CN105130759B - 一种厚朴提取物的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种厚朴提取物的提取方法，包括如下操作步骤：a)将干燥根粉以醇类溶剂加热提取得到提取液，将提取液过滤后于真空下加热浓缩至干得到浓缩物；b)收集浓缩物，用有机溶剂溶解并进行脱色，于真空下加热浓缩至干得到粗提物；c)粗提物用混合溶剂溶解后，在4～8℃下得到粗结晶；d)将粗结晶用碱性溶剂溶解，形成上柱液；e)上柱液过聚酰胺层析柱；f)将洗脱液分别收集后，用盐酸将洗脱液调至pH为中性，分别过滤得出厚朴酚沉淀物与和厚朴酚沉淀物；g)沉淀物于50～60℃真空干燥，得到厚朴酚与和厚朴酚；该方法工艺简单，使用的化学试剂成本低，提取的厚朴酚与和厚朴酚纯度高，具有良好的经济效益。

Description

一种厚朴提取物的提取方法
技术领域
本发明涉及植物提取物领域，特别涉及一种植物提取物的提取方法。
背景技术
厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils)为木兰科落叶乔木，我国重要传统中药，《神农本草经》将厚朴列为上品。厚朴以干皮、根皮、枝皮及花蕾入药。有燥湿消痰，下气除满的功效，用于湿滞伤中，脱痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳。开胸顺气丸、霍香正气丸、木香顺气丸、鳖甲煎胶囊、保济丸、香砂养胃丸等传统中药及新药中均以厚朴为主药。厚朴酚与和厚朴酚为厚朴中主要的药用成分，结构相似，要得到各自的高纯度的酚类化合物单体有一定难度。随着厚朴酚与和厚朴酚在医药方面的深入研究，对厚朴酚与和厚朴酚的分离提纯方法和产物的要求越来越高。我们对目前厚朴的提取分离方法进行了总结和实验验证，通用的提取分离方法普遍存在工艺复杂、效率低等缺点。
发明内容
针对现有技术存在的上述缺点，本发明的目的在于提供一种厚朴提取物的提取方法；该方法工艺简单，使用的化学试剂成本较低，提取的厚朴酚与和厚朴酚纯度高，具有良好的经济效益。
为实现上述目的本发明所采用的技术方案如下：
一种厚朴提取物的提取方法，所述厚朴提取物包括厚朴酚与和厚朴酚，其特征在于包括如下操作步骤：
a)将粉碎达20目以上的厚朴的干燥根粉以90％的醇类溶剂加热提取4次，得到提取液；将提取液过滤后取滤液，在真空压力为-0.08～-0.09Mpa，温度为50～60℃的条件下浓缩至干，得到浓缩物；
b)将步骤a)得到的浓缩物，用有机溶剂将浓缩物溶解，溶解后加入脱色剂进行脱色，在真空压力为-0.07～-0.08Mpa，温度40～50℃的条件下浓缩至干，得到粗提物；
c)将步骤b)得到的粗提物用混合溶剂溶解后，在温度4～8℃的条件下放置结晶，得到粗结晶；
d)将步骤c)得到的粗结晶，用浓度为1～3％的碱性溶剂溶解完全，形成上柱液；
e)将步骤d)得到的上柱液装入聚酰胺层析柱，以自来水或纯化水作为洗脱剂在常压下进行梯度洗脱，薄层色谱跟踪监测洗脱过程，洗下得到：和厚朴酚洗脱液，厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液，厚朴酚洗脱液；
f)用浓度为5～20％的盐酸将步骤e)得到的和厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到和厚朴酚沉淀物；用浓度为5～20％的盐酸将步骤e)得到的厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到厚朴酚沉淀物；
g)将步骤f)得到的和厚朴酚沉淀物于温度为50～60℃的真空条件下干燥，得到和厚朴酚；将步骤f)得到的厚朴酚沉淀物于温度为50～60℃的真空条件下干燥，得到厚朴酚。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤a)中,加热的温度为50～85℃。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤a)中,所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤b)中，所述有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷或二氯乙烷；所述脱色剂为活性炭、硅胶或硅藻土。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤c)中，所述混合溶剂由乙酸乙酯、丙酮或氯仿中的一种和环己烷、正己烷或石油醚中的一种混合而成。