CN104919055B - 用单一信号检测多种分析物的方法和组合物 - Google Patents

用单一信号检测多种分析物的方法和组合物 Download PDF

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Abstract

提供用单一信号检测多种分析物的组合物、方法和装置。

Description

用单一信号检测多种分析物的方法和组合物
技术领域
实施方式部分地针对用单一信号检测多种分析物。
背景技术
检测多种分析物通常需要使用多个信号或多个反应、点或孔以确定样品是否具有多种分析物。这可以使解释变得复杂，并且在掺杂物被归类为具有两种或两种以上可检测特征的情况下，可以使识别对于最终用户来说具有挑战性。因此，为了简化且对最终用户提供综合的定性报告，需要能够用单一信号检测样品中的多种分析物的方法和组合物。本发明满足这种需要和其他需要。
发明内容
本发明提供并行地(同时地，concurrently)检测第一分析物和第二分析物的方法，包括：使固体支撑物与第一分析物、第二分析物、包含第二捕获试剂的桥接单元和包含第三捕获试剂的信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在或不存在，所述信号检测单元并行地指示第一分析物和第二分析物的存在或不存在，其中第一捕获试剂固定(粘附，附连，affix)于固体支撑物；第一分析物包含结合于第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于桥接单元的第二相互作用单元；且第二分析物包含结合桥接单元的第一相互作用单元和结合于信号检测单元的第二相互作用单元。
本发明还提供用单一信号并行地检测第一分析物、第二分析物和第三分析物的方法，包括：使第一、第二和第三分析物与固体支撑物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在，信号检测单元用单一信号并行地指示第一、第二和第三分析物的存在，其中：第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；第三分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；固体支撑物包含结合于第一分析物的第一相互作用单元的第一捕获试剂；第一桥接单元结合于第一分析物的第二相互作用单元和第二分析物的第一相互作用单元；第二桥接单元结合于第二分析物的第二相互作用单元和第三分析物的第一相互作用单元；并且信号检测单元结合于第三分析物的第二相互作用单元。相互作用单元在各分析物上可以彼此不同。
在一些实施方式中，提供并行地检测第一分析物和第二分析物的方法，方法包括：使固体支撑物与所关注的第一分析物、所关注的第二分析物、包含第二捕获试剂的桥接单元和包含第三捕获试剂的信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在或不存在，所述信号检测单元并行地指示所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的存在或不存在，其中：第一捕获试剂固定于固体支撑物；所关注的第一分析物包含结合于第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于桥接单元的第二相互作用单元；并且所关注的第二分析物包含结合桥接单元的第一相互作用单元；结合于第二分析物、第二分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元、第一和第二分析物的复合物或仅当复合物含有第一和第二分析物时存在的桥接单元的组分的信号检测单元。
本文所描述的实施方式还提供包含固体支撑物、第一分析物、第二分析物、桥接单元和信号检测单元的复合物，其中复合物的各成员直接或间接地彼此结合。
本文所描述的实施方式还提供包含固体支撑物、第一分析物、第二分析物、第三分析物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元的复合物，其中固体支撑物、第一分析物、第二分析物、第三分析物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元直接或间接地彼此结合。
本文提供并行地检测所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的方法。在一些实施方式中，方法包括使固体支撑物与所关注的第一分析物、所关注的第二分析物、包含第二捕获试剂的桥接单元和包含第三捕获试剂的信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在或不存在，所述信号检测单元并行地指示所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的存在或不存在，其中第一捕获试剂固定于固体支撑物；所关注的第一分析物包含结合于第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于桥接单元的第二相互作用单元；并且所关注的第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，其中第一相互作用单元结合桥接单元；结合于以下的信号检测单元：i)第二分析物、ii)第二分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元、iii)第一和第二分析物的复合物的组分或iv)仅当复合物含有第一和第二分析物时存在的分析物-桥接复合物的组分。
在一些实施方式中，所关注的第一分析物的第一和第二相互作用单元以及所关注的第二分析物的第一和第二相互作用单元各自独立地为异源相互作用单元。在一些实施方式中，所关注的第一分析物的第二相互作用单元和所关注的第二分析物的第一相互作用单元包含相同的异源相互作用单元。在一些实施方式中，所关注的第一分析物的第二相互作用单元和所关注的第二分析物的第一相互作用单元包含不同的异源相互作用单元。在一些实施方式中，所关注的第一分析物的第一相互作用单元和所关注的第二分析物的第二相互作用单元包含相同的异源相互作用单元。在一些实施方式中，所关注的第一分析物的第一相互作用单元和所关注的第二分析物的第二相互作用单元包含不同的异源相互作用单元。
提供用单一信号并行地检测所关注的第一分析物、所关注的第二分析物和所关注的第三分析物的方法。在一些实施方式中，方法包括使所关注的第一、第二和第三分析物与固体支撑物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在，所述信号检测单元用单一信号并行地指示所关注的第一、第二和第三分析物的存在，其中：所关注的第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；所关注的第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；所关注的第三分析物包含第一相互作用单元和第五相互作用单元；固体支撑物包含结合于所关注的第一分析物的第一相互作用单元的第一捕获试剂；第一桥接单元结合于所关注的第一分析物的第二相互作用单元和所关注的第二分析物的第一相互作用单元；第二桥接单元结合于所关注的第二分析物的第二相互作用单元和所关注的第三分析物的第一相互作用单元；并且信号检测单元结合于：i)第三分析物、ii)第三分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元、iii)第一、第二或第三分析物复合物的组分或iv)仅当复合物含有第一、第二和第三分析物时存在的分析物-桥接复合物的组分。
在一些实施方式中，本文所描述的桥接单元为多价捕获试剂。在一些实施方式中，多价捕获试剂为免疫球蛋白。在一些实施方式中，免疫球蛋白为IgM。桥接单元还可以为生物素。
提供使用装置用单一信号并行地检测多种分析物的方法。在一些实施方式中，方法包括a)使用单一信号检测多种分析物的装置与一个或多个包含多种分析物的样品接触，其中装置包含：外壳，其包括：与结合垫(结合物垫，conjugate pad)呈流体接触的进口(inlet opening)；加力构件(force member)；接触加力构件的可滑动锁定构件(slidablelocking member)；接触加力构件的连接构件(attachment member)；接触连接构件的滑动按钮(sliding button)；和包含结合垫、测试膜(test membrane)和吸收构件(absorbentmember)的检测膜系统(detection membrane system)，结合垫、测试膜和吸收构件的至少一部分基本上彼此平行，加力构件接触检测膜系统并且能够施加基本上垂直于检测膜系统的压力，滑动按钮移动可滑动锁定构件，结合垫包括包含第三捕获试剂的信号检测单元；测试膜包含固定于测试膜的第一捕获试剂；其中一个或多个样品包含所关注的第一分析物、所关注的第二分析物和包含第二捕获试剂的桥接单元，其中所关注的第一分析物包含结合于第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于桥接单元的第二相互作用单元，并且所关注的第二分析物包含结合桥接单元的第一相互作用单元和第二相互作用单元；其中包含第三捕获试剂的信号检测单元结合于：i)第二分析物、ii)第二分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元、iii)第一分析物和第二分析物复合物的组分或iv)仅当复合物含有第一和第二分析物时存在的分析物-桥接复合物的组分；和b)检测信号检测单元的存在或不存在，所述信号检测单元并行地指示所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的存在或不存在。
在一些实施方式中，方法包括在一个或多个样品的一部分已经接触并且流过结合垫之后使结合垫移动，由此使测试膜的至少一部分暴露以用于检测信号检测单元，从而用单一信号指示多种分析物的存在或不存在。在一些实施方式中，结合垫是通过使可滑动锁定构件移动来移动的。在一些实施方式中，第一分析物和第二分析物为扩增子。在一些实施方式中，第一分析物和第二分析物为PCR反应产物。在一些实施方式中，第一分析物的第一相互作用单元为地高辛(digoxigenin)标记(标签，label)。在一些实施方式中，第一分析物的第二相互作用单元为若丹明(rhodamine)标记。在一些实施方式中，第二分析物的第一相互作用单元为若丹明标记。在一些实施方式中，第二分析物的第二相互作用单元为荧光素标记。在一些实施方式中，第三捕获试剂结合于第二分析物的第二相互作用单元。在一些实施方式中，第三捕获试剂为生物素化的捕获试剂。在一些实施方式中，信号相互作用单元涂布有链霉亲和素(streptavidin)。在一些实施方式中，信号相互作用单元为链霉亲和素涂布的胶体金(胶态金)。在一些实施方式中，第一和第二分析物为核酸扩增产物，其中：第一分析物包含地高辛标记和若丹明标记；第二分析物包含若丹明标记和荧光素标记；第一捕获试剂为抗地高辛标记的抗体；第二捕获试剂为抗若丹明标记的抗体；第三捕获试剂为生物素化的抗荧光素标记的抗体；并且信号相互作用单元为链霉亲和素涂布的胶体金。
附图说明
图1尤其说明用单一信号对两种分析物进行的代表性检测。
图2尤其说明用单一信号对三种分析物进行的代表性检测。
图3尤其说明正用胶体金检测的两种扩增产物。
图4尤其说明多组分桥接单元。
图5尤其说明使用多组分桥接单元用单一信号对两种分析物进行的代表性检测。
图6尤其说明结合于仅当多种分析物存在于复合物中时存在的桥接单元的组分的信号检测单元。
图7尤其说明用单一信号检测多种分析物的非限制性工作流程。
图8描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的透视图。
图9描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一些组件。
图10描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一些组件。
图11描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一些组件。
图12描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置在各种位置的一些组件。
图13：描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一些组件的侧视图。
图14描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一些组件的侧视图。
图15A描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一些组件的侧视图。
图15B描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一些组件(如但不限于非柔性连接构件)的视图。
图15C描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的透视图。
图15D描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的透视图。
图16描绘连接于结合垫的柔性连接构件。
图17描绘代表性外壳构件中的膜。
图18描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的侧视图和顶视图。
图19描绘用于根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一类分析物检测膜系统。
图20描绘用于根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一类分析物检测膜系统。
图21描绘用于根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一类分析物检测膜系统。
图22描绘用于根据本发明的一些实施方式的代表性装置的一类分析物检测膜系统。
图23描绘用于根据本发明的一些实施方式的代表性装置的代表性加力构件。
图24A-图24D描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图25A-图25C描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图26描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图27A-图27B描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的视图。
图28描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的底视图。
图29描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的分解图。
图30描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的内视图。
图31A-图31B描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的剖视图。
图32描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的分解图。
图33描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的内视图。
图34描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的剖视图。
图35描绘根据本发明的一些实施方式的代表性可移动锁定构件。
图36描绘根据本发明的一些实施方式的代表性外壳。
图37描绘根据本发明的一些实施方式的代表性外壳。
图38A描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图38B描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图39描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的放大图。
图40描绘根据本发明的一些实施方式的筒和分析物检测膜系统的分解图。
图41描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图42描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图43A-图43C描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置。
图44描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的分解图。
图45描绘根据本发明的一些实施方式的代表性装置的分解图。
具体实施方式
在描述本文提供的组合物和方法之前，应了解实施方式不限于所描述的特定方法、组合物或方法，因为其可以变化。还应了解，描述中所用的术语是出于描述一些实施方式的目的，而不意在限制实施方式的范畴。
本文描述各种方法和实施方式。方法和实施方式可以彼此组合。本文所描述的定义和实施方式不限于特定方法或实例，除非上下文清楚地指示其应如此受限。
如本文所用，短语“分析物的检测”、“检测分析物”是指用单一信号进行多种分析物的检测。多种分析物的检测可以是如本文所描述的用单一信号检测至少或正好2、3、4或5种分析物。
必须注意，如本文和随附权利要求书中所使用的，除非上下文另外清楚地指示，否则单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“该(the)”包括多个提及物。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与所属领域的技术人员通常所理解相同的含义。尽管类似于或等效于本文所描述的方法的任何方法都可以用于实践或测试本发明的实施方式，但现在描述优选方法。本文所提及的所有公开案都以全文引用的方式并入本文中，其并入程度支持目前所描述的主题。本文绝不应解释为承认主题由于先前发明而无权先于公开内容。
如本文所用，术语“约”意指与其一起使用的数字的数值的±10％。因此，约50％意指在45％-55％范围内。另外，短语“约X到Y”与“约X到约Y”相同，也就是说术语“约”修饰“X”和“Y”两者。
如本文所用，术语“可选”或“可选地”意指随后描述的结构、事件或情形可以或可以不发生，并且描述包括事件发生的情况和事件不发生的情况。
如本文所用，术语“样品”意指可以含有特定物品(例如分析物)或疑似含有特定物品的任何流体介质或液体。在一些实施方式中，可以使用富含溶解固体的样品而无需进一步处理，而在一些实施方式中，含有高固体(非溶解)的样品可以通过使用过滤器加以分析或结合另外手动步骤加以使用。样品在用于本文所描述的方法或装置中之前也可以为非过滤的或纯化的。样品可以为液体、悬浮液、提取或溶解的样品，或超临界流体。如果样品将要用于流动装置(垂直或横向(lateral))，那么一些流动特性必须存在于样品或提取物中以允许流过本文所描述的装置和系统。样品的实例包括(但不限于)血液、食物拭子、食物提取物、食物悬浮液、食物培养物、细菌培养物、病毒培养物、扩增反应、唾液、生物流体、PCR反应等。样品还可以从另一样品获得。举例来说，可以对已经从另一样品(例如食物、细胞、病毒、细菌、血液等)提取、分离和/或纯化的核酸混合物进行PCR反应。PCR反应将被视为从另一样品获得的样品。
“食物悬浮液”是指已经放置或悬浮于溶液中的生食或烹煮过的食物。食物溶液可以为混合的、涡旋的或掺合的。“食物培养物”为在富集样品的条件下培养的食物样品。这个方法也可以称为“富集”。富集可以用于促进样品分析以更好地用单一信号检测多种分析物的存在或不存在。样品也可以为衍生自不同样品的反应样品。反应样品的实例为“富集”。举例来说，血液或食物样品可以经处理(例如，培养、纯化、分离为组分等)并且可以测试经处理的样品以检测多种分析物。在一些实施方式中，在血液样品或食物样品中检测两种分析物。在一些实施方式中，可以通过进行对两种分析物具特异性的两种扩增反应并且随后可以用单一信号检测两种扩增产物以并行地检测样品中两种分析物的存在来检测分析物。在一些实施方式中，使用单一信号检测三种分析物。检测可以为并行的，也就是说，仅当所有分析物均存在于同一样品中时产生信号。可以通过产生本文所描述的桥接复合物来实现并行信号产生。桥接复合物的非限制性实施方式可见于图1-图3中。
如本文所用，术语“固体支撑物”意指在所选择的系统中基本上不溶的材料，或可以容易地从其存在于其中的所选择的系统中分离(例如，通过沉淀)的材料。适用于实践本发明方法的固体支撑物可以包括经活化或能够活化以允许某些化合物或分子(例如捕获试剂、抗体等)结合于固体支撑物的基团。固体支撑物可以为，例如，琼脂糖(agarose)、琼脂糖凝胶(sepharose)、聚丙烯酰胺、琼脂糖/聚丙烯酰胺共聚物、葡聚糖、纤维素、聚丙烯、聚碳酸酯、硝化纤维素、玻璃纸或能够提供合适固体支撑物的任何其他合适物质。在一些实施方式中，固体支撑物可以为适用于色谱法的颗粒、粉末或凝胶的形式。固体支撑物也可以为膜，诸如硝化纤维素、PVC等。也可以使用其他类型的膜，并且关于可以使用的膜的类型并无具体要求。在一些实施方式中，固体支撑物为测试膜。测试膜的实例描述于本文中。
如本文所用，术语“分析物”包括(但不限于)抗原、由细胞、病毒、细菌或其他类型的微生物编码的核酸分子、扩增产物(例如扩增子)、肽、糖等。在一些实施方式中，分析物不为抗体或其功能片段。可以如本文所描述的通过使用本文所描述的方法与其他已知的方法或装置如扩增方法(例如PCR、RT-PCR等)、杂交方法、经标记的引物等组合来检测核酸分子。术语“靶分子”可以与术语“分析物”互换使用。扩增方法可以用于扩增样品中存在的核酸分子的量以促进分析物的检测。可以使用本文所描述的方法检测的其他类型的分析物包括(但不限于)抗原、抗体、受体、配体、螯合物、蛋白质、酶、核酸、DNA、RNA、杀虫剂、除草剂、无机或有机化合物，或可以发现特异性结合试剂的任何材料。分析物也可以指存在于同一蛋白质或多肽上的不同表位。分析物也可以指来自病原或非病原生物体的分析物。分析物也可以称为样品中的所关注的分析物。也就是说，分析物可以称为正由用户确定存在或不存在于样品中的试剂。
如本文所论述，分析物可以为扩增产物，如PCR反应的产物。PCR产物是扩增来自测试样品的核酸序列。因此，检测样品中的PCR产物是确定作为PCR产物的基础的核酸序列是否存在于初始样品中。举例来说，如果所属领域的技术人员正确定食物样品是否受到大肠杆菌污染，那么可以扩增(例如，通过PCR)对大肠杆菌具特异性的核酸序列且随后根据本文所描述的方法进行检测。扩增产物(即，扩增子)的检测指示，食物样品含有对大肠杆菌具特异性的天然核酸序列。这个实例是非限制性的且可以用于检测天然样品中存在的其他核酸序列或其他类型的分析物。分析物可以为初始样品中存在的或为通过例如使用PCR从初始样品获得的分析物。当正根据本文提供的方法用单一信号检测多种分析物时，分析物也可以具有异源标签(tag)或相互作用单元，且经修饰的分析物也称为分析物。在一些实施方式中，分析物将不含异源相互作用单元，如荧光标签、生物素、地高辛等。
分析物不同于用于检测分析物的存在或不存在的试剂。因此，加入样品中以确定分析物是否存在的试剂不是所关注的分析物。例如，在典型夹心分析中，第一种抗体连接于固体支撑物。涂布有抗体的固体支撑物与样品接触以确定结合于抗体的抗原的存在或不存在。随后还加入二级抗体(secondary antibody)以检测抗原。随后通常通过加入三级抗体(第三抗体，third antibody)来检测二级抗体的存在，三级抗体具有例如结合于其的酶，使得其可以通过各种方式(例如HRP连接的抗体)来检测。二级抗体不是所关注的分析物，因为它是用于检测初级抗原(primary antigen)的试剂。因此，夹心分析不会根据本文所描述的方法用单一信号检测多种分析物的存在，因为二级抗体是检测抗原或所关注的分析物的存在或不存在的试剂或工具。分析物也不是发现于桥接实体上的组分或部分。例如，在美国公开申请案US 2010/0273145中，图1和图2显示分析物结合于桥接实体，桥接实体随后结合于发信号(signaling)实体以检测分析物的存在。桥接单元或其任何部分或发信号实体都不是分析物或所关注的分析物。这些组分是用于检测分析物的试剂，在美国公开申请案US2010/0273145的情况下，这是单一分析物的检测。美国公开申请案US2010/0273145关于其图和其组分的解释由此以引用的方式并入。
在一些实施方式中，分析物是蛋白质，如病原体蛋白质。病原体蛋白质是指来自病原体的蛋白质。病原体的实例包括(但不限于)病毒、原核生物体和例如病原性真核生物体，如单细胞病原生物体和多细胞寄生虫。病原体也可以包括原生动物病原体，其包括生命周期中其为细胞内病原体的阶段。如本文所用，术语“细胞内病原体”意指病毒或病原生物体，其生殖或生命周期的至少一部分存在于宿主细胞内且在其中产生或引起产生病原体蛋白质。病原体也可以为食源性病原体。
细菌病原体包括(但不限于)如细菌病原性革兰氏阳性球菌，其包括(但不限于)：肺炎球菌、葡萄球菌和链球菌。病原性革兰氏阴性球菌包括(但不限于)：脑膜炎球菌和淋球菌。病原性肠革兰氏阴性杆菌包括(但不限于)：肠细菌、假单胞菌、放线菌、艾肯菌(eikenella)、类鼻疽、沙门氏菌、志贺氏菌、嗜血杆菌、软下疳、布鲁氏杆菌、土拉菌、耶尔森氏菌(巴斯德氏菌)、念珠状链杆菌(streptobacillus moniliformis)、螺菌(spirilum)、单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、红斑丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)、白喉、霍乱、炭疽、第五性病(donovanosis)(腹股沟肉芽肿(granulomainguinale))和巴尔通体(bartonellosis)。病原性厌氧细菌包括(但不限于)引起破伤风、波特淋菌中毒(botulism)、其他梭状芽孢杆菌病、肺结核、麻风和其他分枝杆菌病的细菌。病原性螺旋体疾病包括(但不限于)：梅毒、密螺旋体病、雅司病、品他病和地方性梅毒以及钩端螺旋体病。由高等病原性细菌和病原性真菌引起的其他感染包括(但不限于)：放线菌病、诺卡菌病、隐球菌病、芽生菌病、组织胞浆菌病和球孢子菌病、念珠菌病、曲霉病、毛霉病、孢子丝菌病、副球孢子菌病、波氏霉菌病、球拟酵母病、足分枝菌病、广色霉菌病(chromomycosis)和皮真菌病。立克次氏体感染包括(但不限于)立克次氏体和立克次氏体病。支原体和衣原体感染的实例包括(但不限于)：支原体肺炎、性病淋巴肉芽肿(lymphogranuloma venereum)、鹦鹉热和围产期衣原体感染。病原性原生动物和蠕虫(helminth)以及传染性真核生物由此包括(但不限于)：阿米巴病、疟疾、利什曼病、锥虫病、弓形体病、肺炎肺囊虫(Pneumocystis carinii)、巴贝西虫病、贾第鞭毛虫病、旋毛虫病、丝虫病、血吸虫病、线虫、吸虫或蛭(fluke)以及绦虫(带虫(tapeworm))感染。细菌还包括(但不限于)李斯特菌、大肠杆菌、弯曲菌属和沙门氏菌属。在一些实施方式中，大肠杆菌为大肠杆菌0157。
病毒的实例包括(但不限于)HIV、甲型、乙型和丙型肝炎、FIV、慢病毒、瘟病毒(pestiviruses)、西尼罗河病毒、麻疹、天花、牛痘、埃博拉病毒、冠状病毒等。其他病原体也公开于美国专利申请公开案US20080139494中，该案以引用的方式并入本文中。
在一些实施方式中，病原体为食源性病原体。分析物也可以存在于食源性病原体上。食源性病原体为在食用受污染的食物后引起疾病的病原体(例如病毒性的或细菌性的)。食物本身不直接引起疾病，但其更确切地是存在于引起疾病的食物上的食源性病原体的消耗。在一些实施方式中，食源性病原体为大肠杆菌、李斯特菌、弯曲菌属或沙门氏菌属。在一些实施方式中，分析物是选自食源性病原体分析物。例如，食源性病原体分析物可以是(但不限于)选自大肠杆菌分析物、李斯特菌分析物、弯曲菌属分析物或沙门氏菌属分析物。在一些实施方式中，分析物是特异性O-抗原。在一些实施方式中，O-抗原是大肠杆菌抗原和/或沙门氏菌属O-抗原并且可以用于大肠杆菌和沙门氏菌检测。在一些实施方式中，分析物是鞭毛蛋白抗原。在一些实施方式中，分析物是弯曲菌鞭毛蛋白抗原。在一些实施方式中，分析物是毒力因子基因，例如从病原性大肠杆菌或沙门氏菌扩增的志贺毒素基因。在一些实施方式中，分析物是经由扩增方法(例如PCR或RT-PCR)扩增且随后根据本文所描述的方法检测的DNA或RNA序列。
如本文所描述，分析物可以为扩增产物。扩增产物，如PCR产物(例如双链PCR产物)可以标记有相互作用单元。可以通过使用由两种相互作用单元标记或与其结合的引物来进行用单元标记的扩增产物的产生。在一些实施方式中，分析物将具有两种不同相互作用单元，使得桥接复合物可以是可组装的并且可能通过信号检测单元来检测多种分析物。
如本文所用，术语“信号检测单元”意指可以经检测以确定分析物是否存在于样品中的单元。信号检测单元可以为可经检测的任何试剂或组合物。在一些实施方式中，信号检测单元连接于捕获试剂。因此，信号检测单元可以用于检测结合于其特异性结合伴侣的捕获试剂的存在。捕获试剂可以直接包含检测试剂，或捕获试剂可以进一步包含含有检测试剂的粒子。在一些实施方式中，捕获试剂和/或粒子包含颜料(color)、胶体金、放射性标签、荧光标签或化学发光底物(substrate)。在一些实施方式中，信号检测单元包含近红外或红外标签或底物。在一些实施方式中，信号检测单元包含颜料、胶体金、放射性标签、荧光标签或化学发光底物。在一些实施方式中，信号检测单元包含纳米晶体、官能化的纳米粒子、上转换(up-converting)纳米粒子、硒化镉/硫化镉融合纳米粒子、量子点和能够在NIR光谱中发光的近红外(NIR)荧光团或材料(如(但不限于)例如镧系元素簇和酞菁的材料，以及由CuPc、PdPc和PtPc组成的发光二极管)。在一些实施方式中，捕获试剂和/或粒子结合于信号检测单元，如(但不限于)胶体金、银、放射性标签、荧光标签或化学发光底物、近红外化合物(例如底物、分子、粒子)或红外化合物(例如底物、分子、粒子)、纳米粒子、放射性纳米粒子、量子点、磁性粒子或酶。
信号检测单元也可以为例如病毒粒子、乳胶粒子、脂质粒子、荧光粒子、近红外粒子或红外粒子。如本文所用，术语“荧光粒子”意指在荧光光谱中发光的粒子。如本文所用，术语“近红外粒子”意指在近红外光谱中发光的粒子。如本文所用，术语“红外粒子”意指在红外光谱中发光的粒子。在一些实施方式中，胶体金具有约20nm、约30nm或约40nm或在约20-30nm、约20-40nm、约30-40nm或约35-40nm的范围内的直径尺寸。在一些实施方式中，粒子包含金属合金粒子。在一些实施方式中，金属合金粒子具有约10到约200nm的直径。金属合金粒子的实例包括(但不限于)金金属合金粒子、金-银双金属粒子、银金属合金粒子、铜合金粒子、镉-硒粒子、钯合金粒子、铂合金粒子和铅纳米粒子。
如本文所论述，信号检测可以结合于分析物中的一种。结合于分析物的信号检测单元的非限制性实例显示于图1中。图1较详细地描述于本文中，显示通过捕获试剂50结合于分析物40的信号检测单元60。然而，信号检测单元也可以结合于复合物的其他部分。仅当多种分析物均存在于复合物中时必定存在的任何组分均可以为信号检测单元的结合伴侣。通常(但非排他地)，这种组分将为分析物中的一种，但也可以为结合于分析物的捕获试剂。相比之下，在一些实施方式中，信号检测单元不只是结合于与固体支撑物结合的分析物、固体支撑物或直接结合于固体支撑物的捕获试剂(如果存在于固体支撑物上)。例如，在图1中，信号检测单元将不直接结合于固体支撑物10、捕获试剂15或分析物20。不受任何特定理论束缚，如果信号检测单元直接与固体支撑物10、捕获试剂15或分析物20结合，那么方法将提供假阳性结果，即信号将在多种分析物不必定存在的情况下检测到。例如，图6说明结合于多组分桥接单元的组分的信号检测单元。桥接单元和多组分桥接单元的实施方式在本文中且例如参考图4和5描述。图6说明信号检测单元60，其中其捕获试剂50结合于桥接单元30的组分。桥接单元30包含粒子34、第一捕获试剂31、第二捕获试剂32和第三捕获试剂33。图6说明结合于第二捕获试剂32的信号检测单元。仅当两种分析物均存在于复合物中时捕获试剂32将存在于复合物中。如果捕获试剂32不存在，这意指不存在多种分析物的桥接复合物。因此，当多种分析物存在于复合物中时信号检测单元将仅为复合物的一部分，由此避免假阳性结果。如果两种分析物不存在，那么捕获试剂32将不为复合物的一部分，并且因此，将不存在信号检测单元的结合伴侣。因此，仅当多种分析物存在时信号检测单元为可检测的。因此，在一些实施方式中，信号检测单元结合于仅当多种分析物也存在时存在的任何组分。多组分桥接单元的其他特性、特征和结构特征也公开于本文中且基于本发明为显而易见的。
其中可使用目前描述的方法的装置的实例描述于例如美国专利US8,012,770、美国专利申请案US13/360,528(2012年1月27日提交)、PCT公开案WO 2011/044574中，各案以引用的方式全文并入本文中。然而，目前描述的方法可以用多种装置或格式加以使用，例如多孔板、阵列、微阵列或呈“ELISA”类型格式。装置的实例也描述于本文中，但这些实例为非限制性的。本文所描述的方法也可与横向流装置结合使用。在横向流装置中，装置的不同部分处于与垂直流装置相反的同一平面中。横向流装置的非限制性实例可以发现于美国专利US 6,485,982、US 6,818,455、US6,951,631、US 7,109,042、RE39,664等中，各专利以引用的方式并入。横向流装置可以经过调适以用于本文所描述的方法，因为所描述方法是针对垂直流装置加以描述的。在横向流装置中，指示阳性或阴性结果的区域可以包含结合于分析物中的一种的捕获试剂。桥接单元可以存在于横向流区域之一中或在添加到装置中之前与分析物混合，这也可以针对其他装置和固体支撑物进行。信号检测单元也可以并入横向流区域之一中。如由本发明显而易见，装置或固体支撑物的类型并不关键且方法可以基于本文所描述的实例和实施方式加以调适。
如本文所用，术语“扩增子”意指通过PCR反应或其他扩增反应或方法扩增的扩增产物，例如核酸分子。如本文所论述，扩增子可以为分析物。扩增子可以为双链核酸分子。扩增产物可以直接地或间接地通过使用抗体或其他捕获试剂系统(包括本文所描述的那些)来检测。扩增产物也可以通过整体或部分地如本文所描述的杂交方法来检测。扩增产物也可以是例如通过RT-PCR或线性扩增来制备的。
在一些实施方式中，扩增子为PCR产物。PCR反应产物(例如扩增子)可以经标记使得其由另一抗体或抗体样系统是可检测的，例如(但不限于)生物素-抗生物素蛋白/链霉亲和素系统、系统、半抗原系统、DNA的BRDU标记、标记DNA的插入剂、经标记的dNTPS等也可以用于其中PCR产物是经标记的情况。分析物可以例如(但不限于)为核酸(单链的或双链的)并且可以用抗体或其他捕获试剂系统如本文所描述的那些来识别或检测。核酸分子可以标记有生物素标记或使用本文所描述的方法可检测的其他类型的标记。标记的其他实例包括荧光标记。荧光标记可以为例如荧光素(例如萤光素异硫氰酸酯(FITC))、若丹明(例如四甲基若丹明(TAMRA))等。可以用这些标记通过使用经标记的引物来产生扩增子。标记可以通过扩增程序并入扩增子中并且因此成为分析物的一部分。标记将被视为异源标签，因为该标记未在用作扩增子的模板的天然序列中发现。可以使用结合于标记以有助于形成本文所描述的复合物的捕获试剂(例如抗体)，其使得能用单一信号检测多种分析物。这些标记可以用作相互作用单元。图3显示标记可以如何用作相互作用单元以使得可以用单一信号检测多种分析物的非限制性实例。
例如，在一个实施方式中，用与分析物核酸序列同源的半抗原和/或生物素标记的DNA或RNA引物进行PCR反应。分析物核酸序列可以为(但不限于)来自肉类样品的毒素基因和/或毒素分子(例如志贺毒素)。然而，样品可以为任何样品，且分析物可以为本文所描述的任何其他类型的分析物。可以进行PCR反应以产生具有相互作用单元的多种分析物。在用引物扩增后，可以使用本文所描述的方法检测PCR样品。也可以用地高辛和/或TAMRA和/或用FITC和TAMRA标记的引物进行PCR反应。这些可以产生差别标记的扩增子，扩增子可以通过使用捕获试剂桥接在一起以使得能够用单一信号检测多种分析物。这类复合物的实例显示于图3中。
图3说明具有抗地高辛抗体(即，捕获试剂15)、地高辛/TAMRA标记的扩增子(即，第一分析物20、第一相互作用单元21和第二相互作用单元22)、抗若丹明抗体((即，桥接单元30)、FITC/TAMRA标记的扩增子(即，第二分析物40、第一相互作用单元41和第二相互作用单元42)的测试膜(即，固体支撑物10)；和结合于生物素化的抗FITC抗体的链霉亲和素-金复合物(即，信号产生单元60和第三捕获试剂50)。
简单地说，在进行PCR反应后，扩增子可以与固体支撑物、桥接单元和信号检测单元接触。固体支撑物可以具有结合于第一分析物上的相互作用单元的捕获试剂。桥接单元可以具有或为结合于第一和第二分析物上的相互作用单元的捕获试剂，使得结合于第一和第二分析物上的相互作用单元使分析物合起来成为复合物。信号检测单元可以结合于存在于第二分析物之一上的相互作用单元。信号检测单元可以随后发射可检测信号，或信号检测单元可以通过添加另一检测系统来检测。例如，在图3中，信号检测单元为结合于第二分析物上的相互作用单元的捕获试剂(例如，抗体)。信号检测单元是经生物素化的。可以随后通过添加链霉亲和素来确定信号检测单元的存在。链霉亲和素将仅结合于两种分析物均存在的复合物。在图3中所示的非限制性实例中，链霉亲和素是用胶体金标记，胶体金使得能够检测。然而，其他标记或检测系统可以用于检测链霉亲和素。在本文所描述的垂直流装置的实施方式中，测试膜是具有捕获试剂的固体支撑物，并且结合垫可以包含信号检测单元或检测信号检测单元与第二分析物的相互作用单元的结合的分子。
图7说明非限制性工作流程程序，所述程序可用于使用扩增子用单一信号检测多种分析物以检测所关注的分析物在样品中的存在。分析食物样品7000以确定病原性大肠杆菌的存在或不存在。食物样品7000经处理(例如，富集、培养、核酸、纯化、分离、提取或其他类似步骤)以提取、分离或以其他方式获得存在于食物样品中的核酸。存在于经处理样品7001中的核酸序列可以扩增，例如(但不限于)通过PCR，以扩增特异性病原性大肠杆菌序列。这些序列的实例描述于本文中。不需要使用特异性引物组，因为可以基于待扩增的靶序列修饰那些序列。如本文所描述，引物可以经标记，由此产生经标记的扩增子(具有异源相互作用单元的分析物)。如果靶序列存在于食物样品和经处理样品中，那么将产生第一分析物7020和第二分析物7040。显示分析物具有异源相互作用单元(7021、7022、7041和7042)。分析物可以与桥接单元7030混合。混合物将形成桥接复合物7100。可以随后通过使桥接复合物与包含捕获试剂7015的固体支撑物7010和包含捕获试剂7050的信号检测单元7060接触来检测分析物。如本文所论述，可以将包含捕获试剂7050的信号检测单元7060吸收于膜上并且允许其与桥接复合物相互作用。包含捕获试剂7015的固体支撑物7010可以为具有抗体的测试膜。这些要素(element)可以并入如本文所描述的装置中。尽管图7显示步骤是分别地进行的，但其也可以以不同顺序进行且一些步骤可以组合。举例来说，使分析物与桥接单元混合的步骤也可以与使分析物与包含捕获试剂的信号检测单元接触相组合。可以随后随后进行添加复合物到固体支撑物中的检测步骤。在一些实施方式中，分析物、桥接单元、包含捕获试剂的信号相互作用单元和包含捕获试剂的固体支撑物可以同时或几乎同时混合在一起且随后可检测信号检测单元。仅当多种分析物存在于所测试的样品中时检测到信号检测单元或在背景水准以上(即，在阴性对照以上)检测到。即，在图7中，将仅在如果两种分析物且因此两个靶序列均存在于食物样品7000中时形成复合物7200。在如果分析物之一缺失时将不形成复合物7200。图7中显示的工作流程也可以包括洗涤步骤以洗去不形成复合物7200的任何未结合材料或组分。洗涤步骤也可以并入本文所描述的任何方法中。
在本文所描述的方法的一些实施方式中，用单一信号检测多种分析物的方法包括扩增存在于样品中的多个靶核酸序列。靶序列可以为分析物，或扩增的产物可以为分析物。扩增的序列(例如，PCR产物)的检测指示模板序列在原始样品中的存在。
在一些实施方式中，用单一信号并行地检测多种分析物的方法包括a)使用单一信号检测多种分析物的装置与一个或多个包含多种分析物的样品接触；和检测信号检测单元的存在或不存在，所述信号检测单元并行地指示所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的存在或不存在。装置可以为用于检测分析物的存在或不存在的任何装置，包括(但不限于)本文所描述的装置。在一些实施方式中，装置包括：外壳，其包含：与结合垫呈流体接触的进口；加力构件；接触加力构件的可滑动锁定构件；接触加力构件的连接构件；接触连接构件的滑动按钮；和包含结合垫、测试膜和吸收构件的检测膜系统，结合垫、测试膜和吸收构件的至少一部分基本上彼此平行，加力构件接触检测膜系统且能够施加基本上垂直于检测膜系统的压力，滑动按钮移动可滑动锁定构件，结合垫包括包含第三捕获试剂的信号检测单元；测试膜包含固定于测试膜的第一捕获试剂。
在一些实施方式中，一个或多个样品包含所关注的第一分析物、所关注的第二分析物和包含第二捕获试剂的桥接单元，其中所关注的第一分析物包含结合于第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于桥接单元的第二相互作用单元，并且所关注的第二分析物包含结合桥接单元的第一相互作用单元和第二相互作用单元。在一些实施方式中，信号检测单元包含第三捕获试剂，第三捕获试剂结合于第二分析物、第二分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元、第一和第二分析物的复合物的组分，或仅当复合物含有第一和第二分析物时存在的桥接单元的组分。
在一些实施方式中，检测包括在一个或多个样品的一部分已经接触且流过结合垫之后使结合垫移动，由此使测试膜的至少一部分暴露以用于信号检测单元的检测，从而用单一信号指示多种分析物的存在或不存在。在一些实施方式中，通过使可滑动锁定构件移动来移动结合垫。在一些实施方式中，一个或多个样品在压缩检测膜系统之前与结合垫接触。方法可以用多个样品进行以检测多种分析物。例如，如果进行多个扩增反应以产生多个扩增子(分析物)，那么多个扩增反应各自被视为独立样品。为了用单一信号检测多种分析物，样品必须混合。多个样品可以在接触装置之前混合或依序或同时与装置(固体支撑物)接触。
在一些实施方式中，第一和第二分析物为扩增子。在一些实施方式中，第一和第二分析物为PCR反应产物。在一些实施方式中，第一分析物的第一相互作用单元为地高辛标记。在一些实施方式中，第一分析物的第二相互作用单元为若丹明标记。在一些实施方式中，第二分析物的第一相互作用单元为若丹明标记。在一些实施方式中，第二分析物的第二相互作用单元为荧光素标记。在一些实施方式中，第三捕获试剂结合于第二分析物的第二相互作用单元。在一些实施方式中，第三捕获试剂为生物素化的捕获试剂。在一些实施方式中，信号相互作用单元涂布有链霉亲和素。在一些实施方式中，信号相互作用单元为链霉亲和素涂布的胶体金。在一些实施方式中，第一和第二分析物为核酸扩增产物，其中：第一分析物包含地高辛标记和若丹明标记；第二分析物包含若丹明标记和荧光素标记；第一捕获试剂为抗地高辛标记抗体；第二捕获试剂为抗若丹明标记抗体；第三捕获试剂为生物素化的抗荧光素标记抗体；并且信号相互作用单元为链霉亲和素涂布的胶体金。
如本文和通篇所用，术语“连接的(attached)”或“连接(attachment)”可以包括直接连接或间接连接。彼此直接连接的两个组件也是彼此呈物理接触。彼此间接连接的两个组件是通过中间组件连接。例如，如果组件A直接连接于组件C且组件C直接连接于组件B，那么组件A可以间接连接于组件B。因此，在这类实例中，组件A将被称为间接连接于组件B。
术语“捕获试剂”意指能够结合样品中待检测的靶分子或分析物的试剂。捕获试剂的实例包括(但不限于)抗体或其抗原结合片段、寡核苷酸和类肽。捕获试剂的其他实例包括(但不限于)小分子或蛋白质，如生物素、抗生物素蛋白、链霉亲和素、半抗原、地高辛、BRDU、单链和双链核酸结合蛋白或其他插入剂等，或识别和捕获其的分子。这些为捕获试剂的非限制性实例。也可使用其他类型的捕获试剂。
如本文所论述，捕获试剂也可以提及例如抗体。完整抗体(也称为免疫球蛋白)典型地为由各约25kDa的两条轻(L)链和各约50kDa的两条重(H)链组成的四聚糖基化蛋白。两种类型的轻链(称为λ和κ)存在于抗体中。取决于重链的恒定结构域的氨基酸序列，将免疫球蛋白指派为五个主要类别：A、D、E、G和M，并且这些类别中的一些可以进一步分为子类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。各轻链由N端可变(V)结构域(VL)和恒定(C)结构域(CL)组成。各重链由一个N端V结构域(VH)、三个或四个C结构域(CH)和一个铰链区组成。最接近VH的CH结构域是指定为CH1。VH和VL结构域由四个称为构架区的相对保守序列区域(FR1、FR2、FR3和FR4)组成，这些区域形成三个高可变序列区域(互补决定区，CDR)的骨架。CDR含有负责抗体或抗原结合蛋白与抗原的特异性相互作用的大部分残基。CDR被称为CDR1、CDR2和CDR3。因此，重链上的CDR组分被称为H1、H2和H3，而轻链上的CDR组分被称为L1、L2和L3。CDR3是抗体或抗原结合蛋白结合位点内分子多样性的最大来源。举例来说，H3可以短至两个氨基酸残基或超过26个氨基酸。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构造在所属领域中为众所周知的。关于抗体结构的综述，参见抗体：实验室手册(Antibodies:A Laboratory Manual)，冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)，哈洛(Harlow)等人编，1988。所属领域的技术人员应认识到，各亚单位结构，例如CH、VH、CL、VL、CDR和/或FR结构，均包含活性片段。例如，活性片段可以由结合抗原的VH、VL或CDR亚单位的部分(即，抗原结合片段)，或结合于和/或活化Fc受体和/或补体的CH亚单位的部分组成。
本文所用的术语“抗原特异性抗体”内涵盖的结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含通过铰链区的二硫桥键连的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)dAb片段，其由VH结构域组成；和(vi)分离的CDR。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH是由独立基因编码，但其可以通过合成接头(linker，连接子)重组接合，产生其中VL和VH结构域配对以形成单价分子的单一蛋白链(称为单链Fv(scFv))。最常用的接头是15个残基的(Gly4Ser)3肽，但所属领域中也已知其他接头。单链抗体也意在涵盖于术语“抗体或抗原结合蛋白”或抗体的“抗原结合片段”内。抗体也可以为多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、抗原结合片段、Fc片段、单链抗体或其任何衍生物。捕获试剂或抗体也可以为VHH区、双特异性抗体、包含抗原结合位点的肽片段或结合于所关注的抗原的化合物。所关注的抗原可以为扩增子或其他类型的分析物。
这些抗体可以购得或使用所属领域的技术人员已知的常规技术获得，且以与完整抗体相同的方式筛选这些片段的效用。通过多种编码可变结构域的种系基因和多个体细胞事件来产生抗体多样性。体细胞事件包括可变基因区段与多样性(D)和接合(J)基因区段的重组以制备完整的VH结构域，以及可变和接合基因区段的重组以制备完整的VL结构域。重组过程本身为不精确的，导致在V(D)J连接点处的氨基酸损失或添加。在抗原暴露前，这些多样性机制出现于发展中的B细胞中。在抗原刺激后，在B细胞中表达的抗体基因经历体细胞突变。基于种系基因区段的估计数目、这些区段的随机重组和随机VH-VL配对，可以产生多达1.6x107种不同抗体(基础免疫学(Fundamental Immunology)，第3版(1993)，保罗(Paul)编，乌鸦出版社(Raven Press)，纽约(New York)，N.Y.)。当考虑有助于抗体多样性(例如，体细胞突变)的其他过程时，认为可以产生超过1x1010种不同抗体(免疫球蛋白基因(Immunoglobulin Genes)，第2版(1995)，吉奥尼奥(Jonio)等人编，学术出版社(AcademicPress)，圣地亚哥(San Diego)，加利福尼亚州(Calif.))。由于许多过程参与产生抗体多样性，独立衍生的具有相同抗原特异性的单克隆抗体将不可能具有相同氨基酸序列。
可以通过所属领域的技术人员众所周知的方法来产生能够与本文所描述的抗原、表位或其他分子特异性相互作用的抗体或抗原结合蛋白分子。举例来说，可以通过根据已知方法产生杂交瘤细胞来产生单克隆抗体。可以随后使用标准方法，例如酶联免疫吸附分析(ELISA)和Biacore分析来筛选以这种方式形成的杂交瘤细胞，以识别一种或多种产生与所关注的分子或化合物特异性相互作用的抗体的杂交瘤细胞。
作为制备分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞的替代方案，可以通过用本发明多肽筛选重组组合免疫球蛋白文库(例如，抗体噬菌体展示文库)以由此分离结合于多肽的免疫球蛋白文库成员来识别且分离本发明多肽的单克隆抗体。用于产生和筛选噬菌体展示文库的技术和市售试剂盒为所属领域的技术人员众所周知的。另外，尤其可以用于产生且筛选抗体或抗原结合蛋白展示文库的方法和试剂的实例可以发现于文献中。
术语“捕获试剂”也包括嵌合抗体，例如人源化抗体，以及完全人源化抗体。在一些实施方式中，捕获试剂为山羊抗大肠杆菌0157:H7抗体目录号：70-XG13(菲兹杰拉尔德工业(Fitzgerald Industries))；大肠杆菌0157:H7单克隆抗体目录号：10-E13A(菲兹杰拉尔德工业)；大肠杆菌0157:H7目录号：10C-CR1295M3(菲兹杰拉尔德工业)；大肠杆菌0157:H7单克隆抗体目录号：10-E12A(菲兹杰拉尔德工业)；或山羊抗小鼠IgG目录号：ABSE-020(DCN)。捕获试剂也可以为例如蛋白A、蛋白G等。捕获试剂也可以为结合或特异性结合于荧光标记(例如，荧光素或若丹明)、半抗原、地高辛等的抗体。如链霉亲和素的捕获试剂可以与胶体金结合。链霉亲和素-金复合物可以随后用于例如结合于生物素化产品，例如生物素化抗体。非限制性实例可见于图3中。图3中所示的标记仅用于说明性目的并且可以使用其他排列。
捕获试剂也可以包括抗抗体，即识别另一抗体、但对分析物不具特异性的抗体，例如(但不限于)抗IgG、抗IgM或抗IgE抗体。
如本文所用，术语“并行地”是指同时或几乎同时检测多种分析物。如本文所用，“用单一信号并行地检测多种分析物的方法”或其变化形式是指使用单一分析(例如，单孔、单点、在一个阵列上的单一位置)或单一用途的装置来用单一信号检测多种分析物的方法。如果不同的装置、孔或阵列用于由同一信号检测多种分析物，那么这不是用单一信号并行地检测多种分析物的方法。对于一种方法要想作为用单一信号并行地检测多种分析物的方法，所述方法必须仅在单一位置(膜或其他类型的固体支撑物上的孔、点、线等)处产生单一信号(信号的实例描述于本文中)，这告知用户多种分析物是存在于样品中。例如，将同一信号用于不同孔中以指示单一分析物是否存在于这个孔(或阵列上的点)中且随后分析多个孔(或点)以确定多种分析物是否存在，这不是用单一信号并行地检测多种分析物的方法。
如本文所用，术语“单一信号”意指基于单一部分或方法的信号检测。例如，如果单一信号是颜色红色，那么仅基于颜色红色的存在来指示多种分析物。即，在这个非限制性实例中，颜色红色指示多种分析物存在于样品中。相比之下，如果一种分析物是由颜色红色指示且第二分析物是由颜色黄色指示，那么使用两种颜色(即，信号)不是用单一信号检测多种分析物。信号不限于比色检测。本文中提供可使用的信号的实例。
术语“检测(detecting)”或“检测(detection)”以最广泛含义使用以包括靶分析物的定性和/或定量测量。
如本文所用，术语“相互作用单元”意指分析物或连接于分析物的异源标签或标记的一部分，其由另一分子(例如，捕获试剂、桥接单元或信号检测单元)识别或结合。相互作用单元可以为分析物本身的一部分或可以为异源标签或标记。相互作用单元也可以为识别分析物的抗体或其他类型的捕获试剂。在一些实施方式中，分析物可以包含超过1、2、3、4或5个相互作用单元。在一些实施方式中，相互作用单元是结合于存在于分析物本身或作为分析物的一部分的异源标签上的另一相互作用单元的捕获试剂。例如，如果分析物是肽或者蛋白质的一部分，那么蛋白质的一部分或肽本身可以为由捕获试剂、桥接单元或信号检测单元识别的相互作用单元。在一些实施方式中，肽也可以共价连接于异源标签或标记且异源标签或标记或肽与异源标签或标记的复合物被视为相互作用单元。因此，在一些实施方式中，分析物包含第一相互作用单元和/或第二相互作用单元。在一些实施方式中，一个或多个相互作用单元可以为分析物本身固有的，或一个或多个相互作用单元可以通过一些其他方法，如交联、通过化学反应共价连接、非共价相互作用(例如，抗体-抗原、在分析物的一部分与另一分子之间的杂交等)来添加。在相互作用单元是由两种分子(例如，两个核苷酸序列)的杂交形成时，使得杂交产物中由另一分子识别的部分将被视为相互作用单元。相互作用单元也可以通过扩增反应添加到分析物中。这可以通过使用含有相互作用单元的引物来产生。相互作用单元也可以具有可检测的信号，但是它不是待检测的这些信号。
如本文所用，关于相互作用单元的术语“异源”意指并非分析物天然所有的基团、分子或部分。例如，扩增产物可以仅包含核酸分子或核苷酸碱基。然而，扩增产物可以结合于或连接于异源标签，如(但不限于)半抗原、生物素、地高辛、荧光分子(例如，荧光素或若丹明)等。异源相互作用单元的实例包括(但不限于)半抗原、生物素、核酸分子、肽片段(例如His标签、GST标签等)、酶、链霉亲和素、抗生物素蛋白、荧光分子等。这个清单是非限制性的并且可以使用任何相互作用单元。分析物可以用例如地高辛、若丹明、荧光素、DNP、BRDU的分子标记且随后由对给定的分子具有特异性的捕获试剂检测。
根据一些实施方式，提供检测多种分析物的方法。目前描述的方法可以用于检测多种分析物。出乎意料的且令人惊讶的结果是，可以使用单一信号检测多种分析物。这具有出乎意料的结果，即可以仅由一种信号的检测来检测多种分析物的存在或不存在。这与在同一反应中使用不同信号检测样品中多种分析物的存在或需要进行检测多种分析物的独立反应和方法来检测多种分析物的存在形成对比。即，本文所描述的实施方式部分地提供用单一信号并行地检测多种分析物的方法，使得单一信号的检测指示样品中多种分析物的存在，或单一信号的不存在指示样品中多种分析物的不存在。本发明实施方式提供用单一信号并行地检测至少2、3、4或5种分析物的方法。在一些实施方式中，方法可以用于用单一信号并行地检测2、3、4或5种不同分析物。尽管提供关于检测2种分析物的多个实例，但可以基于本发明关于3、4或5种分析物进行调适和修改方法。
如本文所用，术语“不同分析物”意指分析物不相同。然而，不同分析物可以同一名称提及，但来自不同生物体或来自同一生物体的不同菌株。例如，不同生物体含有具有相同功能的基因和蛋白质，且因此被给予同一名称。但基因或蛋白质是来自不同来源且因此被视为不同分析物。它们可以或可以不具有不同序列。不同分析物也可以意指来自不同生物体的分析物。例如，存在大肠杆菌的多种菌株。并非大肠杆菌的所有菌株均引起食源性疾病。本发明方法可以用于例如检测来自病原性大肠杆菌菌株的多种分析物，如与检测来自非病原性大肠杆菌菌株的分析物相对比。尽管本发明中可以提及特定类型的分析物，但分析物可以为任何类型的分析物，例如(但不限于)本文所描述的分析物类别。
例如，在一些实施方式中，提供并行地检测第一分析物和第二分析物的方法。在一些实施方式中，方法包括使包含第一捕获试剂的固体支撑物与第一分析物、第二分析物、包含第二捕获试剂的桥接单元和包含第三捕获试剂的信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在，信号检测单元指示第一分析物和第二分析物的存在。在一些实施方式中，第一捕获试剂固定于固体支撑物。在一些实施方式中，第一分析物包含结合于第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于桥接单元的第二相互作用单元；第二分析物包含结合桥接单元的第一相互作用单元和结合于信号检测单元的第二相互作用单元。随后可以检测信号检测单元。如果检测到信号检测单元，那么其指示多种分析物是存在的。
不希望受任何理论束缚，可以通过形成复合物并行地检测多种分析物。在一些实施方式中，复合物包含固体支撑物、第一分析物、第二分析物、桥接单元和信号检测单元，其中复合物的各成员直接或间接地彼此结合。样品可以经洗涤，同时保留固体支撑物，且复合物将仅在形成复合物时检测到。这些复合物的实例可见于图1-图3中，其在本文中进一步加以描述。
在一些实施方式中，提供并行地检测第一分析物和第二分析物的方法，方法包括：使固体支撑物与所关注的第一分析物、所关注的第二分析物、包含第二捕获试剂的桥接单元和包含第三捕获试剂的信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在或不存在，信号检测单元并行地指示所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的存在或不存在，其中：第一捕获试剂固定于固体支撑物；所关注的第一分析物包含结合于第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于桥接单元的第二相互作用单元；且所关注的第二分析物包含结合桥接单元的第一相互作用单元；结合于第二分析物、第二分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元、第一和第二分析物的复合物或仅当复合物含有第一和第二分析物时存在的桥接单元的组分的信号检测单元。
图1说明可以形成复合物以用单一信号并行地检测两种分析物。图1说明固定于固体支撑物10的捕获试剂15。捕获试剂15结合于第一分析物20。桥接单元30结合于第一分析物。桥接单元还结合于第二分析物40。图1还说明包含结合于第二分析物40的捕获试剂50的信号检测单元60。图1说明这种复合物仅在各成员均存在且可以彼此结合时形成。随后可以检测信号检测单元。图3也显示用单一信号检测两种分析物的实施方式。图3显示特异性标记(例如FITC、TAMRA、DIG、生物素、链霉亲和素等……)，但这些标记可以根据本发明经修饰。
在一些实施方式中，方法包含一个或多个洗涤步骤。洗涤步骤可以用于移除未结合的材料。例如，如果固体支撑物与第一样品接触，那么固体支撑物可以经洗涤以移除任何未结合的材料。在固体支撑物为珠粒(bead)的一些实施方式中，珠粒可以与样品接触且随后可以洗涤所述珠粒。洗涤珠粒是常规的且所属领域的技术人员众所周知的。可以基于所用的通常不为关键特征的特定固体支撑物改变或选择洗涤珠粒或其他类型的固体支撑物的方法。
在一些实施方式中，具有第一分析物的样品与固体支撑物接触。在一些实施方式中，混合物经洗涤，使得未结合于固体支撑物的任何材料均不再存在。在一些实施方式中，固体支撑物也与相同样品或包含第二分析物和/或桥接单元的不同样品接触。混合物可以随后再次洗涤以移除任何未结合的材料。在一些实施方式中，添加包含捕获试剂的信号检测单元。也可以包括洗涤步骤以移除任何未结合的信号检测单元。随后可以检测信号检测单元，或可以添加检测信号检测单元的存在的另一试剂。在一些实施方式中，所有步骤是同时或几乎同时进行。在方法的进行期间，可以在适当时插入洗涤步骤。
在一些实施方式中，可以在施用于固体支撑物之前或同时将不同分析物或样品混合在一起。样品可以为例如扩增反应混合物，其用于产生或尝试产生分析物。在一些实施方式中，将进行不同扩增反应以扩增多种分析物。因此，在样品或分析物施用于固体支撑物之前，可以将样品或分析物混合在一起。样品或分析物也可以在与固体表面接触之前与捕获试剂和/或桥接单元混合。
在一些实施方式中，第一分析物的第一和第二相互作用单元以及第二分析物的第一和第二相互作用单元各自独立地为异源相互作用单元。在一些实施方式中，第一分析物的相互作用单元和第二分析物的相互作用单元为半抗原。在一些实施方式中，第一分析物和第二分析物的相互作用单元为荧光素或若丹明分子。因此，在一些实施方式中，第一分析物和第二分析物具有至少一个共同的相互作用单元。相互作用单元的共同性将使得桥接单元能够使两种分析物成为可检测的复合物。在一些实施方式中，第一和第二分析物不具有相同的相互作用单元。在这种情形下，对于一些实施方式，桥接实体将为可以使两种分析物彼此键连的二价捕获试剂(例如，二价抗体)。二价捕获试剂将能够同时结合于第一和第二分析物。在一些实施方式中，存在于多种分析物上的各相互作用单元是不同的。在一些实施方式中，一些相互作用单元是不同的，但一些相互作用单元是相同的。在一些实施方式中，分析物包含半抗原相互作用单元和生物素相互作用单元。在一些实施方式中，第一分析物包含地高辛相互作用单元和若丹明相互作用单元；第二分析物包含若丹明相互作用单元和FITC相互作用单元，并且桥接单元结合于若丹明相互作用单元。桥接单元可以随后形成含有第一和第二分析物的复合物。这可见于例如图3中。
在一些实施方式中，多种分析物是同一类型的分析物。例如，所检测的各分析物可以为肽。在一些实施方式中，各分析物是核酸分子，例如扩增产物(例如，扩增子)。分析物也可以为任何类型，包括(但不限于)本文所描述的分析物。在一些实施方式中，分析物是不同的。在一些实施方式中，第一分析物是扩增产物且第二分析物是蛋白质或肽。可以使用分析物的任何组合。
如本文所用，术语“桥接单元”或“桥”意指可以使两种或两种以上分析物在复合物中键连的一种或多种分子。即，举例来说，桥接单元可以结合于第一分析物上的相互作用单元和第二分析物上的相互作用单元。如果仅检测两种分析物，则可以使用一种桥接单元。如果检测三种分析物，则可以使用两种桥接单元。在一些实施方式中，方法使用“n-1”种桥接单元，其中“n”是所检测的分析物的数目。在一些实施方式中，使用单一桥接单元来检测超过2种分析物。桥接单元的实例包括(但不限于)免疫球蛋白分子(例如IgM、IgE、IgG、IgA等)、链霉亲和素和包含多种捕获试剂使得桥接单元可以结合于超过一个相互作用单元的分子。在一些实施方式中，桥接单元为多价捕获试剂。
在一些实施方式中，桥接单元是化合物、物质或大分子的复合物。例如，桥接单元可以包含涂布有抗体的纳米粒子和另一抗体。在这个非限制性实例中，涂布有抗体的纳米粒子可以含有结合于分析物或在分析物上的相互作用单元的抗体且也含有结合于另一抗体的抗体。另一抗体可以结合于不同分析物。涂布有抗体的纳米粒子和另一抗体的相互作用随后将能够使不同的分析物桥接在一起。这种桥接复合物的非限制性说明可以见于图4和图5中，在下文中也有描述。也可以制备作为复合物的桥的其他变化形式。桥接单元的精确结构和形式不是必要的，只要其可以将多种分析物“桥接”在复合物中即可。因此，可以由多个亚单位或组分组成桥以将分析物桥接在一起。尽管桥接单元可以经说明且论述为桥接两种分析物，但桥接单元可以被设计成桥接超过2种分析物，例如3、4、5种或更多种。因此，在一些实施方式中，桥接单元桥接2、3、4、5种或更多种分析物。在一些实施方式中，桥接单元桥接至少2、3、4或5种分析物。桥接2种分析物的非限制性实例仅是为了达成说明性目的且本文公开的实施方式不限于仅桥接2种分析物。
如本文所论述，可应用本发明方法来检测超过2种分析物。例如，提供用单一信号并行地检测第一分析物、第二分析物和第三分析物的方法。对于另外分析物的检测，可以以类似方式调适方法。在一些实施方式中，方法包括使第一、第二和第三分析物与固体支撑物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元接触；和检测信号检测单元的存在，信号检测单元用单一信号并行地指示第一、第二和第三分析物的存在，其中第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；第三分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；固体支撑物包含结合于第一分析物的第一相互作用单元的第一捕获试剂；第一桥接单元结合于第一分析物的第二相互作用单元和第二分析物的第一相互作用单元；第二桥接单元结合于第二分析物标记的第二相互作用单元和第三分析物的第三相互作用单元；并且信号检测单元结合于第三分析物的第二相互作用单元。不受任何理论束缚，预期可以并行地检测分析物，因为第一、第二和第三分析物形成复合物，其中复合物包含固体支撑物、第一分析物、第二分析物、第三分析物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元，其中复合物的各成员彼此直接或间接结合。
图2说明可以形成的检测三种分析物的复合物，其类似于图1中说明的实例。图2说明具有结合于第一分析物70的捕获试剂15的固体支撑物10。第一分析物结合于第一桥接单元80。第一桥接单元结合于第二分析物20，其也结合于第二桥接单元30。第二桥接单元也结合于第三分析物40，其结合于捕获试剂50。捕获试剂也连接于信号检测单元60。因此，图2说明如何可以用单一信号检测三种分析物的非限制性实例。
图4说明由超过一种分子、大分子或物质组成的非限制性桥接复合物。这种复合物可以称为多组分桥接复合物。图4说明包含粒子34、第一捕获试剂31、第二捕获试剂32和第三捕获试剂33的桥接单元30。桥接单元30能够使第一分析物20和第二分析物40合起来且形成键连第一分析物20和第二分析物40的复合物。图4说明粒子34(例如，纳米粒子、聚苯乙烯、琼脂糖等)，粒子涂布有直接或通过相互作用单元间接结合于第一分析物20的第一捕获试剂31、也存在于粒子34上的第三捕获试剂33，第三捕获试剂结合于与第二分析物40结合的第二捕获试剂32。可以随后根据本文所描述的方法和组合物检测这种复合物，这说明于图5中。图5显示图4的桥接复合物，复合物与具有结合于第一分析物20的捕获试剂15的固体支撑物10和包含结合于第二分析物40的捕获试剂50的信号检测单元60相互作用。如本文所论述，结合于第二分析物的信号检测单元的说明是仅出于说明性目的。信号检测单元也可以结合复合物的其他部分，只要信号检测单元不结合于与固体支撑物相互作用的分析物或固体支撑物本身即可。固体支撑物40可以为例如测试膜，例如图3中显示的测试膜。本文中提供固体支撑物的其他实例。
本发明提供包含固体支撑物、第一分析物、第二分析物、桥接单元和信号检测单元的复合物，其中复合物的各成员彼此直接或间接地结合。在一些实施方式中，固体支撑物结合于第一分析物，桥接单元结合于第一分析物和第二分析物，并且信号检测单元结合于第二分析物。在一些实施方式中，固体支撑物包含第一捕获试剂，第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，桥接单元包含一种或多种独立地结合于第一分析物的第二相互作用单元和第二分析物的第一相互作用单元的捕获试剂，并且信号检测单元包含结合于第二分析物的第二相互作用单元的捕获试剂。
在一些实施方式中，复合物包含固体支撑物、第一分析物、第二分析物、第三分析物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元，其中固体支撑物、第一分析物、第二分析物、第三分析物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元彼此直接或间接地结合。在一些实施方式中，固体支撑物结合于第一分析物，第一桥接单元结合于第一分析物和第二分析物，第二桥接单元结合于第二分析物和第三分析物，并且信号检测单元结合于第三分析物。在一些实施方式中，固体支撑物包含第一捕获试剂，第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，第三分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，第一桥接单元包含一种或多种独立地结合于第一分析物的第二相互作用单元和第二分析物的第一相互作用单元的捕获试剂，第二桥接单元包含一种或多种独立地结合于第二分析物的第二相互作用单元和第三分析物的第一相互作用单元的捕获试剂，并且信号检测单元包含结合于第三分析物的第二相互作用单元的捕获试剂。
在一些实施方式中，目前描述的方法可以用于通过用单一信号检测多种食源性病原体分析物来检测食源性病原体。例如，样品可以经处理以分离分析物(例如，可以分离或扩增抗原或毒素，或食源性病原体核酸)。可以用本文所描述的方法并行地检测多种分析物(例如，食源性病原体蛋白和/或扩增子)。方法可以随后提供对测试的特异性的较大置信并且避免假阴性结果。在一些实施方式中，指示食源性病原体的存在的阳性结果需要检测2、3或4种分析物。本发明方法可以用于用单一信号并行地检测分析物。单一信号提供更简单的结果来进行解释，因为信号将仅在所检测的多种分析物均存在于样品中时可以检测到。因此，如果正在检测2种分析物，那么信号将仅在两种分析物均存在时可以检测到。在一些实施方式中，信号仅在3种分析物存在时可以检测到。这种类型的方法可以应用于其他检测方法。
在一些实施方式中，方法可以用于检测3类分析物以提供关于食品污染的阳性测试。在一些实施方式中，分析物中的一种是毒素(例如，志贺毒素1和/或2)。可以检测毒素本身，或可以检测编码或控制毒素的产生的核苷酸序列。在一些实施方式中，分析物中的一种是eae基因，其也可以称为毒力因子。eae基因可发现于或表达于例如肠出血性大肠杆菌中。
在一些实施方式中，分析物中的一种是血清型分析物，其可以为由食源性病原体的菌株特异性产生的抗原。在一些实施方式中，血清型分析物是大肠杆菌血清型。在一些实施方式中，大肠杆菌血清型为O26、O45、O103、O111、O121和O145。因此，在一些实施方式中，关于食源性污染的阳性测试需要用单一信号检测3种分析物，其中3种分析物是志贺毒素(例如，志贺毒素1和/或2)、eae基因和选自大肠杆菌血清型的血清型分析物，血清型分析物是O26、O45、O103、O111、O121和O145。在一些实施方式中，血清型分析物是由病原性菌株特异性表达的蛋白质。在一些实施方式中，分析物是编码抗原的核酸序列。在一些实施方式中，核酸序列是抗原的编码序列的片段。特异性片段不是关键的并且所属领域的技术人员可以确定序列或其片段以使用常规方法进行扩增。如本文所论述，可以扩增并且可选地用异源相互作用单元标记靶序列。可以随后根据本文提供的方法检测分析物。
例如，如果关于病毒的阳性测试需要存在两个不同的核酸序列，那么这两个核酸序列可以使用本文所描述的方法用单一信号并行地检测，如与用超过一种信号分别检测这两个核酸序列相对比。另外，如果癌症的存在需要检测样品中表达的多种基因，那么可以通过使用与其表达相关的分析物(例如，通过使用RT-PCR来扩增基因产物)根据本文所描述的方法用单一信号并行地检测基因。因此，目前描述的方法具有广泛适用性且可以与多个分析物(靶分子)并且甚至与不相同的分析物一起使用。
在一些实施方式中，提供检测两种或两种以上分析物的方法，包含使用流动(垂直或横向)装置检测多种分析物。垂直流装置的实例和其使用方法提供于美国专利US 8,012,770、US 8,183,059和美国专利申请案US13/500,997、US 13/360,528、US 13/445,233中，各案以引用的方式全文并入本文中。可以调适装置用于使用单一信号检测多种分析物。
因此，本文中提供的实施方式提供通过使用垂直流和采用垂直流的装置用单一信号检测多种分析物的方法。垂直流允许分析物和/或样品流过分析物检测膜系统的层/膜。“经过层”或“经过膜”意在指样品流过层并且垂直地通过所述层。在一些实施方式中，样品不会水平地或横向地流动通过不同层/膜。
以下术语与各种垂直流装置的描述结合使用。通篇也描述了与一些垂直流装置或其用途有关的其他术语。
术语“压力致动器”和“力致动器”可互换使用且是指可以例如通过施加力来施行压力的组件。力致动器也可以称为加力构件。实例包括(但不限于)本文中描述的各种加力构件。其他实例包括(但不限于)活塞或其他固体支撑结构。力致动器相对于另一组件的位置可提高、降低或横向移动。可以手动地或通过信号处理单元(例如，电脑)来控制力致动器的位置。控制力致动器的位置的能力可以用于调整施加于另一组件(例如(但不限于)分析物检测膜系统)的力(例如压力)。通过调整施加于膜系统的力，可以调整样品的流动速率。力可以用于使样品通过膜系统的流动速率保持恒定，或流动速率可以为可变的。流动速率也可以停止且使样品停留在膜系统的不同层上。例如，当样品接触结合垫时，样品的流动速率可以为零或接近零。在搁置于结合垫上之后，可通过调节由力致动器施加的压力来增加流动速率。样品可随后通过整个膜系统，或可以调节所施加的力以允许样品停留(搁置)在膜系统的另一层上。当样品垂直地流过膜系统时，可以手动地或通过使用信号处理单元(例如，电脑)精确地调整力，可以在任何时刻修改流动速率。流动速率也可以基于膜系统中的膜的吸收性和/或系统的膜的数目来调整。基于吸收性，可以调节(例如，增加或降低)流动速率。
流动速率可以任何单位，包括(但不限于)μl/分钟或μl/秒等来量度。停留期间的流动速率可以为例如0μl/秒，或小于1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.1μl/秒或μl/分钟。可以手动地或通过信号处理单元(例如，电脑)来监控并且同样进行调整流动速率。除本文所描述的方法以外，还可以通过所属领域的技术人员已知的众所周知且常规的方法来调整和监控流动速率。在一些实施方式中，流动速率为约0到1ml/分钟、约0-10ml/分钟、约1-9ml/分钟、约1-8ml/分钟、约1-7ml/分钟、约1-6ml/分钟、约1-5ml/分钟、约1-4ml/分钟、约1-3ml/分钟、约1-2ml/分钟、约0.5-1.5ml/分钟、约1-1.5ml/分钟或约0.5-1ml/分钟。在一些实施方式中，流动速率为约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10ml/分钟。在一些实施方式中，流动速率为至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10ml/分钟。在一些实施方式中，流动速率为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10ml/分钟。
在一些实施方式中，用于用单一信号检测多种分析物的装置包含外壳，外壳包含第一外壳构件和第二外壳构件。在一些实施方式中，第一和第二外壳构件可以构建为单一单元。外壳可以包含进口。进口允许将样品引入色谱分析中。在一些实施方式中，第一外壳构件包含进口。进口可以具有足以处置添加到装置中的溶液的适量体积的尺寸。在一些实施方式中，开口(opening)的尺寸大到足以处置约0.1到3ml、约0.1到2.5ml、约0.5到2.0ml、约0.1到1.0ml、约0.5到1.5ml、0.5到1.0ml和1.0到2.0ml。
在一些实施方式中，外壳包含结合垫、可透膜、测试膜和/或吸收构件。在一些实施方式中，外壳包含分析物检测膜系统。在一些实施方式中，分析物检测膜系统包含结合垫、可透膜、测试膜和吸收构件。在一些实施方式中，分析物检测膜系统不含可透膜。在一些实施方式中，分析物检测膜系统以下列顺序包含：结合垫、可透膜、测试膜和吸收构件。
如本文所用，术语“结合垫”是指可以包含捕获试剂的膜或其他类型的材料。结合垫可以为乙酸纤维素、硝酸纤维素、聚酰胺、聚碳酸酯、玻璃纤维、膜、聚醚砜、再生纤维素(RC)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚酯(例如聚对苯二甲酸乙二酯)、聚碳酸酯(例如4,4-羟基-二苯基-2,2'-丙烷)、氧化铝、混合纤维素酯(例如乙酸纤维素与硝酸纤维素的混合物)、尼龙(例如聚酰胺、六亚甲基-二胺和尼龙66)、聚丙烯、PVDF、高密度聚乙烯(HDPE)+成核剂“二苯甲酸铝”(DBS)(例如80u 0.024 HDPE DBS(Porex))和HDPE。结合垫的实例也包括(聚对苯二甲酸乙二酯)、(聚对苯二甲酸乙二酯)、(乙酸纤维素和硝酸纤维素)、沃特曼(Whatman)(乙酸纤维素和硝酸纤维素)、沃特曼#12-S(人造丝))、(氧化铝)、(氧化铝)、赛多利斯(Sartorius)(乙酸纤维素，例如5μm)和沃特曼标准17(银焊玻璃)。结合垫也可以由与样品或其他液体接触之后溶解的材料制成。可以进行结合垫的溶解，使得本文所描述系统的其他层可显露或暴露以用于肉眼检查(例如，检测分析物)或用于分光计检查(例如，通过分光计检测分析物)。
在一些实施方式中，结合垫或测试膜包含捕获试剂。在一些实施方式中，使结合垫或测试膜与捕获试剂接触且随后使其干燥，随后用于垂直流装置中。结合垫或测试膜也可以包含其他组合物以保存捕获试剂，使得其可以在室温下或在冷藏或冷冻温度下稳定存储。在一些实施方式中，结合垫或测试膜在施用捕获试剂之前用缓冲液浸泡。在一些实施方式中，缓冲液是用于防止非特异性结合的阻断缓冲液。在一些实施方式中，缓冲液包含硼酸盐、BSA、PVP40和/或Tween-100或其任何混合物。在一些实施方式中，缓冲液为10mM硼酸盐、3％BSA、1％PVP40和0.25％Tween-100。在一些实施方式中，捕获试剂是在包含海藻糖和蔗糖的溶液中施用于垫或膜。在一些实施方式中，捕获试剂是在包含海藻糖、蔗糖和磷酸盐和/或BSA的溶液中施用于垫、膜或两者。在一些实施方式中，捕获试剂是在5％海藻糖、20％蔗糖、10mM磷酸盐和1％BSA的溶液中施用。在一些实施方式中，测试膜包含结合于经标记扩增子的捕获试剂。在一些实施方式中，捕获试剂为识别或结合于地高辛、荧光素(例如FITC)、若丹明(TAMRA)等的抗体。
在一些实施方式中，结合垫包含链霉亲和素。链霉亲和素也可以如本文所描述进一步经标记。在一些实施方式中，链霉亲和素是结合于用于用单一信号检测多种分析物的生物素化抗体的捕获试剂。
在一些实施方式中，可移除构件接触结合垫的第一表面且粘着构件(adhesivemember)接触结合垫的第二表面。
在一些实施方式中，装置包含粘着构件。粘着构件可以包含允许样品流过结合垫并且接触测试膜的粘着构件入口。在一些实施方式中，粘着构件入口与可移除构件入口具有相同尺寸或形状。在一些实施方式中，粘着构件入口与可移除构件入口具有不同尺寸或形状。在一些实施方式中，粘着构件中的入口具有相同形状，但具有不同面积。具有不同面积的入口将被视为具有不同尺寸。粘着构件可以由适用于将一种构件或膜粘附于另一构件或膜的任何物质制成。在一些实施方式中，粘着构件不透液体。在一些实施方式中，粘着构件接触可移除构件。
在装置的一些实施方式中，可透膜是连接于或粘附于测试膜。在一些实施方式中，可透膜是层压到测试膜上。可透膜可以为允许样品(例如流体样品)流过测试膜的任何材料的膜。测试膜的实例包括(但不限于)硝化纤维素、纤维素、玻璃纤维、聚酯、聚丙烯、尼龙等。在一些实施方式中，可透膜包含开口。开口可以存在以允许目测或检测测试膜。在一些实施方式中，可透膜中的开口基本上与外壳中的进口具有相同尺寸。可透膜的实例包括(但不限于)Protran BA83、沃特曼等。
如本文所论述，固体支撑物的一个实例是测试膜。如本文和通篇所用，“测试膜”是指其中检测捕获试剂的结合伴侣的膜。测试膜包括(但不限于)硝化纤维素膜、尼龙膜、聚偏氟乙烯膜、聚醚砜膜等。测试膜可以为可由所属领域的技术人员用于检测捕获试剂的结合伴侣(例如，经标记的分析物、抗原或表位)的存在的任何材料。测试膜也可以包含捕获试剂。在一些实施方式中，测试膜与捕获试剂接触且使捕获试剂干燥且粘附于测试膜。测试膜的实例包括(但不限于)Protran BA83、沃特曼、Opitran BA-SA83和0.22μm白色光面膜(密理博(Millipore)产品编号SA3J036107)。测试膜也可以包含与捕获试剂结合的纳米粒子基质。纳米晶体可以布置成具有例如(但不限于)基于碳的粒子、金或金属合金粒子、共聚物基质以及单分散半导体、磁性、金属和铁电纳米晶体的材料的2D薄片和3D基质。测试膜可以包含多种捕获试剂。在一些实施方式中，测试膜包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种捕获试剂。在一些实施方式中，测试膜包含多个各具有不同捕获试剂的区域。在一些实施方式中，多个区域不完全彼此重叠或一致。
在一些实施方式中，装置或外壳还包含吸收构件。吸收构件也可以称为“芯垫”或“芯吸垫”。吸收构件吸收在样品施用于装置时流过装置的流体且提供在样品施用于装置时有助于样品流动的芯吸力。“吸收构件”意在指具有从与材料接触的表面汲取(芯)且保持溶液的能力的材料。使用增加或降低吸收率的材料的组合也可以允许控制样品移动。
吸收构件可以为可促进样品流过结合垫且流到测试膜的任何材料。吸收构件的实例包括(但不限于)纤维素、超吸收聚合物、玻璃纤维垫(例如C083(密理博(Millipore)))等。在一些实施方式中，外壳包含多个(例如，2个或2个以上)吸收构件。在一些实施方式中，外壳包含2、3、4或5个吸收构件。在一些实施方式中，装置包含一个吸收构件。在一些实施方式中，吸收构件包含一个或多个膜(最高达10个个别膜)，并且各个膜可以为相同材料或不同材料。在一些实施方式中，装置仅由1个作为吸收构件的膜组成。
在一些实施方式中，装置包含加力构件。加力构件的实例描述于下文中且可见于图中。这些实例为非限制性的并且可以使用其他形式的加力构件。在一些实施方式中，加力构件可以用于施加压力或压缩分析物检测膜系统的其他组件使得彼此抵靠。在一些实施方式中，加力构件可以由包括(但不限于)塑料或不锈钢的任何材料产生。如图23中所示，夹具可用作加力构件。不锈钢可以为激光切割的，使得其可以用作夹具。这些夹具的非限制性实例可见于图23中。加力构件用于向膜系统施加压力。加力构件不限于夹具，而是可以为任何形状(参见关于非限制性实例的图)，其可以向膜系统(例如，纳米粒子基质)和位于组合件内的关键位置处的活塞样结构施加压力。在一些实施方式中，加力构件是活塞。加力构件可以用于施加压力或压缩分析物检测膜系统的其他组件使得彼此抵靠。在一些实施方式中，加力构件可以包含轴和头。加力构件可以具有蘑菇型形状，其中头比轴宽。在一些实施方式中，头比轴窄。包含头和轴的加力构件可以为单一单元或可以由彼此接触形成加力构件的多个部件制成。举例来说，头可以为一个可以与轴分离的单元。在组装时，头和轴彼此接触以制成加力构件。在另一实例中，头和轴是一个粘结单元并且一起制造，而非稍后组装形成加力构件的独立部件。加力构件允许装置与垂直流一起工作，如与依赖于横向流相对比。
在一些实施方式中，加力构件接触吸收构件的表面。在一些实施方式中，加力构件接触吸收构件的表面和可移除层的表面。在一些实施方式中，加力构件从膜检测系统的上方和下方压缩膜检测系统。例如，在一些实施方式中，加力构件可以夹在膜检测系统的所有层中间。在一些实施方式中，加力构件连接于支撑构件。
在一些实施方式中，装置以下列顺序包含可移除构件、结合垫和粘着构件。
装置还可以包含支撑构件。在一些实施方式中，支撑构件接触吸收构件的表面。支撑构件还可以具有支撑构件入口。入口可以与可移除构件和/或粘着构件中的入口具有相同尺寸和/或形状。在一些实施方式中，支撑构件包含与可移除构件和/或粘着构件中的入口具有不同尺寸和/或形状的入口。可以由任何材料，包括(但不限于)塑料制成支撑构件。在一些实施方式中，第二外壳构件用作支撑构件。
本文所描述的装置可以用于检测捕获试剂的结合伴侣的存在的分析中。这些分析可以如本文所示用于针对单一信号的检测来检测多种分析物。例如，可以通过抗体使用本发明装置来检测抗原。术语“垂直流”通篇使用。术语“垂直流”是指样品流动通过存在于装置中的不同膜和构件的方向。垂直流是指流过膜(例如，顶部到底部)的样品，如与横向流相对比，横向流是指流动通过(例如，侧面到侧面)膜、垫或吸收构件的样品。在横向流装置中，膜和垫水平地位于彼此相邻位置处，基本上在同一平面上。在垂直流装置中，各膜或垫基本上平行或完全地彼此平行且占据装置中基本上不同的空间平面。膜和垫可以在其经压缩或在压力下放置时占据类似平面。在一些实施方式中，各构件、膜或垫的至少一部分在彼此顶部成层。在一些实施方式中，构件、膜或垫的各层的至少一部分基本上彼此平行。在一些实施方式中，各层的至少一部分处于与其他层不同的空间平面中。
为了使垂直流有效地发生，在一些实施方式中且当存在时，结合垫、可透膜、测试膜和吸收构件基本上彼此平行。在一些实施方式中，结合垫、可透膜、测试膜和吸收构件存在于不同的空间平面中。在一些实施方式中，外壳还包含疏水膜，疏水膜可以减慢或停止样品的垂直流。疏水膜可以与测试膜接触，这将使样品停留或搁置在测试膜上。停留可以允许增加的灵敏性和检测。通过施加于膜、垫和/或构件的压力来调节垂直流。在一些实施方式中，垂直于测试膜和/或结合垫施加压力。在一些实施方式中，可以施加压力使得结合垫抵靠外壳经压缩。抵靠外壳的压缩可使得结合垫与外壳、O型环或环箍直接接触或通过中间物接触，使得结合垫和测试膜彼此抵靠经压缩。
加力构件可以施加基本上垂直于测试膜的压力。不受任何特定理论束缚，压力促进垂直流。压力使膜堆叠的各层与另一层接触。压力也可以解除以停止流动，使得测试样品可以停留或搁置在测试膜上，此举可以允许更大灵敏性。压力可以随后再施加以允许垂直流继续使样品流入一个或多个吸收构件中。加力构件可以施加压力，使得结合垫接触外壳的一部分(例如，第一或第二外壳构件或可移除层)。在一些实施方式中，当结合垫不在加力构件施加的压力下时，结合垫接触外壳，但在施加压力的加力构件上，结合垫抵靠外壳的一部分经压缩。
在一些实施方式中，结合垫接触进口的周界。进口还可以包含环箍或其他类似特征，例如O型环。在一些实施方式中，结合垫接触环箍和/或O型环的周界。在一些实施方式中，结合垫能够抵靠进口的周界经压缩，进口可以在一些实施方式中包括环箍和/或O型环。
“能够抵靠进口的周界经压缩”是指膜或垫(例如，结合垫)直接与进口的周界接触经压缩或抵靠与进口的周界接触的另一层或材料(例如，膜)经压缩。
在一些实施方式中，结合垫不与外壳呈直接物理接触，而是与外壳呈流体接触。“流体接触”意指如果样品通过进口或其他开口施用于装置，那么流体将接触结合垫。在一些实施方式中，结合垫可以通过另一膜(例如可透膜)与外壳分离，其中另一膜与外壳呈直接物理接触或与环箍或O型环呈直接物理接触。当样品施用于装置时，流体可首先接触另一膜且随后接触结合垫。这正好是与外壳呈流体接触的结合垫的一个实例。存在众多其他实施方式，其中结合垫不与外壳、环箍或O型环呈直接物理接触，但是与外壳呈流体接触。
加力构件可以施加足以促进垂直流通过不同膜层的任何压力。在一些实施方式中，装置的层(例如，结合垫、可透膜、测试膜和吸收构件)在选自约5lbf到100lbf、约5lbf到50lbf、约10lbf到401bf、约15lbf到40lbf、约15lbf到25lbf或约30lbf到40lbf的力下经压缩。在一些实施方式中，装置的层(例如，结合垫、可透膜、测试膜和吸收构件)在选自约1lbf到100lbf、约1lbf到50lbf、约1lbf到51bf、约1lbf到10lbf、约1lbf到15lbf、约1lbf到20lbf、约1lbf到30lbf或约1lbf到25lbf的力下经压缩。如果疏水膜或不透膜存在于装置中，力还可以压缩疏水膜或不透膜。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，加力构件接触吸收构件的第一表面。在一些实施方式中，结合垫接触测试膜。在一些实施方式中，测试膜的第一表面接触可透膜。在一些实施方式中，测试膜的第二表面接触吸收垫的第二表面。在一些实施方式中，装置包含疏水膜且例如，疏水膜接触测试膜的第二表面。在一些实施方式中，疏水膜接触吸收垫的第一表面。在一些实施方式中，结合垫接触粘着构件。在一些实施方式中，测试膜接触粘着构件。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，结合垫的第一表面接触外壳且结合垫的第二表面接触可透膜的第一表面，其中可透膜的第二表面接触测试膜的第一表面，其中测试膜的第二表面接触吸收垫的第一表面，其中吸收垫的第二表面接触加力构件。在一些实施方式中，结合垫的第一表面接触外壳的进口的周界。在一些实施方式中，结合垫的第一表面接触环箍或O型环的周界。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，结合垫的第一表面接触外壳且结合垫的第二表面接触粘着构件的第一表面，其中粘着构件的第二表面接触测试膜的第一表面，其中测试膜的第二表面接触吸收垫的第一表面，其中吸收垫的第二表面接触支撑构件。在一些实施方式中，结合垫的第一表面接触入口的周界。在一些实施方式中，结合垫的第一表面接触环箍或O型环的周界。
装置还可以包含连接构件。在一些实施方式中，连接构件是柔性的或由柔性材料制成。在一些实施方式中，连接构件是固定的或由非柔性材料制成。固定的连接构件可以为例如铰链等，其可以例如接触系统的结合垫或另一层或膜并且可以介导其位移。固定的连接构件，例如(但不限于)固定的铰链或类似铰链起作用的其他可压缩材料，在压缩释放时可以恢复形状或尺寸。连接构件能够使结合垫移位。连接构件还可以仅为塑料并且尽管可弯曲，其弯曲特性无法用于装置的功能。
柔性材料可以为例如弹性或弹性体材料。连接构件可以例如连接于结合垫和/或疏水膜。连接构件还可以连接于装置的任何膜或构件。连接构件的实例包括(但不限于)弹性体带、橡胶带、弹簧等。在一些实施方式中，连接构件可以由形状记忆材料制成。在一些实施方式中，连接构件使得有可能在移动锁定构件与移动结合垫或与连接构件连接的任何其他类型的膜或垫之间产生延迟。在一些实施方式中，垫或膜的移动不会与移动滑动按钮或锁定构件同时发生。在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，并且不受任何特定理论束缚，当滑动按钮或锁定构件移动时，能量在连接构件中积聚并且这种能量用于拉紧在压力已释放后连接于连接构件的垫或膜。在一些实施方式中，在移动或移除结合垫之前，锁定构件远离加力构件移动(即，加力构件不再接触锁定构件)在一些实施方式中，一旦完全移除由加力构件施加的压缩或压力，结合垫即移动。
连接构件还可以连接于滑动按钮或锁定构件。连接构件可以通过任何方式，例如粘着剂、卡钉、系结等连接于其他组件。在一些实施方式中，膜或垫在膜或垫中具有凹口，其允许连接构件连接于膜或垫。非限制性实例可见于图9中。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，外壳包含锁定构件。锁定构件可以为可以在装置内移动的可滑动锁定构件。锁定构件可以用于将加力构件锁定于一个位置，使得在不同层上由加力构件产生的力得以维持。锁定构件是例如将加力构件锁定于一个位置，使得压力无法解除，直到锁定构件移动以允许加力构件改变位置(即，降低)。锁定构件可以例如安装在加力构件的头的下方，这将使加力构件保持在提高的位置。锁定构件还可以经定位，使得其将加力构件保持在特定位置(例如，提高或降低)。可以由包括(但不限于)塑料等的任何材料制成锁定构件。锁定构件可以例如直接或间接通过防止加力构件释放压力的另一组件接触加力构件。在一些实施方式中，锁定构件接触加力构件以压缩结合垫。
锁定构件还可以接触连接构件，使得锁定构件的移动将移动连接构件、连接于连接构件的任何其他膜(例如，结合垫、疏水膜、测试膜或吸收构件)或其他组件。例如，如果锁定构件移动以解除加力构件的压力，由此使加力构件改变位置(例如，从提到的位置到降低的位置)，那么锁定构件的移动还将使连接构件变形/将能量积聚到连接构件中，因此一旦压力已充分降低，锁定构件可移动膜或垫。当结合垫连接于连接构件且锁定构件移动时，一旦压力已充分降低，此举还将移动结合垫。在一些实施方式中，压力被完全移除。结合垫可以例如移动，使得其从装置移除。在一些实施方式中，结合垫移动以通过进口显露测试膜。显露的测试膜的量将取决于使用的检测的类型。对于肉眼检测，在进口中可以需要显露更多的测试膜。对于非肉眼(例如，荧光、近红外、红外、放射性或化学发光)检测，可以需要显露更少或更多的测试膜。在一些实施方式中，结合垫移动，使得不再通过进口可以看见或检测到结合垫。在一些实施方式中，结合垫的移动可以产生除进口以外的另一开口以目测或检测测试膜。在一些实施方式中，结合垫溶解以目测或检测测试膜(例如，用单一信号检测分析物或多种分析物)。结合垫可以由可溶解材料制成，使得当结合垫与样品或另一溶液接触时，结合垫部分地或完全溶解。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，连接构件还连接于不透膜或疏水膜。当连接构件移动时，移动还将移动或移除不透膜或疏水膜。如本文所论述，不透或疏水膜的存在可以通过减缓或停止垂直流使测试样品停留或搁置在测试膜上。当不透膜或疏水膜移动或移除时，通过使其连接于连接构件或通过其他方式，垂直流不再被阻止或抑制。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，外壳包含滑动按钮。滑动按钮也可称为滑动构件。滑动按钮可以交叉通过(cross)外壳的内表面和外表面。在一些实施方式中，滑动按钮或滑动构件突出到外壳的外表面。在一些实施方式中，滑动按钮直接或间接连接于锁定构件。当滑动按钮连接(直接或间接)于锁定构件时，滑动按钮的移动也移动锁定构件。在一些实施方式中连接构件可以连接于滑动按钮。在一些实施方式中，连接构件连接于滑动按钮和锁定构件。滑动按钮和锁定构件还可构建为单一单元。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，任何一个或多个入口(inlet)均包含选自约0.2到约20cm2的范围的开口(opening)。在一些实施方式中，任何一个或多个入口均为约1到约2cm的直径。在一些实施方式中，任何一个或多个入口均为约1或约1.5cm的直径。在一些实施方式中，任何一个或多个入口均为约1、约2、约3、约4或约5cm的直径。在一些实施方式中，存在超过一个入口，入口可以为不同尺寸或相同尺寸。各入口的尺寸彼此独立。在本文所描述的装置和系统的一些实施方式中，装置或系统包含1、2、3、4或5个入口。在本文所描述的装置和系统的一些实施方式中，装置或系统包含至少1、2、3、4或5个入口。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，进口包含选自约0.2-20cm2的范围的开口。在一些实施方式中，进口为约1到约2cm的直径。在一些实施方式中，进口为约1或约1.5cm的直径。在一些实施方式中，进口为约1、约2、约3、约4或约5cm的直径。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，用于检测分析物的装置包含第一构件和第二构件。在一些实施方式中，第一构件和第二构件彼此接触。在一些实施方式中，第一构件包含一个或多个入口。在一些实施方式中，第一和第二构件之间为分析物检测膜系统。在一些实施方式中，第一和第二构件之间的分析物检测膜系统包含结合垫、粘着构件、测试膜和吸收构件。在一些实施方式中，分析物检测膜系统以下列顺序包含：结合垫、粘着构件、测试膜和吸收构件。如本文所论述，在一些实施方式中，结合垫、测试膜和吸收构件中每一者的至少一部分基本上彼此平行。在一些实施方式中，结合垫、测试膜和吸收构件中每一者的至少一部分处于不同空间平面中。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，分析物检测膜系统在(例如，加力构件的)第一和第二构件之间经压缩。在一些实施方式中，分析物检测膜系统在由第一构件形成的平面和由第二构件形成的平面之间经压缩，其中由第一和第二构件形成的平面基本上彼此平行且与分析物检测膜系统平行。在一些实施方式中，平面彼此平行且与分析物检测膜系统平行。在一些实施方式中，压缩分析物检测膜系统的第一和第二构件是加力构件。例如，加力构件可以称为包含第一和第二构件以产生压缩分析物检测膜系统的力。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，第一和第二构件沿平行于第二构件的边缘的第一构件的边缘彼此连接。在一些实施方式中，第一和第二构件是由弹簧、铰链等连接。第一和第二构件连接的方式不受限制并且可以是通过使得分析物膜系统能够在第一和第二构件之间经压缩的任何结构。在一些实施方式中，第一和第二构件是彼此相邻的且形成夹具。夹具(例如，加力构件)的实例在本申请案通篇中显示(例如图16)。夹具可以例如从金属或使第一构件具有柔性的任何类型的材料切割，使得分析物检测膜系统可以插入第一和第二构件之间。在一些实施方式中，第一构件是可移除的。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，第一构件与结合垫连接或接触，其中第一构件的移动或移除移动结合垫或从装置移除结合垫。在一些实施方式中，结合垫是可移除的。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，结合垫是通过仅移除结合垫而从包含第一和第二构件的装置移除。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，结合垫包含调整片(tab)。调整片可以用于移除或促进移除结合垫。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，本文所描述的装置放置于容器中。在一些实施方式中，容器是囊或袋。在一些实施方式中，容器包含入口。在一些实施方式中，容器包含可移除或可移动构件或层，构件或层在移动或移除时暴露入口，允许样品施用于分析物检测膜系统。可移除或可移动构件或层的实例包括(但不限于)襟翼(flap)或调整片。襟翼或调整片例如显示于图18和图19中。在一些实施方式中，可移除层或可移动层也可以用作容器的密封(seal)。密封可以保护结合垫和/或分析物检测膜系统。
在本文所描述的装置和系统的一些实施方式中，可移除或可移动层与结合垫接触或连接。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，用于检测分析物的装置包含第一外部构件(outer member)和包含第一内部构件(inner member)和第二内部构件的第二外部构件，其中第一内部构件和第二内部构件是彼此接触的。在一些实施方式中，第一外部构件包含入口。在一些实施方式中，第一内部构件包含入口。在一些实施方式中，第一外部构件和第一内部构件包含入口。在一些实施方式中，在第一和第二内部构件之间是分析物检测膜系统。在一些实施方式中，装置包含结合垫。在一些实施方式中，装置缺乏结合垫。在一些实施方式中，分析物检测膜系统包含测试膜和吸收构件以及可选地包含结合垫。在一些实施方式中，分析物检测膜系统以下列顺序包含测试膜和吸收构件。在一些实施方式中，可选的结合垫、测试膜和吸收构件中每一者的至少一部分基本上彼此平行。在一些实施方式中，如上文所论述，分析物检测膜系统是在第一内部构件和第二内部构件之间经压缩。在一些实施方式中，装置和/或系统包含如本文所描述的粘着构件。在一些实施方式中，装置包含滤膜。在一些实施方式中，滤膜可以在分析物检测膜系统内。在一些实施方式中，滤膜的第一表面接触第一内部构件的表面并且滤膜的第二表面接触分析物检测膜系统的另一膜或构件。在一些实施方式中，滤膜的第二表面接触测试膜的表面。滤膜可以为如本文所描述的任何材料。例如，在一些实施方式中，滤膜可以为可作为结合垫、测试膜、吸收构件等的相同材料。在一些实施方式中，滤膜是玻璃纤维垫。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，当结合垫不存在于装置或系统内时，结合物是呈液体形式或呈可溶解于液体(例如，水、缓冲溶液、生理盐水等)中的材料形式供应。结合物可以在独立容器(例如，管)中供应并且由本文所描述的装置或系统提供。在结合物是在容器中供应时，结合物是在样品施用于分析物检测膜系统之前与样品一起孵育(incubate)。样品可以由任何方法和/或如本文所描述来产生。例如，一块肉可经擦洗或擦拭且产生测试样品。测试样品可以随后与结合物一起孵育或接触以产生测试样品-结合物混合物。这种混合物可以随后使用如本文所描述的装置和/或系统施应用于如本文所描述的分析物检测膜系统。在一些实施方式中，测试样品-结合物混合物直接施用于测试膜。在一些实施方式中，测试样品-结合物混合物是在接触测试膜之前经过滤或穿过另一膜。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，分析物检测膜系统在第一和第二内部构件之间经压缩。在一些实施方式中，分析物检测膜系统在由第一内部构件形成的平面和由第二内部构件形成的平面之间经压缩，其中由第一内部构件和第二内部构件形成的平面基本上彼此平行并且与分析物检测膜系统平行。在一些实施方式中，平面彼此平行并且与分析物检测膜系统平行。在一些实施方式中，平面基本上平行于第一和第二外部构件。
在本文和通篇所描述的装置的一些实施方式中，结合垫不是由第一和第二内部构件或由本文所描述的加力构件压缩。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，第一外部构件包含可移除或可移动调整片。在一些实施方式中，结合垫是连接于所述第一外部构件。在一些实施方式中，结合垫是连接于可移除或可移动调整片。在一些实施方式中，第一外部构件和第二外部构件形成容器且容器封装第一和内部第二构件。在一些实施方式中，容器是囊、袋(例如，可密封的(例如拉链、粘着等)或任何其他类型的可以包围分析物检测膜系统且压缩在第一和第二内部构件之间的容器。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，容器包含可移除或可移动调整片。可移除或可移动调整片可以为任何形状并且可以为完全地可移除的或经移除到暴露入口的程度。在一些实施方式中，调整片在移动或移除时移除或移动结合垫。结合垫可移除例如充足距离，使得可以分析(例如，目测)测试膜的结果。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，结合垫的第一表面与第一外部构件接触且结合垫的第二表面与第一内部构件接触。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，第一和第二内部构件沿平行于第二内部构件的边缘的第一内部构件的边缘彼此连接。在一些实施方式中，由弹簧、铰链等连接第一和第二内部构件。第一和第二内部构件连接的方式不受限制并且可以通过使得分析物膜系统能够在第一和第二构件之间经压缩的任何结构进行。在一些实施方式中，第一和第二内部构件是彼此相邻的并且形成例如夹具。夹具的实例显示于本申请案通篇中。夹具可以例如从金属或使第一内部构件具有柔性的任何类型的材料切割，使得分析物检测膜系统可以插入第一和第二构件之间。在一些实施方式中，第一内部构件是可移除的。
如本文所论述，装置和系统可以包含可移除或可移动层(例如，调整片)。可由手动力，例如(但不限于)剥离(pealing)或撕裂来移除或移动可移除或可移动层。也可以由机械力移除或移动可移除或可移动层。可移除或可移动层移动的方式可以为任何方式。可移除或可移动层的实例包括(但不限于)调整片、襟翼等。如本文所论述，这种襟翼或调整片可以用作密封等。
如本文所论述，结合垫可以包含分析物特异性捕获试剂。在一些实施方式中，结合垫包含多种分析物特异性捕获试剂。在一些实施方式中，结合垫包含1、2、3、4或5种分析物特异性捕获试剂。这种分析物可以为可由捕获试剂特异性识别的任何分子。分析物的实例包括聚核苷酸分子(例如DNA、RNA、siRNA、反义寡核苷酸)、肽、蛋白质、糖、多糖、碳水化合物等。抗原也可以指存在于同一蛋白质或多肽上的不同表位。分析物也可以指来自病原性或非病原性生物体的抗原。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，装置可单独地、成对或呈多种配置装外壳。外壳可以为水密的以防止渗漏且可以由多种惰性材料，例如聚合物材料制造。在一些实施方式中，入口可以具有足以容纳任何所需量的待与本发明一起使用的样品或试剂的体积。
因为装置的膜、构件或垫在一些实施方式中是化学惰性的，所以其可能必须在需要针对溶剂运输使特异性结合试剂固定所需要的任何反应位点处经活化。根据试剂的特定化学性质可能需要多种方法使试剂固定化。一般来说，当介质是硝化纤维素或混合硝化纤维素酯时，不需要特殊化学键连来使试剂固定化。多种技术可以用于其他材料和试剂，其包括用例如羰基二咪唑、戊二醛或丁二酸的材料官能化或用例如溴化氰的材料处理。其他合适反应包括用席夫碱和硼氢化物处理以还原醛、羰基和氨基。DNA、RNA和某些抗原可以针对溶剂运输通过在色谱材料上烘焙而固定化。烘焙可以在介于约60℃到约120℃范围内的温度下进行，持续在约5分钟到约12小时之间变化的时间，并且在一些实施方式中，在约80℃下进行约2小时。
本文所描述的实施方式还提供包含本文所描述的装置和缓冲液容器的系统。系统可以用于用单一信号检测多种分析物。缓冲液容器可以为可与所测试的样品混合且随后施用于装置的任何缓冲液。例如，样品可以从来源取得并且样品可与缓冲液混合。缓冲液可以为将溶解(裂解，lyse)细胞的溶解缓冲液(裂解缓冲液，lysis buffer)或维持样品的pH使得可以适当地进行分析的缓冲液。缓冲液容器可以为任何形状并且可包括在装置的外壳的外部或内部。
在一些实施方式中，提供包含样品收集器的系统。样品收集器可以为可以从来源取得样品并且允许样品被测试的任何材料。例如，样品收集器可以为拭子，例如棉拭子。在一些实施方式中，样品收集器是接种器。在一些实施方式中，外壳包含样品收集器并且样品收集器的一部分在外壳的内部。在一些实施方式中，样品收集器部分地在外壳的外部并且部分地在外壳的内部。在一些实施方式中，样品收集器完全地在外壳的外部。
还提供用单一信号检测多种分析物的试剂盒，其中试剂盒包含本文所描述的装置。试剂盒可以包括如本文所描述的装置、样品收集器、缓冲液容器、说明书、阳性对照物、阴性对照物或其任何组合。关于试剂盒，阳性对照物是已知含有可以用存在于试剂盒中的装置检测的一种或多种分析物的样品。相比之下，阴性对照物将不含可以由试剂盒检测的分析物。例如，阴性对照物在与抗抗体结合使用时将能够证实装置适当地工作。
缓冲液还可以包括于本发明中。缓冲液的实例包括(但不限于)1X PBS(10mM磷酸盐、137mM氯化钠、2.7mM氯化钾)、洗涤缓冲液(例如，10mM磷酸钠、150mM NaCl、0.5％吐温-20、0.05％叠氮化钠)、膜缓冲液(例如，10mM磷酸钠、0.1％蔗糖、0.1％BSA、0.2％PVP-40pH7.21，用0.2μm过滤器过滤)、多克隆结合物阻断缓冲液(例如，50mM硼酸盐、10％BSA，pH8.93)；多克隆结合物稀释剂(例如，50mM硼酸盐、1％BSA，pH9.09)或阻断缓冲液(例如，10mM磷酸钠、0.1％蔗糖、0.025％Silwet pH7.42；10mM磷酸钠、1％蔗糖、1％海藻糖、0.01％BSA、0.025％吐温-20；0.05％叠氮化钠、0.025％Silwet pH7.4；10mM磷酸钠、0.1％蔗糖、0.1％BSA、0.2％PVP-40 pH7.21)。缓冲液还可以为(但不限于)阻断缓冲液(例如，在去离子水中的10％BSA(pH7.4)或在去离子水中的1％BSA(pH7.4))；10mM硼酸盐、3％BSA、1％PVP40和0.25％吐温-100等。
结合垫和测试膜可以在捕获试剂存在或不存在下与本文所描述的任何缓冲液接触且在一些实施方式中，使其干燥。
作为溶解缓冲液的缓冲液的实例包括例如(但不限于)2％吐温(v/v)和0.1％Triton(v/v)；2％吐温(v/v)和0.1％SDS(w/v)；2％吐温(v/v)和0.1％BSA(w/v)；2％吐温(v/v)和1％BSA(w/v)；0.1％SDS(w/v)、1％BSA(w/v)或其任何组合。溶解缓冲液还可以为例如5％吐温/PBS；2％吐温/PBS+0.1％SDS；2％吐温/PBS+1％BSA。溶解缓冲液的其他实例包括(但不限于)5％吐温-80(v/v)；5％Triton X-100(v/v)；5％NP40(v/v)；2％吐温-80(v/v)；2％Triton X-100(v/v)；2％NP40(v/v)；1％吐温-80(v/v)；1％Triton X-100(v/v)；和1％NP40(v/v)。清洁剂(去垢剂)和缓冲液的其他组分可由适用于蛋白质的任何合适缓冲液制备并且包括(但不限于)水和磷酸盐缓冲盐水。溶解缓冲液可以在样品与本文所描述的装置接触之前用于制备样品。在一些实施方式中，不使用溶解缓冲液。当希望在方法中检测到表面蛋白或表面分析物时，在样品上不使用溶解缓冲液。因此，在一些实施方式中，样品不经受溶解或将引起细胞溶解的条件。在使用细胞时，细胞可以为桥接复合物的一部分且替换例如显示于图3中的扩增子。细胞可以是经标记或不经标记的，只要存在可以产生类似桥接复合物的捕获试剂即可。
本发明主题还提供检测多种分析物的方法，包括使样品与如本文所描述的装置和/或系统接触，其中样品接触结合垫和测试膜，其中与测试膜的阳性反应指示多种分析物的存在。在一些实施方式中，结合垫包含信号检测单元或结合于信号检测单元的捕获试剂。在一些实施方式中，测试膜包含第二分析物特异性捕获试剂。这种捕获试剂可以结合于存在于分析物上的相互作用单元。样品可以具有例如差异(差别，differentially)标记的扩增子。例如，测试膜可以包含结合于第一分析物上所存在的相互作用单元的第一捕获试剂。结合垫可以具有结合于信号检测单元的捕获试剂。在施用于装置且接触结合垫和/或测试膜之前，分析物可与桥接单元和/或信号检测单元一起孵育。当分析物、捕获试剂和信号检测单元的复合物存在时，指示阳性反应。否则，不产生信号。捕获试剂可以施用于测试膜，使得当其结合于其特异性结合伴侣时，其将指示阳性反应。可以利用系统和装置以形成本文所描述的复合物。例如，在发生产生差异标记的扩增产物的PCR反应后，产物与可以用于产生桥接复合物的抗体一起孵育。孵育混合物随后添加到装置中。样品流过含有捕获试剂的结合垫并且随后与含有另一捕获试剂的测试膜相互作用。在一些实施方式中，结合垫被移除或移动，使得可以检测到信号。本文中描述结合垫在垂直流装置中的移动。如果所有分析物均存在，那么产生桥接复合物且可以检测到单一信号。可以以任何方式施用测试膜上的特异性捕获试剂使得当检测试剂时，其可以形成线、圆圈、加号、虚线、“X”或任何其他图案。在一些实施方式中，指示装置适当地工作的对照线将跨越分析物特异性线并且当多种分析物存在且被检测时，可检测标记将形成加号。可以通过检测如本文所描述的检测试剂且通过所属领域的技术人员已知的常规方法来确定检测。类似方法可以用于例如ELISA系统中。
在一些实施方式中，样品接触装置，随后在样品已经接触装置之后，将缓冲液施用于装置。例如，包含分析物的样品可以与结合垫接触使得样品转移到结合垫。在与结合垫接触之后，另一溶液可以施用于装置以促进或启动垂直流过本文所描述的装置。
在一些实施方式中，如本文所描述，捕获试剂为抗体。在一些实施方式中，所测试的样品为溶液，但也可以为溶液或缓冲液与可以施用于装置的固体材料的混合物。溶液将随后溶解一种或多种分析物并且允许结合垫的捕获试剂与存在于样品中的适当分析物接触。在一些实施方式中，样品包含细胞溶解产物。在一些实施方式中，细胞溶解产物已通过离心或其他方式得到澄清以移除不可溶材料。
在一些实施方式中，方法包括使测试样品与样品收集器接触和使样品收集器与装置接触。测试样品可以为包含由多种分析物产生的扩增子的样品。在一些实施方式中，方法包括使样品收集器与溶液或缓冲液接触，其中溶液或缓冲液被施用于装置。在一些实施方式中，在样品与测试膜接触之前，样品与结合垫接触。在一些实施方式中，样品与结合垫和测试膜同时接触。
在一些实施方式中，方法包括使本文所描述的装置的结合垫移动，其中装置的移动暴露测试膜以供检测。在一些实施方式中，锁定构件移动结合垫。在一些实施方式中，结合垫连接于锁定构件和/或滑动按钮构件。一些实施方式中，可移除构件的移动或移除会移动或移除结合垫。在一些实施方式中，结合垫连接于可移除构件和/或粘着构件。在一些实施方式中，当可移除构件移动或移除时，粘着构件也关于其初始位置移动或从装置移除。分析物可以为本文所论述的分析物或可以使用本文所描述的方法和装置检测的任何其他分析物。在一些实施方式中，方法包括将样品施用到装置和允许样品经由垂直流流过装置。
在一些实施方式中，多种分析物的存在或不存在的检测或指示在少于60秒内出现。在一些实施方式中，多种分析物的存在或不存在的检测或指示在约30到约60秒内出现。在一些实施方式中，多种分析物的存在或不存在的检测或指示在少于2分钟内出现。在一些实施方式中，多种分析物的存在或不存在的检测或指示在约30秒内出现。
在一些实施方式中，提供用单一信号检测多种分析物的装置。在一些实施方式中，装置包含外壳。装置可以包含第一外壳构件和第二外壳构件以形成外壳。在一些实施方式中，第一和第二外壳构件为独立构件。第一和第二外壳构件可以制造为单件。在一些实施方式中，单件可以分离为两个外壳构件以允许将材料引入外壳(例如装置)中。在一些实施方式中，装置包含入口。入口可以在任一外壳构件(例如，第一或第二外壳构件)中。入口可以定向于结合垫上方使得经过入口引入装置中的样品在接触测试膜之前接触结合垫。装置经定向使得无论任何压力施加于装置，样品均将垂直向下流过膜(例如，分析物检测膜系统)的层。因此，在一些实施方式中，第二外壳构件包含进口。在一些实施方式中，第二外壳构件是在第一外壳构件的顶部。入口可为如本文所描述的任何尺寸或形状，只要尺寸和形状足以将样品引入装置中使得样品可以接触分析物检测膜系统。
装置可以包含一个或多个加力构件。加力构件可以向分析物检测膜系统施加压力。力是垂直于或基本上垂直于分析物检测膜系统的膜或层施加。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个加力构件。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个加力构件。在一些实施方式中，装置包含多个加力构件。加力构件可以与外壳构件接触。在一些实施方式中，加力构件的第一表面与外壳构件(例如，第一或第二外壳构件)接触。在一些实施方式中，加力构件的第二表面接触分析物检测膜系统。如本文所描述，加力构件可以用于压缩分析物检测膜系统以促进样品流过分析物检测膜系统。压力可以促进样品垂直地流过分析物检测膜系统。加力构件可以彼此独立地定向于装置中。加力构件还可以经操纵使得各加力构件向不同的分析物检测膜系统施加压力且施加于各分析物检测膜系统的力是不同的或在一些实施方式中是相同或基本上相同的。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，装置包含一个或多个可移动锁定构件。在一些实施方式中，可移动锁定构件接触加力构件。在一些实施方式中，可移动锁定构件接触存在于装置中的各个加力构件。例如，在包含第一和第二加力构件的装置中，可移动锁定构件与第一加力构件和第二加力构件接触。在一些实施方式中，可移动锁定构件支撑加力构件使得加力构件是在提高的位置中。可以通过比较当加力构件与可移动锁定构件接触时和当加力构件不与可移动锁定构件接触时加力构件的位置来确定提高的位置。在加力构件与可移动锁定构件之间不存在接触时，加力构件在第一位置。当可移动锁定构件与加力构件接触时，加力构件在第二位置。在一些实施方式中，加力构件的第二位置被视为提高的位置。提高的位置可以用于压缩分析物检测膜系统的层(例如，膜)。当可移动锁定构件不与加力构件接触时，在一些实施方式中，分析物检测膜系统不经压缩。
装置可以包含一个或多个可移动锁定构件。在一些实施方式中，装置包含多个或1、2、3、4或5个可移动锁定构件。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个可移动锁定构件。在一些实施方式中，装置包含的可移动锁定构件的数目等于存在于装置中的加力构件的数目。
可移动锁定构件还可以包含移动构件，例如(但不限于)把手。移动构件可以用于例如转动或移动可移动锁定构件使得锁定构件接触加力构件。在一些实施方式中，移动构件使锁定构件从加力构件脱离使得加力构件改变位置(例如，从提到的位置到降低的位置)。移动构件可以用于解除在分析物检测膜系统上施加的压力或施加所述压力。移动构件还可以用于解除或施加分析物检测膜系统的压缩。在一些实施方式中，移动构件使锁定构件围绕装置的中心轴旋转。例如，在将样品施用于装置并且样品流过至少一个分析物检测膜系统之后，移动构件被移动，其使可移动锁定构件在顺时针或逆时针方向上旋转。可移动锁定构件的旋转使加力构件降低到不同的位置。可移动锁定构件的旋转还允许解除施加于分析物检测膜系统的压力。在一些实施方式中，压力被完全地解除，或在一些实施方式中，压力仅部分地解除。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，移动可移动锁定构件的移动构件突出穿过第一或第二外壳构件。在一些实施方式中，经过移动构件出口可接近(accessible)移动构件。在一些实施方式中，移动构件在移动时围绕装置的中心轴旋转。在一些实施方式中，移动构件使可移动锁定构件横向地(例如，水平地)或垂直地移动。在一些实施方式中，可移动锁定构件在移动时横向地(例如，水平地)或垂直地移动。
移动构件和可移动锁定构件可以构建为单件或为两件。在一些实施方式中，其中可移动锁定构件和移动构件为独立的两件且构建为彼此相互作用使得一者的移动使另一者移动。例如，两件中的一件可具有“公构件”，公构件从表面突出且插入另一件的“母构件”中以形成相互作用。
由移动构件使可移动锁定构件移动也可以用于移动或移除存在于分析物检测膜系统中的结合垫。如本文所论述，可以移除结合垫以允许目测或分析测试膜。如本文所论述，可以完全地从分析物检测膜系统移除结合垫或以足以允许目测或分析测试膜的量移除结合垫。测试膜的分析可以仅基于肉眼检查，或在一些实施方式中，可以使用光学读取器来分析测试膜以确定样品中抗原的不存在或存在。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，装置包含多个或两个或两个以上分析物检测膜系统。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个分析物检测膜系统。在一些实施方式中，装置包含1、2、3、4或5个分析物检测膜系统。分析物检测膜系统可以如本文中和本申请案通篇所描述。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，装置包含一个或多个柔性或非柔性连接构件。在一些实施方式中，装置包含多个柔性或非柔性连接构件。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个柔性或非柔性连接构件。在一些实施方式中，装置包含1、2、3、4或5个柔性或非柔性连接构件。在一些实施方式中，柔性或非柔性连接构件接触可移动锁定构件。在一些实施方式中，柔性或非柔性连接构件接触可移动锁定构件和结合垫。柔性或非柔性连接构件可以用于移除或移动结合垫远离分析物检测膜系统的层(例如，膜)的剩余部分。在一些实施方式中，装置包含的柔性或非柔性连接构件的数目等于存在于装置中的分析物检测膜系统的数目。在一些实施方式中，装置包含的柔性连接构件的数目等于存在于装置中的加力构件的数目。柔性或非柔性连接构件也可以用于缩回结合垫以显露或暴露测试膜的一部分或全部。
例如，在一些实施方式中，装置包含三个分析物检测膜系统和三个加力构件。具有超过一个分析物检测膜系统的装置可以用于检测不同的分析物或不同的多个分析物组。在这类装置中，例如，装置包含第一、第二和第三连接构件。第一连接构件可以与第一分析物检测膜系统的结合垫和可移动锁定构件接触。另外，在一些实施方式中，第二连接构件可以与第二分析物检测膜系统的结合垫和可移动锁定构件接触。在一些实施方式中，第三连接构件可以与第三分析物检测膜系统的结合垫和可移动锁定构件接触。在一些实施方式中，第一、第二和第三连接构件与相同的可移动锁定构件接触。在一些实施方式中，第一、第二和第三连接构件是与不同的可移动锁定构件接触。例如，在一些实施方式中，第一和第二连接构件是与相同的可移动锁定构件接触而第三连接构件是与不同的可移动锁定构件接触。各连接构件独立地与一个或多个可移动锁定构件接触。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，可移动锁定构件包含一个或多个可移动锁定构件延伸部(extension)。在一些实施方式中，可移动锁定构件延伸部接触加力构件。在一些实施方式中，装置包含的可移动锁定构件延伸部的数目与存在于装置中的加力构件的数目相同。在一些实施方式中，可移动锁定构件延伸部部分地环绕或包围加力构件。在一些实施方式中，可移动锁定构件延伸部完全地环绕或包围加力构件。可移动锁定构件或构件延伸部的形状可以为使加力构件保持在提高的位置中的任何形状。在一些实施方式中，延伸部为部分地或完全地环绕或包围加力构件的钩或钩样形状。形状不是重要的，只要形状用作力致动器(例如，加力构件)的支撑物即可。
可移动锁定构件延伸部的数目可以与存在于本文所描述的装置中的加力构件的数目相同或不同。在一些实施方式中，装置包含多个可移动锁定构件延伸部。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个可移动锁定构件延伸部。在一些实施方式中，装置包含1、2、3、4或5个可移动锁定构件延伸部。例如，在一些实施方式中，装置包含第一、第二和第三加力构件连接构件以及第一、第二和第三可移动锁定构件延伸部。在这个非限制性实例中，例如，第一加力构件接触第一可移动锁定构件延伸部，第二加力构件接触第二可移动锁定构件延伸部，而第三加力构件接触第三可移动锁定构件延伸部。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，可移动锁定构件包含连接构件延伸部，延伸部可以为柔性或非柔性的。在一些实施方式中，连接构件延伸部接触连接构件。在一些实施方式中，连接构件延伸部包含连接构件延伸结节(节点，nodule)。结节可以为使连接构件牢固以使得连接构件牢固地维持它与可移动锁定构件的接触的任何形状或尺寸。在一些实施方式中，一个或多个可移动锁定构件延伸部从可移动锁定构件的中心径向地(例如，向外)延伸。
连接构件延伸部的数目可以与存在于本文所描述的装置中的分析物检测膜系统的数目相同或不同。在一些实施方式中，装置包含多个柔性或非柔性连接构件延伸部。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个柔性或非柔性连接构件延伸部。在一些实施方式中，装置包含1、2、3、4或5个柔性或非柔性连接构件延伸部。例如，在一些实施方式中，装置包含第一、第二和第三连接构件以及第一、第二和第三连接构件延伸部。在这个非限制性实例中，例如，第一连接构件接触第一连接构件延伸部，第二连接构件接触第二连接构件延伸部，而第三连接构件接触第三连接构件延伸部。
在一些实施方式中，本文所描述的装置包含柔性和非柔性连接构件和/或构件延伸部。在本发明通篇中，可以提及柔性或非柔性的连接构件或构件延伸部。如果一个实施方式公开柔性构件，那么应了解，除非本文相反指示，否则也公开其中构件为非柔性的另一实施方式。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，装置包含通道系统。通道系统可以用于从装置的进口运输样品(例如，流体)到存在于装置中的一个或多个分析物检测膜系统。如本文所用，“通道系统”是指整个系统而不考虑有多少个个别通道是系统的一部分。例如，通道系统可以包含两个或两个以上从入口将流体运输到分析物检测膜系统的通道，例如(但不限于)毛细管。在一些实施方式中，通道系统包含一个或多个分支(例如，臂)。一个或多个臂可将流体运输到一个或多个分析物检测膜系统。在一些实施方式中，通道系统包含1、2、3、4或5个分支。在一些实施方式中，装置包含的通道系统中的分支的数目等于存在于装置中的分析物检测膜系统的数目。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，通道系统的各分支包含从入口将流体运输到分析物检测膜系统的毛细管。在一些实施方式中，各分支包含多个毛细管。在一些实施方式中，各分支包含至少1、2、3、4或5个毛细管。在一些实施方式中，通道系统不包含毛细管或管样形成物(formation)，但由允许将样品的一部分从入口运输到分析物检测系统的结合垫的材料制成。在一些实施方式中，通道系统是多孔材料，其可以用于从入口将样品运输到分析物检测膜系统。在一些实施方式中，通道系统由与结合垫相同的材料制成。在一些实施方式中，通道系统和结合垫是相邻的一块材料。在一些实施方式中，通道系统包含Porex材料。这些多孔材料允许入口与分析物检测膜系统呈流体连通。在一些实施方式中，多孔材料包括聚乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、PVDF、乙酸乙烯乙酯(ethyl vinyl acetate)、尼龙6(Nylon 6)、热塑性聚氨基甲酸酯(TPU)、SCP等。在一些实施方式中，结合垫和通道系统是相同材料或不同材料。在一些实施方式中，通道系统不包含多孔材料和/或毛细管系统。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，通道系统接触入口。在一些实施方式中，通道系统接触分析物检测膜系统的顶部。在一些实施方式中，通道系统接触结合垫的顶部或在结合垫顶部的膜。在一些实施方式中，通道系统接触结合垫的边缘或在结合垫顶部的膜的边缘。与样品如何接触分析物检测膜系统无关，在一些实施方式中，样品垂直地流过分析物检测膜系统。因此，尽管样品可以水平地(例如，横向地)从入口流到分析物检测膜系统，但不分析样品，直到它垂直地流过分析物检测膜系统。这与其中样品横向地(例如，水平地)流过多个膜或测试层的横向流系统明显不同。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，通道系统将样品分为相等部分，其中各相等部分接触独立的分析物检测膜系统。在一些实施方式中，通道系统将样品分为一个或多个不相等部分。一个或多个不相等部分随后运输到独立的分析物检测膜系统。
例如，在包含第一和第二分析物检测膜系统的装置中，装置包含包括第一和第二分支的通道系统。在一些实施方式中，第一分支接触第一分析物检测膜系统而第二分支接触第二分析物检测膜系统。在将样品施用到装置(例如，经由进口)时，样品以相等部分经过通道系统的第一和第二分支运输到第一和第二分析物检测膜系统。在一些实施方式中，样品以不相等部分经过通道系统的第一和第二分支运输到第一和第二分析物检测膜系统。样品可以分为不相等部分，例如基于存在于各分支中的毛细管的数目。例如，第一分支可以包含比第二分支多的毛细管。更大数目的毛细管将允许更多样品经过第一分支而非第二分支运输，由此递送不相等部分到第一和第二分析物检测膜系统。
因此，通道系统的分支可以具有相同数目的毛细管或不同数目的毛细管。通道系统的各分支中的毛细管的数目独立于各分支。即，通道系统的各分支可以与另一分支具有相同数目或不同数目的毛细管。因此，在一些实施方式中，装置的通道系统可以描述为毛细管通道系统。在一些实施方式中，通道系统是封装在与本文中关于装置本身所描述的第一和第二外壳构件分开且不同的通道外壳中。在一些实施方式中，通道外壳是透明的、半透明的、不透明的或部分半透明的。
如本文所论述，可以用人眼肉眼或通过机器，例如光学读取器来分析测试膜以用单一信号确定多种分析物的存在或不存在。在一些实施方式中，分析是通过端口(portal)进行。在一些实施方式中，装置包含一个或多个端口，其尺寸足以允许目测一个或多个分析物检测膜系统的测试膜。在一些实施方式中，使用单一端口来目测存在于装置中的各测试膜。在一些实施方式中，装置不包含端口。在其中装置不包含端口的实施方式中，测试膜仍可以通过使用用于装置的透明或半透明外壳来目测。在一些实施方式中，第一和/或第二外壳是透明或半透明的。在第一和/或第二外壳是透明或半透明时，这可以允许分析物检测膜系统和它的测试膜在移动或移除结合垫时显露。在一些实施方式中，装置包含多个端口。在一些实施方式中，装置包含至少1、2、3、4或5个端口。在一些实施方式中，装置包含1、2、3、4或5个端口。在一些实施方式中，装置包含1个端口，端口为连续的且暴露存在于装置中的各分析物检测膜系统以进行肉眼检查。
如本文所论述，可以允许加力构件在至少两个位置之间移动(例如，提高的或降低的；啮合的(接合的，engaged)或未啮合的(未接合的、脱离的，disengaged))。在一些实施方式中，加力构件是降低的且由力致动器出口包围。因此，在一些实施方式中，装置包含一个或多个力致动器出口，当加力构件降低时，出口可接受加力构件。在一些实施方式中，装置包含多个力致动器出口。在一些实施方式中，力致动器出口是凹槽。在一些实施方式中，力致动器出口是圆圈或基本上圆形的。力致动器出口可以用于使力致动器(例如，加力构件)悬挂在特定位置处。力致动器出口还可以用于使力致动器保持在第二位置中。在一些实施方式中，力致动器出口的圆周大于加力构件中进入出口的部分的圆周。在一些实施方式中，力致动器出口的圆周大于加力构件的最大圆周。在一些实施方式中，力致动器出口的圆周不大于加力构件的最大圆周，其中加力构件含有具有至少两个不同圆周的区域。例如，本文中描述将具有两个不同圆周的加力构件。加力构件可以包含具有一个圆周的帽和具有不同圆周的支撑帽的支撑结构。在一些实施方式中支撑结构可以具有比帽小的圆周。在一些实施方式中，力致动器出口可以具有大于支撑结构圆周、但小于帽结构圆周的圆周。在一些实施方式中，力致动器出口的数目与存在于装置中的加力构件的数目相同或不同。
力致动器出口还可以为外壳构件中的连续凹陷(depression)，当装置中的每一个加力构件降低且不再压缩分析物检测膜系统时，出口可以接受加力构件。出口可以用于暂时地容纳加力构件，或其可以为永久的，使得加力构件无法再提高以压缩或进一步压缩分析物检测膜系统。
如本文中和本申请案通篇所论述，结合垫、可透膜、测试膜和吸收构件可以由或是由加力构件在如本文所描述且包括(但不限于)约1lbf到约100lbf的力的某些力下压缩。在一些实施方式中，其中存在多个分析物检测膜系统，施加于各膜检测系统的压力可以为不同的，或其可以为相同的。例如，在具有第一、第二和第三分析物检测膜系统的装置中，第一分析物检测膜系统可以在5lbf的力下经压缩，第二分析物检测膜系统可以在10lbf的力下经压缩，且第三分析物检测膜系统可以在25lbf的力下经压缩。在另一实例中，在一些实施方式中，第一和第二分析物检测膜系统是在相同压力下经压缩而第三分析物检测膜系统是在不同于第一和第二分析物检测膜系统的压力下经压缩。压力的差异可以用于使用不同的流动速率，不同的流动速率可以适用于不同的分析物。压力与流动速率相关。可以通过加力构件的位置和分析物检测膜系统中受压缩的层数来操纵压力。可以由所属领域的技术人员使用已知并且常规的方法来确定和测量所使用的特定力。
如本文所描述，在一些实施方式中，本发明提供包含本文所描述的任何装置、缓冲液容器和/或样品收集器的系统。在一些实施方式中，本发明提供包含本文所描述的任何装置以及阳性对照物、阴性对照物、说明书、缓冲液容器和/或样品收集器或其任何组合中的一种或多种的试剂盒。
本文所描述的方法可以与具有例如多个(两个或两个以上)分析物检测膜系统的装置一起使用。方法还可以与具有2、3、4或5个分析物检测膜系统的装置一起使用。在存在超过两个分析物检测膜系统(例如，3、4、5、6、7、8、9或10)时，修改本文中所包含的方法和描述以与分析物检测膜系统的数目一致。这些变化是根据本文中所包含的描述和所属领域的技术人员已知的任何常规变化来进行。有关基于本文中所包含的描述以及所属领域的技术人员的知识涵盖超过2个分析物膜检测系统的变化将不需要过度的实验。在如本文所描述的一些实施方式中，装置包含两个或两个以上分析物检测膜系统。在一些实施方式中，方法包括使样品(例如，包含多种分析物的样品)与装置接触并且经过通道系统将一部分样品运输到两个或两个以上分析物检测膜系统的结合垫。在一些实施方式中，方法包括检测分析物的阳性或阴性反应，其中阳性反应指示存在多种分析物。在一些实施方式中，由加力构件压缩两个或两个以上分析物检测膜系统。在一些实施方式中，样品从结合垫垂直地流到测试膜。在一些实施方式中，方法进一步包括由加力构件压缩分析物检测膜系统。在一些实施方式中，方法包括在一部分样品已接触且流过两个或两个以上检测系统的结合垫之后，使结合垫移动，由此暴露测试膜以供分析。在一些实施方式中，测试膜在端口开口(portalopening)内暴露以供检测。在一些实施方式中，两个或两个以上检测系统的结合垫是通过使可移动锁定构件移动来移动的。在一些实施方式中，使可移动锁定构件移动包括使可移动锁定构件围绕装置的中心轴旋转。在一些实施方式中，可移动锁定构件被横向地或垂直地移动。在一些实施方式中，可移动锁定构件同时或依序移动两个或两个以上检测系统的结合垫。在一些实施方式中，方法进一步包括解除两个或两个以上分析物检测系统的压缩。可以例如通过使可移动锁定构件移动来解除或减少压力。在一些实施方式中，可移动锁定构件是通过使连接于可移动锁定构件的移动构件转动或移动来移动的(例如，旋转)。
在一些实施方式中，一个或多个分析物检测膜系统在样品接触通道系统之前被压缩。在一些实施方式中，一个或多个分析物检测膜系统在样品接触一个或多个分析物检测膜系统的结合垫之前被压缩。在一些实施方式中，各分析物检测膜系统同时被压缩。在一些实施方式中，各分析物检测膜系统独立地被压缩。在一些实施方式中，存在于装置中的各分析物检测膜系统是在样品接触结合垫之前被压缩。
在一些实施方式中，方法包括使两个或两个以上分析物检测膜系统上由加力构件施加的压力解除，其中所述加力构件垂直地或水平地移动以解除所述压力。在一些实施方式中，方法包括使加力构件从第一位置移动到第二位置以解除压力。在一些实施方式中，加力构件移动到力致动器出口中或与力致动器出口接触，此时加力构件的移动解除或减少压力或解除或减少施加于分析物检测膜系统的力。在一些实施方式中，加力构件部分地或完全地退出(drop out)装置。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，本发明提供用于检测分析物的装置，其包含压力致动器、压力释放装置、分析物检测膜系统、分析物检测膜系统接受器和出口。在一些实施方式中，分析物检测膜系统接受器(receptacle)为足以接受分析物检测膜系统的尺寸和形状。在一些实施方式中，接受器为凹槽。在一些实施方式中，接受器是可以(但非必须)从装置移除的盒子。
在一些实施方式中，如本文所描述的分析物检测膜系统可以包围在或含于筒或外壳中。外壳可以包含第一和/或第二外壳构件。在一些实施方式中，其中分析物检测膜系统是容纳于外壳或筒中，接受器具有足以接受外壳或筒的尺寸和形状。在一些实施方式中，外壳或筒包含入口。入口可以用于向分析物检测膜系统施用样品。在一些实施方式中，筒或外壳包含允许样品流过和流出外壳和筒的第二出口。分析物检测膜系统可以为如本文所描述的任何分析物检测膜系统。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，装置包含压力致动器。例如，压力致动器可以为本文中所描述的加力构件。在一些实施方式中，压力致动器为空气阀或真空阀，其向分析物检测膜系统施加空气压力或经过分析物检测膜系统抽真空。在一些实施方式中，可以由压力释放装置或压力调整器来调整压力致动器。压力释放装置或压力调整器可以为例如真空释放装置。释放装置或调整器可以用于调整向分析物检测膜系统施加的压力或真空。压力或真空可以通过存在于装置中的出口或管施加于分析物检测膜系统。出口可以为存在于本文中所述的筒或外壳中的相同的出口，或其可以为不同的出口或管。可以使用出口或管使得压力或真空将以特异性施加而非使其在整个装置中扩散。
在一些实施方式中，包覆分析物膜检测的外壳(例如，筒)包括上部外壳和下部外壳。在一些实施方式中，外壳包含多个膜或垫夹持器。在一些实施方式中，外壳包含一个或多个膜或垫夹持器。在一些实施方式中，外壳包含1、2、3、4或5个膜或垫夹持器。在一些实施方式中，外壳包含至少1、2、3、4或5个膜或垫夹持器。在一些实施方式中，外壳包含入口。在一些实施方式中，外壳包含出口。在一些实施方式中，真空致动器直接地或间接地接触外壳出口。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，装置和本文所描述的任何装置均包含用于喷射外壳的喷射器。喷射器可以用于促进含有分析物检测膜系统的外壳的移除。在一些实施方式中，装置包含外壳分离器。外壳分离器可以用于促进外壳的分离。在一些实施方式中，喷射器也可以用作外壳分离器。
除了本文所描述的方法外，在一些实施方式中，检测多种分析物的方法也包括向包含压力致动器、压力调整器、分析物检测膜系统、分析物检测膜系统接受器和出口或本文所描述的任何其他装置或分析物检测膜系统的装置施用含有多种分析物的样品。在一些实施方式中，样品与分析物检测膜系统接触，其中样品垂直地流过分析物检测膜系统。在一些实施方式中，方法包括检测分析物的存在或不存在。这可以根据通过使用本文所描述的相互作用单元、捕获试剂和信号检测单元形成的桥接复合物来进行。
在使用装置来检测多种分析物的一些实施方式中，检测包括移除或移动存在于分析物检测膜系统中的结合垫足够的量以使结果可见，其中阳性结果指示多种分析物的存在。在一些实施方式中，检测包括从装置移除分析物检测膜系统和进一步移除或移动结合垫足够的量以使单一信号对分析物或多种分析物的检测可见。在一些实施方式中，分析物检测膜系统容纳于外壳或筒内，并且因此，在一些实施方式中，外壳或筒是在移动或移除结合垫之前从装置移除的。在一些实施方式中，如本文所描述的在移除或移动结合垫之前，外壳分离为第一(例如，上部)和第二(例如，下部)外壳。在一些实施方式中，外壳分离为第一和第二外壳会移除或移动结合垫以使如本文所描述的测试膜可见。在一些实施方式中，外壳被手动地和/或机械地分离。在一些实施方式中，外壳(例如，筒)被从装置喷射出。在一些实施方式中，外壳被通过喷射器从装置喷射出。在一些实施方式中，外壳被通过分离器分离。在一些实施方式中，喷射器也用作分离器。
在一些实施方式中，方法包括在分析物检测膜系统上施加压力或通过分析物检测膜系统抽真空。在一些实施方式中，方法包括释放或减少压力或真空。在一些实施方式中，通过使用压力调整器来释放或减少压力或真空。在本文所描述的方法的一些实施方式中，与分析物检测膜系统接触的样品以由压力致动器调整的流动速率流过分析物膜系统。在一些实施方式中，整个样品以恒定速率流过分析物检测膜系统。在一些实施方式中，样品以可变速率流过分析物检测膜系统。在一些实施方式中，可变速率包含在至少一段时间中一部分样品的流动速率为0。例如，可以调整所施加的压力或所抽的真空使得样品停止流过分析物检测膜系统持续一段时间。这可以称为“停留(dwell)”。如本发明文献中其余地方所描述，可以通过将不透或微透膜(slightly impermeable membrane)放置在结合垫与分析物检测膜系统的其他层之间来实现停留。然而，也可以通过调整(例如，改变)施加于分析物检测膜系统的压力来调整停留。也可以通过调整(例如，改变)通过分析物检测膜系统所抽的真空来调整停留。可以使用调整通过分析物检测膜系统的流动速率的任何方法，包括(但不限于)通过结合垫和/或测试膜的流动速率。
本文中的装置也可以是自动化的或与光学读取器或其他类型的分光计结合使用。使本文所描述的系统和装置与光学读取器或其他类型的分光计组合的优势在于可以增加装置和分析的灵敏性使得用来将样品识别为对分析物呈阳性所必须的存在于样品中的分析物较少。这种较大灵敏性可以随后用于例如确定是否食品含有病原体、人是否患有某种疾病或病况，或产品是否具有在其他情况下使用其他装置和方法在使用目前描述的方法和装置所耗费的相同时间量中无法检测的分析物。
因此，在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，本发明提供用于检测多种分析物的装置包含样品入口、分析物检测筒接受器、分析物检测筒接受器入口、可选的结合垫移除器、压力致动器、分光计(例如，光学读取器)、显示单元(displayunit)、信号处理单元。压力致动器可以为加力构件，其位置经修改以调整施用于与装置结合使用的分析物检测膜系统的压力。压力致动器还可以经由通过与装置结合使用的分析物检测膜系统抽真空来调整压力。分光计可以为可以检测信号的存在的任何分光计。信号可以为光学信号。信号可以为在选自例如红外光谱、近红外光谱、可见光谱、x射线光谱、紫外线光谱、γ射线、电磁谱等的谱中发射的信号。
分光计可以连接于信号处理单元(例如，电脑)。信号处理单元可以取得向其传送的信号并且分析信号以确定样品的存在或不存在。信号处理单元的实例是(但不限于)电脑。信号处理单元可以程序化以分析由分光计传送的信号。程序化可进行算式以分析信号，从而确定样品中分析物的存在或不存在。算式可以基于在信号处理单元的存储器中预安装的或由装置的用户输入的准则。可输入的信息的类型可以为阳性或阴性信号的截止(cut-off)、处理时间等。信号处理单元还可以用于调整向分析物检测膜系统施加的压力或通过分析物检测膜系统所抽的真空。
信号处理单元可以用于或经程序化以调整样品流过分析物检测膜系统的流动速率。可以通过调整向分析物检测膜系统施加的压力或通过分析物检测膜系统所抽的真空来调整流动速率。如上文关于本文所描述的方法所描述的，与分析物检测膜系统接触的样品以由压力致动器调整的流动速率流过分析物膜系统。压力调整器反过来可以由例如信号处理单元调整。在一些实施方式中，整个样品以恒定速率流过分析物检测膜系统，速率由信号处理单元调整。在一些实施方式中，样品以可变速率流过分析物检测膜系统，速率由信号处理单元调整。在一些实施方式中，可变速率包含在至少一段时间中一部分样品的流动速率为0，流动速率可以由信号处理单元调整。例如，可以由信号处理单元调整所施加的压力或所抽的真空使得样品停止流过分析物检测膜系统，持续一段时间。如本文所论述，这可以称为“停留”。例如，可以通过调整(例如，改变)施加于分析物检测膜系统的压力来调整停留，调整可以由信号处理单元实现或控制。也可以通过调整(例如，改变)通过分析物检测膜系统所抽的真空来调整停留，调整可以由信号处理单元实现或控制。可以使用调整流过分析物检测膜系统的流动速率，包括(但不限于)流过结合垫和/或测试膜的流动速率的任何方法，并且方法可以由信号处理单元调整或实现。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，本文中和通篇所描述的装置包含分析物检测筒接受器定位构件(positioning member)。检测筒接受器定位构件可以用于例如将分析物检测膜系统放置在适当位置中以接受样品和/或用于待分析的样品。在一些实施方式中，系统经定位以用于分光计分析。在一些实施方式中，可以由信号处理单元机动化(motorized)和/或控制检测筒接受器定位构件。在一些实施方式中，检测筒接受器定位构件未经机动化，但可由手动控制器例如(但不限于)允许修改接受器的位置的杠杆或螺杆控制。在一些实施方式中，信号处理单元通过使分析物膜检测接受器移动构件移动来控制分析物膜检测接受器的移动。在一些实施方式中，分析物检测筒接受器定位构件与分析物检测筒接受器接触。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，本文所描述的装置可以包含废物接受器。废物接受器可以在装置的内部或在外部，但仍接触装置。废物接受器可以接纳已使用的分析物检测膜系统。在一些实施方式中，如本文所描述，分析物检测膜系统是容纳于外壳(例如，筒)中。外壳可以随后被喷射到废物接受器中。喷射可以为手动的或自动化的。在一些实施方式中，喷射是由信号处理单元控制的。在一些实施方式中，信号处理单元控制喷射器，喷射器将分析物检测膜系统从分析物检测膜系统接受器喷射到废物接受器中。如本文中所描述的所有装置，在一些实施方式中，装置包含分析物检测膜系统，其可以纳入或可以不纳入外壳(例如，筒)中。
在可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的一些实施方式中，压力致动器接触分析物检测膜系统。在一些实施方式中，压力致动器在允许压力致动器移动的点处连接于装置。在一些实施方式中，压力致动器在允许压力致动器在单一接触点处枢转的枢转点处连接。
在一些实施方式中，本文所描述的装置包含显示器。在一些实施方式中，显示器是电子显示器。在一些实施方式中，信号处理单元接受来自分光计的输入并且在显示单元上显示信息。显示单元可以显示各种信息，包括(但不限于)一种或多种分析物、状态等的存在和/或不存在。
在一些实施方式中，本发明包括使用包含信号处理单元的装置或本文所描述的装置来检测多种分析物。在一些实施方式中，方法包括使装置与样品接触，样品接触装置内的分析物检测膜系统。样品随后流过分析物检测膜系统。在一些实施方式中，方法包括检测分析物的存在或不存在。在一些实施方式中，检测包括光学读取器检测来自分析物膜系统的光学信号，光学读取器将光学信号传达到信号处理单元，信号处理单元分析光学信号以确定分析物的存在或不存在；和信号处理单元在显示单元上显示结果。所显示的结果可以为视觉的和/或听觉的。所分析的信号可以为在选自红外光谱、近红外光谱、可见光谱、x射线光谱、紫外线光谱、γ射线或电磁谱的谱中的信号。在一些实施方式中，信号是在近红外光谱中。在一些实施方式中，方法包括将分析物检测膜系统喷射到废物接受器中。在一些实施方式中，信号处理单元是电脑。
参考附图，在一些实施方式中，图1-图36描绘装置的实施方式、代表性装置的组件以及可以用于方法中和/或与本文所描述的其他装置和/或系统结合或不结合使用的具体化装置的各种视图。
本文中描述的这些装置是非限制性的并且任何其他装置(包括其他垂直流装置)均可用于根据本文所描述的方法使用利用多种标记和捕获试剂所产生的桥接复合物来检测多种分析物。
图8描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置，包括第一外壳构件(10)、缓冲液容器(15)、第二外壳构件(20)、用于滑动按钮的凹槽(25)、滑动按钮(30)、进口(35)、环箍(40)和测试膜(45)。图8描绘包含两种捕获试剂的测试膜(45)。第一(10)和第二(20)外壳构件也可以分别称为下部和上部外壳构件。在图1中，样品将通过进口(35)施用并且可以使其垂直地流到测试膜(45)。在图8中，凹槽(25)允许滑动按钮移动，滑动按钮在连接于锁定构件时移动锁定构件，并且在一些实施方式中可以移动结合垫并且改变加力构件的位置。
图9描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置，包括第一外壳构件(10)、第二外壳构件(20)、用于滑动按钮的凹槽(25)、滑动按钮(30)、进口(35)、环箍(40)、测试膜(45)、结合垫(50)、多个吸收构件(例如，垫)(55)、连接构件(60)、锁定构件(65)和加力构件(70)。图9描绘基本上彼此平行布置的结合垫(50)、测试膜(45)和吸收构件(55)。加力构件(70)当与吸收构件接触时将施加基本上垂直于结合垫的压力。如图9中可见，通过进口(35)与装置接触的样品将垂直地经过结合垫(50)流到测试膜(45)。虽然图9中未明确显示，但在一些实施方式中，可透膜也基本上平行于结合垫(50)和测试膜(45)，其中可透膜的第一表面接触结合垫(50)的表面，可透膜的第二表面接触测试膜(45)的表面。
图10描绘结合垫(50)、可透膜(75)、测试膜(45)和多个吸收构件(55)，其可以用于用单一信号检测多种分析物。图10描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的组件，其基本上彼此平行。图10描绘包含开口的可透膜(75)。这个开口可以被用于允许测试膜的结果的可视化和检测。
图11描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置，包括第一外壳构件(10)、缓冲液容器(15)、第二外壳构件(20)、滑动按钮(30)、测试膜(45)、结合垫(50)、可透膜(75)、多个吸收构件(例如，垫)(55)、连接构件(60)、锁定构件(65)和加力构件(70)。图11还描绘包含轴(72)和头(71)的加力构件(70)，其中头(71)比轴(72)宽。
图12描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的局部视图，包括第一外壳构件(10)、锁定构件(65)、滑动按钮(30)和加力构件(70)。图12描绘与加力构件(70)接触的锁定构件(65)使得加力构件(70)在提高的方法中。图12还描绘锁定构件(65)和滑动按钮(30)远离加力构件(70)的移动，允许加力构件改变位置。在一些实施方式中，位置的改变是加力构件降低。
图13描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的侧面剖视图，包括第一外壳构件(10)、第二外壳构件(20)、滑动按钮(30)、锁定构件(65)、环箍(40)、O型环(41)、加力构件(70)和用于加力构件的支撑物(73)。用于轴的支撑物可以为例如第一外壳构件(10)的一部分并且仅出于实例目的有差别地画上阴影。图13描绘与锁定构件(65)接触的按钮(30)，其接触方式使得按钮(30)的移动将移动锁定构件(65)。锁定构件(65)的移动将从加力构件(70)带走支撑物，这将允许加力构件(70)改变位置。图13还描绘加力构件的轴(72)和头(71)。头(71)产生唇状物，其中锁定构件(65)可以在加力构件(70)下方滑动并且支撑加力构件(70)。
图14描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的局部视图，包括第一外壳构件(10)、第二外壳构件(20)、进口(35)、测试膜(45)、结合垫(50)、多个吸收构件(55)、连接构件(60)、锁定构件(65)和加力构件(70)。图8描绘连接于结合垫(50)和锁定构件(65)的连接构件(60)。图14还描绘抵靠第二外壳构件(20)以及进口(35)的周界经压缩的结合垫。图14描绘通过接触多个吸收构件(55)来施加压力的加力构件的头(71)。在图14中，样品可通过进口(35)施用于装置，使得样品接触结合垫(50)并且由于压力，样品通过垂直流接触测试膜(45)。
图15A描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的局部视图，包括第一外壳构件(10)、第二外壳构件(20)、进口(35)、测试膜(45)、结合垫(50)、多个吸收构件(55)、连接构件(60)、锁定构件(65)和加力构件(70)。图8描绘锁定构件(65)的移动，锁定构件(65)连接于连接构件(60)。连接于结合垫(50)的连接构件(60)的移动使结合垫移动。图15A描绘改变位置的测试加力构件(70)和测试膜(45)的压力和/或压缩的减轻或消除。图15C和图15D也描绘结合垫(50)远离进口(35)的移动，显露测试膜(45)用于可视化和/或检测。
图16描绘连接于结合垫(50)的连接构件(60)。图16描绘结合垫(50)中作为连接构件(60)所连接的位置的凹口(51)。连接构件也可以通过其他方式如通过粘着剂、卡钉和其他连接形式连接。
图17描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的局部视图，包括第二外壳构件(20)、多个垫或膜(80)(其中多个垫包含测试膜、可透膜和一个或多个吸收构件)以及可以保持多个垫或膜(80)的保持构件(85)。图10描绘当移动结合垫时多个垫保留在适当位置中的结构。任何方式或其他结构均可用于使多个垫保持在适当位置中。
图18描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的代表性装置，包括进一步包含外壳入口(1006)的第一外壳构件(1002)和第二外壳构件(1004)。在一些实施方式中，第一和第二外壳构件可以构建为单一单元。外壳入口允许将样品引入外壳内部的组件中。外壳入口可以具有足以处置添加到装置中的溶液的适量体积的尺寸。在一些实施方式中，由外壳入口产生的开口的尺寸足以处置约0.1到约3ml、约0.1到约2.5ml、约0.5到约2.0ml、约0.1到约1.0ml、约0.5到约1.5ml、约0.5到约1.0ml和约1.0到约2.0ml。在一些实施方式中，装置的尺寸使得任何尺寸(例如，宽度、深度或高度)均小于或等于约5.08cm(2.000英寸)。在一些实施方式中，装置的高度是小于约0.635cm(0.250英寸)、小于约0.254cm(0.100英寸)、小于约0.191cm(0.075英寸)、小于约0.165cm(0.065英寸)、小于约0.152cm(0.06英寸)或小于约0.140cm(0.055英寸)。在一些实施方式中，装置的高度为约0.127cm(0.050英寸)。在一些实施方式中，装置的宽度或深度是小于或等于约5.08cm(2.000英寸)、约4.83cm(1.900英寸)、约4.699cm(1.850英寸)、约4.572cm(1.800英寸)、约4.445cm(1.750英寸)、约4.191cm(1.650英寸)、约4.064cm(1.600英寸)或约3.81cm(1.500英寸)。在一些实施方式中，装置的高度为约0.127cm(0.050英寸)，深度为约4.445cm(1.750英寸)，且宽度为约3.81cm(1.500英寸)。
在一些实施方式中，可以用于用单一信号检测多种分析物的装置包括多个组件，组件包含以下一种或多种：可移除构件、结合垫、粘着构件、测试膜、吸收构件、加力构件、支撑构件或其任何组合。
在一些实施方式中，可以用于用单一信号检测多种分析物的装置包括加力构件、可移除构件、结合垫、测试膜、粘着构件和/或吸收构件。在一些实施方式中，装置包括分析物检测膜系统。在一些实施方式中，分析物检测膜系统包含结合垫、测试膜和吸收构件。在一些实施方式中，分析物检测膜系统包含另外可透膜，但装置也可以不含可透膜。在一些实施方式中，分析物检测膜系统以下列顺序包括：结合垫、粘着构件、测试膜和吸收构件。
图19描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的代表性装置的内部的分解图，装置包含可移除构件(1005)、结合垫(1050)、粘着构件(1010)、测试膜(1030)、吸收构件(1040)和支撑构件(1020)，其中支撑构件进一步包含可选的支撑构件入口(1025)。可移除构件和粘着构件也可以分别包含可选的可移除构件入口(1008)和粘着构件入口(1012)。组件可以在例如图18的装置内。
图20描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的另一代表性装置的代表性组件，包括粘着构件(1010)、支撑构件(1020)、测试膜(1030)和吸收构件(1040)。如图20中可见，样品可流过粘着构件(1010)并接触测试膜(1030)。
图21描绘粘着构件(1010)、支撑构件(1020)、测试膜(1030)和吸收构件(1040)。图21描绘组件基本上彼此平行。图21进一步描绘包含支撑构件入口(1025)的支撑构件(1020)。这个入口可以用于允许样品垂直地流过装置。
图22部分地描绘结合垫(1050)、测试膜(1030)和吸收构件(1040)。图22还描绘接触和/或连接于可移除构件(1005)的结合垫。图22还描绘正远离可以用于用单一信号检测多种分析物的装置移除或移动的可移除构件，它也使结合垫远离装置移除或移动。结合垫的移动允许测试膜被可视化，这促进用单一信号分析和检测分析物，包括多种分析物。
图23描绘加力构件(例如，夹具)的实例。代表性加力构件可以呈多种形状、尺寸和配置，但各构件均在放置于加力构件中或加力构件上的组件上施加压力。各加力构件还可以包含开口(+)，分析物样品向其中施用。图23描绘具有第一构件(110)和第二构件(100)的加力构件的非限制性实例。
图24A、图24B、图24C和图24D部分地描绘包含第一构件(110)、b)第二构件(100)、入口(115)和分析物检测膜系统(120)的加力构件。图24A和图24B还部分地描绘结合垫(1050)。结合垫在图24C和图24D中不可见。图24C和图24D还部分地描绘作为分析物检测膜系统的一部分的测试膜(1030)。图24D还部分地描绘由色带可视化已与对照物反应的测试膜(1030)。
图25部分地描绘包含可移除或可移动调整片(200)、入口(210)、结合垫(1050)和结合垫(1050)的调整片的容器。结合垫的调整片(255)可以用于从装置移除结合垫(1050)以暴露测试膜。例如，用户可以抽出结合垫的调整片(255)以从容器移除结合垫(1050)。未目测到的是在如本文所描述的第一构件(110)和第二构件(100)之间压缩的分析物检测膜系统。
图26部分地描绘第一外部构件(310)、第二外部构件(320)、可移动或可移除调整片(330)和结合垫(1050)。可移动或可移除调整片(330)包含入口，入口暴露结合垫(1050)，使得样品可以施用于结合垫。图26不显示压缩分析物检测膜系统(120)的第一内部构件(110)和第二内部构件(100)。可移除或可移动调整片(330)在移动或移除时会移动或移除结合垫(1050)，这允许目测和分析测试膜。
在可移除构件内的可移除构件入口允许将样品引入结合垫上。入口可以具有足以处置添加到装置中的溶液的适量体积的尺寸。在一些实施方式中，入口的尺寸大到足以处置约0.1到约3ml、约0.1到约2.5ml、约0.5到约2.0ml、约0.1到约1.0ml、约0.5到约1.5ml、约0.5到约1.0ml和约1.0到约2.0ml。可移除构件也可以经构建使得可移除构件的一部分对溶液是可透过的(即，由可移除构件入口限定的区域)而另一区域为不可透过的。可透区域可以用作入口，因为其将允许溶液通过可移除构件并且接触结合垫。可移除构件入口可以具有多种形状和尺寸中的任一种。在一些实施方式中，第一外壳构件用作可移除构件。在其他实施方式中，第一外壳构件和可移除构件为独立组件。在其中第一外壳构件和可移除构件为独立组件的实施方式中，外壳入口和可移除构件入口的至少一部分重叠使得溶液可以进入两个入口。
在一些实施方式中，可移除构件接触结合垫的第一表面。可移除构件也可以连接于结合垫。可移除构件可以通过任何方式连接于结合垫使得当可移除构件从装置移除或其位置改变时，结合垫也被移除或结合垫的位置也改变。可移除构件可以由例如(但不限于)粘着剂连接于结合垫。粘着剂包括(但不限于)胶、胶带或将允许可移除构件和结合垫彼此连接的其他物质。
在一些实施方式中，可移除构件直接地接触结合垫或间接地通过另一层接触结合垫。在一些实施方式中样品可以直接地通过可移除构件中的开口施用于结合垫。
图27A部分地描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的俯视图，包括多个端口(2036)、入口(2035)和外壳构件(2010)。图27A还部分地描绘通过端口(2301)可见的通道系统(2300)的一部分。图27B部分地描绘装置的放大区域，具体说来是端口(2036)。在端口中，也可见多个毛细管(2301)。
图28描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的底视图，装置包含多个力致动器出口(2200)、外壳构件(2020)和移动构件(2100)。
图29部分地描绘第一外壳构件(2010)、第二外壳构件(2020)、多个端口(2036)、入口(2035)、通道系统(2300)、多个毛细管(2301)、结合垫(2050)、多个测试膜(2045)和可移动锁定构件(2065)。图29中描绘的通道系统被描绘为由3个分支组成，分支数等于存在于装置中的分析物检测膜系统的数目。
图30部分地描绘第二外壳构件(2020)、通道系统(2300)、多个毛细管(2301)、结合垫(2050)、测试膜(2045)和吸收构件(2055)以及可移动锁定构件(2065)、柔性连接构件(2060)、分析物检测膜系统(2400)。
图31A部分地描绘多个力致动器出口(2200)、通道系统(2300)、多个毛细管(2301)、多个加力构件(2070)、可移动锁定构件(2065)、多个可移动锁定构件延伸部(2068)、结合垫(2050)、多个柔性或非柔性连接构件延伸部(2066)和结节(2067)、测试膜(2045)和吸收构件(2055)。
图31B部分地描绘图24A中所示的装置的类似部分，然而，可移动锁定构件(2065)已围绕中心轴旋转，并且可移动锁定构件延伸部(2068)不再支撑加力构件(2070)，并且加力构件已退回或降到力致动器出口(2200)中。
图32部分地描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的分解图，装置包含通道系统(2300)、结合垫(2050)、测试膜(2045)、多个加力构件(2070)、可以转动所描绘的可移动锁定构件(2065)的可移动构件(2100)。图32还部分地描绘可移动锁定构件延伸部(2068)、多个柔性或非柔性连接构件延伸部(2066)和结节(2067)、柔性连接构件(2060)、出口(2105)、第二外壳构件(2020)、多个力致动器出口(2200)以及分析物检测膜系统的一部分(2047)。包含分析物检测膜系统的部分(2047)的区域已被放大并且部分地描绘加力构件(2070)、测试膜(2045)、吸收构件(2055)以及可移动锁定构件延伸部(2068)的一部分。
图33部分地描绘外壳(2020)、毛细通道(2301)和通道系统(2300)。图33的一部分已被放大以描绘结合垫(2050)、吸收构件(2055)和多个毛细管(2301)。
图34部分地描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的剖视图，包括多个端口(2036)、入口(2035)、可移动锁定构件(2065)、可移动该可移动锁定构件的可移动构件(2100)、加力构件(2700)、力致动器出口(2200)、多个吸收构件(2055)、测试膜(2045)和可移动锁定构件延伸部(2068)。图34还描绘分析物检测膜系统的一部分的分解图，该部分包含结合垫(2050)、可透膜(2056)和吸收构件(2055)。
图35部分地描绘可移动锁定构件(2065)和可移动锁定构件延伸部(2068)的非限制性实例。
图36部分地描绘包含多个端口(2036)和入口(2035)的外壳的外视图和内视图。
图37部分地描绘包含多个力致动器出口(2200)和可移动构件出口(2105)的外壳的内视图和外视图。
图38部分地描绘包含可以包围分析物检测膜系统的筒(3100)、力致动器(3200)和力释放装置(3000)和出口(3400)以及分析物检测膜系统接受器(3300)的装置。
