CN104803894B - 2‑氨基苯甲醛肟衍生物及其制备方法与用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及2‑氨基苯甲醛肟衍生物及其制备方法与用途。本发明揭示具有下列化学式(I)的新颖的2‑氨基苯甲醛肟衍生物：或者它们的药学上可接受的盐类，其中各个取代基的定义如说明书与权利要求书中所界定。本发明也揭示所述衍生物的制备方法，以及它们在制备供用于治疗发炎性障碍的医药品上的用途。

Description

2-氨基苯甲醛肟衍生物及其制备方法与用途
技术领域
本发明有关于新颖的2-氨基苯甲醛肟衍生物(2-aminobenzaldehyde oximederivatives)，它们已被证实具有有效的抗发炎活性。本发明也有关于制备所述衍生物的方法，以及它们在制备医药品上的用途。
背景技术
嗜中性白血球(neutrophils)是一种重要的发炎性细胞，当它被各种不同的发炎性刺激(inflammatory stimulus)触发时，会产生细胞毒素(cytotoxins)[诸如超氧阴离子(superoxide anion,O2 ·-)]、活性氧族(reactive oxygen species,ROS)的前驱物(precursors)、生物活性脂质(bioactive lipids)以及丝氨酸蛋白酶(serineproteinases)。
嗜中性白血球弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)[也被称为白血球弹性蛋白酶(leukocyte elastase)或溶酶体弹性蛋白酶(lysosomal elastase)](EC3.4.21.37)以及蛋白酶3(proteinase3)[也被称为白血球蛋白酶3(leukocyte proteinase3)](EC3.4.21.76)的分子量分别约为29-33kDa以及29-32kDa，它们皆属于似胰凝乳蛋白酶的丝氨酸蛋白酶(chymotrypsin-like serine proteinases)，并且通常被储存在嗜中性白血球的嗜苯胺蓝颗粒(azurophil granules)中。
嗜中性白血球弹性蛋白酶以及蛋白酶3的活性皆会受到内生性抑制剂蛋白质(endogenous inhibitor protein)[诸如，α1-蛋白酶抑制剂(α1-protease inhibitor)以及α2-巨球蛋白(α2-macroglobluin)等]的调控而在身体内维持恒定(homeostasis)。当在发炎位置的嗜中性白血球弹性蛋白酶以及蛋白酶3被过量地释出时，它们会破坏细胞外基质(extracellular matrices)、细胞激素(cytokines)、凝固因子(clotting factors)、粘着分子(adhesion molecular)以及补体级联(complement cascade)的组分等，进而造成身体细胞或组织的损伤(injury)，最后导致发炎性障碍(inflammatory disorders)。
与嗜中性白血球弹性蛋白酶和/或蛋白酶3有关联的发炎性障碍包括：肺损伤(lung injury)[例如，急性肺损伤(active lung injury)]、慢性阻塞性肺脏疾病(chronicobstructive pulmonary disease)、急性呼吸窘迫症候群(acute respiratory distresssyndrome)、肺气肿(emphysema)、囊肿纤维化(cystic fibrosis)、局部大脑缺血(focalcerebral ischemic)、缺血性-再灌流损伤(ischemic-reperfusion injury)、肾丝球性肾炎(glomerulonephritis)、关节炎(arthritis)[例如，类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis)]、大水疱性天孢疮样病(bullous pemphigoid)、败血病(sepsis)以及韦格内氏肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis)(B.Korkmaz等人(2008),Biochimie,90:227-242；A.S.Cowburn等人(2008),Chest,134:606-612；Y.Nakano等人(2009),Journal ofSurgical Research,155:311-317；M.Hayakawa等人(2010),Shock,33:14-18；K.J.Kwon等人(2013),Neurosci.Lett.,548:67-72；B.Korkmaz等人(2013),Semin.Immunopathol.,35:411-421；B.Korkmaz等人(2013),Int.Immunopharmacol.,doi:10.1016/j.intimp.2013.07.003)。因此，对于用于治疗发炎性障碍的药物设计而言，抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶和/或蛋白酶3的活性似乎是重要的治疗标的。
西维来司钠(Sivelestat)(商品名为Elaspol)是全世界唯一一种可供临床上使用的嗜中性白血球弹性蛋白酶抑制剂，但是，西维来司钠的制程较为复杂以及具有危险性，并且具有较差的药物动力学以及具有器官毒性的风险，而使得它在临床上的应用受到限制。就申请人所知，目前只有日本以及韩国会使用西维来司钠来治疗与急性呼吸窘迫症候群有关联的呼吸衰竭(acute respiratory distress syndrome-related respiratoryfailure)(T.Stevens等人(2011),The Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics,339:313-320)。
EP0347168B1揭示具有下列化学式(I)的三甲基乙酸酯衍生物(pivalic acidester derivatives)：
有关所述具有化学式(I)的三甲基乙酸酯衍生物的各个基团的定义如EP0347168B1的说明书与权利要求书中所界定。从该专利案的表1中可见，20种化合物被证实具有人类嗜中性白血球弹性蛋白酶的抑制活性，其中包括下列2种化合物：
实施例2(63)，也就是N-[O-(p-三甲基乙酰基氧基苯)磺酰氨基苄酰基]甘氨酸{N-[O-(p-pivaloyloxybenzene)sulfonylaminobenzoyl]glycine}，其中R1是R2是H，R3是H，m是1，以及Y是SO2；以及
实施例5(3)，也就是三甲基乙酸的p-[N-(O-羧基苯基)氨磺酰基]苯基酯{p-[N-(O-carboxyphenyl)sulfamoyl]phenyl ester of pivalic acid}，其中R1是R2是H，R3是H，m是1，以及Y是SO2。
在长庚大学天然药物研究所的王翰翔所著硕士论文[名称：“Anthranilate衍生物的抗发炎活性与其化学结构相关性研究(The Sturcture-activity Relationships Studyof Anti-inflammatory Activity Anthranilate Derivatives)”]中，王翰翔合成出一系列具有下列化学式(II)的邻胺苯甲酯衍生物(anthranilate derivatives)：
有关所述具有化学式(II)的邻胺苯甲酯衍生物的各个基团的定义如该硕士论文中所界定。经由实验结果发现，在所述邻胺苯甲酯衍生物中，只有下列化合物能够有效地抑制人类嗜中性白血球弹性蛋白酶的释出并且抑制效用近似于西维来司钠所具者：
化合物WHH51，也就是2-(4-(三甲基乙酰基氧基)苯基磺酰氨基)苯甲酸甲酯[methyl2-(4-(pivaloyloxy)phenylsulfonamido)benzoate]，其中环A是苯环，R1是OCH3，R2是4-OCOC(CH3)3，W是CH，X是NH，Y是SO2，以及Z是单键；
化合物WHH52，也就是2-(4-(三甲基乙酰基氧基)苯基磺酰氨基)苯甲酸乙酯[ethyl2-(4-(pivaloyloxy)phenylsulfonamido)benzoate]，其中环A是苯环，R1是OCH2CH3，R2是4-OCOC(CH3)3，W是CH，X是NH，Y是SO2，以及Z是单键；以及
化合物WHH53，也就是三甲基乙酸[4-(N-(2-(2-甲氧基-2-氧乙基氨甲酰基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[4-(N-(2-(2-methoxy-2-oxoethylcarbamoyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate]，其中环A是苯环，R1是NHCH2COOCH3，R2是4-OCOC(CH3)3，W是CH，X是NH，Y是SO2，以及Z是单键。
然而，上述具有化学式(I)或化学式(II)的衍生物的制程较为复杂以及具有危险性，并且未被进一步证实具有蛋白酶3的抑制活性以及在活体内治疗发炎性障碍的效用。因此，对于药学产业中的药物化学家以及制造者而言，仍然存在有需要去发展可被容易地制备并且适合供应用于治疗发炎性障碍的新颖化合物。
发明内容
于是，在第一个方面，本发明提供一种具有下列化学式(I)的化合物：
或者它的药学上可接受的盐类，其中：
Y是羰基基团或磺酰基基团；
R1是选自于由下列所构成的群组：氢、羟基、C1-C4烷基以及C1-C4烷氧基；
R2是选自于由下列所构成的群组：羟基、甲氧基、-OR4OH以及-OR4NH2，其中R4是C1-C3烷基；以及
R3是氢或三甲基乙酰基氧基苯磺酰基基团。
本发明的化合物，Y是磺酰基基团。
本发明的化合物，该化合物选自于由下列所构成的群组：
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)丙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)丁基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-((羟基亚氨基)甲基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(Z)-4-(N-(2-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；以及
