CN107177046A - 一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种胶原蛋白‑牛至精油抗菌膜的制备方法，包括以下步骤：取改性的胶原蛋白溶液，将不同质量的牛至精油分别溶解在改性的胶原蛋白溶液中，搅拌均匀后，得到不同浓度的胶原蛋白‑牛至精油共混液；将不同浓度的胶原蛋白‑牛至精油共混液进行最小抑菌浓度试验，得到牛至精油的最小抑菌浓度；将具有最小抑菌浓度以及浓度大于最小抑菌浓度的胶原蛋白‑牛至精油共混液进行最小杀菌浓度试验，得到牛至精油的最小杀菌浓度；将具有最小杀菌浓度以及接近最小杀菌浓度的胶原蛋白‑牛至精油共混液进行真空脱气、流延成膜后揭膜，制得胶原蛋白‑牛至精油抗菌膜。该制备方法得出最小抑菌浓度和最小杀菌浓度后，用来指导抗菌膜的制备，方法简单易行。

Description

一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜及其制备方法
技术领域
本发明涉及食品包装材料领域，具体涉及一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜及其制备方法。
背景技术
可食性包装膜由于能够减少食品的风味物质散失和营养成分消耗，防止微生物侵染，能够有效地延长食品贮藏保鲜和销售期限，从而受到广泛关注。在众多的可食性包装膜载体中，胶原蛋白因其安全无毒、营养丰富、良好的成膜性和气体阻隔性能而备受青睐。但是胶原蛋白不具有抗菌活性，对食品表面在加工、储运和处理过程中的污染的微生物不具有抑制或杀死的效果，因而其在食品保存期限的长度上有局限性。
另外，现有技术在制备包装膜过程中，一般先制备出包装膜成品材料，再将成品材料采用牛津杯法测得对大肠杆菌或金黄色葡萄球菌等的抑菌圈以测试成品材料的抗菌效果，如果测试得到的抗菌结果不好，还需调整抗菌剂的浓度重新制备包装膜，然后再测试抗菌效果，直至得到抗菌效果良好的包装膜成品材料，该制备方法缺乏科学的指导，制备方法复杂、耗时较长，浪费了大量的时间和精力。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，该方法先对牛至精油的抗菌效果进行测试，得出最小抑菌浓度及最小杀菌浓度后，用来指导抗菌膜的制备，使制备方法更有目的性和针对性，同时节省了大量的时间和精力。
本发明第一方面提供了一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，包括以下步骤：
取改性的胶原蛋白溶液，将不同质量的牛至精油分别溶解在所述改性的胶原蛋白溶液中，搅拌均匀后，得到不同牛至精油浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液；
将所述胶原蛋白-牛至精油共混液进行最小抑菌浓度试验，得到所述牛至精油的最小抑菌浓度；
将具有所述最小抑菌浓度以及浓度大于所述最小抑菌浓度的所述胶原蛋白-牛至精油共混液进行最小杀菌浓度试验，得到所述牛至精油的最小杀菌浓度；
将具有所述最小杀菌浓度以及浓度接近所述最小杀菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液进行真空脱气、流延成膜后揭膜，制得胶原蛋白-牛至精油抗菌膜。
其中，所述最小抑菌浓度试验方法为：
将不同质量的牛至精油分别溶解到改性的胶原蛋白溶液中，搅拌均匀后，得到牛至精油浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.02和0.01μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液，将大肠杆菌或与金黄色葡萄球菌菌悬液加入到所述胶原蛋白-牛至精油共混液中，观察所述胶原蛋白-牛至精油共混液中是否有肉眼可见的细菌沉淀，无肉眼可见细菌沉淀的所述胶原蛋白-牛至精油共混液对应的最小的牛至精油浓度即为胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度。
其中，所述胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.25-2.5μL/mL。
其中，所述最小杀菌浓度试验方法为：
将具有所述最小抑菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液以及浓度大于所述最小抑菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液分别加入到培养皿中与大肠杆菌或金黄色葡萄球菌37℃共培养24-48h，然后观察所述培养皿中的细菌生长情况，无生长菌落的培养皿对应的最小的牛至精油浓度即为胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度。
其中，所述胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度为2.5-5μL/mL。
其中，所述真空脱气的方法为：在真空度0.08-0.09Mpa的环境下将所述胶原蛋白-牛至精油共混液脱气3-6min，重复脱气三次后，静置0.5-1h。
其中，所述真空脱气后，将所述胶原蛋白-牛至精油共混液进行流延成膜，然后在30-60℃下干燥4-20h，冷却后揭膜，得到胶原蛋白-牛至精油抗菌膜。
