CN104906194B - 一种治疗哮喘的药物贴膏及制备工艺与检测分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物领域，发明名称为一种治疗哮喘的药物贴膏及制备工艺与检测分析方法，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：樟脑1～2重量份，薄荷脑1～2重量份，丁香油1～2重量份，青风藤10～20重量份，蛇床子10～20重量份。该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。本发明还提供该药物贴膏的含量测定方法，该方法具有较高准确度、稳定性和重复性。该药物组合物可用于制备治疗风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征的药物。

Description

一种治疗哮喘的药物贴膏及制备工艺与检测分析方法

技术领域

本发明属于药物领域，涉及一种治疗哮喘的药物组合物，具体涉及一种由为樟脑、薄荷脑、丁香油、青风藤、蛇床子为原料制成的药物组合物。

背景技术

在哮喘是一种常见病、多发病，属于中医的“喘证”范畴。中医认为，本病的发生是肺脾肾虚、痰饮内伏、痰阻气道、宣降失常所致。哮喘是一种以嗜酸性粒细胞（EOS）、肥大细胞反应为主，淋巴细胞和巨噬细胞浸润为辅的气道炎症性疾病。往往在人的体质下降，免疫功能低下时发病。其发病率高居不下，严重危害人类的身体健康。穴位贴敷疗法具有简单、效验、费用少，无副作用的优点，近年来在防治哮喘的应用中发挥了巨大作用。

一、临床研究

（一）药物选择

研究表明，药物可通过腧穴、肌肤、孔窍等处吸收，贯通经脉而作用于全身。穴贴用药有单味药、多味药的不同，但大多是用多味药，如选用细辛、甘遂、白芥子、麻黄等这类刺激性强和芳香走窜之品，其“切于皮肤，彻于腠理，摄于吸气，融于渗液”，可达到温煦阳气，驱寒散邪，温肺化饮的作用。所用赋形剂多采用姜汁、蜂蜜、醋、酒等，或在其中加入助渗药物如二甲基亚砜、氮酮等以提高药物的渗透。

（二）穴位选择

1、单穴的使用：高修安等用海龙蠲哮方（海蛤粉、地龙、炙麻黄、杏仁、炙甘草、款冬花、葶苈子、细辛、防风、蒲公英、丹参、橘红、淫羊藿）联用咳喘平（猪牙皂、细辛等）药末，调以白醋、葱白成糊，贴于双侧涌泉穴，贴药2周。治疗75例发作期患儿，总有效率为89.3%。张瑜等将患者随机分为2组，治疗组24例用中药辛桂散（细辛、白芥子、苍术、公丁香、肉桂、法半夏、人工麝香）敷脐，每天换药1次，10日为1个疗程，每年从小暑开始，共贴3～6个疗程。对照组21例不予任何治疗和处理，观察期1年，观察治疗前后哮喘病情分级及外周血嗜酸性粒细胞数的变化，结果有显著性差异，治疗组优于对照组（P<0.05）。

2、多穴的使用：徐绿萍等自制“止喘膏”（白芥子、甘遂、细辛、元胡索、生麻黄、冰片等，姜汁调），初伏取肺俞、定喘、天突，中伏取风门、厥阴俞、膻中，末伏取大杼、心俞、华盖。虚寒型加膏肓俞、肾俞；痰热型加丰隆、大椎，3次为1个疗程，连贴3年。结果:治疗218例，虚寒型156例，有效率为96.8%，痰热型62例，有效率为93.7%。张林昌等用自制伏贴膏（白芥子、延胡索、甘遂、麻黄、附子、黄芪、生川乌、细辛、麝香、姜汁），于初伏取定喘、肺俞、心俞、膻中，中伏取风门、厥阴俞、膈俞、大椎，末伏取大杼、肺俞、膏肓、天突，3次为1个疗程，连贴3年。结果治疗支气管炎、哮喘112例，显效63例，有效45例，无效4例，总有效率为96.43%。曹春梅等用膏剂（白芥子、玄胡、甘遂、细辛、地龙、麝香、姜汁）治疗580例，初伏取大杼、肺俞、膈俞，中伏取肺俞、心俞、膈俞，末伏取肺俞、脾俞、肾俞、足三里，连贴3年，总有效率为98.1%。邵素菊等在三伏天选取肺俞、大椎、风门、天突、膻中等穴，贴药（玄胡、干姜、丁香、生甘遂、细辛、白芥子，姜汁调），4～6h后取下，一年贴敷3次。治疗40例，临床控制8例，显效26例，好转4例，无效5例，总有效率为87.50%。

