KR102180666B1 - 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 애플민트, 유자, 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물은 천연 유래 소재를 활용하여 세포 독성이 없고 피부에 안전하며, 피부 트러블 개선에 도움을 주는 유산균을 활용하여 일반 복합 추출물 대비 우수한 항균, 항염증 및 피부 장벽 강화 효과를 가질 수 있으며, 피지를 억제하고 피부 수분량을 증가시켜, 여드름 피부 개선에 우수한 효과를 발휘한다.

Description

애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Skin Care Containing Fermented Extracts of Applemint, Citron and Sparassis Crispa}
본 발명은 애플민트, 유자, 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 항염증, 항균 및 피부 장벽 강화 활성이 우수하고 피지 분비 억제 및 피부 수분량 증가 활성을 가져 여드름 억제 효능이 우수한 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부 질환은 유전적 요인, 환경적 요인, 피부 장벽의 이상, 면역학적 이상, 식생활의 변화 등 복합적인 영향에 의해 급증하고 있다. 다양한 피부 질환 중 여드름은 모낭벽의 과각화, 피지 분비의 증가, Propionibacterium acnes 증식, 염증 유발 등으로 이어지는 복합적인 요인에 의해 발병하는 질환이다.
여드름의 주된 원인으로는 피부 상재균에 의한 발생이 있다. 피부 염증을 유발하는 피부 상재균은 그람 양성균인 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Propionibacterium acnes와 그람 음성균인 Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa가 있다. 그 중 여드름 유발균인 P.acnes는 주로 모낭과 피지선이 많이 분포된 얼굴, 가슴 등에서 성장하며, 모낭의 피지선에 피지가 정체되면 모낭 입구는 막히게 되고 결국 모낭 내부에서 여드름균의 작용으로 여드름을 발생시킨다. 이와 같이 피부 상재균 및 기타 세균의 증식은 피부 질환을 유발시킬 뿐 아니라 피부 세포나 장벽 기능에 손상을 야기시킬 수 있다.
피부 장벽은 표피층에서도 가장 최외각층인 각질층에 존재하며, 피부 장벽이 있는 각질층은 천연 보습 인자를 함유한 각질형성세포와 세포간지질로 구성된다. 피부 장벽은 수분과 영양의 손실을 막아주고 외부의 세균으로 부터 피부를 보호하는 역할을 한다. 피부 장벽이 무너지는 원인은 선천적인 요인과 환경의 변화, 스트레스 등이 있다. 피부 장벽 기능이 약화되면 알레르기의 원인 물질인 알레르겐의 흡수량이 증가되어 접촉성 피부염 발생 확률이 높아지고, 여드름 피부의 경우에는 여드름균이 과증식하게 되어 여드름을 더욱 악화시키기도 한다. 여드름의 원인은 매우 복합적이고 다양하지만 근본적으로 피부 장벽이 튼튼하고 건강한 피부 상태라면 여드름의 발생 확률을 낮출 수 있다.
또한, 염증은 병원체의 침입이나 조직 손상으로부터 몸을 보호하는 방어 기전 중 하나이다. 그러나 면역 반응이 과도하게 발생되면 세포 또는 조직이 공격을 받아 만성 면역 질환을 일으키는 염증 반응이 진행되고 이 과정에서 염증성 사이토카인 등 다양한 물질이 관여하게 된다. 최근에는 피지선 내 존재하는 여드름 유발균인 P.acnes로부터 발생된 대사 산물이 염증성 사이토카인의 분비를 자극한다는 연구 결과도 발표되었다.
발효에 영향을 미치는 미생물은 다양한 종류가 있으며, 인체 내에도 다양하게 존재한다. 인체 내 유익한 미생물의 대표적인 것이 프로바이오틱스(Probiotics)를 의미하는 유산균이다. 유산균은 포도당 또는 유당과 같은 당을 분해하여 젖산, 초산과 같은 유기산을 생성하는 균으로서 병원균과 유해세균의 생육이 저지되는 성질을 이용하여 식품을 발효시키거나, 체내 다른 병원 미생물로부터 몸을 보호하고 항상성을 유지하는 데 도움을 준다. 이러한 유산균은 장내 유해균을 죽이거나 증식을 억제하고, 면역 증강 작용, 항암 작용 등 다양한 역할을 한다. 이 외에도, 유해 세균 제거하고 독성 물질을 배출하여 여드름균 또는 모낭충의 생장을 억제하는 작용을 통해 피부 미용 효과를 가지고 있다. 또한 유산균 대사 물질 중 천연 항생제인 박테로이신은 피부의 여드름균, 잡균을 억제하기도 한다.
