CN105125603A - 一种刺苋提取物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种刺苋提取物在制备抗癌药物中的应用，刺苋作为一种传统药用植物，具有清热解毒，消肿止痛，清肝明目等功效；现代药理学研究表明该植物具有镇痛抗炎、利尿、退热、免疫、保肝、降血糖、抗疟疾、抗菌、抗氧化等方面的药理作用；本发明人在寻找中草药抗癌活性成分的过程中，发现刺苋；提取物具有良好的抗肿瘤活性；本发明刺苋提取物的制备工艺简单实用，制得的提取物抗癌活性较好，这为后期这种植物提取物的抗癌或辅助治疗作用研究奠定了一定的基础。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种刺苋提取物的新用途。
背景技术
刺苋(Amaranthusspinosus.L)，别名苋菜、勒苋菜等，是苋科的一种植物。在我国大部分省份和日本、印度、中南半岛、马来西亚、菲律宾、美洲等地皆有分布。喜生长在干燥荒地，生境在草丛、河边荒地、荒地、开阔地、山坡等。民间用刺苋的幼叶作野菜食用，也用于解毒消肿、利尿止痛、清肝明目、散风止痒、杀虫疗伤。已有研究发现，该植物含有游离烷烃类、甾醇类、黄酮类、三萜皂苷类等等化合物。现代药理学研究表明该植物具有镇痛抗炎、利尿、退热、免疫、保肝、降血糖、抗疟疾、抗菌、抗氧化等方面的药理作用。
但是，迄今为止，从未报道过刺苋的抗癌作用相关研究。癌症是当今社会发病率高，死亡率高的一种顽疾，目前尚未有能够治愈率较高的药物报道。本发明人在寻找中草药抗癌活性成分的过程中，发现刺苋的石油醚提取物具有良好的抗肿瘤活性。这为后期这种植物提取物的抗癌或辅助治疗作用研究奠定了一定的基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种刺苋提取物的用途，即其在制备抗癌药物中的应用，该刺苋提取物制备工艺简单，为刺苋在抗癌药物研究中的应用奠定了一定的基础。
本发明中刺苋提取物按如下方法制得：
（1）按质量比1:2~1:5的比例将刺苋浸入乙醇溶液中超声提取0.5~1h，过滤，滤渣中再添加乙醇溶液超声提取，重复提取2~4次后，合并滤液得到提取液；
（2）提取液减压蒸馏浓缩至无醇味；
（3）按照质量比1:1~1:2的比例在浓缩后的提取物中添加蒸馏水，混和均匀，按混合溶液与石油醚的体积比1:1~1:2的比例，在混合溶液中加入石油醚进行萃取，收集石油醚萃取相，反复萃取3~4次，合并石油醚萃取相；减压蒸馏浓缩石油醚萃取相，干燥后得到刺苋提取物。
所述刺苋为新鲜采集或者经过干燥的根茎、枝叶、果实中的一种或多种的混合物。
所述乙醇溶液为无水乙醇溶液或质量百分比浓度为80-95%的乙醇溶液。
所述步骤（2）中减压蒸馏在43℃~48℃、真空度0.04~0.06Mpa条件下进行。
所述步骤（3）中减压蒸馏在40℃~43℃、真空度0.04~0.06Mpa条件下进行。
所述步骤（3）中干燥为先在40℃~50℃下常压干燥8~12h后，再在40℃~50℃下真空干燥8~12h。
本发明的优点和技术效果：本发明刺苋提取物的制备工艺简单实用，制得的提取物抗癌活性好；实验结果显示：刺苋石油醚提取物对MCF-7和A549细胞具有一定的抑制作用，且对A549细胞抑制的作用更明显，为后期这种植物提取物的抗癌或辅助治疗作用研究奠定了一定的基础。
附图说明
图1为刺苋提取物抑制MCF-7细胞生长时间效应曲线；
图2为刺苋提取物抑制A549细胞生长时间效应曲线；
图3为刺苋提取物抑制MCF-7细胞IC50曲线；
图4为刺苋提取物抑制A549细胞IC50曲线。
具体实施方式
下面通过附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不局限于所述内容。
