CN104800277A - 一种黄芪甘草口服液的制备方法及其产品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种黄芪甘草口服液的制备方法及其产品。所述方法包括以下步骤：S1，用黄芪药材制备黄芪提取物；S2，用甘草药材制备甘草提取物；以及S3，将所述黄芪提取物和所述甘草提取物用水配制为黄芪甘草口服液。本发明的制备方法对设备要求不高，制备工艺简单，可提高生产效率。采用本发明方法制备的口服液澄清度更高，稳定性更好，效果更显著。

Description

一种黄芪甘草口服液的制备方法及其产品

技术领域

本发明涉及一种黄芪甘草口服液的制备方法及其产品。

背景技术

目前我国的养禽业高速发展，已步入世界禽业大国行列，但我国禽病的发生和危害十分严重，禽类病毒性免疫抑制疾病是当前困扰养禽业的一类重要传染病，由于免疫抑制状态的存在，常常造成疫苗免疫效果差或免疫失败，极易并发和继发其他传染病和寄生虫病，增加了家禽的发病率和治疗难度，给养禽业造成巨大的经济损失。目前使用的免疫增强剂种类很多，包括微生物免疫增强剂，如干扰素；化学性免疫增强剂，如左旋咪唑等，其存在着高剂量产生免疫抑制、体内残留时间长等缺点，中药免疫增强剂具有资源丰富、安全方便、功能全面、无残留及毒副作用小等优点，因此，研制和开发活性强的新型中药免疫增强剂已成为迫切需要。

黄芪甘草口服液处方来源于《太平惠民和剂局方》中的“黄芪六一散”，由黄芪和甘草两味中药组成，具有补中益气、扶正祛邪的功效，临床试验结果表明，黄芪甘草口服液可以提高鸡群细胞免疫和体液免疫功能，增强抵御疾病的能力，降低鸡群的发病率与死亡率，提高养殖经济效益。

黄芪甘草口服液的活性成分主要为多糖和甘草酸，现代药理学研究表明黄芪多糖和甘草多糖具有增强机体免疫力的功效，甘草酸具有非特异性免疫调节作用。采用传统的水提醇沉法制备黄芪甘草口服液，醇沉除杂的同时也将大部分多糖类活性成分除去，导致质量下降，影响临床疗效，而且醇沉过程中使用大量乙醇，工艺成本较高，时间较长；而采用水沉法作为纯化方法时，除去的杂质较少，制备的口服液稳定性较差。

为有效地去除杂质，增加稳定性，并保留多糖类活性成分，有必要建立一种合理的黄芪甘草口服液的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种黄芪甘草口服液的制备方法，以达到多糖等有效成分含量高且质量稳定的效果。

本发明提供了一种的黄芪甘草口服液的制备方法，包括以下步骤：

S1，用黄芪药材制备黄芪提取物；

S2，用甘草药材制备甘草提取物；

S3，将所述黄芪提取物和所述甘草提取物用水配制为黄芪甘草口服液。

在一个具体实施方式中，所述黄芪提取物的制备步骤包括：

a)将黄芪药材加水浸泡，提取后浓缩，优选浓缩至浓缩液的比重为1.10-1.15；

b)将步骤a)得到的浓缩液先用果胶酶和蛋白酶进行处理，再用壳聚糖醋酸溶液进行处理；

c)将步骤b)得到的混合物进行过滤，用碱液将滤液调节至弱酸至中性，优选调至pH值为5.0-7.0，然后浓缩，即得黄芪提取物。

在一个具体实施方式中，步骤a)中，所述提取为低温减压回流提取。优选地，所述低温减压回流提取的条件是：真空度为-0.03-0.05MPa，温度为60-70℃，提取次数为2-4次，提取时间为1-3h。在一个实施例中，所述提取的条件是：真空度为-0.05MPa，在70℃下，提取3次，每次2h。优选地，步骤a)中，以重量计，水的用量为黄芪药材的6-10倍。