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(3-羟基丙氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯。
在第二个方面，本发明提供一种用于制备如上所述的具有化学式(I)的化合物的方法，其包含有令具有下列化学式(A)的化合物：
其中所述R1以及R3基团具有相同于那些为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义，
进行选自于下列的化学反应：
(i)与具有下列化学式(B)的化合物相反应：
其中Y具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义，
以形成具有下列化学式(II)的化合物：
其中所述R1以及R3基团以及Y具有相同于那些为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义；以及
令该具有化学式(II)的化合物与具有下列化学式(C)的化合物相反应：
R2NH2 (C)
其中该R2基团具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义；以及
(ii)与具有下列化学式(C)的化合物相反应：
R2NH2 (C)
其中该R2基团具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义，
以形成具有下列化学式(III)的化合物：
其中所述R1、R2以及R3基团具有相同于那些为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义；以及
令该具有化学式(III)的化合物与具有下列化学式(B)的化合物相反应：
其中Y具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义。
在第三个方面，本发明提供一种具有嗜中性白血球弹性蛋白酶抑制活性的药学组合物，其包含有如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
在第四个方面，本发明提供一种具有蛋白酶3抑制活性的药学组合物，其包含有如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
在第五个方面，本发明提供一种用于治疗发炎性障碍的药学组合物，其包含有如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
本发明的药学组合物，该发炎性障碍选自于下列所构成的群组：肺损伤、慢性阻塞性肺脏疾病、急性呼吸窘迫症候群、肺气肿、囊肿纤维化、局部大脑缺血、缺血性-再灌流损伤、肾丝球性肾炎、关节炎、大水疱性天孢疮样病、败血病以及韦格内氏肉芽肿病。
本发明的药学组合物，该发炎性障碍是肺损伤。
本发明的药学组合物，该发炎性障碍是急性肺损伤。
在第六个方面，本发明提供一种用于抑制在个体中的嗜中性白血球弹性蛋白酶的方法，其包含有对该个体投药以如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
在第七个方面，本发明提供一种用于抑制在个体中的蛋白酶3的方法，其包含有对该个体投药以如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
在第八个方面，本发明提供一种用于治疗具有或被怀疑具有发炎性障碍的个体的方法，其包含有对该个体投药以如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
在第九个方面，本发明提供一种如前所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供应用于制备用来抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶的医药品的用途。
在第十个方面，本发明提供一种如前所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供应用于制备用来抑制蛋白酶3的医药品的用途。
在第十一个方面，本发明提供一种如前所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供应用于制备用来治疗发炎性障碍的医药品的用途。
本发明的如上所述的用途，该发炎性障碍是选自于下列所构成的群组：肺损伤、慢性阻塞性肺脏疾病、急性呼吸窘迫症候群、肺气肿、囊肿纤维化、局部大脑缺血、缺血性-再灌流损伤、肾丝球性肾炎、关节炎、大水疱性天孢疮样病、败血病以及韦格内氏肉芽肿病。
本发明的如上所述的用途，该发炎性障碍是肺损伤。
本发明的如上所述的用途，该发炎性障碍是急性肺损伤。
附图说明
下面结合附图及实施例来对本发明进行详细说明，所以本发明在上述以及其他目的与特征，可通过参照下文的描述、随文检附的权利要求书和伴随的图式而变得更为明显，附图中：
图1显示在人类嗜中性白血球弹性蛋白酶(human neutrophil elastase)注射后的第10、20、30、40、50、60、90、120与240分钟，各组小鼠通过游标卡尺(vernier caliper)所测得的右后脚掌的水肿厚度变化，小鼠右后脚掌的水肿厚度是以小鼠右后脚掌在人类嗜中性白血球弹性蛋白酶注射后所测得的厚度减去在人类嗜中性白血球弹性蛋白酶注射前所测得者的差值来表示，其中“*”表示：当与病理对照组比较，p＜0.05；“**”表示：当与病理对照组比较，p＜0.01；以及“***”表示：当与病理对照组比较，p＜0.001；
图2显示在脂多醣(lipopolysaccharides,LPS)投予后的第6小时，在各组小鼠的肺脏组织中所测得的骨髓过氧化酶(myeloperoxidase,MPO)活性，其中“**”表示：当与病理对照组比较，p＜0.01；以及；
图3是切片染色图，其显示在LPS投予后的第6小时，从各组小鼠的肺脏中所取得的组织通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin)染色而被观察到的结果。
具体实施方式
为了开发可被容易地制备并且适合供应用于治疗发炎性障碍的新颖化合物，申请人经多方研究后发现：一系列新颖的2-氨基苯甲醛肟衍生物(2-aminobenzaldehyde oximederivatives)具有抗发炎的活性。
于是，本发明提供一种具有下列化学式(I)的化合物：
或者它的药学上可接受的盐类，其中：
Y是羰基基团或磺酰基基团；
R1选自于由下列所构成的群组：氢、羟基、C1-C4烷基以及C1-C4烷氧基；
R2选自于由下列所构成的群组：羟基、甲氧基、-OR4OH以及-OR4NH2，其中R4是C1-C3烷基；以及
R3是氢或三甲基乙酰基氧基苯磺酰基基团。
如本文中所用的，术语“烷基基团(alkyl group)”意指具有直链(straightchain)或支链部分(branched chain moieties)的饱和的单价烃基团(saturatedmonovalent hydrocarbon groups)。一般而言，烷基基团，本身或作为另一个基团的一部分，包括，但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲-丁基(sec-butyl)、叔-丁基(tert-butyl)、n-戊基、异戊基、新戊基(neopentyl)、正己基、异己基、庚基、异庚基、辛基，以及它们的各种支链异构物(branched chain isomers)等。较佳地，该烷基基团是C1-C4烷基基团。更佳地，该烷基基团是C1-C3烷基基团。
如本文中所用的，术语“烷氧基基团(alkoxy group)”意指具有化学式-OR’的基团，其中R’是如上所述的烷基基团。烷氧基基团，包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基等。在本发明的一个较佳具体例中，该烷氧基基团是C1-C4烷氧基基团。
依据本发明，所述具有化学式(I)的化合物的代表例包括，但不限于：
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)丙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)丁基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-((羟基亚氨基)甲基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；
三甲基乙酸[(Z)-4-(N-(2-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯；以及
三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(3-羟基丙氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯。
依据本发明，所述具有化学式(I)的化合物可呈其自由形式(free form)或其药学上可接受的盐类的形式。此外，依据本发明的具有化学式(I)的化合物也可有如立体异构物(stereoisomer)或者呈以水合物来代表的溶剂合物的形式而存在。因此，被预期的是：所述立体异构物和溶剂合物会落在本发明的技术概念中。
例示性的药学上可接受的盐类包括，但不限于：带有无机酸(诸如氯化氢、溴化氢、硫酸以及磷酸)的盐类；带有有机酸[诸如醋酸、马来酸(maleate)、酒石酸(tartrate)、甲磺酸(methanesulfonate)]的盐类；以及带有氨基酸(诸如精氨酸、天冬氨酸以及谷氨酸)的盐类。
本发明也提供一种用于制备如上所述的具有化学式(I)的化合物的方法，其包含有令具有下列化学式(A)的化合物：
其中所述R1以及R3基团具有相同于那些为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义，
进行选自于下列的化学反应：
(i)与具有下列化学式(B)的化合物相反应：
其中Y具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义，
以形成具有下列化学式(II)的化合物：
其中所述R1以及R3基团以及Y具有相同于那些为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义；以及
