CN107632103A - 一种参虎败毒颗粒中三种药材的同时薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种参虎败毒颗粒中三种药材的同时薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到同一供试品溶液、二种对照药材溶液和对照品溶液，在同一块薄层板上，以体积比9∶4∶2∶0.5的环己烷‑乙酸乙酯‑丙酮‑甲酸为展开剂，展开后，日光下检视靛玉红的红色斑点；紫外光灯365nm下检视虎杖的亮黄色荧光主斑点；紫外光灯254nm下检视拳参棕褐色主斑点。斑点分离良好，互不干扰。不需显色，以化合物的固有特性，直接检视斑点颜色或荧光，提高了检视识别率、检测效率，节约了成本，减少了污染。

Description

一种参虎败毒颗粒中三种药材的同时薄层鉴别方法

技术领域

本发明属于中药薄层鉴别领域，即，采用薄层鉴别技术，同一供试品溶液，一块薄层板，三种检视条件，同时鉴别参虎败毒颗粒中拳参、虎杖和大青叶的快速薄层鉴别方法。

背景技术

拳参为蓼科植物拳参的干燥根茎，主含鞣质类，有可水解鞣质和缩合鞣质，如鞣酸、没食子酸、鞣花酸、D-儿茶酚、L-表儿茶酚、6-没食子酰葡萄糖和3，6-二没食子酰葡萄糖等。具清热解毒，消肿，止血的功效。其薄层鉴别中国药典是以没食子酸为指标，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，展开，用氨蒸气熏蒸显色后，日光下检视颜色斑点；有文献报道^【1】拳参对照药材与拳参样品都先用水煎煮，水煎液蒸干，残渣再加甲醇超声提取，提取液再蒸干，残渣再加甲醇溶解，作为对照药材和供试品溶液，采用甲苯-乙酸乙酯- 甲酸(5∶4∶1)为展开剂，展开，喷以5％三氯化铁溶液，日光下检视颜色斑点；还有文献报道^【2】取拳参浓缩颗粒2g，加水20ml溶解，加乙酸乙酯40ml萃取，萃取液浓缩至1ml，作为供试品溶液；再取拳参对照药材4g，先加水100ml，煎煮30分钟，煎煮液浓缩至20ml，以下按颗粒剂的制备方法，制备对照药材溶液；再取没食子酸对照品加乙醇制成每1ml含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液；将上述3种溶液点于薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6∶ 3∶1)为展开剂，展开，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，日光下检视颜色斑点。综上，拳参的薄层鉴别都是显色后，检视显色的颜色斑点。

虎杖为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根，主含蒽醌类，有游离的蒽醌，如大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等，以及这些游离蒽醌与糖形成的苷类。具利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰的功效。其薄层鉴别中国药典是以大黄素和大黄素甲醚为指标，通过将样品水解，三氯甲烷萃取，萃取液蒸干，三氯甲烷再定容的方式，制备供试品溶液。方法繁琐、费时、污染环境。有虎杖中多种成分的文献报道^【3】，方法是取虎杖样品10g，用95％乙醇浸泡提取48小时，提取液回收乙醇至适量，再用乙醚萃取，萃取液除去部分乙醚，余0.2ml，作为供试品溶液；以大黄素、大黄酚、二苯乙烯苷及其苷元配制的对照品溶液为对照；将供试品溶液与对照品溶液，点于薄层板上，先用乙酸乙酯-甲醇-水(20∶3∶1)为展开剂，展开4cm，将板取出，挥去溶剂，再用苯-乙酸乙酯(8∶2)按同一方向展至10cm，取出，挥去溶剂，先置氨气缸中熏蒸后检视大黄素与大黄酚的颜色斑点；再用三氯化铁-铁氰化钾显色后，检视二苯乙烯苷及其苷元的颜色斑点。

