KR101168225B1 - 복합 생약 발효 추출물 및 이를 함유하는 여성용 청결제 조성물 - Google Patents
복합 생약 발효 추출물 및 이를 함유하는 여성용 청결제 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 복합 발효 추출물, 및 이를 함유하는 여성용 청결제 조성물에 관한 것이다. 이러한 본 발명의 복합 생약 발효 추출물 및 이를 함유하는 여성용 청결제 조성물은 인체에 안전하고 단독 생약 추출물보다 상승적 항균 및 항염 효과를 나타내어, 외음부 질세정, 냉, 질염, 가려움 및 악취제거용 청결제로 이용가능성이 높다.
Description
본 발명은 생약 발효 추출물 및 이를 함유하는 위생용 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 천연 생약 중에서 항균 및 항염 효과에 있어서 상승효과를 나타내어 선택된 녹차, 천궁, 당귀, 울금 및 자소의 추출물을 발효시킨 복합 생약 발효 추출물 및 이를 포함하는 여성의 질 세정에 유용한 여성청결제 조성물에 관한 것이다.
여성의 질에서는 정상적인 생리조건에서도 어느 정도의 독특한 냄새와 분비물이 있을 수 있습니다. 그런데 외부로부터 침입한 세균에 의해 감염이 되면 분비물, 가려움, 냄새 등의 증상이 나타나게 되는데, 이렇게 위생관리가 잘 되지 않아 생기는 염증을 예방하고 지나친 체취로 인한 불쾌감을 주지 않기 위해 시작된 것이 뒷물이라고 할 수 있습니다.
뒷물은 냉대하증, 염증과 가려움증은 물론 자궁 외 임신이나 불임증, 자궁근종, 자궁암 등 각종 부인병의 원인을 해소하는데 좋은 효과가 있다.
예로부터 여성들은 질 내부의 청결과 질염을 치료하려는 목적으로 뒷물을 했다. 이때 사용하는 것은 주로 약쑥과 무잎인데, 이 재료들을 넣고 끊인 물로 좌욕(坐浴)을 하는 것이 대부분이었다.
여성의 질은 질내 유익 미생물에 의한 젖산 분비에 의해 질내 산도가 pH3.2로 유지되며 이러한 낮은 산도에서는 대부분의 유해균이 증식 억제 내지는 사멸한다는 점에 기초하여 젖산을 주성분으로 하는 pH3.5의 질내 산도조절제로 그 효능이 한정되어 있다.
질염은 여성이 일생에 한 번은 경험하는 여성 질환으로 질 내부가 정상산도의 범주를 벗어나면서 세균이 증식해 발생한다. 질염을 일으키는 원인균은 가려움증을 유발하는 트리코모나스균이나 갑작스럽게 다량의 질 분비물을 유발하는 칸디다균이다.
따라서 흔히 사용하는 비누로 세정을 할 경우 질 내를 알칼리성으로 바꾸어 정상 세균이 살수 없는 환경으로 오히려 감염의 위험성을 높여 줄 수 있고 알칼리의 자극 성분으로 인하여 알러지 발생을 높일 수 있다.
이에 질내 pH 발란스를 약산성으로 맞춰주면서 저자극의 알러지나 부작용이 적으며 유해세균의 증식을 억제 및 사멸시킬 수 있으면서 자극을 완화시켜줄 수 있는 질 전용 세정제가 요구되고 있다.
본 발명은 여성용 청결제로서 염증과 유해 세균의 억제에 우수한 개선 효과를 가지는 물질을 천연물로부터 획득하고자 하는 연구의 일환으로, 본 발명자들은 기존에 생약 원료로 세균에 대한 항균력을 지니면서 항염 효과를 나타내는 천연 추출물을 선정하기 위해 다수의 천연 생약의 항염 및 항균 효과에 대해 비교 실험하여, 항염, 항균 효과가 뛰어난 생약을 선발하였으며 나아가 이의 복합 발효 추출물이 단일 일반 추출물보다 우수한 상승효과가 있음을 발견하게 되어 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명자들은 상기 목적을 위해 천연 생약에 대해 예의 연구한 결과, 항균 및 항염 효과가 있는 것으로 알려진 천연 생약 중 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 추출물이 각 추출물을 혼합하여 발효시킨 경우, 각각의 단독 추출물보다 살균력이 강하고 안전하다는 것을 발견하였다. 이에, 본 발명은 외음부 질세정, 냉, 질염, 가려움 및 악취제거 등을 목적으로 하는 여성 위생용품에 사용할 수 있는 복합 생약 발효 추출물 및 이를 함유하는 여성용 청결제 조성물을 제공한다.
