CN103063767A - 三黄分散片的质量标准及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种三黄分散片的质量标准及其检测方法，其包括定性鉴别以及三种主要成分大黄总蒽醌、盐酸小檗碱、黄芩苷的含量测定。本发明操作简便、分离效果好、精密度好、稳定性高、重复性好、专属性强，可有效地控制三黄分散片的内在质量及产品的稳定性，确保了药物疗效。

Description

三黄分散片的质量标准及其检测方法

技术领域

本发明属于药品检测技术领域，涉及中药制剂的质量标准及检测方法，尤其涉及一种三黄分散片的质量标准及其检测方法。

背景技术

三黄分散片是邯郸摩罗丹药业股份有限公司与承德医学院合作开发的改剂型中药新药，以大黄提取物、盐酸小檗碱和黄芩浸膏为主要成分，加辅料后再依次进行制粒、干燥、混匀、压片、包衣的步骤所得。三黄分散片具有清热解毒、泻火通便、排毒养颜之效，可用于三焦热盛所致的目赤肿痛、口鼻生疮、咽喉肿痛、牙龈肿痛、心烦口渴、尿黄便秘以及急性胃肠炎、痢疾，具有药效高、服用方便的特点，具有广阔的应用前景。现有技术中尚未建立起三黄分散片的质量标准，不利于对其质量的控制，药品疗效得不得保证。

发明内容

本发明目的在于针对现有技术的不足，提供一种三黄分散片的质量标准及其检测方法，该方法对三黄分散片中的三种主要成分全部进行含量测定，能够更有效地控制产品的内在质量并保证产品质量的稳定，进而确保药物疗效。

本发明所检测的三黄分散片是邯郸摩罗丹药业股份有限公司与承德医学院合作开发的改剂型中药新药，邯郸摩罗丹药业股份有限公司拥有该产品的技术专有权，独家使用权及技术的改进、提高权。

本发明所检测的三黄分散片的标准处方为：大黄600-1800g，盐酸小檗碱10-30g，黄芩浸膏42-126g。

本发明所检测的三黄分散片的制备方法为：

①取大黄，加乙醇回流提取，提取液滤过，回收乙醇，调pH值至9-11，上混合树脂柱，5%氢氧化钠乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇，调pH值至2-3，过滤沉淀，烘干，粉碎成细粉，得大黄提取物；

②取黄芩，加水煎煮三次，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1-2，静置，沉淀，用水洗涤至pH值至5-7，烘干，粉碎成细粉，得黄芩浸膏；

③将步骤①获得的大黄提取物、盐酸小檗碱、步骤②获得的黄芩浸膏按照重量份数60-180:1-3:4.2-12.6的比例混合；

④再与常规辅料混合均匀，高速搅拌制粒，50℃以下干燥后，按常规制造片剂的方法依次进行整粒、压片、包衣的步骤，即得三黄分散片。

本发明所检测的三黄分散片的规格为0.46g/片。

为达到本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种三黄分散片的质量标准及其检测方法，包括利用高效液相色谱法对大黄总蒽醌、盐酸小檗碱、黄芩苷进行定性鉴别、土大黄苷的检查、溶出度的检查以及利用液相色谱法对大黄总蒽醌、盐酸小檗碱、黄芩苷进行含量测定。

具体地，所述的三黄分散片的质量标准及其检测方法如下：

【性状】：

薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味苦。

【鉴别】：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD收录的高效液相色谱法测定。

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品的大黄总蒽醌中的5个单体（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间均应与相应对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间一致。

【检查】：

（1）土大黄苷：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.1-0.5mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯。

取本品1片，研细，加甲醇20-40ml，功率120-200w及频率30-50KHz的条件下超声处理20-40min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液。

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法（TLC）试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:25-35:1.5-2.5:2.5-3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点。

上述土大黄苷检查方法经过了方法学考察试验：

①制备土大黄苷对照品溶液：取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.3mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液。