令该具有化学式(II)的化合物与一具有下列化学式(C)的化合物相反应：
R2NH2 (C)
其中该R2基团具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义；以及
(ii)与具有下列化学式(C)的化合物相反应：
R2NH2 (C)
其中该R2基团具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义，
以形成具有下列化学式(III)的化合物：
其中所述R1、R2以及R3基团具有相同于那些为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义；以及
令该具有化学式(III)的化合物与具有下列化学式(B)的化合物相反应：
其中Y具有相同于那个为上述具有化学式(I)的化合物所界定的定义。
依据本发明的具有化学式(I)的化合物经由活体外试验而被证实可以有效地抑制人类嗜中性白血球的弹性蛋白酶释出并且抑制人类嗜中性白血球弹性蛋白酶以及蛋白酶3的活性。此外，依据本发明的具有化学式(I)的化合物进一步经由动物试验而被证实能够有效地改善人类嗜中性白血球弹性蛋白酶-诱发的脚掌水肿以及脂多醣(lipopolysaccharides,LPS)-诱发的急性肺损伤(acute lung injury)。
基于上述，依据本发明的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类被预期具有治疗发炎性障碍的效用，因而可供应用于制备用来治疗发炎性障碍的医药品的用途。
于是，本发明提供一种用于治疗发炎性障碍的药学组合物，其包含有如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
如本文中所用的，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”意指预防(preventing)、减少(reducing)、减轻(alleviating)、改善(ameliorating)、缓解(relieving)、或控制(controlling)疾病(disease)或障碍(disorder)的一或多个临床征兆(clinical sign)，以及降低(lowering)、停止(stopping)或逆转(reversing)正在被治疗中的病况(condition)或症状(symptom)的严重性(severity)的进展(progression)。
依据本发明，该发炎性障碍包括，但不限于：肺损伤(lung injury)、慢性阻塞性肺脏疾病(chronic obstructive pulmonary disease)、急性呼吸窘迫症候群(acuterespiratory distress syndrome)、肺气肿(emphysema)、囊肿纤维化(cystic fibrosis)、局部大脑缺血(focal cerebral ischemic)、缺血性-再灌流损伤(ischemic-reperfusioninjury)、肾丝球性肾炎(glomerulonephritis)、关节炎(arthritis)[例如，类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)]、大水疱性天孢疮样病(bullous pemphigoid)、败血病(sepsis)以及韦格内氏肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis)(B.Korkmaz等人(2008),Biochimie,90:227-242；A.S.Cowburn等人(2008),Chest,134:606-612；Y.Nakano等人(2009),Journal of Surgical Research,155:311-317；M.Hayakawa等人(2010),Shock,33:14-18；K.J.Kwon等人(2013),Neurosci.Lett.,548:67-72；B.Korkmaz等人(2013),Semin.Immunopathol.,35:411-421；B.Korkmaz等人(2013),Int.Immunopharmacol.,doi:10.1016/j.intimp.2013.07.003)。较佳地，该发炎性障碍是肺损伤。在本发明的一个较佳具体例中，该发炎性障碍是急性肺损伤(active lung injury)。
依据本发明的药学组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成适合于非经肠道地(parenterally)、口服地(orally)或局部地(topically)投药的剂型，这包括，但不限于：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterile powder)、锭剂(tablet)、片剂(troche)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、外部制剂(external preparation)以及类似物。
依据本发明的药学组合物可以选自于由下列所构成的群组中的非经肠道途径(parenteral routes)来投药：腹膜内注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、肌肉内注射(intramuscular injection)以及静脉内注射(intravenous injection)。在本发明的一个较佳具体例中，该药学组合物被制成适于以腹膜内注射而被投药的剂型。
依据本发明的药学组合物可进一步包含有被广泛地使用于药物制造技术的药学上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，该药学上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、粘结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、稳定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，该药学上可接受的载剂包含有选自于由下列所构成的群组中的溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS)、含糖溶液、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)，以及它们的组合。
本发明也提供一种用于治疗具有或被怀疑具有发炎性障碍的个体的方法，其包含有对该个体投药以如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
基于如上所述的具有化学式(I)的化合物在抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶的活性上的效用，本发明也预期该具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供用于制备用来抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶的医药品的用途。
于是，本发明提供一种具有嗜中性白血球弹性蛋白酶抑制活性的药学组合物，其包含有如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
依据本发明，该药学组合物的投药剂型、投药途径以及可供使用的药学上可接受的载剂如上面所述。
本发明也提供一种用于抑制在个体中的嗜中性白血球弹性蛋白酶的方法，其包含有对该个体投药以如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
基于如上所述的具有化学式(I)的化合物在抑制蛋白酶3的活性上的效用，本发明也预期该具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供应用于制备用来抑制蛋白酶3的医药品的用途。
于是，本发明也提供一种具有蛋白酶3抑制活性的药学组合物，其包含有如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
依据本发明，该药学组合物的投药剂型、投药途径以及可供使用的药学上可接受的载剂如上面所述。
本发明也提供一种用于抑制在一个体中的蛋白酶3的方法，其包含有对该个体投药以如上所述的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述实施例只是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。
<实施例>
依据本发明的具有化学式(I)的化合物可以依据下面的反应途径与操作程序而被制得。
如反应途径1所示，将2-氨基苯甲醛(2-aminobenzaldehyde)或2-氨基苯基酮(2-aminophenyl ketone)(化合物a1)与p-三甲基乙酰基氧基苯磺酰氯(p-pivaloyloxybenzenesulfonyl chloride)反应而得到三甲基乙酸[4-(N-(2-酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯[4-(N-(2-acylphenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物a2)。接着，将化合物a2与羟胺盐酸盐(hydroxylamine hydrochloride)反应，借此而得到具有化学式(I)的化合物1、2、3或4。
如反应途径2所示，将化合物a1与甲氧胺盐酸盐(methoxylamine hydrochloride)反应而得到1-(2-氨基苯基)乙酮O-甲基肟[1-(2-aminophenyl)ethanone O-methyloxime](化合物a3)。接着，将化合物a3与p-三甲基乙酰基氧基苯磺酰氯反应，借此而得到具有化学式(I)且互为几何异构物(geometrical isomer)的化合物5与6。
