CN1491961A - 苋菜籽核糖体失活蛋白 - Google Patents

苋菜籽核糖体失活蛋白 Download PDF

Info

Publication number
CN1491961A
CN1491961A CNA021456666A CN02145666A CN1491961A CN 1491961 A CN1491961 A CN 1491961A CN A021456666 A CNA021456666 A CN A021456666A CN 02145666 A CN02145666 A CN 02145666A CN 1491961 A CN1491961 A CN 1491961A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
seed
coloured amaranth
molecular weight
ribosome
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA021456666A
Other languages
English (en)
Inventor
陈明晃
王艳芹
王梓壬
石小莉
叶晓明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Institute of Research on the Structure of Matter of CAS
Original Assignee
Fujian Institute of Research on the Structure of Matter of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Institute of Research on the Structure of Matter of CAS filed Critical Fujian Institute of Research on the Structure of Matter of CAS
Priority to CNA021456666A priority Critical patent/CN1491961A/zh
Publication of CN1491961A publication Critical patent/CN1491961A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

苋菜籽核糖体失活蛋白(Amaramangin)，涉及到生物化学中一种核糖体失活蛋白及其制备与应用。它是从常用蔬菜苋菜(Amaranthus mangostanusL.)的种籽中分离出来的，其分子量为29 kDa(SDS－PAGE检测)，等电点大于9。我们采用温和的提取方法，经二次SP－琼脂糖快流速凝胶离子交换层析，获得了高纯度的蛋白质。该蛋白可以作为药物原料应用于制备抗肿瘤制剂、抗病毒制剂和抗艾滋病毒制剂；可以作为RNA N－糖苷酶用于分子生物学和免疫学研究，并可用作为免疫毒素的毒素材料。