②超声时间的确定：

取本品1片，研细，加甲醇30ml，同时加入土大黄苷对照品溶液1ml，超声提取20min，放冷，过滤，滤液作为土大黄苷阳性样品供试品溶液（Ⅰ）；

取本品1片，研细，加甲醇30ml，同时加入土大黄苷对照品溶液1ml，超声提取30min，放冷，过滤，滤液作为土大黄苷阳性样品供试品溶液（Ⅱ）；

取本品1片，研细，加甲醇30ml，同时加入土大黄苷对照品溶液1ml，超声提取40min，放冷，过滤，滤液作为土大黄苷阳性样品供试品溶液（Ⅲ）；

同时考察土大黄苷阳性样品供试品溶液（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）的土大黄苷斑点颜色，发现溶液（Ⅱ）、（Ⅲ）的斑点颜色比溶液（Ⅰ）的斑点颜色明显，而溶液（Ⅱ）、（Ⅲ）的斑点颜色无差异，故选择超声30min作为提取方法。

③制备供试品溶液：

取本品1片（批号：1010004），研细，加甲醇30ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，过滤，滤液作为样品一；

取本品1片（批号：1010005），研细，加甲醇30ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，过滤，滤液作为样品二；

取本品1片（批号：1010006），研细，加甲醇30ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，过滤，滤液作为样品三；

④照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法（TLC）试验：

吸取供试品（样品一、样品二、样品三）、土大黄苷阳性样品供试品溶液（Ⅱ）、土大黄苷对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（100:30:2:3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，结果如图1所示。

⑤从图1可以看出，供试品（样品一、样品二、样品三）色谱中，在与土大黄苷对照品色谱相应的位置上，均未显相同颜色的荧光斑点；而土大黄苷阳性样品供试品溶液（Ⅱ）在与土大黄苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.3wt%-0.5wt%的十二烷基硫酸钠水溶液800-1000ml为溶出介质，转速为80-120转/min，依法操作，经30-60min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出量，限度为标示量的70%，应符合规定。

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录IA片剂项下分散片下有关的各项规定。

【含量测定】：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液70-100:10-15为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为70-90μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为70-90μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为70-90μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为70-90μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为35-45μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液。精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液。混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为11.2-14.4μg/ml、大黄酸的浓度为28-36μg/ml、大黄素的浓度为8.4-10.8μg/ml、大黄酚的浓度为8.4-10.8μg/ml、大黄素甲醚的浓度为2.8-3.6μg/ml。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取80-120mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇40-60ml，密塞，称定重量，超声5-20min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）和大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）的总量计算，不得少于10.2mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水0.8-1.2:0.8-1.2（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.05-0.15mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取40-60mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，称定重量，功率120-200w及频率30-50KHz的条件下超声处理20-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

三黄分散片每片含盐酸小檗碱（C₂₀H₁₇NO₄·HCL·2H₂O）应为标示量的85%-115%。

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸42-52:48-58:0.15-0.25为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.04-0.10mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取40-60mg置于量瓶中，加70%乙醇15-25ml，功率120-200w及频率30-50KHz的条件下超声处理10-30min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷（C₂₁H₁₈O₁₁）计，应在51.0-69.0mg之间。

【功能与主治】清热解毒，泻火通便，排毒养颜。用于三焦热盛所致的目赤肿痛、口鼻生疮、咽喉肿痛、牙龈肿痛、心烦口渴、尿黄便秘；亦用于急性胃肠炎，痢疾。

【用法与用量】口服。一次1片，一日2次，小儿酌减。

【注意】孕妇慎用。

【规格】每片重0.46g（含黄芩苷60mg，盐酸小檗碱20mg）

【贮藏】密封，置干燥处。

优选地，本发明所述的三黄分散片的质量标准及其检测方法如下：

【性状】：

薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味苦。

【鉴别】：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD收录的高效液相色谱法测定。

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品的大黄总蒽醌中的5个单体（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间均应与相应对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间一致。

【检查】：

（1）土大黄苷：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.2-0.4mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯。

取本品1片，研细，加甲醇25-35ml，功率150-180w及频率35-45KHz的条件下超声处理25-35min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液。

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法（TLC）试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:28-32:1.8-2.2:2.8-3.2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点。

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.35wt%-0.45wt%的十二烷基硫酸钠水溶液850-950ml为溶出介质，转速为90-110转/min，依法操作，经40-50min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出量，限度为标示量的70%，应符合规定。

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录IA片剂项下分散片下有关的各项规定

【含量测定】：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液80-90:12-18为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为75-85μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为75-85μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为75-85μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为75-85μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为38-42μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液。精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液。混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为12-13.6μg/ml、大黄酸的浓度为30-34μg/ml、大黄素的浓度为9-10.2μg/ml、大黄酚的浓度为9-10.2μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.04-3.36μg/ml。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取90-110mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇45-55ml，密塞，称定重量，超声8-15min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）和大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）的总量计算，不得少于10.2mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水0.9-1.1:0.9-1.1（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.06-0.10mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取45-55mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇45-55ml，密塞，称定重量，功率150-180w及频率35-45KHz的条件下超声处理25-35min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

三黄分散片每片含盐酸小檗碱（C₂₀H₁₇NO₄·HCL·2H₂O）应为标示量的85%-115%。

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸45-50:50-55:0.18-0.22为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.05-0.08mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取45-55mg置于量瓶中，加70%乙醇18-22ml，功率150-180w及频率35-45KHz的条件下超声处理15-25min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷（C₂₁H₁₈O₁₁）计，应在51.0-69.0mg之间。

【功能与主治】清热解毒，泻火通便，排毒养颜。用于三焦热盛所致的目赤肿痛、口鼻生疮、咽喉肿痛、牙龈肿痛、心烦口渴、尿黄便秘；亦用于急性胃肠炎，痢疾。

【用法与用量】口服。一次1片，一日2次，小儿酌减。

【注意】孕妇慎用。

【规格】每片重0.46g（含黄芩苷60mg，盐酸小檗碱20mg）

【贮藏】密封，置干燥处。

最优选地，本发明所述的三黄分散片的质量标准及其检测方法如下：

【性状】：

薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味苦。

【鉴别】：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD收录的高效液相色谱法测定。

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品的大黄总蒽醌中的5个单体（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间均应与相应对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间一致。

【检查】：

（1）土大黄苷：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.3mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯。

取本品1片，研细，加甲醇30ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液。

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法（TLC）试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:30:2:3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点。

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.4%的十二烷基硫酸钠水溶液900ml为溶出介质，转速为100转/min，依法操作，经45min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出量，限度为标示量的70%，应符合规定。

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录IA片剂项下分散片下有关的各项规定。

【含量测定】：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液85:15为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为80μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为80μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为80μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为80μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为40μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为12.8μg/ml、大黄酸的浓度为32.0μg/ml、大黄素的浓度为9.6μg/ml、大黄酚的浓度为9.6μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.2μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取100mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声10min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，不得少于10.2mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水1:1（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.08mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱应为标示量的85%-115%；

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸47:53:0.2为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.06mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于量瓶中，加70%乙醇20ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理20min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，应在51.0-69.0mg之间。

【功能与主治】清热解毒，泻火通便，排毒养颜。用于三焦热盛所致的目赤肿痛、口鼻生疮、咽喉肿痛、牙龈肿痛、心烦口渴、尿黄便秘；亦用于急性胃肠炎，痢疾。

【用法与用量】口服。一次1片，一日2次，小儿酌减。

【注意】孕妇慎用。

【规格】每片重0.46g（含黄芩苷60mg，盐酸小檗碱20mg）

【贮藏】密封，置干燥处。

本发明所述三黄分散片中大黄总蒽醌的含量测定方法经过了系列方法学考察试验：

（1）仪器、药品与试剂：

仪器：岛津LC-10ATVP型高效液相色谱仪，岛津AEG-45SM分析天平。

对照品：均购自中国药品生物制品检定所。

试剂：色谱甲醇（西陇化工股份有限公司生产），磷酸（分析纯，西陇化工股份有限公司生产），水为重蒸水。

（2）高效液相色谱条件：

参照2010年版中国药典一部大黄原料的色谱条件，其它成份和辅料对大黄总蒽醌无干扰。

色谱柱：Diamonsil C18反相柱（250mm×4.6mm，5μm）；

检测波长：254nm；

柱温：室温；

流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）。

本发明中选择甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）代替腐蚀性较强的高氯酸来作为流动相，避免了腐蚀，优化了高效液相色谱条件。

（3）对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品（110795-201007）8.00mg、大黄酸对照品（110757-200206）8.00mg、大黄素对照品（110756-200110）8.00mg、大黄酚对照品（110796-201118）8.00mg、大黄素甲醚对照品（110758-201013）4.00mg，分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为80μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为80μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为80μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为80μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为40μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液。五种对照品溶液各取5μl进样，记录各自保留时间，五种对照品出峰的先后顺序依次是芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇至25ml，得混合对照品溶液。混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为11.4μg/ml、大黄酸的浓度为32.83μg/ml、大黄素的浓度为10.08μg/ml、大黄酚的浓度为9.84μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.30μg/ml。

为了便于鉴别和减少含量测定误差，本发明选择了与大黄提取物和三黄分散片中五种大黄蒽醌（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）的浓度比例近似的浓度作为五种对照品母液（芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸对照品溶液、大黄素对照品溶液、大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚对照品溶液）的浓度；并且参照《中国药典》大黄药材含量测定项下对照品的制备方法配制了五种对照品母液，为了操作简便和节约，再将五种对照品母液依照比例混合。

（4）供试品溶液的制备：

因三黄片中大黄提取物用聚丙烯酸树脂制粒，聚丙烯酸树脂易溶于甲醇、乙醇，参照大黄提取物中总蒽醌测定方法中供试品溶液的制备，通过对提取方法和用量的选择，最后确定供试品溶液的制备方法为：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取100mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声10min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

（5）精密度试验：

精密量取（3）的混合对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按照（2）的色谱条件进行测定分析；重复测定6次，记录峰面积值，根据测定结果计算精密度，结果如表1所示：

表1精密度试验结果

结果表明本发明方法具有良好的精密度。

（6）五种对照品的分离：

精密量取（3）的混合对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按照（2）的色谱条件进行分离，色谱图如图2所示。

（7）标准曲线：

精密量取（3）的混合对照品溶液4μl，8μl，10μl，12μl，16μl，20μl注入液相色谱仪，按照（2）的色谱条件进行测定分析，记录各对应浓度下的相应峰面积；以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线如图3所示，并计算回归方程，结果如下：

芦荟大黄素回归方程为：Y=1996446X+11553，相关系数0.9999，线性范围0.0456-0.2280μg；

大黄酸回归方程为：Y=1689075X+41682，相关系数0.9997，线性范围0.1313-0.6566μg；

大黄素回归方程为：Y=1599974X+1275，相关系数0.9997，线性范围0.0403-0.2016μg；

大黄酚回归方程为：Y=2177984X+7537，相关系数0.9997，线性范围0.0394-0.1968μg；

大黄素甲醚回归方程为：Y=2216410X+2468，相关系数0.9995，线性范围0.0132-0.0660μg。

结果表明本发明方法在线性范围内具有良好的线性关系。

（8）样品重复性试验：

取同一批号三黄分散片供试品6份，分别按照含量测定项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测得峰面积值并计算含量，含量结果如表2所示：

表2重复性试验结果

结果表明本发明方法具有良好的重复性。

（9）加样回收率试验：

取已知总蒽醌含量的三黄分散片供试品细粉6份，精密称定，分别加入等量的（3）的对照品溶液，按照【含量测定】项下供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，并计算回收率，结果如表3所示：

表3加样回收率试验结果

结果表明本发明方法具有良好的加样回收率。

（10）样品测定：

取三批三黄分散片供试品6份（每批2份），按照【含量测定】项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液并测定含量，结果如表4所示：

表4样品测定试验结果

（11）阴性对照试验：

按三黄分散片处方中药味比例称取不含大黄提取物的群药，按制剂工艺制成阴性对照样品，再按照【含量测定】项下供试品溶液的制备方法制备缺大黄蒽醌的阴性对照溶液。吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μl，分别注入色谱仪中，按照（2）的色谱条件进行测定，结果分别如图2、图4、图5所示，可见阴性对照溶液与对照品溶液相同保留时间处未显色谱峰，故认为在五个大黄蒽醌样品峰相应的保留时间无干扰。

（12）溶液稳定性试验：

取三黄分散片供试品，按照【含量测定】项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别放置2h、4h、8h、12h、24h进样，测定峰面积，结果总蒽醌峰面积RSD为0.476%，表明溶液在24h内稳定。

与现有技术相比，本发明首次建立起三黄分散片的质量标准及其检测方法，操作简便、分离效果好，能够准确地对三黄分散片中的三味药材进行定性鉴别并精密地对三者进行含量测定，精密度好、稳定性高、重复性好、专属性强，可有效地控制三黄分散片的内在质量及产品的稳定性，确保了药物疗效。

在说明书和权利要求书中使用的所有表示工艺参数、组分含量、反应条件等在所有情况下都应当被理解为加上术语“约”的修饰。因此，除非相反指出，在说明书和权利要求书中所给出的数值都可以根据本发明所希望得到的性质的不同而变化。在最低限度，并不用于将等价物原则的应用限定为权利要求的范围，每个数值都应当至少依照所报道的有效数字的值通过使用普通的舍入方法进行解释。而且，所有在此公布的范围都应当被理解为包含范围的起点和终点值，包含任意和所有包含在其中的小范围。例如，一定的范围“1-10”应当被认为包含最小值1和最大值10之间(包括在内)的任何和所有小范围；即所有以大于或等于1的最小值起始，而且以小于或等于10的最大值结束的所有小范围，例如5-10，3.3-6.7，或1.5-8.8。

附图说明

图1是土大黄苷薄层色谱图。

图中：1、样品一；2、样品二；3、样品三；4、土大黄苷阳性样品供试品溶液（Ⅱ）；5、土大黄苷对照品。

图2是大黄蒽醌对照品色谱图。

图3是三黄分散片中大黄总蒽醌线性关系图。

图4是三黄分散片供试品中大黄蒽醌色谱图。

图5是大黄蒽醌阴性对照色谱图。

下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。

具体实施方式

为更好地说明本发明，便于理解本发明的技术方案，本发明的典型但非限制性的实施例如下：

实施例1：

样品名称：三黄分散片

性状：薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味苦。

鉴别：

（1）利用高效液相色谱法对大黄总蒽醌进行定性鉴别，步骤如下：

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为80μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为80μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为80μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为80μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为40μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液。精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液。混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为12.8μg/ml、大黄酸的浓度为32.0μg/ml、大黄素的浓度为9.6μg/ml、大黄酚的浓度为9.6μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.2μg/ml。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取100mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声10min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定含量，得色谱图。

色谱图中，供试品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的主峰的保留时间均与对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的主峰的保留时间一致。

（2）利用高效液相色谱法对盐酸小檗碱进行定性鉴别，步骤如下：

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（1:1）（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.08mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定含量，得色谱图。

色谱图中，供试品的盐酸小檗碱的主峰的保留时间与对照品的盐酸小檗碱的主峰的保留时间一致。

（3）利用高效液相色谱法对黄芩苷进行定性鉴别，步骤如下：

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.06mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得。

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于25ml量瓶中，加70%乙醇20ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理20min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得。

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定含量，得色谱图。

色谱图中，供试品的黄芩苷的主峰的保留时间与对照品的黄芩苷的主峰的保留时间一致。

实施例2：

样品名称：三黄分散片

（1）土大黄苷检查：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.3mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯。

取本品1片，研细，加甲醇30ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液。

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法（TLC）试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（100:30:2:3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点。

（2）溶出度检查：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.4%的十二烷基硫酸钠水溶液900ml为溶出介质，转速为100转/min，依法操作，经45min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出度为98%，符合规定。

（3）其他：

符合《中国药典》2010年版二部附录I A片剂项下分散片下有关的各项规定。

实施例3：

样品名称：三黄分散片

（1）土大黄苷检查：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.2mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯；

取本品1片，研细，加甲醇25ml，功率150w及频率35KHz的条件下超声处理35min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液；

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:28:2.2:2.8为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点。

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.35wt%的十二烷基硫酸钠水溶液950ml为溶出介质，转速为90转/min，依法操作，经50min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出度为96%，符合规定；

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录IA片剂项下分散片下有关的各项规定。

实施例4：

样品名称：三黄分散片

（1）土大黄苷检查：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.4mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯；

取本品1片，研细，加甲醇35ml，功率180w及频率45KHz的条件下超声处理25min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液；

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:32:1.8:3.2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点。

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.45wt%的十二烷基硫酸钠水溶液850ml为溶出介质，转速为110转/min，依法操作，经40min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出度为97%，符合规定；

（3）其他：

符合《中国药典》2010年版二部附录I A片剂项下分散片下有关的各项规定。

实施例5：

样品名称：三黄分散片

（1）土大黄苷检查：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.1mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯；

取本品1片，研细，加甲醇20ml，功率120w及频率30KHz的条件下超声处理40min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液；

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:25:2.5:2.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点；

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.3wt%的十二烷基硫酸钠水溶液1000ml为溶出介质，转速为80转/min，依法操作，经60min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出度为99%，符合规定；

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录IA片剂项下分散片下有关的各项规定。

实施例6：

样品名称：三黄分散片

（1）土大黄苷检查：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法。

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.5mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯；

取本品1片，研细，加甲醇40ml，功率200w及频率50KHz的条件下超声处理20min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液；

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:35:1.5:3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点；

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.5wt%的十二烷基硫酸钠水溶液800ml为溶出介质，转速为120转/min，依法操作，经30min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出度为98%，符合规定；

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录I A片剂项下分散片下有关的各项规定。

实施例7：

样品名称：三黄分散片

含量测定：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为80μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为80μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为80μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为80μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为40μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为12.8μg/ml、大黄酸的浓度为32.0μg/ml、大黄素的浓度为9.6μg/ml、大黄酚的浓度为9.6μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.2μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取100mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声10min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）和大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）的总量计算，为11.80mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（1:1）（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.08mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱（C₂₀H₁₇NO₄·HCL·2H₂O）为18.2mg。

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.06mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于量瓶中，加70%乙醇20ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理20min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，为56.2mg。

实施例8：

样品名称：三黄分散片

含量测定：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液80:18为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为75μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为75μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为75μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为75μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为38μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为12μg/ml、大黄酸的浓度为30μg/ml、大黄素的浓度为9μg/ml、大黄酚的浓度为9μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.04μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取90mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇45ml，密塞，称定重量，超声8min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，为11.63mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水0.9:1.1（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.06mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取45mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇45ml，密塞，称定重量，功率150w及频率35KHz的条件下超声处理35min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱为17.8mg。

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸45:55:0.18为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.05mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取45mg置于量瓶中，加70%乙醇18ml，功率150w及频率35KHz的条件下超声处理15min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，为57.2mg。

实施例9：

样品名称：三黄分散片

含量测定：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液90:12为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为85μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为85μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为85μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为85μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为42μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为13.6μg/ml、大黄酸的浓度为34μg/ml、大黄素的浓度为10.2μg/ml、大黄酚的浓度为10.2μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.36μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取110mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇55ml，密塞，称定重量，超声15min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，为11.9mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水1.1:0.9（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.10mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取55mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇55ml，密塞，称定重量，功率180w及频率45KHz的条件下超声处理35min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱为17.6mg。

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸50:50:0.22为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.08mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取55mg置于量瓶中，加70%乙醇22ml，功率180w及频率45KHz的条件下超声处理25min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，为59.4mg。

实施例10：

样品名称：三黄分散片

含量测定：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液70:15为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为70μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为70μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为70μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为70μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为35μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为11.2μg/ml、大黄酸的浓度为28μg/ml、大黄素的浓度为8.4μg/ml、大黄酚的浓度为8.4μg/ml、大黄素甲醚的浓度为2.8μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取80mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇40ml，密塞，称定重量，超声5min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，为11.7mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水0.8:1.2（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.05mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取40mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40ml，密塞，称定重量，功率120w及频率30KHz的条件下超声处理20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱为18.0mg。