如反应途径3所示，将化合物a1与羟胺盐酸盐反应而得到(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮肟[(E)-1-(2-aminophenyl)ethanone oxime](化合物a4)。之后，将化合物a4与3-氯丙-1-醇(3-chloropropan-1-ol)反应而得到(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮O-3-羟基丙基肟[(E)-1-(2-aminophenyl)ethanone O-3-hydroxypropyl oxime](化合物a5)。接着，将化合物a5与p-三甲基乙酰基氧基苯磺酰氯反应，借此而得到具有化学式(I)的化合物7。
另择地，化合物1-4可大体上依据上面反应途径2所示的操作程序而被制得，不同处在于：使用羟胺盐酸盐来替代甲氧胺盐酸盐，来与所对应的化合物a1反应。而化合物7可大体上依据上面反应途径2所示的操作程序而被制得，不同处在于：使用O-3-羟丙基羟胺盐酸盐(O-3-hydroxypropylhydroxyamine hydrochloride)来替代甲氧胺盐酸盐，来与所对应的化合物a1反应。
依据本发明的具有化学式(I)的代表性化合物被显示于下面的表1中。
表1.依据本发明的具有化学式(I)的代表性化合物
一般操作程序：
硅胶管柱层析法(silica gel column chromatography)通过使用硅胶60[筛孔(sieve mesh)为230-400，由Silicycle所制造]作为固相(solid phase)并组合以用于分离与纯化的适当洗提液(eluent)而被执行。
1H-NMR以及13C-NMR光谱是使用Brucker AVANCE-400MHz FT-NMR核磁共振光谱仪(nuclear magnetic resonance spectrometer)而被检测。以δ(以ppm为单位)来表示的1H-NMR以及13C-NMR的化学位移分别使用CDCl3(δ＝7.265ppm)以及CDCl3(δ＝77.0ppm)作为内部标准(internal standard)，而偶合常数(coupling constant)是以J(以Hz为单位)来表示。
电喷洒游离质谱(electrospray ionization mass spectra,ESI-MS)以及高解析度电喷洒游离质谱(high-resolution electrospray ionization mass spectra,HRESI-MS)是分别使用TSQ Quantum Triple Quadrupole质谱仪(Thermo Finnigan)以及Orbitrap质谱仪(Thermo Finnigan)而被检测。
合成例1.三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[(E)-4-(N-(2-(1-(hydroxyimino)ethyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物1)
A、三甲基乙酸[4-(N-(2-乙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯[4-(N-(2-acetylphenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate]的合成：
将2-氨基苯乙酮(2-aminoacetophenone)(1mmol)与p-三甲基乙酰基氧基苯磺酰氯(p-pivaloyloxybenzenesulfonyl chloride)(1.5当量)配于吡啶(pyridine)(5mL)中而得到混合物，然后将该混合物置于室温下进行反应历时4小时，继而于真空下移除溶剂。接着，将所形成的残余物通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝4:1)予以纯化，而得到三甲基乙酸[4-(N-(2-乙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(331mg，产率89％)。
B、标题化合物的合成：
将由上面第A项所得到的三甲基乙酸[4-(N-(2-乙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(0.2mmol)与羟胺盐酸盐(hydroxylamine hydrochloride)(1.5当量)配于乙醇中(5mL)而得到混合物，该混合物被回流加热历时14小时，继而进行减压浓缩以移除溶剂。接着，将所形成的残余物通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝4：1)予以纯化，而得到有如白色粉末的标题化合物1(105mg，产率27％)。
标题化合物被测得的性质：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：10.86(1H,s,NH),8.51(1H,s,OH),7.73(2H,d,J＝8,8Hz),7.65(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz),7.33(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz),7.28(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),7.11(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),7.09(2H,d,J＝8.8Hz),2.05(3H,s,CH3),1.33(9H,s,(CH3)3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ：176.9(s,-OCO-),157.3(s,C＝N),154.9(s,C-4’),136.5(s,C-1’),135.7(s,C-2),130.0(d,C-4),129.2(d,C-2’,6’),129.0(d,C-6),125.9(s,C-1),125.1(d,C-5),122.9(d,C-3),122.5(d,C-3’,5’),39.6(s,C(CH3)3),27.4(q,(CH3)3),12.8(q,CH3)。关于C19H23O5N2S[M+H]+的ESI发现值：390.9。关于C19H23O5N2S[M+H]+的HRESI计算值：391.1330；发现值：391.1322。
合成例2.三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)丙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[(E)-4-(N-(2-(1-(hydroxyimino)propyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物2)
A、1-(2-氨基苯基)丙-1-酮[1-(2-aminophenyl)propan-1-one]的合成：
将2-氨基苯甲腈(2-aminobenzonitrile)(1mmol)配于无水四氢呋喃(5mL)中，然后在氮气环境中，于0℃下将溴化乙基镁(ethylmagnesium bromide)溶液(10当量)添加至所形成的混合物中并进行反应历时4小时。接着，以1N的HCl溶液来将所形成的反应混物的pH值调整至落在大约3至4的范围内，继而以乙酸乙酯(ethyl acetate)与饱和的NaHCO3溶液来进行分配分离(partitioning)共计3次。之后，收取乙酸乙酯层并通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝4:1)予以纯化，而得到1-(2-氨基苯基)丙-1-酮(83.5mg，产率56％)。
B、三甲基乙酸[4-(N-(2-丙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯[4-(N-(2-propionylphenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate]的合成：
三甲基乙酸[4-(N-(2-丙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯大体上是依据上面合成例1的第A项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用由合成例2的第A项所得到的1-(2-氨基苯基)丙-1-酮(0.5mmol)来替代2-氨基苯乙酮(1mmol)。三甲基乙酸[4-(N-(2-丙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝4:1)被纯化(263mg，产率68％)。
C、标题化合物的合成：
化合物2大体上是依据上面合成例1的第B项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用由合成例2的第B项所得到的三甲基乙酸[4-(N-(2-丙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(0.5mmol)来替代三甲基乙酸[4-(N-(2-乙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(0.2mmol)。标题化合物2通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝4:1)被纯化而有如白色粉末(153g，产率90％)。
标题化合物被测得的性质：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：11.04(1H,s,NH),8.40(1H,s,OH),7.76(2H,d,J＝8,8Hz),7.67(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz),7.37(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz),7.27(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),7.10(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),7.09(2H,d,J＝8.8Hz),2.64(2H,q,J＝7.6Hz,CH2),1.32(9H,s,(CH3)3),0.99(3H,t,J＝7.6Hz,CH3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ：176,4(s,-OCO-),161.8(s,C＝N),154.4(s,C-4’),136.3(s,C-1’),135.9(s,C-2),129.6(d,C-4),128.8(d,C-2’,6’),128.3(d,C-6),124.4(s,C-1),123.6(d,C-5),122.0(d,C-3,3’,5’),39.2(s,C(CH3)3),27.0(q,(CH3)3),19.5(t,CH2CH3),10.8(q,CH2CH3)。关于C20H25O5N2S[M+H]+的ESI发现值：405.2；关于C20H24O5N2SNa[M+Na]+的ESI发现值：427.2；关于C40H48O10N4S2Na[M+M+Na]+的ESI发现值：830.8。关于C20H25O5N2S[M+H]+的HRESI计算值：405.1500；发现值：405.1500。