한편, 여드름 치료를 위해 사용되는 약제는 여드름 균에 대한 직접적인 살균 효과를 가지며, 유리 지방산이 생성되는 것을 막아주는 국소도포 항생제와 비타민 A를 변형시켜 만든 것으로 각질을 벗겨내어 피지 배출이 잘 되도록 작용한다. 이러한 여드름 치료 제제는 신체 부작용과 함께 체내 상재균들의 항생제 내성 증가와 같은 역효과를 일으킬 수 있다. 이러한 배경하에 여드름 피부에 있어서 인체에 안전하면서도 개선 효과가 우수하고, 피부의 면역을 증강시킬 수 있는 천연물 탐색에 대한 필요성이 꾸준히 대두되고 있다.
천연물을 이용한 여드름 치료 조성물에 대한 특허문헌으로는 대한민국 등록특허공보 제10-2004468호에서 하고초 추출물을 이용한 피부 재생 촉진 조성물을 기재하고 있고, 대한민국 공개특허공보 제10-2019-0067700호에서 흑초 및 나이아신아마이드를 포함하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허공보 제10-1978716호에서 삼백초 추출물, 어성초 추출물, 야자수 추출물 및 녹차 추출물을 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공하고 있다.
이에 본 발명자들은 여드름과 같은 피부 질환의 개선 효과를 나타내는 천연물에 대한 연구를 하던 중, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯을 복합 발효한 추출물이 우수한 항염증, 피부 장벽 강화 및 여드름의 원인균에 대한 항균 효과를 갖는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 우수한 항염증, 피부 장벽 강화 및 여드름 원인 균에 대한 항균 효과를 갖고, 피지를 감소시키고 피부 수분량을 증가시킴으로써, 여드름에 대한 개선 효과를 갖는 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 복합 발효 추출물은 락토바실러스(Lactobacillus), 비피도박테리움(Bifidobacterium) 및 스트렙토코커스(Streptococcus)로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 유산균에 의해 발효된 것이 바람직하다.
본 발명에 있어서, 상기 복합 발효 추출물은 애플민트 추출물 100중량부에 대하여, 유자 추출물 10 내지 100중량부 및 꽃송이버섯 추출물 100 내지 1000중량부를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 화장료 조성물은 이눌린, 프락토올리고당, 갈락토오스올리고당, 자일로오스 올리고당 및 치커리 뿌리 올리고당으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 프리바이오틱스(prebiotics)를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 젖산(lactic acid) 및 히알루론산(hyaluronic acid) 중 1종 이상의 포스트바이오틱스(postbiotics)를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 마스크팩으로 구성된 군에서 선택된 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 항균에 의한 피부개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명에서, 상기 항균은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균일 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 항염증에 의한 피부개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 피부 장벽 강화에 의한 피부개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 여드름 피부 개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 피지 분비 억제에 의한 피부개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 피부 보습에 의한 피부개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 지루성 피부염, 아토피 피부염, 접촉성 피부염 및 건선으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 질환을 갖는 피부의 개선용일 수 있다.
본 발명에 따른 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물은 천연물 유래 소재를 활용하여 세포 독성이 없고 피부에 안전하며, 피부 트러블 개선에 도움을 주는 유산균을 활용하여 일반 복합 추출물 대비 우수한 항균, 항염증 및 피부 장벽 강화 효과를 가질 수 있으며, 피지 분비를 억제하고 피부 수분량을 증가시켜, 여드름 피부 개선에 우수한 효과를 발휘한다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 복합 발효 추출물과 일반 복합 추출물의 세포 처리시 농도에 따른 TLR-2 활성 저해율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 복합 발효 추출물과 일반 복합 추출물의 농도에 따른 P.acnes 균 성장 억제율을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 복합 발효 추출물과 일반 복합 추출물의 세포 처리시 농도에 따른 각질세포 분화능을 나타낸 그래프이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명은 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 항염증 및 피부 장벽 강화 효과가 우수하고 여드름 원인균에 대한 항균 활성이 우수하며, 피지 억제 및 피부 수분량 증가에 효과적이기 때문에, 여드름 피부를 효과적으로 개선할 수 있다.
본 발명에 있어서, 애플민트(applemint)는 유럽이 원산지인 허브의 일종으로 통화식물목 꿀풀과의 여러해살이풀을 의미한다. 애플민트는 높이가 30∼60cm 정도이고, 사과와 박하가 섞인 듯한 향기가 나며, 잎은 달걀 모양으로 둥글고 흰 털이 나 있으며 연해 보인다.
본 발명에 있어서, 유자(citron)는 유자나무의 열매로, 노랑색 공 모양이다. 껍질이 울퉁불퉁하고 신 맛이 특징이다. 주요 성분으로 비타민 C가 레몬보다 3배나 많이 들어 있어 감기와 피부 미용에 좋고, 노화와 피로를 방지하는 유기산이 많이 들어 있다.
