CN105213411B - 一种从人参花中提取分离人参皂苷混合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种从人参花中提取分离各种不同人参皂苷混合物的方法，尤其是含有人参皂苷F3、人参皂苷F5、人参皂苷F1的人参皂苷混合物的方法。本发明以人参花为原料，用甲醇溶液加热回流提取，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取物通过MCI GEL柱层析，分别用水及不同比例有机溶剂的水溶液洗脱，获得三种新的不同的人参皂苷混合物。

Description

一种从人参花中提取分离人参皂苷混合物的方法
技术领域
本发明涉及从人参花中提取分离各种不同人参皂苷混合物的方法，属于天然药物化学研究领域。
背景技术
人参花是人参(Panax ginseng C.A.Mey.)含苞待放的花，6-7月采收，烘干，干燥的人参花通常为灰绿色；具有补气强身，延缓衰老等功能；用于头昏乏力，胸闷气短。
到目前为止，人们从人参花中分离得到多种人参皂苷，其中主要包括人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Ro，Rh1、Rg2等。此外，近年来还发现多个微量新皂苷类化合物，如人参花皂苷A、B、C、D、E、F[3]、G、H、I、J、K，Ka、Kb、Kc、La、Lb，M、N、O、P等。
不同的人参皂苷单体具有不同的生物活性，比如人参皂苷Rg1能使中枢神经亢进，对精力不足、易感疲劳的人有效果，具有滋养强壮、消除疲劳、活化细胞、使中枢神经系统兴奋的作用。而人参皂苷Rb1对中枢神经系统有抑制作用，能使兴奋的神经系统镇静下来，安定精神、消除焦虑、缓解精神压力，有改善失眠和神经衰弱，使中枢神经系统安定的作用。不同的人参皂苷组成的人参皂苷混合物也具有不同的生物活性，常见的由人参皂苷Rbl、Rb2、Rc、Rd、Rg3等组成的二醇组皂苷具有中枢抑制作用和神经保护作用，由人参皂苷Re、Rg1、Rg2等组成的三醇组皂苷具有中枢兴奋作用。因此，设法从人参花中获得多种具有不同生物活性的有效组分组合物，有利于开发出具有不同生物活性或更强生物活性的有效部位，促进人参皂苷类药物创新。
发明内容
本发明提供一种从人参花中提取分离各种不同人参皂苷混合物的新方法，即从人参花中提取分离主要由人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物；主要由人参皂苷Rh1、人参皂苷F3、人参皂苷F5组成的人参皂苷混合物；主要由人参皂苷F1、人参皂苷Rd组成的人参皂苷混合物。具体是将人参花用甲醇溶液提取，提取液回收浓缩后依次用环己烷、乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液即得人参花总皂苷。将人参花总皂苷上MCI GEL柱，先用水洗脱，后改用含20～30％有机溶剂的水溶液洗脱，获得主要由人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物；将人参花总皂苷上MCI GEL柱，先用水洗脱，接着用含20～30％有机溶剂的水溶液将人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc洗脱完全后，改用含40～50％有机溶剂的水溶液洗脱，获得主要由人参皂苷Rh1、人参皂苷F3、人参皂苷F5组成的人参皂苷混合物；将人参花总皂苷上MCI GEL柱，先用水洗脱，接着用含40～50％有机溶剂的水溶液将人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh1、人参皂苷F3、人参皂苷F5洗脱完全后，改用含60～70％有机溶剂的水溶液洗脱，获得主要由人参皂苷F1、人参皂苷Rd组成的人参皂苷混合物。
获得的人参皂苷混合物可用于制备药物组合物、保健品及人参皂苷单体。具体如下。
本发明获得人参花总皂苷的方法为：将人参花粉碎后加甲醇溶液进行加热回流提取，提取液浓缩回收溶剂后，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液，回收浓缩后即得人参花总皂苷。将获得的人参花总皂苷再通过如下创新的柱层析方法，最终获得三种新的人参皂苷混合物，具体如下。
将上述制备获得的人参花总皂苷上MCI GEL柱，先用水冲洗，这时洗脱下来的主要为糖、无机盐等非皂苷类杂质，待水洗脱完全后，改用含20～30％甲醇或乙醇或丙酮的水溶液洗脱，这时洗脱下来的是人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc，回收溶剂，获得主要由人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物；然后用含40～50％甲醇或乙醇或丙酮的水溶液洗脱，这时洗脱下来的是人参皂苷Rh1、人参皂苷F3和人参皂苷F5，回收溶剂，获得主要由人参皂苷Rh1、人参皂苷F3和人参皂苷F5组成的人参皂苷混合物；最后用含60～70％甲醇或乙醇或丙酮的水溶液洗脱，这时洗脱下来的是人参皂苷Rd和人参皂苷F1，回收溶剂，获得主要由人参皂苷F1和人参皂苷Rd组成的人参皂苷混合物。
