CN114891639A - 一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法 - Google Patents
一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114891639A CN114891639A CN202111398436.7A CN202111398436A CN114891639A CN 114891639 A CN114891639 A CN 114891639A CN 202111398436 A CN202111398436 A CN 202111398436A CN 114891639 A CN114891639 A CN 114891639A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- microbial strain
- fermentation
- salidroside
- medicinal material
- content
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 52
- ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N Salidroside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 45
- ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N salidroside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N 0.000 title claims abstract description 45
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 58
- 244000042430 Rhodiola rosea Species 0.000 claims abstract description 49
- 235000003713 Rhodiola rosea Nutrition 0.000 claims abstract description 49
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 12
- 241001205401 Aspergillus cristatus Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims abstract 3
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 claims abstract 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 41
- 241001165494 Rhodiola Species 0.000 claims description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 11
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 7
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 7
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 claims description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 4
- 230000007480 spreading Effects 0.000 claims description 4
- 238000003892 spreading Methods 0.000 claims description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 5
- 241001136487 Eurotium Species 0.000 abstract description 4
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 abstract description 4
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 abstract description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 241000997135 Rhodiola crenulata Species 0.000 description 3
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 3
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 150000002338 glycosides Chemical group 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 2-(4-Hydroxyphenyl)ethanol Natural products OCCC1=CC=C(O)C=C1 YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001260012 Bursa Species 0.000 description 1
- 235000019224 Camellia sinensis var Qingmao Nutrition 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010019468 Hemiplegia Diseases 0.000 description 1
- DBLDQZASZZMNSL-QMMMGPOBSA-N L-tyrosinol Natural products OC[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 DBLDQZASZZMNSL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010024642 Listless Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 235000019225 fermented tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000017971 listlessness Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010587 phase diagram Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000020339 pu-erh tea Nutrition 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 235000004330 tyrosol Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法，利用微生物菌株对红景天药材原料进行固体发酵，该微生物菌株对红景天原料中的糖苷发酵分解，用于提高红景天苷元成分的含量；该微生物菌株为一种发酵红景天的菌株SWS‑008，其名称为Eurotiumcristatum，冠突散囊菌(金花菌)SWS‑008，保藏日期2020年3月27日，保藏号CGMCCNO：19605。该提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法，在冠状散囊菌的葡萄糖苷酶作用下，可以切断糖苷化学键，从而使红景天苷分子剥离开来，所以使红景天苷的含量有所提高，该方法的实施可以进一步提高红景天药材的药效成分，为相关企业节约成本，具有较好的经济和社会效益。
Description
技术领域
本发明涉及生物发酵技术领域，具体公开一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法。
背景技术
红景天为景天科植物大花红景天Rhdiolacrenulata(Hook.f.etThoms.) H.Ohba的干燥根和根茎。红景天具有益气活血，通脉平喘的功能，用于气虚血瘀，胸痹心痛，中风偏瘫，倦怠气喘。目前健康领域确定的红景天的药理作用包括：增强免疫力，红景天苷通过改善T-细胞免疫，可提升机体对外毒的抵抗能力。消除忧郁感，红景天被用以提升人的精神状态，成为那些生活在因月份周期延长，而得不到足够阳光照射的国家和季节的人的宝贵医药。保护心血管，红景天可缓和压力所致心血管组织损伤和功能紊乱，防止继发的心脏收缩力下降，有助于心肌的稳定性收缩。
红景天苷是大花红景天的重要活性成分，其含量高低是评价其药用价值的重要指标之一。红景天苷(Salidroside)的分子式是C14H20O7，结构式如下：
红景天苷是一种由葡萄糖与酪醇苷键结合的糖苷，纯品为白色或者浅黄色粉末，易溶于水和醇类。作为红景天药材的主要药效成分，其含量即药材的质量标准。<<中华人民共和国药典>>2020版收载红景天，其红景天苷含量不得少于0.50％。由于红景天种植环境特殊，野生资源有限，其药材是根茎部分，不能续代采收，所以提高红景天苷含量的技术研究具有重要的商业价值。不同地域产的红景天药材原料中红景天苷的含量也有一定差距，中国药材公司的崔秀梅等测试发现，西藏错那地区的含量最高，可以达到2.10％左右，其它如产自云南和四川阿坝州的大概在0.80-1.29％之间，最低的是产自青海海北的只有0.58％。红景天产品厂家一般会采取更加精细的提取技术来达到制定的企业标准，该技术相对比较成熟，一般采取水提、醇提和超声微波技术。
