CN104911244A - 一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法 - Google Patents

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鲁志康
张苏敏
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Abstract

本发明涉及一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，包括以下步骤：（1）菌液的制备：取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌株接种到牛肉膏蛋白胨培养基斜面，用接种环从斜面上挑菌到lOOmL无菌水中制成菌液，用棉塞塞好备用；（2）滤纸片的制备及处理：用打孔器打成圆形滤纸片，经干热灭菌后备用，用镊子夹取已灭菌的滤纸片浸在不同浓度的药液和酒样中备用；（3）按种培养：在无菌条件下，用已灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基制平板，待冷却凝固后，加入供试菌，用无菌涂布器涂布均匀，再用无菌镊子夹取浸提处理过的滤纸片贴在上述含菌平皿上。本发明通过对霉菌和细菌的抑制作用的控制，从而为功能性黄酒的生产和研发提供理论依据和技术支持。

Description

一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法
技术领域
本发明涉及一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，属于黄酒酿造的技术领域。
背景技术
黄酒是世界上最古老的酒类之一，也是我国的特产，享有“国酒”之美誉。由于它的酒度适中，酒香浓郁，口味独特，营养丰富，具有食疗价值，深受消费者的欢迎。
黄酒成分相当复杂，其酒体是一种不稳定的胶体，贮存期间的温度、光照、PH值等因素的改变都将在一定程度上破坏其胶体平衡，从而使其中的某些物质析出，形成沉淀。这些沉淀虽对人体无害，但严重影响了黄酒的外观品质。解决黄酒的沉淀问题已迫在眉睫。因此，对这一现象的探索和研究具有重要的理论意义和实用价值。
关于黄酒生产方面的相关报道很多，但对于黄酒工艺的系统性研究还未见详细报道。本发明探索了在黄酒发酵过程中添加具有杀菌作用的中药材及其产品对于霉菌和细菌的抑制作用，为功能性黄酒的生产和研发提供理论依据和技术支持。
发明内容
针对现有技术的上述技术问题，本发明的目的是提供一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，通过对霉菌和细菌的抑制作用的控制，从而为功能性黄酒的生产和研发提供理论依据和技术支持。
为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，包括以下步骤：
（1）菌液的制备：取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌株接种到牛肉膏蛋白胨培养基斜面，37℃培养24h，用接种环从斜面上挑菌到lOOmL无菌水中制成菌液，用棉塞塞好备用；
（2）滤纸片的制备及处理：用打孔器打成若干直径为5.5mm的圆形滤纸片，经120℃干热灭菌2h后备用，用镊子夹取已灭菌的滤纸片浸在不同浓度的药液和酒样中备用；以无菌水浸过的滤纸做空白；
（3）药物稀释：以吸入20μL药液为标准，若纸片薄，药物原液需作调整；根据纸片内各种抗菌药物的不同浓度配制药物原液，其浓度需比纸片浓度大200倍；青霉素G的纸片为10U/片，青霉素G的原液浓度为2000U/mL，200张纸片内即加入1mL青霉素G原液；
（4）纸片浸润、干燥和保存：用无菌操作法将待测的抗菌药物溶液1ml加入摊布于灭菌平皿中的100片纸片中，置冰箱内浸泡1-2小时，不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，如立即实验可不烘干，若保存备用可用下列一种方法烘干，干燥的抗菌素纸片可保存6个月；
（5）按种培养：在无菌条件下，用已灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基制平板，待冷却凝固后，分别加入0.2mL供试菌，然后用无菌涂布器涂布均匀，再用无菌镊子夹取浸提处理过的滤纸片贴在上述含菌平皿上，每种浓度的滤纸片要间隔一定的距离，并以无菌水和4％己醇的滤纸片作为对照；
所述步骤（4）中烘干采用培养皿烘干法或真空抽干法：
所述的培养皿烘干法为：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37℃温箱内保持2-3h即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥；
所述的真空抽干法为：将放有抗菌药物纸片的试管置于干燥器了，用真空抽气机抽干；
所述步骤（4）中的纸片保存为：将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中置冰箱内保存备用，收到纸片后应立即保存在-20-4℃中，放置1周使用的纸片；纸片容器打开前先置室温平衡，装纸片的容器自冰箱取出后，在室温10min以上打开，纸片贴毕应把未用完的放回冰箱中。
所述的牛肉膏蛋白胨培养基为：牛肉膏3.0g 、蛋白胨10.0g、食盐5.0g、琼脂18-20g和自来水1000mL用NaOH调节PH至7.0～7.2，lkg/cm2、121℃下灭菌30分钟。
本发明的有益效果如下：
本发明滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，通过对霉菌和细菌的抑制作用的控制，从而为功能性黄酒的生产和研发提供理论依据和技术支持。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
本发明一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，包括以下步骤：
（1）菌液的制备：取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌株接种到牛肉膏蛋白胨培养基斜面，37℃培养24h，用接种环从斜面上挑菌到lOOmL无菌水中制成菌液，用棉塞塞好备用；
