CN112772681B

CN112772681B - 一种生物复合型消毒剂及其制备方法

Info

Publication number: CN112772681B
Application number: CN202110152999.1A
Authority: CN
Inventors: 方改霞; 李冰冰; 王艳红; 陈艳艳; 侯凯玉; 郝佳聪
Original assignee: Henan University of Urban Construction
Current assignee: Shanxi Yixintai Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-02-04
Filing date: 2021-02-04
Publication date: 2021-10-15
Anticipated expiration: 2041-02-04
Also published as: CN112772681A

Abstract

本发明涉及一种生物复合型消毒剂及其制备方法。一种生物复合型消毒剂，由桉叶、石榴皮、艾叶三种中草药成分以及酿酒酵母培养物组成，其中按重量份计包括桉叶55～65份，石榴皮70～80份，艾叶30～40份，酿酒酵母培养物12～18份。本发明由桉叶、艾叶、石榴皮等具有气味清香、清热解毒、涩肠止泻的中草药为基础，采用传统的煎熬方法添加益生菌酿酒酵母进行发酵，起到协同增效的作用，可以有效杀灭多种病原微生物，配方简单，原料易得，成本低廉；利用常见的中草药和益生菌——酿酒酵母菌发酵而成，使用安全、绿色环保，对人体及其他生物无刺激和毒副作用，且具有良好的生物降解性。特别适用于对畜禽舍带畜消毒，具有巨大的社会、经济与环境效益。

Description

一种生物复合型消毒剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物消毒剂，尤其是涉及一种畜禽养殖纯生物消毒剂及其制备方法。

背景技术

目前越来越多的人开始关注生态环境保护及动物食品安全问题，人们对新型绿色生物消毒剂的关注度也在不断提升，传统的中草药再次进入人们的视野，含有抗菌、抗病毒、杀虫等成分的中草药不仅绿色安全，而且具有对环境友好，易降解，长期使用不易产生耐药性等优点，较之目前我国规模养殖场对畜禽、圈舍及周边环境进行消毒常用的酚类、醛类、醇类、卤素类、季铵盐类、氧化剂类、酸类、碱类和染料类等化学消毒药，以及用来预防、治疗疾病和改善畜禽的生长性能和繁殖性能等广泛使用的兽用抗生素及重金属元素等，其意义更为明显。中草药天然产物组成复杂，有效成分多样，主要包括生物碱、皂苷类、挥发油、黄酮类、多糖类、有机酸以及矿物元素和维生素等，这些活性成分有助于抗菌、增强机体免疫功能、有效提高动物机体的抗氧化水平、抗应激功能等作用，其药效或功能往往是多种组分协同作用的结果。

对天然活性物质两大来源的药用植物和微生物综合协同研究，利用微生物发酵改性中药材，就是将天然药物（中药）以优选的益生菌菌群中一种或几种作为菌种，结合微生态学研究成果而形成的中药制药新技术。通过微生物生长代谢及生命活动炮制中药不但改变了煎、煮、熬、炼、蒸、浸的传统工艺，还能促进有效成分充分分离、提取，增强或产生新的功效，扩大临床用药范围，降低毒副作用，并促进其吸收利用。微生物发酵中草药集合了中草药、酶制剂、益生素等 3 种物质的优点，具有天然无毒、无副作用、无残留、安全和清洁的优势。

酵母菌是一种最常见、应用最为广泛的益生菌。酵母是一种兼性厌氧的单细胞真菌，在有氧呼吸或无氧发酵条件下都能生长，厌氧发酵可以获得代谢产物（如酒精、各种酒类、甘油、酶等），耗氧发酵可以获得酵母细胞或细胞组成成分；其种类多、增殖速度快、代谢旺盛且产物繁多。喜在糖分高、偏酸性的环境中生长；酵母菌具有优良的发酵特性和营养特性，对动物和人的健康无害，可实现生产性，菌株本身或代谢产物具有促进动物消化道中有益微生物活性的作用，菌种能适应胃及肠道内较为广泛的酸碱度等，相对于细菌类微生态制剂，更能耐受饲料中的抗生素。因而在畜禽、水产和反刍等动物养殖中广泛应用。工业上常用的酵母种类有酿酒酵母、异常汉逊氏酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母、巴斯德毕赤酵母等。酵母作为真菌类的微生态制剂，有着其独特的应用优势，在最新的饲料添加剂目录中，作为微生态制剂的酵母菌种中酿酒酵母是应用最为广泛的。

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）富含蛋白质、核酸、维生素、多糖等营养物质，其活菌、非活性成分及细胞组成成分已广泛应用于饲料工业和畜牧养殖业，其活菌可以作为益生菌或发酵菌剂使用，其酿酒酵母非活性形式和细胞组分，可以作为酵母有机微量元素、功能性蛋白原料、免疫增强剂、霉菌毒素吸附剂、抑菌促生长剂使用。酿酒酵母属于兼性厌氧菌，在进入动物胃肠道后，可以消耗胃肠道的氧气，造成厌氧环境，从而促进有益菌群的繁殖，改善动物消化道微生态平衡。大部分酿酒酵母最适生长和代谢温度为 30 ℃。酿酒酵母可以作为发酵菌剂使用，或与其他益生菌配伍，用于饲用原料的发酵处理，提升原料价值。将酵母细胞自溶或酶解（自溶法破壁虽然时间消耗较久，但破壁效果更好，且没有复杂的后续处理工序），其水解物作为一种功能性蛋白原料在饲料中使用，在诱食、促生长效果方面作用明显。酵母细胞壁的主要功效成分为甘露聚糖和β-葡聚糖，甘露聚糖能黏附Ⅰ型菌毛的革兰氏阴性细菌，干扰其与上皮细胞表面的结合，阻止细菌在消化道表面定植，维护消化道微生物区系的稳定；甘露寡糖通过引发直接的抗体反应来增强免疫力。酵母葡聚糖及其衍生物，对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌等均有抑制作用。而以酵母葡聚糖为代表的β-1，3/1，6-葡聚糖具有促进动物生长、增强机体免疫、抗氧化、抗辐射、抗肿瘤、抑菌等多种生物学功效，将成为一种良好的抗生素替代产品。

活性干酵母是经压榨干燥脱水后仍保持发酵能力、含酵母活菌数大于1.5×10⁹CFU/g的酵母产品（AAFCO，Association of American Feed Control of Officials，美国饲料控制委员会，2002年）。作为一种天然添加剂，畜禽不会对其产生耐受性。饲喂活性干酵母能调节肠道微生态平衡，使肠道中大肠杆菌数明显减少，乳酸杆菌数显著增加，促进营养物质的消化吸收，降低粪便中的病原微生物数量，并可以减少肠道内容物、粪便的氨含量，降低粪便臭味，减少粪便中病原微生物对畜禽养殖环境的污染。

生物复合消毒剂具有天然无毒、无副作用、无残留、安全和清洁的优势，不仅消毒效果明显，还不会对畜禽、人类和环境造成污染，还能促进动物生长、增强机体免疫、提高肉质品质等多种生物学功效。已逐渐为相关领域专业技术人员所关注。

中国发明专利CN93110833.0净肤液及制备方法，采用水煎法对五倍子、蒲公英、野菊、地肤子、土茯苓、白芨、桉叶、木芙蓉、丁香、紫草、皂角、大枫子、石榴皮、川槿皮、椿皮、赤芍、石菖蒲、艾叶、射干、黄柏等20味中药提取煎液；用渗漉法对密陀僧、蜈蚣、紫背浮、轻粉、黄丹、铜绿、蓖麻仁、地榆、防风、百部、蝉蜕、乌贼骨等12味中药提取渗漉液。然后将煎液和渗漉液按1∶1的比例配兑。该发明是一种治疗性病、皮肤病和妇科杂症的净肤液及制备方法，涉及的中药众多，组方复杂，不是针对畜禽养殖场地带畜消毒的消毒剂使用的。

中国发明专利CN201710853284.2公开了一种环保高效消毒剂，其配方包括以下重量份数的各组分：桉叶油素200份、蛇床子汁液65～80份、柠檬酸200～300份、绿茶汁0.02～2份、苹果酸提取物10～200份、引发剂0.05～0.6份、二丙烯乙二醇-油酸盐0～5份、复合交联剂0.2～4份。通过桉叶油素、蛇床子汁液和苹果酸提取物的协同增效作用，具有良好的杀菌作用。该发明虽涉及一种环保消毒剂，其配方中除桉叶油素、蛇床子汁液和苹果酸提取物均是从植物中提取的天然产物，使用安全、无任何毒副作用且具有生物降解性外，但还含有柠檬酸、引发剂、交联剂等其他的非生物质成分，不是纯生物型消毒剂，还会对环境造成一定的影响。

中国发明专利CN201710738661.8一种抗菌剂及其制备方法，包括二氧化钛、艾叶、石榴皮、马齿苋、植物精油、大蒜素、双乙酸钠﹑乳化剂﹑稳定剂、乙醇和纯化水。该发明的消毒抗菌剂具有起效快﹑抗菌时间长的优秀性能，对将大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌﹑痢疾杆菌、黄曲霉具有显著的抑制作用。在该专利中对艾叶、石榴皮等植物有效成分的提取主要用的是乙醇浸提的方法，需要在搅拌罐中持续搅拌，方法较复杂，且制作过程中添加其他辅料较多，配方中添加的组分越多，成本高，添加的辅料也会影响产品的环境友好性。

中国发明专利CN201310347240.4本发明公开了一种蒸熏消毒、净化空气的中药组合物，其由以下重量份的原料制成：艾叶20～30、青蒿15～25、荆芥10～15、藿香14～18、鹅不食草12～16、贯众5～10、冬青皮9～13、防风10～15、五倍子8～12、藏红花6～9、赤芍10～15、桉叶5～10、槟榔壳7～11、丁癸莫根12～16、荆芥10～15、鼠尾草14～18、地肤子5～10、泡桐叶18～22、苍术10～15、榄仁叶8～12。该发明中药熏剂组合物具有较强的杀菌性能，对鸡舍空气细菌具有较高的灭菌率，能净化鸡舍空气，减少鸡的呼吸道疾病，降低死亡率，从面提高鸡的生长性能，且刺激性小，无应激反应，同时具有使用方便的特点。该专利利用80%乙醇加热回流提取有效成分并浓缩之，而且中药达20种之多，较传统中草药煎熬法+微生物发酵法成本较高。

可见，现有技术虽然公开了桉叶、石榴皮、艾叶在消毒方面的相关应用，但多数和其它多种中草药组合使用或和其它添加辅料共同作用，组方复杂，制备方法和工艺复杂，使用对环境不友好，主要的是不能充分发挥桉叶、石榴皮、艾叶这三种中草药成分的协同作用，不能充分利用其纯中药消毒剂的药效，对环境不友好，成本高。

发明内容

本发明针对现有技术不足，提出一种环保无污染、制备简单，便于操作的生物复合型消毒剂；采用酿酒酵母发酵中草药药剂制成，对畜禽无刺激和毒副作用，杀菌效果显著，安全可靠，兼具杀灭球虫卵、芽孢的作用。

本发明利用微生物发酵中草药技术，利用桉叶、石榴皮、艾叶等具有抑/杀菌效果的中草药进行配伍，再借助传统的中药熬制方法+微生物发酵技术，制作一种用于畜禽养殖场帯畜消毒的纯生物消毒剂。本发明的消毒剂集合了中草药、酶制剂、益生素等 3 种物质的优点，用于畜禽养殖业，既减少了环境污染，又利于生产绿色环保的畜禽产品。

本发明采用的技术方案：

本发明利用益生菌发酵中草药技术制备纯生物复合型消毒剂。一种生物复合型消毒剂，由桉叶、石榴皮、艾叶三种中草药成分以及酿酒酵母培养物组成，按质量/重量份计，其组合物成分包括：桉叶55～65份，石榴皮70～80份，艾叶30～40份，酿酒酵母培养物12～18份。其中，所述的酿酒酵母培养物组成为：红糖和等量的1～3×10⁸CFU/mL酿酒酵母菌液；所述酿酒酵母菌液可以用10 倍于活性干酵母质量、35 ℃ 左右的水活化安琪活性干酵母30 min左右制得的菌液替代。

一种如前所述的生物复合型消毒剂制备方法，过程如下：

（1）按质量/重量份称取桉叶55～65份，石榴皮70～80份，艾叶30～40份，将其用3倍体积的蒸馏水或者自来水浸泡1～2h；

（2）将其转移到电动中药锅中，用武火自动煎煮15～20min，煎煮一到两次，然后用文火煎煮20～30min一次。冷却至不烫手（35 ℃左右）；

（3）将步骤（2）的煎煮物转移至发酵罐中，添加组方中红糖和酵母菌菌液（1～3×10⁸CFU/mL），进行充分混匀后，密封后放置5～10天，去杂，抽滤，即可得到所述生物复合型消毒剂。

本发明选用桉叶、艾叶和石榴皮等3种中草药，它们的水提物均具有较好的抗菌、抗病毒作用，再利用益生菌——酿酒酵母对其进行发酵，可以有效率提高其药效，同时酿酒酵母菌本身及其代谢物均对动物和人的健康无害。

本发明技术方案中，各中草药原料的药理具体如下：

桉叶Eucalyptus globulusLabill，味苦，性温。主要含l，8-叶素、蓝桉醛、黄酮类化合物、芸香甙、槲皮甙、丁香烯以及没食子酸，咖啡酸，阿魏酸等多种活性成分。桉叶具有抗菌、消炎、杀虫和防腐等作用。如对枯草芽孢杆菌、链球菌、破伤风杆菌、白喉杆菌等有较强的抑制作用；桉叶油霜作为单剂中药就有杀蠕形螨的效用；桉叶油还可激活红细胞中的过氧化氢酶起到抗氧化作用。

艾叶为菊科植物艾Artemisia argyi Lévl. et Vant. 的干燥叶，味辛、苦，性温，气清香，具有温经止血，散寒止痛，降湿杀虫的功效，是一种常用中药。药理研究表明艾叶水煎液具有杀虫止痒、抑菌、抗炎等作用。如对金黄色葡萄球菌、白喉杆菌、绿脓杆菌、结核杆菌、大肠杆菌等10多种常见细菌具有杀菌或抑菌作用；艾叶挥发油具有良好的抗真菌效果,尤其对白色念珠菌的效果最明显，可导致白念珠菌的细胞凋亡, 表现出典型的凋亡特征,另外使其胞内ROS大量累积、MMP下降, 激活了metacaspase活性, 随之启动细胞凋亡。艾叶油具有支气管扩张、镇咳和祛痰作用及抗过敏作用等。

石榴皮是石榴科植物石榴Punica granatum L.的成熟果皮，味酸、涩，性温。其主要药效为涩肠止泻、止血、驱虫等。石榴皮中的活性物质为多酚，石榴皮提取物中有9 种多酚类成分，其中安石榴苷为主要成分，含量约为 525 mg/g，占总酚含量的 65.75％。具有抗氧化、清除自由基的作用。石榴皮提取物对金黄色葡球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、黄曲霉菌、解脂假丝酵母等 12 种人和动物的常见致病菌的抑菌效果，表明石榴皮提取物对革兰氏阳性菌的抑制效果强于革兰氏阴性菌。

本发明在研究时首先用传统水煎法对挑选出的具有杀菌效果的桉叶、艾叶、石榴皮等十几种中草药分别提取其有效成分，再分别对5种典型指示菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌）和球虫卵进行重复抑菌和杀虫试验，发现桉叶、艾叶、石榴皮等的水煎物均有一定的抑菌、杀虫效果，但作用效果各有强弱，其中沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌对桉叶、石榴皮等敏感，而铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌却不太敏感，而艾叶的作用效果较好，只有铜绿假单胞菌对其较不敏感；桉叶抑制球虫卵孢子化明显；每种中草药作用时均有一定的的最适浓度，其最适浓度不一定是最高浓度。但当进行组合配伍后发现，其中的桉叶/艾叶/石榴皮组合，其对铜绿假单胞菌等微生物的杀菌和杀虫效果更为突出，且价格低廉。当对其再用酿酒酵母进一步发酵后，其药效更佳。

研究过程中，申请人曾尝试在中草药组合物中加入土荆皮、鱼腥草、千里光等，但实验发现，这些组分的加入并不会对本发明杀灭微生物的效能带来明显提升。综合考虑制备工艺和经济成本，本发明无需加其它组分。

发明有益效果

1、本发明生物复合型消毒剂，采用酿酒酵母发酵中草药煎熬物制成的纯生物复合型消毒剂，利用对沙门氏菌、大肠杆菌等抑杀效果明显而对铜绿假单胞菌等作用效果差的桉叶、石榴皮和艾叶三者进行配伍，借助各味中草药间的最佳抑菌、抗虫协同效应，以及酿酒酵母促中草药有效成分释放及酿酒酵母厌氧发酵产物和菌体自身组分的抑/杀菌特点，发挥其消毒效果，其杀菌消毒效果显著。能很好的防治畜禽被大肠杆菌及其他病原菌所侵害，消毒效果好。将该消毒剂应用于畜禽养殖场地等表面消毒，能有效灭杀病原微生物，特别是沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等畜禽养殖场的致病微生物，且对球虫卵、芽孢也具有一定的杀灭效果。

2、本发明生物复合型消毒剂，制作工艺简单，制备方法简单易行。以传统的中草药煎熬法为基础，加入微生物发酵技术进行发酵即可。不需特殊的设备，操作简单，易于完成。采用纯中草药+酿酒酵母制成，充分发挥生物的优势，生物质作用温和，不残留有害物质，对皮肤粘膜无刺激、对畜禽无毒副作用，安全可靠。

3、本发明生物复合型消毒剂，选用的配方药材种类少且常见，容易获取，成本低廉。桉叶、艾叶和石榴皮均特别易获取，成本较低；酿酒酵母是一种常用的益生菌，可以自己培养，也可以直接添加市面上出售的活性干酵母，成本低廉。

4、本发明生物复合型消毒剂及其制备方法，通过酿酒酵母利用中草药和红糖的成分进行厌氧发酵产生生物酶、乙醇、有机酸和部分酿酒酵母细胞组分即可实现，不需刻意添加生物酶、乙醇、酸类物质等成分。关键是“0”添加，无污染，所涉及的微生物是酿酒酵母，酿酒酵母是目前研究最透彻、对人类社会贡献最大，也是酿酒工业的主要菌种，畜禽不会对其产生耐受性。

5、本发明生物复合型消毒剂，涉及材料少、制作简单、消毒效果好、无污染。用于帯畜消毒的畜禽养殖场所的纯生物消毒，对畜禽养殖场地的常见微生物杀菌效果好。本发明利用益生菌酿酒酵母可以促进中草药有效成分的充分分离、提取，增强或产生新的功效，扩大临床用药范围，降低毒副作用；同时酿酒酵母的发酵产物及细胞组分又是良好的抑菌剂，酿酒酵母细胞本身也是一种益生菌，对畜禽舍带畜消毒的动物没有副作用。

具体实施方式

下面通过具体实施方式，对本发明技术方案做进一步的详细描述。

实施例1

本发明生物复合型消毒剂，由桉叶、石榴皮、艾叶三种中草药成分以及酿酒酵母培养物组成，按质量/重量份计，包括：桉叶55～65份，石榴皮70～80份，艾叶30～40份，酿酒酵母培养物12～18份。

添加的酿酒酵母培养物由等量的红糖和1～3×10⁸CFU/mL酿酒酵母菌液组成；其中，酿酒酵母菌液可用10 倍于活性干酵母质量、35 ℃ 的水活化安琪活性干酵母 30 min制得的菌液替代。制备过程中，酿酒酵母培养物红糖和菌液一般是按1:1添加的，而在发酵过程中菌液添加量一般是总体积的6～9%，在微生物发酵时接种量一般是5～10%。

本研究用的酿酒酵母种子是摇瓶种，当把摇瓶种接入发酵罐后，考虑到营养、溶氧等生长环境因素的由富到贫的变化，会对酿酒酵母的生长及代谢造成一定的影响，所以酿酒酵母的接种量控制在6～9%之间这样一个较高的浓度。

实施例2

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶55，石榴皮70份，艾叶30份，酿酒酵母培养物：红糖7份，1～3×10⁸CFU/mL酿酒酵母菌液7份。其中酿酒酵母菌液可用10 倍于活性干酵母质量、35 ℃ 左右的水活化安琪活性干酵母 30 min制得的菌液替代。

实施例3

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶55，石榴皮70份，艾叶40份，酿酒酵母培养物18份。

实施例4

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶55，石榴皮80份，艾叶30份，酿酒酵母培养物12份。

实施例5

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶55，石榴皮80份，艾叶40份，酿酒酵母培养物16份。

实施例6

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶60，石榴皮70份，艾叶30份，酿酒酵母培养物16份。

实施例7

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶60，石榴皮70份，艾叶40份，酿酒酵母培养物18份。

实施例8

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶60，石榴皮80份，艾叶30份，酿酒酵母培养物12份。

实施例9

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶60，石榴皮80份，艾叶40份，酿酒酵母培养物18份。

实施例10

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶65，石榴皮70份，艾叶30份，酿酒酵母培养物14份。

实施例11

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶65，石榴皮70份，艾叶40份，酿酒酵母培养物18份。

实施例12

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶65，石榴皮80份，艾叶30份，酿酒酵母培养物12份。

实施例13

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶65，石榴皮80份，艾叶40份，酿酒酵母培养物14份。

实施例14

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶65，石榴皮75份，艾叶30份，酿酒酵母培养物16份。

实施例15

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶60，石榴皮75份，艾叶35份，酿酒酵母培养物16份。

实施例16

本实施例的生物复合型消毒剂，配伍如下：桉叶62，石榴皮76份，艾叶40份，酿酒酵母培养物14份。

实施例17

本实施例为用于畜禽养殖的生物复合型消毒剂制备方法，具体包括如下步骤：

（1）按质量/重量份称取桉叶55份，石榴皮70份，艾叶30份，将其用3倍体积的蒸馏水或者自来水浸泡1h～2h；

（2）将其转移到电动中药锅中，用武火自动煎煮15～20min两次，然后用文火煎煮20～30min一次；

（3）待其冷却至35 ℃左右时，将步骤（2）的煎煮物转移至发酵罐中，添加12重量份的红糖和酿酒酵母菌菌液（1～3×10⁸CFU/mL），每个发酵罐的满装程度为 70% ，进行充分混匀后，于室温密封放置5～10天，去杂，抽滤，即制得纯生物消毒剂。

实施例18

本实施例的用于畜禽养殖的生物复合型消毒剂，其制备方法：

（1）按质量/重量份称取桉叶65份，石榴皮80份，艾叶40份，将其用3倍体积的蒸馏水或者自来水浸泡1h～2h；

（3）待其冷却至35 ℃左右时，将步骤（2）的煎煮物转移至发酵罐中，添加16重量份的红糖和酿酒酵母菌菌液（1～3×10⁸CFU/mL），每个发酵罐的满装程度为 70% ，进行充分混匀后，于室温密封放置5～10天，去杂，抽滤，即制得纯生物消毒剂。

实施例19

本实施例的用于畜禽养殖的生物复合型消毒剂，其制备方法具体包括如下步骤：

（1）按质量/重量份称取桉叶60份，石榴皮75份，艾叶34份，将其用3倍体积的蒸馏水或者自来水浸泡1h～2h；

（3）待其冷却至35 ℃左右时，将步骤（2）的煎煮物转移至发酵罐中，添加18重量份的红糖和酿酒酵母菌菌液（1～3×10⁸CFU/mL），每个发酵罐的满装程度为 70% ，进行充分混匀后，于室温密封放置5～10天，去杂，抽滤，即制得纯生物消毒剂。

下面是对实施例17～19制备的生物复合型消毒剂（分别记为样品1～3）进行的毒性评价以及杀菌、抗虫实验：

1. 急性毒性实验

实验动物：SPF 级昆明小鼠 80 只，雌雄各半，体质量20±2 g 。

实验方法：随机分成3个试验组（分别作为实例17～19制备的生物复合型消毒剂组）和1个空白对照组，禁食 12～16h 后，采用一次最大限度试验法。试验组灌胃剂量为7500mg/kg·BW，对照组给予等量无菌水。染毒后观察动物的中毒表现和死亡数及死亡时间，并对死亡动物和观察期满动物进行尸体解剖，肉眼观察组织或脏器异常情况，并进行组织病理学检查，观察时间 14d。