본 발명에 있어서, 꽃송이버섯은 학명 Sparasis crispa로서, 담자균류 민주름버섯목 꽃송이버섯과의 버섯이다. 여름에서 가을까지 침엽수의 자른 그루터기나 죽은 나무 언저리에서 자생한다. 자실체는 높이 10~25cm로 육질이고 밑부분은 굵은 줄기로 공통의 자루가 되어 있으며, 여러 차례 가지를 쳐서 꼭대기는 그 가장자리가 물결 모양이다. 자실층은 꽃잎 뒷면에 발달하였다.
본 발명에서는, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 복합 발효 추출물이 우수한 항균, 함염증 및 피부 장벽 강화 효과를 나타내어 여드름 개선에 우수한 효과를 갖는다는 것을 확인하였다.
구체적으로, 본 발명의 실시예에서는, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯을 포함하는 유산균 활용 복합 발효 추출물이 대표적인 여드름 유발균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대하여 항균 활성이 뛰어나다는 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 실시예에서는 본 발명의 복합 발효 추출물이 염증성 사이토카인의 분비를 매개하여 면역 반응을 활성화시키는 수용체에 대한 저해 활성을 통한 항염증 효과가 우수하며, 피부의 물리적 장벽 기능을 담당하는 불용성 단백질 막인 각질세포막 분화에 대한 활성 또한 우수하다는 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 복합 발효 추출물은 화장료 조성물로 사용될 경우 피부의 피지 분비를 억제하고 피부 수분량을 증가시켜 피부 보습 및 피부 장벽 강화에 유리하고 결과적으로 여드름을 개선할 수 있다.
특히, 본 발명의 일 실시예에서는, 본 발명의 복합 발효 추출물이 애플민트 발효 추출물, 유자 발효 추출물 또는 꽃송이버섯 발효 추출물과 같은 개별 성분의 발효 추출물과 비교할 때 2배 이상의 우수한 피지 분비 억제 및 수분량 증가 효과를 나타낸다는 것을 확인하였다. 즉, 본 발명은 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯이 복합적으로 발효된 추출물을 이용하는 경우 상호간 시너지 효과를 발휘하여 단독 발효 추출물보다 월등히 뛰어난 효과를 발휘한다는 것을 발견한 것이다.
본 발명의 복합 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항균, 항염증 및 피부 장벽 강화 효과를 발휘하여, 여드름 피부에 대한 개선 뿐만 아니라, 지루성 피부염, 아토피 피부염, 접촉성 피부염, 건선 등의 피부 질환의 예방 및 개선 효과를 발휘할 수 있다.
본 발명의 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물은 다음의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다:
(a) 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯을 각각 추출하여 추출물을 제조하는 단계;
(b) 상기 추출물을 혼합한 후 유산균을 접종하여 발효시키는 단계; 및
(c) 상기 발효물을 추출하여 복합 발효 추출물을 제조하는 단계.
우선, 상기 (a) 단계는 원물인 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯에 대하여 각각 추출물을 제조하는 단계이다.
상기 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯에 대한 추출물을 제조하는 방법은 당업계에서 일반적으로 사용되는 추출 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 열수추출, 실온추출, 가온추출, 초음파추출, 초임계추출, 냉침추출, 환류 냉각 추출 등이 있으며, 특별히 이에 한정되는 것은 아니나, 가장 바람직하게는 열수추출을 이용할 수 있다.
예를 들어, 애플민트는 지상부를 건조시켜 파쇄하고 추출용매를 사용하여 추출물을 제조할 수 있다. 애플민트 추출물을 제조하기 위한 원물은 전초를 포함한, 잎, 뿌리, 줄기, 꽃 및 열매 등으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 추출하여 사용할 수 있다.
또한, 유자는 착즙하고 남은 잔사를 취합하여 추출용매를 이용하여 추출, 여과, 감압, 농축 및 건조하여 분말화할 수 있다.
꽃송이버섯은 균주를 액상 배양하여 균체를 취합한 후 마찬가지로 추출용매를 이용하여 추출물을 제조할 수 있다. 상기 배양은 예를 들어, 꽃송이버섯의 균주를 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지에 전배양하고, 균사를 PDB(Potato Dextrose Broth) 2.4%를 정제수에 녹여 멸균한 배지에 접종하여 약 50일간 액상 배양할 수 있다.
본 발명에 있어서, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 추출물을 제조하기 위한 추출용매는 당업계에서 허용되는 용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 정제수, 탄소수 1~4개(C1 내지 C4)의 저급 알코올, 상기 저급알코올과 정제수의 혼합용매, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜, 다이클로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 헥센, 벤젠, 페트로륨 에테르 및 이의 혼합물을 사용할 수 있고, 가장 바람직하게는 정제수이다.