3、穴位贴敷配合他法：陆为华于三伏天在百劳、肺俞、膏肓上贴药（细辛、白芥子、甘遂、延胡索等），并使用直流感应电疗仪辅助药物渗透。每次敷药30min，以局部皮肤潮红为度。每年治疗4次，连治3年。治疗1000例患儿，显效100例，有效660例，无效240例，总有效率为76%。王希琳于三伏天采用壮医药线，应用梅花形灸法，点灸大椎、肺俞、膏肓俞、膻中、足三里、脾俞、肾俞，灸后在背部穴位上贴敷自制“消喘膏”，每年贴3次，连治3年。治疗缓解期患者288例，总有效率达91.7%。瞿群威等用火针配合贴黑膏药（菟丝子、白芥子、五味子、元胡、细辛、甘遂、杜仲、僵蚕等）治疗50例患者。寒证取百劳、肺俞、膏肓俞，热证取大椎、风门、肺俞。火针每6日1次，5次为1个疗程。黑膏药每次贴3天，连续10次为1个疗程。其治愈率和总显效率分别为54%和84%，且寒证有效率为100%，与热证有效率为89.6%相比，有显著性差异（P<0.01）。周志英用自制消喘膏（白芥子、延胡索、细辛、生甘遂、蜂蜜及姜汁），连续3年于三伏天在双侧风门、肺俞、膏肓俞、肾俞上拔罐后贴敷上穴，一年贴3次，并从初伏开始用卡介菌多糖核酸注射液0.5mL注射患者双侧足三里，每隔1周注射1次，共治6次，连续治疗3年。结果114例中，临床控制16例，显效38例，好转46例，无效14例，总有效率为87.7%。李国忠在三伏天和三九天用锋钩针勾刺天突穴，配合在肺俞、膏肓俞、风门、大椎上拔罐后，用药饼（麻黄、白芥子、细辛、洋金花、甘遂、扑尔敏、姜汁）贴上穴，喘甚加定喘，痰多加脾俞，肾虚加肾俞，一年治6次，结果治疗264例，痊愈36例，有效186例，无效42例。

二、机理研究

现代研究认为哮喘的主要病理是慢性气道炎症，而免疫功能异常是导致炎症反复发作的重要原因。临床研究表明，穴位贴敷疗法可以改善机体的免疫状态，对气道炎性细胞、免疫机制、细胞受体、细胞因子、肺功能、哮喘潜伏期等都有非常明显的影响。单翠英等报道运用伏九贴敷药膏贴穴后，可使患儿FVC、FEV1、PEF、FEF均升高，IgE降低，IgA、IgG升高、IL-4降低、IFN-γ升高，说明穴贴法能调节机体免疫力，纠正体内Th1/Th2的比例失衡，从而达到治疗哮喘的作用。杨君军等观察到三伏贴能显著降低患者血浆可溶性细胞间黏附分子（sICAM-1）水平（P<0.01），降低血浆可溶性血管-细胞间黏附分子（sVCAM-1）和可溶性选择素（sEslectin）水平（P<0.05），说明三伏贴可能通过抑制黏附分子的表达或直接抑制白细胞与内皮细胞的黏附，从而减少炎细胞的浸润，达到治疗目的。

动物实验证明穴位贴敷能使IFN-γ明显升高，明显降低潜伏期中的IgE和IL-6、IL-4、IL-2水平、血清肿瘤坏死因子及血清E、P选择素水平，减少嗜酸性粒细胞浸润等。沈惠风等运用血清药理学的方法，观察敷贴后含药血清对抗由氯化乙酰胆碱（ACH）引起的豚鼠体外螺旋气管条的收缩作用，发现其效果与氨茶碱腹腔注射作用等同。并且在一定时间内，体外气管条的收缩百分比随中药敷贴治疗天数的延长而减少，但治疗7～14天，其作用趋于稳定，说明对抗ACH解痉作用是中药循经敷贴法治疗哮喘的机制之一，且合理地确定疗程是十分必要的。

