CN104873576A - 一种含葛仙米提取物的抑菌组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含葛仙米提取物的抑菌组合物的制备方法，其步骤如下：取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率辐射，水提，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液；取干药材连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，水提，制得复方中药提取液；将葛仙米提取液和复方中药提取液按照体积比1：1的比例混合，加上药物上可接受的剂型制备成药物。

Description

一种含葛仙米提取物的抑菌组合物

技术领域

本发明属于中药领域，尤其涉及一种中药抑菌剂。

背景技术

葛仙米( Nostoc sphaeroides kützing) 是蓝藻门( Cynophytn)念珠藻科( Nostocaceae) 的一种低等单细胞蓝藻，在我国有上千年的食用历史，是不可多得的天然无公害绿色食品。念珠藻对外界胁迫有较强的耐受能力,一些陆生种类可抵抗极端温度、干燥、辐射等胁迫因素。某些种类在极端干燥条件下可生存几十年或者更久,这可能与其含有丰富的胞外多糖有着密切的关系。近年来的研究还表明,念珠藻多糖具有抗氧化、抗病毒和抗肿瘤等多种生物活性。

女性下生殖道为开放性腔道，是人体内重要的微生态区，正常情况下是以优势菌为主组成的微生态系统。阴道分泌物中已分离到29种之多的微生物，其中最重要的是乳酸杆菌，它能产生一些抗微生物的物质，包括乳酸、细菌素、乳酸素B和过氧化氢。

霉菌性阴道炎或念珠菌性阴道炎即外阴阴道假丝念珠菌病（VVC），是由念珠菌引起的一种常见多发的外阴阴道炎症性疾病。白色念珠菌为条件致病菌，10%～20%的非孕妇女及30%的孕妇阴道中有此菌寄生，但菌量少，不引起症状。只有当全身及阴道局部免疫能力下降，尤其是局部细胞免疫力下降，白色念珠菌大量繁殖，才会引发阴道炎症状。霉菌性阴道炎很容易治疗，但是非常容易复发。

许多中药被证实具有抑菌效果，如连翘又称黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹，是中国临床常用传统中药之一，主要生长于山西、河南、山东等地，具有清热解毒、消肿散结之功效。连翘苷类是连翘所含的主要有效的化学成分，经研究表明，连翘具有抗病原微生物、抗炎、解热、护肝等作用，其中对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、白喉杆菌及霍乱弧菌、葡萄球菌、链球菌都有抑制作用。

但是不管是中药还是西抑菌，都存在“滥杀无辜”，过量杀灭乳酸杆菌，引发阴道菌群失衡的问题。

本发明旨在提供一种含葛仙米提取物的抑菌组合物，可以有效杀死念珠菌，对乳酸杆菌毒性不大，并且促进阴道上皮细胞再生，调节阴道微生态环境，使得念珠菌性阴道炎不再复发。

发明内容                                   

本发明的目的是提供一种含葛仙米提取物的抑菌组合物及其制备方法，利用生物制备，其原料天然，可以有效杀死念珠菌，对乳酸杆菌毒性不大，并且促进阴道上皮细胞再生，调节阴道微生态环境，使得念珠菌性阴道炎不再复发。

葛仙米含有大量念珠藻水溶性多糖，是其重要的活性成分，一般主要采取水提醇沉法进行粗提,包括脱色除杂、热水浸提、乙醇沉淀和真空干燥等步骤。在此过程中,原料预处理、料液比、提取温度、时间、次数和醇沉浓度等均会影响多糖的提取效率。微波辅助法提取是利用微波能来提高提取效率的一种新技术。微波能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，当细胞内部压力超过细胞壁承受能力时，细胞破裂，细胞内有效成分自由流出，提取速率提高数10 倍。而微波的处理参数也会影响多糖的提取效率。总而言之，葛仙米的提取方法中，参数的选择非常重要，不仅影响多糖的得率，还可能引起多糖的断裂分解，引发不同的活性。某些多糖可以通过抑制病毒吸附和穿入宿主细胞、直接杀伤病毒、增强机体免疫系统等途径达到抗病毒作用,影响其抗病毒作用的因素主要包括分子量、结构和修饰基团等。从葛仙米提取的水溶性多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和霉菌均有抑制作用。