其中，所述改性的胶原蛋白溶液的制备方法为：将胶原蛋白溶于蒸馏水中，在20℃-60℃温度下热处理5-30min，得到所述改性的胶原蛋白溶液。
本发明第一方面提供的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，该方法先对牛至精油的抗菌效果进行测试，得出最小抑菌浓度及最小杀菌浓度后，用来指导抗菌膜的制备，使制备方法更有目的性和针对性，同时节省了大量的时间和精力。
本发明第二方面提供了一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，其由上述的制备方法制得的。
其中，所述胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的厚度为0.08-0.12mm。
本发明第二方面提供的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，包括胶原蛋白和牛至精油，两者均可生物降解，生物相容性较好，另外，牛至精油的抗菌性能较好，得到的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜具有抗菌防腐特性，能够抑制贮藏过程中食品微生物的生长并避免食品的二次污染，从而延长食品的保质期。
综上，本发明有益效果包括以下几个方面：
1、本发明提供了一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，该制备方法先进行抑菌试验和杀菌试验，然后根据得到最小抑菌浓度和最小杀菌浓度结果指导抗菌膜的制备，使制备方法具有目的性和针对性，节省了大量的时间和精力；
2、本发明提供了一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，具有抗菌防腐特性，能够抑制贮藏过程中食品微生物的生长并避免食品的二次污染，从而延长食品的保质期。
附图说明
图1为本发明实施例1的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法的流程图；
图2为本发明实施例1测试牛至精油对大肠杆菌的最小抑菌浓度的细胞培养板图；
图3为本发明实施例1测试牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度的细胞培养板图；
图4为本发明实施例1测试牛至精油对大肠杆菌的最小杀菌浓度的培养皿图；
图5为本发明实施例1测试牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度的培养皿图。
具体实施方式
以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
本发明第一方面提供了一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，包括以下步骤：
取改性的胶原蛋白溶液，将不同质量的牛至精油分别溶解在改性的胶原蛋白溶液中，搅拌均匀后，得到不同牛至精油浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液；
将胶原蛋白-牛至精油共混液进行最小抑菌浓度试验，得到牛至精油的最小抑菌浓度；
将具有最小抑菌浓度以及浓度大于最小抑菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液进行最小杀菌浓度试验，得到牛至精油的最小杀菌浓度；
将具有最小杀菌浓度以及浓度接近最小杀菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液进行真空脱气、流延成膜后揭膜，制得胶原蛋白-牛至精油抗菌膜。
本发明实施方式中，胶原蛋白为Ⅰ型胶原蛋白。
本发明实施方式中，胶原蛋白为从鱼鳞、牛皮或猪皮中提取得到的。
本发明一优选实施方式中，胶原蛋白为鱼鳞胶原蛋白，鱼鳞胶原蛋白的纯度大于90％。
牛至精油是从植物“牛至”中提取的挥发油，为淡黄色油状液体，主要成分为酚类化合物，其中：香芹酚约占80％；百里香素约占8.7％；麝香草酚占约2.5％；萜品烯约占2.1％。研究发现，植物中的酚类化合物有抗菌作用，在含酚类化合物的植物中，牛至属植物(牛至、百里香等)中的香芹酚和百里香酚的含量最高，含生物合成香芹酚和百里香酚的前体(Y-赧品烯和p-异丙甲苯)的水平也很高。
本发明实施方式中，牛至精油的纯度≥90％。
本发明将胶原蛋白和牛至精油混合用于制备胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，能抑制食品表面微生物的生长，从而达到食品保鲜及延长货架期的效果。同时，胶原蛋白-牛至精油抗菌膜能被生物降解，不会对环境造成污染。
本发明实施方式中，改性的胶原蛋白溶液为将胶原蛋白进行热改性得到的。
本发明实施方式中，热改性的方法为：将胶原蛋白溶于蒸馏水中，在20℃-60℃温度下热处理5-30min，得到改性的胶原蛋白溶液。
未改性的胶原蛋白难溶于水，力学性能和成膜能力差，改性后，胶原蛋白的交联度较高，机械强度和热稳定较好，同时可以均匀分散在蒸馏水中，易于成膜。