三、讨论

中医认为哮喘是宿痰内伏于肺，复因外邪或饮食、情志、劳倦等诱发，致使痰阻气道，肺失肃降，痰气交阻，壅塞气道所致。穴位贴敷防治哮喘是根据中医“春夏养阳”、“长夏土治，土能生金”，天人相应的理论、子午流注理论和“未病先防”的思想，融合了经络、穴位、药物、环境甚至时间的多重作用，“可与内治并行，能补内治之不及”，已成为穴位贴敷疗法临床运用的成功典范，具有广阔发展前景。

本发明贴膏是发明人多年来精心研制，主要用于治疗慢性气管炎和支气管哮喘且行之有效的外用贴膏。如果在“三伏天”使用，能通过“时间疗法”、药物渗透和穴位调整的三重治疗而达到健脾益肾、降气平喘、化痰止咳的综合治疗作用。经研究表明，本发明药物贴膏对哮喘具有较好的治疗效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗哮喘的药物组合物。

本发明的另一目的是提供该药物组合物的制备方法。

本发明还提供该药物组合物的质量检测方法。

本发明还提供了该药物组合物的制药用途。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种治疗哮喘的药物组合物，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：樟脑1～2重量份，薄荷脑1～2重量份，丁香油1～2重量份，青风藤10～20重量份，蛇床子10～20重量份。

该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑2重量份，丁香油1重量份，青风藤20重量份，蛇床子10重量份。

该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑2重量份，薄荷脑1重量份，丁香油2重量份，青风藤10重量份，蛇床子20重量份。

该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑1重量份，丁香油1重量份，青风藤10重量份，蛇床子10重量份。

该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂。

该药物组合物贴膏剂优选采用如下方法制备：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，浓缩得胶液；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

该药物组合物的含量测定方法为：采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2.8，比例为21：79；检测波长：260nm；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置10mL量瓶中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1mL甲醇含青风藤碱1.5mg的对照品溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品1g，置具塞锥形瓶中，加入0.5%盐酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0.5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加氨水调节pH至9～10，转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加10mL甲醇溶解定容，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

该药物组合物可以用于制备治疗风湿性关节炎的药物。

该药物组合物还可以用于制备治疗青年慢性疲劳综合征的药物。

通过如下实验研究验证本发明的技术效果：

实验一：本发明贴膏贴敷穴位治疗豚鼠哮喘的实验研究

1 材料与方法

实验动物：健康豚鼠70只（雌雄各半）体重300±50g。

实验药物：

本发明贴膏：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g、青风藤5g、蛇床子5g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

对比贴膏A：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

对比贴膏B：

本发明贴膏：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g、青风藤5g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

对比贴膏C：

本发明贴膏：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g、蛇床子5g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到蛇床子浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、蛇床子浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

桂龙咳喘宁胶囊（桂龙药业（安徽）有限公司生产，国药准字Z20053135）

试剂与仪器卵蛋白干粉制剂（上海博奥生物制品公司生产），IgE放免试剂盒（北方生物技术研究所生产），IL-4放免试剂盒（北方生物技术研究所生产），IgG放免试剂盒（中国原子能科学研究所生产），CX5生化分析仪（黑龙江中医药大学附属第一医院核放射科提供），CW-20D超声雾化仪（德国百瑞公司制造），FJ-2008全自动C免疫计数仪（西安二六二厂制造）。

选用穴位肺俞（双）、厥阴俞（双）、心俞（双）、督俞（双）、膈俞（双）（取穴参照《实验针灸学》（林文注. 实验针灸学[M]. 上海：上海科学技术出版社，1994：88-89）。

实验方法动物分组：将70只豚鼠以平衡饲料适应性的喂养1W，依据“数字随机表分组法”分为本发明贴膏穴位贴敷治疗组（简称本发明贴膏组）、对比贴膏A穴位贴敷治疗组（简称贴膏A组）、对比贴膏B穴位贴敷治疗组（简称贴膏B组）、对比贴膏C穴位贴敷治疗组（简称贴膏C组）、空白对照组（简称空白组）、模型对照组（简称模型组）、口服药物对照组（简称内服组）7组，每组10只。

