CN104950067A - 一种板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法 - Google Patents

一种板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种板青超微粉的常温制备工艺及处方中靛蓝及靛玉红的薄层鉴别方法。以板蓝根、大青叶为处方普通粉碎机进行粗粉碎,混合之后烘干至水分在6%以下,然后用双向气流超微粉筛机进行超微粉碎得板青超微粉。用三氯甲烷对板青超微粉进行超声提取,以靛蓝和靛玉红为对照品进行薄层色谱鉴别。供试品在对照品位置出现相同颜色的浅紫红色斑点,而阴性样品则无,说明该方法可以作为板青超微粉中靛蓝和靛玉红的质量控制方法。

Description

一种板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法
技术领域
本发明涉及一种板青超微粉的常温制备和薄层色谱鉴别方法,特别是涉及一种板青超微粉的常温工艺和配方靛蓝以及靛玉红的薄层鉴别方法。
背景技术
板青超微粉是根据中国兽药典二部收载的复方制剂板青颗粒经处方和工艺优化得到的。工艺是将板蓝根和大青叶两味药按比例混合后进行粉碎。现有技术中通常制备的是板青细粉,其大大影响了其药效,尤其是在应用于动物饮水或颗粒料拌料使用时,由于大量未破壁细胞的存在,很难达到使用要求。
药理学研究表明,板青超微粉有清热解毒,凉血的功效,主治畜禽风热感冒,咽喉肿痛,热病发斑等温热性疾病,如流行性感冒、皮炎与肾病综合征等,也可用于降低和消除免疫抑制性疾病。板青超微粉作为新开发的中药复方制剂,集合了板青颗粒的功效和超微粉的剂型优势,在集约化养殖业快速发展中,必将发挥重要作用。
超微粉粉碎技术是为适应现代技术要求而发展起来的新的粉碎技术,中药经超微粉碎后,具有极小的体积,因而它极易吸附于动物肠壁而增加吸收率,生物利用度得到极大提高。常规的超微粉碎方法是通过球磨机、棒磨机等机械力通过剪切、碰撞、挤压等方式将药物颗粒粉碎至40μm以下,但该方法效率低、耗能大、且产生大量热量,影响药物稳定性。低温超微粉碎方法是将药物置于超低温条件下将物料冷冻至脆化或玻璃体温度之下,使其成为脆性状态,然后通过机械粉碎或气流粉碎方式进行超微粉碎。这种方法优点是粉碎速度快,可以最大限度地保留药材有效成分,但是成本较高,不符合养殖业的实际情况。本发明采用的双向气流粉筛机,属于气流式超微粉碎的一种,通过喷嘴产生的高速气流作为颗粒的载体,颗粒与颗粒之间或颗粒与固定板之间发生冲击性积压、磨擦和剪切等作用,从而达到粉碎的目的。由于是循环式双气流设计,没有达到粒径要求的颗粒会再次被吹至粉碎仓进行粉碎,因此不会产生大量热量,常温即可进行大规模生产。
此外,现有对板青进行薄层色谱鉴别时,由于供试品溶液点于硅胶薄层板上展开后,少量的靛蓝、靛玉红在薄层板上分解或是被薄层板的硅胶吸附,故当待测溶液在硅胶板上展开后,对薄层进行分析应在短时间内进行,才能保证测定结果的偏差在允许范围内。
发明内容
本发明的目的在于提供一种板青超微粉的常温制备方法及靛蓝和靛玉红的薄层鉴别方法。本发明的目的通过以下过程实现。
本发明的板青超微粉的常温制备及靛蓝和靛玉红的薄层鉴别方法包括如下步骤:
步骤1、取板蓝根、大青叶,二者重量比为0.5~1:5~6,用粉碎机进行粗粉碎,混合之后于70~80℃烘干至水分质量百分比在6%以下,然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎,将通过250~300目筛网筛分的药物进行收集,再混合之后即得到板青超微粉;
步骤2、取板青超微粉0.6~0.8g,加入三氯甲烷15~20mL,超声处理30~40分钟,过滤,滤液浓缩至0.8~1.2mL,作为供试品溶液;
步骤3、取靛蓝对照品,加入二氯甲烷,制成靛蓝对照品浓度为1mg/1mL的二氯甲烷溶液,作为靛蓝对照品溶液;
步骤4、取靛玉红对照品,加入三氯甲烷,制成靛玉红对照品浓度为1mg/1mL的三氯甲烷溶液,作为靛玉红对照品溶液;
步骤5、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛蓝对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以乙酸乙酯-三氯甲烷-乙醇的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为3~4:3~4:1~1.5,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为3~6%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为5~10%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤6、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛玉红对