（2）滤纸片的制备及处理：用打孔器打成若干直径为5.5mm的圆形滤纸片，经120℃干热灭菌2h后备用，用镊子夹取已灭菌的滤纸片浸在不同浓度的药液和酒样中备用；以无菌水浸过的滤纸做空白；
（3）药物稀释：以吸入20μL药液为标准，若纸片薄，药物原液需作调整；根据纸片内各种抗菌药物的不同浓度配制药物原液，其浓度需比纸片浓度大200倍；青霉素G的纸片为10U/片，青霉素G的原液浓度为2000U/mL，200张纸片内即加入1mL青霉素G原液；
（4）纸片浸润、干燥和保存：用无菌操作法将待测的抗菌药物溶液1ml加入摊布于灭菌平皿中的100片纸片中，置冰箱内浸泡1-2小时，不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，如立即实验可不烘干，若保存备用可用下列一种方法烘干，干燥的抗菌素纸片可保存6个月；
（5）按种培养：在无菌条件下，用已灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基制平板，待冷却凝固后，分别加入0.2mL供试菌，然后用无菌涂布器涂布均匀，再用无菌镊子夹取浸提处理过的滤纸片贴在上述含菌平皿上，每种浓度的滤纸片要间隔一定的距离，并以无菌水和4％己醇的滤纸片作为对照；
所述步骤（4）中烘干采用培养皿烘干法或真空抽干法：
所述的培养皿烘干法为：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37℃温箱内保持2-3h即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥；
所述的真空抽干法为：将放有抗菌药物纸片的试管置于干燥器了，用真空抽气机抽干；
所述步骤（4）中的纸片保存为：将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中置冰箱内保存备用，收到纸片后应立即保存在-20-4℃中，放置1周使用的纸片；纸片容器打开前先置室温平衡，装纸片的容器自冰箱取出后，在室温10min以上打开，纸片贴毕应把未用完的放回冰箱中。
本发明的牛肉膏蛋白胨培养基为：牛肉膏3.0g 、蛋白胨10.0g、食盐5.0g、琼脂18-20g和自来水1000mL用NaOH调节PH至7.0～7.2，lkg/cm2、121℃下灭菌30分钟。
实施例1
以4％的酒精和无菌水为对照，测定不同浓度药液和添加功能性中药材制作的酒样对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用。抑菌圈的大小见下表1。
表中数据为抑菌圈直径的平均值，单位为mm，抑菌圈直径越大，抑菌效果越好，“——”表示无抑菌圈。
由上表1可知：不同浓度的中药提取液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都具有一定的抑制作用，但对金黄色葡萄球菌的抑制作用较强，其抑菌圈大于大肠杆菌的抑菌圈；添加功能性中药材制作的酒样对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用均强于中药提取液，这可能与发酵过程中形成某种有效成分有关；另外，酒样对金黄色葡萄球菌的抑制作用强于大肠杆菌。
本发明滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，通过对霉菌和细菌的抑制作用的控制，从而为功能性黄酒的生产和研发提供理论依据和技术支持。
上述实施例仅用于解释说明本发明的发明构思，而非对本发明权利保护的限定，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应落入本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）菌液的制备：取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌株接种到牛肉膏蛋白胨培养基斜面，37℃培养24h，用接种环从斜面上挑菌到lOOmL无菌水中制成菌液，用棉塞塞好备用；
（2）滤纸片的制备及处理：用打孔器打成若干直径为5.5mm的圆形滤纸片，经120℃干热灭菌2h后备用，用镊子夹取已灭菌的滤纸片浸在不同浓度的药液和酒样中备用；以无菌水浸过的滤纸做空白；
（3）药物稀释：以吸入20μL药液为标准，若纸片薄，药物原液需作调整；根据纸片内各种抗菌药物的不同浓度配制药物原液，其浓度需比纸片浓度大200倍；青霉素G的纸片为10U/片，青霉素G的原液浓度为2000U/mL，200张纸片内即加入1mL青霉素G原液；
（4）纸片浸润、干燥和保存：用无菌操作法将待测的抗菌药物溶液1ml加入摊布于灭菌平皿中的100片纸片中，置冰箱内浸泡1-2小时，不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，如立即实验可不烘干，若保存备用可用下列一种方法烘干，干燥的抗菌素纸片可保存6个月；
（5）按种培养：在无菌条件下，用已灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基制平板，待冷却凝固后，分别加入0.2mL供试菌，然后用无菌涂布器涂布均匀，再用无菌镊子夹取浸提处理过的滤纸片贴在上述含菌平皿上，每种浓度的滤纸片要间隔一定的距离，并以无菌水和4％己醇的滤纸片作为对照；
所述步骤（4）中烘干采用培养皿烘干法或真空抽干法：
所述的培养皿烘干法为：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37℃温箱内保持2-3h即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥；
所述的真空抽干法为：将放有抗菌药物纸片的试管置于干燥器了，用真空抽气机抽干；
所述步骤（4）中的纸片保存为：将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中置冰箱内保存备用，收到纸片后应立即保存在-20-4℃中，放置1周使用的纸片；纸片容器打开前先置室温平衡，装纸片的容器自冰箱取出后，在室温10min以上打开，纸片贴毕应把未用完的放回冰箱中。
2.如权利要求1所述滤纸片扩散法测定黄酒抑菌圈的方法，其特征在于所述的牛肉膏蛋白胨培养基为：牛肉膏3.0g 、蛋白胨10.0g、食盐5.0g、琼脂18-20g和自来水1000mL用NaOH调节pH至7.0～7.2，lkg/cm2、121℃下灭菌30分钟。
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