상기 (a) 단계에서 제조되는 추출물은 감압 농축 후 건조시킨 분말의 형태일 수 있으며, 또는 상기 분말을 추출용매와 배합시킨 배합물일 수 있다.
상기 분말 또는 배합물은 상기 (b) 단계에서, 유산균을 접종하여 발효시켜 복합 발효 추출물을 제조할 수 있다.
이 때, 상기 애플민트 추출물, 유자 추출물 및 꽃송이버섯 추출물의 혼합은 애플민트 추출물 100중량부에 대하여, 유자 추출물 10 내지 100중량부 및 꽃송이버섯 추출물 100 내지 1000중량부로 혼합하는 것이 바람직하다. 또는, 애플민트 추출물 100중량부에 대하여, 유자 추출물 20 내지 90중량부 및 꽃송이버섯 추출물 190 내지 800중량부를 혼합하는 것이 상호간 시너지 효과를 증대시키기 위하여 더욱 바람직하다.
본 발명에서 복합 추출물의 발효를 위하여 사용될 수 있는 유산균은 특별히 제한되지 않으나, 피부에 유용한 효과를 나타내는 락토바실러스(Lactobacillus), 비피도박테리움(Bifidobacterium), 스트렙토코커스(Streptococcus) 등으로부터 선택된 1종 이상의 균을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)를 사용할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는, 복합 추출물의 유산균 발효를 통하여 복합 발효 추출물의 형태로 제조하는 경우 피부 흡수가 촉진되며, 피부 개선 효과가 더욱 증가된다는 것을 확인하였다.
상기 (b) 단계에서, 복합 추출물의 발효는 액상 배양에 의해 수행될 수 있다. 상기 액상 배양의 배지는 탈지분유를 정제수에 녹여 멸균한 배지를 사용하는 것이 바람직하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 복합 추출물은 발효 배지의 0.1 내지 10중량%로 첨가될 수 있으며, 1 내지 7중량%가 더욱 바람직하고, 3 내지 5중량%가 가장 바람직하다.
또한, 상기 발효는 109 내지 1010cells/ml의 균체 농도의 유산균을 이용하여 24 내지 72시간 동안 수행될 수 있으며, 바람직하게는 약 37℃에서 약 48시간 동안 수행될 수 있다.
발효가 완료되면, 발효물을 추출하여 복합 발효 추출물을 얻을 수 있다. 상기 발효물은 배양액을 원심분리하여 침전물과 균체를 제거한 다음 상등액을 여과하여 사용할 수 있다.
상기 추출 공정은 (b) 단계에서 수득한 발효물을 그대로 사용하거나 발효액을 건조한 발효건조물을 사용할 수 있으며, 이를 당업계에서 일반적으로 사용하는 추출 공정을 사용하여 추출할 수 있다. 상기 추출 공정은 예를 들어, 열수추출, 실온추출, 가온추출, 초음파추출, 초임계추출, 냉침추출, 환류 냉각 추출 등을 사용할 수 있고, 열수추출이 가장 바람직하다.
상기 추출에 사용될 수 있는 용매는 앞서 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 추출에 사용될 수 있는 용매와 동일하다.
본 발명의 화장료 조성물은, 상기 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 전체 조성물의 중량을 기준으로 0.0001 내지 10중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.001 내지 5중량%로 포함할 수 있다. 복합 발효 추출물이 0.0001중량% 미만인 경우에는 항균, 항염증 및 피부 장벽 강화 효과가 나타나기 어려우며, 10중량% 초과인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안정성에 문제가 있고, 경제적이지 못하다.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유산균의 증식과 활성을 도와주는 프리바이오틱스(prebiotics)인 이눌린, 프락토올리고당(프락토올리고사카라이드), 갈락토오스올리고당, 자일로오스 올리고당 및 치커리 뿌리 올리고당(치커리 뿌리 올리고사카라이드) 중 하나 이상을 더 포함할 수 있으며, 바람직하게는 치커리 뿌리 올리고당(치커리 뿌리 올리고사카라이드)를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유산균의 대사산물을 의미하는 포스트바이오틱스(Postbiotics)인 젖산(lactic acid) 및 히알루론산(hyaluronic acid) 중 하나 이상을 더 포함할 수 있으며, 바람직하게는 히알루론산을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따라 제조된 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물은 항균, 항염증 및 피부 장벽 강화 효과를 가지고 있어 피부 개선용 화장료 조성물로 이용될 수 있다.