在一个具体实施方式中，在步骤b)中，果胶酶的用量为1-2g/100mL浓缩液。

在一个具体实施方式中，在步骤b)中，蛋白酶的用量为1-2g/100mL浓缩液。

在一个具体实施方式中，在步骤b)中，果胶酶和蛋白酶的质量比为1:2-2:1。

在一个具体实施方式中，在步骤b)中，壳聚糖醋酸溶液的加入量与浓缩液的体积比为0.15:1-0.2:1。

根据一个具体实施方式，所述甘草提取物的制备步骤包括：

A)用氨水溶液浸泡甘草药材，提取后浓缩，优选浓缩至浓缩液的比重为1.10-1.15；

B)将步骤A)得到的浓缩液调节pH值为5.0-6.0，然后先用果胶酶和蛋白酶进行处理，再用壳聚糖醋酸溶液进行处理；

C)将步骤B)所得的混合物进行过滤，调节pH值为5.0-7.0，浓缩，即得甘草提取物。

根据一个具体实施方式，所述提取为低温减压回流提取。优选地，所述低温减压回流提取的条件是：真空度为-0.03-0.05MPa，温度为60-70℃，提取次数为2-4次，提取时间为1-3h。在一个实施例中，所述提取的条件是：真空度为-0.05MPa，在70℃下，提取3次，每次2h。

在一个具体实施方式中，步骤A)中，所述氨水溶液中氨的质量含量为0.075％～0.168％。

优选地，步骤A)中，以重量计，水的用量为甘草黄芪药材的6-10倍。

在一个具体实施方式中，在步骤B)中，果胶酶的用量为1-2g/100mL浓缩液。

在一个具体实施方式中，在步骤B)中，蛋白酶的用量为1-2g/100mL浓缩液。

在一个具体实施方式中，在步骤B)中，果胶酶和蛋白酶的质量比为1:2-2:1。

在一个具体实施方式中，在步骤B)中，壳聚糖醋酸溶液的加入量与浓缩液的体积比为0.15:1-0.2:1。

在一个具体实施方式中，所述黄芪药材和甘草药材的质量比为1:1。

根据本发明的一个具体实施方式，所述黄芪甘草口服液的制备方法包括：

1)将甘草药材用氨水溶液浸泡，其中所述氨水溶液中氨的质量百分含量为0.075％～0.168％；

2)提取后浓缩，将浓缩液调节pH值为5.0～6.0之间，分别按浓缩液体积的1％-2％(m/v)加入果胶酶和蛋白酶，放置，再加入15％～20％(v/v)壳聚糖醋酸溶液，静置；

3)过滤步骤2)所述的中药液，调节pH值为5.0-7.0，浓缩，即得甘草提取物；

4)将黄芪药材加水浸泡，提取后浓缩；

5)分别按浓缩液体积的1％-2％(m/v)向步骤4)得到的浓缩液中加入果胶酶和蛋白酶，放置，再加入15％～20％(v/v)壳聚糖醋酸溶液，静置；

6)过滤步骤5)所述的中药液，调节pH值为5.0-7.0，浓缩，即得黄芪提取物；

7)将步骤3)制备的甘草提取物与步骤6)制备的黄芪提取物混合，加水，调节pH值至4.0～6.0，离心，过滤，灌装，灭菌，即得。

本发明所用的壳聚糖醋酸溶液中，壳聚糖的质量浓度为1％。其制备方法例如为取壳聚糖，用1％冰醋酸溶解，制成浓度为1％的溶液。

本发明还提供了由上述制备方法制备得到的产品。

根据一个具体实施方式，所述黄芪甘草口服液中甘草酸含量不低于5.0mg/ml，总糖含量不低于120mg/ml。

本发明提供了一种黄芪甘草口服液的制备方法及其产品，有以下优点：

1、使用尤其是0.3～0.6％(g/g)的氨水溶液对甘草进行提取，既可充分提取甘草多糖，又显著提高甘草酸的提取率。

2、采用减压低温回流提取，避免高温对中药活性成分的破坏，最大限度保留了活性成分。

3、采用蛋白酶和果胶酶对浓缩液中的蛋白质和果胶进行分解，用壳聚糖对浓缩液进行絮凝纯化，可有效除去蛋白质、果胶、鞣质、淀粉等杂质成分，保留多糖、甘草酸等有效成分，制备的口服液澄清度更高，稳定性更好，效果更显著。