本发明实施方式中，改性的胶原蛋白溶液的浓度为0.03g/mL-0.07g/mL。如果胶原蛋白溶液中胶原蛋白含量较少，将难以得到交联性较好的抗菌膜，如果胶原蛋白较高，抗菌膜的制备成本就大大提高，因此，本发明改性的胶原蛋白溶液的浓度为0.03g/mL-0.07g/mL。
本发明一优选实施方式中，改性的胶原蛋白溶液的浓度为0.05g/mL。
本发明实施方式中，搅拌速度为2000-5000r/min。
本发明实施方式中，不同浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油的浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.02和0.01μL/mL。
本发明实施方式中，最小抑菌浓度测试方法为：
将不同质量的牛至精油分别溶解到改性的胶原蛋白溶液中，搅拌均匀后，得到牛至精油浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.02和0.01μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液，将大肠杆菌或与金黄色葡萄球菌菌悬液加入到胶原蛋白-牛至精油共混液中，观察胶原蛋白-牛至精油共混液中是否有肉眼可见的细菌沉淀，无肉眼可见细菌沉淀的胶原蛋白-牛至精油共混液对应的最小浓度即为牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度。
本发明实施方式提供的最小抑菌浓度测试方法，将胶原蛋白-牛至精油共混液和菌悬液混合后，只需肉眼观察胶原蛋白-牛至精油共混液中是否含有细菌沉淀即可得到最小抑菌浓度，测试方法简单、直观，不需要将细菌和胶原蛋白-牛至精油共混液培养一段时间再测试，易于操作。
本发明实施方式中，将不同浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液置于96孔板中。现有技术测试最小抑菌浓度时一般是在试管中操作，但是采用试管操作时，耗费的溶液体积一般为几十毫升，浪费较为严重。本发明采用96孔板进行最小抑菌浓度试验，每孔加入的溶液体积仅为几毫升，大大节省了试验成本。
本发明实施方式中，96孔板中大肠杆菌的菌落数为104-106cfu/mL。
本发明实施方式中，96孔板中金黄色葡萄球菌的菌落数为104-106cfu/mL。
本发明实施方式中，最小杀菌浓度测试方法为：
将具有最小抑菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液以及浓度大于最小抑菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液分别加入到培养皿中与大肠杆菌或金黄色葡萄球菌37℃共培养24-48h，然后观察培养皿中的细菌生长情况，无生长菌落的培养皿对应的最小浓度即为最小杀菌浓度。
本发明实施方式中，培养皿中大肠杆菌的菌落数为104-106cfu/mL。
本发明实施方式中，培养皿中金黄色葡萄球菌的菌落数为104-106cfu/mL。
本发明实施方式中，培养皿中含有琼脂培养基。
本发明实施方式提供的最小杀菌浓度测试方法，在得到最小抑菌浓度结果后，根据最小抑菌浓度测试最小杀菌浓度，方法简单、直观，不需从多个不同的浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液中测试得到最小杀菌浓度，试验过程较为简短。
本发明实施方式中，胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油的最小抑菌浓度为1.25-2.5μL/mL。
本发明实施方式中，胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油的最小杀菌浓度为2.5-5μL/mL。
在具体试验或生产过程中，可以根据实际需求选择最终的胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油的浓度，如为了胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的抗菌效果更好，可以选择浓度大于最小杀菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液。
胶原蛋白与牛至精油混合在一起时，容易发生化学反应，例如胶原蛋白中的羧基和牛至精油的羟基发生反应，从而会影响抗菌效果，因此胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的抗菌效果和单独牛至精油的抗菌效果是不同的。现有技术测试牛至精油的抗菌效果时，一般是将牛至精油溶于水中，从而测试牛至精油水溶液的抗菌效果。而本发明测试胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油的抗菌效果，结果更准确。
本发明实施方式中，将胶原蛋白-牛至精油共混液进行真空脱气的方法为：在真空度0.08-0.09Mpa的环境下将胶原蛋白-牛至精油共混液脱气3-6min，重复脱气三次后，静置0.5-1h。脱气的目的是为除去涂膜液中包裹的气体，有助于得到分布均匀的抗菌膜。
本发明实施方式中，将胶原蛋白-牛至精油共混液进行流延成膜，在30-60℃下干燥4-20h，冷却后揭膜，得到胶原蛋白-牛至精油抗菌膜。