合成例3.三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(羟基亚氨基)丁基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[(E)-4-(N-(2-(1-(hydroxyimino)butyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物3)
A、1-(2-氨基苯基)丁-1-酮[1-(2-aminophenyl)butan-1-one]的合成：
1-(2-氨基苯基)丁-1-酮大体上是依据上面合成例2的第A项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用氯化丙基镁(propylmagnesium chloride)溶液来替代溴化乙基镁溶液。1-(2-氨基苯基)丁-1-酮通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝5:1)而被纯化(91mg，产率56％)。
B、三甲基乙酸[4-(N-(2-丁酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯[4-(N-(2-butyrylphenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate]的合成：
三甲基乙酸[4-(N-(2-丁酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯大体上是依据上面合成例1的第A项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用由合成例3的第A项所得到的1-(2-氨基苯基)丁-1-酮(0.5mmol)来替代2-氨基苯乙酮(1mmol)。三甲基乙酸[4-(N-(2-丁酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝5:1)而被纯化(293mg，产率73％)。
C、标题化合物的合成：
化合物3大体上是依据上面合成例1的第B项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用由合成例3的第B项所得到的三甲基乙酸[4-(N-(2-丁酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(0.5mmol)来替代三甲基乙酸[4-(N-(2-乙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(0.2mmol)。标题化合物3通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝5:1)被纯化而有如白色粉末(292mg，产率70％)。
标题化合物被测得的性质：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:11.07(1H,s,NH),7.77(2H,d,J＝8,8Hz),7.68(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz),7.36(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz),7.27(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),7.10(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),7.09(2H,d,J＝8.8Hz),2.61(2H,t,J＝7.6Hz,CH2),1.35(2H,sext.,J＝7.6Hz,CH2),1.32(9H,s,(CH3)3),0.89(3H,t,J＝7.6Hz,CH3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ：176,3(s,-OCO-),160.8(s,C＝N),154.4(s,C-4’),136.4(s,C-1’),136.0(s,C-2),129.6(d,C-4),128.7(d,C-2’,6’),128.4(d,C-6),124.3(s,C-1),123.7(d,C-5),122.0(d,C-3’,5’),121.8(d,C-3),39.2(s,C(CH3)3),27.9(t,CH2CH2CH3),27.0(q,(CH3)3),19.9(t,CH2CH2CH3),14.2(q,CH2CH2CH3)。关于C21H27O5N2S[M+H]+的ESI发现值：419.2；关于C21H26O5N2SNa[M+Na]+的ESI发现值：441.2。关于C21H27O5N2S[M+H]+的HRESI计算值：419.1643；发现值：419.1635。
合成例4.三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-((羟基亚氨基)甲基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[(E)-4-(N-(2-((hydroxyimino)methyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物4)
A、三甲基乙酸[4-(N-(2-甲酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯[4-(N-(2-formylphenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate]的合成：
三甲基乙酸[4-(N-(2-甲酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯大体上是依据上面合成例1的第A项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用2-氨基苯甲醛(2-aminobenzaldehyde)来替代2-氨基苯乙酮。三甲基乙酸[4-(N-(2-甲酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝5:1)被纯化(230mg，产率64％)。
B、标题化合物的合成：
化合物4大体上是依据上面合成例1的第B项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用由合成例4的第A项所得到的三甲基乙酸[4-(N-(2-甲酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(0.5mmol)来替代三甲基乙酸[4-(N-(2-乙酰基苯基)氨磺酰基)苯基]酯(0.2mmol)。标题化合物4通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝5:1)被纯化而有如白色粉末(214g，产率57％)。
标题化合物被测得的性质：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：10.52(1H,s,NH),8.05(1H,s,H),7.87(2H,d,J＝8.8Hz),7.64(1H,br.dd,J＝1.2,8.0Hz),7.26(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),7.14(2H,d,J＝8.8Hz),7.13(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz),7.05(1H,td,J＝1.2,8.0Hz),1.33(9H,s,(CH3)3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ：176,4(s,-OCO-),154.6(s,C＝N),152.1(s,C-4’),136.3(s,C-1’,2),132.1(d,C-4),130.5(d,C-6),128.9(d,C-2’,6’),123.7(d,C-5),122.2(d,C-3’,5’),119.5(s,C-1),119.1(d,C-3),39.2(s,C(CH3)3),27.0(q,(CH3)3)。关于C18H20N2O5SNa[M+Na]+的ESI发现值：399.1。关于C18H20N2O5SNa[M+Na]+的HRESI计算值：399.0983；发现值：399.0985。
合成例5.三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[(E)-4-(N-(2-(1-(methoxyimino)ethyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物5)以及三甲基乙酸[(Z)-4-(N-(2-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[(Z)-4-(N-(2-(1-(methoxyimino)ethyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物6)
A、1-(2-氨基苯基)乙酮O-甲基肟[1-(2-aminophenyl)ethanone O-methyloxime]的合成：