Description

苋菜籽核糖体失活蛋白
                             技术领域
本发明涉及有机化学领域，特别是涉及到生物化学中一种核糖体失活蛋白-苋菜籽蛋白及其制备和应用。
                             背景技术
在本文中，核糖体失活蛋白可被定义为至少具有下列活性之一的蛋白质：RNA N-糖苷酶活性，多核苷酸：腺苷糖苷酶活性，抗肿瘤活性，抗病毒活性，特别是抗HIV活性，引产蛋白活性。该蛋白是寡聚的，单肽链的简单蛋白或糖蛋白。
从高等植物中提取的核糖体失活蛋白，根据其分子结构可以分为两类，类型I是单肽链蛋白，例如，来自葫芦科植物块根和种籽的天花粉蛋白(Trichosanthin)，苦瓜籽蛋白(Momorcharin)和来自商陆科植物的商陆抗病毒蛋白(PAP)。类型II是双肽链蛋白，例如，来自大戟科植物种籽的蓖麻毒素(Ricin)和来自豆科植物种籽的相思子毒素(Abrin)。类型I蛋白和类型II的A链都具有RNA N-糖苷酶活性，也叫做多核苷酸：腺苷糖苷酶[EC3.2.2.22]活性，都可以裂解真核生物核糖体内28S rRNA的4324位腺嘌呤和核糖间的N-C键，而使真核细胞核糖体60S亚基失活(Endo and Tsaragi1987，J.Biol.Chem.262：8128-8130，Stirpe，F.et al.，1988，Nacl.AcidRes.16：1349-1357)。关于类型I和类型II的核糖体失活蛋白已经有很多的专利和文献报道。
苋菜(Amaranthus mangostanus L.)是苋科苋菜属的一个品种，其茎叶是常见蔬菜。Kwon，S et at从苋属植物Amaranthus visidis的叶子中分离出一种核糖体失活蛋白，命名为Amaranthin(Kwon，S etat：1997，Biosci.Biotech.Biochem.61：1613-1614)其分子量为29kDa，等电点大于9.8，IC50为25pM，与商陆抗病毒蛋白(PAP)相当。该属植物中其它的核糖体失活蛋白未见报道。
                             发明内容
本发明的目的是从我国南方常见的苋菜品种(Amaranthus mangostanusL.)的种籽中，制备出一种新的核糖体失活蛋白-苋菜蛋白(Amaramangin)，并公开了它的制备方法及用途。经SDS-PAGE显示它的分子量为29kDa，等电点pI＞9。
本发明采用一种温和的分离纯化方法，即苋菜籽加入醋酸缓冲液，或磷酸缓冲液，或水，或盐水浸泡，然后在高速匀浆机上匀浆，经低温离心或过滤获得抽提液，抽提液再经SP-琼脂糖、S-琼脂糖、CM-琼脂糖或CM-纤维素等强或弱阳离子凝胶介质层析分离，就可得到电泳一条带的纯蛋白，我们把它命名为苋菜籽蛋白(Amaramangin)，SDS-PAGE显示它的分子量为29kDa，等电点pI＞9，用阿尔新蓝染色(孙册，《凝集素》P21)，证明苋菜蛋白是糖蛋白。同时，苋菜蛋白可以被Cibacron blue-介质所吸附。
本发明的苋菜籽蛋白与天花粉蛋白和商陆抗病毒蛋白相类似，可以用作引产药物原料用于制备抗肿瘤制剂、抗病毒制剂抗艾滋病毒制剂。
本发明的苋菜籽蛋白，还可以作为RNA N-糖苷酶或多核苷酸：腺苷糖苷酶用于分子生物学和免疫学研究。
本发明的苋菜蛋白，对真核生物细胞内蛋白质生物合成有强烈抑制作用，适合于作免疫毒素的毒素材料。
使用本发明的方法，可以从苋科其他种属植物的种籽或茎叶(如鸡冠花Celosia cristata L，青葙子Celosia argentea L，千里红Gomphrenaglobosa L，老枪谷Amaranthus caudatus L.，刺苋A.spinosus L.，绿穗苋A.hybridus，反枝苋A.retroflexux等)中分离出核糖体失活蛋白，其分子量在29kDa左右，等电点偏碱性，并具有强烈抑制细胞内核糖体蛋白质合成的活性。
使用本发明的方法，可以从黎科菠菜(Spinacia oleracea Mill)的种籽或茎叶中分离出核糖体失活蛋白，其分子量在29kDa左右，等电点偏碱性，并具有强烈抑制细胞内核糖体蛋白质合成的活性。
本发明与现有技术相比，具有以下积极效果：
(1).苋菜是常用蔬菜，因其生长旺盛，抗病虫害，产量高，农村用作猪的饲料。采用温和的提取方法从中可获得一种新的核糖体失活蛋白-苋菜籽蛋白。
(2).本发明与本属植物中分离的Amaranthin相类似，它们都属于类型I核糖体失活蛋白，分子量大约29～30kDa之间。本发明证实苋菜籽蛋白是一种糖蛋白，可以被Cibacron blue-介质所吸附。
                             附图说明
现在对附图作图面说明：附图1.显示苋菜籽蛋白进行纯化的阳离子交换层析图；附图2.显示苋菜籽蛋白进行再纯化的阳离子交换色谱图；附图3.显示附图2.的SDS-PAGE图，其中A：f2；B：f4；C：f5；D：f6；E：f7；F：分子量标准：天花粉蛋白，溶菌酶；附图4.显示苋菜籽蛋白在Blue Sepharoe Fast Flow柱上的层析行为。
                             具体实施例
实施例1.从苋菜籽中分离纯化苋菜籽蛋白(Amaramangin)
取200g苋菜籽，加入适量的20mMol/L醋酸缓冲液(pH4.5)匀浆，离心或过滤收集提取液，用50％的醋酸调pH4.0，静置分层，离心或过滤收集清液，清液上SP-琼脂糖快流速凝胶离子交换柱，用20mMol/L pH4.5醋酸缓冲液洗柱，然后用20mMol/L pH6.0磷酸缓冲液洗去杂蛋白，最后用0～1M NaCl(在20mM pH6.0磷酸缓冲液中)梯度洗脱。洗脱图谱见附图1。
合并9-15管收集液，用50％醋酸调pH4.0，再次加在SP-琼脂糖快流速离子交换柱上，用20mMol/L pH4.5的醋酸缓冲液洗柱，再用10mMol/LpH7.2的磷酸缓冲液洗去杂蛋白，最后用0-0.5M NaCl(在10mMol/L磷酸缓冲液中)梯度洗脱，洗脱图见附图2。所得组分中第4-7管即为苋菜籽蛋白。SDS-PAGE显示其分子量为29kD。
实施例2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
核糖体失活蛋白-苋菜籽蛋白，在Bio-Rad公司的微量垂直平板电泳仪上进行SDS-PAGE，SDS-PAGE按Leammli的方法进行，分离胶浓度为12％，浓缩胶浓度为4％，电泳后按郭尧君方法(1991，生物化学与生物物理进展，18：32-37)，用考马斯亮兰染色，以天花粉蛋白(MW～27kDa)和溶菌酶(MW～14kDa)为分子量标准对照，显示苋菜籽蛋白的分子量为29kDa。SDS-PAGE结果见附图3。
实施例3.SDS-PAGE后阿尔新蓝染色
苋菜籽蛋白参照实施例2的方法进行SDS-PAGE，电泳后的胶片用阿尔新蓝染色(孙册，《凝集素》，p21)。SDS-PAGE后的凝胶在12.5％的三氯乙酸中固定30分钟，然后在含7％乙酸的过碘酸溶液中氧化一小时，再放入0.5％的偏重亚硫酸钠溶液中充分震荡30分钟，最后用0.5％阿尔新蓝(溶于7％乙酸中)染色4小时。染色结果发现苋菜籽蛋白带呈蓝绿色，证明苋菜籽蛋白是糖蛋白。
糖蛋白染色后的凝胶重新按实施例2方法，用考马斯亮兰复染，观察到原染色带位置是苋菜籽蛋白带。
实施例4.Blue-Sepharose Fast Flow层析行为
Blue-Sepharose Fast Flow是Pharmacia Brotech公司生产的CibacronBlue 3GA交联的琼脂糖快流速凝胶。合并附图2中第4-7管，对10mMol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液透析后，上Blue-Sepharose Fast Flow层析柱，先用上样缓冲液洗去杂蛋白，然后用0.3M NaCl(在10mMol/L pH7.5 Tris-HCl缓冲液中)阶段洗脱，得一尖峰，见附图4。
此例证明苋菜籽蛋白可以被Cibacron Blue-介质所吸附。