本发明实施方式中，将胶原蛋白-牛至精油共混液在有机玻璃板上流延成膜。
本发明实施方式中，将胶原蛋白-牛至精油共混液定容至100mL后，再进行流延成膜。
本发明实施方式中，干燥冷却后揭膜，在温度25±1℃，湿度为50±1％的恒温恒湿箱中平衡48h，得到胶原蛋白-牛至精油抗菌膜。
本发明实施方式中，胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的厚度为0.08-0.12mm。
现有技术一般提供的抗菌膜的制备方法需要先制备出成品再采用测试抑菌圈直径的方法来抗菌性能测试，抗菌测试方法往往需要3天才能测试完成，另外，该方法只能定性，无法直接得到抗菌膜的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。如果抗菌测试效果不好，还要调节原料的配比重新再测试制备抗菌膜，后续还要进行抗菌测试，该制备方法较为盲目，缺乏指导，制备方法复杂繁琐。
本发明第一方面提供的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，在制备抗菌膜之前先测试胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度，在得到最小抑菌浓度和最小杀菌浓度后，可以用来指导抗菌膜的制备，如可以确认抗菌膜中牛至精油含量为多少时抗菌效果较好，使抗菌膜的制备更有目的性和针对性，避免了现有技术需要重复多次制备抗菌膜造成的制备方法复杂的问题，方法简单、直观。
本发明第二方面提供了一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，其由上述的制备方法制得的。
本发明实施方式中，胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的厚度为0.08-0.12mm。
本发明提供的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，可用于食品包装，尤其适用于深海鱼的包装。
本发明第二方面提供的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，包括胶原蛋白和牛至精油，两者均可生物降解，生物相容性较好，另外，牛至精油的抗菌性能较好，得到的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜具有抗菌防腐特性，能够抑制贮藏过程中食品微生物的生长并避免食品的二次污染，从而延长食品的保质期。本发明得到的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜可以应用于食品的保鲜。
实施例1：
参照图1的制备方法流程示意图，一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，包括以下步骤：
(1)胶原蛋白热改性：称取5g鱼鳞胶原蛋白溶于95mL蒸馏水中，热改性温度为20℃，热改性时间为30min，得到改性的胶原蛋白溶液；
(2)牛至精油最小抑菌浓度试验：称取一定量牛至精油，分别溶解在改性的胶原蛋白溶液，搅拌转速为2000r/min，得到牛至精油的最终浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.02和0.01μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液；
取无菌96孔细胞培养板，将牛至精油浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.02和0.01μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液依次置于96孔细胞培养板中的第1排第1管至第11管中以及第2排的第1管至第11管中，然后在第2排第1管至第11管的每管内加入大肠杆菌菌悬液，细胞培养板中大肠杆菌的菌落数约为105CFU/ml；对照第1排，观察第2排培养板中是否有肉眼可见的细菌沉淀，无肉眼可见细菌沉淀的培养板即澄清的培养板对应的最小浓度即为牛至精油对大肠杆菌的最小抑菌浓度。按照相同的方法，测试牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度，细胞培养板中金黄色葡萄球菌的菌落数约为105CFU/ml。图2为本发明实施例1测试牛至精油对大肠杆菌的最小抑菌浓度的细胞培养板图；图3为本发明实施例1测试牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度的细胞培养板图；从图2中可以看出，第2排第3管为澄清，从第4管开始，溶液较为浑浊，因此，可以确定第3管对应的牛至精油的浓度为最小抑菌浓度，牛至精油对大肠杆菌的最小抑菌浓度为2.5μL/mL。从图3中可以看出，第2排第4管为澄清的试管，从第5管开始，溶液较为浑浊，因此，可以确定第4管对应的牛至精油的浓度为最小抑菌浓度，牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.25μL/mL。
(3)牛至精油最小杀菌浓度试验：