将2-氨基苯乙酮(1mmol)配于乙醇(10mL)中，接着加入甲氧胺盐酸盐(methoxylamine hydrochloride)(2.5当量)而得到混合物，该混合物于80℃下被回流加热历时12小时，继而进行减压浓缩以移除溶剂。接着，以水与二氯甲烷(dichloromethane,DCM)来进行分配分离共计3次。之后，收取有机层并以无水MgSO4予以干燥，继而予以过滤，接着进行减压浓缩以移除溶剂，而得到(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮O-甲基肟(154mg，产率94％)。
B、标题化合物的合成：
化合物5与6大体上是依据上面合成例1的第A项当中所述的操作程序而被制得，不同处在于：使用由合成例5的第A项所得到的1-(2-氨基苯基)乙酮O-甲基肟(0.5mmol)来替代2-氨基苯乙酮(1mmol)。标题化合物5与6通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝4:1)先后被纯化而分别有如白色粉末(242mg，产率60％)以及白色粉末(10mg，产率2.5％)。
标题化合物5被测得的性质：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：10.77(1H,s,NH),7.69(2H,d,J＝8,8Hz),7.65(1H,br.dd,J＝1.2,8.4Hz),7.30(1H,br.td,J＝1.2,8.4Hz),7.27(1H,d,J＝8.4Hz),7.11(1H,td,J＝1.2,8.4Hz),7.08(2H,d,J＝8.8Hz),4.06(3H,s,OCH3),2.02(3H,s,CH3),1.33(9H,s,(CH3)3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ：176.2(s,-OCO-),156.1(s,C＝N),154.4(s,C-4’),136.4(s,C-1’),135.4(s,C-2),129.7(d,C-6),128.7(d,C-2’,6’),128.5(d,C-4),125.0(s,C-1),124.5(d,C-5),122.3(d,C-3’,5’),121.9(d,C-3),62.6(q,OCH3),39.2(s,C(CH3)3),27.0(q,(CH3)3),13.2(q,CH3)。关于C20H23O5N2S[M–H]-的ESI发现值：403.4。关于C20H23O5N2S[M–H]-的HRESI计算值：403.1331；发现值：403.1322。
标题化合物6被测得的性质：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.66(2H,d,J＝8.8Hz),7.64(1H,br.dd,J＝1.2,7.6Hz),7.40(1H,td,J＝1.2,7.6Hz),7.23(1H,td,J＝1.2,7.6Hz),7.10(2H,d,J＝8.8Hz),7.05(1H,d,J＝1.2,7.6Hz),3.91(3H,s,OCH3),1.57(3H,s,CH3),1.36(9H,s,(CH3)3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ：176.3(s,-OCO-),154.6(s,C＝N),153.6(s,C-4’),136.7(s,C-1’),132.7(s,C-2),130.3(d,C-1),130.1(s,C-6),128.8(d,C-2’,6’),127.3(d,C-4),126.5(d,C-3),126.3(d,C-3),122.3(d,C-3’,5’),62.1(q,OCH3),39.2(s,C(CH3)3),27.0(q,(CH3)3),21.3(q,CH3)。关于C20H23NO5SNa[M+Na]+的ESI发现值：427.1。关于C20H23NO5SNa[M+Na]+的HRESI计算值：427.1294；发现值：427.1298。
合成例6.三甲基乙酸[(E)-4-(N-(2-(1-(3-羟基丙氧基亚氨基)乙基)苯基)氨磺酰基)苯基]酯[(E)-4-(N-(2-(1-(3-hydroxypropoxyimino)ethyl)phenyl)sulfamoyl)phenyl pivalate](化合物7)
A、(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮肟[(E)-1-(2-aminophenyl)ethanone oxime]的合成：
将2-氨基苯乙酮(1.5mmol)配于乙醇(5mL)中，接着加入羟胺盐酸盐(3.75当量)而得到混合物，该混合物于70℃下被回流加热历时16小时，继而进行减压浓缩以移除溶剂。接着，以水与乙酸乙酯来进行分配分离共计3次。之后，收取有机层并以无水MgSO4予以干燥，继而予以过滤，接着进行减压浓缩以移除溶剂，而得到(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮肟(215mg，产率95％)。
B、(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮O-3-羟基丙基肟[(E)-1-(2-aminophenyl)ethanoneO-3-hydroxypropyl oxime]的合成：
将由合成例6的第A项所得到的(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮肟(0.2mmol)配于无水MeCN(10mL)中，继而加入K2CO3(1.1当量)与3-氯丙-1-醇(3-chloropropan-1-ol)(5当量)而得到一混合物。该混合物被回流加热历时36小时，接着通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝2：1)予以纯化，而得到(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮O-3-羟基丙基肟(168mg，产率81％)。
C、标题化合物的合成：
将由合成例6的第B项所得到的(E)-1-(2-氨基苯基)乙酮O-3-羟基丙基肟(0.2mmol)配于二氯甲烷(5mL)中，继而加入吡啶(10当量)与三甲基乙酸[4-(氯磺酰)苯基]酯[4-(chlorosulfonyl)phenyl pivalate](2当量)而得到一混合物。之后，将该混合物置于室温下进行反应历时16小时，接着通过硅胶管柱层析法(正己烷/丙酮＝6：1)予以纯化，而得到有如一白色粉末的标题化合物7(43mg，产率49％)。
标题化合物被测得的性质：
1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ：10.82(1H,s,NH),7.71(2H,br.dd,J＝8.8Hz,H-3’,5’),7.63(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz,H-3),7.33(1H,dd,J＝1.2,8.0Hz,H-6),7.28(1H,td,J＝1.2,8.0Hz,H-5),7.09(2H,d,J＝8.8Hz,H-2’,6’),7.10(1H,td,J＝1.2,8.0Hz,H-4),4.39(2H,t,J＝6.4Hz,＝NOCH2-),3.82(2H,t,J＝6.0Hz,-CH2OH),3.82(2H,t,J＝6.0Hz,-CH2OH),2.06(2H,m,CH2),2.06(3H,s,CH3),1.33(9H,s,(CH3)3)。13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ：176,3(s,-OCO-),156.2(s,C＝N),154.4(s,C-4’),136.4(s,C-2),135.4(s,C-1’),129.7(d,C-4),128.6(d,C-6),128.6(d,C-2’,6’),124.8(d,C-5),124.4(s,C-1),122.0(d,C-3’,5’),121.7(d,C-3),72.1(t,＝NOCH2-),59.8(-CH2OH),39.2(s,C(CH3)3),32.2(t,CH2),27.0(q,(CH3)3),13.3(q,CH3)。关于C22H29N2O6S[M+H]+的ESI发现值：449.2；关于C22H28N2O6SNa[M+Na]+的ESI发现值：471.2。关于C22H29N2O6S[M+H]+的HRESI计算值：449.1741；发现值：449.1761。
药理实施例(Pharmacological Examples)
为了决定依据本发明的化合物1-7的生物活性，下面的分析被执行。
实验材料：
1.无Ca2+的汉克氏平衡盐溶液(Ca2+-free Hank’s balanced salt solution)：
下面实施例中所使用的无Ca2+的汉克氏平衡盐溶液(pH7.4)具有下面表2所示的配方。
表2.无Ca2+的汉克氏平衡盐溶液的配方
2.汉克氏平衡盐溶液(Hank’s balanced salt solution,HBSS)：
下面实施例中所使用的汉克氏平衡盐溶液(pH7.4)具有下面表3所示的配方。
表3.汉克氏平衡盐溶液的配方
3.人类嗜中性白血球的制备：
20至34岁的健康人类志愿者使用由长庚医疗财团法人人体试验伦理委员会(Chang Gung Medical Foundation Institutional Review Board)所认可的操作程序而被募集。
首先，将来自20至34岁的健康人类志愿者中通过静脉穿刺(venipuncture)所抽取的血液在室温下以650g离心历时10分钟后，移除含有血小板(platelet)的上清液(supernatant)，继而将等体积的3％聚葡萄糖T500(dextran T500)溶液加入至残余物中并予以混合均匀，接而在室温下静置历时25分钟。接着，缓慢地将含有嗜中性白血球的上清液转移至含有4/3倍体积的Ficoll-PaqueTM Plus(14-1440-03,GE Healthcare,Sweden)的离心管中，继而于4℃下以400g进行密度-梯度离心(density-gradient centrifugation)历时40分钟。之后，将沉淀物(pellet)处理以低张溶液(hypotonic solution)(0.2％NaCl)历时30秒而使得红血球涨破，接而于4℃下以200g离心历时8分钟以除去残存的红血球。最后，将所分离出的嗜中性白血球[含有>98％可活性细胞(viable cells)，其是通过锥虫蓝排除法(trypan blue exclusion method)所测定出]再悬浮于无Ca2+的汉克氏平衡盐溶液(pH7.4)中，借此而生成浓度为1×107细胞/mL的嗜中性白血球悬浮液。该嗜中性白血球悬浮液被储存在4℃下备用。