제1 관점으로서, 본 발명은 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 각 추출물을 혼합하는 단계; 및 수득한 혼합물을 유산균 발효시켜 발효액을 제공하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생산되는 복합 생약 발효 추출물을 제공한다.
이의 한 양태로서, 상기 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 추출물은 물, 유기용매 또는 이의 혼합용매를 이용하여 추출할 수 있다.
다른 양태로서, 상기 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 각 추출물은 각 추출물에 대해 세포면역활성 시험과 최소저해농도시험을 실시하여, 각 추출물이 최적의 활성을 나타내는 농도에 근거한 비율로 각 추출물을 배합하여 추출 혼합물을 제공할 수 있다. 예컨대, 이하 실시예에 예시된 바와 같이 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 각 추출물은 2:4:4:1:2의 혼합 비율로 배합할 수 있다.
또 다른 양태로서, 상기 유산균은 락토바실러스 불가리커스(Lactobacillus Bulgaricus)를 예로 들 수 있고, 본원에서는 예시적으로 이하 실시예에 예시한 한국생명공학연구원 생물자원센터에서 분양 받은 락토바실러스 불가리커스는 KCTC 3635를 사용하였다.
제2 관점으로서, 본 발명은 앞서 언급한 바와 같이 단일 약재의 추출물보다 항염 및 항균 효과의 상승작용을 나타내는 복합 생약 발효 추출물을 포함하는 여성용 청결제 조성물에 관한 것이다.
한 양태에 따르면, 본 발명의 여성용 청결제 조성물은 상기 복합 생약 발효 추출물을 조성물의 총 중량 100 중량%를 기준으로 0.1 내지 2 중량%의 양으로 포함할 수 있다. 바람직하게는 복합 생약 발효 추출물의 함량은 1 중량%일 수 있다.
다른 양태에 따르면, 본 발명의 여성용 청결제 조성물은 액상 제제 또는 반고형 제제의 제형으로 제조될 수 있다.
또 다른 양태에 따르면, 본 발명의 여성용 청결제 조성물은 추가로 당업계에 통상적으로 사용되는 첨가제를 포함할 수 있다. 이러한 첨가제로는 계면활성제, 보습제, 컨디셔닝제, 증점제, 중화제, 색소 및 향료로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 혼합 발효 추출물과 이를 함유하는 여성용 청결제 조성물은 상승적인 항염, 항균 효과를 나타내어 외음부 질세정, 냉, 가려움 및 악취제거에 우수한 효과를 가지며, 종래의 여성용 질세정 성분에 비해 세포독성이 없으며 질염 개선 효과가 우수한 바, 안전한 여성용 청결제로서 다양한 제형으로 조제하여 사용할 수 있다.
도 1은 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 발효 혼합 추출물의 세포독성시험에 의한 안전성 시험 결과를 도시한 막대그래프이다.
도 2은 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 발효 혼합 추출물의 농도에 따른 상대적 루시퍼라아제 활성과 일정 농도의 각 추출물의 상대적 루시퍼라아제 활성을 기초로 하여 항염 효과를 비교한 막대그래프이다.
도 3은 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 발효 혼합 추출물의 칸디다균에 대한 항균활성을 입증한 원판확산 실험 결과를 보여주는 배양 플라스크이다.
도 2은 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 발효 혼합 추출물의 농도에 따른 상대적 루시퍼라아제 활성과 일정 농도의 각 추출물의 상대적 루시퍼라아제 활성을 기초로 하여 항염 효과를 비교한 막대그래프이다.
도 3은 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 발효 혼합 추출물의 칸디다균에 대한 항균활성을 입증한 원판확산 실험 결과를 보여주는 배양 플라스크이다.