Claims (7)

1.苋菜籽核糖体失活蛋白，是从苋菜的种籽中分离出来的，其特征在于，它的分子量为29kDa，等电点大于9。
2.如权利要求1所述的苋菜籽核糖体失活蛋白，其特征在于，它具有强烈抑制细胞内核糖体蛋白质合成的活性。
3.一种权利要求1的苋菜籽核糖体失活蛋白的分离纯化方法，包括缓冲溶液抽提、二次SP-琼脂糖快流速凝胶离子交换层析，其特征在于，通过适当的缓冲液抽提和二次SP-琼脂糖快流速凝胶离子交换层析。
4.一种权利要求3所述，从鸡冠花Celosia cristata L，青葙子Celosiaargentea L，千里红Gomphrena globosa L，老枪谷Amaranthuscaudatus L.，刺苋A.spinosus L.，绿穗苋A.hybridus，反枝苋A.retroflexus采用相似的方法分离出核糖体失活蛋白，其分子量在29kDa左右，等电点偏碱性，并具有强烈抑制细胞内核糖体蛋白质合成的活性。
5.如权利要求3所述，可以从常见蔬菜菠菜属植物菠菜的种籽中，采用相似的方法分离出核糖体失活蛋白，其分子量在29kDa左右，等电点偏碱性，并具有强烈抑制细胞内核糖体蛋白质合成的活性。
6.苋菜籽核糖体失活蛋白的应用，其特征在于，该蛋白可作为药物原料应用于制备抗肿瘤制剂、抗病毒制剂和抗艾滋病毒制剂。
7.如权利要求1所述的苋菜籽蛋白的应用，其特征在于，该蛋白可作为RNAN-糖苷酶用于分子生物学和免疫学的研究，并可作为制备免疫毒素的毒素材料。
CNA021456666A 2002-10-22 2002-10-22 苋菜籽核糖体失活蛋白 Pending CN1491961A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA021456666A CN1491961A (zh) 2002-10-22 2002-10-22 苋菜籽核糖体失活蛋白