模型复制：参考相关文献（苗三明. 实验动物与动物实验技术[M] 北京:中国中医药出版社, 1997: 193~ 194），除空白对照组外，给本发明贴膏组、贴膏A组、贴膏B组、贴膏C组、模型组、内服组六组动物造模。给每只豚鼠的腹腔内注射10%卵蛋白生理盐水1ml进行致敏，1W重复一次。2W后将豚鼠置雾化箱中，以恒压400mmHg雾化吸入1%卵蛋白生理盐水15min。观察至豚鼠出现张口喘息，肚腹鼓张为止，即造模成功。

处理：

本发明贴膏组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面积3cm×4.5cm左右。用75%酒精消毒后，将本发明贴膏贴敷于脱毛处（包括肺俞、厥阴俞、心俞、督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天1次，共贴敷6次。

贴膏A组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面积3cm×4.5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏A贴敷于脱毛处（包括肺俞、厥阴俞、心俞、督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天1次，共贴敷6次。

贴膏B组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面积3cm×4.5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏B贴敷于脱毛处（包括肺俞、厥阴俞、心俞、督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天1次，共贴敷6次。

贴膏C组豚鼠，用2%硫代硫酸钠在其背部双侧肺俞至膈俞部位进行脱毛，脱毛面积3cm×4.5cm左右。用75%酒精消毒后，将贴膏C贴敷于脱毛处（包括肺俞、厥阴俞、心俞、督俞、膈俞穴在内），然后轻轻按压两次，再用不干胶纸固定。8h后将本发明贴膏取掉。每天1次，共贴敷6次。

内服组豚鼠，用桂龙咳喘宁胶囊去胶囊，内装药粉以0.58g/kg/d的用量（按体表面积折算的等效剂量，相当于人体常规用量的4.9倍）用蒸馏水按1：5的比例调成水糊状，进行灌胃治疗。

空白组、模型组动物除每天抓取刺激外，不作任何处理。

标本采集及检测方法EOS检测：对每组豚鼠，均采用毛细取穴管吸取豚鼠尾尖血液20μL，加入0.38mL伊红-甲醛稀释液中，轻轻摇匀，静置5min，采用常规计数法检测。

IgE、IgG、IL-4检测：对每组豚鼠，用3.5%苯巴比妥钠0.1g/kg腹腔注射麻醉，眼球静脉采血6ml，分装3个试管。各2ml待凝固后分离血清，在-20℃保存，按照试剂盒说明方法和要求操作，采用放免法分低温冰箱检测IgE、IgG、IL-4。

统计学处理：应用SPSS10.0系统软件进行处理，所有数据用均数±标准差（mean±SD）表示，各组间比较用方差分析。

2 结果

各组豚鼠血中EOS计数和血清总IgE、IgG、IL-4结果比较（见表1）。

表1 各组豚鼠血中EOS和血清总IgE、IgG、IL-4的结果比较（mean±SD）

注：模型组与空白组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01；本发明贴膏组与模型组的比较，#表示P<0.05，##表示P<0.01；本发明贴膏组与内服组的比较，▲表示P<0.05

可以看出，造模后模型组动物的EOS计数和IL-4的含量显著上升（P<0.05，P<0.01），IgG明显下降（P<0.05），说明造模成功。

经过治疗后，本发明贴膏组与模型组比较，EOS显著降低（P<0.01），IgG显著增高（P<0.01），均有非常显著性差异；IL-4有所下降，但无统计学意义。贴膏A组、贴膏B组、贴膏C组与模型组比较，EOS没有显著降低，IgG没有显著增高，均没有显著性差异；

本发明贴膏组与内服组比较，EOS计数下降更明显（P<0.05），IgG含量升高更显著（P<0.05），较内服组有显著性差异，本发明贴膏组明显优于内服组。

血清总IgE水平在空白组、模型组、内服组和贴敷组、贴膏A组、贴膏B组、贴膏C组的变化均不明显，无显著性差异。

3 讨论与结论

本实验结果证实，该贴膏穴位贴敷能明显降低哮喘豚鼠血中EOS计数，并能提高血清IgG的含量，充分说明该贴膏能提高机体的免疫功能，有较好的化痰平喘作用。其疗效优于内服药物桂龙咳喘宁，并且也明显优于贴膏A、贴膏B、贴膏C，说明本发明药物组合物贴膏中各药味之间的配伍精良，缺一不可，各药味之间的组合产生了明显的协同增效作用，值得临床推广应用。