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-三氯甲烷-丙酮的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为4~5:3~4:1~2,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为3~6%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为3~8%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤7、将供试品溶液的薄层色谱分别与靛蓝对照品溶液和靛玉红对照品溶液的薄层色谱进行对比,当在相应的位置上均显示相同颜色的斑点时,制备的板青超微粉为合格产品。
进一步地,处方中板蓝根和大青叶的重量比为1:5.5。
进一步地,将板蓝根和大青叶用粉碎机进行粗粉碎后混合,80℃烘干至水分在6%以下。
进一步地,用双向气流超微粉筛机进行超微粉碎,过300目筛网进行收集。
进一步地,步骤5中乙酸乙酯-三氯甲烷-乙醇的混合溶液的体积浓度为3:4:1.5。
进一步地,步骤6中环己烷-三氯甲烷-丙酮的混合溶液的体积浓度为5:4:1。
其中,双向气流超微粉筛机特征在于:其特征在于:包括机壳(1),在所述机壳(1)内腔中部设置有开口向下的筛筒(2),所述筛筒(2)的筒口与设置在机壳(1)下部的漏斗(3)上开口相衔接;机壳(1)内腔通过上部的负压室(4)与外设引风机(5)相连通;在位于筛筒(2)与机壳(1)之间的区域设置有由横管(6)和立管(7)构成的门字形旋转喷气管,所述门字形旋转喷气管的横管(6)中部与驱动电机(8)传动联接;在筛筒(2)中间位置垂直设置有鼓风管(9),所述鼓风管(9)的出风口穿过筛筒(2)与门字形旋转喷气管的横管(6)中部相连通,并通过滚动轴承(10)与门字形旋转喷气管的横管(6)滚动连接;鼓风管(9)的进风口延伸出所述漏斗(3)侧壁之外与外设鼓风机(11)的鼓风口相连通;在筛筒(2)内设置有进料管(12),在所述进料管(12)的出料口上方设置有缓冲伞(13),进料管(12)的进料口延伸出漏斗(3)侧壁之外;所述门字形旋转喷气管的喷气口为沿所述横管(6)、立管(7)轴向开设在其管壁上的通槽(14),所述通槽(14)的槽口朝着所述筛筒(2)方向开设;或者所述门字形旋转喷气管的喷气口为沿所述横管(6)、立管(7)轴向间隔排列开设在其管壁上的条形孔(15);所述条形孔(15)的孔口朝着所述筛筒(2)方向开设。
结果显示,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而阴性样品则无。
因此,本发明可以在常温下对板青超微粉进行规模化生产,效率高,成本低。建立的薄层鉴别方法简单快速、稳定好,无阴性干扰,可以有效控制板青超微粉中的靛蓝以及靛玉红。
为了有效控制板青超微粉的质量,本发明同时对其有效成分靛蓝及靛玉红的薄层进行鉴别研究,提供了快速鉴别方法,保证了工业生产中板青超微粉的质量。本发明制备的超微粉粒径较细,在薄层色谱鉴别时,有利于有效成分的提取,更加确保了鉴别结果的精确性。本发明为了避免薄层色谱鉴别长时间测定结果存在偏差以及显色不明显,对薄层色谱板进行了改进,一是在G薄层色谱板上喷以质量浓度为3~6%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;二是在制备时掺有质量百分比为5~10%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
此外,本发明针对靛蓝和靛玉红在板青超微粉中的不同特性,分别采用了特定配比的乙酸乙酯-三氯甲烷-乙醇的混合溶液、以及环己烷-三氯甲烷-丙酮的混合溶液作为展开剂,从而使得其展开效果清晰有效,有利于对靛蓝及靛玉红的薄层进行鉴别研究。
附图说明
图1从左边起第1个斑点为靛玉红对照品,第2个斑点为大青叶阴性样品,第3-5个斑点为板青超微粉样品。
图2批次为20130905的板青超微粉薄层图,第1斑点为靛蓝对照品,第2-4个斑点为样品。
图3批次为20130916的板青超微粉薄层图,第1斑点为靛玉红对照品,第2-4斑点为样品。
图4是双向气流超微粉筛机的结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步说明。
按上述制备方法生产2批板青超微粉批号分别为20130905和20130916,按上述检测薄层鉴别方法进行检测。
实施例一
批号为20130905板青超微粉的生产和质量鉴别。
步骤1、以板蓝根5000g,大青叶25000g为投料量,用普通粉碎机进行粗粉碎,混合之后70℃烘干至水分在6%以下,然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎,将过250目筛网的药物进行收集,再混合之后即得,该批产品的产率为90.3%。
步骤2、取板青超微粉0.6g,加入三氯甲烷15mL,超声处理35分钟,过滤,滤液浓缩至1mL,作为供试品溶液;