本发明发现在特殊的提取条件下，葛仙米提取液可以和其他抑菌中药组合物起到意想不到的协同作用，即有效杀死念珠菌，对乳酸杆菌毒性不大，并且促进阴道上皮细胞再生，调节阴道微生态环境，使得念珠菌性阴道炎不再复发。

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种含葛仙米提取物的抑菌组合物的制备方法，其步骤如下：

（1）         制备葛仙米提取液：

取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率辐射，水提，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液；

（2）         制备复方中药提取液：

取干药材连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，水提，制得复方中药提取液；

（3）         制备成品：

将葛仙米提取液和复方中药提取液按照体积比1：1的比例混合，加上药物上可接受的剂型制备成药物。

作为优选，步骤（1）为：取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率400-420W辐射3分钟，加8倍重量的水煮沸20-25min，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复提取三次，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液；

作为优选，步骤（2）为：取连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，加入总重量8-10倍的水，100℃煎煮1.5-2小时，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复三次，最后将三次药液合并在一起，精滤，得复方中药提取液；

作为优选，步骤（3）为制备成凝胶。

本发明的有益之处在于：

1.本发明制得的中药组合物可以有效杀死念珠菌，对乳酸杆菌毒性不大，并且可以条件阴道微生态环境，根治霉菌性阴道炎，不易复发。

2. 本发明的制备方法简单，全程采用天然材料作为生产原料，绿色环保，保护环境，易于产业化操作。

3、葛仙米提取物含有大量有益物质，尤其是葛仙米多糖，对阴道上皮细胞有很好的促进再生作用，并且和本发明的其他中药配方具有良好的协同效果，即杀死念珠菌，对乳酸杆菌毒性不大。

具体实施方式

实施例1：

一种含葛仙米提取物的抑菌组合物，其步骤如下：

取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率400W辐射3分钟，加8倍重量的水煮沸25min，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复提取三次，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液。

取连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，加入总重量8倍的水，100℃煎煮2小时，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复三次，最后将三次药液合并在一起，精滤，得复方中药提取液。

制备成凝胶：

每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：7ml，葛仙米提取液30ml，复方中药提取液30ml，柠檬酸：0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。

实施例2：

一种含葛仙米提取物的抑菌组合物，其步骤如下：

取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率420W辐射3分钟，加8倍重量的水煮沸20min，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复提取三次，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液。

取连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，加入总重量10倍的水，100℃煎煮1.5小时，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复三次，最后将三次药液合并在一起，精滤，得复方中药提取液。

制备成凝胶：

每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：7ml，葛仙米提取液30ml，复方中药提取液30ml，柠檬酸：0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。

实施例3：

一种含葛仙米提取物的抑菌组合物，其步骤如下：

取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率405W辐射3分钟，加8倍重量的水煮沸23min，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复提取三次，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液。

取连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，加入总重量9倍的水，100℃煎煮1.8小时，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复三次，最后将三次药液合并在一起，精滤，得复方中药提取液。

制备成凝胶：

每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：7ml，葛仙米提取液30ml，复方中药提取液30ml，柠檬酸：0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。

实施例4：

一种含葛仙米提取物的抑菌组合物，其步骤如下：

取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率413W辐射3分钟，加8倍重量的水煮沸21min，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复提取三次，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液。

取连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，加入总重量8倍的水，100℃煎煮1.6小时，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复三次，最后将三次药液合并在一起，精滤，得复方中药提取液。

制备成凝胶：

每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：7ml，葛仙米提取液30ml，复方中药提取液30ml，柠檬酸：0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。

实施例5：

一种含葛仙米提取物的抑菌组合物，其步骤如下：

取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率417W辐射3分钟，加8倍重量的水煮沸24min，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复提取三次，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液。