哮喘的气道炎症反应，在人体是由IgE介导的速发相的变态反应。可激活EOS，释放气道上皮物质、炎性介质和相关的细胞因子，参与炎症反应的调节。本实验观察到血清总IgE含量在空白组、模型组、内服组与贴敷组、贴膏A组、贴膏B组、贴膏C组均无明显改变。而模型组IgG含量明显降低，与空白组比较有显著性差异（P<0.05）。经本发明贴膏穴位贴敷和内服桂龙咳喘宁两种方法治疗后，IgG含量明显增高（P<0.01，P<0.05），说明豚鼠的哮喘是由IgG介导的的变态反应，而不是IgE介导的。这与人体的哮喘发病机制有所不同。

本发明穴位贴敷疗法是将有效药物贴敷于相关穴位上，通过药物和穴位的双重作用而达到治疗目的的。该方法对肠胃无刺激，也不经过肝的首过效应，不会引起人体的不良反应。

实验二：本发明药物贴膏穴位敷贴治疗哮喘症疗效观察

1资料和方法

1.1一般资料

黑龙江中医药大学附属第一医院2014年4月至2015年1月支气管哮喘症患者42例，其中男性21例，女性21例；年龄22岁～58岁，平均年龄（40.5±1.3）岁；病程1年～20年，平均病程（7.4±2.3）年。纳入标准：符合中华医学会呼吸科学会制定的支气管哮喘的诊断标准；经相关临床特征、实验室检查、影像学检查确诊。所有患者均签署知情同意书。

根据随机数字表法分为研究组、对照组，每组21例。

研究组男性11例，女性10例，年龄22岁～58岁，平均年龄（40.3±1.4）岁；病程1年～20年，平均病程（7.6±2.5）年；

对照组男性10例，女性11例，年龄22～57岁，平均年龄（40.7±1.6）岁；病程1年～20年，平均病程（7.2±2.0）年。

两组患者均排除血液系统、肝肾、心脑血管系统疾病、精神疾患、哺乳期、妊娠期女性，两组患者的性别、平均年龄、平均病程等临床资料无统计学意义（P＞0.05），结果具有可比性。

1.2研究方法

全部患者均酌情予以氧气疗法、化痰止咳抗感染、糖皮质激素等常规性疗法。研究组：在此基础上予以本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，药物贴膏制备方法参见本发明说明书实施例1，将贴膏分别贴于病人双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、双侧膈俞穴，每24h更换一次，两组均治疗3个月。

观察两组的临床效果和咳嗽、啰音、紫绀、喘息的持续时间。

1.3判断和评估标准

显效：体征症状消失或显著减轻，无呼吸困难、低氧血症，意识清晰；

有效：症状略有减轻，轻度低氧血症，意识清楚，未出现呼吸困难；

好转：出现紫绀、哮鸣音，中度低氧血症，略有呼吸困难；

无效：体征症状加重或无改变，重度低氧血症，喘憋。

临床有效率为显效与有效的百分比之和。

1.4统计学方法

全部数据采用SPSS18.0软件系统处理分析，计量资料采用均数±标准差（mean±SD）表示，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组临床效果的评估比较

研究组的临床有效率95.24%，显著高于对照组的61.90%，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组临床效果的评估比较［n（%）］

2.2两组患者的体征及症状持续时间评估

研究组治疗后的咳嗽、喘息、紫绀、啰音等临床症状体征持续时间显著优于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 两组患者的体征及症状持续时间评估（mean±SD，天）

3讨论与结论

本研究对支气管哮喘患者进行本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，结果显示：研究组的临床有效率为95.24%，显著优于对照组的61.90%，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组治疗后的咳嗽、喘息、紫绀、啰音等临床症状体征持续时间显著优于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，哮喘症进行本发明药物贴膏穴位敷贴治疗，可显著改善患者的临床症状体征，临床效果确切，值得临床推广。