实施例1：刺苋提取物的应用
1、刺苋提取物的制备
（1）将100g新鲜刺苋根茎浸入200g质量百分比浓度95%的乙醇溶液中超声提取，过滤，滤渣中再添加200g乙醇溶液超声提取30min，重复提取3次后，合并滤液得到提取液；
（2）提取液在45℃、真空度0.05Mpa条件下减压蒸馏浓缩至无醇味；
（3）按照质量比1:1的比例在浓缩后的提取物中添加蒸馏水，混和均匀，按混合溶液与石油醚的体积比1:2的比例，在混合溶液中加入石油醚进行萃取，收集石油醚萃取相，反复萃取3次，合并石油醚萃取相；在40℃、真空度0.06Mpa条件下减压蒸馏浓缩石油醚萃取相，浓缩物先在40℃下常压干燥12h后，再在50℃下真空干燥8h，得到刺苋提取物。
2、刺苋提取物的体外抗癌实验
2.1细胞株，试剂以及仪器
人非小细胞肺癌A549，人乳腺癌MCF-7。DMEM培养液（GIBCO），胎牛血清（GIBCO），胰蛋白酶（GIBCO），DMSO（分析纯，Amresco），青霉素(Sigma)，链霉素（Sigma），MTT（Amresco），96孔板，细胞培养箱（Thermo），酶标仪（Tecan），生物操作台（吴江市绿岛净化设备厂）。
2.2肿瘤细胞培养方法
基础培养基1640+10%FBS（胎牛血清）+1%双抗青链霉素，培养条件为37℃，5%CO2浓度及饱和湿度；当细胞生长至对数期时，用胰蛋白酶消化细胞，洗涤吹散细胞，以每孔3×103个细胞100μl接种于96孔板，以备MTT实验。
2.3细胞增殖实验（MTT法）
将刺苋提取物溶于DMSO溶液，分别配置浓度为100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml、1.5625mg/ml、0.78125mg/ml的溶液，共8个浓度每个浓度2倍稀释；每孔加入1μl各浓度刺苋提取物，并补加100μl培养基，混匀，使得刺苋提取物的每孔终浓度为500μg/ml、250μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml、31.25μg/ml、15.625μg/ml、7.8125μg/ml、3.90625μg/ml；放入培养箱继续培养24h、48h、72h，每孔加入20μlMTT溶液，继续培养4h，培养4h后抽出每孔溶液后每孔加入100μlDMSO溶液，酶标仪下测定每孔的吸光度。以加入DMSO溶液1μl培养的细胞为对照组，每个浓度梯度设5个平行组，分别计算细胞抑制率。按照以下公式计算抑制率：存活率=（实验组吸光度/对照组吸光度）×100%；实验结果见表1、2，从表中可以看出：刺苋石油醚提取物确实能抑制MCF-7和A549细胞生长，且抑制作用具有浓度效应关系；图1、2、3、4中也可以看出刺苋石油醚提取物在MCF-7和A549细胞的抑制作用成剂量-时间效应关系，并可以计算出相对应的IC50值，分别为99.21μg/ml和26.26μg/ml。
3、阳性对照药物吉西他滨细胞增殖实验
取粉末状药物吉西他滨，用DMSO进行稀释，初始浓度为114μg/ml，10倍梯度稀释，共稀释8个梯度，放入培养箱继续培养24h、48h、72h，每孔加入20μlMTT溶液，继续培养4h，培养4h后抽出每孔溶液后每孔加入100μlDMSO溶液，酶标仪下测定每孔的吸光度。以加入DMSO溶液1μl培养的细胞为对照组，每个浓度梯度设5个平行组，分别计算细胞抑制率。按照以下公式计算抑制率：存活率=（实验组吸光度/对照组吸光度）×100%；实验结果见表3、4，吉西他滨，从表中可以看出，吉西他滨能抑制MCF-7和A549细胞生长，且抑制作用与药剂量成正相关；通过计算，得到吉西他滨在MCF-7和A549细胞上的IC50值分别为1.91μg/ml和0.27μg/ml。