综合后可以发现，红景天苷的含量是药材质量和价格的决定因素。本发明利用微生物发酵红景天药材原料，采用冠状散囊菌株SWS-008，制备菌丝体发酵种子液，接种到蒸汽处理的红景天药材原料中，搅拌均匀后，放置于无菌托盘中。将喷洒菌液后的红景天覆盖纱布，在无菌发酵室恒温发酵，温度 28℃，保持无菌通风，通气量1L/m3/h，湿度80±5％。发酵3天，药材的表面有少量白色或者黄色的菌丝生长，用无菌不锈钢铲翻转红景天药材，使均匀，继续发酵培养。发酵至10天左右，药材的表面布满黄色菌丝和孢子，取出托盘烘干后即为发酵后的红景天。
冠状散囊菌俗称“金花”菌，来自中国传统发酵黑茶，如茯砖和普洱等，具有抗氧化、降血脂、促进肠道健康的作用，安全无毒副作用。由于冠状散囊菌可以分泌多种生物酶，尤其是葡萄糖苷酶等纤维素酶。红景天药材原料通过发酵过程后，采用相同的提取方式，其红景天苷的含量可以明显提高。红景天苷在红景天植物内的生物合成，但是有部分可能与其它化学基团键合，一般的水提和醇提不能将之分开，但是冠状散囊菌的葡萄糖苷酶作用下，可以分开这些化学键，从而使红景天苷分子剥离开来，所以使红景天苷的含量有所提高。该方法的实施可以进一步提高红景天药材的药效成分，为相关企业节约成本，具有较好的经济和社会效益，为此，提出一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法。
发明内容
鉴于现有技术中的上述缺陷或不足，本申请旨在提供一种提高红景天苷含量的微生物菌株，利用微生物菌株对红景天药材原料进行固体发酵，该微生物菌株对红景天原料中的糖苷发酵分解，用于提高红景天苷元成分的含量；
该微生物菌株为一种发酵红景天的菌株SWS-008，其名称为 Eurotiumcristatum，冠突散囊菌(金花菌)SWS-008，保藏日期2020年3月 27日，保藏号CGMCCNO：19605；
优选的，该所述微生物菌株的主要生物学特征包括：菌丝有横隔，菌落上生长闭囊壳，子闭囊壳无子座，内有子囊，破碎后释放子囊孢子。
优选的，所述微生物菌株的PDA培养平板菌落为圆形黄色菌丝体，质地致密，黄色晕圈，边缘淡黄色，中央颜色较深至褐色，大于15天老化后，表面分泌黑色液体，整体菌丝体逐渐加深，至全部黑褐色。
提高红景天苷含量的微生物菌株的发酵方法，该发酵方法包括以下步骤：
S1:首先制备菌株SWS-008的种子液，于液体PDA培养基中装量100ml/300ml,pH7.0，灭菌121℃-20min，降温后备用，然后将试管中保存的SWS-008菌株的菌苔表面挑取少量，接入灭菌后的培养液中，摇床培养；
S2:红景天原料的处理与接种，红景天药材原料，切成约1cm长宽的小块，放入容器中，表面喷洒水，比例为药材：水＝4:1，使药材表面微湿，取出放入托盘，表面覆盖4层纱布，入高温蒸汽锅，105℃-5min处理，取出放入无菌室降温备用，然后将培养2天的SWS-008种子液，收集至灭菌罐中，用9 倍无菌水稀释，用无菌压缩空气连接灭菌罐，使稀释菌液均匀喷洒于红景天药材表面；
S3:红景天的发酵过程，将喷洒菌液后的红景天覆盖纱布，在无菌发酵室恒温发酵，药材的表面有少量白色或者黄色的菌丝生长，用无菌不锈钢铲翻转红景天药材，使均匀，继续发酵培养，再发酵至10天左右，药材的表面布满黄色菌丝和孢子，取出托盘烘干后即为发酵后的红景天。
优选的，S1中摇床发酵温度28℃，转速140r/min，培养时间2天。
优选的，S2中药材：菌液＝20-25:1。
优选的，S3中发酵时发酵室的温度28℃，保持无菌通风，通气量1L/m3/h，湿度80±5％，发酵3天。
有益效果：该提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法，在冠状散囊菌的葡萄糖苷酶作用下，可以分开这些化学键，从而使红景天苷分子剥离开来，所以使红景天苷的含量有所提高，该方法的实施可以进一步提高红景天药材的药效成分，为相关企业节约成本，具有较好的经济和社会效益。
附图说明
通过阅读参照以下附图所作的对非限制性实施例所作的详细描述，本申请的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1是实施例1步骤A中，菌株SWS-008的电镜图。
图2是实施例2步骤B中种子液的显微镜图。
图3是发酵后的红景天外表面图。
图4是实施例3步骤C中的红景天苷标品的液相图谱。
图5是实施例3步骤C中的红景天发酵后的测试液相色谱图。
保藏说明
保藏菌种归类于冠状散囊菌，拉丁名为，命名为Eurotiumcristatum， SWS-008，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2020年3月27日，保藏号CGMCCNO：19605。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本申请作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释相关发明，而非对该发明的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与发明相关的部分。
本发明实施例中的附图：图中不同种类的剖面线不是按照国标进行标注的，也不对元件的材料进行要求，是对图中元件的剖视图进行区分。
请参阅图1-5，一种提高红景天苷含量的微生物菌株，利用微生物菌株对红景天药材原料进行固体发酵，该微生物菌株对红景天原料中的糖苷发酵分解，用于提高红景天苷元成分的含量；