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤d)中，所述碱性溶剂为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或氨水。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤d)中，从粗提物制成粗结晶的转化率在85％以上，所述粗结晶中厚朴总酚的色谱含量在90％以上。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤e)中，所述聚酰胺层析柱中含有60～80目或100～200目的聚酰胺；所述薄层色谱跟踪监测洗脱过程为：取溶液10uL，点于硅胶G薄层板或硅胶GF254薄层板上，以展开剂展开；所述展开剂为乙醇：石油醚：乙酸乙酯＝0.1:10:3，，以碘蒸汽熏蒸或于254nm紫外灯下显色，与和厚朴酚标准品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点为和厚朴酚洗脱液；与厚朴酚标准品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点为厚朴酚洗脱液；除去厚朴酚洗脱液，和厚朴酚洗脱液后，剩余的洗脱液为厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液。
作为本发明的一种优选的方案，将在步骤e)得到的厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液与下一批次的上柱液混合后过聚酰胺层析柱。
作为本发明的一种优选的方案，在步骤g)中，从粗结晶转化为高纯度厚朴酚与和厚朴酚的转化率在90％以上，所述厚朴酚与和厚朴酚的色谱含量均在98.5％以上。
本发明的有益效果在于：
1、本发明采用醇类溶剂加热提取的方法，结合物理方法，在真空压力下将提取液浓缩，得到厚朴酚与和厚朴酚含量较高的粗结晶。
2、用稀碱性溶液将粗结晶溶解后上聚酰胺层析柱，以水洗脱，通过薄层色谱跟踪监测洗脱过程，分别收集洗脱液用酸性溶液调至中性后即可得到厚朴酚与和厚朴酚的沉淀物。
3、采用本发明所述的提取方法，得到粗结晶中厚朴总酚的色谱含量在90％以上，从粗提物制成粗结晶的转化率在85％以上；从粗结晶转化为高纯度厚朴酚与和厚朴酚的转化率在90％以上，最后得到厚朴酚与和厚朴酚的色谱含量均在98.5％以上。
附图说明
图1为厚朴酚标准品色谱图；
图2为实施例1厚朴酚提取物色谱图；
图3为和厚朴酚标准品色谱图；
图4为实施例1和厚朴酚提取物色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做具体说明：
实施例1：
一种厚朴提取物的提取方法，所述厚朴提取物包括厚朴酚与和厚朴酚，按以下方法制备而成：
a)将粉碎达20目以上的厚朴的干燥根粉100g依次用12倍、10倍、8倍和6倍量的90％的乙醇提取4次，提取温度为75℃，得到提取液；将提取液过滤，取滤液于真空压力为-0.08Mpa，温度为50℃下浓缩至干得到浓缩物；
b)将步骤a)得到的浓缩物，加入60mL的乙酸乙酯将浓缩物溶解，溶解后加入3g活性炭进行脱色，于真空压力为-0.07Mpa，温度40℃的条件下浓缩至干，得到粗提物；
c)将步骤b)得到的粗提物用比例为5:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶剂溶解后，在温度为5℃的条件下放置结晶，得到粗结晶12g；
d)取步骤c)得到的粗结晶1g，用1％的氢氧化钠溶液溶解完全，形成上柱液；
e)将步骤d)得到的上柱液装入聚酰胺层析柱，该聚酰胺层析柱中含有40g 100～200目的聚酰胺，以自来水作为洗脱剂在常压下进行梯度洗脱，薄层色谱跟踪监测洗脱过程，洗下得到和厚朴酚洗脱液，厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液，厚朴酚洗脱液；将厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液与下一批次的上柱液混合后过聚酰胺层析柱；
其中，薄层色谱跟踪监测洗脱过程中，取溶液10uL，点于硅胶G薄层板上，以乙醇：石油醚：乙酸乙酯＝0.1:10:3作为展开剂展开，在紫外灯下观察；与和厚朴酚标准品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点为和厚朴酚洗脱液；与厚朴酚标准品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点为厚朴酚洗脱液；除去厚朴酚洗脱液，和厚朴酚洗脱液后，剩余的洗脱液为厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液；