상세하게는, 본 발명의 실시예에서는 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 사용하는 경우 용매를 이용한 통상적인 방법의 추출물보다 항균, 항염증 및 피부 장벽 강화 효과를 증가시키는 것을 확인하였다. 구체적으로, 유산균을 활용한 복합 발효 추출물이 일반 추출물 대비 여드름을 유발하는 균인 p.acnes 성장을 보다 더 억제할 수 있다는 것을 확인하였으며, 염증성 사이토카인을 분비하는 단백질 수용체인 Toll-like receptor 2(TLR-2)의 활성을 더욱 억제하고, 피부 장벽 강화 지표인 각질세포막(CE, cornified envelope)의 형성을 보다 촉진시키는 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 실시예에서는 복합 발효 추출물이 각각의 단독 성분 발효 추출물과 대비하여, 피부의 피지량을 억제하고, 수분량을 증가시키는 것을 확인하였다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이, 마스크팩 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시에 불과하며, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
제조예 1: 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 추출물 제조
애플민트는 지상부를 건조하여 파쇄하고, 1:10의 질량비로 정제수를 부가하여 80℃에서 3시간 동안 추출, 여과, 감압 농축 및 건조하여 분말화하였다.
유자 열매는 착즙하고 남은 잔사를 취합하여 1:10의 질량비로 정제수를 부가하여 80℃에서 3시간 동안 추출, 여과, 감압 농축 및 건조하여 분말화하였다.
꽃송이버섯은 균주를 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지에 전배양하고, 균사를 PDB(Potato Dextrose Broth) 2.4%를 정제수에 녹여 멸균한 배지에 접종하여 액상 배양하였다. 50일 동안 배양 후 균체를 취합하였다. 균체에 1:10의 질량비로 정제수를 부가하여 80℃에서 3시간 동안 추출, 여과, 감압 농축 및 건조하여 분말화하였다.
제조예 2: 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 발효 추출물 제조
유산균은 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)를 이용하여, 탈지분유 5중량%를 정제수에 녹여 멸균한 배지에 종균을 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양하였다.
앞서 준비한 애플민트 추출물, 유자 추출물 및 꽃송이버섯 추출물을 아래의 표 1의 함량으로 5중량%의 탈지분유와 함께 정제수에 녹여 멸균한 배지에 농도 109-1010cells/ml의 유산균 종균을 1% 접종하여 37℃에서 48시간 동안 액상 배양하였다.
배양액을 100℃에서 3시간 동안 추출하고, 원심분리한 상등액을 0.22㎛ 제균 필터로 여과하여 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 얻었다.
또한, 비교를 위하여, 애플민트 추출물, 유자 추출물 및 꽃송이버섯 추출물 각 1중량%에 정제수를 부가하고 100℃에서 3시간 동안 추출하여 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 추출물을 얻었다(비교예 1)
애플민트 추출물
(중량%)		 유자 추출물
(중량%)		 꽃송이버섯 추출물
(중량%)		 유산균
발효
실시예 1 0.9 0.2 1.9 O
실시예 2 1.1 0.9 3.0 O
비교예 1 1.0 1.0 1.0 X
비교예 2 1.0 - - O
비교예 3 - 1.0 - O
비교예 4 - - 1.0 O
실험예 1 : 항염증 효능 확인
항염증 효능 시험을 진행하기 위해, Toll-like receptor 2 activity assay를 진행하였다.
HEK-BlueTM hTLR2 cells(InvivoGen)을 DMEM(10% FBS) 배양배지, 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 배양 배지를 모두 제거하고 PBS로 세척한 후 37℃ 인큐베이터에서 2분 동안 반응시켰다.
세포를 회수하여 DMEM에 suspension 시킨 후 well에 분주하였다. 분주 후 상기 실시예 2의 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물 및 비교예 1의 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 추출물을 아래 표 2의 농도별로 처리하였다.
처리 1시간 후 TLR2의 리간드로 작용할 수 있는 P.acnes(ATCC6919)의 배양액을 inducer로 처리하고, 37℃, 5% CO2 조건 하에서 12시간동안 배양하였다. 배양 후 세포 배양액을 덜어내서 Quanti-Blue solution(InvivoGen)과 37℃에서 1시간동안 반응시켰다.
Spectrophotometer를 이용하여 620nm 흡광도에서 TLR2 활성도를 측정한 결과를 아래의 표 2 및 도 1에 나타내었다.
추출물 처리 농도(중량%) TLR2 활성(%) 억제율(%)
무처리군 - 2468 -
비교예 1 1 2368 -4.1
비교예 1 2 2278 -7.7
비교예 1 5 2166 -12.2
실시예 2 1 2101 -14.9
실시예 2 2 1799 -27.1
실시예 2 5 1484 -39.9
실험 결과, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 복합 발효 추출물과 일반 복합 추출물 모두 농도 의존적으로 염증성 사이토카인 분비를 매개하여 면역 반응을 활성화시키는 수용체인 TLR-2 활성을 저해한다는 것을 확인할 수 있다.
다만, 복합 발효 추출물은 일반 추출물과 비교하여, 동량을 처리하더라도(2%, 5%) TLR-2 저해 활성값이 더욱 유의미하고 우수한 결과를 나타내었다(도1).
따라서, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 복합 발효 추출물이 유산균 발효를 진행하지 않은 일반 복합 추출물에 비하여 항염증 효과가 우수하다는 것을 확인할 수 있다.
실험예 2 : 항균 효능 확인
지방친화성 혐기성균인 프로피오니박테리움(Propionibacterium)에 대한 효능 시험을 진행하기 위해, Minimum inhibitory concentration assay를 진행하였다.
P.acnes(ATCC6919)를 37℃ 혐기 챔버에서 계대배양하여 활성상태로 준비하였다. 그 후 96 plate에 RCM medium과 실시예 2 및 비교예 1을 농도별로 준비하고 프로피오니박테리움 균주를 각 well에 loading 하였다.
37℃ 혐기 챔버에서 24시간 배양한 프로피오니박테리움의 viability를 측정하기 위해 각 well에 WST solution을 1/20이 되도록 loading한 다음 1시간 배양하였다. 450nm 흡광도를 통해 microbial cell viability를 측정하여 그 결과를 아래의 표 3 및 도 2에 나타내었다.
추출물 처리 농도(중량%) P.acnes 억제율(%)
비교예 1 1 3.7
비교예 1 2 5.8
비교예 1 5 13.6
실시예 2 1 7.5
실시예 2 2 12.4
실시예 2 5 29.9
실험 결과, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 복합 발효 추출물과 일반 복합 추출물 모두 농도 의존적으로 P.acnes의 성장을 저해하였다.
또한, 복합 발효 추출물은 발효시키지 않은 일반 복합 추출물과 비교하여, 동량을 처리하였을때(2%, 5%) P.acnes의 성장 저해 활성값이 유의미하고 우수한 결과를 나타내었다(도 2).
따라서, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 복합 발효 추출물이 유산균 발효를 진행하지 않은 일반 복합 추출물에 비하여 여드름 유발균인 P.acnes에 대한 항균 효과가 보다 우수한 것을 알 수 있었다.
실험예 3 : 피부 장벽 강화 효능 확인
피부 장벽 강화 효능 시험을 진행하기 위해, CE formation assay를 진행하였다.
HaCaT 세포를 FBS, penicillin 포함 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건으로 배양하였다. 세포를 6 well plate에 분주하여 100% confluence 이상이 될 때까지 배양하였다.
배지에 실시예 2 및 비교예 1의 추출물을 아래의 표 4에 기재된 농도별로 3일 간격으로 2번 처리하여 6일간 배양하였다. 6일 후에 DPBS로 washing 후 SDS solution을 처리하고, 5분간 ice에 반응시킨 다음 초음파 처리하였다.
BCA protein assay kit를 이용하여 총 단백질을 정량하였다. 원심분리하여 상등액을 제거하고 20nM DTT SDS solution을 넣고 pellet을 suspension하여 90℃에서 20분간 heating 한 다음 310nm 흡광도를 측정하였다.
흡광도 값을 총 단백질 양으로 보정하여 control 대비 증가값(%)을 측정하여 그 결과를 아래의 표 4 및 도 3에 나타내었다.
추출물 처리 농도(중량%) CE formation 증가율(%)
비교예 1 1 4.3
비교예 1 2 12.3
실시예 2 1 16.8
실시예 2 2 30.5
실험 결과, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물과 일반 복합 추출물 모두 농도 의존적으로 각질 세포막의 증식능(CE formation assay)이 증가하였다.
복합 발효 추출물은 발효시키지 않은 일반 복합 추출물과 비교하여, 동량을 처리하였을때 각질 세포막의 증식능이 유의미하고 우수한 결과를 나타내었다(도 3).
따라서, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 복합 발효 추출물이 유산균 발효를 진행하지 않은 일반 복합 추출물에 비하여 우수한 피부 장벽 보호 효과가 있다는 것을 확인하였다.
제조예 3: 에센스 제조
하기 표 5에 나타낸 바와 같은 제형으로, 실시예 1 및 2, 및 비교예 2, 3 및 4를 유효 성분으로 함유하는 에센스를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
정제수에 수상 성분들을 혼합하여 수상을 제조하고, 점증제를 천천히 교반하면서 균일하게 분산시킨 후, pH 조절제를 첨가하였다. 치커리 뿌리 올리고사카라이드(prebioitcs), 히알루론산(postbiotics), 방부제 및 향료를 수상 성분에 첨가하여 혼합하고 여과하였다.