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA021456666A CN1491961A (zh) 2002-10-22 2002-10-22 苋菜籽核糖体失活蛋白

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1491961A true CN1491961A (zh) 2004-04-28

Family

ID=34232522

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA021456666A Pending CN1491961A (zh) 2002-10-22 2002-10-22 苋菜籽核糖体失活蛋白

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1491961A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1958601B (zh) * 2005-11-01 2012-04-18 中国科学院福建物质结构研究所 八棱丝瓜蛋白1的快速分离纯化及其晶体生长技术
CN101544690B (zh) * 2008-03-26 2012-08-22 林俊生 从墨草(P.octandra)所提取的一类植物蛋白、其制备方法及用途
CN105125603A (zh) * 2015-09-08 2015-12-09 昆明理工大学 一种刺苋提取物的应用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1958601B (zh) * 2005-11-01 2012-04-18 中国科学院福建物质结构研究所 八棱丝瓜蛋白1的快速分离纯化及其晶体生长技术
CN101544690B (zh) * 2008-03-26 2012-08-22 林俊生 从墨草(P.octandra)所提取的一类植物蛋白、其制备方法及用途
CN105125603A (zh) * 2015-09-08 2015-12-09 昆明理工大学 一种刺苋提取物的应用
CN105125603B (zh) * 2015-09-08 2019-02-05 昆明理工大学 一种刺苋提取物的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0295956B1 (en) Use of a protein-bound polysaccharide for making a drug for treating AIDS.
US20080112967A1 (en) Process for Refining Ganoderma Spore Polysacchoride
FI72735C (fi) Foerfarande foer framstaellning av anti-inflammatoriska polysackarider.
WO2011016937A2 (en) Methods of treatment using thymus-derived compositions
FI74474B (fi) Foerfarande foer framstaellning av nya, ur klebsiella pneumoniae extraherade glykoproteiner.
NL8204323A (nl) Fysiologisch actieve stof; werkwijze voor het bereiden daarvan.
CN1491961A (zh) 苋菜籽核糖体失活蛋白
DE3019847A1 (de) Verfahren zur herstellung von menschlichem interferon und es enthaltende mittel
CN1263107A (zh) 一种核糖体失活蛋白－南瓜蛋白
CN104628880A (zh) 红毛五加多糖、提取及提纯方法、组成分析方法及用途
CN1152052C (zh) 一种制备胸腺肽的工艺方法
CN101092448A (zh) 人参水溶性蛋白的分离纯化制备方法
Ooi et al. Isolation and characterization of a mannose-binding lectin from leaves of the Chinese daffodil Narcissus tazetta
US4944946A (en) Pharmaceutical composition for inhibiting viruses and increasing immune function (PII)
CN110256597B (zh) 一种膜法降低灵芝多糖中重金属残留的方法
CN1166685C (zh) 一种小分子核糖体失活蛋白
CN101538561B (zh) 一种提取芹菜中celⅰ核酸酶的方法
Srivastava Effect of kinetin on the Ecteola cellulose elution profile and other properties of RNA from the excised first seedling leaves of barley
CN107929351B (zh) 一种艾迪注射制剂的制备工艺
US4985247A (en) Pharmaceutical composition for inhibiting viruses and increasing immune function (PII)
CN1137135C (zh) 来源于八棱丝瓜的核糖体失活蛋白
CN110016470A (zh) 一种从商陆中提取纯化商陆抗病毒蛋白的方法
CN101200496A (zh) 血管生成抑制因子的制备方法
Haq et al. Fractionation of black seed (Nigella sativa Linn) proteins by using rotofor
KR920017663A (ko) 정제 진드기 알레르겐

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication