ES2900066T3

ES2900066T3 - Métodos y composiciones para detectar múltiples analitos con una única señal

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Publication number: ES2900066T3
Application number: ES19171186T
Authority: ES
Original assignee: Invisible Sentinel Inc
Current assignee: Invisible Sentinel Inc
Priority date: 2012-03-09
Filing date: 2013-03-07
Publication date: 2022-03-15
Anticipated expiration: 2033-03-07
Also published as: US20130236899A1; EP2823308A4; CN104919055B; US20170023558A1; NZ629703A; US9823240B2; JP6190395B2; HK1205760A1; US20190162719A1; WO2013134503A3; AU2018264112A1; AU2013230917C1; EP2823308A2; WO2013134503A2; AU2018264112B2; US20160340714A1; EP2823308B1; EP3578980B1; JP2015523054A; CA2866379A1

Abstract

Un complejo que comprende: un primer reactivo de captura fijado a un soporte sólido; un primer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un segundo analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; una unidad de puente; y una unidad de detección de señal; en donde el primer reactivo de captura se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés; en donde la unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la unidad de detección de señal comprende un reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; y en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son analitos de E. coli.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos y composiciones para detectar múltiples analitos con una única señal

Campo de la invención

La invención se refiere, en parte, a la detección de múltiples analitos con una única señal.

Antecedentes de la invención

La detección de múltiples analitos frecuentemente requiere el uso de múltiples señales o múltiples reacciones, sitios, o pocillos para determinar si una muestra tiene múltiples analitos. Esto puede complicar la interpretación y, en casos en los que un adulterante se clasifica como que tiene dos o más características detectables, puede hacer que la identificación suponga un desafío para el usuario final. Por tanto, para simplificar y proporcionar un informe cualitativo consolidado al usuario final, existe una necesidad de métodos y composiciones que permitan la detección de múltiples analitos en una muestra con una única señal. La presente invención satisface esta necesidad y otras.

El documento CA 2 353 920 A1 describe un sistema de prueba para detectar diferentes marcadores (analitos) simultáneamente usando un soporte sólido.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona un complejo que comprende: un primer reactivo de captura fijado a un soporte sólido; un primer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un segundo analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; una unidad de puente; y una unidad de detección de señal; en donde el primer reactivo de captura se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés; en donde la unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la unidad de detección de señal comprende un reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; y en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son analitos de E. coli. El primer analito de interés y el segundo analito de interés pueden ser analitos de E. coli diferentes. El primer analito de interés y el segundo analito de interés pueden ser amplicones. El primer analito de interés y el segundo analito de interés pueden ser independientemente amplicones de toxina Shiga 1, toxina Shiga 2 o eae.

Según un segundo aspecto de la invención, se proporciona un complejo que comprende: un primer reactivo de captura fijado a un soporte sólido; un primer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un segundo analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un tercer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; una primera unidad de puente; una segunda unidad de puente; y una unidad de detección de señal que comprende un segundo reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito de interés, en donde el primer reactivo de captura se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés; en donde la primera unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la segunda unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés y la primera unidad de interacción del tercer analito de interés; en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés, la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés, y la primera y segunda unidad de interacción del tercer analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; y en donde el primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés son analitos de E. coli. El primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés pueden ser diferentes analitos de E. coli. El primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés pueden ser amplicones. El primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés pueden ser independientemente amplicones de toxina Shiga 1, toxina Shiga 2 o eae.

Según un tercer aspecto de la invención, se proporciona un complejo que comprende: un primer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un segundo analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; una unidad de puente; y una unidad de detección de señal, en donde la unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la unidad de detección de señal comprende un primer reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés, en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; y en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son amplicones.

Según un cuarto aspecto de la invención, se proporciona un complejo que comprende: un primer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un segundo analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un tercer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; una primera unidad de puente; una segunda unidad de puente; y una unidad de detección de señal que comprende un primer reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito de interés, en donde la primera unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la segunda unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés y la primera unidad de interacción del tercer analito de interés; en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; y en donde el primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés son amplicones.

La unidad de detección de señal de cualquiera de los aspectos primero a cuarto de la invención puede emitir una señal detectable, tal como un oro coloidal, una marca radiactiva, una marca fluorescente o un sustrato quimioluminiscente o la unidad de detección de señal comprende un nanocristal detectable, una nanopartícula funcionalizada, una nanopartícula de conversión ascendente, una nanopartícula de fusión de seleniuro de cadmio/sulfuro de cadmio, un punto cuántico, un fluoróforo de infrarrojo cercano, una agrupación de lantánidos, una ftalocianina, un diodo emisor de luz. Los aspectos primero a cuarto pueden comprender, además, un segundo reactivo de captura fijado a un soporte sólido; en donde el segundo reactivo de captura se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés.

Según un quinto aspecto de la invención, se proporciona un método de detección, concurrentemente, de un primer analito de interés, un segundo analito de interés y un tercer analito de interés en una muestra de prueba con una única señal, en donde el primer, segundo y tercer analito de interés son diferentes, comprendiendo el método: poner en contacto la muestra de prueba que comprende el primer, segundo y tercer analitos de interés con un soporte sólido, una primera unidad de puente, una segunda unidad de puente y una unidad de detección de señal; y detectar la presencia de la única señal de la unidad de detección de señal que indica la presencia del primer, segundo y tercer analitos de interés concurrentemente con una única señal, en donde la única señal se detecta solo cuando el primer analito de interés, el segundo analito de interés, el tercer analito de interés y la primera unidad de puente, y la segunda unidad de puente forman un complejo de puente y la unidad de detección de señal se une al complejo de puente, en donde: el primer analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el segundo analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el tercer analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés, la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés, y la primera y segunda unidad de interacción del tercer analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; el soporte sólido comprende un primer reactivo de captura que se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés; la primera unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; la segunda unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés y la primera unidad de interacción del tercer analito de interés; y la unidad de detección de señal se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito de interés. La presente divulgación describe métodos de detección, concurrentemente, de un primer analito y un segundo analito, que comprende: poner en contacto un soporte sólido con un primer analito, un segundo analito, una unidad de puente que comprende un segundo reactivo de captura, y una unidad de detección de señal que comprende un tercer reactivo de captura; y detectar la presencia o ausencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia o ausencia del primer analito y el segundo analito concurrentemente, en donde un primer reactivo de captura se fija al soporte sólido; el primer analito comprende una primera unidad de interacción que se une al primer reactivo de captura y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de puente; y el segundo analito comprende una primera unidad de interacción que une la unidad de puente y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de detección de señal.

La presente divulgación describe métodos de detección, concurrentemente, de un primer analito, un segundo analito y un tercer analito con una única señal que comprende: poner en contacto el primer, segundo y tercer analitos con un soporte sólido, una primera unidad de puente, una segunda unidad de puente y una unidad de detección de señal; y detectar la presencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia del primer, segundo y tercer analitos concurrentemente con una única señal, en donde: el primer analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el segundo analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el tercer analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el soporte sólido comprende un primer reactivo de captura que se une a la primera unidad de interacción del primer analito; la primera unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito; la segunda unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito y la primera unidad de interacción del tercer analito; y la unidad de detección de señal se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito. Las unidades de interacción pueden ser diferentes entre sí en cada uno de los analitos.

Como se describe en el presente documento, se proporcionan métodos de detección, concurrentemente, de un primer analito y un segundo analito, comprendiendo el método: poner en contacto un soporte sólido con un primer analito de interés, un segundo analito de interés, una unidad de puente que comprende un segundo reactivo de captura, y una unidad de detección de señal que comprende un tercer reactivo de captura; y detectar la presencia o ausencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia o ausencia del primer analito de interés y el segundo analito de interés concurrentemente, en donde: un primer reactivo de captura se fija al soporte sólido; el primer analito de interés comprende una primera unidad de interacción que se une al primer reactivo de captura y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de puente; y el segundo analito de interés comprende una primera unidad de interacción que une la unidad de puente; una unidad de detección de señal que se une al segundo analito, a la primera unidad de interacción del segundo analito o una segunda unidad de interacción, a un componente del primer y segundo complejo de analito o unidad de puente que solo está presente cuando el complejo contiene el primer y segundo analito.

Como se describe en el presente documento, también se proporcionan complejos que comprenden un soporte sólido, un primer analito, un segundo analito, una unidad de puente y una unidad de detección de señal en donde cada uno de los miembros del complejo se unen entre sí directa o indirectamente.

Como se describe en el presente documento, también se proporcionan complejos que comprenden un soporte sólido, un primer analito, un segundo analito, un tercer analito, una primera unidad de puente, una segunda unidad de puente y una unidad de detección de señal, en donde el soporte sólido, el primer analito, el segundo analito, el tercer analito, la primera unidad de puente, la segunda unidad de puente y la unidad de detección de señal están unidos entre sí directa o indirectamente.

En el presente documento se proporcionan métodos de detección, concurrentemente, de un primer analito de interés y un segundo analito de interés. Como se describe en el presente documento, el método comprende poner en contacto un soporte sólido con un primer analito de interés, un segundo analito de interés, una unidad de puente que comprende un segundo reactivo de captura, y una unidad de detección de señal que comprende un tercer reactivo de captura; y detectar la presencia o ausencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia o ausencia del primer analito de interés y el segundo analito de interés concurrentemente, en donde un primer reactivo de captura se fija al soporte sólido; el primer analito de interés comprende una primera unidad de interacción que se une al primer reactivo de captura y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de puente; y el segundo analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción, en donde la primera unidad de interacción une la unidad de puente; una unidad de detección de señal que se une a: i) el segundo analito, ii) a la primera unidad de interacción o segunda unidad de interacción del segundo analito, iii) a un componente del primer y segundo complejo de analito, o iv) un componente de un complejo de analito-puente que solo está presente cuando el complejo contiene el primer y segundo analitos.

Como se describe en el presente documento, la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga. Como se describe en el presente documento, la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés comprenden la misma unidad de interacción heteróloga. Como se describe en el presente documento, la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés comprenden diferentes unidades de interacción heterólogas. Como se describe en el presente documento, la primera unidad de interacción del primer analito de interés y la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés comprenden la misma unidad de interacción heteróloga. Como se describe en el presente documento, la primera unidad de interacción del primer analito de interés y la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés comprenden diferentes unidades de interacción heterólogas.

Se proporcionan métodos de detección, concurrentemente, de un primer analito de interés, un segundo analito de interés y un tercer analito de interés con una única señal. Como se describe en el presente documento, el método comprende poner en contacto el primer, segundo y tercer analitos de interés con un soporte sólido, una primera unidad de puente, una segunda unidad de puente y una unidad de detección de señal; y detectar la presencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia del primer, segundo y tercer analitos de interés concurrentemente con una única señal, en donde: el primer analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el segundo analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el tercer analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una quinta unidad de interacción; el soporte sólido comprende un primer reactivo de captura que se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés; la primera unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; la segunda unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés y la primera unidad de interacción del tercer analito de interés; y la unidad de detección de señal se une a: i) el tercer analito, ii) a la primera unidad de interacción o segunda unidad de interacción del tercer analito, iii) a un componente del primer, segundo o tercer complejo de analito, o iv) un componente de un complejo de analito-puente que solo está presente cuando el complejo contiene el primer, segundo y tercer analitos.

Como se describe en el presente documento, las unidades de puente descritas en el presente documento son reactivos de captura multivalentes. Como se describe en el presente documento, el reactivo de captura multivalente es una inmunoglobulina. Como se describe en el presente documento, la inmunoglobulina es IgM. La unidad de puente también puede ser biotina.

Se proporcionan métodos de detección, concurrentemente, de una pluralidad de analitos con una única señal con un dispositivo. Como se describe en el presente documento, el método comprende a) poner en contacto un dispositivo para detectar una pluralidad de analitos con una única señal con una o más muestras que comprenden una pluralidad de analitos, en donde el dispositivo comprende: una carcasa que comprende: una abertura de entrada en contacto fluido con un almohadilla de conjugado; un miembro de fuerza; un miembro de bloqueo deslizante que se pone en contacto con el miembro de fuerza; un miembro de unión que se pone en contacto con el miembro de fuerza; un botón de deslizamiento que se pone en contacto con el miembro de unión; y un sistema de membrana de detección que comprende la almohadilla de conjugado, una membrana de prueba y un miembro absorbente, al menos una porción de la almohadilla de conjugado, la membrana de prueba y el miembro absorbente son sustancialmente paralelas entre sí, el miembro de fuerza se pone en contacto con el sistema de membrana de detección y es capaz de aplicar presión sustancialmente perpendicular al sistema de membrana de detección, el botón de deslizamiento mueve el miembro de bloqueo deslizante, la almohadilla de conjugado comprende una unidad de detección de señal que comprende un tercer reactivo de captura; la membrana de prueba comprende un primer reactivo de captura fijado a la membrana de prueba; en donde la una o más muestras comprenden un primer analito de interés, un segundo analito de interés y una unidad de puente que comprende un segundo reactivo de captura, en donde el primer analito de interés comprende una primera unidad de interacción que se une al primer reactivo de captura y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de puente, y el segundo analito de interés comprende una primera unidad de interacción que une la unidad de puente y una segunda unidad de interacción; en donde la unidad de detección de señal que comprende el tercer reactivo de captura se une a: i) el segundo analito, ii) a la primera unidad de interacción o segunda unidad de interacción del segundo analito, iii) a un componente del primer y segundo complejo de analito, o iv) un componente de un complejo de analito-puente que solo está presente cuando el complejo contiene el primer y segundo analitos; y b) detectar la presencia o ausencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia o ausencia del primer analito de interés y el segundo analito de interés concurrentemente.

Como se describe en el presente documento, el método comprende mover la almohadilla de conjugado después de que una porción de una o más muestras se haya puesto en contacto y circulado a través de la almohadilla de conjugado, exponiendo así al menos una porción de la membrana de prueba para la detección de la unidad de detección de señal para indicar la presencia o ausencia de la pluralidad de analitos con una única señal. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se mueve moviendo el miembro de bloqueo deslizante. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo analito son amplicones. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo analitos son productos de reacción de PCR. Como se describe en el presente documento, la primera unidad de interacción del primer analito es un marcador de digoxigenina. Como se describe en el presente documento, la segunda unidad de interacción del primer analito es un marcador de rodamina. Como se describe en el presente documento, la primera unidad de interacción del segundo analito es un marcador de rodamina. Como se describe en el presente documento, la segunda unidad de interacción del segundo analito es un marcador de fluoresceína. Como se describe en el presente documento, el tercer reactivo de captura se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito. Como se describe en el presente documento, el tercer reactivo de captura es un reactivo de captura biotinilado. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal está recubierta con estreptavidina. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal es oro coloidal recubierto con estreptavidina. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo analitos son productos de amplificación de ácido nucleico, en donde: el primer analito comprende un marcador de digoxigenina y un marcador de rodamina; el segundo analito comprende un marcador de rodamina y un marcador de fluoresceína; el primer reactivo de captura es un anticuerpo anti-marcador de digoxigenina; el segundo reactivo de captura es un anticuerpo anti-marcador de rodamina; el tercer reactivo de captura es un anticuerpo anti-marcador de fluoresceína biotinilado; y la unidad de detección de señal es oro coloidal recubierto con estreptavidina.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 ilustra, entre otros aspectos, la detección representativa de dos analitos con una única señal.

La Figura 2 ilustra, entre otros aspectos, la detección representativa de tres analitos con una única señal.

La Figura 3 ilustra, entre otros aspectos, dos productos de amplificación que se detectan con oro coloidal.

La Figura 4 ilustra, entre otros aspectos, una unidad de puente de múltiples componentes

La Figura 5 ilustra, entre otros aspectos, la detección representativa de dos analitos con una única señal usando una unidad de puente de múltiples componentes.

La Figura 6 ilustra, entre otros aspectos, la unidad de detección de señal que se une a un componente de la unidad de puente que solo está presente cuando la pluralidad de analitos está presente en el complejo.

La Figura 7 ilustra, entre otros aspectos, un flujo de trabajo no limitante para detectar una pluralidad de analitos con una única señal.

La Figura 8 representa una vista en perspectiva de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 9 representa algunos componentes de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 10 representa algunos componentes de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 11 representa algunos componentes de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 12 representa algunos componentes de un dispositivo representativo en diversas posiciones según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 13 representa una vista lateral de algunos componentes de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 14 representa una vista lateral de algunos componentes de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 15A representa una vista lateral de algunos componentes de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 15B representa una vista de algunos componentes, tales como, pero sin limitarse a, un miembro de unión no flexible, de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 15C representa una vista en perspectiva de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 15D representa una vista en perspectiva de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 16 representa un miembro de unión flexible unido a una almohadilla de conjugado.

La Figura 17 representa membranas en un miembro de carcasa representativo.

La Figura 18 representa una vista lateral y una vista superior de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 19 representa un tipo de sistema de membrana de detección de analitos para un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 20 representa un tipo de sistema de membrana de detección de analitos para un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 21 representa un tipo de sistema de membrana de detección de analitos para un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 22 representa un tipo de sistema de membrana de detección de analitos para un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 23 representa miembros de fuerza representativos para un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

Las Figuras 24A-D representan un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

Las Figuras 25A-C representan un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

Las Figuras 26 representan dispositivos representativos según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

Las Figuras 27A-B representan una vista de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 28 representa una vista desde abajo de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 29 representa una vista en despiece ordenado de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 30 representa una vista interior de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

Las Figuras 31A-B representan una vista en sección transversal de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 32 representa una vista en despiece ordenado de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 33 representa una vista interior de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 34 representa una vista en sección transversal de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 35 representa un miembro de bloqueo móvil representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 36 representa una carcasa representativa según algunas divulgaciones descritas en el presente documento. La Figura 37 representa una carcasa representativa según algunas divulgaciones descritas en el presente documento. La Figura 38A representa un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 38B representa un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 39 representa una vista ampliada de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 40 representa una vista en despiece ordenado de un cartucho y sistema de membrana de detección de analitos según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 41 representa un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento. La Figura 42 representa un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento. Las Figuras 43A-C representan un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 44 representa una vista en despiece ordenado de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

La Figura 45 representa una vista en despiece ordenado de un dispositivo representativo según algunas divulgaciones descritas en el presente documento.

Descripción de las realizaciones

Antes de describir las composiciones y métodos proporcionados en el presente documento, debe entenderse que la divulgación no se limita a los procesos, composiciones o metodologías particulares descritos, ya que estos pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en la descripción es con el fin de describir la divulgación, y no pretende limitar el alcance de la divulgación.

Se describen diversos métodos y divulgaciones en el presente documento. Los métodos y divulgaciones se pueden combinar entre sí. Las definiciones y divulgaciones descritas en el presente documento no se limitan a un método o ejemplo particular, a menos que el contexto indique claramente que se debe limitar así.

Como se usa en el presente documento, la expresión "detección de un analito", "detectar un analito" se refiere a la detección de múltiples analitos con una única señal. La detección de múltiples analitos puede ser, como se describe en el presente documento, al menos, o exactamente, 2, 3, 4 o 5 analitos con una única señal.

Cabe señalar que, tal como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "una" y "el/la" incluyen referencias plurales salvo que el contexto indique claramente lo contrario. A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos que se usan en el presente documento tienen el mismo significado que el entendido habitualmente por un experto en la materia. Aunque se puede usar cualquier método similar o equivalente a los descritos en el presente documento en la práctica o prueba de las divulgaciones, ahora se describen los métodos preferidos. Nada de lo expuesto en el presente documento se ha de interpretar como un reconocimiento de que la materia objeto no tenga derecho a preceder tal divulgación en virtud de la invención anterior.

Como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente" significa más o menos un 10% del valor numérico del número que se está usando. Por lo tanto, aproximadamente el 50 % significa en el intervalo de 45 %-55 %. Además, la expresión "aproximadamente X a Y", es la misma que "aproximadamente X a aproximadamente Y", es decir, el término "aproximadamente" modifica tanto a "X" como a "Y".

Como se usa en el presente documento, el término "opcional" u "opcionalmente" significa que la estructura, acontecimiento o circunstancia posteriormente descrita puede o puede no ocurrir, y que la descripción incluye casos donde el evento ocurre y casos donde no.

Como se usa en el presente documento, el término "muestra" significa cualquier medio fluido o líquido que puede contener un artículo particular (por ejemplo analito) o que se sospecha que contiene un artículo particular. Como se describe en el presente documento, se pueden usar muestras que son ricas en sólidos disueltos sin procesamiento adicional, y se pueden analizar muestras que contienen altos sólidos (no disueltas), como se describe en el presente documento, mediante el uso de un filtro, o se usan conjuntamente con etapas manuales adicionales. Las muestras también pueden estar sin filtrar o ser purificadas antes de ser usadas en un método o dispositivo descrito en el presente documento. Las muestras pueden ser un líquido, una suspensión, muestra extraída o disuelta, o un fluido supercrítico. Si una muestra se va a usar en un dispositivo de flujo (vertical o lateral), deben existir algunas propiedades de flujo en la muestra o extracto que permita el flujo a través de los dispositivos y sistemas descritos en el presente documento. Los ejemplos de muestras incluyen, pero sin limitarse a, sangre, hisopos para alimentos, extractos de alimentos, suspensiones de alimentos, cultivos de alimentos, cultivos bacterianos, cultivos virales, reacciones de amplificación, saliva, fluido biológico, reacciones de PCR, y similares. La muestra también se puede obtener de otra muestra. Por ejemplo, se puede realizar una reacción de PCR en una mezcla de ácidos nucleicos que se ha extraído, aislado y/o purificado de otra muestra (por ejemplo, alimento, celular, viral, bacteriana, sangre, y similares). Se consideraría que la reacción de PCR es una muestra derivada de otra muestra.

Una "suspensión de alimentos" se refiere a alimento crudo o cocinado que se ha puesto o suspendido en una solución. La solución de alimento se puede mezclar, agitar vorticialmente o combinar. Un "cultivo de alimento" es una muestra de alimento que se cultiva en condiciones para enriquecer la muestra. Este proceso también se puede denominar "enriquecimiento". El enriquecimiento se puede usar para facilitar el análisis de muestras para detectar mejor la presencia o ausencia de múltiples analitos con una única señal. La muestra también puede ser una muestra de reacción que se obtienen una muestra diferente. Un ejemplo de una muestra de reacción es un "enriquecimiento". Por ejemplo, se puede procesar una muestra de sangre o alimento (por ejemplo, cultivar, purificar, separar en componentes, y similares) y la muestra procesada se puede probar para la detección de múltiples analitos. Como se describe en el presente documento, dos analitos se detectan en una muestra de sangre o una muestra de alimento. Como se describe en el presente documento, los analitos se pueden detectar realizando dos reacciones de amplificación que son específicas para los dos analitos y a continuación se pueden detectar los dos productos de amplificación con una única señal para detectar la presencia de los dos analitos en una muestra concurrentemente. Como se describe en el presente documento, se detectan tres analitos usando una única señal. La detección puede ser concurrente, es decir, la señal solo se genera cuando todos los analitos están presentes en la misma muestra. La generación de señal concurrente puede ser efectuada mediante la creación de un complejo de puente, que se describe en el presente documento. Como se describe en el presente documento, el complejo de puente se puede observar en las Figuras 1-3.

Como se usa en el presente documento, el término "soporte sólido" significa un material que es sustancialmente insoluble en un sistema seleccionado, o que se puede separar fácilmente (por ejemplo, mediante precipitación) de un sistema seleccionado en el que está presente. Los soportes sólidos útiles en la práctica de los presentes métodos pueden incluir grupos que se activan o capaces de activación para permitir que ciertos compuestos o moléculas (por ejemplo, reactivos de captura, anticuerpos, y similares) se unan al soporte sólido. El soporte sólido puede, por ejemplo, ser agarosa, Sepharose, poliacrilamida, copolímeros de agarosa/poliacrilamida, dextrano, celulosa, polipropileno, policarbonato, nitrocelulosa, papel de vidrio, o cualquier otra sustancia adecuada capaz de proporcionar un soporte sólido adecuado. Como se describe en el presente documento, el soporte sólido puede estar en forma de gránulos, un polvo o un gel adecuado para su uso en cromatografía. El soporte sólido también puede ser una membrana, tal como nitrocelulosa, PVC y similares. También se pueden usar otros tipos de membranas y no existe requisito específico para el tipo de membrana que se puede usar. Como se describe en el presente documento, el soporte sólido es una membrana de prueba. Los ejemplos de membranas de prueba se describen en el presente documento.

Como se usa en el presente documento, el término "analito" incluye, pero sin limitarse a, antígenos, moléculas de ácidos nucleicos codificadas por una célula, virus, bacterias u otro tipo de microorganismo, productos de amplificación (por ejemplo, amplicones), un péptido, un azúcar, y similares. Como se describe en el presente documento, el analito no es un anticuerpo o fragmento funcional del mismo. Las moléculas de ácidos nucleicos se pueden detectar como se describe en el presente documento usando los métodos descritos en el presente documento en combinación con otros métodos o dispositivos conocidos, tales como métodos de amplificación (por ejemplo, PCR, RT-PCR, y similares), métodos de hibridación, cebadores marcados, y similares. El término "molécula diana" se puede usar indistintamente con el término "analito". Los métodos de amplificación se pueden usar para amplificar la cantidad de moléculas de ácidos nucleicos presentes en una muestra para facilitar la detección del analito. Otros tipos de analitos que se pueden detectar usando los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero sin limitarse a, antígenos, anticuerpos, receptores, ligandos, quelantes, proteínas, enzimas, ácidos nucleicos, ADN, ARN, pesticidas, herbicidas, compuestos inorgánicos u orgánicos, o cualquier material para el que se puede encontrar un reactivo de unión específica. El analito también se puede referir a diferentes epítopos presentes sobre la misma proteína o polipéptido. El analito también se puede referir a analitos de organismos patógenos o no patógenos. Los analitos también se pueden referir como un analito de interés en una muestra. Es decir, el analito se puede referir a un agente cuya presencia o ausencia en una muestra está siendo determinada por un usuario.

Como se analiza en el presente documento, el analito puede ser un producto de amplificación, tal como un producto de una reacción de PCR. El producto de PCR está amplificando una secuencia de ácidos nucleicos de una muestra de prueba. Por tanto, la detección del producto de PCR en la muestra es determinar si la secuencia de ácidos nucleicos en la que se basa el producto de PCR está presente en la muestra inicial. Por ejemplo, si un experto en la materia está determinando si una muestra de alimento está contaminada con E. coli, secuencias de ácidos nucleicos que son específicas para E. coli, se puede amplificar (por ejemplo, por PCR) y luego detectar según los métodos descritos en el presente documento. La detección de los productos de amplificación (es decir, amplicones) indica que la muestra de alimento contenía las secuencias de ácidos nucleicos nativas que son específicas para E. coli. Este ejemplo es no limitante y se puede aplicar a la detección de otra secuencia de ácidos nucleicos u otros tipos de analitos presentes en una muestra nativa. El analito puede ser lo que es en la muestra inicial, o un analito que deriva de la muestra inicial por, por ejemplo, utilizando PCR. Cuando la pluralidad de analitos está siendo detectada con una única señal según los métodos proporcionados en el presente documento, los analitos también pueden tener marcas heterólogas o unidades de interacción, y el analito modificado también se denomina el analito. Como se describe en el presente documento, el analito estará libre de unidades de interacción heteróloga, tales como marcas fluorescentes, biotina, digoxigenina, y similares.

Un analito es diferente de un reactivo que se usa para detectar la presencia o ausencia de un analito. Por tanto, un reactivo que se añade a la muestra para determinar si el analito está presente no es un analito de interés. Por ejemplo, en un ensayo de sándwich típico, un primer anticuerpo se une a un soporte sólido. El soporte sólido recubierto con un anticuerpo se pone en contacto con una muestra para determinar la presencia o ausencia de un antígeno que se une al anticuerpo. Entonces también se añade un anticuerpo secundario para detectar el antígeno. La presencia del anticuerpo secundario se detecta entonces frecuentemente mediante la adición de un tercer anticuerpo que tiene, por ejemplo, una enzima conjugada con él tal que se pueda detectar mediante diversos medios (por ejemplo, anticuerpos unidos a HRP). El anticuerpo secundario no es un analito de interés debido a que es un reactivo usado para detectar el antígeno primario. Por lo tanto, un ensayo de sándwich no detecta la presencia de una pluralidad de analitos con una única señal según los métodos descritos en el presente documento debido a que el anticuerpo secundario es un reactivo, o herramienta, para detectar la presencia o ausencia del antígeno, o un analito de interés. Un analito tampoco es un componente o porción que se encuentra en una entidad de puente. Por ejemplo, en la solicitud publicada de EE. UU. n.° 2010/0273145, las Figuras 1 y 2 muestran un analito que se une a una entidad de puente, que entonces se une a una entidad de señalización para detectar la presencia del analito. Ni la unidad de puente, o cualquier porción de la misma, ni la entidad de señalización es un analito o analito de interés. Estos componentes son reactivos usados para detectar el analito, que en el caso de la solicitud publicada de EE. UU. n.° 2010/0273145 es la detección de un único analito.

Como se describe en el presente documento, el analito es una proteína, tal como una proteína patógena. Una proteína patógena se refiere a una proteína que es de un patógeno. Los ejemplos de patógenos incluyen, pero sin limitarse a, virus, procariotas y, por ejemplo, organismos eucariotas patógenos tales como organismos patógenos unicelulares y parásitos multicelulares. Los patógenos también pueden incluir patógenos protozoarios que incluyen una etapa en el ciclo vital donde son patógenos intracelulares. Como se usa en el presente documento, el término "patógeno intracelular" significa un virus u organismo patógeno en que, al menos parte de su ciclo reproductor o vital, existe dentro de una célula hospedadora y en su interior produce o provoca que se produzcan, proteínas patógenas. Un patógeno también puede ser un patógeno transmitido por alimentos.

Los patógenos bacterianos incluyen, pero sin limitarse a, tales como cocos Gram-positivos patógenos bacterianos, que incluyen, pero sin limitarse a: neumocócicos, estafilocócicos y estreptocócicos. Los cocos Gram-negativos patógenos incluyen, pero sin limitarse a: meningocócicos y gonocócicos. Los bacilos Gram-negativos entéricos patógenos incluyen, pero sin limitarse a: enterobacteriaceae, pseudomonas, acinetobacteria, eikenella, melioidosis, salmonela, shigellosis, hemophilus, chancroide, brucelosis, tularemia, yersinia (pasteurella), Streptobacillus moniliformis, espirilo, Listeria monocytogenes, Erysipelothrix rhusiopathiae, difteria, cólera, carbunco, donovanosis (granuloma inguinal) y bartonellosis. Las bacterias anaerobias patógenas incluyen, pero sin limitarse a, las que son responsables de: tétanos, botulismo, otros clostridios, tuberculosis, lepra y otras micobacterias. Las enfermedades por espiroquetas patógenas incluyen, pero sin limitarse a: sífilis, treponematosis, pian, pinta y sífilis endémica, y leptospirosis. Otras infecciones causadas por bacterias patógenas superiores y hongos patógenos incluyen, pero sin limitarse a: actinomicosis, nocardiosis, criptococosis, blastomicosis, histoplasmosis y coccidioidomicosis, candidiasis, aspergilosis, mucormicosis, esporotricosis, paracoccidiodomicosis, petrielidiosis, torulopsosis, micetoma, cromomicosis y dermatofitosis. Las infecciones por Rickettsia incluyen, pero sin limitarse a, rickettsia y rickettsiosis. Los ejemplos de infecciones por micoplasma y clamidia incluyen, pero sin limitarse a: neumonía por micoplasma, linfogranuloma venéreo, sitacosis e infecciones perinatales por clamidia. Los protozoos y helmintos patógenos y eucariotas infecciosos incluyen así, pero sin limitarse a: amibiasis, paludismo, leishmaniasis, tripanosomiasis, toxoplasmosis, Pneumocystis carinii, babesiosis, giardiasis, triquinosis, filariasis, esquistosomiasis, nematodos, trematodos o duelas, e infecciones por cestodos (tenía). Las bacterias también incluyen, pero sin limitarse a, Listeria, E. coli, especies de Campylobacter, y especies de Salmonella. Como se describe en el presente documento, E. coli es E. coli 0157.

Los ejemplos de virus incluyen, pero sin limitarse a, VIH, hepatitis A, B y C, VIF, lentivirus, pestivirus, virus del Nilo occidental, sarampión, viruela, viruela vacuna, ébola, coronavirus, y similares. Otros patógenos también se divulgan en la publicación de solicitud de patente de EE. UU. n.° 20080139494.

Como se describe en el presente documento, el patógeno es un patógeno trasmitido por alimentos. El analito puede estar presentes en un patógeno trasmitido por alimentos. Los patógenos trasmitidos por alimentos son patógenos (por ejemplo, virales o bacterianos) que causan enfermedades después de comer alimentos contaminados. El alimento en sí no causa directamente las enfermedades, sino que es el consumo del patógeno trasmitido por alimentos que está presente en el alimento el que causa las enfermedades. Como se describe en el presente documento, el patógeno trasmitido por alimentos es E. coli, Listeria, una especie de Campylobacter, o una especie de Salmonella. Como se describe en el presente documento, el analito se elige de un analito de patógeno trasmitido por alimentos. Por ejemplo, el analito de patógeno trasmitido por alimentos se puede, pero sin limitarse a, elegir de un analito de E. coli, un analito de Listeria, un analito de especies de Campylobacter, o un analito de especies de Salmonella. Como se describe en el presente documento, el analito es el antígeno O específico. Como se describe en el presente documento, el antígeno O es el antígeno de E. coli y/o un antígeno O de especie de Salmonella y se puede usar para la detección de E. coli y Salmonella. Como se describe en el presente documento, el analito es un antígeno de flagelina. Como se describe en el presente documento, el analito es el antígeno de flagelina de Campylobacter. Como se describe en el presente documento, el analito es un gen de factor de virulencia tal como el gen de la toxina Shiga amplificado de E. coli o Salmonella patógena. Como se describe en el presente documento, el analito es una secuencia de ADN o ARN que se amplifica por un método de amplificación (por ejemplo, PCR o RT-PCR) y a continuación se detecta según los métodos descritos en el presente documento.

Como se describe en el presente documento, un analito puede ser un producto de amplificación. El producto de amplificación, tal como un producto de PCR (por ejemplo, un producto de PCR bicatenario), se puede marcar con unidades de interacción. Se puede hacer la producción de un producto de amplificación marcado con las unidades usando cebadores marcados o conjugados con las dos unidades de interacción. Como se describe en el presente documento, un analito tendrá dos unidades de interacción diferentes de modo que se pueda ensamblar el complejo de puente y sea posible la detección de múltiples analitos mediante una unidad de detección de señal.

Como se usa en el presente documento, el término "unidad de detección de señal" significa una unidad que se puede detectar para determinar si el analito o analitos están presentes en una muestra. La unidad de detección de señal puede ser cualquier reactivo o composición que se pueda detectar. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal se une a un reactivo de captura. Por tanto, la unidad de detección de señal se puede usar para detectar la presencia del reactivo de captura que se une a su compañero de unión específica. El reactivo de captura puede comprender un reactivo de detección directamente o el reactivo de captura puede comprender, además, una partícula que comprende el reactivo de detección. Como se describe en el presente documento, el reactivo y/o partícula de captura comprende un color, oro coloidal, una marca radiactiva, una marca fluorescente, o un sustrato quimioluminiscente. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal comprende una marca o sustrato de infrarrojo cercano o infrarrojo. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal comprende un color, oro coloidal, una marca radiactiva, una marca fluorescente, o un sustrato quimioluminiscente. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal comprende un nanocristal, nanopartículas funcionalizadas, nanopartículas de conversión ascendente, nanopartículas de fusión de seleniuro de cadmio/sulfuro de cadmio, puntos cuánticos y un fluoróforo o material de infrarrojo cercano (NIR) (tal como, pero sin limitarse a, materiales tales como agrupaciones de lantánidos y ftalocianinas, así como diodos emisores de luz que consisten en CuPc, PdPc y PtPc) capaces de emitir luz en el espectro de NIR. Como se describe en el presente documento, un reactivo de y/o partícula captura se conjuga con la unidad de detección de señal, tal como, pero sin limitarse a, oro coloidal, plata, marca radiactiva, marca fluorescente, o un sustrato quimioluminiscente, compuesto de infrarrojo cercano (por ejemplo, sustrato, molécula, partícula), o compuesto de infrarrojo (por ejemplo, sustrato, molécula, partícula), nanopartícula, nanopartícula emisora, punto cuántico, partícula magnética, o una enzima.

La unidad de detección de señal también puede ser, por ejemplo, una partícula vírica, una partícula de látex, una partícula lipídica, una partícula fluorescente, una partícula de infrarrojo cercano, o partícula de infrarrojo. Como se usa en el presente documento, el término "partícula fluorescente" significa una partícula que emite luz en el espectro fluorescente. Como se usa en el presente documento, el término "partícula de infrarrojo cercano" significa una partícula que emite luz en el espectro de infrarrojo cercano. Como se usa en el presente documento, el término "partícula de infrarrojo" significa una partícula que emite luz en el espectro de infrarrojo. Como se describe en el presente documento, el oro coloidal tiene un tamaño de diámetro de: aproximadamente 20 nm, aproximadamente 30 nm, o aproximadamente 40 nm, o en el intervalo de aproximadamente 20-30 nm, aproximadamente 20-40 nm, aproximadamente 30-40 nm, o aproximadamente 35-40 nm. Como se describe en el presente documento, la partícula comprende un partícula de aleación metálica. Como se describe en el presente documento, la partícula de aleación metálica tiene un diámetro desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 200 nm. Los ejemplos de partículas de aleación metálica incluyen, pero sin limitarse a, partículas de aleación de oro metálico, partículas bimetálicas de oro-plata, partículas de aleación de plata metálica, partículas de aleación de cobre, partículas de cadmio-selenio, partículas de aleación de paladio, partículas de aleación de platino y nanopartículas de plomo.

Como se analiza en el presente documento, la señal detección se puede unir a uno de los analitos. Un ejemplo no limitante de la unidad de detección de señal que se une a un analito se muestra en la Figura 1. La Figura 1, que se describe con más detalle en el presente documento, muestra la unidad de detección de señal 60 que se une al analito 40 mediante un reactivo de captura 50. Sin embargo, la unidad de detección de señal también se puede unir a otras porciones del complejo. Cualquier componente que esté necesariamente presente solo cuando ambos de la pluralidad de analitos están presentes en el complejo puede ser un compañero de unión para la unidad de detección de señal. A menudo, pero no exclusivamente, esto será uno de los analitos, pero también puede ser un reactivo de captura que se une al analito. En cambio, como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal no se une únicamente al analito que se une al soporte sólido, el soporte sólido, o el reactivo de captura unido directamente al soporte sólido, si está presente sobre el soporte sólido. Por ejemplo, en la Figura 1, la unidad de detección de señal no se unirá directamente al soporte sólido 10, el reactivo de captura 15, o el analito 20. Sin quedar ligados a teoría particular alguna, si la unidad de detección de señal se une directamente con el soporte sólido 10, el reactivo de captura 15, o el analito 20, el método proporcionaría un positivo falso ya que la señal se detectaría sin estar necesariamente presente la pluralidad de analitos. Por ejemplo, La Figura 6, ilustra la unidad de detección de señal que se une a un componente de una unidad de puente de múltiples componentes. Como se describe en el presente documento, la unidad de puente, y una unidad de puente de múltiples componentes, se describen en el presente documento y, por ejemplo, con referencia a las Figuras 4 y 5. La Figura 6 ilustra una unidad de detección de señal 60 con su reactivo de captura 50 que se une a un componente de la unidad de puente 30. La unidad de puente 30 comprende una partícula 34, un primer reactivo de captura 31, un segundo reactivo de captura 32 y un tercer reactivo de captura 33. La Figura 6 ilustra la unidad de detección de señal que se une al segundo reactivo de captura 32. El reactivo de captura 32 solo estará presente en el complejo si ambos analitos están presentes en el complejo. Si el reactivo de captura 32 no está presente, esto significa que no existe complejo de puente de la pluralidad de analitos.

Por lo tanto, la unidad de detección de señal solo será parte del complejo si la pluralidad de analitos está presente en el complejo, evitando así positivos falsos. Si ambos analitos no están presentes, el reactivo de captura 32 no será parte del complejo, y, por lo tanto, no habrá compañero de unión para la unidad de detección de señal. Por consiguiente, la unidad de detección de señal solo será detectable cuando esté presente la pluralidad de analitos. Por lo tanto, como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal se une a cualquier componente que solo está presente cuando también está presente la pluralidad de analitos. También se divulgan en el presente documento otras propiedades, características y rasgos estructurales de la unidad de puente de múltiples componentes y son fácilmente evidentes basándose en la presente divulgación.

Los ejemplos de dispositivos en los que se pueden usar los métodos actualmente descritos se describen en, por ejemplo, la patente de EE. UU. n.° 8.012.770, la solicitud de patente de EE. UU. n.° 2012/0301893, presentada el 27 de enero de 2012, Publicación PCT n.°WO 2011/044574. Los métodos actualmente descritos, sin embargo, se pueden usar con cualquier número de dispositivos o formatos, tales como placas de múltiples pocillos, matrices, micromatrices, o en un formato de tipo "ELISA". Los ejemplos de dispositivos también se describen en el presente documento, pero estos ejemplos son no limitantes. Los métodos descritos en el presente documento también se pueden usar junto con dispositivos de flujo lateral. En un dispositivo de flujo lateral, las diferentes porciones del dispositivo están en el mismo plano, a diferencia de un dispositivo de flujo vertical. Los ejemplos no limitantes de los dispositivos de flujo lateral se pueden encontrar en las patentes de EE. UU. 6.485.982, 6.818.455, 6.951.631, 7.109.042, RE39.664. Los dispositivos de flujo lateral se pueden adaptar para los métodos descritos en el presente documento como se describen para los dispositivos de flujo vertical. En un dispositivo de flujo lateral, la región que indica un resultado positivo o negativo puede comprender el reactivo de captura que se une a uno de los analitos. La unidad de puente puede o bien estar presentes en una de las regiones de flujo lateral o bien mezclarse con los analitos antes de la adición al dispositivo, esto también se puede hacer para otros dispositivos y soportes sólidos. La unidad de detección de señal también se puede incorporar en una de las regiones de flujo lateral. Como es evidente a partir de la presente divulgación, el tipo de dispositivo o soporte sólido no es crítico y los métodos se pueden adaptar basándose en los ejemplos y las divulgaciones descritos en el presente documento.

Como se usa en el presente documento, el término "amplicón" significa un producto de amplificación tal como una molécula de ácido nucleico que se amplifica por una reacción de PCR u otra reacción o método de amplificación. Como se analiza en el presente documento, un amplicón puede ser un analito. El amplicón puede ser una molécula de ácido nucleico bicatenaria. El producto de amplificación se puede detectar directa o indirectamente mediante el uso de anticuerpos u otros sistemas de reactivo de captura, que incluyen los que se describen en el presente documento. El producto de amplificación también se puede detectar mediante métodos de hibridación completos o en parte como se describe en el presente documento. El producto de amplificación también se puede producir, por ejemplo, mediante RT-PCR o amplificación lineal.

Como se describe en el presente documento, el amplicón es un producto de PCR. Los productos de reacción de PCR (por ejemplo, amplicones) se pueden marcar de forma que sean detectables ya sea por otro anticuerpo o sistema de tipo anticuerpo, tal como, pero sin limitarse a, sistemas de biotina-avidina/estreptavidina, sistemas, sistemas de hapteno, marcado con BRDU de ADN, agentes intercalantes que marcan ADN, dNTP marcados, y también se pueden usar similares donde se marcan los productos de PCR. El analito, que puede, por ejemplo, pero sin limitarse a, ser un ácido nucleico (monocatenario o bicatenario) y se puede reconocer o detectar con un anticuerpo u otro sistema de reactivo de captura, tales como los descritos en el presente documento. La molécula de ácido nucleico se puede marcar con un marcador de biotina u otro tipo de marcador que se puede detectar usando un método descrito en el presente documento. Otros ejemplos de marcadores incluyen marcadores fluorescentes. Los marcadores fluorescentes pueden ser, por ejemplo, fluoresceína (por ejemplo, isotiocianato de fluoresceína (FITC)), rodamina (por ejemplo, tetrametilrodamina (TAMRA)), y similares. Los amplicones se pueden generar con estos marcadores usando cebadores marcados. Los marcadores se pueden incorporar en el amplicón mediante el procedimiento de amplificación y, por tanto, llegan a ser parte del analito. Los marcadores se considerarían marcas heterólogas debido a que los marcadores no se encuentran en la secuencia nativa que se usa como molde para el amplicón. Se pueden usar reactivos de captura (por ejemplo, anticuerpos) que se unen a los marcadores para ayudar en la formación de los complejos que se describen en el presente documento, que permiten la detección de múltiples analitos con una única señal. Estos marcadores pueden actuar como unidades de interacción. Un ejemplo no limitante de cómo los marcadores pueden actuar como unidades de interacción de forma que se puedan detectar múltiples analitos con una única señal se muestra en la Figura 3.

Por ejemplo, como se describe en el presente documento, se realiza una reacción de PCR con un hapteno y/o cebadores de ADN o ARN marcados con biotina con homología a una secuencia de ácidos nucleicos del analito. La secuencia de ácidos nucleicos del analito puede ser, pero sin limitarse a, un gen de toxina y/o una molécula de toxina (por ejemplo, toxina Shiga) de una muestra de carne. La muestra, sin embargo, puede ser cualquier muestra, y el analito puede ser cualquier otro tipo de analito descrito en el presente documento. Las reacciones de PCR se pueden realizar para producir múltiples analitos con las unidades de interacción. Tras la amplificación con los cebadores, la muestra de p Cr se puede detectar usando un método descrito en el presente documento. La reacción de PCR también se puede realizar con digoxigenina y/o TAMRA y/o con cebadores marcados con FITC y TAMRA. Estos pueden crean los amplicones diferencialmente marcados que pueden formar un puente juntos mediante el uso de reactivos de captura para permitir la detección de múltiples analitos con una única señal. Un ejemplo de dicho complejo se muestra en la Figura 3.

La Figura 3 ilustra una membrana de prueba (es decir, soporte sólido 10) con un anticuerpo anti-Dig (es decir, reactivo de captura 15), un amplicón marcado con digoxigenina/TAMRA (es decir, un primer analito 20, una primera unidad de interacción 21 y una segunda unidad de interacción 22), un anticuerpo anti-rodamina ((es decir, unidad de puente 30), un amplicón marcado con FITC/TAMRA (es decir, un segundo analito 40, una primera unidad de interacción 41 y una segunda unidad de interacción 42); y un complejo de estreptavidina-oro que se une a un anticuerpo anti-FITC biotinilado (es decir, una unidad de generación de señales 60 y un tercer reactivo de captura 50).

En resumen, después de realizar las reacciones de PCR, los amplicones se pueden poner en contacto con un soporte sólido, una unidad de puente y una unidad de detección de señal. El soporte sólido puede tener un reactivo de captura que se une a una unidad de interacción sobre el primer analito. La unidad de puente puede tener, o ser, un reactivo de captura que se une a unidades de interacción sobre el primer y segundo analitos de forma que la unión a las unidades de interacción sobre el primer y segundo analitos junte los analitos en un complejo. La unidad de detección de señal se puede unir a una unidad de interacción presente sobre uno del segundo analito. La unidad de detección de señal puede entonces emitir una señal detectable o la unidad de detección de señal se puede detectar mediante la adición de otro sistema de detección. Por ejemplo, en la Figura 3, la unidad de detección de señal es un reactivo de captura (por ejemplo, anticuerpo) que se une a la unidad de interacción sobre el segundo analito. La unidad de detección de señal se biotinila. La presencia de la unidad de detección de señal se puede entonces determinar mediante la adición de estreptavidina. La estreptavidina solo se unirá a un complejo que tiene presentes ambos analitos. En el ejemplo no limitante mostrado en la Figura 3, la estreptavidina se marca con oro coloidal que permite la detección. Sin embargo, se podrían usar otros marcadores o sistemas de detección para detectar la estreptavidina. Como se describe en el presente documento, los dispositivos de flujo vertical descritos en el presente documento, la membrana de prueba es el soporte sólido con el reactivo de captura, y la almohadilla de conjugado puede comprender la unidad de detección de señal o la molécula que detecta la unión de la unidad de detección de señal a la unidad de interacción del segundo analito.

La Figura 7 ilustra un procedimiento de flujo de trabajo no limitante que se podría usar para detectar una pluralidad de analitos con una única señal usando amplicones para detectar la presencia de un analito de interés en una muestra. Se analiza una muestra de alimento 7000 para determinar la presencia o ausencia de E. coli patógena. La muestra de alimento 7000 se procesa (por ejemplo, se enriquece, se cultiva, ácido nucleico, purificación, aislamiento, extracción, u otras etapas similares) para extraer, aislar o proporcionar de otro modo los ácidos nucleicos presentes en la muestra de alimento. Se pueden amplificar las secuencias de ácidos nucleicos presentes en la muestra procesada 7001, tal como, pero sin limitarse a, por PCR, para amplificar las secuencias específicas de E. coli patógena. Los ejemplos de estas secuencias se describen en el presente documento. No se necesita usar un conjunto de cebadores específicos ya que se pueden modificar basándose en la secuencia diana a amplificar. Como se describe en el presente documento, los cebadores se pueden marcar, creando así amplicones marcados (analitos con unidades de interacción heteróloga). Se generarán el primer analito 7020 y el segundo analito 7040 si las secuencias diana están presentes en la muestra de alimento y la muestra procesada. Los analitos se muestran con unidades de interacción heteróloga (7021, 7022, 7041 y 7042). Los analitos se pueden mezclar con una unidad de puente 7030. La mezcla formará un complejo de puente 7100. Los analitos se pueden detectar entonces poniendo en contacto el complejo de puente con un soporte sólido 7010 que comprende un reactivo de captura 7015 y una unidad de detección de señal 7060 que comprende un reactivo de captura 7050. Como se analiza en el presente documento, la unidad de detección de señal 7060 que comprende un reactivo de captura 7050 se puede absorber sobre una membrana y dejar que interaccione con el complejo de puente. El soporte sólido 7010 que comprende un reactivo de captura 7015 puede ser una membrana de prueba con un anticuerpo. Estos elementos se pueden incorporar en un dispositivo como se describe en el presente documento. Aunque la Figura 7 muestra las etapas que se realizan por separado, también se pueden realizar en orden diferente y se pueden combinar algunas etapas. Por ejemplo, la etapa de mezclar los analitos con la unidad de puente también se puede combinar con poner en contacto los analitos con la unidad de detección de señal que comprende un reactivo de captura. Entonces se podría realizar posteriormente la etapa de detección de añadir al complejo al soporte sólido. Como se describe en el presente documento, los analitos, unidad de puente, unidad de detección de señal que comprende un reactivo de captura, y el soporte sólido que comprende un reactivo de captura, se pueden mezclar juntos simultáneamente o casi simultáneamente y luego se puede detectar la unidad de detección de señal. La unidad de detección de señal solo detectará o detectará por encima de los niveles de fondo (es decir, por encima de un control negativo) cuando estén presentes la pluralidad de los analitos en la muestra que se pone a prueba. Es decir, en la Figura 7, el complejo 7200 solo se formará si están presentes ambos analitos y, por tanto, ambas secuencias diana en la muestra de alimento 7000. No se formará el complejo 7200 si falta uno de los analitos. El flujo de trabajo mostrado en la Figura 7 también puede incluir una etapa de lavado para lavar cualquier material no unido o componentes que no forman un complejo 7200. Las etapas de lavado también se pueden incorporar en cualquier método descrito en el presente documento.

Como se describe en el presente documento, el método de detección de una pluralidad de analitos con una única señal comprende amplificar una pluralidad de secuencias de ácidos nucleicos diana presentes en una muestra. Las secuencias diana pueden ser los analitos o los productos amplificados pueden ser los analitos. La detección de las secuencias amplificadas (por ejemplo, productos de PCR) indica la presencia de las secuencias de molde en la muestra original.

Como se describe en el presente documento, los métodos de detección, concurrentemente, de una pluralidad de analitos con una única señal comprenden a) poner en contacto un dispositivo para detectar una pluralidad de analitos con una única señal con una o más muestras que comprenden una pluralidad de analitos; y detectar la presencia o ausencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia o ausencia del primer analito de interés y del segundo analito de interés concurrentemente. El dispositivo puede ser cualquier dispositivo usado para detectar la presencia o ausencia de analito que incluye, pero sin limitarse a, los dispositivos descritos en el presente documento. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende: una carcasa que comprende: una abertura de entrada en contacto fluido con un almohadilla de conjugado; un miembro de fuerza; un miembro de bloqueo deslizante que se pone en contacto con el miembro de fuerza; un miembro de unión que se pone en contacto con el miembro de fuerza; un botón de deslizamiento que se pone en contacto con el miembro de unión; y un sistema de membrana de detección que comprende la almohadilla de conjugado, una membrana de prueba y un miembro absorbente, al menos una porción de la almohadilla de conjugado, la membrana de prueba y el miembro absorbente son sustancialmente paralelas entre sí, el miembro de fuerza se pone en contacto con el sistema de membrana de detección y es capaz de aplicar presión sustancialmente perpendicular al sistema de membrana de detección, el botón de deslizamiento mueve el miembro de bloqueo deslizante, la almohadilla de conjugado comprende una unidad de detección de señal que comprende un tercer reactivo de captura; la membrana de prueba comprende un primer reactivo de captura fijado a la membrana de prueba.

Como se describe en el presente documento, la una o más muestras comprenden un primer analito de interés, un segundo analito de interés y una unidad de puente que comprende un segundo reactivo de captura, en donde el primer analito de interés comprende una primera unidad de interacción que se une al primer reactivo de captura y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de puente, y el segundo analito de interés comprende una primera unidad de interacción que une la unidad de puente y una segunda unidad de interacción. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal comprende el tercer reactivo de captura que se une al segundo analito, a la primera unidad de interacción o la segunda unidad de interacción del segundo analito, a un componente del complejo de primer y segundo analito, o a un componente de la unidad de puente que solo está presente cuando el complejo contiene el primer y segundo analitos.

Como se describe en el presente documento, la detección comprende mover la almohadilla de conjugado después de que una porción de una o más muestras se haya puesto en contacto y circulado a través de la almohadilla de conjugado, exponiendo así al menos una porción de la membrana de prueba para la detección de la unidad de detección de señal para indicar la presencia o ausencia de la pluralidad de analitos con una única señal. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se mueve moviendo el miembro de bloqueo deslizante. Como se describe en el presente documento, la una o más muestras se ponen en contacto con la almohadilla de conjugado antes de comprimir el sistema de membrana de detección. El método se puede realizar con múltiples muestras para detectar la pluralidad de analitos. Por ejemplo, si se realizan una pluralidad de reacciones de amplificación para producir una pluralidad de amplicones (analitos), cada una de la pluralidad de reacciones de amplificación se considera una muestra separada. Para detectar la pluralidad de analitos con una única señal, se tienen que mezclar las muestras. La pluralidad de muestras se pueden mezclar antes de poner en contacto el dispositivo o se pueden poner en contacto con el dispositivo (soporte sólido) secuencialmente, o simultáneamente.

Como se describe en el presente documento, el primer y segundo analito son amplicones. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo analitos son productos de reacción de PCR. Como se describe en el presente documento, la primera unidad de interacción del primer analito es un marcador de digoxigenina. Como se describe en el presente documento, la segunda unidad de interacción del primer analito es un marcador de rodamina. Como se describe en el presente documento, la primera unidad de interacción del segundo analito es un marcador de rodamina. Como se describe en el presente documento, la segunda unidad de interacción del segundo analito es un marcador de fluoresceína. Como se describe en el presente documento, el tercer reactivo de captura se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito. Como se describe en el presente documento, el tercer reactivo de captura es un reactivo de captura biotinilado. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal está recubierta con estreptavidina. Como se describe en el presente documento, la unidad de detección de señal es oro coloidal recubierto con estreptavidina. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo analitos son productos de amplificación de ácido nucleico, en donde: el primer analito comprende un marcador de digoxigenina y un marcador de rodamina; el segundo analito comprende un marcador de rodamina y un marcador de fluoresceína; el primer reactivo de captura es un anticuerpo anti-marcador de digoxigenina; el segundo reactivo de captura es un anticuerpo anti-marcador de rodamina; el tercer reactivo de captura es un anticuerpo anti-marcador de fluoresceína biotinilado; y la unidad de detección de señal es oro coloidal recubierto con estreptavidina.

Como se usa en el presente documento y en todas partes, los términos "unido" o "unión" puede incluir tanto unión directa como unión indirecta. Dos componentes que están directamente unidos entre sí también están en contacto físico entre sí. Dos componentes que están indirectamente unidos entre sí están unidos mediante un componente intermedio. Por ejemplo, el Componente A se puede unir indirectamente al Componente B si el Componente A se une directamente al Componente C y el Componente C se une directamente al Componente B. Por lo tanto, en dicho ejemplo, se diría que el Componente A está indirectamente unido al Componente B.

El término "reactivo de captura" significa un reactivo capaz de unirse a una molécula diana o analito que va a detectarse en una muestra. Los ejemplos de reactivos de captura incluyen, pero sin limitarse a, anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, un oligonucleótido, y un peptoide. Otros ejemplos de reactivos de captura incluyen, pero sin limitarse a, moléculas pequeñas o proteínas, tales como biotina, avidina, estreptavidina, hapteno, digoxigenina, BRDU, proteínas de unión a ácido nucleico monocatenario y bicatenario u otros agentes intercalantes, y similares, o moléculas que reconocen y capturan los mismos. Estos son ejemplos no limitantes de los reactivos de captura. También se pueden usar otros tipos de reactivos de captura.

Como se analiza en el presente documento, un reactivo de captura también puede referirse a, por ejemplo, anticuerpos. Los anticuerpos intactos, también conocidos como inmunoglobulinas, típicamente son proteínas glucosiladas tetrámeras compuestas por dos cadenas ligeras (L) de aproximadamente 25 kDa cada una, y dos cadenas pesadas (H) de aproximadamente 50 kDa cada una. Existen en los anticuerpos dos tipos de cadena ligera, denominadas lambda y kappa. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de cadenas pesadas, las inmunoglobulinas se asignan a cinco clases principales: A, D, E, G y M, y varias de estas se pueden dividir adicionalmente en subclases (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Cada cadena ligera está compuesta por un dominio variable (V) (VL) de extremo N y un dominio constante (C) (CL). Cada cadena pesada está compuesta por un dominio V (VH) de extremo N, tres o cuatro dominios C (CH) y una región bisagra. El dominio CH más proximal a VH se designa CHI. Los dominios VH y VL consisten en cuatro regiones de secuencias relativamente conservadas llamadas regiones estructurales (FR1, FR2, FR3 y FR4), que forman un armazón para tres regiones de secuencias hipervariables (regiones determinantes de la complementariedad, CDR). Las CDR contienen la mayoría de los restos responsables de las interacciones específicas del anticuerpo o proteína de unión a antígeno con el antígeno. Las CDR se denominan CDR1, CDR2 y CDR3. Por consiguiente, los constituyentes de CDR en la cadena pesada se denominan H1, H2 y H3, mientras que los constituyentes de CDR en la cadena ligera se denominan L1, L2 y L3. La CDR3 es la mayor fuente de diversidad molecular dentro del anticuerpo o sitio de unión de la proteína de unión al antígeno. H3, por ejemplo, puede ser de tan solo dos restos de aminoácido o de más de 26 aminoácidos. Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de las diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas en la técnica. Como revisión de la estructura de un anticuerpo, véase Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Eds. Harlow et al., 1988. Un experto en la materia reconocerá que cada estructura de subunidad, por ejemplo, una estructura CH, VH, CL, VL, CDR y/o FR, comprende fragmentos activos. Por ejemplo, los fragmentos activos pueden consistir en la porción de la subunidad VH, Vl o CDR que se une al antígeno, es decir, el fragmento de unión al antígeno, o la porción de la subunidad CH que se une a y/o activa un receptor y/o complemento de Fc.

Los ejemplos no limitantes de fragmentos de unión englobados dentro del término "anticuerpo específico de antígeno" usados en el presente documento incluyen: (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, ^{V h ,} CL y CHI; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CHI; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de una sola rama del anticuerpo, (v) un fragmento dAb, que consiste en un dominio VH; y (vi) una CDR aislada. Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, estén codificados por genes independientes, se pueden unir recombinantemente por un enlazador sintético, creando una única cadena proteica en la que los dominios VL y VH se emparejan para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv monocatenario (scFv)). El enlazador más comúnmente usado es un péptido (Gly⁴Ser⁾³de 15 restos, pero también se conocen en la técnica otros enlazadores. Los anticuerpos monocatenarios también pretenden estar englobados dentro de los términos "anticuerpo o proteína de unión al antígeno", o "fragmento de unión a antígeno" de un anticuerpo. El anticuerpo también puede ser un anticuerpo policlonal, anticuerpo monoclonal, anticuerpo quimérico, fragmento de unión a antígeno, fragmento Fc, anticuerpos monocatenarios, o cualquier derivado de los mismos. El reactivo de captura o anticuerpo también puede ser una región VHH, un anticuerpo biespecífico, un fragmento de péptido que comprende un sitio de unión al antígeno, o un compuesto que se une a un antígeno de interés. El antígeno de interés puede ser un amplicón u otro tipo de analito.

Estos anticuerpos se pueden comprar u obtener usando técnicas convencionales conocidas para los expertos en la materia, y los fragmentos se criban para utilidad del mismo modo que los anticuerpos intactos. Se crea diversidad de anticuerpos por múltiples genes de la línea germinal que codifican dominios variables y una variedad de acontecimientos somáticos. Los acontecimientos somáticos incluyen la recombinación de segmentos de genes variables con segmentos de genes de diversidad (D) y de unión (J) para hacer un dominio VH completo, y la recombinación de segmentos de genes variables y de unión para hacer un dominio VL completo. El proceso de recombinación en sí es impreciso, dando como resultado la pérdida o adición de aminoácidos en las uniones V(D)J. Estos mecanismos de diversidad ocurren en el desarrollo de linfocitos B antes de la exposición al antígeno. Después de la estimulación antigénica, los genes de anticuerpo expresados en linfocitos B se someten a mutación somática. Basándose en el número estimado de segmentos de genes de la línea germinal, la recombinación al azar de estos segmentos, y el emparejamiento VH-VL al azar, se pueden producir hasta 1,6 x 107 anticuerpos diferentes (Fundamental Immunology, 3a ed. (1993), ed. Paul, Raven Press, Nueva York, N.Y.). Cuando se tienen en cuenta otros procesos que contribuyen a la diversidad de anticuerpos (tales como mutación somática), se cree que se pueden generar más de 1 x 1010 anticuerpos diferentes (Immunoglobulin Genes, 2a ed. (1995), eds. Jonio et al., Academic Press, San Diego, Calif.). Debido a los muchos procesos implicados en la generación de diversidad de anticuerpos, es poco probable que los anticuerpos monoclonales independientemente derivados con la misma especificidad por antígenos tengan secuencias de aminoácidos idénticas.

Las moléculas de anticuerpo o proteína de unión al antígeno capaces de interaccionar específicamente con los antígenos, epítopos, u otras moléculas descritas en el presente documento, se pueden producir por métodos bien conocidos para los expertos en la materia. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales se pueden producir por generación de hibridomas según métodos conocidos. A continuación, los hibridomas formados de este modo se pueden cribar usando métodos convencionales, tales como ensayo inmunoadsorbente ligado a enzimas (ELISA) y análisis Biacore, para identificar uno o más hibridomas que producen un anticuerpo que interacciona específicamente con una molécula o compuesto de interés.

Como alternativa a la preparación de hibridomas que secretan anticuerpos monoclonales, se puede identificar un anticuerpo monoclonal para un polipéptido de la presente divulgación y aislar por cribado de una biblioteca combinatoria recombinante de inmunoglobulinas (por ejemplo, una biblioteca de anticuerpos de presentación en fagos) con un polipéptido de la presente invención para así aislar los miembros de la biblioteca de inmunoglobulina que se unen al polipéptido. Se conocen bien por los expertos en la materia las técnicas y los kits comercialmente disponibles para generar y cribar bibliotecas de presentación en fagos. Además, se pueden encontrar en la bibliografía ejemplos de métodos y reactivos particularmente aceptados para su uso en la generación y el cribado de bibliotecas de anticuerpos o de proteínas de unión a antígeno.

El término "reactivo de captura" también incluye anticuerpos quiméricos, tales como anticuerpos humanizados, así como anticuerpos completamente humanizados. Como se describe en el presente documento, el reactivo de captura es un anticuerpo anti-E. coli 0157:H7 de cabra n.° de cat: 70-XG13 (Fitzgerald Industries); E. coli 0157:H7 mono n.° de cat: 10-E i 3a (Fitzgerald Industries); E. coli 0157:H7 n.° de cat: 10C-CR1295M3 (Fitzgerald Industries); E. coli 0157:H7 mono n.° de cat: 10-E12A (Fitzgerald Industries); o de cabra anti-IgG de ratón n.° de cat: ABSE-020 (DCN). El reactivo de captura también puede ser, por ejemplo, proteína A, proteína G, y similares. El reactivo de captura también puede ser un anticuerpo que se une o se une específicamente a un marcador fluorescente (por ejemplo, fluoresceína o rodamina), un hapteno, digoxigenina y similares. Un reactivo de captura, tal como una estreptavidina, se puede conjugar con oro coloidal. El complejo de estreptavidina-oro se puede usar entonces, por ejemplo, para unirse a un producto biotinilado, tal como un anticuerpo biotinilado. Un ejemplo no limitante se puede observar en la Figura 3. Los marcadores mostrados en la Figura 3 son para fines ilustrativos solo y se pueden usar otras permutaciones.

El reactivo de captura también puede incluir un anti-anticuerpo, es decir, un anticuerpo que reconoce otro anticuerpo, pero no es específico para un analito, tal como, pero sin limitarse a, anticuerpo anti-IgG, anti-IgM, o anti-IgE.

Como se usa en el presente documento, el término "concurrentemente" se refiere a la detección de múltiples analitos simultáneamente o casi simultáneamente. Como se usa en el presente documento, "un método de detección, concurrentemente, de una pluralidad de analitos con una única señal", o variaciones de los mismos, se refiere a un método que usa un único ensayo (por ejemplo, único pocillo, único punto, única localización sobre una matriz) o un único uso de un dispositivo para detectar la pluralidad de analitos con una única señal. Si se usan diferentes dispositivos, pocillos o matrices para detectar la pluralidad de analitos con la misma señal, esto no es un método de detección, concurrentemente, de una pluralidad de analitos con una única señal. Para que un método sea un método de detección, concurrentemente, de una pluralidad de analitos con una única señal, el método debe generar solo una única señal (ejemplos de señales se describen en el presente documento) en una única localización (pocillo, punto, línea sobre una membrana u otro tipo de soporte sólido, y similares), que informe al usuario de que la pluralidad de analitos están presentes en la muestra. Por ejemplo, la misma señal que se usa en diferentes pocillos para indicar si un único analito está presente en ese pocillo (o sitios sobre una matriz) y luego analizar los múltiples pocillos (o sitios) para determinar si la pluralidad de analitos están presentes no, es un método de detección, concurrentemente, de una pluralidad de analitos con una única señal.

Como se usa en el presente documento, el término "única señal" significa la detección de una señal basándose en un único resto o método. Por ejemplo, si la única señal es el color rojo, entonces la pluralidad de analitos se indica solo por la presencia del color rojo. Es decir, el color rojo, en este ejemplo no limitante, indica que la pluralidad de analitos están presentes en la muestra. En cambio, si un analito se indica por el color rojo y un segundo analito se indica por el color amarillo, el uso de dos colores (es decir, señales) no es la detección de una pluralidad de analitos con una única señal. La señal no se limita a detección colorimétrica. En el presente documento se proporcionan ejemplos de señales que se pueden usar.

El término "detectar" o "detección" se usa en el sentido más amplio para incluir mediciones cualitativas y/o cuantitativas de un analito diana.

Como se usa en el presente documento, el término "unidad de interacción" significa una parte del analito o una marca o marcador heterólogo que se une al analito que es reconocida por o al que se une otra molécula (por ejemplo, el reactivo de captura, la unidad de puente, o la unidad de detección de señal). La unidad de interacción puede ser parte del propio analito o puede ser una marca o marcador heterólogo. La unidad de interacción también puede ser un anticuerpo u otro tipo de reactivo de captura que reconoce el analito. Como se describe en el presente documento, el analito puede comprender más de 1,2, 3, 4 o 5, unidades de interacción. Como se describe en el presente documento, la unidad de interacción es un reactivo de captura que se une a otra unidad de interacción presente sobre el propio analito o una marca heteróloga que es parte del analito. Por ejemplo, si el analito es un péptido o parte de una proteína, una parte de la propia proteína o péptido puede ser la unidad de interacción reconocida por el reactivo de captura, unidad de puente, o la unidad de detección de señal. Como se describe en el presente documento, el péptido también se puede unir covalentemente a una marca o marcador heterólogo y la marca o marcador heterólogo o el complejo del péptido con la marca o marcador heterólogo se considera la unidad de interacción. Por tanto, como se describe en el presente documento, un analito comprende una primera unidad de interacción y/o una segunda unidad de interacción. Como se describe en el presente documento, la unidad o unidades de interacción pueden ser intrínsecas al propio analito o la unidad o unidades de interacción se podrían añadir mediante algún otro método, tal como reticulación, unión covalente mediante una reacción química, interacciones no covalentes (por ejemplo, anticuerpoantígeno, hibridación entre una parte del analito y otra molécula, y similares). Donde la unidad de interacción se forma por la hibridación de dos moléculas (por ejemplo, dos secuencias de nucleótidos), dicha parte del producto de hibridación que es reconocida por otra molécula se consideraría la unidad de interacción. Las unidades de interacción también se pueden añadir al analito mediante una reacción de amplificación. Esto se puede producir mediante el uso de cebadores que contienen las unidades de interacción. Las unidades de interacción también pueden tener señales detectables, pero no son estas señales las que se detectan.

Como se usa en el presente documento, el término "heterólogo" en referencia a la unidad de interacción significa un grupo, molécula o resto que no es nativo del analito. Por ejemplo, un producto de amplificación puede comprender solo moléculas de ácidos nucleicos o bases de nucleótidos. El producto de amplificación, sin embargo, se puede conjugar con o unir a una marca heteróloga, tal como, pero sin limitarse a, hapteno, biotina, digoxigenina, una molécula fluorescente (por ejemplo, fluoresceína o rodamina) y similares. Los ejemplos de unidades de interacción heteróloga incluyen, pero sin limitarse a, hapteno, biotina, moléculas de ácido nucleico, fragmentos de péptido (por ejemplo, marcas de His, marcas de GST, y similares), enzimas, estreptavidina, avidina, moléculas fluorescentes, y similares. Esta lista no es limitante y se puede usar cualquier unidad de interacción. Los analitos se pueden marcar con moléculas tales como digoxigenina, rodamina, fluoresceína, DNP, BRDU, y luego detectar por reactivos de captura que son específicos para una molécula dada.

Como se describe en el presente documento, se proporcionan métodos de detección de una pluralidad de analitos. Los métodos actualmente descritos se pueden usar para detectar múltiples analitos. Un resultado inesperado y sorprendente es que se pueden detectar múltiples analitos usando una única señal. Esto tiene el resultado inesperado de que se puede detectar la presencia, o ausencia, de múltiples analitos con solo la detección de una señal. Esto es a diferencia de la detección de la presencia de múltiples analitos usando distintas señales en la misma reacción para detectar la presencia de múltiples analitos en una muestra o que requiere la realización de reacciones y métodos separados para detectar múltiples analitos. Es decir, como se describe en el presente documento, los métodos de detección de múltiples analitos concurrentemente con una única señal, de modo que la detección de una única señal indique la presencia de los múltiples analitos en una muestra o que la ausencia de la única señal indique la ausencia de los múltiples analitos en la muestra. La divulgación proporciona métodos de detección de al menos 2, 3, 4 o 5 analitos concurrentemente con una única señal. Como se describe en el presente documento, el método se puede usar para detectar 2, 3, 4 o 5 diferentes analitos concurrentemente con una única señal. Aunque se proporcionan muchos ejemplos para detectar 2 analitos, los métodos se pueden adaptar y modificar basándose en la presente divulgación para la detección de 3, 4 o 5 analitos.

Como se usa en el presente documento, el término "diferentes analitos" significa que los analitos no son los mismos. Los diferentes analitos, sin embargo, se pueden denominar con el mismo nombre, pero ser de diferentes organismos o de diferentes cepas del mismo organismo. Por ejemplo, diferentes organismos contienen genes y proteínas que tienen la misma función y, por lo tanto, se les ha dado el mismo nombre. Pero los genes o proteínas son de diferentes fuentes y así se consideran diferentes analitos. Pueden o no tener diferentes secuencias. Diferentes analitos también puede significar analitos de diferentes organismos. Por ejemplo, existen muchas cepas de E. coli. No todas las cepas de E. coli provocan enfermedades transmitidas por un alimento. Los presentes métodos se pueden usar, por ejemplo, para detectar una pluralidad de analitos de una cepa de E. coli patógena en lugar de detectar un analito de una cepa de E. coli no patógena. Aunque se puede hacer referencia en toda la presente divulgación a tipos específicos de analitos, los analitos pueden ser cualquier tipo de analito, tal como, pero sin limitarse a, las clases de analitos descritas en el presente documento.

Por ejemplo, como se describe en el presente documento, se proporcionan métodos de detección, concurrentemente, de un primer analito y un segundo analito. Como se describe en el presente documento, el método comprende poner en contacto un soporte sólido, que comprende un primer reactivo de captura con un primer analito, un segundo analito, una unidad de puente, que comprende un segundo reactivo de captura, y una unidad de detección de señal que comprende un tercer reactivo de captura; y detectar la presencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia del primer analito y el segundo analito. Como se describe en el presente documento, el primer reactivo de captura se fija al soporte sólido. Como se describe en el presente documento, el primer analito comprende una primera unidad de interacción que se une al primer reactivo de captura y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de puente; el segundo analito comprende una primera unidad de interacción que une la unidad de puente y una segunda unidad de interacción que se une a la unidad de detección de señal. A continuación, se puede detectar la unidad de detección de señal. Si se detecta la unidad de detección de señal, esto indica que están presentes los múltiples analitos.

Sin desear quedar ligados a teoría alguna, los múltiples analitos se pueden detectar concurrentemente formando un complejo. Como se describe en el presente documento, el complejo comprende el soporte sólido, el primer analito, el segundo analito, la unidad de puente y la unidad de detección de señal, en donde cada uno de los miembros del complejo se unen entre sí directa o indirectamente. La muestra se puede lavar mientras que se retiene el soporte sólido y el complejo solo se detectará si se forma el complejo. Los ejemplos de estos complejos se pueden observar en las Figuras 1-3, que se describen adicionalmente en el presente documento.

La Figura 1 ilustra un complejo que se podría formar para detectar dos analitos concurrentemente con una única señal. La Figura 1 ilustra un reactivo de captura 15 fijado a un soporte sólido 10. El reactivo de captura 15 se une al primer analito 20. La unidad de puente 30 se une al primer analito. La unidad de puente también se une al segundo analito 40. La Figura 1 también ilustra una unidad de detección de señal 60 que comprende un reactivo de captura 50 que se une al segundo analito 40. La Figura 1 ilustra que este complejo solo se forma cuando están presentes todos los miembros y pueden unirse entre sí. A continuación, se puede detectar la unidad de detección de señal. La Figura 3 también muestra una descripción de la detección de dos analitos con una única señal. La Figura 3 muestra marcadores específicos (por ejemplo, FITC, TAMRA, DIG, biotina, estreptavidina, etc...), pero estos marcadores se pueden modificar según la presente divulgación.

Como se describe en el presente documento, el método comprende una o más etapas de lavado. La etapa de lavado se puede usar para retirar material no unido. Por ejemplo, si el soporte sólido se pone en contacto con una primera muestra, el soporte sólido se puede lavar para retirar cualquier material no unido. Como se describe en el presente documento, donde el soporte sólido es una perla, las perlas se pueden poner en contacto con la muestra y entonces las perlas se pueden lavar. El lavado de perlas es rutinario y bien conocido por un experto en la materia. El método de lavar perlas u otros tipos de soportes sólidos se puede alterar o elegir basándose en el soporte sólido específico que se usa y frecuentemente no es una característica crítica.

Como se describe en el presente documento, la muestra con el primer analito se pone en contacto con el soporte sólido. Como se describe en el presente documento, la mezcla se lava de forma que ya no esté presente ningún material no unido al soporte sólido. Como se describe en el presente documento, el soporte sólido también se pone en contacto con la misma muestra o una muestra diferente que comprende el segundo analito y/o la unidad de puente. A continuación, la mezcla se puede lavar otra vez para retirar cualquier material no unido. Como se describe en el presente documento, se añade una unidad de detección de señal que comprende un reactivo de captura. También se puede incluir una etapa de lavado para retirar cualquier unidad de detección de señal no unida. Entonces se puede detectar la unidad de detección de señal o se puede añadir otro reactivo que detecte la presencia de la unidad de detección de señal. Como se describe en el presente documento, todas las etapas se realizan simultáneamente o casi simultáneamente. Durante la realización del método, se puede insertar una etapa de lavado cuando corresponda.

Como se describe en el presente documento, los diferentes analitos o muestras se pueden mezclar entre sí antes o aplicar simultáneamente al soporte sólido. Las muestras pueden ser, por ejemplo, mezclas de reacción de amplificación que se usaron para producir, o previstas para producir, los analitos. Como se describe en el presente documento, se realizarán diferentes reacciones de amplificación para amplificar la pluralidad de analitos. Por lo tanto, antes de que las muestras o los analitos se apliquen al soporte sólido, las muestras o analitos se pueden mezclar entre sí. Las muestras o analitos también se pueden mezclar con los reactivos de captura y/o unidades de puente antes de ponerse en contacto con la superficie sólida.

Como se describe en el presente documento, la primera y segunda unidad de interacción del primer analito y la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito son, cada una independientemente, una unidad de interacción heteróloga. Como se describe en el presente documento, una unidad de interacción del primer analito y una unidad de interacción del segundo analito es un hapteno. Como se describe en el presente documento, la unidad de interacción del primer analito y el segundo analito es una molécula de fluoresceína o rodamina. Por consiguiente, como se describe en el presente documento, el primer analito y segundo analito tienen al menos una unidad de interacción en común. La característica compartida de la unidad de interacción permitirá que la unidad de puente proporcione los dos analitos en un complejo detectable. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo analitos no tienen la misma unidad de interacción. En dicho caso, la entidad de puente sería un reactivo de captura bivalente (por ejemplo, anticuerpo bivalente) que puede unir los dos analitos entre sí. El reactivo de captura bivalente sería capaz de unir tanto el primer como el segundo analitos simultáneamente. Como se describe en el presente documento, cada una de las unidades de interacción presentes sobre la pluralidad de analitos son diferentes. Como se describe en el presente documento, algunas de las unidades de interacción son diferentes, pero algunas de las unidades de interacción son las mismas. Como se describe en el presente documento, el analito comprende una unidad de interacción de hapteno y una unidad de interacción de biotina. Como se describe en el presente documento, el primer analito comprende una unidad de interacción de digoxigenina y una unidad de interacción de rodamina; el segundo analito comprende una unidad de interacción de rodamina y una unidad de interacción de FITC, y la unidad de puente se une a la unidad de interacción de rodamina. La unidad de puente puede entonces formar el complejo que contiene tanto el primer como el segundo analito. Esto puede verse, por ejemplo, en la Figura 3.

Como se describe en el presente documento, la pluralidad de los analitos son el mismo tipo de analito. Por ejemplo, cada uno de los analitos que se detectan puede ser un péptido. Como se describe en el presente documento, cada uno de los analitos es una molécula de ácido nucleico, tal como un producto de amplificación (por ejemplo, amplicón). Los analitos también pueden ser cualquier tipo, incluyendo, pero sin limitarse a, los analitos descritos en el presente documento. Como se describe en el presente documento, los analitos son diferentes. Como se describe en el presente documento, un primer analito es un producto de amplificación y un segundo analito es una proteína o péptido. Se puede usar cualquier combinación de analitos.

Como se usa en el presente documento, el término "unidad de puente" o "puente" significa una molécula o moléculas que pueden enlazar dos o más analitos en un complejo. Es decir, por ejemplo, la unidad de puente puede unirse a una unidad de interacción sobre un primer analito y una unidad de interacción sobre un segundo analito. Si solo se detectan dos analitos, se puede usar una unidad de puente. Si se detectan tres analitos, se pueden usar dos unidades de puente. Como se describe en el presente documento, los métodos usan "n-1" unidades de puente, donde "n" es el número de analitos que se detecta. Como se describe en el presente documento, se usa una única unidad de puente para detectar más de 2 analitos. Los ejemplos de unidades de puente incluyen, pero sin limitarse a, moléculas de inmunoglobulina (por ejemplo, IgM, IgE, IgG, IgA, y similares), estreptavidina, y una molécula que comprende una pluralidad de reactivos de captura de forma que la unidad de puente pueda unirse a más de una unidad de interacción. Como se describe en el presente documento, la unidad de puente es un reactivo de captura multivalente.

Como se describe en el presente documento, la unidad de puente es un complejo de compuestos, sustancias, o macromoléculas. Por ejemplo, una unidad de puente podría comprender una nanopartícula recubierta con anticuerpos y un anticuerpo independiente. En este ejemplo no limitante, la nanopartícula recubierta con anticuerpos puede contener anticuerpos que se unen a un analito o unidad de interacción sobre el analito y también contienen anticuerpos que se unen al anticuerpo independiente. El anticuerpo independiente se puede unir a un analito diferente. La interacción de la nanopartícula recubierta con anticuerpos y el anticuerpo independiente sería entonces capaz de conectar mediante puente los diferentes analitos. Se puede ver una ilustración no limitante de este complejo de puente en las Figuras 4 y 5, que también se describen más adelante. También se podrían realizar otras variaciones del puente que es un complejo. La estructura y forma exacta de la unidad de puente no es esencial, mientras que pueda "conectar mediante puente" una pluralidad de analitos en un complejo. Por tanto, el puente se podría constituir de múltiples subunidades o componentes para conectar mediante puente los analitos entre sí. Aunque la unidad de puente se puede ilustrar y analizar conectando mediante puente dos analitos, la unidad de puente se puede diseñar para conectar mediante puente más de 2 analitos, tales como 3, 4, 5, o más. Por lo tanto, como se describe en el presente documento, la unidad de puente conecta mediante puente 2, 3, 4, 5, o más analitos. Como se describe en el presente documento, la unidad de puente conecta mediante puente al menos 2, 3, 4 o 5 analitos. El ejemplo no limitante de conexión mediante puente de 2 analitos es para fines ilustrativos solamente y las descripciones divulgadas en el presente documento no se limitan a conectar mediante puente solo 2 analitos.

Como se analiza en el presente documento, los presentes métodos se pueden aplicar a la detección de más de 2 analitos. Por ejemplo, se proporciona un método de detección de un primer analito, un segundo analito y un tercer analito concurrentemente con una única señal. Para la detección de analitos adicionales, los métodos se pueden adaptar de una manera similar. Como se describe en el presente documento, el método comprende poner en contacto el primer, segundo y tercer analitos con un soporte sólido, una primera unidad de puente, una segunda unidad de puente y una unidad de detección de señal; y detectar la presencia de la unidad de detección de señal que indica la presencia del primer, segundo y tercer analitos concurrentemente con una única señal, en donde el primer analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el segundo analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el tercer analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el soporte sólido comprende un primer reactivo de captura que se une a la primera unidad de interacción del primer analito; la primera unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito; la segunda unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del marcador del segundo analito y la tercera unidad de interacción del tercer analito; y la unidad de detección de señal se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito. Sin quedar ligados a teoría alguna, se espera que los analitos puedan ser detectados concurrentemente debido a que el primer, segundo y tercer analitos forman un complejo, en donde el complejo comprende el soporte sólido, el primer analito, el segundo analito, el tercer analito, la primera unidad de puente, la segunda unidad de puente y la unidad de detección de señal, en donde cada uno de los miembros del complejo se unen entre sí directa o indirectamente.

La Figura 2 ilustra un complejo que se puede formar para detectar tres analitos, que es análogo al ejemplo ilustrado en la Figura 1. La Figura 2 ilustra un soporte sólido 10 con un reactivo de captura 15 unido a un primer analito 70. El primer analito está unido a una primera unidad de puente 80. La primera unidad de puente está unida a un segundo analito 20, que también está unido a una segunda unidad de puente 30. La segunda unidad de puente también está unida a un tercer analito 40, que está unido a un reactivo de captura 50. El reactivo de captura también está unido a una unidad de detección de señal 60. Por tanto, la Figura 2 ilustra un ejemplo no limitante de cómo se pueden detectar tres analitos con una única señal.

La Figura 4 ilustra un complejo de puente no limitante constituido por más de una molécula, macromolécula, o sustancia. Esto se puede denominar un complejo de puente de múltiples componentes. La Figura 4 ilustra una unidad de puente 30 que comprende una partícula 34, un primer reactivo de captura 31, un segundo reactivo de captura 32 y un tercer reactivo de captura 33. La unidad de puente 30 es capaz de poner juntos el primer analito 20 y el segundo analito 40 y a partir de un complejo que enlaza el primer analito 20 y el segundo analito 40. La Figura 4 ilustra una partícula 34 (por ejemplo, nanopartícula, poliestireno, agarosa, y similares) recubierta con un primer reactivo de captura 31 que se une al primer analito 20, ya sea directa o indirectamente mediante una unidad de interacción, un tercer reactivo de captura 33, que también está presente sobre la partícula 34, que se une a un segundo reactivo de captura 32 que está unido al segundo analito 40. A continuación, este complejo se puede detectar según los métodos y composiciones descritos en el presente documento, que se ilustra en la Figura 5. La Figura 5 muestra el complejo de puente de la Figura 4 que interacciona con un soporte sólido 10 con un reactivo de captura 15 unido a un primer analito 20 y una unidad de detección de señal 60 que comprende un reactivo de captura 50 que se une al segundo analito 40. Como se analiza en el presente documento, la ilustración de la unidad de detección de señal que se une al segundo analito es para fines ilustrativos solamente. La unidad de detección de señal también puede unir a otras partes del complejo, mientras que la unidad de detección de señal no se está uniendo al analito que está interaccionando con el soporte sólido o el propio soporte sólido. El soporte sólido 40 puede ser, por ejemplo, una membrana de prueba, tal como la membrana de prueba que se muestra en la Figura 3. Otros ejemplos de soportes sólidos se proporcionan en el presente documento.

La presente divulgación describe complejos que comprenden un soporte sólido, un primer analito, un segundo analito, una unidad de puente y una unidad de detección de señal en donde cada uno de los miembros del complejo se unen entre sí directa o indirectamente. Como se describe en el presente documento, el soporte sólido está unido al primer analito, la unidad de puente está unida al primer analito y el segundo analito, y la unidad de detección de señal está unida al segundo analito. Como se describe en el presente documento, el soporte sólido comprende un primer reactivo de captura, el primer analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción, el segundo analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción, la unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito, y la unidad de detección de señal comprende un reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito.

Como se describe en el presente documento, el complejo comprende un soporte sólido, un primer analito, un segundo analito, un tercer analito, una primera unidad de puente, una segunda unidad de puente y una unidad de detección de señal, en donde el soporte sólido, el primer analito, el segundo analito, el tercer analito, la primera unidad de puente, la segunda unidad de puente y la unidad de detección de señal están unidos entre sí directa o indirectamente. Como se describe en el presente documento, el soporte sólido se une al primer analito, la primera unidad de puente se une al primer analito y el segundo analito, la segunda unidad de puente se une al segundo analito y el tercer analito, y la unidad de detección de señal se une al tercer analito. Como se describe en el presente documento, el soporte sólido comprende un primer reactivo de captura, el primer analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción, el segundo analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción, el tercer analito comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción, la primera unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito, la segunda unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del segundo analito y la primera unidad de interacción del tercer analito, y la unidad de detección de señal comprende un reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito.

Como se describe en el presente documento, se pueden usar los métodos actualmente descritos para detectar un patógeno trasmitido por alimentos por la detección de una pluralidad de analitos de patógenos transmitidos por alimentos con una única señal. Por ejemplo, se puede procesar una muestra para aislar un analito (por ejemplo, un antígeno o una toxina, o se puede aislar o amplificar un ácido nucleico de patógeno trasmitido por alimentos). La pluralidad de analitos (por ejemplo, proteína de patógeno transmitida por los alimentos y/o un amplicón) se puede detectar concurrentemente con los métodos descritos en el presente documento. Los métodos pueden entonces proporcionar mayor confianza en la especificidad de la prueba y evitar negativos falsos. Como se describe en el presente documento, un resultado positivo que indica la presencia de un patógeno trasmitido por alimentos requiere la detección de 2, 3 o 4 analitos. Los presentes métodos se pueden usar para detectar los analitos concurrentemente con una única señal. La única señal proporciona un resultado más fácil de interpretar, puesto que la señal solo será detectable si todos de la pluralidad de analitos que se detectan están presentes en la muestra. Por tanto, si se van a detectar 2 analitos, entonces la señal solo será detectable si están presentes ambos analitos. Como se describe en el presente documento, la señal solo es detectable cuando están presentes 3 analitos. Este tipo de métodos se puede aplicar a otros métodos de detección.

Como se describe en el presente documento, el método se puede usar para detectar 3 clases de analitos para proporcionar una prueba positiva para contaminación de alimentos. Como se describe en el presente documento, uno de los analitos es una toxina (por ejemplo, toxina Shiga 1 y/o 2). Se puede detectar propia la toxina o se puede detectar la secuencia de nucleótidos que codifica o controla la producción de la toxina. Como se describe en el presente documento, uno de los analitos es el gen eae, que también se puede denominar un factor de virulencia. El gen eae se puede encontrar, o expresar en, por ejemplo, Escherichia coli enterohemorrágica.

Como se describe en el presente documento, uno de los analitos es un analito de serotipo, que puede ser un antígeno que se produce específicamente por una cepa de un patógeno trasmitido por alimentos. Como se describe en el presente documento, el analito de serotipo es un serotipo de E. coli. Como se describe en el presente documento, el serotipo de E. coli es O26, O45, 0103, O111, 0121 y 0145. Por lo tanto, como se describe en el presente documento, una prueba positiva para contaminación transmitida por alimentos requiere la detección de 3 analitos con una única señal, en donde los 3 analitos son la toxina Shiga (por ejemplo, toxina Shiga 1 y/o 2), el gen eae y un analito de serotipo elegido de serotipo de E. coli es O26, O45, 0103, O111, 0121 y 0145. Como se describe en el presente documento, el analito de serotipo es una proteína específicamente expresada por una cepa patógena. Como se describe en el presente documento, el analito es una secuencia de ácidos nucleicos que codifica el antígeno. Como se describe en el presente documento, la secuencia de ácidos nucleicos es un fragmento de la secuencia codificante del antígeno. El fragmento específico no es crítico y un experto en la materia puede determinar las secuencias o sus fragmentos para amplificar usando métodos rutinarios. Como se analiza en el presente documento, la secuencia diana se puede amplificar y opcionalmente marcar con una unidad de interacción heteróloga. A continuación, los analitos se pueden detectar según los métodos proporcionados en el presente documento.

Por ejemplo, si una prueba positiva para un virus requiere la presencia de dos secuencias distintas de ácidos nucleicos, las dos secuencias de ácidos nucleicos se pueden detectar concurrentemente con una única señal usando los métodos descritos en el presente documento en lugar de detectar las dos secuencias de ácidos nucleicos por separado con más de un señal. Además, si la presencia de cáncer requiere la detección de una pluralidad de genes que se expresan en la muestra, los genes se pueden detectar concurrentemente con una única señal usando analitos que se correlacionan con su expresión (por ejemplo usando RT-PCR para amplificar el producto génico) según un método descrito en el presente documento. Por lo tanto, los métodos actualmente descritos tienen una gran aplicabilidad y se pueden usar con cualquier pluralidad de analitos (moléculas diana) e incluso con analitos que no son los mismos.

Como se describe en el presente documento, se proporcionan métodos para detectar dos o más analitos que comprenden detectar los múltiples analitos usando un dispositivo de flujo (vertical o lateral). Los ejemplos de dispositivos de flujo vertical y sus métodos de uso se proporcionan en las patentes de EE. UU. n.° 8.012.770, 8.183.059 y las solicitudes de patente de EE. UU. n.° 13/500.997, 13/360.528, 13/445.233. Los dispositivos se pueden adaptar para la detección de múltiples analitos usando una única señal.

Por consiguiente, las descripciones proporcionadas en el presente documento proporcionan métodos de detección de múltiples analitos con una única señal usando dispositivos de flujo vertical y dispositivos que emplean flujo vertical. El flujo vertical permite que el analito y/o la muestra circulen a través de capas/membranas del sistema de membrana de detección de analitos. Por "a través de capas" o "a través de membranas" se pretende hacer referencia a la muestra que circula a través de las capas y verticalmente a través de las capas. Como se describe en el presente documento, la muestra no circula horizontal o lateralmente a través de las diferentes capas/membranas.

Los siguiente términos se usan conjuntamente con la descripción de los diversos dispositivos de flujo vertical. Otros términos que se definen relevantes para algunos dispositivos de flujo vertical o sus usos también se describen en todas partes.

El término "accionador de presión" y "accionador de fuerza" se pueden usar indistintamente y se refieren a un componente que puede ejercer, por ejemplo, presión mediante la aplicación de fuerza. Un accionador de fuerza también se puede denominar un miembro de fuerza. Los ejemplos incluyen, pero sin limitarse a, diversos miembros de fuerza que se describen en el presente documento. Otros ejemplos incluyen, pero sin limitarse a, pistones u otras estructuras de soporte sólido. La posición del accionador de fuerza con respecto a otro componente puede ser subida, bajada, o movida lateralmente. La posición del accionador de fuerza se puede controlar manualmente o mediante una unidad de procesamiento de señales (por ejemplo, ordenador). Se puede usar la capacidad para controlar la posición del accionador de fuerza para regular la fuerza (por ejemplo, presión) que se aplica a otro componente, tal como, pero sin limitarse a, un sistema de membrana de detección de analitos. Regulando la fuerza aplicada al sistema de membrana, se puede regular el caudal de la muestra. Se puede usar la fuerza para mantener constante el caudal de la muestra a través del sistema de membrana, o el caudal puede ser variable. El caudal también se puede detener y permitir que la muestra permanezca en diferentes capas del sistema de membrana. Por ejemplo, el caudal de la muestra puede ser cero o próximo a cero cuando la muestra se pone en contacto con la almohadilla de conjugado. Después de descansar sobre la almohadilla de conjugado, se puede aumentar el caudal modulando la presión que se aplica por el accionador de fuerza. La muestra puede entonces pasar a través de todo el sistema de membrana, o se puede modular la fuerza que se aplica para permitir que la muestra permanezca (descanse) sobre otra capa del sistema de membrana. La fuerza puede ser regulada con precisión, ya sea manualmente o usando una unidad de procesamiento de señales (por ejemplo, ordenador), el caudal se puede modificar en cualquier momento a medida que la muestra circula verticalmente a través del sistema de membrana. El caudal también se puede regular basándose en la capacidad de absorción de las membranas en el sistema de membrana y/o el número de membranas del sistema. Basándose en la capacidad de absorción, se puede modular (por ejemplo, aumentar o reducir) el caudal.

El caudal se puede medir en cualquier unidad que incluye, pero sin limitarse a, p/min o p/s, y similares. El caudal durante una permanencia puede ser, por ejemplo, 0 p/s, o inferior a 1, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2 o 0,1 p/s o p/min. El caudal se puede monitorizar manualmente o por una unidad de procesamiento de señales (por ejemplo, ordenador) y regular por la misma. El caudal se puede regular y monitorizar por métodos bien conocidos y rutinarios conocidos por un experto en la materia, además de los descritos en el presente documento. Como se describe en el presente documento, el caudal es de aproximadamente 0 a 1 ml/min, aproximadamente 0-10 ml/min, aproximadamente 1-9 ml/min, aproximadamente 1-8 ml/min, aproximadamente 1-7 ml/min, aproximadamente 1-6 ml/min, aproximadamente 1-5 ml/min, aproximadamente 1-4 ml/min, aproximadamente 1-3 ml/min, aproximadamente 1-2 ml/min, aproximadamente 0,5-1,5 ml/min, aproximadamente 1-1,5 ml/min, o aproximadamente 0,5-1 ml/min. Como se describe en el presente documento, el caudal es de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 ml/min. Como se describe en el presente documento, el caudal es de al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 ml/min. Como se describe en el presente documento, el caudal es de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 ml/min.

Como se describe en el presente documento, los dispositivos usados para detectar múltiples analitos con una única señal comprenden una carcasa que comprende un primer miembro de carcasa y un segundo miembro de carcasa. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembros de carcasa se pueden construir como una única unidad. La carcasa puede comprender una abertura de entrada. La abertura de entrada permite la introducción de una muestra en el ensayo cromatográfico. Como se describe en el presente documento, el primer miembro de carcasa comprende la abertura de entrada. La abertura de entrada puede ser de tamaño suficiente para manipular una cantidad apropiada de volumen de una solución que se añade al dispositivo. Como se describe en el presente documento, el tamaño de la abertura es lo suficientemente grande como para manipular aproximadamente 0,1 a 3 ml, aproximadamente 0,1 a 2,5 ml, aproximadamente 0,5 a 2,0 ml, aproximadamente 0,1 a 1,0 ml, aproximadamente 0,5 a 1,5 ml, 0,5 a 1,0 ml, y 1,0 a 2,0 ml.

Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende una almohadilla de conjugado, una membrana permeable, una membrana de prueba y/o un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende un sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende una almohadilla de conjugado, una membrana permeable, una membrana de prueba y un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos está libre de una membrana permeable. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende, en el siguiente orden: una almohadilla de conjugado, una membrana permeable, una membrana de prueba y un miembro absorbente.

Como se usa en el presente documento, el término "almohadilla de conjugado" se refiere a una membrana u otro tipo de material que puede comprender un reactivo de captura. La almohadilla de conjugado puede ser un acetato de celulosa, nitrato de celulosa, poliamida, policarbonato, fibra de vidrio, membrana, polietersulfona, celulosa regenerada (RC), politetrafluoretileno, (PTFE), poliéster (por ejemplo, tereftalato de polietileno), policarbonato (por ejemplo, 4,4-hidroxi-difenil-2,2'-propano), óxido de aluminio, éster de celulosa mixto (por ejemplo, mezcla de acetato de celulosa y nitrato de celulosa), nailon (por ejemplo, poliamida, hexametilendiamina y nailon 66), polipropileno, PVDF, polietileno de alta densidad (HDPE) agente de nucleación "dibenzoato de aluminio" (DBS) (por ejemplo, 80u 0,024 HDPE DBS (Porex)), y HDPE. Los ejemplos de almohadillas de conjugado también incluyen, Cyclopore® (tereftalato de polietileno), Nucleopore® (tereftalato de polietileno), Membra-Fil® (acetato y nitrato de celulosa), Whatman® (acetato y nitrato de celulosa), Whatman n.° 12-S (rayón)), Anopore® (óxido de aluminio), Anodisc® (óxido de aluminio), Sartorius (acetato de celulosa, por ejemplo 5 pm), y Whatman Standard 17 (vidrio unido). La almohadilla de conjugado también puede estar hecha de un material que se disuelve después de entrar en contacto con una muestra u otro líquido. Se puede realizar la disolución de la almohadilla de conjugado de modo que otras capas de los sistemas descritos en el presente documento se puedan revelar o exponer para ya sea inspección visual (por ejemplo, detección de un analito) o para inspección por espectrómetro (por ejemplo, detección de un analito por un espectrómetro).

Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado o membrana de prueba comprende un reactivo de captura. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado o membrana de prueba se pone en contacto con el reactivo de captura y a continuación se deja que se seque antes de ser usada en el dispositivo de flujo vertical. La almohadilla de conjugado o membrana de prueba también puede comprender otras composiciones para conservar el reactivo de captura de forma que pueda almacenar de forma estable a temperatura ambiente o por debajo de temperaturas de refrigeración o congelación. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado o membrana de prueba se empapa con un tampón antes de aplicar el reactivo de captura. Como se describe en el presente documento, el tampón es un tampón de bloqueo que se usa para prevenir la unión no específica. Como se describe en el presente documento, el tampón comprende borato, BSA, PVP40 y/o Tween-100, o cualquier mezcla de los mismos. Como se describe en el presente documento, el tampón es borato 10 mM, BSA al 3 %, PVP40 al 1 % y Tween-100 al 0,25 %. Como se describe en el presente documento, el reactivo de captura se aplica a la almohadilla o membrana en una solución que comprende trehalosa y sacarosa. Como se describe en el presente documento, el reactivo de captura se aplica a la almohadilla, membrana, o ambas, en una solución que comprende trehalosa, sacarosa y fosfato y/o BSA. Como se describe en el presente documento, el reactivo de captura se aplica en una solución que es trehalosa al 5 %, sacarosa al 20 %, fosfato 10 mM y BSA al 1 %. Como se describe en el presente documento, la membrana de prueba comprende un reactivo de captura que se une a un amplicón marcado. Como se describe en el presente documento, el reactivo de captura es un anticuerpo que reconoce o se une a digoxigenina, fluoresceína (por ejemplo, FITC), rodamina (TAMRA), y similares.

Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado comprende estreptavidina. La estreptavidina también se puede marcar adicionalmente como se describe en el presente documento. Como se describe en el presente documento, la estreptavidina es el reactivo de captura que se une a un anticuerpo biotinilado que se usa para detectar múltiples analitos con una única señal.

Como se describe en el presente documento, el miembro amovible se pone en contacto con una primera superficie de la almohadilla de conjugado y el miembro adhesivo se pone en contacto con una segunda superficie de la almohadilla de conjugado.

Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un miembro adhesivo. El miembro adhesivo puede comprender una entrada de miembro adhesivo que permite que la muestra circule a través de la almohadilla de conjugado y se ponga en contacto con la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la entrada de miembro adhesivo es del mismo tamaño o forma que la entrada de miembro amovible. Como se describe en el presente documento, la entrada de miembro adhesivo tiene un tamaño o forma diferente que la entrada de miembro amovible. Como se describe en el presente documento, las entradas en el miembro adhesivo son de la misma forma pero tienen diferentes áreas. Se consideraría que entradas con diferentes áreas tendrían diferentes tamaños. El miembro adhesivo puede estar constituido por cualquier sustancia adecuada para adherir un miembro o membrana a otro miembro o membrana. Como se describe en el presente documento, el miembro adhesivo es impermeable al líquido. Como se describe en el presente documento, el miembro adhesivo se pone en contacto con el miembro amovible.

En algunas descripciones del dispositivo, la membrana permeable está unida o adherida a una membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la membrana permeable se lamina sobre la membrana de prueba. La membrana permeable puede ser una membrana de cualquier material que permita que una muestra, tal como una muestra de fluido, circule a través de la membrana de prueba. Los ejemplos de membrana de prueba incluyen, pero sin limitarse a, nitrocelulosa, celulosa, fibra de vidrio, poliéster, polipropileno, nailon y similares. Como se describe en el presente documento, la membrana permeable comprende una abertura. La abertura puede estar presente para permitir la visualización o detección de la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la abertura en la membrana permeable tiene sustancialmente el mismo tamaño que la abertura de entrada en la carcasa. Los ejemplos de membranas permeable incluyen, pero sin limitarse a, Protran BA83, Whatman, y similares.

Como se analiza en el presente documento, un ejemplo de un soporte sólido es una membrana de prueba. Como se usa en el presente documento y en todas partes, la "membrana de prueba" se refiere a una membrana donde ocurre la detección de un compañero de unión a un reactivo de captura. Las membranas de prueba incluyen, pero sin limitarse a, una membrana de nitrocelulosa, una membrana de nailon, una membrana de fluoruro de polivinilideno, una membrana de poliétersulfona, y similares. La membrana de prueba puede ser cualquier material que pueda ser usado por un experto en la materia para detectar la presencia de un compañero de unión del reactivo de captura (por ejemplo, analito marcado, antígeno o epítopo). La membrana de prueba también puede comprender un reactivo de captura. Como se describe en el presente documento, la membrana de prueba se pone en contacto con un reactivo de captura y se deja que el reactivo de captura se seque y adhiera a la membrana de prueba. Los ejemplos de membranas de prueba incluyen, pero sin limitarse a, Protran BA83, Whatman, Opitran BA-SA83, y lisa blanca de 0,22 pm (producto de Millipore n.° SA3J036107). Las membranas de prueba también pueden estar compuestas por matrices de nanopartículas a las que se unen reactivos de captura. Los nanocristales se pueden disponer en láminas en 2D y matrices en 3D con materiales tales como, pero sin limitarse a, partículas a base de carbono, partículas de aleación de oro o metálica, matrices de copolímeros, así como nanocristales monodispersos semiconductores, magnéticos, metálicos y ferroeléctricos. La membrana de prueba puede comprender una pluralidad de reactivos de captura. Como se describe en el presente documento, la membrana de prueba comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 reactivos de captura. Como se describe en el presente documento, la membrana de prueba comprende una pluralidad de áreas cada una con un reactivo de captura diferente. Como se describe en el presente documento, la pluralidad de áreas no se solapan o coinciden completamente entre sí.

Como se describe en el presente documento, el dispositivo o carcasa también comprende un miembro absorbente. El miembro absorbente también se puede denominar una "almohadilla de mecha" o "almohadilla de efecto mecha". El miembro absorbente absorbe el fluido que circula a través del dispositivo cuando la muestra se aplica al dispositivo y proporciona la fuerza de efecto de mecha que ayuda en el flujo de la muestra cuando se aplica al dispositivo. "Miembro absorbente" pretende referirse a un material que tiene una capacidad de extraer (empaparse de) y retener solución lejos de una superficie con la que el material está en contacto. El uso de una combinación de material de aumento o disminución de la absorbancia también puede permitir el control del movimiento de muestras.

El miembro absorbente puede ser cualquier material que pueda facilitar el flujo de la muestra a través de la almohadilla de conjugado y a la membrana de prueba. Los ejemplos de miembros absorbentes incluyen, pero sin limitarse a, celulosa, polímeros superabsorbentes, almohadillas de fibra de vidrio (por ejemplo, C083 (Millipore)), y similares. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende una pluralidad (por ejemplo, 2 o más) de miembros absorbentes. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende 2, 3, 4 o 5 miembros absorbentes. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, el miembro absorbente comprende una o más membranas hasta 10 membranas individuales, y cada membrana puede ser el mismo material o un material diferente. Como se describe en el presente documento, el dispositivo consiste en solo 1 membrana que es un miembro absorbente.

Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un miembro de fuerza. Los ejemplos de miembros de fuerza se describen a continuación y se pueden ver en los dibujos. Estos ejemplos son no limitantes y se pueden usar otras formas de miembros de fuerza. El miembro de fuerza puede, como se describe en el presente documento, usarse para aplicar presión o para comprimir los otros componentes del sistema de membrana de detección de analitos entre sí. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza puede estar hecho de cualquier material que incluye, pero sin limitarse a, plástico o acero inoxidable. Como se muestra en la Figura 23, clips pueden actuar como miembros de fuerza. El acero inoxidable puede ser cortado por láser de forma que pueda actuar como un clip. Los ejemplos no limitantes de estos clips se pueden observar en la Figura 23. El miembro de fuerza actúa aplicando presión al sistema de membrana. El miembro de fuerza no se limita a un clip, sino que puede tener cualquier forma (véanse las Figuras para ejemplos no limitantes) que pueda aplicar al sistema de membrana (por ejemplo, matrices de nanopartículas) y estructuras de tipo pistón estratégicamente situadas dentro del conjunto. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza es un pistón. El miembro de fuerza se puede usar para aplicar presión o para comprimir los otros componentes del sistema de membrana de detección de analitos entre sí. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza puede comprender un vástago y una cabeza. El miembro de fuerza puede tener una forma de tipo champiñón donde la cabeza es más ancha que el vástago. Como se describe en el presente documento, la cabeza es más estrecha que el vástago. El miembro de fuerza que comprende una cabeza y un vástago puede ser una unidad única o puede estar constituido por múltiples partes que se ponen en contacto entre sí para formar el miembro de fuerza. Por ejemplo, la cabeza podría ser una unidad que se puede separar del vástago. Tras el ensamblaje, la cabeza y el vástago se ponen en contacto entre sí para formar el miembro de fuerza. En otro ejemplo, la cabeza y el vástago son una unidad cohesiva y se fabrican juntas y no como partes independientes que después se ensamblan para formar el miembro de fuerza. El miembro de fuerza permite que el dispositivo funcione con flujo vertical a diferencia de depender de flujo lateral.

Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza se pone en contacto con una superficie del miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza se pone en contacto con una superficie del miembro absorbente y una superficie de la capa amovible. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza comprime el sistema de detección de membrana desde arriba y abajo del sistema de detección de membrana. Por ejemplo, como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza puede emparedar todas las capas del sistema de detección de membrana. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza está unido a un miembro de soporte.

Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende, en el siguiente orden, un miembro amovible, una almohadilla de conjugado y un miembro adhesivo.

El dispositivo también puede comprender un miembro de soporte. El miembro de soporte, como se describe en el presente documento, se pone en contacto con una superficie del miembro absorbente. El miembro de soporte también puede tener una entrada de miembro de soporte. La entrada puede ser del mismo tamaño y/o forma que la entrada en el miembro amovible y/o el miembro adhesivo. Como se describe en el presente documento, el miembro de soporte comprende una entrada que tiene un tamaño y/o forma diferente que la entrada en el miembro amovible y/o el miembro adhesivo. El miembro de soporte puede estar hecho de cualquier material que incluye, pero sin limitarse a, plástico. Como se describe en el presente documento, el segundo miembro de carcasa sirve de miembro de soporte.

Los dispositivos descritos en el presente documento se pueden usar en ensayos para detectar la presencia de un compañero de unión del reactivo de captura. Estos ensayos se pueden usar, como se muestra en el presente documento, para detectar múltiples analitos para la detección de señales únicas. Por ejemplo, se puede detectar un antígeno por un anticuerpo usando los dispositivos de la presente invención. El término "flujo vertical" se usa en todas partes. El término "flujo vertical" se refiere a la dirección en la que la muestra circula a través de las diferentes membranas y miembros presentes en un dispositivo. Flujo vertical se refiere a una muestra que circula a través de la membrana (por ejemplo, arriba a abajo) a diferencia de flujo lateral, que se refiere a una muestra que circula a través de (por ejemplo, lado a lado) una membrana, almohadilla o miembro absorbente. En un dispositivo de flujo lateral, las membranas y almohadillas se asientan horizontalmente adyacentes entre sí sustancialmente en el mismo plano. En un dispositivo de flujo vertical, cada una de las membranas o almohadillas es sustancialmente paralela o completamente paralela entre sí y ocupan planos espaciales sustancialmente diferentes en el dispositivo. Las membranas y almohadillas pueden ocupar planos similares cuando se comprimen o se ponen bajo presión. Como se describe en el presente documento, al menos una porción de cada miembro, membrana, o almohadilla está en capas encima de las otras. Como se describe en el presente documento, al menos una porción de cada una de las capas de miembro, membrana o almohadilla son sustancialmente paralelas entre sí. Como se describe en el presente documento, al menos una porción de cada capa está en un planto espacial diferente que cada otra capa.

Para permitir que el flujo vertical ocurra eficientemente, como se describe en el presente documento y cuando está presente, la almohadilla de conjugado, membrana permeable, membrana de prueba y el miembro absorbente son sustancialmente paralelos entre sí. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado, membrana permeable, membrana de prueba y el miembro absorbente están presentes en planos espaciales diferentes. Como se describe en el presente documento, la carcasa también comprende una membrana hidrófoba que puede ralentizar o detener el flujo vertical de la muestra. La membrana hidrófoba puede estar en contacto con la membrana de prueba, que permitiría que la muestra permaneciera o descansara encima de la membrana de prueba. La permanencia puede permitir elevada sensibilidad y detección. El flujo vertical se modula por la presión que se aplica a las membranas, almohadillas y/o miembros. Como se describe en el presente documento, la presión se aplica perpendicular a la membrana de prueba y/o la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, la presión se puede aplicar de modo que la almohadilla de conjugado se comprima contra la carcasa. La compresión contra la carcasa puede ser tal que el conjugado esté en contacto directo con la carcasa, junta tórica, o collar, o mediante un intermediario de modo que la almohadilla de conjugado y la membrana de prueba se compriman entre sí.

El miembro de fuerza puede aplicar presión que es sustancialmente perpendicular a la membrana de prueba. Sin quedar ligados a teoría particular alguna, la presión facilita el flujo vertical. La presión permite que cada capa de la pila de membranas esté en contacto con otra capa. La presión también puede ser aliviada para detener el flujo de modo que la muestra de prueba pueda permanecer o descansar sobre la membrana de prueba, lo que puede permitir mayor sensibilidad. Entonces se puede volver a aplicar la presión para permitir que el flujo vertical continúe, permitiendo que la muestra circule hacia el o los miembros absorbentes. El miembro de fuerza puede aplicar presión de forma que la almohadilla de conjugado se ponga en contacto con una porción de la carcasa (por ejemplo, primer o segundo miembros de carcasa o capa amovible). Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se pone en contacto con la carcasa cuando no está bajo la presión que se ejerce por el miembro de fuerza, pero tras ejercer el miembro de fuerza la presión, la almohadilla de conjugado se comprime contra una porción de la carcasa.

Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se pone en contacto con el perímetro de la abertura de entrada. La abertura de entrada también puede comprender un collar u otra característica similar, tal como una junta tórica. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se pone en contacto con el perímetro de un collar y/o una junta tórica. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado es capaz de ser comprimida contra el perímetro de la abertura de entrada, que puede incluir, como se describe en el presente documento, un collar y/o una junta tórica.

"Capaz de ser comprimida contra el perímetro de la abertura de entrada" se refiere a una membrana o almohadilla (por ejemplo, almohadilla de conjugado) que se comprime ya sea directamente en contacto con el perímetro de la abertura de entrada o que se comprime contra otra capa o material (por ejemplo, membrana) que está en contacto con el perímetro de la abertura de entrada.

Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado no está en contacto físico directo con la carcasa, pero está en contacto fluido con la carcasa. "Contacto fluido" significa que si una muestra se aplica al dispositivo a través de la abertura de entrada u otra abertura, el fluido se pondrá en contacto con la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se puede separar de la carcasa por otra membrana, tal como una membrana permeable, donde la otra membrana está en contacto físico directo con la carcasa o en contacto físico directo con el collar o junta tórica. Cuando la muestra se aplica al dispositivo, el fluido se puede poner en contacto con la otra membrana primero y luego se pone en contacto con la almohadilla de conjugado. Esto es solo un ejemplo de la almohadilla de conjugado que está en contacto fluido con la carcasa. Existen numerosas otras descripciones donde la almohadilla de conjugado no está en contacto físico directo con la carcasa, el collar, o la junta tórica, pero está en contacto fluido con la carcasa.

El miembro de fuerza puede aplicar cualquier presión que sea suficiente para facilitar el flujo vertical a través de las diferentes capas de membrana. Como se describe en el presente documento, las capas del dispositivo (por ejemplo, almohadilla de conjugado, membrana permeable, membrana de prueba y miembro absorbente) se comprimen bajo una fuerza elegida desde aproximadamente 22,24 N (5 lbf) hasta 444,82 N (100 lbf), aproximadamente 22,24 N (5 lbf) hasta 222,41 N (50 lbf), aproximadamente 44,48 N (10 lbf) hasta 177,93 N (40 lbf), aproximadamente 66,72 N (15 lbf) hasta 177,93 N (40 lbf), aproximadamente 66,72 N (15 lbf) hasta 111,21 N (25 lbf), o aproximadamente 133,45 N (30 lbf) hasta 177,93 N (40 Ibf). Como se describe en el presente documento, las capas del dispositivo (por ejemplo, almohadilla de conjugado, membrana permeable, membrana de prueba y miembro absorbente) se comprimen bajo una fuerza elegido desde aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 444,82 N (100 lbf), aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 222,41 N (50 lbf), aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 22,24 N (5 lbf), aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 44,48 N (10 lbf), aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 66,72 N (15 lbf), aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 88,96 N (20 lbf), aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 133,45 N (30 lbf), o aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta 111,21 N (25 lbf). La fuerza también puede comprimir un membrana hidrófoba o impermeable, también si una está presente en el dispositivo.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el miembro de fuerza se pone en contacto con una primera superficie de un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, una almohadilla de conjugado se pone en contacto con una membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, una primera superficie de una membrana de prueba se pone en contacto con una membrana permeable. Como se describe en el presente documento, una segunda superficie de la membrana de prueba se pone en contacto con una segunda superficie de la almohadilla absorbente. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una membrana hidrófoba, y, por ejemplo, la membrana hidrófoba se pone en contacto con una segunda superficie de la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la membrana hidrófoba se pone en contacto con una primera superficie de la almohadilla absorbente. Como se describe en el presente documento, una almohadilla de conjugado se pone en contacto con un miembro adhesivo. Como se describe en el presente documento, una membrana de prueba se pone en contacto con un miembro adhesivo.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, una primera superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con la carcasa y una segunda superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con una primera superficie de la membrana permeable, en donde la segunda superficie de la membrana permeable se pone en contacto con una primera superficie de la membrana de prueba, en donde una segunda superficie de la membrana de prueba se pone en contacto con una primera superficie de la almohadilla absorbente, en donde una segunda superficie de la almohadilla absorbente se pone en contacto con el miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, la primera superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con un perímetro de la abertura de entrada de dicha carcasa. Como se describe en el presente documento, la primera superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con un perímetro de un collar o una junta tórica.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, una primera superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con la carcasa y una segunda superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con una primera superficie del miembro adhesivo, en donde la segunda superficie del miembro adhesivo se pone en contacto con una primera superficie de la membrana de prueba, en donde una segunda superficie de la membrana de prueba se pone en contacto con una primera superficie de la almohadilla absorbente, en donde una segunda superficie de la almohadilla absorbente se pone en contacto con el miembro de soporte. Como se describe en el presente documento, la primera superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con un perímetro de la entrada. Como se describe en el presente documento, la primera superficie de la almohadilla de conjugado se pone en contacto con un perímetro de un collar o una junta tórica.

El dispositivo también puede comprender un miembro de unión. Como se describe en el presente documento, el miembro de unión es flexible o está hecho de un material flexible. Como se describe en el presente documento, el miembro de unión es fijo o está hecho de un material no flexible. El miembro de unión fijo puede ser, por ejemplo, una bisagra y similares que puede, por ejemplo, ponerse en contacto con la almohadilla de conjugado u otra capa o membrana del sistema y puede mediar en su desplazamiento. El miembro de unión fijo, tal como, pero sin limitarse a, una bisagra fija u otro material compresible que actúa como una bisagra y puede volver a una forma o dimensión tras la liberación de la compresión. El miembro de unión puede ser capaz de desplazar la almohadilla de conjugado. El miembro de unión también puede ser solo de plástico y aunque puede flexionarse, sus propiedades de flexión no se usan en el funcionamiento del dispositivo.

El material flexible puede ser, por ejemplo, un material elástico o elastómero. Un miembro de unión puede, por ejemplo, unirse a una almohadilla de conjugado y/o una membrana hidrófoba. El miembro de unión también se puede unir a cualquier membrana o miembro del dispositivo. Los ejemplos de miembros de unión incluyen, pero sin limitarse a, banda de elastómero, banda de caucho, muelle, y similares. Como se describe en el presente documento, el miembro de unión puede estar hecho de un material con memoria de forma. Como se describe en el presente documento, el miembro de unión hace posible crear un retardo entre mover el miembro de bloqueo y mover la almohadilla de conjugado o cualquier otro tipo de membrana o almohadilla a la que está unida el miembro de unión. Como se describe en el presente documento, el movimiento de la almohadilla o membrana no ocurre al mismo tiempo que se mueve el botón de deslizamiento o miembro de bloqueo. En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, y no quedando ligados a teoría particular alguna, a medida que se mueve el botón de deslizamiento o miembro de bloqueo, se acumula energía en el miembro de unión y esta energía se usa para tirar de una almohadilla o membrana que está unida al miembro de unión después de liberar la presión. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo se aleja del miembro de fuerza (es decir, el miembro de fuerza ya no se pone en contacto con el miembro de bloqueo) antes de que la almohadilla de conjugado se mueva o retire. La almohadilla de conjugado, como se describe en el presente documento, se mueve una vez se ha retirado completamente la compresión o presión que se ha ejercido por el miembro de fuerza.

El miembro de unión también se puede unir a ya sea un botón de deslizamiento o miembro de bloqueo. El miembro de unión se puede unir mediante cualquier medio tal como, adhesivos, grapas, atadura, y similares a los otros componentes. Como se describe en el presente documento, la membrana o almohadilla tiene muescas en la membrana o almohadilla que permiten que el miembro de unión se una a la membrana o almohadilla. Un ejemplo no limitante se puede observar en la Figura 9.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, la carcasa comprende un miembro de bloqueo. El miembro de bloqueo puede ser un miembro de bloqueo deslizante que se puede mover dentro del dispositivo. El miembro de bloqueo se puede usar para bloquear el miembro de fuerza en una posición tal que se mantenga la fuerza creada por el miembro de fuerza sobre las diferentes capas. El miembro de bloqueo está, por ejemplo, bloqueando el miembro de fuerza en su sitio de modo que la presión no pueda ser liberada a menos que se mueva el miembro de bloqueo para permitir que el miembro de fuerza cambie posiciones (es decir, se baje). El miembro de bloqueo, puede, por ejemplo, encajar debajo de la cabeza del miembro de fuerza, lo que mantendría el miembro de fuerza en la posición subida. El miembro de bloqueo también se puede situar de modo que mantenga el miembro de fuerza en una posición particular (por ejemplo, subida o bajada). El miembro de bloqueo puede estar hecho de cualquier material incluyendo, pero sin limitarse a, plástico y similares. El miembro de bloqueo puede, por ejemplo, ponerse en contacto con el miembro de fuerza ya sea directa o indirectamente mediante otro componente que previene que el miembro de fuerza libere la presión. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo se pone en contacto con el miembro de fuerza para comprimir la almohadilla de conjugado.

El miembro de bloqueo también se puede poner en contacto con el miembro de unión de modo que el movimiento del miembro de bloqueo mueva el miembro de unión, cualquier otra membrana (por ejemplo, almohadilla de conjugado, membrana hidrófoba, membrana de prueba o miembro absorbente) u otro componente que está unido al miembro de unión. Por ejemplo, si el miembro de bloqueo se mueve para aliviar la presión del miembro de fuerza permitiendo así que el miembro de fuerza cambie posiciones (por ejemplo, de una posición subida a una más baja), el movimiento del miembro de bloqueo también deformará/acumulará energía en el miembro de unión para que pueda mover la membrana o almohadilla una vez se haya reducido suficientemente la presión. Cuando la almohadilla de conjugado está unida al miembro de unión y el miembro de bloqueo se mueve, esto también moverá la almohadilla de conjugado una vez se ha reducido suficientemente la presión. Como se describe en el presente documento, la presión se retira completamente. La almohadilla de conjugado puede, por ejemplo, moverse de modo que se retire del dispositivo. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se mueve para revelar la membrana de prueba a través de la abertura de entrada. La cantidad de la membrana de prueba que se revela dependerá del tipo de detección que se usa. Para una detección visual se puede necesitar que se revele más de la membrana de prueba en la abertura de entrada. Para una detección no visual, por ejemplo, fluorescente, de infrarrojo cercano, infrarrojo, radiactiva o quimioluminiscente, se puede necesitar que se revele menos o nada de la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se mueve de modo que ya no se pueda observar o detectar a través de la abertura de entrada. Como se describe en el presente documento, el movimiento de la almohadilla de conjugado puede crear otra abertura distinta de la abertura de entrada para visualizar o detectar la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se disuelve para visualizar o detectar la membrana de prueba (por ejemplo, detección del analito o múltiples analitos con una única señal). La almohadilla de conjugado puede estar hecha de un material disoluble de forma que cuando la almohadilla de conjugado se pone en contacto con la muestra u otra solución, la almohadilla de conjugado se disuelva parcial o completamente.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el miembro de unión también está unido a la membrana impermeable o hidrófoba. Cuando el miembro de unión se mueve, el movimiento también moverá o retirará la membrana impermeable o hidrófoba. Como se analiza en el presente documento, la presencia de la membrana impermeable o hidrófoba puede permitir que la muestra de prueba permanezca o descanse sobre la membrana de prueba ralentizando o deteniendo el flujo vertical. Cuando la membrana impermeable o hidrófoba se mueve o retira, ya sea por su unión al miembro de unión o mediante otro medio, ya no se impide o inhibe el flujo vertical.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, la carcasa comprende un botón de deslizamiento. Un botón de deslizamiento también se puede denominar un miembro de deslizamiento. El botón de deslizamiento puede cruzar las superficies internas y externas de la carcasa. Como se describe en el presente documento, el botón de deslizamiento o miembro de deslizamiento sobresale hasta una superficie externa de la carcasa. Como se describe en el presente documento, el botón de deslizamiento está unida ya sea directa o indirectamente al miembro de bloqueo. Cuando el botón de deslizamiento se une (directa o indirectamente) al miembro de bloqueo, el movimiento del botón de deslizamiento también mueve el miembro de bloqueo. El miembro de unión, como se describe en el presente documento, se puede unir al botón de deslizamiento. Como se describe en el presente documento, el miembro de unión se une tanto al botón de deslizamiento como al miembro de bloqueo. El botón de deslizamiento y el miembro de bloqueo también se pueden construir como una única unidad.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, una cualquiera o más de las entradas comprenden una abertura elegida de un intervalo de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 20 cm2 Como se describe en el presente documento, una cualquiera o más de las entradas tiene aproximadamente 1 a aproximadamente 2 cm de diámetro. Como se describe en el presente documento, una cualquiera o más de las entradas tiene aproximadamente 1 o aproximadamente 1,5 cm de diámetro. Como se describe en el presente documento, una cualquiera o más de las entradas tiene aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, o aproximadamente 5 cm de diámetro. Como se describe en el presente documento, donde existe más de una entrada, las entradas pueden tener diferentes tamaños o los mismos tamaños. El tamaño de cada entrada es independiente entre sí. En algunas descripciones de los dispositivos y sistemas descritos en el presente documento, los dispositivos o sistemas comprenden 1, 2, 3, 4 o 5 entradas. En algunas descripciones de los dispositivos y sistemas descritos en el presente documento, los dispositivos o sistemas comprenden al menos 1, 2, 3, 4 o 5 entradas.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, la abertura de entrada comprende una abertura elegida de un intervalo de aproximadamente 0,2-20 cm2. Como se describe en el presente documento, la abertura de entrada tiene aproximadamente 1 a aproximadamente 2 cm de diámetro. Como se describe en el presente documento, la abertura de entrada tiene aproximadamente 1 o aproximadamente 1,5 cm de diámetro. Como se describe en el presente documento, la abertura de entrada tiene aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, o aproximadamente 5 cm de diámetro.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, un dispositivo para detectar un analito comprende un primer miembro y un segundo miembro. Como se describe en el presente documento, el primer miembro y segundo miembro están en contacto entre sí. Como se describe en el presente documento, el primer miembro comprende una o más entradas. Como se describe en el presente documento, entre el primer y segundo miembro está un sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos entre el primer y segundo miembro comprende una almohadilla de conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba y un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende, en el siguiente orden: una almohadilla de conjugado; un miembro adhesivo; una membrana de prueba; y un miembro absorbente. Como se analiza en el presente documento, en algunas descripciones, al menos una porción de cada uno de la almohadilla de conjugado, la membrana de prueba y el miembro absorbente son sustancialmente paralelos entre sí. Como se describe en el presente documento, al menos una porción de cada uno de la almohadilla de conjugado, la membrana de prueba y el miembro absorbente están en un plano espacial diferente.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el sistema de membrana de detección de analitos se comprime entre el primer y segundo miembro (por ejemplo, del miembro de fuerza). Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos se comprime entre un plano formado por el primer miembro y un plano formado por el segundo miembro, en donde los planos formados por el primer y segundo miembros son sustancialmente paralelos entre sí y el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, los planos son paralelos entre sí y el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembros que comprimen el sistema de membrana de detección de analitos es un miembro de fuerza. Por ejemplo, se puede hacer referencia a que el miembro de fuerza comprende un primer y segundo miembro para crear la fuerza que comprime el sistema de membrana de detección de analitos.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el primer y segundo miembro están unidos entre sí a lo largo de un borde del primer miembro que es paralelo a un borde del segundo miembro. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembro están unidos por un muelle, bisagra, y similares. La manera por la que el primer y segundo miembro se unen no está limitada y puede ser por cualquier estructura que permita que el sistema de membrana de analitos se comprima entre el primer y segundo miembro. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembro son contiguos entre sí y forman un clip. Los ejemplos de clips (por ejemplo, miembros de fuerza) se muestran en toda la presente solicitud (por ejemplo, Figura 16). El clip, puede ser, por ejemplo, cortado de metal u otro tipo de material que permite que el primer miembro sea flexible de modo que el sistema de membrana de detección de analitos se pueda insertar entre el primer y segundo miembros. Como se describe en el presente documento, el primer miembro es amovible.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el primer miembro está unido o en contacto con la almohadilla de conjugado, en donde el movimiento o retirada del primer miembro mueve la almohadilla de conjugado o retira la almohadilla de conjugado del dispositivo. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado es amovible.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, la almohadilla de conjugado se retira del dispositivo que comprende el primer y segundo miembro retirando solo la almohadilla de conjugado.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, la almohadilla de conjugado comprende una lengüeta. La lengüeta se puede usar para retirar o para facilitar la retirada de la almohadilla de conjugado.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, los dispositivos descritos en el presente documento se colocan en un recipiente. Como se describe en el presente documento, el recipiente es una funda o una bolsa. Como se describe en el presente documento, el recipiente comprende una entrada. Como se describe en el presente documento, el recipiente comprende un miembro o capa amovible o móvil que cuando se mueve o retira expone la entrada permitiendo que la muestra se aplique al sistema de membrana de detección de analitos. Los ejemplos de un miembro o capa amovible o móvil incluyen, pero sin limitarse a, una solapa o lengüeta. Una solapa o lengüeta, por ejemplo, se muestra en las Figuras 18 y 19. Como se describe en el presente documento, la capa amovible o capa móvil también puede actuar como una junta para el recipiente. La junta puede proteger la almohadilla de conjugado y/o el sistema de membrana de detección de analitos.

En algunas descripciones de los dispositivos y sistemas descritos en el presente documento, la capa amovible o móvil está en contacto con o unida a la almohadilla de conjugado.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, un dispositivo para detectar un analito comprende un primer miembro externo y un segundo miembro externo que comprende un primer miembro interno y un segundo miembro interno, en donde el primer miembro interno y el segundo miembro interno están en contacto entre sí. Como se describe en el presente documento, el primer miembro externo comprende una entrada. Como se describe en el presente documento, el primer miembro interno comprende una entrada. Como se describe en el presente documento, el primer miembro externo y el primer miembro interno comprenden una entrada. Como se describe en el presente documento, entre el primer y segundo miembros internos está un sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, el dispositivo carece de una almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende una membrana de prueba y un miembro absorbente y opcionalmente una almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende, en el siguiente orden, una membrana de prueba y un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, al menos una porción de cada uno de la almohadilla de conjugado opcional, la membrana de prueba y el miembro absorbente son sustancialmente paralelos entre sí. Como se describe en el presente documento y se analiza anteriormente, el sistema de membrana de detección de analitos se comprime entre el primer miembro interno y el segundo miembro interno. Como se describe en el presente documento, el dispositivo y/o sistema comprende un miembro adhesivo como se describe en el presente documento. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una membrana de filtración. Como se describe en el presente documento, la membrana de filtración puede estar dentro del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, una primera superficie de la membrana de filtración se pone en contacto con una superficie del primer miembro interno y una segunda superficie de la membrana de filtración se pone en contacto con otra membrana o miembro del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, una segunda superficie de una membrana de filtración se pone en contacto con una superficie de una membrana de prueba. La membrana de filtración puede ser cualquier material como se describe en el presente documento. Por ejemplo, la membrana de filtración, como se describe en el presente documento, puede ser de los mismos materiales que puede ser una almohadilla de conjugado, prueba, membrana, miembro absorbente, y similares. Como se describe en el presente documento, la membrana de filtración es una almohadilla de fibra de vidrio.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, donde la almohadilla de conjugado no está presente dentro del dispositivo o el sistema, el conjugado se suministra como un líquido o como un material que se puede disolver en un líquido (por ejemplo, agua, solución tamponada, solución salina, y similares). El conjugado se puede suministrar en un recipiente separado (por ejemplo, tubo) y se proporciona con un dispositivo o sistema descrito en el presente documento. Donde el conjugado se suministra en un recipiente, el conjugado se incuba con la muestra antes de que la muestra se aplique al sistema de membrana de detección de analitos. La muestra se puede producir por cualquier método y/o como se describe en el presente documento. Por ejemplo, se puede coger una muestra de un trozo de carne o limpiar para producir una muestra de prueba. A continuación, la muestra de prueba se puede incubar o poner en contacto con el conjugado para producir una mezcla de muestra de prueba-conjugado. Esta mezcla se puede aplicar entonces al sistema de membrana de detección de analitos como se describe en el presente documento usando un dispositivo y/o sistema como se describe en el presente documento. Como se describe en el presente documento, la mezcla de muestra de prueba-conjugado se aplica directamente a la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la mezcla de muestra de prueba-conjugado se filtra o hacer pasar a través de otra membrana antes de ponerla en contacto con la membrana de prueba.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el sistema de membrana de detección de analitos se comprime entre el primer y segundo miembros internos. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos se comprime entre un plano formado por el primer miembro interno y un plano formado por el segundo miembro interno en donde los planos formados por el primer miembro interno y el segundo miembro interno son sustancialmente paralelos entre sí y el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, los planos son paralelos entre sí y el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, los planos son sustancialmente paralelos al primer y segundo miembros externos.

En algunas descripciones de los dispositivos descritos en el presente documento y en todas partes, la almohadilla de conjugado no se comprime por el primer y segundo miembros internos o por los miembros de fuerza descritos en el presente documento.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el primer miembro externo comprende una lengüeta amovible o móvil. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado está unida a dicho primer miembro externo. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado está unida a la lengüeta amovible o móvil. Como se describe en el presente documento, el primer miembro externo y segundo miembro externo forman un recipiente y el recipiente encapsula el primer y segundo miembro interno. Como se describe en el presente documento, el recipiente es una funda, bolsa (por ejemplo, sellable (por ejemplo, cremallera, adhesivo, y similares) o cualquier otro tipo de recipiente que pueda englobar el sistema de membrana de detección de analitos y que se comprime entre el primer y segundo miembros internos.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el recipiente comprende una lengüeta amovible o móvil. La lengüeta amovible o móvil puede tener cualquier forma y puede ser completamente amovible o retirarse hasta una medida que exponga la entrada. Como se describe en el presente documento, cuando se mueve o retira la lengüeta, retira o mueve la almohadilla de conjugado. La almohadilla de conjugado puede ser movida, por ejemplo, una distancia suficiente tal que se puedan analizar (por ejemplo, visualizar) los resultados de la membrana de prueba.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, una primera superficie de la almohadilla de conjugado está en contacto con el primer miembro externo y una segunda superficie de la almohadilla de conjugado está en contacto con el primer miembro interno.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el primer y segundo miembros internos están unidos entre sí a lo largo de un borde del primer miembro interno que es paralelo a un borde del segundo miembro interno. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembros internos están unidos por un muelle, bisagra, y similares. La manera por la que el primer y segundo miembros internos están unidos no está limitada y puede ser por cualquier estructura que permita que el sistema de membrana de analitos se comprima entre el primer y segundo miembro. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembros internos son contiguos entre sí y forman, por ejemplo, un clip. Los ejemplos de clips se muestran en toda la presente solicitud. El clip, puede ser, por ejemplo, cortado de metal u otro tipo de material que permite el primer miembro interno sea flexible de modo que el sistema de membrana de detección de analitos se pueda insertar entre el primer y segundo miembros. Como se describe en el presente documento, el primer miembro interno es amovible.

Como se analiza en el presente documento, los dispositivos y sistemas pueden comprender una capa amovible o móvil (por ejemplo, lengüeta). La capa amovible o móvil se puede retirar o mover por fuerza manual, tal como, pero sin limitarse a, desprendimiento o rasgado. La capa amovible o móvil también se puede retirar o mover por fuerza mecánica. La manera por la que la capa amovible o móvil se mueve puede ser por cualquier medio. Los ejemplos de una capa amovible o móvil incluyen, pero sin limitarse a, lengüetas, solapas, y similares. Como se analiza en el presente documento, esta solapa o lengüeta puede actuar como una junta y similares.

Como se analiza en el presente documento, la almohadilla de conjugado puede comprender un reactivo de captura específico de analito. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado comprende una pluralidad de reactivos de captura específicos de analito. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado comprende 1, 2, 3, 4 o 5 reactivos de captura específicos de analito. El analito puede ser cualquier molécula que pueda ser específicamente reconocida por un reactivo de captura. Los ejemplos de analitos incluyen una molécula de polinucleótido (por ejemplo, ADN, ARN, ARNip, oligonucleótido antisentido), un péptido, una proteína, un sacárido, un polisacárido, un hidrato de carbono, y similares. El antígeno también se puede referir a diferentes epítopos presentes sobre la misma proteína o polipéptido. El analito también se puede referir a antígenos de organismos patógenos o no patógenos.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, los dispositivos pueden ser alojados individualmente, en pares, o en configuraciones múltiples. La carcasa puede ser estanca al agua para prevenir fugas y se puede fabricar de una variedad de materiales inertes, tales como materiales de polímero. La entrada, como se describe en el presente documento, puede ser de volumen suficiente para contener cualquier cantidad requerida de muestra o reactivos que se van a usar con la divulgación.

Debido a que las membranas, miembros, o almohadillas del dispositivo son, como se describe en el presente documento, químicamente inertes, pueden tener que ser activados en cualquier sitio de reacción donde se desee inmovilizar un reactivo de unión específica contra el transporte por disolvente. Se pueden requerir diversos métodos para convertir el reactivo inmovilizado según la naturaleza química particular del reactivo. En general, cuando el medio es nitrocelulosa o un éster mixto de nitrocelulosa, no se requiere enlace químico especial para la inmovilización de reactivos. Se pueden usar diversas técnicas para otros materiales y reactivos que incluyen funcionalización con materiales tales como carbonildiimidazol, glutaraldehído o ácido succínico, o tratamiento con materiales tales como bromuro de cianógeno. Otras reacciones adecuadas incluyen tratamiento con bases de Schiff y borohidruro para la reducción de grupos aldehído, carbonilo y amino. Se pueden inmovilizar ADN, ARN y ciertos antígenos contra el transporte de disolvente por horneado sobre el material cromatográfico. El horneado se puede llevar a cabo a temperaturas que varían desde aproximadamente 60 °C hasta aproximadamente 120 °C durante tiempos variables desde aproximadamente cinco minutos hasta aproximadamente 12 horas, y como se describe en el presente documento, a aproximadamente 80 °C durante aproximadamente dos horas.

También se proporcionan sistemas que comprenden los dispositivos descritos en el presente documento y un recipiente de tampón. Los sistemas se pueden usar para detectar múltiples analitos con una única señal. El recipiente de tampón puede ser cualquier tampón con el que se pueda mezclar la muestra que está siendo probada y entonces aplicar al dispositivo. Por ejemplo, se puede tomar la muestra de una fuente y la muestra se puede mezclar con el tampón. El tampón puede ser un tampón de lisis que lisará las células o un tampón que mantiene el pH de la muestra de modo que el análisis se pueda hacer apropiadamente. El recipiente de tampón puede tener cualquier forma y se puede incluir fuera o dentro de la carcasa del dispositivo.

Como se describe en el presente documento, se proporciona un sistema que comprende un colector de muestras. El colector de muestras puede ser cualquier material que pueda tomar una muestra de una fuente y permitir que la muestra se ponga a prueba. Por ejemplo, el colector de muestras puede ser un hisopo, tal como un hisopo de algodón. Como se describe en el presente documento, el colector de muestras es un inoculador. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende el colector de muestras y una porción del colector de muestras está dentro de la carcasa. Como se describe en el presente documento, el colector de muestras está parcialmente fuera y parcialmente dentro de la carcasa. Como se describe en el presente documento, el colector de muestras está completamente fuera de la carcasa.

También se proporcionan kits para detectar múltiples analitos con una única señal, en donde los kits comprenden un dispositivo descrito en el presente documento. El kit puede incluir un dispositivo como se describe en el presente documento, un colector de muestras, un recipiente de tampón, un manual de instrucciones, un control positivo, un control negativo, o cualquier combinación de los mismos. Con respecto al kit, un control positivo es una muestra que se sabe que contiene el o los analitos que pueden ser detectados con el dispositivo presente en el kit. En cambio, el control negativo, no contendría un analito que se pueda detectar por el kit. Por ejemplo, el control negativo, cuando se usa conjuntamente con el anti-anticuerpo, sería capaz de demostrar que el dispositivo está funcionando apropiadamente.

También se pueden incluir tampones en la presente divulgación. Los ejemplos de tampones incluyen, pero sin limitarse a, IX PBS (fosfato 10 mM, cloruro de sodio 137 mM, cloruro de potasio 2,7 mM), un tampón de lavado (por ejemplo, fosfato de sodio 10 mM, NaCl 150 mM, Tween-20 al 0,5 %, azida de sodio al 0,05 %), un tampón de membrana (por ejemplo, fosfato de sodio 10 mM, sacarosa al 0,1 %, BSA al 0,1 %, PVP-40 al 0,2 % pH 7,21, filtrado con filtro de 0,2 |jm), tampón de bloque conjugado con policlonal (por ejemplo, borato 50 mM, BSA al 10 %, pH 8,93); diluyente conjugado con policlonal (por ejemplo, borato 50 mM, b Sa al 1 %, pH 9,09), o tampones de bloqueo (por ejemplo, fosfato de sodio 10 mM, sacarosa al 0,1 %, Silwet al 0,025 % pH 7,42; fosfato de sodio 10 mM, sacarosa al 1 %, trehalosa al 1 %, BSA al 0,01 %, Tween-20 al 0,025 %; azida de sodio al 0,05 %, Silwet al 0,025 % pH 7,4; fosfato de sodio 10 mM, sacarosa al 0,1 %, BSA al 0,1 %, PVP-40 al 0,2 % pH 7,21). El tampón también puede ser, pero sin limitarse a, un tampón de bloqueo (por ejemplo, BSA al 10 % en agua desionizada, pH 7,4 o BSA al 1 % en agua desionizada, pH 7,4); borato 10 mM, BSA al 3 %, PVP40 al 1 % y Tween-100 al 0,25 %; y similares.

La almohadilla de conjugado y la membrana de prueba se pueden poner en contacto con cualquiera de los tampones descritos en el presente documento ya sea en presencia o ausencia de un reactivo de captura y, como se describe en el presente documento, dejarse secar.

Los ejemplos de tampones que son tampones de lisis incluyen, por ejemplo, pero sin limitarse a, Tween al 2 % (v/v) y Triton al 0,1 % (v/v); Tween al 2 % (v/v) y SDS al 0,1 % (p/v); Tween al 2 % (v/v) y BSA al 0,1 % (p/v); Tween al 2 % (v/v) y BSA al 1 % (p/v), SDS al 0,1 % (p/v), BSA al 1 % (p/v), o cualquier combinación de los mismos. Los tampones de lisis también pueden ser, por ejemplo, Tween al 5 %/Pb S; Tween al 2 %/PBS SDS al 0,1 %; Tween al 2 %/PBS BSA al 1 %. Otros ejemplos de tampones de lisis incluyen, pero sin limitarse a, Tween-80 al 5 % (v/v); Triton X-100 al 5 % (v/v); NP40 al 5 % (v/v); Tween-80 al 2 % (v/v); Triton X-100 al 2 % (v/v); NP40 al 2 % (v/v); Tween-80 al 1 % (v/v); Triton X-100 al 1 % (v/v); y NP40 al 1 % (v/v). Los detergentes y otros componentes de los tampones se pueden preparar con cualquier tampón adecuado para proteínas, e incluyen, pero sin limitarse a, agua y solución salina tamponada con fosfato. Los tampones de lisis se pueden usar para preparar las muestras antes de que las muestras se pongan en contacto con los dispositivos descritos en el presente documento. Como se describe en el presente documento, no se usa un tampón de lisis. No se usa un tampón de lisis sobre una muestra cuando se desea detectar una proteína de la superficie o analito de la superficie en el método. Por consiguiente, como se describe en el presente documento, la muestra no se somete a lisis o condiciones que provocaran que se lisara una célula. Donde una célula está siendo usada, la célula podría ser parte del complejo de puente y sustituir a un amplicón que se muestra, por ejemplo, en la Figura 3. La célula podría estar marcada o sin marcar, mientras que exista un reactivo de captura que pueda crear un complejo de puente similar.

La presente materia objeto también proporciona métodos de detección de múltiples analitos que comprenden poner en contacto una muestra con un dispositivo y/o sistema como se describe en el presente documento, en donde la muestra se pone en contacto con la almohadilla de conjugado y la membrana de prueba, en donde una reacción positiva con la membrana de prueba indica la presencia de los múltiples analitos. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado comprende una unidad de detección de señal o un reactivo de captura que se une a la unidad de detección de señal. Como se describe en el presente documento, la membrana de prueba comprende un segundo reactivo de captura específico de analito. Este puede unirse a una unidad de interacción presente sobre el analito. La muestra puede tener, por ejemplo, los amplicones diferencialmente marcados. Por ejemplo, la membrana de prueba puede comprender un primer reactivo de captura que se une a una unidad de interacción presente sobre el primer analito. La almohadilla de conjugado puede tener un reactivo de captura que se une a la unidad de detección de señal. Los analitos se pueden incubar con la unidad de puente y/o la unidad de detección de señal antes de ser aplicados al dispositivo y puestos en contacto con la almohadilla de conjugado y/o la membrana de prueba. Una reacción positiva se indica cuando están presentes el complejo de los analitos, reactivos de captura y unidades de detección de señal. De otro modo, no se genera la señal. Un reactivo de captura se puede aplicar a la membrana de prueba de modo que indique una reacción positiva cuando se une a su compañero de unión específica. El sistema y los dispositivos se pueden utilizar para formar los complejos descritos en el presente documento. Por ejemplo, después de ocurrir una reacción de PCR que crea productos de amplificación diferencialmente marcados, los productos se incuban con los anticuerpos que se pueden usar para crear el complejo de puente. A continuación, se añade la mezcla de incubación al dispositivo. La muestra circula a través de la almohadilla de conjugado que contiene un reactivo de captura y luego interacciona con la membrana de prueba que contiene otro reactivo de captura. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado se retira o mueve de modo que se pueda detectar la señal. El movimiento de la almohadilla de conjugado en un dispositivo de flujo vertical se describe en el presente documento. Si todos los analitos están presentes, se crea el complejo de puente y se puede detectar la única señal. El reactivo de captura específico sobre la membrana de prueba se puede aplicar de cualquier manera de forma que, cuando se detecte, pueda formar una línea, un círculo, un signo más, una línea discontinua, una "X" o cualquier otro patrón. Como se describe en el presente documento, la línea de control que indica que el dispositivo está funcionando apropiadamente cruzará la línea específica de analito y, cuando los múltiples analitos estén presentes y sean detectados, el marcador detectable formará un signo más. La detección se puede determinar por la detección de la reactivo de detección como se describe en el presente documento y por métodos rutinarios conocidos por un experto en la materia. Se pueden usar métodos similares, por ejemplo, en un sistema de ELISA.

Como se describe en el presente documento, una muestra se pone en contacto con el dispositivo, que a continuación va seguido por un tampón que se aplica al dispositivo después de que la muestra se haya puesto en contacto con el dispositivo. Por ejemplo, una muestra que comprende los analitos se puede poner en contacto con la almohadilla de conjugado de forma que la muestra se transfiera a la almohadilla de conjugado. Tras el contacto con la almohadilla de conjugado se puede aplicar una solución separada al dispositivo para facilitar o iniciar el flujo vertical a través de los dispositivos descritos en el presente documento.

Como se describe en el presente documento, como se describe en el presente documento, el reactivo de captura es un anticuerpo. Como se describe en el presente documento, la muestra que se pone a prueba es una solución pero también puede ser una mezcla de solución o tampón y material sólido que se pueda aplicar al dispositivo. La solución solubilizará entonces el o los analitos y permitirá que el reactivo de captura de la almohadilla de conjugado se ponga en contacto con el analito apropiado presente en la muestra. Como se describe en el presente documento, la muestra comprende un lisado celular. Como se describe en el presente documento, el lisado celular se ha clarificado por centrifugación u otro medio para retirar materiales no solubles.

Como se describe en el presente documento, los métodos comprenden poner en contacto una muestra de prueba con un colector de muestras y poner en contacto el colector de muestras con el dispositivo. La muestra de prueba puede ser una muestra que comprende amplicones que se crean a partir de múltiples analitos. Como se describe en el presente documento, los métodos comprenden poner en contacto el colector de muestras con una solución o tampón, en donde la solución o tampón se aplica al dispositivo. Como se describe en el presente documento, las muestras se ponen en contacto con la almohadilla de conjugado antes de que la muestra entre en contacto con la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, la muestra se pone en contacto con la almohadilla de conjugado y la membrana de prueba simultáneamente.

Como se describe en el presente documento, el método comprende mover la almohadilla de conjugado de los dispositivos descritos en el presente documento, en donde el movimiento de los dispositivos expone la membrana de prueba para la detección. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo mueve la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado está unida al miembro de bloqueo y/o el miembro de botón de deslizamiento. Como se describe en el presente documento, el movimiento o la retirada del miembro amovible mueve o retira la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado está unida al miembro amovible y/o miembro adhesivo. Como se describe en el presente documento, cuando el miembro amovible se mueve o retira, el miembro adhesivo también se mueve con respecto a su posición original o se retira del dispositivo. El analito puede ser aquellos que se analizan en el presente documento o cualquier otro analito que se pueda detectar usando los métodos y dispositivos descritos en el presente documento. Como se describe en el presente documento, el método comprende aplicar la muestra al dispositivo y permitir que la muestra circule a través del dispositivo por flujo vertical.

Como se describe en el presente documento, la detección o indicación de la presencia o ausencia de múltiples analitos ocurre en menos de 60 segundos. Como se describe en el presente documento, la detección o indicación de la presencia o ausencia de múltiples analitos ocurre en aproximadamente 30 a aproximadamente 60 segundos. Como se describe en el presente documento, la detección o indicación de la presencia o ausencia de múltiples analitos ocurre en menos de 2 minutos. Como se describe en el presente documento, la detección o indicación de la presencia o ausencia de múltiples analitos ocurre en aproximadamente 30 segundos.

Como se describe en el presente documento, se proporcionan dispositivos para detectar múltiples analitos con una única señal. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una carcasa. El dispositivo puede comprender un primer miembro de carcasa y un segundo miembro de carcasa para formar la carcasa. Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembros de carcasa son miembros separados. El primer y segundo miembros de carcasa se pueden fabricar como una única pieza. La única pieza, Como se describe en el presente documento, se puede separar en los dos miembros de carcasa para permitir la introducción de los materiales en la carcasa (por ejemplo, dispositivo). Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una entrada. La entrada puede estar en cualquier miembro de carcasa (por ejemplo, primer o segundo miembro de carcasa). La entrada puede estar orientada por encima de la almohadilla de conjugado, de modo que una muestra que se introduce en el dispositivo a través de la entrada se ponga en contacto con la almohadilla de conjugado antes de ponerse en contacto con la membrana de prueba. El dispositivo se orienta de modo que, independientemente de cualquier presión que se aplique al dispositivo, la muestra circulará verticalmente hacia abajo a través de las capas de membranas (por ejemplo, sistema de membrana de detección de analitos). Por consiguiente, como se describe en el presente documento, el segundo miembro de carcasa comprende la abertura de entrada. Como se describe en el presente documento, el segundo miembro de carcasa está encima del primer miembro de carcasa. La entrada puede tener cualquier tamaño o forma como se describe en el presente documento, siempre que el tamaño y forma sean suficientes para la introducción de una muestra en el dispositivo tal que la muestra se pueda poner en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos.

El dispositivo puede comprender uno o más miembros de fuerza. Los miembros de fuerza pueden aplicar presión al sistema de membrana de detección de analitos. La fuerza se aplica perpendicular o sustancialmente perpendicular a las membranas o capas del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 miembros de fuerza. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 miembros de fuerza. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una pluralidad de miembros de fuerza. Los miembros de fuerza pueden estar en contacto con un miembro de carcasa. Como se describe en el presente documento, una primera superficie del miembro de fuerza está en contacto con un miembro de carcasa (por ejemplo, primer o segundo miembro de carcasa). Como se describe en el presente documento, una segunda superficie del miembro de fuerza se pone en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza se puede usar para comprimir el sistema de membrana de detección de analitos para facilitar el flujo de la muestra a través del sistema de membrana de detección de analitos. La presión puede facilitar que la muestra circule verticalmente a través del sistema de membrana de detección de analitos. Los miembros de fuerza pueden estar orientados en el dispositivo independientemente entre sí. Los miembros de fuerza también se pueden manipular de forma que cada miembro de fuerza aplique una presión a un sistema de membrana de detección de analitos distinto y que la fuerza aplicada a cada sistema de membrana de detección de analitos sea diferente o, como se describe en el presente documento, la misma o sustancialmente la misma.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el dispositivo comprende uno o más miembros de bloqueo móviles. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo móvil se pone en contacto con un miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo móvil se pone en contacto con cada miembro de fuerza presente en el dispositivo. Por ejemplo, en un dispositivo que comprende un primer y segundo miembros de fuerza, el miembro de bloqueo móvil está en contacto con el primer miembro de fuerza y el segundo miembro de fuerza. El miembro de bloqueo móvil, como se describe en el presente documento, soporta el miembro de fuerza de modo que el miembro de fuerza esté en una posición subida. La posición subida se puede determinar comparando la posición del miembro de fuerza cuando está en contacto con el miembro de bloqueo móvil con cuando el miembro de fuerza no está en contacto con el miembro de bloqueo móvil. En ausencia de contacto entre el miembro de fuerza y el miembro de bloqueo móvil, el miembro de fuerza está en una primera posición. Cuando el miembro de bloqueo móvil está en contacto con el miembro de fuerza, el miembro de fuerza está en una segunda posición. Como se describe en el presente documento, se considera que la segunda posición del miembro de fuerza es una posición subida. La posición subida se puede usar para comprimir las capas (por ejemplo, membranas) del sistema de membrana de detección de analitos. Cuando el miembro de bloqueo móvil no está en contacto con el miembro de fuerza, como se describe en el presente documento, no se comprime el sistema de membrana de detección de analitos.

El dispositivo puede comprender uno o más miembros de bloqueo móviles. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una pluralidad de, o 1, 2, 3, 4 o 5 miembros de bloqueo móviles. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 miembros de bloqueo móviles. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un número de miembros de bloqueo móviles que es igual al número de miembros de fuerza presentes en el dispositivo.

Los miembros de bloqueo móviles también pueden comprender un miembro móvil, tal como, pero sin limitarse a, un asa. El miembro móvil se puede usar, por ejemplo, para girar o mover el miembro de bloqueo móvil de modo que el miembro de bloqueo se ponga en contacto con el miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, el miembro móvil desacopla los miembros de bloqueo del miembro de fuerza de modo que el miembro de fuerza cambie las posiciones (por ejemplo, de una posición subida a una posición bajada). El miembro móvil se puede usar para aliviar o aplicar la presión que se aplica sobre el sistema de membrana de detección de analitos. El miembro móvil también se puede usar aliviar o aplicar compresión del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el miembro móvil gira el miembro de bloqueo alrededor de un eje central del dispositivo. Por ejemplo, después de aplicar la muestra al dispositivo y hacer circular la muestra a través de al menos un sistema de membrana de detección de analitos, se mueve el miembro móvil, lo que hace girar el miembro de bloqueo móvil en cualquiera de en el sentido de las agujas del reloj o en sentido contrario a las agujas del reloj. La rotación del miembro de bloqueo móvil permite que se baje el miembro de fuerza a una posición diferente. La rotación del miembro de bloqueo móvil también puede permitir que se alivie la presión que se aplica al sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, la presión se alivia completamente o, como se describe en el presente documento, la presión solo se alivia parcialmente.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el miembro móvil que mueve el miembro de bloqueo móvil sobresale a través del primer o segundo miembro de carcasa. Como se describe en el presente documento, el miembro móvil es accesible a través de la salida de miembro móvil. Como se describe en el presente documento, el miembro móvil gira alrededor de un eje central del dispositivo cuando se mueve. Como se describe en el presente documento, el miembro móvil mueve el miembro de bloqueo móvil lateralmente (por ejemplo, horizontalmente) o verticalmente. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo móvil se mueve lateralmente (por ejemplo, horizontalmente) o verticalmente cuando es movido.

El miembro móvil y el miembro de bloqueo móvil se pueden construir como una única o como dos piezas. Como se describe en el presente documento, donde el miembro de bloqueo móvil y el miembro móvil son dos piezas separadas y se construyen para interaccionar entre sí de modo que el movimiento de uno mueva el otro. Por ejemplo, una de las dos piezas puede tener un "miembro macho" que sobresale de la superficie y se inserta en el "miembro hembra" de la otra pieza para formar la interacción.

También se puede usar el movimiento del miembro de bloqueo móvil por el miembro móvil para mover o retirar la almohadilla de conjugado presente en el sistema de membrana de detección de analitos. Como se analiza en el presente documento, la almohadilla de conjugado se puede retirar para permitir la visualización o el análisis de la membrana de prueba. La almohadilla de conjugado, como se analiza en el presente documento, se puede retirar completamente del sistema de membrana de detección de analitos o una cantidad que sea suficiente para permitir la visualización o el análisis de la membrana de prueba. El análisis de la membrana de prueba se puede basar únicamente en la inspección visual, o como se describe en el presente documento, se puede usar un lector óptico para analizar la membrana de prueba para determinar la ausencia o presencia de un antígeno en la muestra.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el dispositivo comprende una pluralidad, o dos o más sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende 1, 2, 3, 4 o 5 sistemas de membrana de detección de analitos. El sistema de membrana de detección de analitos puede ser como se describe en el presente documento y en todas partes de la presente solicitud.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el dispositivo comprende uno o más miembros de unión flexibles o no flexibles. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una pluralidad de miembros de unión flexibles o no flexibles. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 miembros de unión flexibles o no flexibles. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende 1,2, 3, 4 o 5 miembros de unión flexibles o no flexibles. Como se describe en el presente documento, el miembro de unión flexible o no flexible se pone en contacto con el miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, el miembro de unión flexible o no flexible se pone en contacto con el miembro de bloqueo móvil y la almohadilla de conjugado. El miembro de unión flexible o no flexible se puede usar para retirar o mover la almohadilla de conjugado lejos del resto de las capas (por ejemplo, membranas) del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un número de miembros de unión flexibles o no flexibles que es igual al número de sistemas de membrana de detección de analitos presentes en el dispositivo. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un número de miembros de unión flexibles que es igual al número de miembros de fuerza presentes en el dispositivo. Los miembros de unión flexibles o no flexibles también se pueden usar para retraer la almohadilla de conjugado de modo que revele o exponga una porción de o toda la membrana de prueba.

Por ejemplo, como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende tres sistemas de membrana de detección de analitos y tres miembros de fuerza. Se puede usar un dispositivo con más de un sistema de membrana de detección de analitos para detectar diferentes analitos o diferentes conjuntos de múltiples analitos. En dicho dispositivo, por ejemplo, el dispositivo comprende un primer, segundo y tercer miembro de unión. El primer miembro de unión puede estar en contacto con la almohadilla de conjugado del primer sistema de membrana de detección de analitos y un miembro de bloqueo móvil. Además, como se describe en el presente documento, el segundo miembro de unión puede estar en contacto con la almohadilla de conjugado del segundo sistema de membrana de detección de analitos y un miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, el tercer miembro de unión puede estar en contacto con la almohadilla de conjugado del tercer sistema de membrana de detección de analitos y un miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, el primer, segundo y tercer miembros de unión están en contacto con el mismo miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, el primer, segundo y tercer miembros de unión están en contacto con diferentes miembros de bloqueo móviles. Por ejemplo, como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembros de unión están en contacto con el mismo miembro de bloqueo móvil y el tercer miembro de unión está en contacto con un miembro de bloqueo móvil diferente. Cada miembro de unión se pone independientemente en contacto con uno o más miembros de bloqueo móviles.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el miembro de bloqueo móvil comprende una o más extensiones de miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, las extensiones de miembro de bloqueo móvil se ponen en contacto con un miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende varias extensiones de miembro de bloqueo móvil que son las mismas que el número de miembros de fuerza que están presentes en el dispositivo. Como se describe en el presente documento, la extensión de miembro de bloqueo móvil rodea o engloba parcialmente el miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, la extensión de miembro de bloqueo móvil rodea o engloba completamente el miembro de fuerza. La forma del miembro de bloqueo móvil o la extensión de miembro puede ser cualquier forma para mantener el miembro de fuerza en una posición subida. Como se describe en el presente documento, la extensión es un gancho o forma de tipo gancho que rodea o engloba parcial o completamente el miembro de fuerza. La forma no es esencial, siempre que la forma actúe de soporte para el accionador de fuerza (por ejemplo, miembro de fuerza).

El número de extensiones de miembro de bloqueo móvil puede ser el mismo o diferente del número de miembros de fuerza presentes en un dispositivo descrito en el presente documento. Como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende una pluralidad de extensiones de miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 extensiones de miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende 1, 2, 3, 4 o 5 extensiones de miembro de bloqueo móvil. Por ejemplo, como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende un primer, segundo y tercer miembros de fuerza, miembros de unión y una primera, segunda y tercera extensiones de miembro de bloqueo móvil. En este ejemplo no limitante, por ejemplo, el primer miembro de fuerza se pone en contacto con la primera extensión de miembro de bloqueo móvil, el segundo miembro de fuerza se pone en contacto con segunda la extensión de miembro de bloqueo móvil y el tercer miembro de fuerza se pone en contacto con la tercera extensión de miembro de bloqueo móvil.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el miembro de bloqueo móvil comprende una extensión de miembro de unión, que puede ser flexible o inflexible. Como se describe en el presente documento, la extensión de miembro de unión se pone en contacto con el miembro de unión. Como se describe en el presente documento, la extensión de miembro de unión comprende un nódulo de extensión de miembro de unión. El nódulo puede ser de cualquier forma o tamaño que permita que el miembro de unión se asegure de modo que el miembro de unión mantenga de forma segura su contacto con el miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, la una o más extensiones de miembro de bloqueo móvil se extienden radialmente (por ejemplo, hacia afuera) desde el centro del miembro de bloqueo móvil.

El número de extensiones de miembro de unión puede ser el mismo o diferente del número de sistemas de membrana de detección de analitos presentes en un dispositivo descrito en el presente documento. Como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende una pluralidad de extensiones de miembro de unión flexibles o no flexibles. Como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende al menos 1,2, 3, 4 o 5 extensiones de miembro de unión flexibles o no flexibles. Como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende 1, 2, 3, 4 o 5 extensiones de miembro de unión flexibles o no flexibles. Por ejemplo, como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende un primer, segundo y tercer miembros de unión y una primera, segunda y tercera extensiones de miembro de unión. En este ejemplo no limitante, por ejemplo, el primer miembro de unión se pone en contacto con la primera extensión de miembro de unión, el segundo miembro de unión se pone en contacto con la segunda extensión de miembro de unión, y el tercer miembro de unión se pone en contacto con la tercera extensión de miembro de unión.

Como se describe en el presente documento, los dispositivos comprenden miembros de unión y/o extensiones de miembro flexibles y no flexibles. En toda la presente divulgación, se puede hacer referencia a un miembro de unión o extensiones de miembro que son flexibles o no flexibles. Si una descripción divulga un miembro flexible, se entiende que también se divulga otra descripción donde el miembro es no flexible, a menos que el contexto dicte lo contrario.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el dispositivo comprende un sistema de canales. El sistema de canales se puede usar para transportar la muestra (por ejemplo, fluido) desde la abertura de entrada del dispositivo hasta el o los sistemas de membrana de detección de analitos presentes en el dispositivo. Como se usa en el presente documento, el "sistema de canales" se refiere a todo el sistema independientemente de cuántos canales individuales sean una parte del sistema. Por ejemplo, el sistema de canales puede comprender dos o más canales, tales como, pero sin limitarse a, capilares, que transportan fluido desde la entrada hasta un sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales comprende una o más ramas (por ejemplo, brazos). La una o más ramas pueden transportar fluido a uno o más sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales comprende 1, 2, 3, 4 o 5 ramas. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un número de ramas en el sistema de canales que es igual al número de sistemas de membrana de detección de analitos presentes en el dispositivo.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, cada rama del sistema de canales comprende tubos capilares que transportan el fluido desde la entrada hasta el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, cada rama comprende una pluralidad de tubos capilares. Como se describe en el presente documento, cada rama comprende al menos 1,2, 3, 4 o 5 tubos capilares. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales no comprende tubos capilares o formaciones de tipo tubo, pero está hecho de un material que permite que una porción de la muestra se transporte desde la entrada hasta la almohadilla de conjugado del sistema de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales es un material poroso que se puede usar para transportar la muestra desde la entrada hasta el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales está hecho del mismo material que la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales y la almohadilla de conjugado son una pieza contigua de material. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales comprende un material de Porex. Estos materiales porosos permiten que la entrada esté en comunicación fluida con el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el material poroso comprende polietileno, polipropileno, politetrafluoroetileno (PTFE), PVDF, acetato de etilvinilo, Nailon 6, poliuretano termoplástico (TPU), SCP y similares. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado y el sistema de canales son los mismos materiales o diferentes materiales. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales no comprende un material poroso y/o un sistema de tubos capilares.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el sistema de canales se pone en contacto con la entrada. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales se pone en contacto con la parte superior del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales se pone en contacto con la parte superior de la almohadilla de conjugado o una membrana que está encima de la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales se pone en contacto con un borde de la almohadilla de conjugado o un borde de una membrana que esté encima de la almohadilla de conjugado. Independientemente de cómo la muestra se pone en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos, como se describe en el presente documento, la muestra circula verticalmente a través del sistema de membrana de detección de analitos. Por lo tanto, aunque la muestra puede circular horizontalmente (por ejemplo, lateralmente) desde la entrada hasta el sistema de membrana de detección de analitos, la muestra no se analiza hasta que circule verticalmente a través del sistema de membrana de detección de analitos. Esto es claramente diferente de los sistemas de flujo lateral donde una muestra circula lateralmente (por ejemplo, horizontalmente) a través de múltiples membranas o capas de prueba.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el sistema de canales divide la muestra en porciones iguales, en donde cada porción igual se pone en contacto con un sistema de membrana de detección de analitos independiente. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales divide la muestra en una o más porciones desiguales. La una o más porciones desiguales se transportan entonces a sistemas de membrana de detección de analitos independientes.

Por ejemplo, en un dispositivo que comprende un primer y segundo sistemas de membrana de detección de analitos, el dispositivo comprende un sistema de canales que comprende una primera y segunda rama. Como se describe en el presente documento, la primera rama se pone en contacto con el primer sistema de membrana de detección de analitos y la segunda rama se pone en contacto con el segundo sistema de membrana de detección de analitos. Tras la aplicación de la muestra al dispositivo (por ejemplo, a través de la abertura de entrada), la muestra se transporta en porciones iguales a través de la primera y segunda ramas del sistema de canales al primer y segundo sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, la muestra se transporta en porciones desiguales a través de la primera y segunda ramas del sistema de canales al primer y segundo sistemas de membrana de detección de analitos. La muestra se puede dividir en porciones desiguales, por ejemplo, basándose en el número de capilares presentes en cada rama. Por ejemplo, la primera rama puede comprender más capilares que la segunda rama. El mayor número de capilares permitirá que más de la muestra se transporte a través de la primera rama que la segunda rama, suministrando así porciones desiguales al primer y segundo sistemas de membrana de detección de analitos.

Por consiguiente, las ramas del sistema de canales pueden tener el mismo número de capilares o diferentes números de capilares. Los números de capilares en cada rama del sistema de canales son independientes de cada rama. Es decir, cada rama del sistema de canales puede tener el mismo número o un número diferente de capilares que otra rama. Por lo tanto, como se describe en el presente documento, el sistema de canales del dispositivo se puede describir como un sistema de canales capilares. Como se describe en el presente documento, el sistema de canales está encerrado en una carcasa de canal que está separada y es distinta del primer y segundo miembros de carcasa descritos en el presente documento para el propio dispositivo. Como se describe en el presente documento, la carcasa de canal es transparente, translúcida, opaca, o parcialmente translúcida.

Como se analiza en el presente documento, la membrana de prueba se puede analizar ya sea visualmente con el ojo humano o a través de una máquina, tal como un lector óptico para determinar la presencia o ausencia de múltiples analitos con una única señal. Como se describe en el presente documento, el análisis se realiza a través de un portal. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende uno o más portales que son suficientes en tamaño para permitir la visualización de una membrana de prueba de uno o más de los sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, se usa un único portal para visualizar cada una de las membranas de prueba presentes en el dispositivo. Como se describe en el presente documento, el dispositivo no comprende un portal. Como se describe en el presente documento, donde el dispositivo no comprenda un portal, la membrana de prueba se puede todavía visualizar usando una carcasa transparente o translúcida para el dispositivo. Como se describe en el presente documento, la primera y/o segunda carcasa son transparentes o translúcidas. Donde la primera y/o segunda carcasas son transparentes o translúcidas, esto puede permitir un sistema de membrana de detección de analitos y su membrana de prueba cuando se revela tras el movimiento o la retirada de la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una pluralidad de portales. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 portales. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende 1, 2, 3, 4 o 5 portales. Como se describe en el presente documento, un dispositivo comprende 1 portal que es continuo y expone cada sistema de membrana de detección de analitos presente en el dispositivo a inspección visual.

Como se analiza en el presente documento, se puede permitir que los miembros de fuerza se muevan entre al menos dos posiciones (por ejemplo, subida o bajada; acoplada o desacoplada). Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza se baja y está englobado por una salida de accionador de fuerza. Por tanto, como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una o más salidas de accionador de fuerza que pueden aceptar el miembro de fuerza a medida que se baja. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende una pluralidad de salidas de accionador de fuerza. Como se describe en el presente documento, la salida de accionador de fuerza es una acanaladura. Como se describe en el presente documento, la salida de accionador de fuerza es un círculo o sustancialmente circular. La salida de accionador de fuerza se puede usar para suspender el accionador de fuerza (por ejemplo, miembro de fuerza) en una posición particular. La salida de accionador de fuerza también se puede usar para retener el accionador de fuerza en una segunda posición. Como se describe en el presente documento, la circunferencia de la salida de accionador de fuerza es mayor que la circunferencia de la porción del miembro de fuerza que está entrando en la salida. Como se describe en el presente documento, la circunferencia de la salida de accionador de fuerza es mayor que la circunferencia más grande del miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, la circunferencia de la salida de accionador de fuerza no es mayor que la circunferencia más grande del miembro de fuerza, en donde el miembro de fuerza tiene áreas con al menos dos circunferencias diferentes. Por ejemplo, en el presente documento se describen miembros de fuerza que tendrían dos circunferencias diferentes. Un miembro de fuerza puede comprender una tapa con una circunferencia y una estructura de soporte que soporta la tapa con una circunferencia diferente. La estructura de soporte puede, como se describe en el presente documento, tener una circunferencia más pequeña que la tapa. Como se describe en el presente documento, la salida de accionador de fuerza puede tener una circunferencia que es mayor que la circunferencia de la estructura de soporte, pero más pequeña que la circunferencia de la estructura de tapa. Como se describe en el presente documento, el número de salidas de accionador de fuerza es el mismo o diferente del número de los miembros de fuerza presentes en un dispositivo.

