CN105294309A - 一种野生双孢蘑菇子实体人工培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种双孢蘑菇菌株子实体的人工培养方法。本发明采用的双孢蘑菇为双孢蘑菇G1菌株，它是从山西太原采集分离纯化得到的菌株，保存于山西大学生命科学学院微生物实验室。本发明是将双孢蘑菇G1菌株接种在基础培养基上、麦粒煮汁培养基或麦粒培养基上获得G1菌株子实体。与现有双孢蘑菇人工培养方法相比较，本发明所提供的方法具有操作简单，对场地、环境要求低，短时间内可人工培养得到子实体等优点。本发明双孢蘑菇G1菌株结实能力强，出菇温度范围广(16～26℃)。本发明对于开发双孢蘑菇野生种质资源，丰富我国双孢蘑菇品种，促进双孢蘑菇育种等具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌栽培方法，具体属于一种野生双孢蘑菇子实体人工培养方法。
背景技术
双孢蘑菇[Agaricusbisporus(Lange)Imbach]在分类上隶属于伞菌目、伞菌科、蘑菇属。又称洋蘑菇，简称蘑菇。其味道鲜美，营养丰富，具有很高的食药用价值。是目前栽培规模最大的世界性食用菌。其人工栽培始于法国路易十四时代。
目前，双孢蘑菇子实体人工培养方法已比较成熟，但是，这些方法大都是在经过堆制与发酵的培养料上进行栽培并覆土，栽培周期长，对场地、环境要求高，管理繁琐。不能满足育种、品质分析、分化发育等科学实验中一些需要短时间内人工培养得到子实体的要求。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术存在的缺陷，提供一种对场地、环境要求低，短时间内人工培养可得到子实体的双孢蘑菇子实体的人工培养方法，以适应育种科学实验工作的需要。
本发明采用的双孢蘑菇是从中国山西省太原市采集分离得到的一株野生双孢蘑菇菌株，根据其形态特征及rDNA-ITS序列比对结果，将其鉴定为双孢蘑菇，命名为“双孢蘑菇G1菌株”,G1菌株保存于山西大学生命科学学院微生物实验室，该论文发表在《山西农业科学》2015，43(11)：1421-1423.
双孢蘑菇G1菌株形态特征：
子实体形态：菌盖直径为2.1～5.6cm，白色至淡褐色，初期为扁半球形，后变扁平，肉质，不粘，有时形成裂纹；菌褶稠密，离生，中部宽，长短不一，幼时白色，后变为淡粉红色，受伤处变为褐色，菌褶在开伞菌盖的下面呈片状，形似伞形，长短不一，菌褶初期为粉红色，老熟时变为暗紫色，褐色；菌柄圆柱形，长2～7cm，粗1～3cm，菌柄着生在菌盖下面的中央部位，菌柄为1.2～4.3cm，菌柄中央中实，白色；菌环膜质，白色，生于菌柄的中部，易于脱落。担子棒状，担子上着生2个或3个孢子，以2个孢子为主，孢子椭圆形，大小为5.52～6.12×5.02～5.47μm。
菌丝体形态：在马粪煮出液培养基上菌丝洁白、浓密，为有隔菌丝体，无锁状联合。
孢子特征：担子上着生2个或3个孢子，以2个孢子为主，孢子椭圆形，大小为5.52～6.12×5.02～5.47μm，孢子印褐色。
本发明提供的一种双孢蘑菇菌株子实体的人工培养方法，包括如下步骤：
1)将双孢蘑菇G1菌株纯菌种转接到马粪煮出液培养基试管斜面或平板上，25℃暗培养，待菌丝长满试管斜面或平板后，保存于4℃冰箱，备用；
所述的马粪煮出液培养基，通过如下方法制得：将干马粪150g放入1000mL水中煮沸20min，取其滤液加入20g琼脂,50g蔗糖，溶解后加水至1000mL，分装、灭菌；
2)将试管斜面或平板上的G1菌株接种于基础培养基上，25℃暗培养13-17d，形成原基，培养至23-25d，产生成熟的子实体。
所述的基础培养基配方：葡萄糖20g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，维生素B110mg，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
或者，将试管斜面或平板上的G1菌株接种于麦粒煮汁培养基上，25℃暗培养5-7d，形成原基，培养至19-21d，产生成熟的子实体。