4.实验动物：
在下面的实施例中所使用的雄性C57BL/6小鼠(6至8周大，体重约20至25g)购自于乐斯科生物科技股份有限公司(BioLasco Taiwan Co.,Ltd.)。所有小鼠被饲养于一个光照与黑暗各为12小时、室温维持在21-24℃、相对湿度维持在40％-70％以及换气率维持在75％-100％的独立空调的动物房内，而且水分与饲料被充分地供给。有关实验动物的饲养环境以及实验过程均符合国际实验动物管理标准并且通过长庚大学实验动物中心的审查。
一般实验方法：
1.统计学分析(statistical analysis)：
在下面的实施例中，各组的实验被重复3次，而实验数据以“平均值(mean)±平均值的标准误差(standard error of the mean,SEM)”来表示。所有的数据通过史徒登氏t-试验(Student’s t-test)或单因子变异数分析(one-way analysis of variance,one-wayANOVA)，继而以特奇氏试验(turkey’s test)来作分析，以评估各组间的差异性。若所得到的统计分析结果是p＜0.05，代表有统计学显著性(statistical significance)。
药理实验1.本发明的化合物1-7的抗发炎活性的评估
A、弹性蛋白酶活性(elastase activity)的测定：
首先，将化合物1-7分别配于50μL的缓冲液A[含有20mM Tris-HCl(pH7.4)、0.1％NaN3以及5mM CaCl2]中，然后将所得到的化合物溶液1-7分别添加至一个96-井培养盘(96-well plate)的各井中。另外，等体积的缓冲液A被用来作为对照组。接着，对该96-井培养盘的各井予以加入25μL的配于缓冲液B[含有20mM Tris-HCl(pH7.4)以及0.1％NaN3]中的人类嗜中性白血球弹性蛋白酶(Enzo)(200nM)，继而予以加入25μL的配于缓冲液B中的MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-p-硝基苯胺(500μM)，并且在培养箱(30℃)中进行反应历时30分钟。之后，以ELISA读取机(ELISA reader)(ThermoLabsystem,USA)在波长405nm下测量吸光值(OD405)的变化。
化合物1-7抑制50％的人类嗜中性白血球弹性蛋白酶活性的浓度(IC50)是通过计算待测化合物会降低人类嗜中性白血球弹性蛋白酶所造成的吸光值达50％(与对照组相较下)的浓度而从曲线的线性部分被测定出，并以平均值±SEM(n＝3)来表示。另外，在本实验中，西维来司钠被用来作为正对照组，并与待测化合物进行相同的实验。所得到的结果被显示于下面的表4中。
表4.本发明的化合物1-7对于人类嗜中性白血球弹性蛋白酶活性的影响
化合物 1 2 3 4
IC50(μM)a 51.26±7.88 679.37±29.72 367.5±16.69 394.44±22.54
化合物 5 6 7 西维来司钠b
IC50(μM) 323.89±38.46 367.18±27.35 158.8±15.50 65.04±4.26
a：IC50数值是以平均值±SEM(n＝3)来表示。
b：西维来司钠被用来作为正对照组。
从表4所示的结果可知，本发明的化合物1-7能够有效地抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶的活性，特别地，化合物1表现出明显优越的抑制效用，甚至优于西维来司钠所具者。接着，申请人选出化合物1-6来进行下面的分析。
B、人类嗜中性白血球弹性蛋白酶释出(human neutrophil elastase release)的分析：
首先，将化合物1-6分别配于100％DMSO中，而得到化合物溶液1-6。接着，将750μL的上面“实验材料”的第3项“人类嗜中性白血球的制备”当中所得到的嗜中性白血球悬浮液(1.2×106细胞/mL)添加以750μL的配于汉克氏平衡盐溶液(pH7.4)中的MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-p-硝基苯胺(MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide)(454454,Calbiochem)(200μM)[作为人类嗜中性白血球弹性蛋白酶的基质(substrate)]，并在37℃下予以搅拌历时2分钟。之后，分别加入1.5μL的上面所得到的所述化合物溶液，继而在37℃下进行反应历时2分钟。另外，对照组是以100％DMSO来取代化合物溶液。接着，将1.5μL的细胞松弛素B(cytochalasin B)(0.5μg/mL)分别加入各井中并培育历时3分钟，继而加入1.5μL的FMLP(0.1μM)反应历时10分钟以活化嗜中性白血球细胞。最后，将所形成的混合物以分光光度计(U-3010,Hitachi)在波长405nm下测量吸光值(OD405)的变化。
化合物1-6抑制50％的人类嗜中性白血球弹性蛋白酶释出的浓度(IC50)通过计算待测化合物会降低经FMLP活化的细胞的吸光值达50％(与对照组的细胞相较下)的浓度而从曲线的线性部分被测定出，并以平均值±SEM(n＝3)来表示。另外，在本实验中，西维来司钠(sivelestat)被用来作为正对照组(positive control)，并与待测化合物进行相同的实验。所得到的结果被显示于下面的表5中。
表5.本发明的化合物1-6对于人类嗜中性白血球的弹性蛋白酶释出的影响
a：IC50数值是以平均值±SEM(n＝3)来表示。
b：西维来司钠被用来作为正对照组。
从表5所示的结果可知，本发明的化合物1-6能够有效地抑制人类嗜中性白血球的弹性蛋白酶释出，特别地，化合物1表现出明显优越的抑制效用，甚至优于西维来司钠所具者。
综合以上的实验结果，申请人认为：本发明的具有化学式(I)的化合物具有优异的抗发炎活性。为了进一步确认本发明的化合物是否具有抑制蛋白酶3(proteinase3)活性的能力，申请人依据表4与表5所示的结果选出化合物1来进行下面的实验。
药理实验2.本发明的化合物1在抑制蛋白酶3活性上的效用评估
首先，将化合物1配于50μL的缓冲液C{含有100mM HEPES(pH7.5)、500mM NaCl、10％DMSO以及170mM5,5’-二硫双-(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid),DTNB]}中，然后将所得到的化合物溶液1添加至一个96-井培养盘的各井中，另外，等体积的缓冲液C被用来作为对照组。接着，对该96-井培养盘的各井予以加入25μL的配于缓冲液C中的蛋白酶3(Merck)(200nM)，继而予以加入25μL的配于缓冲液C中的Boc-Ala-Ala-Nve-SBzl(400μM)，并且在培养箱(30℃)中进行反应历时180分钟。之后，以ELISA读取机在波长405nm下测量吸光值(OD405)的变化。
化合物1抑制50％的蛋白酶3活性的浓度(IC50)通过计算待测化合物会降低蛋白酶3所造成的吸光值达50％(与对照组相较下)的浓度而从曲线的线性部分被测定出，并以平均值±SEM(n＝3)来表示。另外，在本实验中，西维来司钠被用来作为正对照组，并与待测化合物进行相同的实验。所得到的结果被显示于下面的表6中。
表6.本发明的化合物1对于蛋白酶3活性的影响
化合物 1 西维来司钠b
IC50(μM)a 221.56±17.31 338.22±28.35
a：IC50数值是以平均值±SEM(n＝3)来表示。
b：西维来司钠被用来作为正对照组。
从表6所示的结果可知，本发明的化合物1能够有效地抑制蛋白酶3的活性，特别地，化合物1所表现出的抑制效用甚至优于西维来司钠所具者。申请人据此而推论：本发明的具有化学式(I)的化合物会同时抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶以及蛋白酶3的活性，进而达到抗发炎的效用。因此，申请人认为本发明的具有化学式(I)的化合物被预期可供用于治疗发炎性障碍。为了进一步确认本发明的化合物在治疗发炎性障碍上的能力，申请人选用化合物1来进行下面的实验。
药理实验3.本发明的化合物1对于人类嗜中性白血球弹性蛋白酶-诱发的脚掌水肿的影响
在本实验中，申请人通过测量带有白血球弹性蛋白酶-诱发的脚掌水肿的小鼠的脚掌厚度来评估本发明的化合物1的活体内抗发炎效用(in vivo anti-inflammationeffects)。
实验方法：
首先，将雄性C57BL/6小鼠随机分成4组(每组n＝6)，其中包括1个病理对照组、1个正对照组以及2个实验组(也就是，实验组1与2)，各组小鼠通过戊巴比妥(pentobarbital)(50mg/kg)的腹膜内注射(intraperitoneal injection)而被麻醉。接着，病理对照组以及正对照组的小鼠分别被腹膜内注射以25μL的生理食盐水以及西维来司钠[配于DMSO/生理食盐水(v/v＝7:3)中，剂量为100mg/kg]，而实验组1与2的小鼠分别被腹膜内注射以25μL的化合物1[配于DMSO/生理食盐水(v/v＝7:3)中，剂量分别为50以及100mg/kg]。在投药后的第60分钟，将25μL的人类嗜中性白血球弹性蛋白酶(0.0075U，5μg/mL)(配于生理食盐水中)注射至各组小鼠的右后脚掌以诱发小鼠的右后脚掌水肿。
在人类嗜中性白血球弹性蛋白酶注射前以及注射后的第10、20、30、40、50、60、90、120以及240分钟，使用游标卡尺(vernier caliper)(SL-A,Insize)来测量各组小鼠的右后脚掌的厚度。小鼠右后脚掌的水肿厚度是以小鼠右后脚掌在人类嗜中性白血球弹性蛋白酶注射后所测得的厚度减去在人类嗜中性白血球弹性蛋白酶注射前所测得者的差值来表示。
结果：
图1显示在人类嗜中性白血球弹性蛋白酶注射后的第10、20、30、40、50、60、90、120以及240分钟，各组小鼠通过游标卡尺所测得的右后脚掌的水肿厚度变化。从图1可见，与病理对照组相较下，实验组1与2的脚掌水肿厚度皆有显著的下降。特别地，在整个实验期间，实验组2的脚掌水肿厚度皆低于正对照组所具者。这个实验结果显示：本发明的化合物1能够在小鼠体内有效地改善人类嗜中性白血球弹性蛋白酶-诱发的脚掌水肿。申请人据此而推论：本发明的具有化学式(I)的化合物可通过抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶的活性来达到活体内抗发炎效用，因而具有治疗发炎性障碍的能力。