f)用浓度为5％的盐酸将步骤e)得到的和厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到和厚朴酚沉淀物；用浓度为5％的盐酸将步骤e)得到的厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到厚朴酚沉淀物；
g)将步骤f)得到的和厚朴酚沉淀物于温度为50℃的真空条件下干燥，得到和厚朴酚0.56g；将步骤f)中厚朴酚沉淀物于温度为50℃的真空条件下干燥，得到厚朴酚0.34g。
检测：
使用高效液相色谱测定外标法进行检测：色谱柱：C18柱，流动相：甲醇:水＝80:20，检测波长：292nm的条件下测定得出和厚朴酚的色谱含量为99.8％，厚朴酚的色谱含量为99.3％。
如图2所示，所获峰值最大的即为提取所得高纯度厚朴酚；如图4所示，所获峰值最大的即为提取所得高纯度和厚朴酚。
实施例2：
一种厚朴提取物的提取方法，所述厚朴提取物包括厚朴酚与和厚朴酚，按以下方法制备而成：
a)将粉碎达20目以上的厚朴的干燥根粉100g依次用12倍、10倍、8倍和6倍量的90％的乙醇提取4次，提取温度为80℃，得到提取液；将提取液过滤，取滤液于真空压力为-0.086Mpa，温度为55℃下浓缩至干，得到浓缩物；
b)将步骤a)得到的浓缩物，加入60mL的乙酸乙酯将浓缩物溶解，溶解后加入5g200目硅胶进行脱色，于真空压力为-0.07Mpa，温度45℃的条件下浓缩至干，得到粗提物；
c)将步骤b)得到的粗提物用比例为5:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶剂溶解，在温度为7℃的条件下放置结晶，得到粗结晶10g；
d)取步骤c)得到的粗结晶2g，用3％的氢氧化钠溶液溶解完全，形成上柱液；
e)将步骤d)得到的上柱液装入聚酰胺层析柱，该聚酰胺层析柱中含有75g 100～200目的聚酰胺，以自来水作为洗脱剂在常压下进行梯度洗脱，薄层色谱跟踪监测洗脱过程，洗下得到：和厚朴酚洗脱液，厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液，厚朴酚洗脱液；将厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液与下一批次的上柱液混合后过聚酰胺层析柱；
其中，薄层色谱跟踪监测洗脱过程与实施例1相同；
f)用浓度为15％的盐酸将步骤e)中的和厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到和厚朴酚沉淀物；用浓度为15％的盐酸将步骤e)中的厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到厚朴酚沉淀物；
g)将步骤f)中和厚朴酚沉淀物于温度为55℃的真空条件下干燥，得到和厚朴酚1.06g；将步骤f)中厚朴酚沉淀物于温度为55℃的真空条件下干燥，得到厚朴酚0.61g。
检测：
使用高效液相色谱测定外标法进行检测过程与实施例1相同，测定得出和厚朴酚的色谱含量为99.7％，厚朴酚的色谱含量为98.8％；实施例2的色谱图与实施例1类似。
实施例3：
一种厚朴提取物的提取方法，所述厚朴提取物包括厚朴酚与和厚朴酚，按以下方法制备而成：
a)将粉碎达20目以上的厚朴的干燥根粉100g依次用12倍、10倍、8倍和6倍量的90％的乙醇提取4次，提取温度为85℃，得到提取液；将提取液过滤，取滤液于真空压力为-0.09Mpa，温度为60℃下浓缩至干，得到浓缩物；
b)将步骤a)得到的浓缩物，加入60mL的乙酸乙酯将浓缩物溶解，溶解后加入5g硅藻土进行脱色，于真空压力为-0.08Mpa，温度50℃浓缩至干得到粗提物；
c)将步骤b)得到的粗提物用比例为5:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶剂溶解后，在温度为8℃的条件下放置结晶，得到粗结晶11.5g；
d)取步骤c)得到的粗结晶1g，用3％的氢氧化钠溶液溶解完全，形成上柱液；
e)将步骤d)得到的上柱液装入聚酰胺层析柱，该聚酰胺层析柱中含有50g 60～80目的聚酰胺，以自来水作为洗脱剂在常压下进行洗脱，薄层色谱跟踪监测洗脱过程，洗下得到：和厚朴酚洗脱液，厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液，厚朴酚洗脱液；将厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液与下一批次的上柱液混合后过聚酰胺层析柱；