图39部分地描绘在图31中描绘的出口(3400)、接受器(3300)和筒(3100)的放大图。
图40部分地描绘包含第一外壳构件(3110)、入口(3135)、结合垫(3350)、第二外壳构件(3120)和多个膜夹持器(3122)的筒(3100)的分解图。
图41部分地描绘用于检测分析物的装置，装置包含入口(3335)、膜系统接受器(3300)和显示器(3500)。
图42部分地描绘在图41中描绘的可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的内部。装置包括包含分析物检测膜系统的筒(3100)、膜系统接受器(3300)、力致动器(3200)、分光计(例如，光学读取器或光检测器(3600)、可选的结合垫移除器(3201)、可选的废物接受器(3606)、马达和膜系统接受器推进器(3605/3607)。
图43显示在图41和图42中描绘的可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的内部，装置处于与图35中描绘的相同组件一起使用的各种阶段。图43A描绘筒正插入接受器中。图43B描绘接受器夹持正在入口下方移动以用于样品施用的筒，并且图43C描绘样品正由分光计分析。
图44描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的分解图，装置包含第一外壳构件(10)、第二外壳构件(20)、用于滑动按钮的凹槽(25)、滑动按钮(30)、进口(35)、测试膜(45)、结合垫(50)、另外的膜(51)、粘着剂(52)、多个吸收构件(例如，垫)(55)、连接构件(60)、锁定构件(65)和加力构件(70)。可以如本文所描述和/或所示组装组件以制造可以使用垂直流检测分析物的装置。
图45描绘可以用于用单一信号检测多种分析物的装置的部分分解图，包括第一外壳构件(10)、第二外壳构件(20)、用于滑动按钮的凹槽(25)、滑动按钮(30)、进口(35)、未见的测试膜、结合垫(50)、多个吸收构件(例如，垫)(未显示)、连接构件(60)、锁定构件(未显示)和加力构件(未显示)。也可以根据本文所描述的方法制造和使用这种装置的其他变化形式。
现参考以下实施例描述实施方式。这些实施例是仅为了说明目的而提供且实施方式而绝不应视为限于这些实施例，而是应视为涵盖由于本文提供的教导而变得明显的任何和所有变化形式。所属领域的技术人员应容易地识别多种非关键性参数，参数可经改变或修改以产生基本上类似的结果。
实施例
实施例1：
用志贺毒素基因作为模板来进行两个独立的PCR反应，反应产生由以下标记的扩增子：1)地高辛和生物素，和2)FITC和生物素。扩增子随后在链霉亲和素(桥接单元)存在或不存在下混合在一起，或分别地进入快速流通分析中：样品A)仅扩增子1，样品B)仅扩增子2，或样品C)在具有和不具有链霉亲和素下扩增子1+扩增子2。流通分析由涂布有抗地高辛(第一捕获试剂)的固体支撑物(硝化纤维素膜)和涂布有抗FITC抗体的胶体金粒子组成。在这个背景下，仅具有链霉亲和素的样品C产生单一阳性测试信号，而样品A和样品B或不具有链霉亲和素的样品C产生阴性测试。
实施例2：使用扩增子桥接来检测多种分析物。
材料：
PCR试剂：OneTaq Hot Start聚合酶(新英格兰生物实验室(New EnglandBiolabs))；5X标准反应缓冲液；半抗原化MHALT1.RV(集成DNA技术公司(Integrated DNATechnologies)(IDT))；半抗原化MgC.CH1AS(IDT)；INV018.7E4 VH基因模板(ZG)；dNTP；dH2O。
在标准温度循环器中以3-4℃/s的匀变速率进行PCR。通过垂直流分析运行PCR反应，分析例如本文所描述的分析，包括Veriflow Cassette(隐形哨兵公司(InvisibleSentinel))。
根据标准方案产生扩增子。产生用荧光素异硫氰酸酯(FITC)和四甲基若丹明(TAMRA)双重标记的一种扩增子，并且产生用TAMRA和地高辛(DIG)双重标记的另一种扩增子。可以可选地沉淀来自PCR反应的DNA扩增子。如果进行沉淀，那么可以由EtOH或异丙醇+1/10v乙酸钠3M(pH5.2)沉淀来完成。为了促进沉淀，也可以添加1uL tRNA糖原。使沉淀在-20℃下进行持续最少2小时，或在-80℃下进行持续15分钟。沉淀的DNA在最高速度下离心约15分钟。弃去上清液，使DNA沉淀空气干燥15分钟。可以用20uL冰冷的70％EtOH进行可选的二次冲洗，随后离心且干燥。用TE(Tris-HCl/EDTA)使悬浮DNA沉淀并且使DNA在室温下再水合约24小时。所产生的扩增子为通用序列并且对任何特定细菌均不具特异性。
扩增子与识别FITC的生物素化的抗体和识别若丹明(即，TAMRA标记)的抗体混合。可以孵育混合物较长时间段，例如5、10、15、20、25或30分钟，但较长时间并非必需的。所孵育的混合物可以添加到Veriflow Cassette(垂直流装置)中，其包含含有未标记的抗地高辛抗体的测试膜和含有链霉亲和素-金结合物的结合垫。装置检测桥接复合物的存在，桥接复合物含有具有单一信号(胶体金)的两种扩增子。进行适当对照且当产生桥接复合物所必需的所有组分均存在时仅检测到胶体金。不希望受任何特定理论束缚，图3说明可以用不同组分形成的复合物。当形成桥接复合物时(参见图3)，检测到胶体金信号。也可以使用其他类型的可检测信号。如果扩增子中的一种不存在，那么检测不到信号。在样品进入装置中之后，从结合垫释放链霉亲和素-胶体金复合物并且移除结合垫。如何产生和使用垂直流装置的实施例可以发现于本文中和美国专利US8,012,770、US 8,183,059和美国专利申请案US13/500,997、US 13/360,528、US 13/445,233中，各案以引用的方式全文并入本文中。这些结果证实，可以用单一可检测信号(在这个实施例中为胶体金)特异性地检测两种分析物。信号的检测不取决于进行PCR反应步骤之后扩增子的沉淀。
本文所引用的每篇专利、专利申请案、公开案的公开内容和登录号均以引用的方式全文并入本文中。
虽然本发明已参考特定实施方式加以公开，但显而易见的是，本发明的其他实施方式和变化形式可以由所属领域的技术人员在不悖离本发明的真实精神和范畴的情况下来设计。随附权利要求书意在被解释为包括所有实施方式和等价变化形式。

Claims (51)

1.一种用于非诊断目的的在测试样品中并行地检测所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的方法，包括：
使固体支撑物与包含所关注的第一分析物和所关注的第二分析物的所述测试样品、包含第二捕获试剂的桥接单元和包含第三捕获试剂的信号检测单元接触，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物和所述所关注的第二分析物不同；和
使用单一信号检测所述信号检测单元的信号的存在或不存在，所述信号检测单元的信号并行地指示所述所关注的第一分析物和所关注的第二分析物在所述测试样品中的存在或不存在，其中，仅当所述测试样品中的所述所关注的第一分析物、所述测试样品中的所述所关注的第二分析物和所述桥接单元形成桥接复合物，并且所述信号检测单元结合于所述桥接复合物时，所述单一信号才被检测到，
其中：
第一捕获试剂固定于所述固体支撑物；
所述测试样品中的所述所关注的第一分析物包含结合于所述第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于所述桥接单元的第二相互作用单元；并且
所述测试样品中的所述所关注的第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，其中，所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元结合所述桥接单元；
其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物的所述第一和第二相互作用单元，以及所述测试样品中的所述所关注的第二分析物的所述第一和第二相互作用单元，各自独立地为异源相互作用单元，所述异源相互作用单元为所对应的分析物的非天然所有的相互作用单元；
其中，所述信号检测单元结合于：i)所述测试样品中的所述所关注的第二分析物、ii)所述桥接复合物的组分或iii)仅当所述桥接复合物含有所述测试样品中的所述第一分析物和所述第二分析物时存在的所述桥接复合物的组分。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述信号检测单元结合于所述第二分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物的所述第二相互作用单元和所述测试样品中的所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元包含相同的异源相互作用单元。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物的所述第二相互作用单元和所述测试样品中的所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元包含不同的异源相互作用单元。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物的所述第一相互作用单元和所述测试样品中的所述所关注的第二分析物的所述第二相互作用单元包含相同的异源相互作用单元。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述测试样品中的所述所关注的第一分析物的所述第一相互作用单元和所述测试样品中的所述所关注的第二分析物的所述第二相互作用单元包含不同的异源相互作用单元。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物和所述测试样品中的所述所关注的第二分析物独立地为肽、糖、抗原、核酸分子或它们的任何组合。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述核酸分子为扩增产物。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物和所述所关注的第二分析物为扩增产物。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述所关注的第一分析物的所述第一相互作用单元为半抗原并且所述第一捕获试剂为结合所述半抗原的分子。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物的所述第二相互作用单元和所述测试样品中的所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元为生物素并且所述第二捕获试剂为结合生物素的化合物。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述第二捕获试剂为链霉亲和素。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述所关注的第二分析物的所述第二相互作用单元为半抗原并且所述第三捕获试剂为结合所述半抗原的分子。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述第三捕获试剂为结合于所述半抗原的抗体。
15.根据权利要求1所述的方法，其中，所述信号检测单元包含放射性标签、胶体金、荧光标签、纳米粒子、量子点、磁性粒子或酶。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述纳米粒子为放射性纳米粒子。
17.一种用于非诊断目的的在测试样品中用单一信号并行地检测所关注的第一分析物、所关注的第二分析物和所关注的第三分析物的方法，包括：
使包含所述所关注的所述第一分析物、所述所关注的第二分析物和所述所关注的第三分析物的所述测试样品与固体支撑物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元接触；和
检测所述信号检测单元的信号的存在，所述信号检测单元的信号用单一信号并行地指示所述所关注的第一分析物、所述所关注第二分析物和所述所关注第三分析物的存在，其中，仅当所述所关注的第一分析物、所述所关注的第二分析物、所述所关注的第三分析物、所述第一桥接单元和所述第二桥接单元形成桥接复合物，并且所述信号检测单元结合于所述桥接复合物时，所述单一信号才被检测到，
其中：
所述所关注的第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
所述所关注的第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
所述所关注的第三分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
所述固体支撑物包含结合于所述所关注的第一分析物的所述第一相互作用单元的第一捕获试剂；
所述第一桥接单元结合于所述所关注的第一分析物的所述第二相互作用单元和所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元；
所述第二桥接单元结合于所述所关注的第二分析物的所述第二相互作用单元和所述所关注的第三分析物的所述第一相互作用单元；且
所述信号检测单元结合于所述所关注的第三分析物的第二相互作用单元；
其中，所述所关注的第一分析物的所述第一和第二相互作用单元，所述所关注的第二分析物的所述第一和第二相互作用单元，以及所述所关注的第三分析物的所述第一和第二相互作用单元各自独立地为异源相互作用单元，所述异源相互作用单元为所对应的分析物的非天然所有的相互作用单元。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述第一桥接单元为多价捕获试剂。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述多价捕获试剂为免疫球蛋白。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述免疫球蛋白为IgM。
21.根据权利要求17所述的方法，其中，所述第二桥接单元结合于生物素。
22.根据权利要求17所述的方法，其中，所述所关注的第一分析物的所述第一相互作用单元为半抗原。
23.根据权利要求17所述的方法，其中，所述所关注的第一分析物的所述第二相互作用单元为肽。
24.根据权利要求17所述的方法，其中，所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元为肽。
25.根据权利要求17所述的方法，其中，所述所关注的第二分析物的所述第二相互作用单元为生物素。
26.根据权利要求17所述的方法，其中，所述所关注的第三分析物的所述第一相互作用单元为生物素。
27.根据权利要求20所述的方法，其中，所述所关注的第三分析物的所述第二相互作用单元为半抗原。
28.一种复合物，包含固体支撑物、测试样品中的所关注的第一分析物和所关注的第二分析物、桥接单元和信号检测单元，其中，
所述所关注的第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
所述所关注的第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物的所述第一和第二相互作用单元，以及所述测试样品中的所述所关注的第二分析物的所述第一和第二相互作用单元，各自独立地为异源相互作用单元，所述异源相互作用单元为所对应的分析物的非天然所有的相互作用单元；
所述测试样品中的所述所关注的第一分析物、所述测试样品中的所述所关注的第二分析物、所述桥接单元形成桥接复合物，并且所述信号检测单元结合于所述桥接复合物。
29.根据权利要求28所述的复合物，其中：
所述固体支撑物包含第一捕获试剂，
所述所关注的第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，
所述所关注的第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元，
所述桥接单元包含一种或多种独立地结合于所述所关注的第一分析物的所述第二相互作用单元和所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元的捕获试剂；并且
所述信号检测单元包含结合于所述所关注的第二分析物的所述第二相互作用单元的捕获试剂。
30.一种复合物，包含固体支撑物、测试样品中的所关注的第一分析物、所述测试样品中的所关注的第二分析物、所述测试样品中的所关注的第三分析物、第一桥接单元、第二桥接单元和信号检测单元，其中，所述测试样品中的所述所关注的第一分析物、所述测试样品中的所述所关注的第二分析物、所述测试样品中的所述所关注的第三分析物、所述第一桥接单元、所述第二桥接单元形成桥接复合物，并且所述信号检测单元结合于所述桥接复合物；其中：
所述所关注的第一分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
所述所关注的第二分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
所述所关注的第三分析物包含第一相互作用单元和第二相互作用单元；
其中，所述所关注的第一分析物的所述第一和第二相互作用单元，所述所关注的第二分析物的所述第一和第二相互作用单元，以及所述所关注的第三分析物的所述第一和第二相互作用单元各自独立地为异源相互作用单元，所述异源相互作用单元为所对应的分析物的非天然所有的相互作用单元。
31.根据权利要求30所述的复合物，其中：
所述固体支撑物结合于所述第一分析物；
所述第一桥接单元结合于所述所关注的第一分析物和所述所关注的第二分析物；
所述第二桥接单元结合于所述所关注的第二分析物和所述所关注的第三分析物；且
所述信号检测单元结合于所述所关注的第三分析物。
32.根据权利要求30所述的复合物，其中
所述固体支撑物包含第一捕获试剂；
所述第一桥接单元包含一种或多种独立地结合于所述所关注的第一分析物的所述第二相互作用单元和所述所关注的第二分析物的所述第一相互作用单元的捕获试剂；
所述第二桥接单元包含一种或多种独立地结合于所述所关注的第二分析物的所述第二相互作用单元和所述所关注的第三分析物的所述第一相互作用单元的捕获试剂；并且
所述信号检测单元包含结合于所述所关注的第三分析物的所述第二相互作用单元的捕获试剂。
33.一种用于非诊断目的的用单一信号并行地检测多种分析物的方法，所述方法包括：
i)使用于用单一信号在测试样品中检测多种分析物的装置与一个或多个包含多种分析物的样品接触，
其中所述装置包括：
外壳，包含：
与结合垫呈流体接触的进口；
加力构件；
接触所述加力构件的可滑动锁定构件；
接触所述加力构件的连接构件；
接触所述连接构件的滑动按钮；
和包含所述结合垫、测试膜和吸收构件的检测膜系统，
所述结合垫、测试膜和吸收构件的至少一部分彼此平行，
所述加力构件接触所述检测膜系统并且能够施加垂直于所述检测膜系统的压力，
所述滑动按钮移动所述可滑动锁定构件，
所述结合垫包括包含第三捕获试剂的信号检测单元；
所述测试膜包含固定于所述测试膜的第一捕获试剂；
其中所述一个或多个样品包含所关注的第一分析物、所关注的第二分析物和包含第二捕获试剂的桥接单元，
其中所述所关注的第一分析物包含结合于所述第一捕获试剂的第一相互作用单元和结合于所述桥接单元的第二相互作用单元；并且所述所关注的第二分析物包含结合于所述桥接单元的第一相互作用单元和第二相互作用单元；
其中所述包含所述第三捕获试剂的信号检测单元结合于所述第二分析物、所述第一分析物和所述第二分析物复合物的组分、或仅当所述复合物含有所述第一分析物和所述第二分析物时存在的所述桥接单元的组分；和
ii)使用单一信号检测所述信号检测单元的信号的存在或不存在，所述信号检测单元的信号并行地指示所述所关注的第一分析物和所述所关注的第二分析物的存在或不存在，其中，仅当所述所关注的第一分析物、所述所关注的第二分析物和所述桥接单元形成桥接复合物，并且所述信号检测单元结合于所述桥接复合物时，所述单一信号才被检测到。
34.根据权利要求33所述的方法，其中，所述包含所述第三捕获试剂的信号检测单元结合于所述第二分析物的第一相互作用单元或第二相互作用单元。
35.根据权利要求33所述的方法，其中，检测包括在所述一个或多个样品的一部分已经接触并且流过所述结合垫之后使所述结合垫移动，由此使所述测试膜的至少一部分暴露以用于检测所述信号检测单元，从而用单一信号指示所述多种分析物的存在或不存在。
36.根据权利要求33所述的方法，其中，所述结合垫是通过使所述可滑动锁定构件移动来移动的。
37.根据权利要求33所述的方法，其中，所述一个或多个样品是在压缩所述检测膜系统之前与所述结合垫接触。
38.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第一分析物和所述第二分析物为扩增子。
39.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第一分析物和所述第二分析物为PCR反应产物。
40.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第一分析物的第一相互作用单元为地高辛标记。
41.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第一分析物的第二相互作用单元为若丹明标记。
42.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第二分析物的第一相互作用单元为若丹明标记。
43.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第二分析物的第二相互作用单元为荧光素标记。
44.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第三捕获试剂结合于所述第二分析物的第二相互作用单元。
45.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第三捕获试剂为生物素化的捕获试剂。
46.根据权利要求33所述的方法，其中，所述信号检测单元涂布有链霉亲和素。
47.根据权利要求33所述的方法，其中，所述信号检测单元是链霉亲和素涂布的胶体金。
48.根据权利要求33所述的方法，其中，所述第一分析物和所述第二分析物为核酸扩增产物，其中：
所述第一分析物包含地高辛标记和若丹明标记；
所述第二分析物包含若丹明标记和荧光素标记；
所述第一捕获试剂为抗地高辛标记抗体；
所述第二捕获试剂为抗若丹明标记抗体；
所述第三捕获试剂为生物素化的抗荧光素标记抗体；并且
所述信号检测单元为链霉亲和素涂布的胶体金。
49.根据权利要求1所述的方法，其中，所述测试样品为食物样品。
50.根据权利要求1所述的方法，其中，所述所关注的第一分析物和所述所关注的第二分析物来自同一生物体。
51.根据权利要求50所述的方法，其中，所述生物体为大肠杆菌、李斯特菌、弯曲菌属或沙门氏菌属。
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