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸42:58:0.15为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.04mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取40mg置于量瓶中，加70%乙醇15ml，功率120w及频率30KHz的条件下超声处理10min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，为59.9mg。

实施例11：

样品名称：三黄分散片

含量测定：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液100:10为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为90μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为90μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为90μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为90μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为45μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为14.4μg/ml、大黄酸的浓度为36μg/ml、大黄素的浓度为10.8μg/ml、大黄酚的浓度为10.8μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.6μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取120mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇60ml，密塞，称定重量，超声20min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，为11.65mg。

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水1.2:0.8（每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.15mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取60mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇60ml，密塞，称定重量，功率200w及频率50KHz的条件下超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱为18.2mg。

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸52:48:0.25为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

④对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.10mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

⑤供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取60mg置于量瓶中，加70%乙醇25ml，功率200w及频率50KHz的条件下超声处理30min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，为58.8mg。

应该注意到并理解，在不脱离后附的权利要求所要求的本发明的精神和范围的情况下，能够对上述详细描述的本发明做出各种修改和改进。因此，要求保护的技术方案的范围不受所给出的任何特定示范教导的限制。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的原料配比及制备步骤，但本发明并不局限于上述配比及制备步骤，即不意味着本发明必须依赖上述制备步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (5)

1.一种三黄分散片的质量标准及其检测方法，其特征在于，包括利用高效液相色谱法对大黄总蒽醌、盐酸小檗碱、黄芩苷进行定性鉴别、土大黄苷的检查、溶出度的检查以及利用液相色谱法对大黄总蒽醌、盐酸小檗碱、黄芩苷进行含量测定。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用高效液相色谱法对大黄总蒽醌、盐酸小檗碱、黄芩苷进行定性鉴别包括如下步骤：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD收录的高效液相色谱法，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间均应与相应对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间一致。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

【性状】：

薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味苦；

【鉴别】：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD收录的高效液相色谱法测定；

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间均应与相应对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间一致；

【检查】：

（1）土大黄苷：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法；

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.1-0.5mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯；

取本品1片，研细，加甲醇20-40ml，功率120-200w及频率30-50KHz的条件下超声处理20-40min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液；

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:25-35:1.5-2.5:2.5-3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点；

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.3wt%-0.5wt%的十二烷基硫酸钠水溶液800-1000ml为溶出介质，转速为80-120转/min，依法操作，经30-60min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出量，限度为标示量的70%，应符合规定；

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录I A片剂项下分散片下有关的各项规定；

【含量测定】：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液70-100:10-15为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为70-90μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为70-90μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为70-90μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为70-90μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为35-45μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为11.2-14.4μg/ml、大黄酸的浓度为28-36μg/ml、大黄素的浓度为8.4-10.8μg/ml、大黄酚的浓度为8.4-10.8μg/ml、大黄素甲醚的浓度为2.8-3.6μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取80-120mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇40-60ml，密塞，称定重量，超声5-20min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，不得少于10.2mg；

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g的乙腈-水0.8-1.2:0.8-1.2为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.05-0.15mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取40-60mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，称定重量，功率120-200w及频率30-50KHz的条件下超声处理20-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱应为标示量的85%-115%；

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸42-52:48-58:0.15-0.25为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.04-0.10mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取40-60mg置于量瓶中，加70%乙醇15-25ml，功率120-200w及频率30-50KHz的条件下超声处理10-30min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，应在51.0-69.0mg之间。

4.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

【性状】：

薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味苦；

【鉴别】：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD收录的高效液相色谱法测定；

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间均应与相应对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间一致；

【检查】：

（1）土大黄苷：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法；

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.2-0.4mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯；

取本品1片，研细，加甲醇25-35ml，功率150-180w及频率35-45KHz的条件下超声处理25-35min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液；

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:28-32:1.8-2.2:2.8-3.2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点；

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.35wt%-0.45wt%的十二烷基硫酸钠水溶液850-950ml为溶出介质，转速为90-110转/min，依法操作，经40-50min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出量，限度为标示量的70%，应符合规定；