上述所用的提取溶剂甲醇的浓度应在98％-100％；MCI GEL柱层析中用到的甲醇或乙醇或丙酮水溶液洗脱液的浓度应分别在20％-30％、40％-50％、60％-70％之间为宜；MCI GEL柱层析填料最好为F型，粒度在75-150u为宜。
发明有益效果
1、本发明所选用的原料人参花甲醇提取物来源于纯天然植物人参的花，从中分离出三种新的不同的人参皂苷混合物，尤其是含有人参皂苷F3、人参皂苷F5、人参皂苷F1的人参皂苷混合物，有利于人参花的深入开发研究及创新药物开发。
2、本发明的工艺方法易于操作，步骤简单，可适用于工业化生产，用于开发人参皂苷药物组合物或人参皂苷单体。
具体实施方式
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述实施例中所用试剂，如无特殊说明，均为商业途径获得；下述实施例中所用试验方法，如无特殊说明，均为本领域技术人员熟知的常规实验方法。
实施例1
人参花4公斤，用甲醇溶液加热回流提取3次，每次甲醇用量为人参花重量的4倍，提取时间均为2小时，合并提取液，回收浓缩溶剂，将得到的稠膏依次用环己烷、乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，回收浓缩溶剂，即得到人参花总皂苷355克。
取人参花总皂苷10克用水溶解作为待纯化样品，再称取MCI GEL填料(F型，粒度75-150u)30克用水溶解作为分离胶并均匀装至玻璃柱内，将样品加至玻璃柱中分离胶的上层进行MCI GEL柱层析。先用水洗脱，将糖、无机盐等洗脱完全，改用含20％甲醇的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物5.8克。经HPLC检测，其中含人参皂苷Re 38.2％、人参皂苷Rg113.6％、人参皂苷Rb1 10.2％、人参皂苷Rb28.5％和人参皂苷Rc 7.2％；接着改用含40％甲醇的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷F3、人参皂苷F5和人参皂苷Rh1的人参皂苷混合物1.1克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F3 19.6％、人参皂苷F5 18.9％、人参皂苷Rh115.4％；最后用含60％甲醇的水溶液洗脱，回收溶剂，浓缩，得主要含人参皂苷F1和人参皂苷Rd的人参皂苷混合物2.3克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F1 42.3％、人参皂苷Rd26.6％。
HPLC测定人参皂苷含量的条件如下：
A、测定人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc的条件：
色谱柱：Zorbax Eclipse XDB(5μm；4.6mm i.d.×250mm)C-18柱；流动相：(乙腈:水:5％乙酸水，10:85:5,v/v/v):(乙腈:水，80:20,v/v)＝78:32；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；检测波长：203nm，以下相同；
B、测定人参皂苷F3、人参皂苷F5和人参皂苷Rh1的条件：色谱柱：Zorbax EclipseXDB(5μm；4.6mm i.d.×250mm)C-18柱；流动相：乙腈:水＝28:72；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：203nm，以下相同；
C、测定人参皂苷F1和人参皂苷Rd的条件：色谱柱：Zorbax Eclipse XDB(5μm；4.6mm i.d.×250mm)C-18柱；流动相：乙腈:水＝35:65；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：203nm，以下相同。
实施例2
取人参花总皂苷10克用水溶解作为待纯化样品，再称取MCI GEL填料(F型，粒度75-150u)30克用水溶解作为分离胶并均匀装至玻璃柱内，将样品加至玻璃柱中分离胶的上层进行MCI GEL柱层析。先用水洗脱，将糖、无机盐等洗脱完全，改用含20％乙醇的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物6.4克。经HPLC检测，其中含人参皂苷Re 39.7％、人参皂苷Rg112.8％、人参皂苷Rb1 9.6％、人参皂苷Rb2 8.9％和人参皂苷Rc 8.0％；接着改用含40％乙醇的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷F3、人参皂苷F5和人参皂苷Rh1的人参皂苷混合物1.0克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F3 20.9％、人参皂苷F5 17.4％、人参皂苷Rh110.7％；最后用含60％乙醇的水溶液洗脱，回收溶剂，浓缩，得主要含人参皂苷F1和人参皂苷Rd的人参皂苷混合物2.1克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F1 40.0％、人参皂苷Rd29.2％。