본 발명자는 여성의 질내 유해세균 억제 효과를 지닌 천연물로서 NF-kB 프로모터 억제능 정도를 살펴봄으로써 천연물 추출물의 항염, 면역력 개선 효과를 조사한 결과, 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 발효 추출물이 우수한 항염, 면역력 개선 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
이들 성분 각각의 공지된 특징, 효능, 효과를 살펴보면 다음과 같다.
녹차는 최근까지의 연구 결과에서 생리활성의 촉진작용뿐 아니라 항암, 항산화, 고혈압 억제효과, 항당뇨 등 다방면의 약리효과를 보이는 것으로 보고되고 있다. 녹차성분의 항균작용에 관한 연구는 식중독 세균에 대한 항균작용을 비롯하여 병원성 식중독 균인 에세리치아 콜리(Escherichia coli ) 0157:H에 대한 항균효과, 만성위염, 위십이지장궤양, 위암 등의 위장질환의 원인이 되고 있는 헬리코박터 파이롤리(Helicobacter pyroli)의 억제까지 다양한 항균활성이 연구 보고되고 있다.
천궁은 향명으로는 궁궁이라고 하며, 학명은 Cnidium officinale MAKINO이다. 중국산 식물로 우리나라에서 흔히 재배되고 있는데, 높이는 30～60㎝이고 곧추 자라며 가지가 갈라진다. 잎은 어긋나고 2회우상복엽이며 근생엽은 엽병이 길고 경생엽(莖生葉)은 위로 올라갈수록 점차 작아지며 밑부분이 엽초(잎깍지)로 되어 원줄기를 감싸고 소엽은 난형 또는 피침형으로서 결각상(缺刻狀)의 톱니와 더불어 예리한 톱니가 있다. 꽃은 8월에 피며 가지 끝과 원줄기 끝에서 큰 산형화서가 발달한다. 어린순은 나물로 먹고 뿌리줄기는 건조시켜 약재로 이용한다. 성분은 방향성정유를 다량 함유하고 있어서 냄새가 좋다. 주성분은 크니딜라이드(cnidilide)?네오크니딜라이드(neocnidilide)?리구스틸라이드(ligustilide) 등이 있다. 동물을 통한 약리적 작용실험에서 중추신경계통에 작용하여 진정효과가 있음을 확인하였으며, 약하지만 지속적인 혈압강하작용도 확인되었다. 평활근에 대한 실험에서는 자궁의 수축력을 증대시켜 주고 또 살균작용이 있어서 대장균?이질균?녹농균?피부진균의 발육을 억제시키는 효과가 나타났다
당귀는 산형과에 속하는 참당귀의 뿌리를 건조시킨 약재로 고려 때의 이두향명으로는 목귀초(目貴草)?당적(當赤)이라고 하였고, 1600년대는 숭엄초불휘라 하였다. 약성은 온화하고 맛은 달고 쓴데, 방향성 정유와 서당?비타민 E 등이 함유되어 있다. 월경을 조절하고 월경통을 제거해주는 효능이 있는데, 이것은 혈액순환을 촉진시키고 진통효과를 나타내기 때문이다. 또한, 보혈작용이 현저하여 빈혈에 유효하고 일반 타박상이나 혈전성동맥염의 치료에도 응용된다. 만성 화농증에 사용하면 순환을 개선시키고 체내의 저항력을 증강시키며, 변비에 복용하면 장관운동을 원활하게 해주어 배변을 용이하게 한다. 이 밖에도 빈혈로 오는 두통과 관절염 등에 널리 사용한다. 민간에서는 당귀의 가는 뿌리를 차로 달여 마시거나 술을 담가 먹는다. 대표적인 처방으로는 귀용탕(歸茸湯)과 사물탕(四物湯)이 있다.(향약채취월령, 세종대왕기념사업회, 1983).