将浓度为2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液以及浓度为10μL/mL和5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液分别加入到三个琼脂培养皿中，在培养皿中通过画板法接种大肠杆菌，培养皿中大肠杆菌的菌落数约为105CFU/ml；37℃孵育24h后观察培养皿中的细菌生长情况，无生长菌落的培养皿对应的最小浓度即为牛至精油对大肠杆菌的最小杀菌浓度。图4为本发明实施例1测试牛至精油对大肠杆菌的最小杀菌浓度的培养皿图；从图4中可以看出，三个培养皿中均没有生长大肠杆菌菌落，可以确定牛至精油对大肠杆菌的最小杀菌浓度即为最小杀菌浓度为2.5μL/mL。按照相同的方法，测试牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度，将浓度为1.25μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液以及浓度为10μL/mL、5μL/mL和2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液分别加入到四个琼脂培养皿中，在培养皿中接种金黄色葡萄球菌，培养皿中金黄色葡萄球菌的菌落数约为105CFU/ml；37℃孵育24h后观察培养皿中的细菌生长情况。图5为本发明实施例1测试牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度的培养皿图。从图5中可以看出，第4个培养皿中生长出了金黄色葡萄球菌菌落，而第1-3个培养皿中没有生长金黄色葡萄球菌菌落，因此，可以确定第3个培养皿对应的浓度即为牛至精油对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度，为2.5μL/mL。
(4)真空脱气：将牛至精油浓度为2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液冷却至室温(23℃)，在真空度0.08Mpa环境下脱气6min，重复三次，然后静置0.5h。
(5)流延成膜：将胶原蛋白-牛至精油共混液定容至100mL，即取100mL真空脱气后的牛至精油浓度为2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液流延至有机玻璃板上，在30℃下干燥20h，注意有机玻璃板保持水平。干燥冷却后揭膜，在温度25±1℃，湿度50±1％的恒温恒湿箱中平衡48h，制得胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，该胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的厚度为0.08mm。
实施例2：
一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，包括以下步骤：
(1)胶原蛋白热改性：称取3g鱼鳞胶原蛋白溶于97mL蒸馏水中，热改性温度为60℃，热改性时间为5min，得到改性的胶原蛋白溶液；
(2)同实施例1的步骤(2)；
(3)同实施例1的步骤(3)；
(4)真空脱气：将牛至精油浓度为2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液冷却至室温(23℃)，在真空度0.09Mpa环境下脱气3min，重复三次，然后静置1h；
(5)流延成膜：将胶原蛋白-牛至精油共混液定容至100mL，即取100mL真空脱气后的牛至精油浓度为2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液流延至有机玻璃板上，在60℃下干燥4h，注意有机玻璃板保持水平。干燥冷却后揭膜，在温度25±1℃，湿度50±1％的恒温恒湿箱中平衡48h，制得胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，该胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的厚度为0.10mm。
实施例3：
一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，包括以下步骤：
(1)胶原蛋白热改性：称取7g鱼鳞胶原蛋白溶于93mL蒸馏水中，热改性温度为40℃，热改性时间为10min，得到改性的胶原蛋白溶液；
(2)同实施例1的步骤(2)；
(3)同实施例1的步骤(3)；
(4)真空脱气：将牛至精油浓度为2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液冷却至室温(23℃)，在真空度0.09Mpa环境下脱气4min，重复三次，然后静置0.7h；
(5)流延成膜：将胶原蛋白-牛至精油共混液定容至100mL，即取100mL真空脱气后的牛至精油浓度为2.5μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液流延至有机玻璃板上，在40℃下干燥10h，注意有机玻璃板保持水平。干燥冷却后揭膜，在温度25±1℃，湿度50±1％的恒温恒湿箱中平衡48h，制得胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，该胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的厚度为0.12mm。