大青叶为十字花科植物菘蓝的干燥叶，主含色氨酸、靛红烷B、靛蓝、靛玉红、色胺酮等。具清热解毒，凉血消斑的功效。其薄层鉴别中国药典是以靛蓝和靛玉红为指标，样品经过三氯甲烷提取、蒸干、再定容，作为供试品溶液，以环己烷-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶2) 为展开剂，展开后，日光下检视颜色斑点。未查阅到单独报道大青叶药材的文献，但查阅到制剂中大青叶的薄层鉴别报道^【4】，方法是以靛玉红对照品为对照，供试品用乙醚提取后，蒸干，再用少量三氯甲烷溶解，作为供试品溶液，以苯-乙酸乙酯(3∶1)为展开剂，进行二次展开，日光下检视颜色斑点。

综上，拳参、虎杖和大青叶的薄层鉴别，都是单味药材的鉴别，其供试品溶液的制备方法比较繁琐，多是显色后检视，有的还要进行二次展开，费时、费力，污染环境。甚至展开剂中还应用了已经禁用的剧毒试剂苯。还未查阅到拳参、虎杖和大青叶三种中药材，采用同一种展开剂，在同一块薄层板上，三种不同的检视条件下，利用各化合物的固有理化性质，同时鉴别的薄层方法报道。

参虎败毒颗粒由拳参、虎杖和大青叶三种药材组成，其处方配比如下：

拳参 6～60g 虎杖1～10份 大青叶3～30份

糊精 2.2～22份 蔗糖 适量

制备方法取处方中三种药材，适当粉碎，加60～70％乙醇6～10倍量，提取二次，每次2～3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，清膏备用；药渣加6～8倍量水煎煮1～ 2小时，滤过，滤液在60～70℃减压浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的清膏，与醇提清膏合并，再在60～70℃减压浓缩至相对密度为1.25～1.30(60℃)稠膏，加入糊精与适量蔗糖，混匀，制粒，70℃减压干燥，制成颗粒1000g，即得。

发明内容

本发明就是在上述研究背景的基础上，针对目前薄层鉴别繁琐、费时、方法污染环境和高成本的弊端，发明了一种参虎败毒颗粒中三种药材的同时薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法，得到同一供试品溶液、各自对照药材溶液和对照品溶液，在同一块薄层板上，以体积比9∶4∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，日光下检视靛玉红的红色斑点(图1)；置紫外光灯(365nm)下检视虎杖的亮黄色荧光主斑点(图2)；再置紫外光灯(254nm)下检视拳参棕褐色主斑点(图3)。斑点分离良好，互不干扰。不需显色，以化合物的固有特性，直接检视斑点颜色或荧光，提高了检视识别率、检测效率，节约了成本，减少了污染。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

取参虎败毒颗粒3g，研细，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取拳参与虎杖对照药材各0.5g，分别加甲醇2ml，超声处理10分钟，上清液作为各自对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照药材溶液各8～10μl、对照品溶液5～8μl、供试品溶液10～12μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比9∶4∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与虎杖对照药材色谱相应的位置上，显2个相同的亮黄色荧光主斑点；置紫外光灯(254nm) 下检视，供试品色谱中，在与拳参对照药材色谱相应的位置上，显相同的棕褐色主斑点。

本发明的原理如下：

依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制成同一供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液。再通过多组分展开剂中每种展开剂极性不同，展开速度而异，携带的成分不一样，在薄层板上的吸附、解吸附能力的差别，使各成分斑点得以分离，在各自不同的检视条件下，呈现不同的颜色斑点，实现同一块薄层板上，不同的检视条件下，不用显色，直接检视多种药材的特征性成分。

本发明的创新点及有益效果如下：

1.用简便、快捷的前处理方法得到同一供试品溶液、二种对照药材溶液和对照品溶液，点在同一块薄层板上，以体积比9∶4∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸为展开剂，展开后，日光下检视靛玉红的红色斑点；紫外光灯(365nm)下检视虎杖的亮黄色荧光主斑点；紫外光灯(254nm)下检视拳参棕褐色主斑点。斑点分离良好，互不干扰。