4、对设备要求不高，制备工艺简单，可提高生产效率。

具体实施方式

所用的物料和设备的来源和批号如下：

黄芪，产地：内蒙，批号：20110903，来源：河南千方药业有限公司；

甘草，产地：内蒙，批号：20111201，来源：河南千方药业有限公司；

氨水，分析纯，批号：20100601，厂家：烟台市双双化工有限公司；

盐酸，分析纯，批号：110301，厂家：洛阳化学试剂厂；

果胶酶，规格：3万U/g，厂家：宁夏和氏璧生物技术有限公司；

蛋白酶，规格：10万U/g，厂家：宁夏和氏璧生物技术有限公司；

壳聚糖，规格：脱乙酰度85.5％，厂家：济南海得贝海洋生物工程有限公司；

低温提取浓缩机组，型号：TN-2/500，厂家：浙江凯迪药化机械有限公司；

高速离心机，型号：GQLB-105N，厂家：辽阳鑫阳光液体分离设备有限公司；

紫外-可见分光光度计，型号UV-2100，厂家：北京瑞利分析仪器公司；

高效液相色谱仪，型号e2695，紫外检测器，型号2489，厂家：美国沃特世公司。

以下通过实验例来进一步说明本发明的具体实施方式：

实施例1：甘草提取物的制备

称取甘草50kg，按下面步骤进行制备：

1)取甘草饮片，加入中药热回流低温提取罐内，加入药材重量8倍的纯化水，再按加水量的0.5％(v/v)加入氨水，浸泡30min；控制真空度为-0.05MPa，在70℃下，提取3次，每次2h，提取液用80目筛网过滤，合并滤液，抽至浓缩罐中，在70℃下，减压浓缩至相对密度为1.10(70℃)，用稀盐酸调节pH值至5.0；

2)分别按步骤1)浓缩液体积的2％(m/v)加入果胶酶和蛋白酶，搅拌均匀，50℃保温放置4h，然后按浓缩液体积的15％(v/v)加入1％(g/ml)壳聚糖醋酸溶液，搅拌均匀，静置12h；

3)将步骤2)药液过滤，滤液用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，在70℃下，减压浓缩至相对密度为1.20(70℃)，即得甘草提取物。

实施例2：黄芪提取物的制备

称取黄芪50kg，按下面步骤进行制备：

1)取黄芪饮片，加入中药热回流低温提取罐内，加入药材重量8倍的纯化水，浸泡30min；控制真空度为-0.05MPa，在70℃下，提取3次，每次2h，提取液用80目筛网过滤，合并滤液，抽至浓缩罐中，在70℃下，减压浓缩至相对密度为1.10(70℃)；

2)分别按步骤1)浓缩液体积的2％(m/v)加入果胶酶和蛋白酶，搅拌均匀，50℃保温放置4h，然后按浓缩液体积的15％(v/v)加入1％(g/ml)壳聚糖醋酸溶液，搅拌均匀，静置12h；

3)将步骤2)药液过滤，滤液用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，在70℃下，减压浓缩至相对密度为1.20(70℃)，即得黄芪提取物。

实施例3：甘草口服液的制备

取实施例1制备的甘草提取物适量(相当于原生药1kg)，加水至2L，调节pH值至5.0，10000转/分钟高速离心，上清液用0.4μm的微孔滤膜过滤，灌装，100℃灭菌30min，即得甘草口服液。

实施例4：黄芪口服液的制备

取实施例2制备的黄芪提取物适量(相当于原生药1kg)，加水至2L，调节pH值至5.0，10000转/分钟高速离心，上清液用0.4μm的微孔滤膜过滤，灌装，100℃灭菌30min，即得黄芪口服液。

实施例5：黄芪甘草口服液的制备

取实施例1制备的甘草提取物适量(相当于原生药25kg)，实施例2制备的黄芪提取物适量(相当于原生药25kg)，混合，加水至50L，调节pH值至5.0，15000转/分钟高速离心，上清液用0.4μm的微孔滤膜过滤，灌装，100℃灭菌30min，即得黄芪甘草口服液。

实施例6：本发明方法与其他制备方法比较

样品1：取本发明实施例3制备的甘草口服液样品。

样品2：取本发明实施例4制备的黄芪口服液样品。

样品3：取本发明实施例5制备所得的黄芪甘草口服液样品。

样品4：采用传统水提醇沉工艺制备黄芪甘草口服液样品，其方法为：称取黄芪饮片和甘草饮片各500g，置圆底烧瓶中，加入药材总重量8倍量的水浸泡1h，加热回流提取2h，提取液用80目筛网过滤，滤渣加8倍量水再回流提取2次，每次2h，分次过滤，合并滤液，在70℃下减压浓缩至相对密度1.20(70℃)，加乙醇至含醇量达60％，搅拌均匀，冷藏24h，滤过，滤液减压回收乙醇浓缩至相对密度1.15(70℃)，加水至1000ml，混匀，调节pH值至5.0，滤过，灌装，100℃灭菌30min，即得。