实验三：本发明贴膏治疗青年慢性疲劳综合征

1资料与方法

1.1一般资料

选择黑龙江中医药大学附属第一医院门诊患者40例，诊断标准参照美国疾病控制与预防中心（CDC）制订的CFS诊断标准，主症为临床评估的不能解释的持续性或反复发作的慢性疲劳，该疲劳是新得的或有明确的发作期限，不是用力的结果；经休息后不能明显缓解，导致在工作、社会或个人活动方面明显下降。次症为下述症状中同时出现4项及其以上，且这些症状已持续存在或反复发作6个月或更长时间，但又不应早于疲劳出现：近期记忆力或注意力集中明显下降；咽痛；颈部或腋下淋巴结肿大，触痛；肌肉痛；没有红肿的多关节疼痛；一种类型新、程度重的头痛；不能解乏的睡眠；运动后疲劳持续超过24h。中医诊断标准参照《中医内科学》（患者证属脾气亏虚肝郁气滞型）。

纳入标准：符合CFS诊断主症加次症4项及其以上者；性别不限，年龄22～44岁；病程超过6个月；经临床评估合格（对持续、反复疲劳低于6个月患者进行常规体检、精神状态检查，及实验室血常规、尿常规、血沉、电解质、血糖、肝功能、肾功能、促甲状腺激素等检查）排除因其他疾病引起的慢性疲劳者；知情同意，自愿参加临床试验。

排除标准：年龄在22岁以下或44岁以上；有原发病原因可解释的慢性疲劳；双相情感障碍、精神分裂症、妄想症、痴呆、神经性厌食症；具有心血管病变，肝、肾、肺脏病变，血液病变，肿瘤或其他代谢疾病；已接受其他有关治疗，可能影响本研究的效应指标观察；试验期间合用其他非针对基础病治疗的中西药物。

将40例患者随机分为治疗组和对照组，各20例。治疗组中，男10例，女10例；对照组中，男11例，女9例。两组患者均为青年患者，性别、年龄、病程、症状、体征等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2治疗方法

两组均给予心理疏导，具体方法为：采用心理压力消除法，让患者换位思考，在认识、思考和评价客观事物时，注意从多方面看问题，消除消积情绪，心理压力可能迎刃而解；广泛结交朋友，向知心朋友倾诉你的感受，同时接受帮助，寻求事情解决的办法；降低生活标准，积极从事体育锻炼，放松身心，缓解紧张情绪。对照组服用归脾丸1丸，每日2次；谷维素20mg，每日3次。治疗组加用本发明贴膏治疗，其处方及制备方法参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1。两组患者均以30d为1个疗程，3个疗程后评价疗效。

1.3观察指标

临床症状观察依据疲劳评定量表，临床心理观察依据症状自评量表（SCL-90）的心理测试量表，在就诊首日、每个疗程结束时进行观察。

1.4统计学处理

采用SPSS10.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（mean±SD）表示，采用t检验，计数资料和等级资料用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

结果见表4和表5。

表4 两组患者疲劳量表积分比较（mean±SD，分）

注：与本组治疗前比较，*P＜0.01；与对照组治疗后比较，#P＜0.01。

表5 两组患者SCL-90量表各因子评分比较（mean±SD，分）

注：与对照组比较，*P＜0.01。

3 结论

本研究结果显示，采用本发明贴膏治疗的患者疲劳评分改善及SCL-90量表各因子评分明显优于对照组，表明其治疗CFS疗效佳。针对青年患者，相较于西药和传统汤药或理疗治疗，运用本膏方治疗具有疗效确切、用药方便等优点，值得临床推广。

实验四：本发明药物贴膏质量检测研究

1仪器与材料

1.1仪器

电子分析天平（德国赛多利斯股份公司）；国之源超纯水器（湖南科尔顿水务有限公司）；超声波清洗器（东莞市科桥超声波设备有限公司）；高效液相色谱仪（美国赛默飞世尔科技有限公司）。

1.2材料

本发明药物贴膏（批号：140502、140503、140504），参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2含量测定

2.1对照品溶液的制备：精密称取青风藤碱（sinoacutine）对照品75mg，置10mL量瓶中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1mL甲醇含青风藤碱1.5mg的对照品溶液，即得。

2.2供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品1g，置具塞锥形瓶中，加入0.5%盐酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0.5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加氨水调节pH至9～10，转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加10mL甲醇溶解定容，即得供试品溶液。

2.3色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）（21：79）；检测波长：260nm；进样量：10μL。