2.以靛玉红在日光下呈现红色斑点的特性，虎杖蒽醌苷元类在紫外光灯365nm下呈现的亮黄色荧光斑点特性，拳参鞣酸类在紫外光灯254nm下呈现的棕褐色斑点特性，不需显色，直接检视，排除了在各自检视颜色下的其他颜色斑点的干扰，提高了检视识别率、检测效率，节约了成本，减少了污染。

3.要实现靛玉红的红色斑点、虎杖蒽醌苷元的亮黄色荧光斑点以及大青叶的棕褐色斑点，在同一块薄层板上能够分离良好、斑点清晰、互不干扰，其关键技术是展开剂系统的组分与配比，本发明的展开剂环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(9∶4∶2∶0.5)，既体现了展开剂极性、中极性和非极性组分间的梯度合理搭配，又筛选了各剂量的最佳配比，才获得供试品溶液不需任何提纯处理，一板检测三种药材的良好薄层鉴别效果，为首次报道。

4.该鉴别方法鉴别3批参虎败毒颗粒，笼统计算，只需样品9g、拳参与虎杖对照药材各0.5g、靛玉红对照品0.5mg，甲醇38ml，展开剂15ml，时间1.5小时，即可检测完毕。与目前复方制剂中检测三种药材的一般方法相比，具有突出的进步，并获得高效率、低成本的有益效果。

附图说明

图1为参虎败毒颗粒日光下的薄层色谱图。

图2为参虎败毒颗粒紫外光灯365nm下的薄层色谱图。

图3为参虎败毒颗粒紫外光灯254nm下的薄层色谱图。

图1.2.3为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.拳参对照药材；2、3虎杖对照药材；4.虎杖空白；5.靛玉红；6.拳参空白7.8.9供试品；10.大青叶空白

本发明具体实施方式如下：

取参虎败毒颗粒3g，研细，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取拳参与虎杖对照药材各0.5g，分别加甲醇2ml，超声处理10分钟，上清液作为各自对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照药材溶液各8～10μl、对照品溶液5～8μl、供试品溶液10～12μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比9∶4∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与虎杖对照药材色谱相应的位置上，显2个相同的亮黄色荧光主斑点；置紫外光灯(254nm) 下检视，供试品色谱中，在与拳参对照药材色谱相应的位置上，显相同的棕褐色主斑点。

参考文献

[1]叶锦雄，李睿均，黄伟红等.拳参薄层色谱的鉴别研究[J]中国民间医药，2016.25(13) 18～19

[2]李琰，付欣彤，张小茜.地榆及拳参浓缩颗粒中没食子酸的薄层色谱鉴别[J]首都食品与医药，2003年18期

[3]郭金凤，崔一民，赵俠等.薄层层析法鉴别虎杖中的成分[J]中国药事，1997.11(1)52～53

[4]郑文红，蓝义琨.清火片中大青叶的薄层色谱鉴别探讨[J]中国医药指南，2012.10(12) 474～475。

Claims (3)

1.一种参虎败毒颗粒中三种药材的同时薄层鉴别方法，其特征在于：

取参虎败毒颗粒3g，研细，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取拳参与虎杖对照药材各0.5g，分别加甲醇2ml，超声处理10分钟，上清液作为各自对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照药材溶液各8～10μl、对照品溶液5～8μl、供试品溶液10～12μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比9∶4∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与虎杖对照药材色谱相应的位置上，显2个相同的亮黄色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与拳参对照药材色谱相应的位置上，显相同的棕褐色主斑点。

2.根据权利要求1所述的一种参虎败毒颗粒中三种药材的同时薄层鉴别方法，其特征在于所述的参虎败毒颗粒由拳参、虎杖和大青叶组成。

3.根据权利要求1所述的一种参虎败毒颗粒中三种药材的同时薄层鉴别方法，其特征在于所述的三种药材是指拳参、虎杖和大青叶。