表1不同浓度刺苋提取物对MCF-7细胞生长的抑制作用
；
表2不同浓度刺苋石油醚提取物对A549细胞生长的抑制作用
；
表3不同浓度吉西他滨对MCF-7细胞生长的抑制作用
表4不同浓度吉西他滨对A549细胞生长的抑制作用
。
实施例2：刺苋提取物的应用
1、刺苋提取物的制备
（1）将100g干燥刺苋枝叶浸入500g质量百分比浓度80%的乙醇溶液中超声提取，过滤，滤渣中再添加500g乙醇溶液超声提取60min，重复提取2次后，合并滤液得到提取液；
（2）提取液在43℃、真空度0.04Mpa条件下减压蒸馏浓缩至无醇味；
（3）按照质量比1:2的比例在浓缩后的提取物中添加蒸馏水，混和均匀，按混合溶液与石油醚的体积比1:1的比例，在混合溶液中加入石油醚进行萃取，收集石油醚萃取相，反复萃取4次，合并石油醚萃取相；在43℃、真空度0.04Mpa条件下减压蒸馏浓缩石油醚萃取相，浓缩物先在50℃下常压干燥8h后，再在40℃下真空干燥12h，得到刺苋提取物。
2、刺苋提取物的体外抗癌实验方法同实施例步骤2，结果见表5、6，刺苋提取物能抑制MCF-7和A549细胞生长，且抑制作用具有浓度效应关系。
表5不同浓度刺苋提取物对MCF-7细胞生长的抑制作用
；
表6不同浓度刺苋石油醚提取物对A549细胞生长的抑制作用
。
实施例3：刺苋提取物的应用
1、刺苋提取物的制备
（1）将100g新鲜刺苋根茎和果实浸入300g质量百分比浓度无水乙醇溶液中超声提取，过滤，滤渣中再添加300g乙醇溶液超声提取0.8h，重复提取4次后，合并滤液得到提取液；
（2）提取液在48℃、真空度0.05Mpa条件下减压蒸馏浓缩至无醇味；
（3）按照质量比1:1.5的比例在浓缩后的提取物中添加蒸馏水，混和均匀，按混合溶液与石油醚的体积比1:1.5的比例，在混合溶液中加入石油醚进行萃取，收集石油醚萃取相，反复萃取3次，合并石油醚萃取相；在41℃、真空度0.05Mpa条件下减压蒸馏浓缩石油醚萃取相，浓缩物先在45℃下常压干燥10h后，再在45℃下真空干燥10h，得到刺苋提取物。
2、刺苋提取物的体外抗癌实验方法同实施例步骤2，结果见表7、8，刺苋石油醚提取物确实能抑制MCF-7和A549细胞生长，且抑制作用具有浓度效应关系。
表7不同浓度刺苋提取物对MCF-7细胞生长的抑制作用
；
表8不同浓度刺苋石油醚提取物对A549细胞生长的抑制作用
。
Claims (5)
1.一种刺苋提取物在制备抗癌药物中的应用，其中刺苋提取物按如下方法制得：
（1）按质量比1:2~1:5的比例将刺苋浸入乙醇溶液中超声提取0.5~1h，过滤，滤渣中再添加乙醇溶液超声提取，重复提取2~4次后，合并滤液得到提取液；
（2）提取液减压蒸馏浓缩至无醇味；
（3）按照质量比1:1~1:2的比例在浓缩后的提取物中添加蒸馏水，混和均匀，按混合溶液与石油醚的体积比1:1~1:2的比例，在混合溶液中加入石油醚进行萃取，收集石油醚萃取相，反复萃取3~4次，合并石油醚萃取相；减压蒸馏浓缩石油醚萃取相，浓缩物干燥后得到刺苋提取物。
2.根据权利要求1所述的刺苋提取物的应用，其特征在于：乙醇溶液为无水乙醇溶液或质量百分比浓度为80-95%的乙醇溶液。
3.根据权利要求1或2所述的刺苋提取物的应用，其特征在于：步骤（2）中减压蒸馏在43℃~48℃、真空度0.04~0.06Mpa条件下进行。
4.根据权利要求3所述的刺苋提取物的应用，其特征在于：步骤（3）中减压蒸馏在40℃~43℃、真空度0.04~0.06Mpa条件下进行。
5.根据权利要求4所述的刺苋提取物的应用，其特征在于：步骤（3）中干燥为先在40℃~50℃下常压干燥8~12h后，再在40℃~50℃下真空干燥8~12h。
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