步骤3、取靛蓝对照品,加入二氯甲烷,制成靛蓝对照品浓度为1mg/1mL的二氯甲烷溶液,作为靛蓝对照品溶液;
步骤4、取靛玉红对照品,加入三氯甲烷,制成靛玉红对照品浓度为1mg/1mL的三氯甲烷溶液,作为靛玉红对照品溶液;
步骤5、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛蓝对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以乙酸乙酯-三氯甲烷-乙醇的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为3:4:1,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为5%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为8%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤6、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛玉红对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-三氯甲烷-丙酮的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为4:3:1,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为5%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为8%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤7、将供试品溶液的薄层色谱分别与靛蓝对照品溶液和靛玉红对照品溶液的薄层色谱进行对比,当在相应的位置上均显示相同颜色的斑点时,制备的板青超微粉为合格产品。
实施例二
批号为20130916板青超微粉的生产和质量鉴别。
步骤1、以板蓝根5000g,大青叶28000g为投料量,用普通粉碎机进行粗粉碎,混合之后80℃烘干至水分在6%以下,然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎,将过300目筛网的药物进行收集,再混合之后即得,该批产品的产率为91.4%。
步骤2、取板青超微粉0.8g,加入三氯甲烷20mL,超声处理40分钟,过滤,滤液浓缩至1.2mL,作为供试品溶液;
步骤3、取靛蓝对照品,加入二氯甲烷,制成靛蓝对照品浓度为1mg/1mL的二氯甲烷溶液,作为靛蓝对照品溶液;
步骤4、取靛玉红对照品,加入三氯甲烷,制成靛玉红对照品浓度为1mg/1mL的三氯甲烷溶液,作为靛玉红对照品溶液;
步骤5、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛蓝对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以乙酸乙酯-三氯甲烷-乙醇的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为4:4:1.5,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为6%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为10%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤6、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛玉红对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-三氯甲烷-丙酮的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为5:4:2,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为3~6%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为8%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤7、将供试品溶液的薄层色谱分别与靛蓝对照品溶液和靛玉红对照品溶液的薄层色谱进行对比,当在相应的位置上均显示相同颜色的斑点时,制备的板青超微粉为合格产品。
实施例三
用本发明实施例1和2中制备的板青超微粉,进行治疗温热病早期的药效学。
采用人工攻毒鸡大肠杆菌,控制攻毒剂量,使人工攻毒鸡大肠杆菌病模型主要表现温热病早期证侯,待证侯比较明显时,用板青超微粉进行治疗。结果显示板青超微粉对人工感染鸡大肠杆菌病温热病早期模型具有一定的治疗作用。表明板青超微粉对鸡大肠杆菌所致温热病早期具有较好治疗作用。实验方法及结果如下:
1实验方法:
150只60日龄罗曼蛋公鸡随机分为3组,每组50只。空白对照组隔离饲养并胸肌注射GN增菌液0.3mL,其余2组每羽胸肌注射鸡大肠杆菌液0.3mL攻毒(预实验攻毒菌液浓度109CFU/mL),出现明显温热病早期证侯时(卫分证和气分证为主),板青超微粉药物试验组按照0.5%板青超微粉拌料混饲,连用5天,阳性对照组不用药。用药后观察期7天(表1)。试验结束时,观察各组的临床症状、治愈率、有效率、死亡率。
表1 试验动物分组处理
2疗效评价标准:结合生长情况按如下标准综合判定疗效:
痊愈:鸡只精神活泼,扎堆现象消除,羽毛平滑、饮食完全正常。
显效:鸡只存活,但精神、存在扎堆现象及饮食等未完全恢复正常。
无效:鸡只死亡,剖检呈现典型的温热病气分证病变。
有效率=(痊愈数+显效数)÷样本数×100%。
3结果
3.1 板青超微粉缓解临床证侯情况
板青超微粉组在用药后第4天开始,采食量开始恢复,并且高于阳性对照组,精神沉郁程度亦轻于阳性对照组,扎堆现象缓解,但阳性对照组的扎堆现象还比较普遍。试验结束时阳性对照组的精神沉郁和扎堆鸡数仍多余板青超微粉组。
3.2 各组治疗温热病早期情况
与阳性对照组比较,板青超微粉可以显著降低温热病早期模型鸡的死亡率和提高其有效率和治愈率(p<0.05)(表2)。
表2 各组对温热病早期的治疗情况
注:同列数据没有相同字母者差异显著(P<0.05)。
实验结果显示,板青超微粉对人工感鸡大肠杆菌病所致温热病早期具有一定的治疗作用。

Claims (6)

1.一种板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法,其特征在于常温制备方法和薄层色谱鉴别方法分别为下述步骤:
步骤1、取板蓝根、大青叶,二者重量比为0.5~1:5~6,用粉碎机进行粗粉碎,混合之后于70~80℃烘干至水分质量百分比在6%以下,然后用双向气流超微粉筛机在常温下进行超微粉碎,将通过250~300目筛网筛分的药物进行收集,再混合之后即得到板青超微粉;
步骤2、取板青超微粉0.6~0.8g,加入三氯甲烷15~20mL,超声处理30~40分钟,过滤,滤液浓缩至0.8~1.2mL,作为供试品溶液;
步骤3、取靛蓝对照品,加入二氯甲烷,制成靛蓝对照品浓度为1mg/1mL的二氯甲烷溶液,作为靛蓝对照品溶液;
步骤4、取靛玉红对照品,加入三氯甲烷,制成靛玉红对照品浓度为1mg/1mL的三氯甲烷溶液,作为靛玉红对照品溶液;
步骤5、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛蓝对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以乙酸乙酯-三氯甲烷-乙醇的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为3~4:3~4:1~1.5,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为3~6%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为5~10%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤6、薄层色谱鉴别试验:吸取供试品溶液和靛玉红对照品溶液各10μL,分别点加于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-三氯甲烷-丙酮的混合溶液为展开剂,混合溶液的体积浓度为4~5:3~4:1~2,展开,取出,晾干;其中G薄层色谱板上喷以质量浓度为3~6%的硫酸甲醇溶液作为荧光增强剂;所述G薄层色谱板在制备时掺有质量百分比为3~8%的十八烷基硅烷键合剂作为填充剂。
步骤7、将供试品溶液的薄层色谱分别与靛蓝对照品溶液和靛玉红对照品溶液的薄层色谱进行对比,当在相应的位置上均显示相同颜色的斑点时,制备的板青超微粉为合格产品。
2.如权利要求1所述的板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法,其特征在于处方中板蓝根和大青叶的重量比为1:5.5。
3.如权利要求1所述的板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法,其特征在于将板蓝根和大青叶用粉碎机进行粗粉碎后混合,80℃烘干至水分在6%以下。
4.如权利要求1所述的板青超微粉,其特征在于用双向气流超微粉筛机进行超微粉碎,过300目筛网进行收集。
5.如权利要求1所述的板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法,其特征在于步骤5中乙酸乙酯-三氯甲烷-乙醇的混合溶液的体积浓度为3:4:1.5。
6.如权利要求1所述的板青超微粉的常温制备及薄层色谱鉴别方法,其特征在于步骤6中环己烷-三氯甲烷-丙酮的混合溶液的体积浓度为5:4:1。
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