其中，薄层色谱跟踪监测洗脱过程与实施例1相同；
f)用浓度为20％的盐酸将步骤e)中的和厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到和厚朴酚沉淀物；用浓度为20％的盐酸将步骤e)中的厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到厚朴酚沉淀物；
g)将步骤f)得到的和厚朴酚沉淀物于温度为60℃的真空条件下干燥，得到和厚朴酚0.54g；将步骤f)中厚朴酚沉淀物于温度为60℃的真空条件下干燥，得到厚朴酚0.35g。
检测：
使用高效液相色谱测定外标法进行检测过程与实施例1相同，测定得出厚朴酚的色谱含量为98.9％，和厚朴酚的色谱含量为99.5％；实施例3的色谱图与实施例1类似。
上述实施例仅为本发明优选的实施案例，不能以此来限定本发明所要求保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的及替换均属于本发明多要求保护的范围。

Claims (1)

1.一种厚朴提取物的提取方法，所述厚朴提取物包括厚朴酚与和厚朴酚，其特征在于按以下方法制备而成：
a）将粉碎达20目以上的厚朴的干燥根粉100g依次用12倍、10倍、8倍和6倍量的90%的乙醇提取4次，提取温度为75℃，得到提取液；将提取液过滤，取滤液于真空压力为-0.08MPa，温度为50℃下浓缩至干得到浓缩物；
b)将步骤a)得到的浓缩物，加入60mL的乙酸乙酯将浓缩物溶解，溶解后加入3g活性炭进行脱色，于真空压力为-0.07MPa，温度40℃的条件下浓缩至干，得到粗提物；
c）将步骤b）得到的粗提物用比例为5:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶剂溶解后，在温度为5℃的条件下放置结晶，得到粗结晶12g；
d）取步骤c）得到的粗结晶1g，用1%的氢氧化钠溶液溶解完全，形成上柱液；
e）将步骤d）得到的上柱液装入聚酰胺层析柱，该聚酰胺层析柱中含有40g 100~200目的聚酰胺，以自来水作为洗脱剂在常压下进行梯度洗脱，薄层色谱跟踪监测洗脱过程，洗下得到和厚朴酚洗脱液，厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液，厚朴酚洗脱液；将厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液与下一批次的上柱液混合后过聚酰胺层析柱；
其中，薄层色谱跟踪监测洗脱过程中，取溶液10uL，点于硅胶G薄层板上，以乙醇：石油醚：乙酸乙酯=0.1:10:3作为展开剂展开，在紫外灯下观察；与和厚朴酚标准品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点为和厚朴酚洗脱液；与厚朴酚标准品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点为厚朴酚洗脱液；除去厚朴酚洗脱液，和厚朴酚洗脱液后，剩余的洗脱液为厚朴酚与和厚朴酚的混合洗脱液；
f）用浓度为5%的盐酸将步骤e）得到的和厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到和厚朴酚沉淀物；用浓度为5%的盐酸将步骤e）得到的厚朴酚洗脱液调至pH为中性，然后过滤得到厚朴酚沉淀物；
g）将步骤f）得到的和厚朴酚沉淀物于温度为50℃的真空条件下干燥，得到和厚朴酚0.56g；将步骤f）中厚朴酚沉淀物于温度为50℃的真空条件下干燥，得到厚朴酚0.34g；
检测：
使用高效液相色谱测定外标法进行检测：色谱柱：C18柱，流动相：甲醇:水=80:20，检测波长：292nm的条件下测定得出和厚朴酚的色谱含量为99.8%，厚朴酚的色谱含量为99.3%。
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Address before: 528000 Room 405, building a, Nanhai biomedical technology industry center, Chinese Academy of Sciences, No. 181, Hongling 3rd road, Shishan, Nanhai District, Foshan City, Guangdong Province

Patentee before: FOSHAN PRIZEN MEDICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.