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录IA片剂项下分散片下有关的各项规定；

【含量测定】：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液80-90:12-18为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为75-85μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为75-85μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为75-85μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为75-85μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为38-42μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为12-13.6μg/ml、大黄酸的浓度为30-34μg/ml、大黄素的浓度为9-10.2μg/ml、大黄酚的浓度为9-10.2μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.04-3.36μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取90-110mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇45-55ml，密塞，称定重量，超声8-15min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，不得少于10.2mg；

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g的乙腈-水0.9-1.1:0.9-1.1为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.06-0.10mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取45-55mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇45-55ml，密塞，称定重量，功率150-180w及频率35-45KHz的条件下超声处理25-35min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱应为标示量的85%-115%；

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸45-50:50-55:0.18-0.22为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.05-0.08mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取45-55mg置于量瓶中，加70%乙醇18-22ml，功率150-180w及频率35-45KHz的条件下超声处理15-25min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，应在51.0-69.0mg之间。

5.根据权利要求1-4所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

【性状】：

薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味苦；

【鉴别】：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD收录的高效液相色谱法测定；

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间均应与相应对照品的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷的主峰的保留时间一致；

【检查】：

（1）土大黄苷：

采用2010年版中国药典中三黄片的检查项收载的土大黄苷检查方法；

取土大黄苷对照品，加甲醇制成土大黄苷浓度为0.3mg/ml的溶液，作为土大黄苷对照品溶液；其他试剂均为分析纯；

取本品1片，研细，加甲醇30ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，过滤，滤液作为供试品溶液；

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验：吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:30:2:3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点；

（2）溶出度：

取本品，照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法溶出度测定法，以0.4%的十二烷基硫酸钠水溶液900ml为溶出介质，转速为100转/min，依法操作，经45min时，取溶液5ml，滤过，取续滤液，照含量测定方法中测定黄芩苷的色谱条件，精密上样，随行黄芩苷对照品溶液，计算黄芩苷的溶出量，限度为标示量的70%，应符合规定；

（3）其他：

应符合《中国药典》2010年版二部附录IA片剂项下分散片下有关的各项规定；

【含量测定】：

（1）大黄总蒽醌：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液85:15为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品分别溶于甲醇，分别制成芦荟大黄素浓度为80μg/ml的芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸浓度为80μg/ml的大黄酸对照品溶液、大黄素浓度为80μg/ml的大黄素对照品溶液、大黄酚浓度为80μg/ml的大黄酚对照品溶液、大黄素甲醚浓度为40μg/ml的大黄素甲醚对照品溶液；精密量取芦荟大黄素对照品溶液4ml、大黄酸对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液3ml、大黄酚对照品溶液3ml、大黄素甲醚对照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇补足25ml，得混合对照品溶液；混合对照品溶液中芦荟大黄素的浓度为12.8μg/ml、大黄酸的浓度为32.0μg/ml、大黄素的浓度为9.6μg/ml、大黄酚的浓度为9.6μg/ml、大黄素甲醚的浓度为3.2μg/ml；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取100mg置于锥形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声10min，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含大黄总蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计算，不得少于10.2mg；

（2）盐酸小檗碱：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g的乙腈-水1:1为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

②对照品溶液的制备：

精密称取盐酸小檗碱对照品溶于甲醇，制成盐酸小檗碱浓度为0.08mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含盐酸小檗碱应为标示量的85%-115%；

（3）黄芩苷：

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

①色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸47:53:0.2为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；

②对照品溶液的制备：

精密称取黄芩苷对照品溶于甲醇，制成黄芩苷浓度为0.06mg/ml的黄芩苷对照品溶液，即得；

③供试品溶液的制备：

取本品10片，精密称定，研细，过四号筛，精密称取50mg置于量瓶中，加70%乙醇20ml，功率160w及频率40KHz的条件下超声处理20min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇补足25ml，即得；

④分别精密吸取步骤②的对照品溶液与步骤③的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

三黄分散片每片含黄芩浸膏以黄芩苷计，应在51.0-69.0mg之间。

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