结果：14d 内未出现死亡现象，且无其他异常情况。参照中华人民共和国卫生部2002年版《消毒技术规范》对消毒剂的急性毒性分级标准，被测样品1～3均属于实际无毒。

2. 皮肤及粘膜刺激实验

实验动物：健康成年新西兰兔，体质量2～3 kg，雌雄不限。

实验方法：参照中华人民共和国卫生部2002年版《消毒技术规范》，用新西兰兔分别进行一次完整皮肤刺激试验和皮肤破损试验，以及急性眼刺激试验。每3只新西兰兔为一组。设置实验组和空白（或生理盐水）对照组，其中皮肤刺激试验的实验组均涂抹0.5mL原液，急性眼刺激试验实验组滴加0.1mL原液（对照用生理盐水替代）。

结果：在一次涂药完整皮肤实验中，对新西兰兔进行1h、24h和48h皮肤局部反应观察，均未发现红斑、水肿现象；对新西兰兔皮肤破损实验中，发现新西兰兔背部伤口发生正常结痂，对伤口恢复未有影响；对新西兰兔进行眼部粘膜刺激，分别滴加药液后于滴眼后1h、24h、48h、72h、4d进行观察，发现1h时实验组除个别兔子眼部出现血丝外，其余时间段均正常。因此可以判定：本发明实施例17～19制得的生物复合型消毒剂对皮肤和粘膜均无刺激性。

3. 生物复合型消毒剂的杀菌效果实验

依据2002年版《消毒技术规范》规定的悬液定量杀菌试验，检测实施例17～19制备的生物复合型消毒剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌等微生物的杀灭效果，具体检测方法及结果如下：

实验菌种：大肠杆菌8099、铜绿假单胞菌 ATCC 15442、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌ATCC 6538、枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372。

操作方法：取上述四种菌经活化3代后培养18～24h液体培养物和枯草芽孢杆菌的芽孢培养物，分别调至实验所需浓度1～5×10⁸CFU/mL。参照2002版消毒技术规范，将稀释好的4种菌悬液和1种芽孢悬液用移液枪分别吸取0.5mL加入无菌离心管中，再加入0.5ml有机干扰物，充分混匀，作用5min后用移液枪分别吸取生物复合型消毒液2mL，迅速混匀并计时，作用30min；再分别吸取0.5mL的消毒药液与菌悬液的混合液加入到2.5mL的中和剂中，作用10min后，分别吸取1mL样液，均匀涂布于营养琼脂培养基上，每管样液涂布3个平板做平行对照；同时用稀释液代替消毒药液做阳性对照；细菌繁殖体37℃培养24h，细菌芽孢37℃培养48h；观察并记录结果，计算各组活菌浓度（CFU/mL）及杀灭对数值（KL）：

杀灭对数值（KL）=对照组平均活菌浓度对数值（N0）-实验组活菌浓度对数值（Nx）。

结果：由实施例17～19制得的生物复合型消毒剂对上述4种菌及1种芽孢的杀灭对数值（KL）均大于等于5（KL≥5）。由此可知，由本发明实例17～19制得的消毒剂不但能杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等，且对畜禽养殖中常见的沙门氏菌也有很好的杀灭效果。另外在研究过程中，按照上述方法也分别对实例17～19制备的生物复合型消毒剂与水以体积比为1:3混合后，进行杀菌效果实验，发现它们的杀灭对数值KL≥5。

4. 生物复合型消毒剂对球虫卵的体外抑/杀效果

实施例17～19制备的生物复合型消毒剂对兔球虫卵的抑/杀效果。

操作方法：分别向2mL无菌离心管中加1mL浓度为3×10⁴个/m L的卵囊液，4000r/min离心6min，弃上清，再向沉淀中加1mL药液。同时取1mL生理盐水作空白对照，混匀，于20℃培养16h后，4000r/min离心6min ，弃上清，向沉淀中加入1mL生理盐水，4000r/min离心6min，弃上清。重复上一步2次。最后一次向沉淀中加入1mL重铬酸钾溶液，摇匀，29℃培养48h后，取出后镜检，计数总卵囊数和孢子化卵囊数，计算球虫卵囊孢子化率：