药理实验4.本发明的化合物1对于脂多醣(lipopolysaccharides,LPS)-诱发的急性肺损伤(acute lung injury)的影响
在本实验中，申请人通过LPS的气管内滴入(intratracheal instillation)来诱发小鼠产生急性肺损伤，继而测量小鼠的肺脏组织中的骨髓过氧化酶(myeloperoxidase,MPO)活性以及进行肺脏组织的组织病理学检验(histopathological examination)，以评估本发明的化合物1的活体内抗发炎效用。
实验方法：
A、急性肺损伤的诱发：
首先，将雄性C57BL/6小鼠随机分成4组(每组n＝6)，其中包括1个正常对照组、1个病理对照组、1个正对照组以及1个实验组，各组的小鼠通过戊巴比妥(50mg/kg)的腹膜内注射而被麻醉。接着，正常对照组与病理对照组的小鼠分别被腹膜内注射以50μL的生理食盐水，正对照组的小鼠被腹膜内注射以西维来司钠[配于DMSO/生理食盐水(v/v＝7:3)中，剂量为100mg/kg]，而实验组的小鼠被腹膜内注射以化合物1[配于DMSO/生理食盐水(v/v＝7:3)中，剂量为100mg/kg]。
在投药后的第60分钟，对各组小鼠进行气管造口术(tracheostomy)而使其气管产生切口，继而将PE10导管(PE10catheter)插入(cannulated)该切口中。接着，正常对照组的小鼠经由该PE10导管而被投予50μL的生理食盐水，而其他各组的小鼠经由该PE10导管而被投予50μL的LPS(配于生理食盐水中，剂量为800μg/只)以诱发小鼠的急性肺损伤。
在LPS投予后的第6小时，将各组小鼠的胸腔(chest)打开并通过取出心脏而予以牺牲，接着将左肺门(left lung hilum)结扎(ligating)，继而取出左侧肺脏，并将0.5g的左侧肺脏的组织拿来进行下面第B项的分析，而其余的左侧肺脏的组织则拿来进行下面第C项的分析。
B、MPO活性分析：
将0.5g的上面第A项中所得到的各组小鼠的左侧肺脏组织悬浮于2.5mL的均质缓冲液(homogenization buffer)[含有0.5％十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethylammonium bromide)、0.25％蛋白酶抑制剂(P2714,Sigma)以及50mM磷酸缓冲液(pH6.0)]中，继而于4℃下以超音波处理器(ultrasonicator)进行震荡共计3次，每次历时30秒，然后置于冰上进行冷却。接着，在4℃下以12,000rpm进行离心历时10分钟后，收集上清液并通过Bio-Rad分析套组来测定所收集的上清液内的总蛋白质浓度(total protein concentrations)(mg/mL)。
之后，对一个96-井培养盘的各井分别加入290μL的50mM磷酸缓冲液、3μL的20g/Lo-联大茴香胺盐酸盐(o-dianisidine hydrochloride)溶液(作为MPO的基质)以及3μL的20mM H2O2，继而将10μL的上清液添加至各井中来进行反应历时5分钟。接着，各井分别被添加以3μL的30％叠氮化钠(sodium azide)来停止反应，最后，所形成的反应混合物以ELISA读取机在波长460nm下测量吸光值(OD460)。
另一方面，将各个MPO标准溶液(Standard Solution)(Sigma,St.Louis,MO)的浓度(5U/mL、2.5U/mL、1.25U/mL、0.625U/mL、0.3125U/mL、0.15625U/mL、0.078125U/mL)与其相对应的吸光值(OD460)作图，可得到标准曲线(standard curve)。各组所测得的吸光值(OD460)通过该标准曲线而被换算成MPO的浓度(U/mL)，再除以各组的总蛋白质浓度而被换算成MPO的活性(U/mg总蛋白质)。
C、组织病理学检验：
将上面第A项中所得到的各组小鼠的左侧肺脏组织以PBS予以清洗，接着以固定溶液[配于PBS中的10％低聚甲醛(paraformaldehyde)]进行固定处理(fixation)历时24小时，继而进行乙醇脱水处理(ethanol dehydrating)。之后，将经脱水的组织样品以石蜡(paraffin)予以包埋(embedding)，继而进行切片处理，借此而得到厚度为4-6μm的切片。经脱蜡的切片以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin)来进行染色，然后使用光学显微镜(IX81,Olympus)在为400X的放大倍率下来进行型态观察并使用数字相机(DP72,Olympus)来拍照。
结果：
A、MPO活性分析：
图2显示在LPS投予后的第6小时，在各组小鼠的肺脏组织中所测得的MPO活性。从图2可见，与正常对照组的小鼠相较下，病理对照组的小鼠的MPO活性有显著地上升，这表示LPS成功地诱发小鼠产生急性肺损伤。而与病理对照组的小鼠相较下，实验组的小鼠的MPO活性有显著地下降。
B、组织病理学检验：
图3是切片染色图，其显示在LPS投予后的第6小时，从各组小鼠的肺脏中所取得的组织通过苏木精-伊红染色而被观察到的结果。从图3可见，与正常对照组相较下，病理对照组的小鼠的肺脏组织切片当中有出现肺泡水肿(alveolar edema)与间质性肺水肿(interstitial lung edema)以及白血球浸润，这表示LPS成功地诱发小鼠产生急性肺损伤。而与病理对照组相较下，实验组的小鼠的肺脏组织切片呈现较轻微的肺泡水肿与间质性肺水肿以及白血球浸润的现象。
综合以上的实验结果可知：本发明的化合物1能够在小鼠体内有效地改善脂多醣-诱发的急性肺损伤。申请人据此而推论：本发明的具有化学式(I)的化合物可通过抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶以及蛋白酶3的活性来达到活体内抗发炎效用，因而具有治疗发炎性障碍的能力。因此，申请人认为本发明的具有化学式(I)的化合物具有发展成为抗发炎试剂的高潜力。
于本说明书中被引述的所有专利和文献以其整体被并入本案作为参考资料。若有所冲突时，本案详细说明(包含界定在内)将占上风。
虽然本发明已参考上述特定的具体例被描述，明显地在不背离本发明的范围和精神下可作出很多的修改和变化。因此意欲的是，本发明只受如随文检附的权利要求书所示者的限制。

Claims (14)

1.一种具有下列化学式(I)的化合物：
或者它的药学上可接受的盐类，其特征在于，
Y是磺酰基基团；
R1是甲基；
R2是羟基；以及
R3是氢。
2.一种具有嗜中性白血球弹性蛋白酶抑制活性的药学组合物，其特征在于，该药学组合物包含有如权利要求1中所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
3.一种具有蛋白酶3抑制活性的药学组合物，其特征在于，该药学组合物包含有如权利要求1中所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
4.一种用于治疗发炎性障碍的药学组合物，其特征在于，该药学组合物包含有如权利要求1中所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类。
5.如权利要求4所述的药学组合物，其特征在于，
该发炎性障碍选自于下列所构成的群组：肺损伤、慢性阻塞性肺脏疾病、急性呼吸窘迫症候群、肺气肿、囊肿纤维化、局部大脑缺血、缺血性-再灌流损伤、肾丝球性肾炎、关节炎、大水疱性天孢疮样病、败血病以及韦格内氏肉芽肿病。
6.如权利要求5所述的药学组合物，其特征在于，该发炎性障碍是肺损伤。
7.如权利要求6所述的药学组合物，其特征在于，该发炎性障碍是急性肺损伤。
8.一种如权利要求1中所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供应用于制备用来抑制嗜中性白血球弹性蛋白酶的医药品的用途。
9.一种如权利要求1中所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供应用于制备用来抑制蛋白酶3的医药品的用途。
10.一种如权利要求1中所界定的具有化学式(I)的化合物或者它的药学上可接受的盐类供应用于制备用来治疗发炎性障碍的医药品的用途。
11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，
该发炎性障碍是选自于下列所构成的群组：肺损伤、慢性阻塞性肺脏疾病、急性呼吸窘迫症候群、肺气肿、囊肿纤维化、局部大脑缺血、缺血性-再灌流损伤、肾丝球性肾炎、关节炎、大水疱性天孢疮样病、败血病以及韦格内氏肉芽肿病。
12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，该发炎性障碍是肺损伤。
13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，该发炎性障碍是急性肺损伤。
14.一种用于制备如权利要求1中所界定的具有化学式(I)的化合物的方法，其特征在于，
该方法包含有令具有下列化学式(A)的化合物：
其中所述R1以及R3基团具有相同于那些在权利要求1中所界定的定义，
进行选自于下列的化学反应：
(i)与具有下列化学式(B)的化合物相反应：
其中Y具有相同于那个在权利要求1中所界定的定义，
以形成具有下列化学式(II)的化合物：
其中所述R1以及R3基团以及Y具有相同于那些在权利要求1中所界定的定义；以及
令该具有化学式(II)的化合物与具有下列化学式(C)的化合物相反应：
R2NH2 (C)
其中该R2基团具有相同于那个在权利要求1中所界定的定义；以及(ii)与具有下列化学式(C)的化合物相反应：
R2NH2 (C)
其中该R2基团具有相同于那个在权利要求1中所界定的定义，
以形成具有下列化学式(III)的化合物：
其中所述R1、R2以及R3基团具有相同于那些在权利要求1中所界定的定义；以及
令该具有化学式(III)的化合物与具有下列化学式(B)的化合物相反应：
其中Y具有相同于那个在权利要求1中所界定的定义。
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