울금은 우리나라에서는 생강과의 식물로 덩이뿌리를 그대로 또는 주피를 제거하고 쪄서 말린 것을 말하며 일본에서는 뿌리줄기를 말한다. 중국에서는 울금 및 생강과의 동속식물인 광서아출(Curcuma kwangsiensis SG Lee & CF Liang:廣西莪朮), 온욱금(Curcuma wenyujin YH Chen & C. Ling:溫郁金), 봉아출(Curcuma phaeocaulis Valeton:蓬莪朮)의 뿌리줄기를 말한다. 울금의 효능은 간장의 해독 촉진과 담즙의 분비작용 및 이혈작용이 뛰어나다. 따라서 이담작용과 방향성 건위약, 이뇨약, 해열약, 소화제, 급 만성 담낭염 치료약, 담도염약, 카타르성 황달약, 담석증, 급성간염약 등에 다양한 처방과 제약의 원료로 국내외서 수요가 많다. 최근 울금이 생리활성물질인 curcuminoids의 약리효과가 알려지면서 의학 분야의 중심을 많은 연구가 활발히 이루어짐에 울금의 항산화, 간기능 개선효과, 항균활성과 항생제 증강효과 등에 관한 연구가 이루어지고 있다.
자소는 중국 원산으로 전국에서 재배하는 귀화식물이다. 목초지, 길가 등에 주로 분포하며 일년생식물로 높이는 2~6m이고 가지가 많다. 줄기는 곧게 서고 높이가 20~80cm 이며, 단면이 사각형이고 자줏빛이 돌며 향기가 있다. 잎 양면에 털이 있고, 뒷면 맥 위에는 긴 털이 있으며, 잎자루가 길다. 잎에는 휘발성 정유 0.5%를 함유하며 그 주성분은 l-페릴알데하이드(l-Perillaldehyde) 55%, d-리모넨(d-Limonene) 20~30%, a-피넨(a-Pinene), b-피넨(b-Pinene) 등이며 이외에 안토시안(Anthocyan) 배당체인 시소닌(Shisonin)과 플라본(Flavone)류인 아피지닌(Apiginin), 루테올린(Luteolin) 및 그 배당체, 카페인산(Caffeic acid), 로즈마린산(Rosemarinic acid)을 함유한다. 또한 들깨의 주성분인 피렐라케톤(Perillaketone), 나지나타-케톤(Naginata-Ketone), 엘숄치아케톤( Elsholtziaketone), 에르고마케톤(Ergomaketone), 이소에고마(isoegoma) 등이 함유되어 있다.
자소엽은 외감성으로 인한 오한, 열 및 두통과 코막힘이 있고 땀이 안나며 기침을 할 때 유효하게 쓰였으며, 방향성의 향기는 기의 순환을 촉진시키므로 비위에 기가 정체되어 헛배가 부르고 가슴과 명치가 답답하며 메스껍고 구토가 나는 것을 없앤다. 또한 임신중 태아와 산모를 보호하고 구토가 나는 것을 없애며, 음식물의 방부효과로 사용되었다.
한편, 식물추출물 발효식품은 채소, 과일, 종실, 해조류 등 식용식물을 압착 또는 당류의 삼투압에 의해 얻은 추출물을 자체발효 또는 유산균이나 효모 등을 접종ㆍ발효시켜 식용유래 성분과 발효생성물을 섭취에 적합하도록 가공한 액상의 것을 말한다. 이를 응용한 발효기술로서, 식물체에 존재하는 효모 또는 유산균의 접종을 통한 식물 추출액을 발효시키면 효소들이 활성화되어 여러 가지 생화학반응을 일으킴으로써 식물체의 영양성분이 소화, 흡수되기 쉬운 형태로 변환될 수 있을 뿐만 아니라 효소작용에 의해 생성된 성분이 새로운 생리조절기능을 발현할 수 있다.
본 발명자는 항염, 항균효과를 가지는 것으로 최종 선별된 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출물을 락토바실러스 불가리커스(Lactobacillus Bulgaricus, KCTC 3635)에 의해 발효하여 사용될 때 그 효과가 현저하게 증가하는 것을 확인하였다.