2.4专属性考察：按处方量称取缺青风藤的其他药材，依照本发明药物贴膏的工艺制成缺青风藤阴性样品，按“2.2”项下方法制成缺青风藤阴性对照溶液，在“2.3”项色谱条件下测定，结果显示专属性良好。

2.5线性关系考察：精密称取青风藤碱对照品适量，按“2.1”项下方法制成浓度依次为5.4、10.8、21.6、43、64.8μg/mL的对照品溶液，照“2.3”项下色谱条件分别进样10μL，记录色谱峰面积，将峰面积积分值Y对相应的浓度X进行线性回归，得回归方程Y=0.0344X+0.0027，r=0.9999，结果表明青风藤碱浓度在5.5～64.9μg/mL范围内，与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.6精密度试验：取对照品溶液，重复进样6次，测定青风藤碱的峰面积，结果RSD为1.07%，表明仪器精密度良好。

2.7重复性试验：取同一批（批号：140502）本发明药物贴膏供试品样品，按样品测定项下方法，连续测定5次，测定青风藤碱的峰面积，得青风藤碱的平均含量为0.1634mg/g，RSD为0.89%（n=5），结果表明重现性良好。

2.8稳定性试验：取同一批本发明药物贴膏样品，按含量测定方法，在0、2、4、6、10h分别进样10μL，得青风藤碱的平均含量为0.1611mg/g，RSD为0.38%（n=5），结果表明被测样品溶液在10h内稳定。

2.9加样回收率试验：在已测含量的本发明药物贴膏样品溶液中，加入一定量的青风藤碱对照品溶液进行试验，并计算其回收率，结果平均回收率为98.6%，RSD为1.06%。

2.10样品中青风藤碱的含量测定：精密称取3批本发明药物贴膏样品（批号：140501、140502、140503），按“2.2”项下方法制成供试品溶液。再按“2.3”项下色谱条件测定青风藤碱的含量，结果见表6。

表6 批本发明药物贴膏样品青风藤碱含量测定结果

3 讨论

本发明采用HPLC测定了本发明药物贴膏中青风藤碱的含量，测得其平均含量为0.1647mg/g。本发明药利用HPLC法测定了青风藤碱的含量，为该制剂质量标准的制定提供科学依据。

具体实施方式：

实施例1：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g、青风藤5g、蛇床子5g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2.8，比例为21：79；检测波长：260nm；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置10mL量瓶中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1mL甲醇含青风藤碱1.5mg的对照品溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品1g，置具塞锥形瓶中，加入0.5%盐酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0.5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加氨水调节pH至9～10，转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加10mL甲醇溶解定容，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0.1623mg/g。

功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。

用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、双侧膈俞穴，每24h更换一次。

实施例2：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g、青风藤10g、蛇床子5g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2.8，比例为21：79；检测波长：260nm；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置10mL量瓶中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1mL甲醇含青风藤碱1.5mg的对照品溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品1g，置具塞锥形瓶中，加入0.5%盐酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0.5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加氨水调节pH至9～10，转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加10mL甲醇溶解定容，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0.1843mg/g。

功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。

用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、双侧膈俞穴，每24h更换一次。

实施例3：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g、青风藤5g、蛇床子10g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2.8，比例为21：79；检测波长：260nm；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置10mL量瓶中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1mL甲醇含青风藤碱1.5mg的对照品溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品1g，置具塞锥形瓶中，加入0.5%盐酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0.5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加氨水调节pH至9～10，转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加10mL甲醇溶解定容，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0.1632mg/g。

功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。

用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、双侧膈俞穴，每24h更换一次。

实施例4：

药物处方：樟脑0.5g、薄荷脑0.5g、丁香油0.5g、青风藤10g、蛇床子10g

辅料处方：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）3.5g、聚丙烯酸钠（PANA）1.5g、明胶 1g、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）3.5g、丙二醇 6g、聚乙二醇400（PEG400）10g、甘油 15.5g、高岭土2g、β-环糊精 5.5g

制备方法：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液约1mL，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入6mL的蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，体积浓缩至50mL左右；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

