CN103575818A

CN103575818A - 板青颗粒质量控制方法

Info

Publication number: CN103575818A
Application number: CN201210269400.3A
Authority: CN
Inventors: 张许科; 刘兴金; 张晓会
Original assignee: Luoyang Huizhong Animal Medicine Co Ltd
Current assignee: Luoyang Huizhong Animal Medicine Co Ltd
Priority date: 2012-07-30
Filing date: 2012-07-30
Publication date: 2014-02-12
Anticipated expiration: 2032-07-30
Also published as: CN103575818B

Abstract

本发明提供了一种板青颗粒质量控制方法，为使用HPLC色谱法同时测定精氨酸和靛玉红含量，包括以下步骤:分别制备精氨酸和靛玉红的标准样品和板青颗粒的供试样品；经HPLC色谱层析法处理，比较计算获得板青颗粒的供试样品中的精氨酸和靛玉红的含量。本发明的板青颗粒含量的控制方法操作简单，实现了对有效成分种类复杂的中药产品中有效成分量化控制要求，使产品的质量水平提升，实践证明将使用本发明的方法将板青颗粒中精氨酸的含量的限度定为每克颗粒中不少于12.5mg/g，靛玉红为0.12mg/g，可以做为板青颗粒的质量控制的标准。

Description

板青颗粒质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种板青颗粒质量控制方法，特别是指一种通过测定板青颗粒中精氨酸和靛玉红含量，实现板青颗粒的质量控制的方法。

背景技术

板青颗粒是一种常见的兽药方，药方含板蓝根、大青叶等成分，具有清热解毒、消肿散结、强心利尿利胆、抗菌消炎、抗病毒，增强免疫力等功效。主要用于防治猪流行性感冒、高热症、繁殖与呼吸综合征、细小病毒病、出血性败血症、丹毒、链球菌病、副伤寒、病毒性肠炎、附红细胞体病、伪狂犬病、仔猪断奶多系统衰竭综合症等免疫抑制病，另外，对治疗由病毒引起的鸭病毒性肝炎、鸭瘟、雏番鸭细小病毒病、小鹅瘟等疾病也有很好的疗效。本品可快速提高机体免疫力，促进抗体形成，作为保健佳品，可长期使用。

关于板青颗粒的质量控制只有《中华人民共和国兽药典》2010版二部标准，其中记载：“板青颗粒[处方]板蓝根600g大青叶900g[制法]以上2味，加水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加蔗糖、糊精适量，混匀，制成颗粒，干燥，制成1500g，即得。[性状]本品为浅黄色或黄褐色颗粒；味甜，微苦。[鉴别]（1）取本品0.5g，加水5ml，使溶解，静置，取上清液点于滤纸上，晾干，置紫外光灯（365nm）下观察，斑点显蓝色荧光。（2）取本品研细的粉末0.5g，加稀乙醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加稀乙醇1ml使溶解，做为供试品溶液。另取精氨酸对照品，加稀乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录32页）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（15:7:7）为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。[检查]应符合颗粒剂项下有关的各项规定（附录8页）。[检查]应符合颗粒剂项下有关的各项规定（附录8页）。[功能]清热解毒，凉血。[主治]风热感冒，咽喉肿痛，热病发斑等温热性疾病。[用法用量]马、牛50g；鸡0.5g。[贮藏]密封，防潮。”上述《中华人民共和国兽药典》2010版二部中板青颗粒的质量标准只对板青颗粒中的精氨酸进行鉴别，没有含量测定项。因此，对板青颗粒的质量控制难以达到量化的标准。

板青颗粒是一种含多组分复杂成分的兽药复方中药，由于成分复杂，造成含量不易控制，使中药的安全性和有效性受到影响，而且板青颗粒是一种含多组分复杂成分的兽药复方中药，如不能进行有效成分的质控，很难保证药品质量。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种使用HPLC色谱法同时测定精氨酸和靛玉红含量的方法，以实现对板青颗粒的质量控制。