본 발명에서 용어, "추출물(extract)"은 천연물로부터 분리된 활성성분을 포함하고, 본 발명의 항균, 항염 효과를 지닌 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 발효물을 제공하기 위한 원료를 의미한다. 추출물은 물, 유기용매, 또는 이의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득하며, “발효 추출물”은 통상적인 발효 식품에서와 같이 효모 또는 유산균을 이용하여 발효시킨 발효물을 의미하며, 예를 들면 이하 실시예에서 예시적으로 실험한 락토바실러스 불가리커스에 의한 발효물을 포함한다. 또한, 본 명세서에 사용된 “복합 생약 발효 추출물”이란 용어는 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출물을 발효시켜 수득되는 발효 추출물을 의미한다.
이하 실시예는 본 발명의 더 상세한 이해를 돕기 위한 것으로, 이 실시예들에 의해 본 발명이 한정되는 것으로 생각되지 않아야 한다.
실시예
1 : 녹차 추출물 제조 방법
본 발명에 사용된 녹차 추출물의 제조 방법은 다음과 같다.
건조시킨 녹차 100g을 생약 분쇄기로 10 내지 200 메쉬 크기로 분쇄한 후, 80%(v/v) 에탄올 수용액 500ml를 가하여 초음파 진동에 넣고 초음파 진동을 가하여 세포막내의 것을 포함한 유효성분이 에탄올속에 추출되게 한 후 상온에서 24시간 냉침시킨 후, 0.40㎛ 여과지를 이용하여 제균여과하였다. 여과된 추출물을 45℃에서 감압 농축하여 얻은 농축액을 추출물로 사용하였다.
실시예
2 : 천궁 추출물 제조 방법
본 발명에 사용된 천궁 추출물의 제조 방법은 다음과 같다.
건조시킨 천궁 100g을 생약 분쇄기로 10 내지 200 메쉬 크기로 분쇄한 후, 80%(v/v) 에탄올 수용액 500ml를 가하여 초음파 진동에 넣고 초음파 진동을 가하여 세포막내의 것을 포함한 유효성분이 에탄올 속에 추출되게 한 후 상온에서 24시간 냉침시킨 후, 0.40㎛ 여과지를 이용하여 제균여과하였다. 여과된 추출물을 45℃에서 감압 농축하여 얻은 농축액을 추출물로 사용하였다.
실시예
3 : 당귀 추출물 제조 방법
본 발명에 사용된 당귀 추출물의 제조 방법은 다음과 같다.
건조시킨 당귀 100g을 생약 분쇄기로 10 내지 200 메쉬 크기로 분쇄한 후, 80%(v/v) 에탄올 수용액 500ml를 가하여 초음파 진동에 넣고 초음파 진동을 가하여 세포막내의 것을 포함한 유효성분이 에탄올 속에 추출되게 한 후 상온에서 24시간 냉침시킨 후, 0.40㎛ 여과지를 이용하여 제균여과하였다. 여과된 추출물을 45℃에서 감압 농축하여 얻은 농축액을 추출물로 사용하였다.
실시예
4 :
울금
추출물 제조 방법
본 발명에 사용된 울금 추출물의 제조 방법은 다음과 같다.
건조시킨 울금 100g을 생약 분쇄기로 10 내지 200 메쉬 크기로 분쇄한 후, 80%(v/v) 에탄올 수용액 500ml를 가하여 초음파 진동에 넣고 초음파 진동을 가하여 세포막내의 것을 포함한 유효성분이 에탄올 속에 추출되게 한 후 상온에서 24시간 냉침시킨 후, 0.40㎛ 여과지를 이용하여 제균여과하였다. 여과된 추출물을 45℃에서 감압 농축하여 얻은 농축액을 추출물로 사용하였다.
실시예
5 : 자소 추출물 제조 방법
본 발명에 사용된 자소 추출물의 제조 방법은 다음과 같다.
건조시킨 자소 100g을 생약 분쇄기로 10 내지 200 메쉬 크기로 분쇄한 후, 80%(v/v) 에탄올 수용액 500ml를 가하여 초음파 진동에 넣고 초음파 진동을 가하여 세포막내의 것을 포함한 유효성분이 에탄올 속에 추출되게 한 후 상온에서 24시간 냉침시킨 후, 0.40㎛ 여과지를 이용하여 제균여과하였다. 여과된 추출물을 45℃에서 감압 농축하여 얻은 농축액을 추출물로 사용하였다.
실험예
1 : 면역활성 시험
상기 실시예 1~5에서 제조된 추출물에 대하여 NF-kB 활성화 억제시험을 이용한 세포 면역활성 효과를 측정하였다.
NF-kB 프로모터는 면역관련 사이토카인의 생산에 중요한 역할을 한다고 보고되어 있다. 이 평가 시스템은 이미 NF-kB 인자가 염증과 관련된 대표적인 사이토카인인 IL-8과 종양괴사인자-알파(tumor necrosis factor-alpha : TNF- α)의 유전자 발현에 중요한 요인임이 알려져 있기 때문에 평가하려는 물질이 NF-kB 루시퍼라아제의 활성을 억제한다면 염증 관련 사이토카인의 활성을 억제할 가능성이 매우 크다고 할 수 있다.
TNF-α는 자극을 받은 대식세포가 생산하는 세포독성 모노카인으로 염증반응과 상처의 회복에 중요한 작용을 한다. 따라서 어떠한 물질이 대식세포를 자극하여 TNF-α 생합성을 유도하는지를 시험하거나, TNF-α 민감성 세포주에 TNF-α와 시험하고자 하는 시료를 같이 배양하여 TNF-α의 효능에 어떠한 영향을 미치는 지를 시험하여 면역조절 능력을 조사할 수 있다.
시험 방법
인간단핵구세포인 THP-1 세포를 6 웰에 각각 1x106개의 세포를 분주한 후, 수퍼펙트 트란스펙션 시약(superfect transfection reagent)을 이용하여 NF-kB 루시퍼라아제 리포터 플라스미드 DNA (NF-kB luciferase reporter plasmid DNA)를 형질감염(transfection)시켰다. 형질감염 후 24시간이 경과한 후, 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; LPS) (100ng/ml)를 처리하여 THP-1 세포를 활성화시킴과 동시에 각각의 추출물을 농도별로 처리하였다. 24시간 후 세포를 수집하여 루미노미터(luminometer)를 이용하여 루시퍼라아제 활성을 측정하였다.
각 추출물의 농도별 NF-kB 프로모터 억제 결과는 표 1과 같이 나타났다.
실험예
2 : 항균효과 시험
상기 실시예 1~5에서 제조된 추출물에 대하여 최소발육저지농도(Minimal inhibitory concentration :MIC) 시험을 이용한 항균효과를 측정하였다.
MIC 시험 항균효과를 지닌 원료를 액체배지에서 단계적 농도로 가하고 여기에 다양한 시험균의 균액을 접종하고 25℃에서 24시간 동안 진탕 배양한 후 시험균의 발육 정도를 측정하는 방법이다.
시험 방법
효모 펩톤 덱스트로스 브로스(Yeast Peptone Dextrose broth) 10ml에 시험하고자 하는 각 미생물을 25℃에서 48시간 배양한 후, 배양한 각 미생물을 배지 3ml에 104 세포가 되도록 미생물을 접종한다. 각 배지에 실시예 1~5 추출물을 농도별로 첨가한다. 준비한 시험관을 25℃에서 48시간 배양 후 미생물의 생육 정도를 관찰한다.
각 추출물의 농도별 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항균활성은 표 2와 같이 나타났다.
실시예 6. 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 추출 혼합물
상기 실시예 1~5의 각 추출물에 대해 상기 실험예 1의 각 세포면역활성 시험(표 1)과 실험예 2의 최소저해농도시험(표2)을 실시한 결과에 따라 각 동일 농도에서 나타나는 최적의 활성 농도를 기초로 배합하여 추출혼합물을 제조하였다. 즉, 상기 실험결과에 따라 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 농축액을 각 2:4:4:1:2 비율로 추출 혼합물을 제조하였다.
이 추출 혼합물을 이용하여 본 발명의 복합 발효 추출물을 제조하기 위해 락토바실러스 불가리커스(Lactobacillus Bulgaricus, KCTC 3635)를 한국생명공학연구원 생물자원센터에서 분양받아 엠알에스 배지(MRS Medium)에 접종하고 37℃ 진탕 배양기에서 24시간 동안 배양한 후 계대배양하였다. 상기 배양된 균주를 멸균수로 2회 세척하고 초기 균수를 106~108 CFU/㎖로 조절하여 유산균 스타터를 준비하였다.