该微生物菌株为一种发酵红景天的菌株SWS-008，其名称为 Eurotiumcristatum，冠突散囊菌(金花菌)SWS-008，保藏日期2020年3月 27日，保藏号CGMCCNO：19605；
其中，该所述微生物菌株的主要生物学特征包括：菌丝有横隔，菌落上生长闭囊壳，子闭囊壳无子座，内有子囊，破碎后释放子囊孢子。
其中，微生物菌株的PDA培养平板菌落为圆形黄色菌丝体，质地致密，黄色晕圈，边缘淡黄色，中央颜色较深至褐色，大于15天老化后，表面分泌黑色液体，整体菌丝体逐渐加深，至全部黑褐色。
提高红景天苷含量的微生物菌株的发酵方法，该发酵方法包括以下步骤：
S1:首先制备菌株SWS-008的种子液，于液体PDA培养基中装量 100ml/300ml,pH7.0，灭菌121℃-20min，降温后备用，然后将试管中保存的 SWS-008菌株的菌苔表面挑取少量，接入灭菌后的培养液中，摇床培养；
S2:红景天原料的处理与接种，红景天药材原料，切成约1cm长宽的小块，放入容器中，表面喷洒水，比例为药材：水＝4:1，使药材表面微湿，取出放入托盘，表面覆盖4层纱布，入高温蒸汽锅，105℃-5min处理，取出放入无菌室降温备用，然后将培养2天的SWS-008种子液，收集至灭菌罐中，用9 倍无菌水稀释，用无菌压缩空气连接灭菌罐，使稀释菌液均匀喷洒于红景天药材表面；
S3:红景天的发酵过程，将喷洒菌液后的红景天覆盖纱布，在无菌发酵室恒温发酵，药材的表面有少量白色或者黄色的菌丝生长，用无菌不锈钢铲翻转红景天药材，使均匀，继续发酵培养，再发酵至10天左右，药材的表面布满黄色菌丝和孢子，取出托盘烘干后即为发酵后的红景天。
其中，S1中摇床发酵温度28℃，转速140r/min，培养时间2天。
其中，S2中药材：菌液＝20-25:1。
其中，S3中发酵时发酵室的温度28℃，保持无菌通风，通气量1L/m3/h，湿度80±5％，发酵3天。
实施例1、菌种的斜面培养
a、仪器设备和试剂
无菌室及超净工作台、灭菌锅、试管、茄子瓶、冰箱、恒温培养箱、显微镜、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、牛肉膏、蛋白胨及琼脂等。
b、培养基制备
按如下配方制备培养基(金花菌培养基)：PDA培养基、琼脂2％；将斜面培养基加热溶化后调pH到7.0－7.8，然后分装茄子瓶或试管，放入灭菌锅内湿热灭菌，冷却后制成斜面备用；
c、菌种活化与扩大培养
用接种环在无菌条件下从原菌种斜面上挑取菌苔，于试管斜面或茄子瓶斜面内进行划线，然后置30±1℃恒温箱内培养72小时，存放备用。
实施例2、发酵菌种的液体培养
a、仪器设备和试剂
无菌室及超净工作台、灭菌锅、冰箱、恒温培养箱、显微镜、氢氧化钠、盐酸等。
b、种子液培养基的配制
按如下方法配制种子液，PDA培养基装量100ml/300ml,pH7.0，灭菌121℃ -20min，降温后备用。
c、接种及培养
将试管中保存的SWS-008菌株的菌苔表面挑取少量，接入灭菌后的培养液中。摇床培养，发酵温度28℃，转速140r/min，培养时间2天，生成白色菌丝球，直径约2-3mm。种子液镜检合格后，4℃保存备用。
所有种子液合并，装入无菌不锈钢接种罐内，冰箱保存备用，同时用划线法作无菌检查，种子液保存不得多于三天。
实施例3、红景天的固体发酵
红景天药材原料，切成约1cm长宽的小块，放入容器中，表面喷洒水，比例为药材：水＝4:1，使药材表面微湿。取出放入托盘，表面覆盖4层纱布，入高温蒸汽锅，105℃-5min处理，取出放入无菌室降温备用。
将培养好的SWS-008种子液，收集至灭菌接种罐中，用9倍无菌水稀释，用无菌压缩空气连接灭菌罐，使稀释菌液均匀喷洒于红景天药材表面，比例为药材：菌液＝20-25:1。将喷洒菌液后的红景天覆盖纱布，在无菌发酵室恒温发酵，温度28℃，保持无菌通风，通气量1L/m3/h，湿度80±5％。发酵3 天，药材的表面有少量白色或者黄色的菌丝生长，用无菌不锈钢铲翻转红景天药材，使均匀，继续发酵培养。发酵至10天左右，药材的表面布满黄色菌丝和孢子，取出托盘烘干后即为发酵后的红景天。
实施例4、发酵前后的红景天检测
取三次发酵前和发酵后的红景天，放到粉碎机中，打碎，加入蒸馏水，红景天：水＝3：1，温度50-55℃，超声，水提三次，合并后过0.45μm滤膜，备用，待测。
同时准确称量发酵前和发酵后的红景天各2-5g，放入70℃烘箱内，至三次称量不再减少为止，再分别准确称量其干燥后重量，每种样品三个平行。
采用C-18液相色谱法测定红景天苷含量，其红景天含水量和红景天苷含量(去除水分)如下表。
可见，经过3批次红景天发酵前后对比测试可知，菌株SWS-008的固体发酵红景天可以有效提高红景天苷的含量，工艺可行，设备常规化。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。
以上描述仅为本申请的较佳实施例以及对所运用技术原理的说明。本领域技术人员应当理解，本申请中所涉及的发明范围，并不限于上述技术特征的特定组合而成的技术方案，同时也应涵盖在不脱离所述发明构思的情况下，由上述技术特征或其等同特征进行任意组合而形成的其它技术方案。例如上述特征与本申请中公开的(但不限于)具有类似功能的技术特征进行互相替换而形成的技术方案。
Claims (7)
1.一种提高红景天苷含量的微生物菌株，利用微生物菌株对红景天药材原料进行固体发酵，其特征在于：该微生物菌株对红景天原料中的糖苷发酵分解，用于提高红景天苷元成分的含量；