实施例3
取人参花总皂苷10克用水溶解作为待纯化样品，再称取MCI GEL填料(F型，粒度75-150u)30克用水溶解作为分离胶并均匀装至玻璃柱内，将样品加至玻璃柱中分离胶的上层进行MCI GEL柱层析。先用水洗脱，将糖、无机盐等洗脱完全，改用含20％丙酮的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物5.1克。经HPLC检测，其中含人参皂苷Re 35.2％、人参皂苷Rg111.3％、人参皂苷Rb1 8.8％、人参皂苷Rb2 7.6％和人参皂苷Rc 6.5％；接着改用含40％丙酮的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷F3、人参皂苷F5和人参皂苷Rh1的人参皂苷混合物0.8克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F3 18.7％、人参皂苷F5 16.1％、人参皂苷Rh19.5％；最后用含60％丙酮的水溶液洗脱，回收溶剂，浓缩，得主要含人参皂苷F1和人参皂苷Rd的人参皂苷混合物2.5克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F1 44.2％、人参皂苷Rd 31.8％。
实施例4
取人参花总皂苷10克用水溶解作为待纯化样品，再称取MCI GEL填料(F型，粒度75-150u)30克用水溶解作为分离胶并均匀装至玻璃柱内，将样品加至玻璃柱中分离胶的上层进行MCI GEL柱层析。先用水洗脱，将糖、无机盐等洗脱完全，改用含30％甲醇的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物6.0克。经HPLC检测，其中含人参皂苷Re 35.8％、人参皂苷Rg112.3％、人参皂苷Rb1 10.5％、人参皂苷Rb27.1％和人参皂苷Rc 6.6％；接着改用含50％甲醇的水溶液洗脱，回收溶剂，得主要含人参皂苷F3、人参皂苷F5和人参皂苷Rh1的人参皂苷混合物1.0克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F3 20.1％、人参皂苷F5 19.5％、人参皂苷Rh114.3％；最后用含70％甲醇的水溶液洗脱，回收溶剂，浓缩，得主要含人参皂苷F1和人参皂苷Rd的人参皂苷混合物1.9克。经HPLC检测，其中含人参皂苷F1 39.7％、人参皂苷Rd19.5％。
综上所述，本发明的方法利用MCI GEL柱层析将人参花中的皂苷分成3中不同组成的人参皂苷混合物，尤其是鲜见的含有人参皂苷F3、人参皂苷F5及含有人参皂苷F1的人参皂苷混合物，这些人参皂苷混合物有可能成为具有新活性或活性更强新部位的研究基础。本发明的方法具有方法独特简便、生产成本低、操作简单等优点。

Claims (6)

1.一种从人参花中提取分离主要由人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rc组成的人参皂苷混合物的方法，其特征在于：将人参花用甲醇溶液提取，环己烷、乙酸乙酯依次萃取，将乙酸乙酯萃取物通过MCI GEL柱层析，用水洗脱完全后改用20％-30％有机溶剂的水溶液洗脱；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的任一种。
2.一种从人参花中提取分离主要由人参皂苷F3、人参皂苷F5、人参皂苷Rh1组成的人参皂苷混合物的方法，其特征在于：将人参花用甲醇溶液提取，环己烷、乙酸乙酯依次萃取，将乙酸乙酯萃取物通过MCI GEL柱层析，用水及20％-30％有机溶剂的水溶液洗脱完全后改用40％-50％有机溶剂的水溶液洗脱；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的任一种。
3.一种从人参花中提取分离主要由人参皂苷F1和人参皂苷Rd组成的人参皂苷混合物的方法，其特征在于：将人参花用甲醇溶液提取，环己烷、乙酸乙酯依次萃取，将乙酸乙酯萃取物通过MCI GEL柱层析，用水、20％-30％有机溶剂的水溶液、40％-50％有机溶剂的水溶液洗脱完全后改用60％-70％有机溶剂的水溶液洗脱；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的任一种。
4.根据权利要求1或2或3中所述的方法，其特征在于：所用的提取溶剂甲醇溶液浓度为98％-100％。
5.根据权利要求1或2或3中所述的方法，其特征在于：MCI GEL柱层析所用的填料为MCIGEL F型，粒度为75-150μm。
6.根据权利要求1或2或3中所述方法获得的人参皂苷混合物在制备药物组合物、保健品及人参皂苷单体中的应用。
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