卵囊孢子化率（％）＝孢子化卵囊数量/（孢子化卵囊数量＋未孢子化卵囊数量）×100％。

结果：由实施例17～19制得的消毒剂对兔球虫卵的孢子化率在22%～28%。由此可知，由本发明实例17～19制得的消毒剂对养兔场中常见的兔球虫卵有一定的抑/杀效果。另外在研究过程中，按照上述方法也分别对实例17～19制备的消毒剂与水以体积比为1：3混合后，进行体外抑/杀兔球虫卵实验，发现它们对球虫卵孢子化抑制率也均在70%左右。

通过在中草药组合物中加入土荆皮、鱼腥草、千里光等中草药成分进行对比实验，结果表明，这些组分的加入并不会对本发明杀灭微生物的效能带来明显提升。在考虑扩大开发本发明应用范围时，可以考虑添加。本发明综合考量工艺和经济成本，不添加其它组分。

因此，本发明制备的纯生物消毒剂具有良好杀菌、抗虫效果，且无毒无刺激性，具有广阔的应用前景。且成本简单，制备工艺简单，原料易得。

本发明生物复合型消毒剂以及所述制备方法制备的生物复合型消毒剂用于杀灭球虫卵或/和芽孢方面以及禽畜舍消毒，直接在畜禽养殖场所等表面喷洒，使用方便。

以上各实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，不应当构成对本发明专利要求保护范围的限定。本领域技术人员在结合现有技术的情况下，无需进行创造性劳动即可对本发明的实施情况进行其他修改或者采用本领域惯用技术手段进行置换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.一种生物复合型消毒剂，其特征在于：由桉叶、石榴皮、艾叶三种中草药成分以及酿酒酵母培养物组成，按重量份计，其配伍如下：桉叶55～65份，石榴皮70～80份，艾叶30～40份，酿酒酵母培养物12～18份；所述的酿酒酵母培养物为：红糖，与红糖等量的1～3×10⁸CFU/mL酿酒酵母菌液或用10 倍于活性干酵母质量、35 ℃ 左右的水活化安琪活性干酵母制得的菌液；所述的生物复合型消毒剂，制备过程如下：

1）按重量份配比称取桉叶、石榴皮、艾叶，先用水浸泡1～2h；

2）在中药锅中，用武火煎煮15～20min，煎煮一到两次，然后用文火煎煮20～30min；冷却至35 ℃左右；

3）将步骤2）的煎煮物转移至发酵容器中，添加组方中的酿酒酵母培养物，充分混匀后，于室温密封放置5～10天，去杂，抽滤，即可得到所述生物复合型消毒剂。

2.根据权利要求1所述的生物复合型消毒剂，其特征在于：其中，三种中草药成分的重量份配比为：桉叶60份，石榴皮75份，艾叶34份。

3.根据权利要求1所述的生物复合型消毒剂，其特征在于：其中，三种中草药成分的重量份配比为：桉叶65份，石榴皮70份，艾叶30份。

4.根据权利要求1所述的生物复合型消毒剂，其特征在于：其中，三种中草药成分的重量份配比为：桉叶55份，石榴皮80份，艾叶40份。

5.根据权利要求1所述的生物复合型消毒剂，其特征在于：其中，三种中草药成分的重量份配比为：桉叶58份，石榴皮76份，艾叶35份。

6.一种如权利要求1所述的生物复合型消毒剂制备方法，过程如下：

7.根据权利要求6所述的生物复合型消毒剂制备方法，其特征在于：步骤1）中，将中草药晒干称重后，采用水煎法先用3倍体积的蒸馏水或者自来水浸泡1～2h；步骤3）中，所述的酿酒酵母培养物由等份的红糖和1～3×10⁸CFU/mL酿酒酵母菌液组成，或者由等份的红糖和用 10 倍于活性干酵母质量、35 ℃左右的水活化安琪活性干酵母 30 min制得的菌液组成；添加红糖和酿酒酵母菌液发酵时，每个发酵罐的满装程度为 70%。

8.权利要求1所述的生物复合型消毒剂以及权利要求6所述的生物复合型消毒剂制备方法所制备的生物复合型消毒剂在杀灭球虫卵或/和芽孢方面的应用。