麦粒煮汁培养基配方：麦粒(干)200g，麦芽糖20g，蛋白胨2g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。制备方法：麦粒需煮沸20min，过滤取麦粒煮汁，用蒸馏水补足到1000mL并加入其余成分，溶解搅匀即成。
或者，将试管斜面或平板上的G1菌株接种于麦粒培养基上，25℃暗培养至菌丝长满麦粒并出现大量原基后，移入温度为16～26℃，相对湿度为80％～90％的菇房，第5-7d即可出菇。
所述的麦粒培养基的配方：麦粒98.5％，石膏1.5％；制备方法：将麦粒用沸水煮20-30min，捞出，晾至含水量为40％；加入石膏混匀。
与现有的双孢蘑菇人工培养方法相比较，本发明所提供的人工培养获得双孢蘑菇子实体的方法是在基础培养基、麦粒煮汁培养基和麦粒培养基上进行，具有操作简单，对场地、环境要求低，短时间内可培养获得子实体等优点。
本发明中所提供的野生双孢蘑菇G1菌株可在琼脂培养基和麦粒培养基上形成原基及子实体，菌株结实能力强，出菇温度范围广(16～26℃)。由于我国野生双孢蘑菇资源比较匮乏，且具有自主知识产权的双孢蘑菇品种更少，本发明对于开发双孢蘑菇野生种质资源，丰富我国双孢蘑菇品种，促进双孢蘑菇育种等具有重要意义。
附图说明：
图1为双孢蘑菇G1菌株在基础培养基上的出菇照片
图2为双孢蘑菇G1菌株在麦粒煮汁培养基上的出菇照片
图3为双孢蘑菇G1菌株在麦粒培养基上形成原基的照片
图4为双孢蘑菇G1菌株在麦粒培养基上形成子实体的照片
具体实施方式
以下对本发明进行详细描述。其中使用的试剂及材料，如无特殊说明，均为商业途径获得。
双孢蘑菇As2796是我国目前栽培量最大的双孢蘑菇品种，As2796在以下实施例中是作为G1菌株的对照品种。
菌种的准备：将As2796和G1菌株纯菌种分别转接到马粪煮出液培养基试管斜面和平板上，25℃暗培养，待菌丝长满试管斜面和平板后，保存于4℃冰箱，备用。
实施例1双孢蘑菇G1菌株在基础培养基上培养获得子实体的方法
(1)基础培养基配方：葡萄糖20g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，维生素B110mg，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
(2)基础培养基平板制作：按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在900mL蒸馏水中。各成分完全溶解后，补足水分至1000mL。分装三角烧瓶内，加棉塞，包扎，121.3℃灭菌20min后，待培养基降至60℃左右，将培养基倒入无菌培养皿中，每皿20mL，待凝固后，制成平板。
(3)接种及培养方法：从冰箱内取出G1菌株和As2796菌株的平板菌种，用内径5mm打孔器取菌落边缘菌饼，接入平板中心。每个菌种10个重复，倒置于培养箱内，25℃暗培养，菌丝生长至第15d，G1菌株开始形成原基，培养至24d原基分化发育成成熟的子实体(见附图1)，对照菌株As2796无原基及子实体的产生。
实施例2双孢蘑菇G1菌株在麦粒煮汁培养基上培养获得子实体的方法
(1)麦粒煮汁培养基配方：麦粒(干)200g，麦芽糖20g，蛋白胨2g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
(2)麦粒煮汁培养基平板制作：称取200g干麦粒，洗净，放入水中煮沸20min后，取其滤液，补足水分至1000mL，依次加入配方中其余成分完全溶解后，平板的制作方法与上述基础培养基的制作方法相同。
(3)接种及培养：从冰箱内取出G1菌株及对照菌株As2796平板菌种，用内径5mm打孔器取菌落边缘菌饼，接入麦粒煮汁培养基平板中心。每个菌种10个重复，倒置于培养箱内，25℃暗培养，培养至第6d，G1菌株开始形成原基，培养至第20d原基进一步分化成成熟的子实体(见附图2)，对照菌株As2796无原基及子实体形成。
实施例3双孢蘑菇G1菌株在麦粒培养基上培养获得子实体的方法
(1)麦粒培养基的配方：麦粒(干)98.5％，石膏1.5％。