다음으로 혼합 추출물 100g과 증류수 500g를 혼합하고 상기 유산균 스타터를 총 부피의 2부피%가 되도록 접종한 후 33℃에서 48시간 혐기 발효시켰다. 발효가 완료되면 80℃에서 10분간 가열하여 실활을 유도한 후 발효되고 남은 잔여물을 종이 여과지로 여과하여 제거한 다음, 여액을 1.0㎛ 기공 크기의 멤브레인 필터로 1차 여과한 후 0.45㎛ 기공크기의 멤브레인 필터로 2차 여과하여 유산균 발효 혼합 추출물을 제조하였다.
실험예
3 : 독성 시험
상기 실시예 6에서 제조된 추출 혼합물에 대해 세포배양을 이용하여 세포 독성 효과를 측정하였다.
방법
세포 독성 시험(Mosmann, T., Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. J. Immunol. Meth. 1983, 65, 55-63.)에 사용한 배지는 10% FBS를 포함하는 DMEM에 사람섬유아세포주(Human fibroblast cell line: ATCC, CRL-2076)를 24웰 평판에 1X105 세포/ml의 농도로 파종한다. 파종 24시간 후 배지를 교체하고 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물을 농도별로 첨가한 후 3일간 37℃, 5% CO2 항온배양기에서 배양한다. MTT 용액 1ml/웰씩 첨가한 후 37℃, CO2 항온배양기에서 4시간 가량 배양 후, 배지를 제거하고 여기에 DMSO를 200ul씩 첨가한 뒤 550nm에서 흡광도를 측정했다.
결과
시험된 0.25% 내지 1%에서는 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물에 대해 세포 발육 저해가 전혀 나타나지 않았고, 5%에서 약간의 세포 생존율 감소가 관찰되었으나, 이보다 2배 농도인 10%에서는 세포 생존율이 증가하는 것으로 관찰되는 바, 실험적 오차인 것으로 생각된다. 이에 본 발명의 발효 추출 혼합물은 적당한 농도에서 여성용 세정 조성물에 안전하게 사용 가능하다는 것을 알 수 있다.
실험예
4 : 면역활성 시험
상기 실시예 6에서 제조된 발효 추출물에 대하여 NF-kB 활성화 억제시험을 이용한 세포 면역활성 효과를 측정하였다.
방법
상기 실험예 1과 동일하게 실험을 실시하였다.
결과
녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물의 면역관련 활성을 NF-kB 루시퍼라아제 실험을 이용하여 관찰하였다. 또한, 동일 농도로 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합 발효물를 처리했을 경우와 각각의 식물추출물 1%를 단독으로 처리했을 경우에 대한 비교실험을 수행하였다.
녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물은 농도 의존적으로 NF-kB 루시퍼라아제 활성을 억제하는 것을 볼 수 있다. 뿐만 아니라, 단일 식물추출물 각 1% 농도로 처리하였을 경우와 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물을 비교해 본 결과, 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물이 동일농도에서 높은 억제능을 보였다 (도2). 이러한 결과는 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물을 구성하는 추출물들 간의 상승작용에 의한 것임을 검증하였다.
실험예
5 : 항균효과 시험
상기 실시예 6에서 제조된 추출혼합 발효물에 대하여 최소발육저지농도(Minimal inhibitory concentration :MIC) 시험을 이용한 항균효과를 측정하였다.
MIC 시험 항균효과를 지닌 원료를 액체배지에서 단계적 농도로 가하고 여기에 다양한 시험균의 균액을 접종하고 25℃에서 24시간 동안 진탕 배양한 후 시험균의 발육 정도를 측정하는 방법이다.
방법
감자 덱스트로스 브로스(Potato Dextrose Broth) 10ml에 칸디다 알비칸스(candida albicans)를 25℃에서 72시간 배양한 후, 배양한 각 미생물을 배지 3ml에 104 세포가 되도록 접종한다. 각 배지에 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합물, 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 발효 추출 혼합물 및 각각의 단일 추출물을 농도별로 첨가한다. 준비한 시험관을 25℃에서 72시간 배양 후 미생물의 생육 정도를 관찰했다.