该微生物菌株为一种发酵红景天的菌株SWS-008，其名称为Eurotiumcristatum，冠突散囊菌(金花菌)SWS-008，保藏日期2020年3月27日，保藏号CGMCCNO：19605。
2.根据权利要求1所述的一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法，其特征在于：该所述微生物菌株的主要生物学特征包括：菌丝有横隔，菌落上生长闭囊壳，子闭囊壳无子座，内有子囊，破碎后释放子囊孢子。
3.根据权利要求1所述的一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法，其特征在于：所述微生物菌株的PDA培养平板菌落为圆形黄色菌丝体，质地致密，黄色晕圈，边缘淡黄色，中央颜色较深至褐色，大于15天老化后，表面分泌黑色液体，整体菌丝体逐渐加深，至全部黑褐色。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的提高红景天苷含量的微生物菌株的发酵方法，其特征在于，该发酵方法包括以下步骤：
S1:首先制备菌株SWS-008的种子液，于液体PDA培养基中装量100ml/300ml,pH7.0，灭菌121℃-20min，降温后备用，然后将试管中保存的SWS-008菌株的菌苔表面挑取少量，接入灭菌后的培养液中，摇床培养；
S2:红景天原料的处理与接种，红景天药材原料，切成约1cm长宽的小块，放入容器中，表面喷洒水，比例为药材：水＝4:1，使药材表面微湿，取出放入托盘，表面覆盖4层纱布，入高温蒸汽锅，105℃-5min处理，取出放入无菌室降温备用，然后将培养2天的SWS-008种子液，收集至灭菌罐中，用9倍无菌水稀释，用无菌压缩空气连接灭菌罐，使稀释菌液均匀喷洒于红景天药材表面；
S3:红景天的发酵过程，将喷洒菌液后的红景天覆盖纱布，在无菌发酵室恒温发酵，药材的表面有少量白色或者黄色的菌丝生长，用无菌不锈钢铲翻转红景天药材，使均匀，继续发酵培养，再发酵至10天左右，药材的表面布满黄色菌丝和孢子，取出托盘烘干后即为发酵后的红景天。
5.根据权利要求4所述的一种提高红景天苷含量的微生物菌株的发酵方法，其特征在于：S1中摇床发酵温度28℃，转速140r/min，培养时间2天。
6.根据权利要求4所述的一种提高红景天苷含量的微生物菌株的发酵方法，其特征在于：S2中药材：菌液＝20-25:1。
7.根据权利要求4所述的一种提高红景天苷含量的微生物菌株的发酵方法，其特征在于：S3中发酵时发酵室的温度28℃，保持无菌通风，通气量1L/m3/h，湿度80±5％，发酵3天。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111398436.7A CN114891639B (zh) | 2021-11-23 | 2021-11-23 | 一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111398436.7A CN114891639B (zh) | 2021-11-23 | 2021-11-23 | 一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114891639A true CN114891639A (zh) | 2022-08-12 |
| CN114891639B CN114891639B (zh) | 2023-07-14 |
Family
ID=82714396
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111398436.7A Active CN114891639B (zh) | 2021-11-23 | 2021-11-23 | 一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114891639B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105543105A (zh) * | 2016-01-08 | 2016-05-04 | 山西大学 | 促进大花红景天积累红景天苷的真菌菌株及其应用 |
| CN114958486A (zh) * | 2022-06-20 | 2022-08-30 | 甘肃烟草工业有限责任公司 | 一种红景天烟用香料及其制备方法和应用 |
-
2021
- 2021-11-23 CN CN202111398436.7A patent/CN114891639B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105543105A (zh) * | 2016-01-08 | 2016-05-04 | 山西大学 | 促进大花红景天积累红景天苷的真菌菌株及其应用 |
| CN114958486A (zh) * | 2022-06-20 | 2022-08-30 | 甘肃烟草工业有限责任公司 | 一种红景天烟用香料及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| STANISLAV SUKHIKH 等: "Antidiabetic Properties of Plant Secondary Metabolites", 《METABOLITES》, pages 1 - 27 * |