采用高效液相色谱法对青风藤碱进行含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2.8，比例为21：79；检测波长：260nm；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置10mL量瓶中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1mL甲醇含青风藤碱1.5mg的对照品溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品1g，置具塞锥形瓶中，加入0.5%盐酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0.5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加氨水调节pH至9～10，转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加10mL甲醇溶解定容，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测，检测结果为青风藤碱的含量为0.1872mg/g。

功能主治：用于哮喘、风湿性关节炎、青年慢性疲劳综合征。

用法用量：将贴膏分别贴于双侧肺俞穴、双侧厥阴俞穴、双侧心俞穴、双侧督俞穴、双侧膈俞穴，每24h更换一次。

在本发明药物贴膏中原料药的基源如下：

樟脑为樟科樟属植物樟Cinnamomum camphora （L.） Presl [Laurus camphoraL.]的根、干、枝、叶经蒸馏精制而成的颗粒状物。

薄荷脑为唇形科薄荷属植物薄荷Mentha canadaensis L. [M. haplocalyxBriq.; M. arvensis L. var. haplocalyx Briq.; M. arvensis auct. non L.]全草中提炼出的结晶。

丁香油为桃金娘科丁子香属植物丁香Eugenia caryophyllata Thunb.[Syzygium aromaticum （L.） Merr. et Perry; E. aromaticea Kuntze]的干燥花蕾经蒸馏所得的挥发油。

青风藤为防己科防己属植物青藤Sinomenium acutum （Thunb.） Rehd. et Wils.[Menispermum acutum Thunb.]或毛青藤S.acutum (Thunb.) Rehd. et Wils. var.cinereum (Diels) Rehd. et Wlis的藤茎。

蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床Cnidium monnieri （L.） Cuss. [Selinummonnieri L.]的果实。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (2)

1.一种治疗哮喘的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：樟脑1重量份，薄荷脑1重量份，丁香油1重量份，青风藤10重量份，蛇床子10重量份；该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成外用贴膏剂，采用如下方法制备：

（1）称取处方量的主药及辅料，备用；取干燥的青风藤，蛇床子，加90%乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，滤过，滤液浓缩，得到青风藤与蛇床子混合浸膏；

（2）分别将CMC-Na、明胶、PVP中加入适量冷蒸馏水浸泡12h，待其变成透明溶液后，将三者混合放入沸水浴中加热并搅拌，使其进行无限溶胀，备用；

（3）樟脑和薄荷脑放入研钵中轻轻研磨至形成共熔液体，加入适量无水乙醇溶液，备用；

（4）称取处方量的β-环糊精，加入蒸馏水，研磨形成水溶液，加入樟脑和薄荷脑的无水乙醇溶液，向一个方向剧烈研磨，至形成糊状物并听到噼啪声为止，时间不少于20min，制备成樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物，备用；

（5）将PANA加入到称量好的丙二醇中，搅拌混合均匀，加入高岭土和丁香油、青风藤与蛇床子混合浸膏，连续研磨至全部混合均匀成糊状，不含高岭土片状颗粒；少量多次向研钵中加入适量蒸馏水，加入的同时剧烈的、快速的向同一个方向研磨，直至形成乳白色的、不含任何杂质颗粒的、均匀的粘稠胶浆，备用；

（6）称取处方量的甘油、PEG400以及加入到制备好的樟脑和薄荷脑的β-环糊精包合物混合均匀后，加入到（2）和（5）制备好的混合后的粘稠胶浆中，沸水浴中持续搅拌，约1h后，浓缩得胶液；

（7）将浓缩后的胶液，铺展于涂有石蜡的特制防粘膜表面晾干，贴上粘性背衬，剪成适宜大小，放入特制包装袋中，得到最终成品。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的含量测定方法为：采用高效液相色谱法进行青风藤碱的含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液，用10%磷酸调节pH值2.8，比例为21：79；检测波长：260nm；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取青风藤碱对照品75mg，置10mL量瓶中，加三氯甲烷溶解，稀释至刻度，摇匀，再精密量取该溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1mL甲醇含青风藤碱1.5mg的对照品溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物贴膏样品1g，置具塞锥形瓶中，加入0.5%盐酸溶液50mL，回流提取2h，倾取提取液，残渣用0.5%盐酸溶液30mL反复洗涤，合并盐酸溶液，加氨水调节pH至9～10，转至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20mL，合并3次三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加10mL甲醇溶解定容，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。