결과
이하 표 4의 결과와 같이, 본 발명에 따른 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 혼합 발효 추출물은 칸디다균에 대해 1mg/ml부터 생육 저해를 나타냈다.
실험예
6 : 원판확산법에 의한 항균 효과 시험
상기 실험예 5에 결과에 대한 검증을 위해 원판확산법에 의해 추출혼합물의 칸디다 알비칸스에 대한 항균효과를 관찰하였다. 원판확산법(Disk Diffusion Method)은 기초 한천배지의 표면에 면봉으로 시험균주의 균액을 고르게 접종하고, 그 위에 항균제 디스크를 놓는다. 배양시간 동안 디스크의 항균제는 주위의 한천으로 확산하므로, 디스크 바로 주변의 한천에는 항균제가 고농도로 분포하지만, 디스크에서 먼 곳의 한천에는 항균제가 낮은 농도로 분포한다. 이와 같은 한천의 항균제 농도경사에 의해서 세균 증식의 억제대가 형성된다.
방법
순수 배양된 평판 배지에서 잘 분리된 집락 4-5개를 선별하여 백금이로 증균용 배지에 접종한다. 25℃ 배양기에서 표준탁도액의 농도 이상으로 균이 발육될 때까지 배양한 배양액을 표준탁도액의 농도와 같도록 멸균된 생리식염수나 액체배지로 희석한다. 균 배양액의 농도를 맞춘 후 15분 이내에 멸균된 면봉을 균 배양액에 적셔서 시험관 내벽에 돌리면서 눌러 짜서 과다한 균액을 제거한다. 표면이 마른 평판 한천 평판 배지 위에 균액이 적셔진 면봉을 골고루 문질러 접종한다. 평판 뚜껑을 닫고 3-5분동안 방치하여 표면의 습기가 흡수되도록 한 후, 디스크 디스펜서를 이용하여 필요한 디스크를 균이 골고루 접종된 한천 평판배지에 놓고 디스크 중앙을 가볍게 눌러 한천 표면에 완전히 부착시킨다. 디스크를 놓은 평판은 약 30분 동안 정치시킨 후 25℃ 배양기에 평판 뚜껑이 밑으로 가도록 놓아 배양했다.
결과
도 3에서와 같이 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합 발효물은 칸디다균에 대해 항균효과가 있음을 검증하였다.
제조예
1.
실시예 6의 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소 추출 혼합 발효액을 함유한 여성용 청결제 처방예는 다음과 같다.
<제조방법>
1. 상온에서 11에 2를 교반용해하고 용해확인후 3,4,5,6을 차례로 투입하고,
2. 용해시킨후 7,8을 투입하여 교반용해한후 9,10,1을 투입하여 다시 교반 용해시킨 다음,
3. 20분간 추가로 교반해주고 300메쉬로 여과한 후 4일간 숙성시킨다
Claims (6)
- 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 각 추출물을 혼합하는 단계;
수득되는 혼합물을 유산균 발효시켜 발효액을 수득하는 단계; 및
상기 발효액의 항균 및 항염 효과, 및 안전성을 시험하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생산되어, 단일 약재의 추출물보다 항염 및 항균 효과의 상승적 효과를 나타내는 복합 생약 발효 추출물. - 제1항에 있어서, 녹차, 천궁, 당귀, 울금, 자소의 추출물이 물, 유기용매 또는 이의 혼합용매를 이용하여 추출된 것인 복합 생약 발효 추출물.
- 제1항에 있어서, 유산균이 락토바실러스 불가리커스인, 복합 생약 발효 추출물.
- 제1항에 기재된 복합 생약 발효 추출물을 함유하는 여성용 청결제 조성물.
- 제4항에 있어서, 제형이 액상 제제 또는 반고형 제제인 여성용 청결제 조성물.
- 제4항에 있어서, 계면활성제, 보습제, 컨디셔닝제, 증점제, 중화제, 색소 및 향료로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 여성용 청결제 조성물
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2012
- 2012-03-12 KR KR1020120024808A patent/KR101168225B1/ko active IP Right Grant
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