La salida de accionador de fuerza también puede ser una depresión continua en un miembro de carcasa que puede aceptar todos y cada uno de los miembros de fuerza en el dispositivo cuando se baja y ya no comprime el sistema de membrana de detección de analitos. La salida se puede usar para alojar temporalmente el miembro de fuerza o puede ser permanente, de modo que el miembro de fuerza no se puede subir otra vez para comprimir o comprimir más el sistema de membrana de detección de analitos.

Como se analiza en el presente documento y en toda la presente solicitud, la almohadilla de conjugado, membrana permeable, membrana de prueba y miembro absorbente se pueden comprimir o se comprimen por el miembro de fuerza bajo ciertas fuerzas como se describe en el presente documento y que incluyen, pero sin limitarse a, una fuerza desde aproximadamente 4,45 N (1 lbf) hasta aproximadamente 444,82 N (100 lbf). Como se describe en el presente documento, donde existen múltiples sistemas de membrana de detección de analitos, la presión aplicada a cada sistema de detección de membrana puede ser diferente o puede ser la misma. Por ejemplo, en un dispositivo que tiene un primer, segundo y tercer sistema de membrana de detección de analitos, el primer sistema de membrana de detección de analitos se puede comprimir bajo una fuerza de 22,24 N (5 lbf), el segundo sistema de membrana de detección de analitos se puede comprimir bajo una fuerza de 44,48 N (10 lbf), y el tercer sistema de membrana de detección de analitos se puede comprimir bajo una fuerza de 111,21 N (25 lbf). En otro ejemplo, como se describe en el presente documento, el primer y segundo sistemas de membrana de detección de analitos se comprimen bajo la misma presión y el tercer sistema de membrana de detección de analitos se comprime bajo una presión que es diferente del primer y segundo sistemas de membrana de detección de analitos. Se pueden usar las diferencias en la presión para usar diferentes caudales, que pueden ser útiles para diferentes analitos. La presión se correlaciona con el caudal. La presión se puede manipular por la posición del miembro de fuerza y cuánto se comprimen las capas del sistema de membrana de detección de analitos. Se puede determinar la fuerza específica usada y medir por un experto en la materia usando métodos conocidos y rutinarios.

Como se describe en el presente documento, un sistema que comprende cualquier dispositivo descrito en el presente documento, un recipiente de tampón y/o un colector de muestras. Como se describe en el presente documento, la presente divulgación describe un kit que comprende cualquier dispositivo descrito en el presente documento y uno o más de un control positivo, un control negativo, un folleto de instrucciones, un recipiente de tampón y/o un colector de muestras, o cualquier combinación de los mismos.

Los métodos descritos en el presente documento se pueden usar con un dispositivo que tiene, por ejemplo, una pluralidad, dos o más, sistemas de membrana de detección de analitos. Los métodos también se pueden usar con dispositivos que tienen 2, 3, 4 o 5 sistemas de membrana de detección de analitos. Donde existen más de dos sistemas de membrana de detección de analitos (por ejemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10), los métodos y las descripciones contenidos en el presente documento se modifican para ser coherentes con el número de sistemas de membrana de detección de analitos. Estos cambios se hacen según las descripciones contenidas en el presente documento y cualquier cambio rutinario que sería conocido por un experto en la materia. Los cambios para englobar más de 2 sistemas de membrana de detección de analitos basados en las descripciones contenidas en el presente documento combinadas con el conocimiento de un experto en la materia no requerirían excesiva experimentación. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende dos o más sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el método comprende poner en contacto una muestra (por ejemplo, la muestra que comprende múltiples analitos) con el dispositivo y una porción de la muestra que se transporta a través de un sistema de canales a las almohadillas de conjugado de los dos o más sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el método comprende detectar una reacción positiva o negativa para los analitos, en donde una reacción positiva indica la presencia de los múltiples analitos. Como se describe en el presente documento, los dos o más sistemas de membrana de detección de analitos se comprimen por el miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, la muestra circula verticalmente desde la almohadilla de conjugado hasta la membrana de prueba. Como se describe en el presente documento, el método comprende además comprimir el sistema de membrana de detección de analitos por el miembro de fuerza. Como se describe en el presente documento, el método comprende mover la almohadilla de conjugado de los dos o más sistemas de detección después de que una porción de la muestra se haya puesto en contacto con y circulado a través de la almohadilla de conjugado, exponiendo así la membrana de prueba para el análisis. Como se describe en el presente documento, la membrana de prueba se expone dentro de la abertura del portal para la detección. Como se describe en el presente documento, la almohadilla de conjugado de los dos o más sistemas de detección se mueve moviendo el miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, el movimiento del miembro de bloqueo móvil comprende girar el miembro de bloqueo móvil alrededor del eje central del dispositivo. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo móvil se mueve lateral o verticalmente. Como se describe en el presente documento, el miembro bloqueable móvil mueve la almohadilla de conjugado de los dos o más sistemas de detección simultánea o secuencialmente. Como se describe en el presente documento, el método comprende además aliviar la compresión de los dos o más sistemas de detección de analitos. La presión puede aliviarse o reducirse, por ejemplo, moviendo el miembro de bloqueo móvil. Como se describe en el presente documento, el miembro de bloqueo móvil se mueve (por ejemplo, gira) girando o moviendo el miembro móvil que está conectado al miembro de bloqueo móvil.

Como se describe en el presente documento, uno o más de los sistemas de membrana de detección de analitos se comprimen antes de que la muestra se ponga en contacto con el sistema de canales. Como se describe en el presente documento, uno o más de los sistemas de membrana de detección de analitos se comprimen antes de que la muestra entre en contacto con la almohadilla de conjugado del uno o más de los sistemas de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, cada uno de los sistemas de membrana de detección de analitos se comprime simultáneamente. Como se describe en el presente documento, cada uno de los sistemas de membrana de detección de analitos se comprime independientemente. Como se describe en el presente documento, cada uno de los sistemas de membrana de detección de analitos presentes en un dispositivo se comprime antes de que una muestra entre en contacto con la almohadilla de conjugado.

Como se describe en el presente documento, el método comprende aliviar la presión aplicada por un miembro de fuerza sobre los dos o más sistemas de membrana de detección de analitos, en donde dicho miembro de fuerza se mueve vertical u horizontalmente para aliviar dicha presión. Como se describe en el presente documento, el método comprende el miembro de fuerza que se mueve desde una posición hasta una segunda posición para aliviar la presión. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza mueve en o se pone en contacto con una salida de accionador de fuerza cuando el movimiento del miembro de fuerza alivia o reduce la presión o alivia o reduce la fuerza que se aplica al sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el miembro de fuerza se retira parcial o completamente del dispositivo.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, la presente divulgación proporciona un dispositivo para detectar un analito que comprende un accionador de presión, una liberación de presión, un sistema de membrana de detección de analitos, un receptáculo del sistema de membrana de detección de analitos y una salida. Como se describe en el presente documento, el receptáculo del sistema de membrana de detección de analitos es de tamaño y forma suficiente para aceptar el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el receptáculo es una acanaladura. Como se describe en el presente documento, el receptáculo es una caja que puede ser, pero no necesariamente, retirada del dispositivo.

Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos, como se describe en el presente documento, puede estar englobado o contenido dentro de un cartucho o carcasa. La carcasa puede comprender un primer y/o segundo miembro de carcasa. Como se describe en el presente documento, donde el sistema de membrana de detección de analitos está contenido dentro de una carcasa o un cartucho, el receptáculo es de tamaño y forma suficientes para aceptar la carcasa o el cartucho. Como se describe en el presente documento, la carcasa o cartucho comprende una entrada. La entrada se puede usar para aplicar la muestra al sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el cartucho o carcasa comprende una segunda salida que permite que la muestra circule a través y fuera de la carcasa y cartucho. El sistema de membrana de detección de analitos puede ser cualquier sistema de membrana de detección de analitos como se describe en el presente documento.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el dispositivo comprende un accionador de presión. El accionador de presión, por ejemplo, puede ser el miembro de fuerza que se describe en el presente documento. Como se describe en el presente documento, el accionador de presión es una válvula de aire o válvula de vacío que o bien aplica presión de aire al sistema de membrana de detección de analitos o extrae un vacío a través del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el accionador de presión se puede regular por una liberación de presión o regulador de presión. La liberación de presión o regulador de presión puede ser, por ejemplo, una liberación de vacío. La liberación o el regulador se puede usar para regular la presión o vacío que se aplica al sistema de membrana de detección de analitos. La presión o vacío se puede aplicar al sistema de membrana de detección de analitos a través de una salida o tubo que está presente en el dispositivo. La salida puede ser la misma salida presente en el cartucho o carcasa descrita en el presente documento o puede ser una salida o tubo diferente. La salida o tubo se puede usar de modo que la presión o vacío se apliquen con especificidad en vez de permitir que se difunda a través de todo el dispositivo.

Como se describe en el presente documento, la carcasa (por ejemplo, cartucho) que recubre la detección de membrana de analitos comprende una carcasa superior y una carcasa inferior. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende una pluralidad de soportes de membrana o de almohadilla. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende uno o más soportes de membrana o de almohadilla. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende 1, 2, 3, 4 o 5 soportes de membrana o de almohadilla. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende al menos 1, 2, 3, 4 o 5 soportes de membrana o de almohadilla. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende una entrada. Como se describe en el presente documento, la carcasa comprende una salida. Como se describe en el presente documento, el accionador de vacío se pone directa o indirectamente en contacto con la salida de la carcasa.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el dispositivo y cualquier dispositivo descrito en el presente documento comprende un eyector para la eyección de la carcasa. El eyector se puede usar para facilitar la retirada de la carcasa que contiene el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, los dispositivos comprenden un separador de carcasa. El separador de carcasa se puede usar para facilitar la separación de la carcasa. Como se describe en el presente documento, el eyector también puede actuar como separador de carcasa.

Además de los métodos descritos en el presente documento, también se describe en el presente documento un método de detección de múltiples analitos que comprende aplicar una muestra que contiene los múltiples analitos a un dispositivo que comprende un accionador de presión, un regulador de presión, un sistema de membrana de detección de analitos, un receptáculo del sistema de membrana de detección de analitos, y una salida o cualquier otro dispositivo o sistema de membrana de detección de analitos descrito en el presente documento. Como se describe en el presente documento, la muestra se pone en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos, en donde la muestra circula verticalmente a través del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el método comprende detectar la presencia o ausencia del analito. Esto se puede hacer según el complejo de puente que se forma mediante el uso de las unidades de interacción, reactivos de captura y unidades de detección de señal descritas en el presente documento.

En algunas descripciones de uso de los dispositivos para detectar múltiples analitos, la detección comprende retirar o mover la almohadilla de conjugado presente en el sistema de membrana de detección de analitos una cantidad suficiente para visualizar el resultado, en donde un resultado positivo indica la presencia de los múltiples analitos. Como se describe en el presente documento, la detección comprende retirar el sistema de membrana de detección de analitos del dispositivo y retirar o mover además la almohadilla de conjugado una cantidad suficiente para visualizar la detección del analito o múltiples analitos con una única señal. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos está contenido dentro de una carcasa o cartucho, y por lo tanto, como se describe en el presente documento, la carcasa o cartucho se retira del dispositivo antes del movimiento o retirada de la almohadilla de conjugado. Como se describe en el presente documento, la carcasa se separa en una primera (por ejemplo, superior) y una segunda (por ejemplo, inferior) carcasa antes de la retirada o movimiento de la almohadilla de conjugado como se describe en el presente documento. Como se describe en el presente documento, la separación de la carcasa en una primera y una segunda carcasa retira o mueve la almohadilla de conjugado para visualizar la membrana de prueba como se describe en el presente documento. Como se describe en el presente documento, la carcasa se separa manual y/o mecánicamente. Como se describe en el presente documento, la carcasa (por ejemplo, cartucho) se eyecta del dispositivo. Como se describe en el presente documento, la carcasa se eyecta del dispositivo por un eyector. Como se describe en el presente documento, la carcasa se separa por un separador. Como se describe en el presente documento, el eyector también funciona como un separador.

Como se describe en el presente documento, el método comprende aplicar presión sobre o extraer un vacío a través de un sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el método comprende liberar o reducir la presión o el vacío. Como se describe en el presente documento, la presión o el vacío se libera o reduce usando el regulador de presión. Como se describe en el presente documento de los métodos descritos en el presente documento, la muestra que se pone en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos circula a través del sistema de membrana de analitos a un caudal que está regulado por un accionador de presión. Como se describe en el presente documento, toda la muestra circula a través del sistema de membrana de detección de analitos a una velocidad constante. Como se describe en el presente documento, la muestra circula a través del sistema de membrana de detección de analitos a una velocidad variable. Como se describe en el presente documento, la velocidad variable comprende al menos un periodo de tiempo donde el caudal de una porción de la muestra es 0. Por ejemplo, se puede regular la presión que se aplica o el vacío que se extrae de modo que la muestra deje de circular a través del sistema de membrana de detección de analitos durante un periodo de tiempo. Esto se puede denominar una "permanencia". Como se describe en cualquier parte en el presente documento, la permanencia se puede implementar colocando membranas impermeables o ligeramente impermeables entre la almohadilla de conjugado y las otras capas del sistema de membrana de detección de analitos. La permanencia, sin embargo, también se puede regular regulando (por ejemplo, cambiando) la presión que se aplica al sistema de membrana de detección de analitos. La permanencia también se puede regular regulando (por ejemplo, cambiando) el vacío que se extrae a través del sistema de membrana de detección de analitos. Se puede usar cualquier método de regulación del caudal a través del sistema de membrana de detección de analitos, incluyendo, pero sin limitarse a, el caudal a través de la almohadilla de conjugado y/o la membrana de prueba.

Los dispositivos en el presente documento, también pueden automatizarse o usarse conjuntamente con un lector óptico u otro tipo de espectrómetro. Las ventajas de combinar los sistemas y dispositivos descritos en el presente documento con un lector óptico u otro tipo de espectrómetro es que se puede aumentar la sensibilidad de los dispositivos y ensayos de modo que sea necesario menos analito presente en la muestra para identificar que una muestra es positiva para ese analito. Esta mayor sensibilidad se puede usar entonces, por ejemplo, para determinar si el alimento contiene patógenos, una persona tiene una cierta enfermedad o afección, o si un producto tiene un analito que es de otro modo indetectable usando otros dispositivos y métodos en la misma cantidad de tiempo que se necesita para usar los métodos y dispositivos actualmente descritos.

Por consiguiente, en algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, se proporciona un dispositivo para detectar múltiples analitos que comprende una entrada de muestra, un receptáculo del cartucho de detección de analitos, una entrada del receptáculo del cartucho de detección de analitos, un extractor de almohadillas de conjugado opcional, un accionador de presión, un espectrómetro (por ejemplo, lector óptico), una unidad de pantalla, una unidad de procesamiento de señales. El accionador de presión puede ser un miembro de fuerza cuya posición se modifica para regular la presión que se aplica al sistema de membrana de detección de analitos que se usa conjuntamente con un dispositivo. El accionador de presión también puede regular la presión extrayendo un vacío a través del sistema de membrana de detección de analitos que se usa conjuntamente con un dispositivo. El espectrómetro puede ser cualquier espectrómetro que pueda detectar la presencia de una señal. La señal puede ser una señal óptica. La señal puede ser una señal que es emitida en un espectro elegido de, por ejemplo, espectro de infrarrojo; espectro de infrarrojo cercano; espectro visible, espectro de rayos X, espectro de ultravioleta, rayos gamma, espectro electromagnético, y similares.

El espectrómetro se puede conectar a la unidad de procesamiento de señales (por ejemplo, ordenador). La unidad de procesamiento de señales puede tomar la señal que se transmite a ella y analizar la señal para determinar la presencia o ausencia de la muestra. Un ejemplo de una unidad de procesamiento de señales es, pero sin limitarse a, un ordenador. Se puede programar la unidad de procesamiento de señales para analizar la señal transmitida por el espectrómetro. La programación puede implementar un algoritmo para analizar la señal para determinar la presencia o ausencia de un analito en la muestra. El algoritmo se puede basar en criterios que son previamente instalados en la memoria de la unidad de procesamiento de señales o que son introducidos por el usuario del dispositivo. Los tipos de información que se pueden introducir pueden ser cortes para una señal positiva o negativa, tiempos de procesamiento, y similares. La unidad de procesamiento de señales también se puede usar para regular la presión aplicada a o el vacío extraído a través del sistema de membrana de detección de analitos.

La unidad de procesamiento de señales se puede usar o programar para regular el caudal de la muestra a través del sistema de membrana de detección de analitos. El caudal se puede regular regulando la presión que se aplica a o un vacío que se extrae a través del sistema de membrana de detección de analitos. Como se ha descrito anteriormente con respecto a los métodos descritos en el presente documento, la muestra que se pone en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos circula a través del sistema de membrana de analitos a un caudal que está regulado por un accionador de presión. El regulador de presión puede ser a su vez regulado por, por ejemplo, la unidad de procesamiento de señales. Como se describe en el presente documento, toda la muestra circula a través del sistema de membrana de detección de analitos a una velocidad constante, que se regula por la unidad de procesamiento de señales. Como se describe en el presente documento, la muestra circula a través del sistema de membrana de detección de analitos a una velocidad variable, que se regula por la unidad de procesamiento de señales. Como se describe en el presente documento, la velocidad variable comprende al menos un periodo de tiempo donde el caudal de una porción de la muestra es 0, que se puede regular por la unidad de procesamiento de señales. Por ejemplo, se puede regular la presión que se aplica o el vacío que se extrae por la unidad de procesamiento de señales de modo que la muestra deje de circular a través del sistema de membrana de detección de analitos durante un periodo de tiempo. Como se analiza en el presente documento, esto se puede denominar una "permanencia". La permanencia, por ejemplo, se puede regular regulando (por ejemplo, cambiando) la presión que se aplica al sistema de membrana de detección de analitos, que se puede implementar o controlar por la unidad de procesamiento de señales. La permanencia también se puede regular regulando (por ejemplo, cambiando) el vacío que se extrae a través del sistema de membrana de detección de analitos, que se puede implementar o controlar por la unidad de procesamiento de señales. Se puede usar cualquier método de regulación del caudal a través del sistema de membrana de detección de analitos, incluyendo, pero sin limitarse a, el caudal a través de la almohadilla de conjugado y/o la membrana de prueba, y dicho método se puede regular o implementar por la unidad de procesamiento de señales.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, los dispositivos descritos en el presente documento y en todas partes, comprenden un miembro de posicionamiento del receptáculo del cartucho de detección de analitos. El miembro de posicionamiento del receptáculo del cartucho de detección se puede usar, por ejemplo, para colocar el sistema de membrana de detección de analitos en la posición apropiada para aceptar la muestra y/o para la muestra a analizar. Como se describe en el presente documento, el sistema se sitúa para el análisis por espectrómetro. El miembro de posicionamiento del receptáculo del cartucho de detección puede ser, como se describe en el presente documento, motorizado y/o controlado por la unidad de procesamiento de señales. Como se describe en el presente documento, el miembro de posicionamiento del receptáculo del cartucho de detección no está motorizado, pero se puede controlar por un controlador manual, tal como, pero sin limitarse a, una palanca o tornillo que permite que se modifique la posición del receptáculo. Como se describe en el presente documento, la unidad de procesamiento de señales controla el movimiento del receptáculo de detección de membrana de analitos moviendo el miembro móvil del receptáculo de detección de membrana de analitos. Como se describe en el presente documento, el miembro de posicionamiento del receptáculo del cartucho de detección de analitos está en contacto con el receptáculo del cartucho de detección de analitos.

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, los dispositivos descritos en el presente documento pueden comprender un receptáculo de residuos. El receptáculo de residuos puede estar en el interior del dispositivo o fuera, pero todavía en contacto con el dispositivo. El receptáculo de residuos puede aceptar sistemas de membrana de detección de analitos que se han usado. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos está contenido en una carcasa (por ejemplo, cartucho). La carcasa se puede eyectar, a continuación, dentro del receptáculo de residuos. La eyección puede ser manual o automatizada. Como se describe en el presente documento, la eyección está controlada por una unidad de procesamiento de señales. Como se describe en el presente documento, la unidad de procesamiento de señales controla un eyector que eyecta el sistema de membrana de detección de analitos del receptáculo del sistema de membrana de detección de analitos dentro del receptáculo de residuos. Al igual que todos los dispositivos descritos en el presente documento, como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un sistema de membrana de detección de analitos, que puede o no estar encerrado en una carcasa (por ejemplo, cartucho).

En algunas descripciones de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, el accionador de presión se pone en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el accionador de presión está unido al dispositivo en un punto que permite el movimiento del accionador de presión. Como se describe en el presente documento, el accionador de presión está unido en un punto de giro que permite que el accionador de presión gire en un único punto de contacto.

Como se describe en el presente documento, los dispositivos descritos en el presente documento comprenden una pantalla. Como se describe en el presente documento, la pantalla es una pantalla electrónica. Como se describe en el presente documento, la unidad de procesamiento de señales recibe una entrada del espectrómetro y muestra información en la unidad de pantalla. La unidad de pantalla puede mostrar diversa información, incluyendo, pero sin limitarse a, la presencia y/o ausencia de uno o más analitos, el estado y similares.

Como se describe en el presente documento, la presente divulgación comprende detectar los múltiples analitos usando un dispositivo que comprende una unidad de procesamiento de señales o un dispositivo descrito en el presente documento. Como se describe en el presente documento, el método comprende poner en contacto el dispositivo con una muestra que se pone en contacto con el sistema de membrana de detección de analitos dentro del dispositivo. La muestra circula, a continuación, a través del sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el método comprende detectar la presencia o ausencia del analito. Como se describe en el presente documento, la detección comprende el lector óptico que detecta una señal óptica del sistema de membrana de analitos, el lector óptico que comunica la señal óptica con la unidad de procesamiento de señales, la unidad de procesamiento de señales que analiza la señal óptica para determinar la presencia o ausencia del analito; y la unidad de procesamiento de señales que muestra un resultado en la unidad de pantalla. El resultado mostrado puede ser visual y/o audible. La señal analizada puede ser una señal en un espectro elegido de espectro de infrarrojo; espectro de infrarrojo cercano; espectro visible, espectro de rayos X, espectro de ultravioleta, rayos gamma o espectro electromagnético. Como se describe en el presente documento, la señal está en el espectro de infrarrojo cercano. Como se describe en el presente documento, el método comprende eyectar el sistema de membrana de detección de analitos en un receptáculo de residuos. Como se describe en el presente documento, la unidad de procesamiento de señales es un ordenador.

Haciendo referencia a los dibujos, como se describe en el presente documento, las Figuras 1 a 36 representan descripciones de dispositivos, componentes de dichos dispositivos representativos, y diversas vistas de dichos dispositivos integrados que se pueden usar en los métodos y/o conjuntamente con o sin otros dispositivos y/o sistemas descritos en el presente documento.

Estos dispositivos descritos en el presente documento son no limitantes y se puede usar cualquier otro dispositivo, incluyendo otros dispositivos de flujo vertical, para detectar múltiples analitos según los métodos descritos en el presente documento usando los complejos de puente que se crean usando los diversos marcadores y reactivos de captura.

La Figura 8 representa un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un recipiente de tampón (15), un segundo miembro de carcasa (20), una acanaladura para el botón de deslizamiento (25), un botón de deslizamiento (30), una abertura de entrada (35), un collar (40) y una membrana de prueba (45). La Figura 8 representa una membrana de prueba (45) que comprende dos reactivos de captura. El primer (10) y segundo (20) miembros de carcasa también se pueden denominar los miembros de carcasa inferior y superior, respectivamente. En la Figura 1, la muestra se aplicaría a través de la abertura de entrada (35) y se puede permitir que circule verticalmente a través de la membrana de prueba (45). En la Figura 8, la acanaladura (25) permite que se mueva el botón de deslizamiento, que cuando se une al miembro de bloqueo mueve el miembro de bloqueo y puede, como se describe en el presente documento, mover la almohadilla de conjugado y cambiar la posición del miembro de fuerza.

La Figura 9 representa un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un segundo miembro de carcasa (20), una acanaladura para el botón de deslizamiento (25), un botón de deslizamiento (30), una abertura de entrada (35), un collar (40), una membrana de prueba (45), una almohadilla de conjugado (50), una pluralidad de miembros absorbentes (por ejemplo, almohadillas) (55), un miembro de unión (60), un miembro de bloqueo (65) y un miembro de fuerza (70). La Figura 9 representa la almohadilla de conjugado (50), membrana de prueba (45) y almohadilla absorbente (55) dispuestas sustancialmente en paralelo entre sí. El miembro de fuerza (70), cuando está en contacto con el miembro absorbente, aplicaría presión que es sustancialmente perpendicular a la almohadilla de conjugado. Como puede verse en la Figura 9, una muestra que se pone en contacto con el dispositivo a través de la abertura de entrada (35) circularía verticalmente a través de la almohadilla de conjugado (50) a la membrana de prueba (45). No mostrado explícitamente en la Figura 9, pero como se describe en el presente documento, la membrana permeable también es sustancialmente paralela a la almohadilla de conjugado (50) y a la membrana de prueba (45), poniéndose una primera superficie de la membrana permeable en contacto con una superficie de la almohadilla de conjugado (50), poniéndose una segunda superficie de la membrana permeable en contacto con una superficie de la membrana de prueba (45).

La Figura 10 representa una almohadilla de conjugado (50), una membrana permeable (75), una membrana de prueba (45) y una pluralidad de miembros absorbentes (55) que se pueden usar para detectar múltiples analitos con una única señal. La Figura 10 representa los componentes que se pueden usar para detectar múltiples analitos con una única señal que son sustancialmente paralelos entre sí. La Figura 10 representa la membrana permeable (75) que comprende una abertura. Esta abertura se puede usar para permitir la visualización y detección de los resultados de la membrana de prueba.

La Figura 11 representa un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un recipiente de tampón (15), un segundo miembro de carcasa (20), un botón de deslizamiento (30), una membrana de prueba (45), una almohadilla de conjugado (50), una membrana permeable (75), una pluralidad de miembros absorbentes (por ejemplo, almohadillas) (55), un miembro de unión (60), un miembro de bloqueo (65) y un miembro de fuerza (70). La Figura 11 también representa el miembro de fuerza (70) que comprende un vástago (72) y una cabeza (71) donde la cabeza (71) es más ancha que el vástago (72).

La Figura 12 representa una vista parcial de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un miembro de bloqueo (65), un botón de deslizamiento (30) y miembro de fuerza (70). La Figura 12 representa el miembro de bloqueo (65) en contacto con el miembro de fuerza (70) de modo que el miembro de fuerza (70) esté en un método subido. La Figura 12 también representa el movimiento del miembro de bloqueo (65) y el botón de deslizamiento (30) lejos del miembro de fuerza (70) que permite que el miembro de fuerza cambie las posiciones. Como se describe en el presente documento, el cambio en la posición es tal que se baja el miembro de fuerza.

La Figura 13 representa una vista en corte lateral de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un segundo miembro de carcasa (20), un botón de deslizamiento (30), un miembro de bloqueo (65), un collar (40), una junta tórica (41), un miembro de fuerza (70) y un soporte para el miembro de fuerza (73). El soporte para el vástago puede ser, por ejemplo, parte del primer miembro de carcasa (10) y está sombreado de forma diferente para fines de ejemplo solamente. La Figura 13 representa el botón (30) en contacto con el miembro de bloqueo (65) de tal forma que el movimiento del botón (30) moverá el miembro de bloqueo (65). El movimiento del miembro de bloqueo (65) quitará el soporte del miembro de fuerza (70), lo que permitiría que el miembro de fuerza (70) cambiara de posiciones. La Figura 13 también representa el vástago (72) y la cabeza (71) del miembro de fuerza. La cabeza (71) crea un labio donde el miembro de bloqueo (65) se puede deslizar debajo y soportar el miembro de fuerza (70).

La Figura 14 representa una vista parcial de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un segundo miembro de carcasa (20), una abertura de entrada (35), una membrana de prueba (45), una almohadilla de conjugado (50), una pluralidad de miembros absorbentes (55), un miembro de unión (60), un miembro de bloqueo (65) y un miembro de fuerza (70). La Figura 8 representa el miembro de unión (60) unido a la almohadilla de conjugado (50) y el miembro de bloqueo (65). La Figura 14 también representa la almohadilla de conjugado que se comprime contra el segundo miembro de carcasa (20) y el perímetro de la abertura de entrada (35). La Figura 14 representa la cabeza del miembro de fuerza (71) que aplica la presión poniéndose en contacto con la pluralidad de miembros absorbentes (55). En la Figura 14, se puede aplicar una muestra al dispositivo a través de la abertura de entrada (35) de modo que la muestra se ponga en contacto con la almohadilla de conjugado (50) y, debido a la presión, la muestra a través del flujo vertical se pone en contacto con la membrana de prueba (45).