원료명 제형예 1
(중량%)		 제형예 2
(중량%)		 제형예 3
(중량%)		 제형예 4
(중량%)		 제형예 5
(중량%)
정제수 TO 100 TO 100 TO 100 TO 100 TO 100
이디티에이 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
아데노신 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04
나이아신아마이드 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00
부틸렌글라이콜 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00
아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10
메틸프로판다이올 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00
잔탄검 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07
알지닌 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10
추출물 실시예 1 2.00 - - - -
실시예 2 - 2.00 - - -
비교예 2 - - 2.00 - -
비교예 3 - - - 2.00 -
비교예 4 - - - - 2.00
치커리 뿌리 올리고사카라이드 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001
히알루론산 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001
방부제 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20
향료 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
실험예 4 : 피지 분비 억제 효능 확인
여드름 발생의 주요 원인인 피지 분비에 대한 억제율을 확인하기 위해, 피지량 측정기 Sebumeter SM815(Courage+Khazaka, Electronig GmbH,Germany)를 이용하여 피지 분비 억제 효능 시험을 진행하였다.
Sebumeter는 특수한 반투명 지질흡수 테이프를(Sebumeter Casette) 일정한 압력으로 피부에 접촉시킨 후 측정되는 피지량을 광학적 반사원리(Photometric reflection)로 단위면접장 유분량(μg/cm2)으로 측정하는 장비로써, 측정값과 유분량은 비례한다.
25~45세의 성인 10명을 대상으로 이마 부분을 6구획으로 나누어 상기 제형예 1 내지 5의 조성물을 일정량 도포한 후 흡수시켰다.
피지 분비 억제율을 확인하기 위해서 에센스 사용 전과 사용 6시간 후의 피지량을 각각 측정하여 그 결과를 아래의 표 7에 나타내었다.
　구분 사용 전 피지량
(μg/cm2)		 사용 6시간 후 피지량(μg/cm2) 억제율(%)
제형예 1
(실시예 1 함유)		 7.6 5.3 30.26
제형예 2
(실시예 2 함유)		 7.6 5.1 32.89
제형예 3
(비교예 2 함유)		 7.2 6.1 15.27
제형예 4
(비교예 3 함유)		 7.5 6.5 13.33
제형예 5
(비교예 4 함유)		 7.7 6.4 16.88
상기 표에서 억제율(%)은 사용전의 피지량에 대한 피지 감소량을 백분율로 나타낸 것이다.
실험 결과, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯의 복합 발효 추출물(실시예 1 및 2)을 함유한 에센스 제형예 1 및 2는 애플민트, 유자 또는 꽃송이버섯의 단일 발효 추출물(비교예 2 내지 4)을 함유하는 에센스 제형예 3 내지 5에 비하여 피지 억제율이 2배 이상 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.
특히, 애플민트:유자:꽃송이버섯을 1.1:0.9:3.0의 중량비로 함유하는 실시예 2의 복합 발효 추출물을 사용한 에센스 제형예 2가 가장 우수한 피지 억제 효과를 나타내어 피지 억제를 통한 여드름 억제 효능이 가능 우수한 것으로 예상할 수 있다.
실험예 5 : 피부 수분 증가 효능 확인
피부 장벽 강화에 중요한 피부 수분량을 확인하기 위해, Corneometer CM82 기기를 이용하여 피부 수분량 효능 시험을 진행하였다.
25~45세의 성인 10명을 대상으로 볼 부분을 6구획으로 나누어 상기 제형예 1 내지 5의 에센스 조성물을 일정량 도포한 후 흡수시켰다.
피지 분비 억제율을 확인하기 위해서 에센스 사용 전 및 사용 6시간 후의 피지량을 각각 측정하여 그 결과를 아래의 표 8에 나타내었다.
구분 사용 전 수분량 사용 6시간 후 수분량 증가율(%)
제형예 1
(실시예 1 함유)		 55.7 73.5 31.95
제형예 2
(실시예 2 함유)		 52.4 72.0 37.40
제형예 3
(비교예 2 함유)		 53.0 60.2 13.58
제형예 4
(비교예 3 함유)		 55.1 64.4 16.87
제형예 5
(비교예 4 함유)		 54.0 66.7 23.51
상기 표에서, 증가율(%)은 사용 전의 수분량에 대한 수분 증가량을 백분율로 나타낸 것이다.
실험 결과, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물(실시예 1 및 2)을 함유한 에센스 제형예 1 및 2가 단일 발효 추출물(비교예 2 내지 4)을 함유한 제형예 3 내지 5보다 더 우수한 수분량 증가율을 나타내었다.