| 刘善鑫 等: "冠突散囊菌对燕麦黄酮含量的影响", 《中国酿造》, pages 93 - 97 * |
| 覃金球 等: "冠突散囊菌医药价值研究进展", 《食品工业科技》, pages 336 - 339 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114891639B (zh) | 2023-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11459593B2 (en) | Dendrobium officinale endophytic fungus strain and extracellular polysaccharide produced thereby, and extraction method and application of extracellular polysaccharide | |
| CN105219681B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens D2WM及制备方法和应用 | |
| CN101423812A (zh) | 解淀粉芽孢杆菌和微生物制剂及其制备方法 | |
| CN113215016B (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN111925973B (zh) | 一株荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌及其在防治荔枝炭疽病和荔枝霜疫病中的应用 | |
| CN109207548A (zh) | 一种花生衣低聚原花色素、其制备方法及应用 | |
| CN113143812A (zh) | 一种卡瓦胡椒发酵物的制备方法和产品及其在化妆品中的应用 | |
| CN108865900A (zh) | 一种爪哇棒束孢菌株及其应用 | |
| CN108486002B (zh) | 一株产胞外多糖的罗汉果内生菌菌株及其生产胞外多糖的方法和胞外多糖的应用 | |
| CN112011478A (zh) | 一种石斛内生唐菖蒲伯克霍尔德氏菌BL-HTie-5及其应用 | |
| CN103436465B (zh) | 一种粪产碱菌株 | |
| CN102851225B (zh) | 一株微嗜酸寡养单胞菌及其在防治苹果树腐烂病中的应用 | |
| CN114032190A (zh) | 一株可发酵石斛且其发酵液可有效修复日光皮炎的罗伊氏乳杆菌 | |
| CN109266559A (zh) | 一种哈茨木霉ltr-2的应用 | |
| CN110591927B (zh) | 一株木霉菌株hb20111在消解作物连作障碍因子酚酸类自毒物质方面的应用及菌剂 | |
| CN100412186C (zh) | 木蹄层孔菌及液体深层发酵制备木蹄层孔菌菌体的方法 | |
| CN107058183B (zh) | 一种甲基营养型芽孢杆菌及其生防菌剂和应用 | |
| CN114891639B (zh) | 一种提高红景天苷含量的微生物菌株及其发酵方法 | |
| CN108553487A (zh) | 一种发酵虫草菌粉Cs-4饮片的制备方法 | |
| CN101401827B (zh) | 古尼拟青霉菌丝体多糖提取物的制药用途 | |
| CN115039633B (zh) | 一种日本棒束孢的子实体人工培养方法 | |
| CN108977368A (zh) | 一种生产虫草菌粉的固体培养基及生产虫草菌粉的方法 | |
| CN117305135B (zh) | 一株拟康氏木霉t0027及其在防治猕猴桃软腐病中的应用 | |
| CN114410491B (zh) | 一株膜醭毕赤酵母、菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN116855392B (zh) | 一种鱼腥草发酵液及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240517 Address after: 20-6 Guanyin Road, Huanggu District, Shenyang City, Liaoning Province, 110000 Patentee after: LIAONING VETLAND BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Country or region after: China Address before: 050081 Building 2, 46 South friendship Street, Shijiazhuang, Hebei. Patentee before: BIOLOGY INSTITUTE, HEBEI ACADEMY OF SCIENCES Country or region before: China |