La Figura 15A representa una vista parcial de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un segundo miembro de carcasa (20), una abertura de entrada (35), una membrana de prueba (45), una almohadilla de conjugado (50), una pluralidad de miembros absorbentes (55), un miembro de unión (60), un miembro de bloqueo (65) y un miembro de fuerza (70). La Figura 8 representa el movimiento del miembro de bloqueo (65), que está unida al miembro de unión (60). El movimiento del miembro de unión (60), que está unido al almohadilla de conjugado (50), mueve la almohadilla de conjugado. La Figura 15A representa el miembro de fuerza de prueba (70) que cambia posiciones y una reducción o eliminación de la presión y/o compresión de la membrana de prueba (45). La Figura 15C y 15D también representa el movimiento de la almohadilla de conjugado (50) lejos de la abertura de entrada (35) que revela la membrana de prueba (45) para visualización y/o detección.

La Figura 16 representa un miembro de unión (60) unido a una almohadilla de conjugado (50). La Figura 16 representa muescas (51) en la almohadilla de conjugado (50) como localizaciones para que el miembro de unión (60) se una. El miembro de unión también se puede unir a través de otros medios tales como a través de adhesivos, grapas, y otras formas de unión.

La Figura 17 representa una vista parcial del dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un segundo miembro de carcasa (20), una pluralidad de almohadillas o membranas (80), en donde la pluralidad de almohadillas comprende una membrana de prueba, una membrana permeable, y uno o más miembros absorbentes, y miembros de retención (85) que pueden retener la pluralidad de almohadillas o membranas (80). La Figura 10 representa las estructuras que cuando la almohadilla de conjugado se mueve la pluralidad de almohadillas siguen en su sitio. Se puede usar cualquier medio u otra estructura para mantener la pluralidad de almohadillas en su sitio.

La Figura 18 representa un dispositivo representativo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (1002) que comprende además una entrada de carcasa (1006), y un segundo miembro de carcasa (1004). Como se describe en el presente documento, el primer y segundo miembros de carcasa se pueden construir como una única unidad. La entrada de carcasa permite la introducción de una muestra sobre los componentes dentro de la carcasa. La entrada de carcasa puede ser de tamaño suficiente para manipular una cantidad apropiada de volumen de una solución que se añade al dispositivo. Como se describe en el presente documento, el tamaño de la abertura creada por la entrada de carcasa es suficiente para manipular aproximadamente 0,1 a aproximadamente 3 ml, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 2,5 ml, aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2,0 ml, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1,0 ml, aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5 ml, aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,0 ml, y aproximadamente 1,0 a aproximadamente 2,0 ml. Como se describe en el presente documento, las dimensiones del dispositivo son tales que cualquier dimensión (por ejemplo, anchura, profundidad o altura) sea inferior o igual a aproximadamente 5,08 cm (2,000 pulgadas). Como se describe en el presente documento, la altura del dispositivo es inferior a aproximadamente 0,635 cm (0,250 pulgadas), inferior a aproximadamente 0,254 cm (0,100 pulgadas), inferior a aproximadamente 0,191 cm (0,075 pulgadas), inferior a aproximadamente 0,165 cm (0,065 pulgadas), inferior a aproximadamente 0,152 cm (0,06 pulgadas), o inferior a aproximadamente 0,140 cm (0,055 pulgadas). Como se describe en el presente documento, la altura del dispositivo es aproximadamente 0,127 cm (0,050 pulgadas). Como se describe en el presente documento, la anchura o profundidad del dispositivo es inferior o igual a aproximadamente 5,08 cm (2,000 pulgadas), aproximadamente 4,83 cm (1,900 pulgadas), aproximadamente 4,699 cm (1,850 pulgadas), aproximadamente 4,572 cm (1,800 pulgadas), aproximadamente 4,445 cm (1,750 pulgadas), aproximadamente 4,191 cm (1,650 pulgadas), aproximadamente 4,064 cm (1,600 pulgadas), o aproximadamente 3,81 cm (1,500 pulgadas). Como se describe en el presente documento, el dispositivo tiene aproximadamente 0,127 cm (0,050 pulgadas) de altura, aproximadamente 4,445 cm (1,750 pulgadas) de profundidad y aproximadamente 3,81 cm (1,500 pulgadas) de anchura.

Como se describe en el presente documento, el dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal comprende una pluralidad de componentes que comprenden uno o más de: un miembro amovible, una almohadilla de conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba, un miembro absorbente, un miembro de fuerza, un miembro de soporte, o cualquier combinación de los mismos.

Como se describe en el presente documento, el dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal comprende un miembro de fuerza, un miembro amovible, una almohadilla de conjugado, una membrana de prueba, un miembro adhesivo y/o un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, el dispositivo comprende un sistema de membrana de detección de analitos. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende una almohadilla de conjugado, una membrana de prueba y un miembro absorbente. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende una membrana permeable adicional, pero el dispositivo también puede estar libre de una membrana permeable. Como se describe en el presente documento, el sistema de membrana de detección de analitos comprende, en el siguiente orden: una almohadilla de conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba y un miembro absorbente.

La Figura 19 representa una vista en despiece ordenado del interior de un dispositivo representativo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, que comprende un miembro amovible (1005), una almohadilla de conjugado (1050), un miembro adhesivo (1010), una membrana de prueba (1030), un miembro absorbente (1040) y un miembro de soporte (1020), en donde el miembro de soporte comprende además una entrada de miembro de soporte opcional (1025). El miembro amovible y el miembro adhesivo también pueden comprender entrada de miembro amovible opcional (1008) y entrada de miembro adhesivo (1012), respectivamente. Dichos componentes podrían residir dentro de, por ejemplo, el dispositivo de la Figura 18.

La Figura 20 representa componentes representativos de otro dispositivo representativo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un miembro adhesivo (1010), un miembro de soporte (1020), una membrana de prueba (1030) y un miembro absorbente (1040). Como puede verse en la Figura 20, una muestra puede circular a través del miembro adhesivo (1010) y ponerse en contacto con la membrana de prueba (1030).

La Figura 21 representa un miembro adhesivo (1010), un miembro de soporte (1020), una membrana de prueba (1030) y un miembro absorbente (1040). La Figura 21 representa los componentes que son sustancialmente paralelos entre sí. La Figura 21 representa además el miembro de soporte (1020) que comprende una entrada de miembro de soporte (1025). Esta entrada se puede usar para permitir que la muestra circule verticalmente a través del dispositivo.

La Figura 22 representa, en parte, una almohadilla de conjugado (1050), una membrana de prueba (1030) y un miembro absorbente (1040). La Figura 22 también representa la almohadilla de conjugado en contacto y/o unida a un miembro amovible (1005). La Figura 22 también representa el miembro amovible que se retira o se aleja del dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, que también retira o aleja del dispositivo la almohadilla de conjugado. El movimiento de la almohadilla de conjugado permite visualizar la membrana de prueba, lo que facilita el análisis y la detección de analitos, incluyendo múltiples analitos con una única señal.

La Figura 23 representa ejemplos de miembros de fuerza (por ejemplo, clips). Los miembros de fuerza representativos pueden venir en una variedad de formas, tamaños y configuraciones, pero cada miembro aplica presión sobre los componentes que se colocan en o sobre el miembro de fuerza. Cada miembro de fuerza también puede comprender una abertura (+) dentro de la que se aplica la muestra de análisis. La Figura 23 representa ejemplos no limitantes de miembros de fuerza con un primer miembro (110) y un segundo miembro (100).

Las Figuras 24A, 24B, 24C y 24D representan, en parte, un miembro de fuerza que comprende un primer miembro (110), b) un segundo miembro (100), una entrada (115) y un sistema de membrana de detección de analitos (120). Las Figuras 24A y 24B también representan, en parte, una almohadilla de conjugado (1050). La almohadilla de conjugado no se observa en las Figuras 24C y 24D. Las Figuras 24C y 24D también representan, en parte, una membrana de prueba (1030) que es parte del sistema de membrana de detección de analitos. La Figura 24D también representa, en parte, una membrana de prueba (1030) que ha reaccionado con un control, que se visualiza por la banda.

La Figura 25 representa, en parte, un recipiente que comprende una lengüeta amovible o móvil (200), una entrada (210), una almohadilla de conjugado (1050) y la lengüeta de la almohadilla de conjugado (1050). La lengüeta de la almohadilla de conjugado (255) se puede usar para retirar la almohadilla de conjugado (1050) del dispositivo para exponer la membrana de prueba. Por ejemplo, un usuario podría tirar de la lengüeta de la almohadilla de conjugado (255) para retirar la almohadilla de conjugado (1050) del recipiente. Lo que no se visualiza es el sistema de membrana de detección de analitos que está comprimido entre un primer miembro (110) y un segundo miembro (100) como se describe en el presente documento.

La Figura 26 representa, en parte, un primer miembro externo (310), un segundo miembro externo (320), una lengüeta móvil o amovible (330) y una almohadilla de conjugado (1050). La lengüeta móvil o amovible (330) comprende una entrada que expone la almohadilla de conjugado (1050) de modo que la muestra se pueda aplicar a la almohadilla de conjugado. La Figura 26 no muestra el primer miembro interno (110) y el segundo miembro interno (100) que comprimen el sistema de membrana de detección de analitos (120). La lengüeta amovible o móvil (330) cuando se mueve o se retira, mueve o retira la almohadilla de conjugado (1050), lo que permite visualizar y analizar la membrana de prueba.

La entrada de miembro amovible dentro del miembro amovible permite la introducción de una muestra sobre la almohadilla de conjugado. La entrada puede ser de tamaño suficiente para manipular una cantidad apropiada de volumen de una solución que se añade al dispositivo. Como se describe en el presente documento, el tamaño de la entrada es lo suficientemente grande como para manipular aproximadamente 0,1 a aproximadamente 3 ml, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 2,5 ml, aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2,0 ml, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1,0 ml, aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5 ml, aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,0 ml, y aproximadamente 1,0 a aproximadamente 2,0 ml. El miembro amovible también se puede construir de modo que una porción del miembro amovible sea permeable a soluciones (es decir, el área definida por la entrada de miembro amovible) y otra área sea impermeable. El área permeable puede actuar de entrada debido a que permitiría que las soluciones cruzaran el miembro amovible y se pusieran en contacto con la almohadilla de conjugado. La entrada de miembro amovible puede tener una cualquiera de numerosas formas y tamaños. Como se describe en el presente documento, el primer miembro de carcasa sirve de miembro amovible. Como se describe en el presente documento, el primer miembro de carcasa y el miembro amovible son componentes separados. Como se describe en el presente documento, donde el primer miembro de carcasa y el miembro amovible son componentes separados, al menos una porción de la entrada de carcasa y la entrada de miembro amovible se solapan, de modo que una solución pueda entrar en a través de ambas entradas.

Como se describe en el presente documento, el miembro amovible se pone en contacto con una primera superficie de una almohadilla de conjugado. El miembro amovible también se puede unir a la almohadilla de conjugado. El miembro amovible se puede unir a la almohadilla de conjugado mediante cualquier medio de modo que, cuando el miembro amovible se retire del dispositivo o cambie su posición, la almohadilla de conjugado también se retire o cambie también la posición de la almohadilla de conjugado. El miembro amovible se puede unir a la almohadilla de conjugado con, por ejemplo, pero sin limitarse a, un adhesivo. Los adhesivos incluyen, pero sin limitarse a, pegamento, cinta, u otro sustancia que permitiría que el miembro amovible y la almohadilla de conjugado se unieran entre sí.

El miembro amovible, como se describe en el presente documento, se pone directamente en contacto con la almohadilla de conjugado o se pone indirectamente en contacto con la almohadilla de conjugado a través de otra capa. La muestra se puede, como se describe en el presente documento, aplicar directamente a la almohadilla de conjugado a través de la abertura en el miembro amovible.

La Figura 27A representa, en parte, una vista elevada de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende una pluralidad de portales (2036), una entrada (2035) y un miembro de carcasa (2010). La Figura 27A también representa, en parte, una porción del sistema de canales (2300) que es visible a través del portal (2301). La Figura 27B representa, en parte, un área ampliada del dispositivo, específicamente, el portal (2036). En el portal también se puede observar una pluralidad de tubos capilares (2301).

La Figura 28 representa una vista desde abajo de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, que comprende una pluralidad de salidas de accionador de fuerza (2200), un miembro de carcasa (2020) y un miembro móvil (2100).

La Figura 29 representa, en parte, un primer miembro de carcasa (2010), un segundo miembro de carcasa (2020) una pluralidad de portales (2036), una entrada (2035), un sistema de canales (2300), una pluralidad de tubos capilares (2301), una almohadilla de conjugado (2050), una pluralidad de membranas de prueba (2045) y miembro de bloqueo móvil (2065). El sistema de canales representado en la Figura 29 se representa como consistiendo en 3 ramas, lo que es igual al número de sistemas de membrana de detección de analitos presentes en el dispositivo.

La Figura 30 representa, en parte, un segundo miembro de carcasa (2020), un sistema de canales (2300), una pluralidad de tubos capilares (2301), una almohadilla de conjugado (2050), una membrana de prueba (2045) y una membrana absorbente (2055), y un miembro de bloqueo móvil (2065), un miembro de unión flexible (2060), un sistema de membrana de detección de analitos (2400)

La Figura 31A representa, en parte, una pluralidad de salidas de accionador de fuerza (2200), un sistema de canales (2300), una pluralidad de tubos capilares (2301), una pluralidad de miembros de fuerza (2070), un miembro de bloqueo móvil (2065), una pluralidad de extensiones de miembro de bloqueo móvil (2068), una almohadilla de conjugado (2050), una pluralidad de extensiones de miembro de unión flexibles o no flexibles (2066) y nódulo (2067), una membrana de prueba (2045) y membrana absorbente (2055).

La Figura 31B representa, en parte, una porción similar del dispositivo mostrado en la Figura 24A, sin embargo, el miembro de bloqueo móvil (2065) se ha girado alrededor de un eje central y la extensión de miembro de bloqueo móvil (2068) ya no soporta el miembro de fuerza (2070) y el miembro de fuerza ha retrocedido o caído en la salida de accionador de fuerza (2200).

La Figura 32 representa, en parte, una vista en despiece ordenado de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal que comprende un sistema de canales (2300), una almohadilla de conjugado (2050), una membrana de prueba (2045), una pluralidad de miembros de fuerza (2070), un miembro móvil (2100) que puede girar el miembro de bloqueo móvil representado (2065). La Figura 32 también representa, en parte, extensión de miembros de bloqueo móviles (2068), una pluralidad de extensiones de miembros de unión flexibles o no flexibles (2066) y nódulo (2067), un miembro de unión flexible (2060), una salida (2105), un segundo miembro de carcasa (2020), una pluralidad de salidas de accionador de fuerza (2200) y una porción de un sistema de membrana de detección de analitos (2047). El área que comprende la porción del sistema de membrana de detección de analitos (2047) ha sido agrandada y representa, en parte, un miembro de fuerza (2070), una membrana de prueba (2045), un miembro absorbente (2055) y porción de la extensión de miembro de bloqueo móvil (2068).

La Figura 33 representa, en parte, una carcasa (2020), un canal capilar (2301) y el sistema de canales (2300). Una porción de la Figura 33 ha sido ampliada para representar la almohadilla de conjugado (2050), el miembro absorbente (2055) y una pluralidad de tubos capilares (2301).

La Figura 34 representa, en parte, una vista en sección transversal de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal, que comprende una pluralidad de portales (2036), una entrada (2035), un miembro de bloqueo móvil (2065), un miembro móvil que puede mover el miembro de bloqueo móvil (2100), un miembro de fuerza (2700), una salida de accionador de fuerza (2200), una pluralidad de miembros absorbentes (2055), una membrana de prueba (2045) y una extensión de miembros de bloqueo móviles (2068). La Figura 34 también representa una vista en despiece ordenado de una porción del sistema de membrana de detección de analitos que comprende una almohadilla de conjugado (2050), una membrana permeable (2056) y un miembro absorbente (2055).

La Figura 35 representa, en parte, un ejemplo no limitante de un miembro de bloqueo móvil (2065) y una extensión de miembros de bloqueo móviles (2068).

La Figura 36 representa, en parte, una vista exterior y una vista interior de una carcasa que comprende una pluralidad de portales (2036) y una entrada (2035).

La Figura 37 representa, en parte, una vista interior y una vista exterior de una carcasa que comprende una pluralidad de salidas de accionador de fuerza (2200) y una salida de miembro móvil (2105).

La Figura 38 representa, en parte, un dispositivo que comprende un cartucho (3100) que puede englobar un sistema de membrana de detección de analitos, un accionador de fuerza (3200) y liberación de fuerza (3000), y salida (3400), y un receptáculo del sistema de membrana de detección de analitos (3300).

La Figura 39 representa, en parte, una vista ampliada de la salida (3400), el receptáculo (3300) y el cartucho (3100) representados en la Figura 31.

La Figura 40 representa, en parte, una vista en despiece ordenado de un cartucho (3100) que comprende un primer miembro de carcasa (3110), una entrada (3135), una almohadilla de conjugado (3350), un segundo miembro de carcasa (3120) y una pluralidad de soportes de membrana (3122).

La Figura 41 representa, en parte, un dispositivo para detectar un analito que comprende una entrada (3335), un receptáculo del sistema de membrana (3300) y pantalla (3500).

La Figura 42 representa, en parte, el interior del dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal representado en la Figura 41. El dispositivo comprende un cartucho que comprende un sistema de membrana de detección de analitos (3100), un receptáculo del sistema de membrana (3300), un accionador de fuerza (3200), un espectrómetro (por ejemplo, lector óptico o fotodetector (3600), un extractor de almohadillas de conjugado opcional (3201), un receptáculo de residuos opcional (3606), un motor y desplazador de receptáculos del sistema de membrana (3605/3607).

La Figura 43, muestra el interior de un dispositivo que se puede usar para detectar múltiples analitos con una única señal representado en las Figuras 41 y 42 en diversas etapas de uso con los mismos componentes representados en la Figura 35. La Figura 43A representa el cartucho siendo insertado en el receptáculo. La Figura 43B representa el receptáculo que contiene el cartucho que se mueve debajo de la entrada para la aplicación de muestras y la Figura 43C representa la muestra que se analiza por el espectrómetro.

La Figura 44 representa una vista en despiece ordenado de un dispositivo que se puede usar para la detección de una pluralidad de analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un segundo miembro de carcasa (20), una acanaladura para el botón de deslizamiento (25), un botón de deslizamiento (30), una abertura de entrada (35), una membrana de prueba (45), una almohadilla de conjugado (50), una membrana adicional (51), un adhesivo (52), una pluralidad de miembros absorbentes (por ejemplo, almohadillas) (55), un miembro de unión (60), un miembro de bloqueo (65) y un miembro de fuerza (70). Los componentes se pueden ensamblar como se describe y/o se muestra en el presente documento para fabricar un dispositivo que puede detectar analitos usando flujo vertical.

La Figura 45 representa una vista parcialmente en despiece ordenado de un dispositivo que se puede usar para la detección de una pluralidad de analitos con una única señal que comprende un primer miembro de carcasa (10), un segundo miembro de carcasa (20), una acanaladura para el botón de deslizamiento (25), un botón de deslizamiento (30), una abertura de entrada (35), una membrana de prueba no vista, una almohadilla de conjugado (50), una pluralidad de miembros absorbentes (por ejemplo, almohadillas) (no mostradas), un miembro de unión (60), un miembro de bloqueo (no mostrado) y un miembro de fuerza (no mostrado). Otras variaciones de este dispositivo también se pueden realizar y usar según los métodos descritos en el presente documento.

Las divulgaciones se describen ahora con referencia a los siguientes ejemplos. Estos ejemplos se proporcionan solo con el propósito de ilustrar y las divulgaciones no deben interpretarse de ninguna manera como limitadas a estos ejemplos, sino que debe interpretarse que incluyen todas y cada una de las variaciones que resulten obviad como resultado de la enseñanza proporcionada en el presente documento. Los expertos en la materia reconocerán fácilmente una diversidad de parámetros no críticos que podrían cambiarse o modificarse para producir resultados esencialmente similares.

Ejemplos

Ejemplo 1:

Se realizaron dos reacciones de PCR separadas con genes de la toxina Shiga como molde que generaron amplicones marcados con: 1) digoxigenina y biotina, y 2) FITC y biotina. Los amplicones fueron luego o bien mezclados juntos en presencia o ausencia de estreptavidina (unidad de puente), o se hicieron discurrir por separado en un flujo rápido a través del ensayo: Muestra A) amplicón 1 solo, Muestra B) amplicón 2 solo, o Muestra C) amplicón 1 amplicón 2 con y sin estreptavidina. El flujo a través del ensayo consistió en un soporte sólido (membrana de nitrocelulosa) recubierto con anti-digoxigenina (primer reactivo de captura) y partículas de oro coloidal recubiertas con anticuerpo anti-FITC. En este contexto, solo la Muestra C con estreptavidina generó una única señal de prueba positiva mientras que la Muestra A y la Muestra B, o la Muestra C sin estreptavidina, dieron como resultado una prueba negativa.

Ejemplo 2: Detección de múltiples analitos usando conexión por puente de amplicones.

Materiales:

Reactivos de PCR: OneTaq Hot Start Polymerase (New England Biolabs); 5X tampón de reacción estándar; MHALT1.RV haptenado (Integrated DNA Technologies (IDT)); MgC.CHIAS haptenado (IDT); molde de gen deINV018.7E4 Vh (ZG); dNTP; dH²O.

La PCR se realizó en un ciclador térmico estándar a una temperatura de rampa de 3-4 °C/s. Las reacciones de PCR se realizaron mediante un ensayo de flujo vertical tal como el descrito en el presente documento que incluye el casete Veriflow (Invisible Sentinel).

Se generaron amplicones según los protocolos convencionales. Se generó un amplicón doblemente marcado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) y tetrametilrodamina (TAMRA) y se generó otro amplicón que está doblemente marcado con TAMRA y digoxigenina (DIG). Opcionalmente se pueden precipitar los amplicones de ADN de la reacción de PCR. Si se realizó precipitación, se hizo o bien por precipitación con EtOH o con isopropanol 1/10 v de acetato sódico 3 M, pH 5,2. Para facilitar la precipitación, también se puede añadir 1 ul de glucógeno de ARNt. Se dejó que la precipitación tuviera lugar a -20 °C durante un mínimo de 2 horas o -80 °C durante 15 minutos. Se centrifugó el ADN precipitado a velocidad máxima durante aproximadamente 15 minutos. Se desechó el sobrenadante, se dejó secar al aire 15 minutos el sedimento de ADN. Se puede realizar un segundo aclarado opcional con 20 ul de EtOH helado al 70 % seguido por centrifugación y secado. Se suspendió el sedimento de ADN con TE (Tris-HCl/EDTA) y se dejó rehidratar el ADN durante aproximadamente 24 horas a temperatura ambiente. Los amplicones generados fueron secuencias genéricas y no específicas para ninguna bacteria particular.

Los amplicones se mezclaron con un anticuerpo biotinilado que reconocía FITC y un anticuerpo que reconocía rodamina (es decir, el marcador TAMRA). La mezcla se puede incubar durante periodos de tiempo más largos, por ejemplo 5, 10, 15, 20, 25 o 30 minutos, pero dichos tiempos más largos no fueron necesarios. Se añadió la mezcla incubada a un casete Veriflow (dispositivo de flujo vertical), que contenía una membrana de prueba que comprendía un anticuerpo anti-digoxigenina no marcado y una almohadilla de conjugado que contenía conjugado de estreptavidina-oro. El dispositivo detectó la presencia del complejo de puente, que contiene ambos amplicones con una única señal (el oro coloidal). Se realizaron los controles apropiados y solo se detectó el oro coloidal cuando estaban presentes todos los componentes necesarios para crear el complejo de puente. Sin desear quedar ligados a teoría particular alguna, la Figura 3 ilustra el complejo que se puede formar con los diferentes componentes. Cuando se forma el complejo de puente (véase la Figura 3), se detecta la señal de oro coloidal. También se pueden usar otros tipos de señales detectables. Si uno de los amplicones no está presente no se detectó ninguna señal. Después de que la muestra se hace discurrir a través del dispositivo, se libera el complejo de estreptavidina-oro coloidal de la almohadilla de conjugado y se retira la almohadilla de conjugado. Los ejemplos de cómo fabricar y usar los dispositivos de flujo vertical se pueden encontrar en el presente documento y en las patentes de EE. UU. n.° 8.012.770, 8.183.059 y las solicitudes de patente de EE. UU. n.° 13/500.997, 13/360.528, 13/445.233. Estos resultados demuestran que se pueden detectar específicamente dos analitos con una única señal detectable, que en este ejemplo era oro coloidal. La detección de la señal no dependió de la precipitación de los amplicones después de realizar la etapa de reacción de PCR.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un complejo que comprende:

un primer reactivo de captura fijado a un soporte sólido;

un primer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un segundo analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; una unidad de puente;

y una unidad de detección de señal;

en donde el primer reactivo de captura se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés; en donde la unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la unidad de detección de señal comprende un reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés;

en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; y

en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son analitos de E. coli.

2. El complejo de la reivindicación 1, en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son analitos de E. coli diferentes.

3. El complejo de la reivindicación 1, en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son amplicones.

4. El complejo de la reivindicación 1, en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son independientemente amplicones de toxina Shiga 1, toxina Shiga 2 o eae.

5. Un complejo que comprende:

un primer reactivo de captura fijado a un soporte sólido;

un primer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un segundo analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; un tercer analito de interés que comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; una primera unidad de puente;

una segunda unidad de puente; y

una unidad de detección de señal que comprende un segundo reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito de interés,

en donde el primer reactivo de captura se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés; en donde la primera unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés;

en donde la segunda unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés y la primera unidad de interacción del tercer analito de interés;

en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés, la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés, y la primera y segunda unidad de interacción del tercer analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito; y

en donde el primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés son analitos de E. coli.

6. El complejo de la reivindicación 5, en donde el primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés son analitos de E. coli diferentes.

7. El complejo de la reivindicación 5, en donde el primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés son amplicones.

8. El complejo de la reivindicación 5, en donde el primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés son independientemente amplicones de toxina Shiga 1, toxina Shiga 2 o eae.

9. Un complejo que comprende:

y una unidad de detección de señal,

en donde la unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés; en donde la unidad de detección de señal comprende un primer reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés,

en donde el primer analito de interés y el segundo analito de interés son amplicones.

10. Un complejo que comprende:

una segunda unidad de puente; y

una unidad de detección de señal que comprende un primer reactivo de captura que se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito de interés,

en donde la primera unidad de puente comprende uno o más reactivos de captura que se unen independientemente a la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés;

en donde el primer analito de interés, el segundo analito de interés y el tercer analito de interés son amplicones.

11. El complejo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 5 y 9-10, en donde la unidad de detección de señal emite una señal detectable, tal como un oro coloidal, una marca radiactiva, una marca fluorescente o un sustrato quimioluminiscente o la unidad de detección de señal comprende un nanocristal detectable, una nanopartícula funcionalizada, una nanopartícula de conversión ascendente, una nanopartícula de fusión de seleniuro de cadmio/sulfuro de cadmio, un punto cuántico, un fluoróforo de infrarrojo cercano, una agrupación de lantánidos, una ftalocianina, un diodo emisor de luz.

12. El complejo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 5 y 9-10 que comprende, además, un segundo reactivo de captura fijado a un soporte sólido; en donde el segundo reactivo de captura se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés.

13. Un método de detección, concurrentemente, de un primer analito de interés, un segundo analito de interés y un tercer analito de interés en una muestra de prueba con una única señal, en donde el primer, segundo y tercer analito de interés son diferentes, comprendiendo el método:

poner en contacto la muestra de prueba que comprende el primer, segundo y tercer analitos de interés con un soporte sólido, una primera unidad de puente, una segunda unidad de puente y una unidad de detección de señal; y detectar la presencia de la única señal de la unidad de detección de señal que indica la presencia del primer, segundo y tercer analitos de interés concurrentemente con una única señal,

en donde la única señal se detecta solo cuando el primer analito de interés,

el segundo analito de interés, el tercer analito de interés y la primera unidad de puente, y la segunda unidad de puente forman un complejo de puente y la unidad de detección de señal se une al complejo de puente, en donde:

el primer analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el segundo analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; el tercer analito de interés comprende una primera unidad de interacción y una segunda unidad de interacción; en donde la primera y segunda unidad de interacción del primer analito de interés, la primera y segunda unidad de interacción del segundo analito de interés, y la primera y segunda unidad de interacción del tercer analito de interés son cada una, independientemente, una unidad de interacción heteróloga en donde la unidad de interacción heteróloga no es nativa del analito;

el soporte sólido comprende un primer reactivo de captura que se une a la primera unidad de interacción del primer analito de interés;

la primera unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del primer analito de interés y la primera unidad de interacción del segundo analito de interés;

la segunda unidad de puente se une a la segunda unidad de interacción del segundo analito de interés y la primera unidad de interacción del tercer analito de interés; y

la unidad de detección de señal se une a la segunda unidad de interacción del tercer analito de interés.