效果实施例：
为有力支持本发明实施例的有益效果，提供效果实施例如下，用以评测本发明实施例提供的产品的性能。
将实施例1制得的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜用于包装新鲜的三文鱼，同时设置空白样，空白样指的是没有做任何处理的三文鱼，测试0-7天的三文鱼中的总的微生物指标。
表1
备注：N表示菌落太多，导致无法计数。
从表1中可以看出，采用胶原蛋白-牛至精油抗菌膜包装的三文鱼中的细菌含量比空白样要显著减少，这可以说明，采用本发明方法制得的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的抗菌效果较好，可以很好地应用于食品的包装。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取改性的胶原蛋白溶液，将不同质量的牛至精油分别溶解在所述改性的胶原蛋白溶液中，搅拌均匀后，得到不同牛至精油浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液；
将所述胶原蛋白-牛至精油共混液进行最小抑菌浓度试验，得到所述牛至精油的最小抑菌浓度；
将具有所述最小抑菌浓度以及浓度大于所述最小抑菌浓度的所述胶原蛋白-牛至精油共混液进行最小杀菌浓度试验，得到所述牛至精油的最小杀菌浓度；
将具有所述最小杀菌浓度以及浓度接近所述最小杀菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液进行真空脱气、流延成膜后揭膜，制得胶原蛋白-牛至精油抗菌膜。
2.如权利要求1所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，所述最小抑菌浓度试验方法为：
将不同质量的牛至精油分别溶解到改性的胶原蛋白溶液中，搅拌均匀后，得到牛至精油浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.02和0.01μL/mL的胶原蛋白-牛至精油共混液，将大肠杆菌或与金黄色葡萄球菌菌悬液加入到所述胶原蛋白-牛至精油共混液中，观察所述胶原蛋白-牛至精油共混液中是否有肉眼可见的细菌沉淀，无肉眼可见细菌沉淀的所述胶原蛋白-牛至精油共混液对应的最小的牛至精油浓度即为胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度。
3.如权利要求2所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.25-2.5μL/mL。
4.如权利要求1所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，所述最小杀菌浓度试验方法为：
将具有所述最小抑菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液以及浓度大于所述最小抑菌浓度的胶原蛋白-牛至精油共混液分别加入到培养皿中与大肠杆菌或金黄色葡萄球菌37℃共培养24-48h，然后观察所述培养皿中的细菌生长情况，无生长菌落的培养皿对应的最小的牛至精油浓度即为胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度。
5.如权利要求4所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白-牛至精油共混液中牛至精油对大肠杆菌或对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度为2.5-5μL/mL。
6.如权利要求1所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，所述真空脱气的方法为：在真空度0.08-0.09Mpa的环境下将所述胶原蛋白-牛至精油共混液脱气3-6min，重复脱气三次后，静置0.5-1h。
7.如权利要求1所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，所述真空脱气后，将所述胶原蛋白-牛至精油共混液进行流延成膜，然后在30-60℃下干燥4-20h，冷却后揭膜，得到胶原蛋白-牛至精油抗菌膜。
8.如权利要求1所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的制备方法，其特征在于，所述改性的胶原蛋白溶液的制备方法为：将胶原蛋白溶于蒸馏水中，在20℃-60℃温度下热处理5-30min，得到所述改性的胶原蛋白溶液。
9.一种胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，其特征在于，所述胶原蛋白-牛至精油抗菌膜是由权利要求1-8任一项所述制备方法制得的。
10.如权利要求9所述的胶原蛋白-牛至精油抗菌膜，其特征在于，所述胶原蛋白-牛至精油抗菌膜的厚度为0.08-0.12mm。
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