(2)麦粒培养基的制作：称取500g干麦粒，洗净，放入已煮沸的水中，不断搅拌，煮沸30min后，四层纱布过滤，将湿麦粒平铺于洁净台面上，室温凉至麦粒表面无水分，此时含水量约为40％，收集麦粒，加入7.5g石膏，搅拌均匀，分装于500mL罐头瓶，每瓶装量100g，用聚丙烯塑料膜封口，121.3℃灭菌1h后，取出，备用。
(3)接种及培养：从冰箱内取出G1菌株及对照菌株As2796菌种，取1cm×1cm大小的菌块接入麦粒培养基中，接种量为每瓶3块，直立放置，25℃暗培养。培养至第20d，菌丝长满麦粒，培养至第26d，G1菌株瓶内开始出现大量原基，将罐头瓶移至出菇房，控制湿度为80％～90％，温度16～26℃。移至出菇房第6d，原基分化发育成成熟的子实体(见附图3-4)。对照菌株As2796无原基及子实体形成。
Claims (4)
1.一种双孢蘑菇菌株子实体的人工培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将双孢蘑菇G1菌株菌种转接到马粪煮出液培养基试管斜面或平板上，25℃暗培养，待菌丝长满试管斜面或平板后，保存于4℃冰箱，备用；
所述的马粪煮出液培养基，通过如下方法制得：将干马粪150g放入1000mL水中煮沸20min，取其滤液加入20g琼脂,50g蔗糖，溶解后加水至1000mL，分装、灭菌；
2)将试管斜面或平板上的G1菌株接种于基础培养基上，25℃暗培养13-17d，形成原基，培养至23-25d，产生成熟的子实体；
所述的基础培养基配方：葡萄糖20g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，维生素B110mg，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
2.一种双孢蘑菇菌株子实体的人工培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将双孢蘑菇G1菌株菌种转接到马粪煮出液培养基试管斜面或平板上，25℃暗培养，待菌丝长满试管斜面或平板后，保存于4℃冰箱，备用；
所述的马粪煮出液培养基，通过如下方法制得：将干马粪150g放入1000mL水中煮沸20min，取其滤液加入20g琼脂,50g蔗糖，溶解后加水至1000mL，分装、灭菌；
2)将试管斜面或平板上的G1菌株接种于麦粒煮汁培养基上，25℃暗培养5-7d，形成原基，培养至19-21d，产生成熟的子实体；
麦粒煮汁培养基配方：麦粒200g，麦芽糖20g，蛋白胨2g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。制备方法：麦粒需煮沸20min，过滤取麦粒煮汁，用蒸馏水补足到1000mL并加入其余成分，溶解搅匀即成。
3.一种双孢蘑菇菌株子实体的人工培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将双孢蘑菇G1菌株菌种转接到马粪煮出液培养基试管斜面或平板上，25℃暗培养，待菌丝长满试管斜面或平板后，保存于4℃冰箱，备用；
所述的马粪煮出液培养基，通过如下方法制得：将干马粪150g放入1000mL水中煮沸20min，取其滤液加入20g琼脂,50g蔗糖，溶解后加水至1000mL，分装、灭菌。
2)将试管斜面或平板上的G1菌株接种于麦粒培养基上，25℃暗培养至菌丝长满麦粒并出现大量原基后，移入温度为16-26℃，相对湿度为80％-90％的菇房，第5-7d即可出菇；
所述的麦粒培养基的配方：麦粒98.5％，石膏1.5％；制备方法：将麦粒用沸水煮20-30min，捞出，晾至含水量为40％；加入石膏混匀。
4.如权利要求1、2或3所述的一种双孢蘑菇菌株子实体的人工培养方法，其特征在于，所述的双孢蘑菇G1菌株，是从中国山西省太原市采集分离得到的一株野生双孢蘑菇菌株，保存于山西大学生命科学学院微生物实验室的双孢蘑菇G1菌株。
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