样品5：采用水提和壳聚糖絮凝纯化工艺制备黄芪甘草口服液样品，其方法为：称取黄芪饮片和甘草饮片各500g，置圆底烧瓶中，加入药材总重量8倍量的水浸泡1h，加热回流提取2h，提取液用80目筛网过滤，滤渣加8倍量水再回流提取2次，每次2h，分次过滤，合并滤液，在70℃下减压浓缩至相对密度1.10(70℃)，按浓缩液体积的20％(v/v)加入1％(g/ml)壳聚糖醋酸溶液，搅拌均匀，静置12h，过滤，滤液用氢氧化钠试液调节pH值至7.0，在70℃下，减压浓缩至相对密度为1.15(70℃)，加水至1000ml，混匀，调节pH值至5.0，滤过，灌装，100℃灭菌30min，即得。

稳定性考察：以上3种方法制得的样品，100ml/瓶，在40℃、相对湿度75％条件下放置6个月，对性状、pH值、甘草酸含量和总糖含量进行考察，结果见表1。pH值测定法参考《中华人民共和国兽药典》2010年版二部附录49页pH值测定方法进行，甘草酸和总糖的含量测定方法如下：

甘草酸照高效液相色谱法(中华人民共和国兽药典2010年版二部附录35页)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(67：33：1)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备取甘草酸铵对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加流动相约20ml，超声处理(功率200W，频率50kHz)30分钟，取出，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

总糖照紫外-可见分光光度法(中华人民共和国兽药典2010年版二部附录26页)测定。

对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含无水葡萄糖30μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取本品2ml，置200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，置具塞试管中，精密加入5％苯酚溶液1ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，立即加塞混匀后，置水浴中保温15min，取出，置冰水浴中冷却5min，取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(附录26页)，在490nm波长处分别测定吸光度，计算，即得。

表1 本发明的黄芪甘草口服液与传统制备方法获得的制剂稳定性比较

结论：本发明制备的黄芪甘草口服液采用氨水溶液对甘草进行提取，甘草酸含量显著提高；使用蛋白酶和果胶酶以及壳聚糖对浓缩液进行纯化，可除去蛋白质、果胶等杂质成分，有效保留多糖等有效成分，提高样品的稳定性；进行高速离心和微孔滤膜过滤，所得药液澄清度更高。

Claims (11)

1.一种黄芪甘草口服液的制备方法，包括以下步骤：

S1，用黄芪药材制备黄芪提取物；

S2，用甘草药材制备甘草提取物；

S3，将所述黄芪提取物和所述甘草提取物用水配制为黄芪甘草口服液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黄芪提取物的制备步骤包括：

a)将黄芪药材加水浸泡，提取后浓缩；

b)将步骤a)得到的浓缩液先用果胶酶和蛋白酶进行处理，再用壳聚糖醋酸溶液进行处理；

c)将步骤b)得到的混合物进行过滤，将滤液调节至弱酸性至中性，优选调至pH值为5.0-7.0，然后浓缩，即得黄芪提取物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤b)中，果胶酶和蛋白酶的用量均为1-2g/100mL浓缩液。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，果胶酶和蛋白酶的质量比为1:2-2:1。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤b)中，壳聚糖醋酸溶液的加入量与浓缩液的体积比为0.15:1-0.2:1。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述甘草提取物的制备步骤包括：

A)用氨水溶液浸泡甘草药材，提取后浓缩；

B)将步骤A)得到的浓缩液调节pH值为5.0-6.0，然后先用果胶酶和蛋白酶进行处理，再用壳聚糖醋酸溶液进行处理；

C)将步骤B)所得的混合物进行过滤，将滤液调到弱酸性至中性，优选调节pH值为5.0-7.0，浓缩，即得甘草提取物。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述氨水溶液中氨的质量含量为0.075％～0.168％。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤B)中，果胶酶和蛋白酶的用量均为1-2g/100mL浓缩液。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤B)中，壳聚糖醋酸溶液的加入量与浓缩液的体积比为0.15:1-0.2:1。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的制备方法，其特征在于，黄芪药材和甘草药材的质量比为1:1。

11.权利要求1-10中任一项制备的黄芪甘草口服液，其中，甘草酸含量不低于5.0mg/ml，总糖含量不低于120mg/ml。