取连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，加入总重量9倍的水，100℃煎煮1.7小时，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复三次，最后将三次药液合并在一起，精滤，得复方中药提取液。

制备成凝胶：

每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：7ml，葛仙米提取液30ml，复方中药提取液30ml，柠檬酸：0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。

实施例6：

(1) 乳酸杆菌抑菌效果测评

采用牛津杯法进行乳酸杆菌抑菌试验。放置直径为8mm的牛津杯，加入实施例1-5合成的抑菌组合物凝胶。放入３７℃培养箱中培养２４ｈ，用游标卡尺测量抑菌圈直径。用本发明的中药复方提取液（均配置为和凝胶同组分相同的浓度）作为对照。测试结果见表1所示。

表1

从上表可以明显的看出，复配之后，对乳酸杆菌的毒作用意想不到的减少了，这有利于减少副作用。

（2）念珠菌抑菌实验

将白色念珠菌接种于灭菌好的培养基中，37℃过夜培养后，用无菌生理盐水校正浓度至10⁷-10⁸CFU/ml。用接种环于培养好的白色念珠菌的培养基上划取一个菌落分装在3ml的MH肉汤(双料)中，放置于摇床(37℃，50r)中，培养6小时，即为供试菌的菌液。

将实施例1-5的凝胶取1ml， MH单料1ml分别置于1-5号试管中，并依次加入100ul白色念球菌，将试管均放置于摇床(37℃，50r)中，培养16-18小时。用本发明的中药复方提取液（均配置为和凝胶同组分相同的浓度）作为对照，(因为中药液本身的浑浊和人为视觉的差异，细菌生长后，使得肉眼无法观察，或观察的实验结果易出现偏差。因此，需要将试管中的液体接种于固体培养皿中观察细菌生长情况。)转种到营养琼脂平板培养基上，用接种环涂布，置37℃电热恒温培养箱培养16～18小时，最后观察菌落的生长状况。平行做3次，以2次或3次相同结果为准，结果加入实施例1-5的凝胶均无白色念珠菌菌落生长，对照组发现1-2个白色念珠菌菌落生长。抑菌试验结果表明：实施例1-5的凝胶对白色念珠菌具有极强的抑制作用，加入葛仙米提取液加强其对白色念珠菌的抑制效果。

（3）         霉菌性阴道炎治疗实例

选取20名确诊为霉菌性阴道炎，且反复发作3次以上，25-25周岁的女性。于月经期结束后第三天开始用药，阴道给药每次10ml，连续使用15天。停药一个月后复诊，均痊愈。随访一年，无一例复发。

由此可见，本发明的含葛仙米提取物的抑菌组合物对霉菌性阴道炎有非常好的效果。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种含葛仙米提取物的抑菌组合物的制备方法，其步骤如下：

（1）制备葛仙米提取液：

取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率辐射，水提，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液；

（2）制备复方中药提取液：

取干药材连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，水提，制得复方中药提取液；

（3）制备成品：

将葛仙米提取液和复方中药提取液按照体积比1：1的比例混合，加上药物上可接受的剂型制备成药物。

2.权利要求1所述的含葛仙米提取物的抑菌组合物的制备方法，其特征在于：

步骤（1）为：取新鲜葛仙米，破碎，用微波功率400-420W辐射3分钟，加8倍重量的水煮沸20-25min，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复提取三次，合并滤液，精滤，得葛仙米提取液。

3.权利要求2所述的含葛仙米提取物的抑菌组合物的制备方法，其特征在于：

步骤（2）为：取连翘、黄芩、肉桂、薰衣草干花按照重量比2：1：1：1混合，将其粉碎，加入总重量8-10倍的水，100℃煎煮1.5-2小时，趁热抽滤，给药渣中再加入水继续煎煮，重复三次，最后将三次药液合并在一起，精滤，得复方中药提取液。

4.权利要求3所述的含葛仙米提取物的抑菌组合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）为：制备成凝胶。

5.权利要求1-4所述的方法制备得到的含葛仙米提取物的抑菌组合物。