即本发明提供了一种板青颗粒质量控制方法，为使用HPLC色谱法同时测定精氨酸和靛玉红含量。

优选地，本发明所述的质量控制方法，包括以下步骤：

A、分别制备精氨酸和靛玉红的标准样品；

B、制备板青颗粒的供试样品；

C、将所述的精氨酸和靛玉红的标准样品、和板青颗粒的供试样品分别经HPLC色谱层析法处理，比较计算获得板青颗粒的供试样品中的精氨酸和靛玉红的含量。

即本发明是通过将黄芪苷的标准样品和大黄素的标准样品、和板青颗粒的供试样品分别经HPLC色谱层析法处理，以获得黄芪苷的标准样品和大黄素的标准样品的标准曲线后，与板青颗粒的供试样品经HPLC色谱层析法处理的色谱曲线对照，以获得板青颗粒的供试样品中的精氨酸和靛玉红的含量。

为了充分释放板青颗粒的供试样品，可以使用有机溶剂进行提取；更优选地，使用乙醇进行提取；更优选地，使用80%的乙醇对板青颗粒的供试样品进行提取；也可以使用本领域常用的其他任何有机溶剂提取。

为了充分释放板青颗粒的供试样品，还可以使用加热回流处理的方法对板青颗粒的供试样品进行处理；优选地，可以对板青颗粒进行研磨处理或超声震荡处理；也可以使用本领域常用的其他提取方法对板青颗粒的供试样品进行处理。

本发明的板青颗粒质量控制方法中，使用了HPLC色谱法对黄芪苷的标准样品和大黄素的标准样品、和板青颗粒的供试样品进行处理，其中，HPLC色谱法中使用的色谱柱为反相层析柱；优选地，HPLC色谱法中使用的色谱柱为C₁₈，更优选地，HPLC色谱法中使用的色谱柱为Agilent-C₁₈。

优选地，所述的HPLC色谱层析法中使用的流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈；更优选地，为磷酸盐缓冲液-乙腈=35：75；最优选地，为磷酸盐缓冲液（0.02mol/L磷酸二氢钾，磷酸调pH=3.0）-乙腈=35：75。

优选地，本发明的HPLC色谱层析法中的流速:1ml/min；检测波长:254nm；柱温:30℃。

由上可以看出，本发明提供了一种HPLC色谱法测定法，同时测定板青颗粒中的精氨酸和靛玉红的含量，以用于板青颗粒的质量控制。

发明效果

本发明的板青颗粒含量的控制方法操作简单，实现了对有效成分种类复杂的中药产品中有效成分量化控制要求，使产品的质量水平提升。本发明使用了简单的方法以控制板青颗粒中的精氨酸和靛玉红两种成分的含量，达到了中药产品板青颗粒的质量可控的效果；本发明的方法线性关系好，重现性好，将使用本发明的方法将板青颗粒中精氨酸的含量的限度定为每克颗粒中不少于12.5mg/g，靛玉红为0.12mg/g，可以做为板青颗粒的质量控制的标准。

附图说明

图1为精氨酸对照品色谱图；

图2为靛玉红对照品色谱图；

图3为供试品色谱图;

图4为阴性对照品色谱图；

图5为精氨酸对照品色谱线性方程图；

图6为靛玉红对照品色谱线性方程图。

具体实施方式

本发明实施例中使用的C18柱是指反相ODS柱（十八烷基硅烷键合硅胶填料，Octadecylsilyl，简称ODS柱），通过本发明的实施例，本领域技术人员知晓所有的C18柱都可以用来实现本发明，如waters的

C18色谱柱等都可以实现本发明

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1HPLC法同时测定板青颗粒中精氨酸、靛玉红的含量1仪器与试剂、样品

仪器:Waterse2695高效液相色谱仪；UV2489紫外检测器。

试剂:乙睛为色谱纯;磷酸，磷酸二氢钾，乙醇为分析纯;水为二次重蒸水。

对照品:精氨酸（140685-200802）、靛玉红（110717-200204）购自中国兽医药品监察所

样品:板青颗粒，由洛阳惠中兽药有限公司生产。{[处方]板蓝根600g 大青叶900g[制法]以上2味，加水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加蔗糖、糊精适量，混匀，制成颗粒，干燥，制成1500g，即得。

2色谱条件:

色谱柱:Agilent-C18（150mm X4.6mm，5um)。

流动相:磷酸盐缓冲液（0.02mol/L磷酸二氢钾，磷酸调pH=3.0）-乙腈（35：75）

流速:1ml/min；检测波长:254nm；柱温:30℃。

3溶液的制备:

①对照品溶液的制备:a取精氨酸对照品适量，精密称定，置25ml量瓶中，加入80%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含精氨酸40μg的对照品溶液。b取靛玉红对照品适量，精密称定，置25ml量瓶中，加入80%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含靛玉红20μg的对照品溶液。

②供试品溶液的制备:取研细的供试品约20g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%的乙醇80ml，加热回流3h，放冷至室温，转移至100ml量瓶中，加80%的乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

③阴性样品的制备:取蔗糖、糊精适量，加水适量混匀，制成颗粒，干燥，即得。按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件测定。在与对照品图谱比较可见，在对照品图谱中精氨酸、靛玉红的峰出现的位置上未见有峰出现（参见图1~图4，其中，图1为精氨酸对照品色谱图；图2为靛玉红对照品色谱图；图3为供试品色谱图;图4为阴性对照品色谱图。由图可见，使用本发明的方法在经过一次HPLC色谱处理即可获得板青颗粒中的精氨酸和靛玉红两种成分的准确含量）。

4 标准曲线的制备:

分别取上述对照品溶液5，10，20，30，50μl，注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件，测定峰面积。以对照进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。结果表明精氨酸在0.2～2μg，靛玉红在0.1～1μg范围内线性关系良好。数据如下表所示。线性图参见图5~图6，其中图5为精氨酸对照品色谱线性方程图；图6为靛玉红对照品色谱线性方程图。

表1线性关系试验结果

Figure 2012102694003100002DEST_PATH_IMAGE001

5精密度试验:

取板青颗粒1份，按3项下②中方法制备供试液，取供试液l0ul,按上述色谱条件连续重复进样6次，测定精氨酸和靛玉红的含量，结果测得RSD分别为1.64%和1.90%。结果如下表所示：

表2精密度试验结果

Figure 2012102694003100002DEST_PATH_IMAGE002

6回收率测定：

取己知含量的板青颗粒6份，精密称定，分别向其中加入精氨酸对照品溶液10ml、靛玉红对照品溶液10ml按3项下②中方法制备供试液，在上述色谱条件下测定各自含量，计算回收率。结果平均回收率分别为97.21%、98.04%，RSD分别为2.13%、2.06%。试验结果如下表3所示：

表3回收率试验结果

7样品测定:

分别取相同工艺制备的12个批号板青颗粒样品（批号：091101、091102、091103、091104、091201、091202、091203、091204、100101、100102、100103、100104），按3项下②中方法制备供试液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10ul，按上述色谱条件，测定，计算样品中精氨酸和靛玉红的含量。经对12批样品进行精氨酸和靛玉红含量测定，其中精氨酸最高值为16.259mg/g，最低值为13.946mg/g，靛玉红最高值为0.143mg/g，最低值为0.129mg/g。根据板蓝根药材中精氨酸的含量为2.4%~6.5%，大青叶中靛玉红的限量为0.02%，计算得本品中精氨酸的理论含量为9.6mg/g~26mg/g，靛玉红为0.12mg/g。考虑到大生产过程中的损失，将本品中精氨酸的含量的限度定为每克颗粒中不少于12.5mg/g，靛玉红为0.12mg/g，以控制内在质量。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种板青颗粒质量控制的方法，其特征在于，所述方法为使用HPLC色谱法同时测定板青颗粒中精氨酸和靛玉红的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、分别制备精氨酸和靛玉红的标准样品；

B、制备板青颗粒的供试样品；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤B中所述的板青颗粒的供试样品为使用乙醇作为溶剂提取获得的。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤C中所述的HPLC色谱层析法中使用的流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤C中所述的HPLC色谱层析法中流动相比例为磷酸盐缓冲液-乙腈=35:75。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤C中所述的HPLC色谱层析法中使用色谱柱为反相柱。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤C中所述的HPLC色谱层析法中使用色谱柱为C₁₈。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤C中所述的HPLC色谱层析法中的流速为1ml/min；检测波长:254nm；柱温:30℃。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤C中所述的精氨酸和靛玉红的标准样品、和板青颗粒的供试样品为使用相同的HPLC色谱条件处理。

10.根据权利要求1-9任意一项所述的方法在板青颗粒质量控制中的用途。