특히, 애플민트:유자:꽃송이버섯을 1.1:0.9:3.0의 중량비로 함유하는 실시예 2의 복합 발효 추출물을 사용한 에센스 제형예 2가 가장 우수한 수분량 증가율을 나타내었으며, 이에 따라 가장 우수한 피부 장벽 강화 효과를 나타낼 것으로 예상된다.
실험예 6 : 안정도 시험
본 발명의 복합 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 안정도를 평가하기 위하여, 제형예 1 및 2의 에센스 조성물을 50℃, 실온, 5℃의 항온조(Incubator, Hanbeak 社)에 각각 보관하고, 3개월간 pH, 점도, 취 변화를 평가하여 그 결과를 아래의 표 9에 나타내었다.
　 　 1일 1주 2주 1개월 2개월 3개월
제형예 1 50℃ O O O O □ □
실온 O O O O O O
5℃ O O O O O O
제형예 2 50℃ O O O □ □ □
실온 O O O O O O
5℃ O O O O O O
O : 양호(pH, 점도, 특이취 이상 없음)
□ : 보통(pH, 점도, 특이취 약간의 변동은 있으나 규격내 적합)
X: 분리(pH, 점도, 특이취 이상 있음)
실험 결과, 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯을 포함하는 유산균 활용 복합 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 3개월 간 pH, 점도 및 특이취에 있어서 이상이 없다는 것을 확인하였다.
따라서, 유산균을 활용한 복합 발효 추출물이 화장료 조성물의 안정도에는 영향을 주지 않는다는 것을 확인하였다.
실험예 7 : 피부 자극도 평가
본 발명의 복합 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 자극을 확인하기 위해, 상기 제형예 1 및 2의 에센스 조성물을 사용하여 피부 첩포 시험(Human Patch Test)을 수행하였다.
본 시험은 임상시험 기관을 통해 진행하였다. 만 20~55세 성인 남녀 30명을 대상으로 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시킨 다음 제형예 1 및 2의 조성물을 25㎕씩 Finn Chamber에 적하시킨 후 피험자의 등 부위에 얹어 고정시켰다.
첩포는 24시간 후 제거하였으며, 첩포를 제거한 후에는 Marking Pen으로 시험부위를 표시하여 30분, 24시간, 48시간 경과 후에 시험부위를 각각 관찰하고 피부 반응을 평가하였다.
피부상태의 변화정도는 하기 표 10의 피부상태 평가 기준에 따라 분류하여 평가하였고, 그 결과를 표 11에 나타내었다.
반응(기호) 가중치 평가기준
- 0 무자극
± 0.5 미자극
+ 1 경자극
++ 2 중자극
+++ 3 강자극
반응(기호) 가중치 평가기준
제형예 1 - 0 무자극
제형예 2 - 0 무자극
실험 결과, 제형예 1 및 2의 화장료 조성물은 패치 제거 후 30분, 24시간, 48시간 모두에서 자극이 관찰되지 않았다.
이에 따라 상기 화장료 조성물은 모두 무자극성으로 피부에 자극이 없다는 것을 확인하였다.
이상으로 본 발명의 내용의 특정부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (14)

  1. 애플민트, 유자 및 꽃송이버섯 복합 발효 추출물을 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물로서,
    애플민트 추출물 100중량부에 대하여, 유자 추출물 20 내지 90중량부 및 꽃송이버섯 추출물 190 내지 800중량부를 포함하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 복합 발효 추출물이 락토바실러스(Lactobacillus), 비피도박테리움(Bifidobacterium) 및 스트렙토코커스(Streptococcus)로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 유산균에 의해 발효된 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  3. 삭제
  4. 제 1 항에 있어서,
    이눌린, 프락토올리고당, 갈락토오스올리고당, 자일로오스 올리고당 및 치커리 뿌리 올리고당으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 프리바이오틱스(prebiotics)를 더 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    젖산(lactic acid) 및 히알루론산(hyaluronic acid) 중 1종 이상의 포스트바이오틱스(postbiotics)를 더 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 마스크팩으로 구성된 군에서 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  7. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 항균에 의한 피부 개선용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  8. 제 7 항에 있어서,
    상기 항균이 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  9. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 항염증에 의한 피부 개선용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물
  10. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 피부 장벽 강화에 의한 피부 개선용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  11. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 여드름 피부 개선용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  12. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 피지 분비 억제에 의한 피부 개선용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  13. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 피부 보습에 의한 피부 개선용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  14. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    지루성 피부염, 아토피 피부염, 접촉성 피부염 및 건선으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 질환을 갖는 피부의 개선용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
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