CN104189088A - 一种桑葚提取物在制备降糖药物中的应用 - Google Patents
一种桑葚提取物在制备降糖药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及桑葚提取物在制备降糖药物中的应用,有效解决制备降糖药物,进而开发治疗糖尿病的新药物,实现桑葚提取物的新用途,桑葚提取物在制备降糖药物中的应用,该桑葚提取物是,取干桑葚药材,粉碎成粗粉,加10倍乙醇提取2次,过滤,合并提取液,减压浓缩至无醇味,得浓缩液,将浓缩液加蒸馏水分散成分散液;分散液过大孔吸附树脂,先用蒸馏水洗脱,弃去水液;继用质量浓度10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用质量浓度80%的乙醇洗脱,收集质量浓度80%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,干燥、粉碎,得桑葚提取物,其中桑葚总黄酮含量60%以上,本发明原料丰富,制备方法简单,所得制备物具有降糖作用,可用于制备降糖药物,有良好的经济和社会效益。
Description
技术领域
本发明涉及医药,特别是一种桑葚提取物在制备降糖药物中的应用。
背景技术
桑葚为桑科落叶乔木桑树的成熟果实,桑葚又叫桑果、桑枣、桑泡儿,人们喜欢其成熟的鲜果食用,味甜汁多,是人们常食的水果之一。成熟的桑葚质油润,酸甜适口,以个大、肉厚、色紫红、糖分足者为佳。每年4~6月果实成熟时采收,洗净,去杂质,晒干或略蒸后晒干食用,也可来泡酒。甘、酸、性寒,入肝、肾经,具有滋阴补血、生津润燥、润肠排毒之功效,滋阴养血、生津、润肠,主治肝肾不足和血虚精亏的头晕目眩;腰酸耳鸣;须发早白;失眠多梦;津伤口渴;消渴;肠燥便秘。
随着人们对桑葚喜食和药用价值的开发,对桑葚的研究也越来越多,但至今未见有桑葚提取物在制备降糖药物中的公开报导。
发明内容
针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种桑葚提取物在制备降糖药物中的应用,可有效解决制备降糖药物,进而开发治疗糖尿病的新药物,实现桑葚提取物的新用途。
本发明解决的技术方案是,桑葚提取物在制备降糖药物中的应用,该桑葚提取物是,取干桑葚药材,粉碎成粗粉,加10倍乙醇提取2次,过滤,合并提取液,减压浓缩至无醇味,得浓缩液,将浓缩液加蒸馏水分散成分散液;分散液过大孔吸附树脂,先用蒸馏水洗脱,弃去水液;继用质量浓度10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用质量浓度80%的乙醇洗脱,收集质量浓度80%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,干燥、粉碎,得桑葚提取物,其中桑葚总黄酮含量60%以上。
本发明原料丰富,制备方法简单,所得制备物具有降糖作用,可用于制备降糖药物,实现桑葚提取物在制备降糖药物中的应用,进而提高桑葚的药用价值和开拓桑葚的新用途,有良好的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明一种桑葚提取物在制备降糖药物中的应用,该桑葚提取物是,取干桑葚药材,粉碎成过20目筛的粗粉,每次加10倍重量、质量浓度80%的乙醇用闪式提取器提取2次,每次5min,过滤,合并提取液,减压浓缩至无醇味,得浓缩液,将浓缩液加蒸馏水分散至相当于含生药量0.2g/ml的分散液;分散液过AB-8型大孔吸附树脂,先用4倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液;继用2倍柱体积的质量浓度10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用8倍柱体积的质量浓度80%的乙醇洗脱,收集质量浓度80%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,50℃干燥、粉碎,得桑葚提取物,其中桑葚总黄酮含量60%以上。
本发明桑葚提取物既有降糖作用,可有效用于制备降糖药物,并进而可以制备治疗糖尿病药物,并经试验得到了充分的证明,有关试验资料如下:
1 实验材料
1.1药物
本发明桑葚提取物。
1.2试剂
盐酸肾上腺素注射液,上海禾丰制药有限公司;盐酸二甲双胍,市售;生理盐水,郑州永和制药有限公司;浓硫酸,洛阳市化学试剂厂;血糖试剂盒,浙江东瓯生物工程有限公司;肝糖元试剂盒,南京建成生物工程研究所;四氧嘧啶,sigma公司;盐酸二甲双胍,上海医药(集团)有限公司信谊制药总厂;链脲佐菌素,sigma公司;柠檬酸(分析纯),湖北省医药公司化玻站;柠檬酸钠(分析纯),天津市化学试剂批发部;浓硫酸,洛阳市化学试剂厂;糖化血清蛋白(GSP)测定试剂盒,南京建成生物工程研究所第一分所。
1.3仪器
UV-2000紫外可见分光光度计:尤尼柯(上海)仪器有限公司;恒温水浴锅,北京市光明仪器厂;离心机,北京医疗仪器修理厂;FA(N)/JA(N)系列电子天平,上海民桥精密仪器有限公司;可调式移液器,上海雷勃分析仪器有限公司。
1.4动物
小鼠:昆明种,雄性,体重15~16g;由河北省实验动物中心提供,合格证号608155;小鼠:昆明种,雄性,体重18~20g;由河北省实验动物中心提供,合格证号611040。
2.实验方法与结果
2.1对肾上腺素致小鼠高血糖模型的影响
取雄性小鼠60只,体重20~22g,随机均匀分为6组,分别灌服大、中、小剂量的桑葚提取物(400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg,配成浓度为20mg/ml 、10mg/ml、5mg/ml,灌胃体积为0.2ml/10g)溶液,二甲双胍混悬液(0.208g/kg,0.104mg/ml,0.2ml/10g),模型组和空白组灌服同体积的生理盐水液。每天给药1次,连续给药9天。于禁食后12h灌药后90min,除空白组外每鼠迅速腹腔注射肾上腺素240ug/kg,空白对照组注射同体积生理盐水,于给肾上腺素后30min、60 min立即取血,分离血清测血糖值(按试剂盒说明操作)。结果见表1。
表1 桑葚提取物组对肾上腺素所致小鼠高血糖模型血糖及肝糖原的影响( ±s,n=10)
组别 | 30min(mmol/L) | 60min(mmol/L) | 肝糖原(mg/g肝湿重) |
空白组 | 5.324±0.430** | 5.311±0.701** | 30.449±4.595** |
模型组 | 14.026±2.241 | 9.975±2.038 | 13.921±2.113 |
二甲双胍组 | 9.500±1.053** | 7.272±1.076** | 16.714±2.542* |
大剂量桑葚提取物组 | 11.191±1.585** | 7.785±2.306* | 18.266±3.692 ** |
中剂量桑葚提取物组 | 10.033±1.033** | 7.845±2.202* | 20.268±6.150** |
小剂量桑葚提取物组 | 10.759±1.014** | 8.880±2.246 | 19.058±4.857** |
*表示与模型组比P<0.05,**表示与模型组比P<0.01
由上表可以看出,与空白组相比,模型组小鼠30 min、60min血糖均显著增高(P<0.01),肝糖原显著降低(P<0.01),说明造高血糖模型成功。与模型组相比,大、中、小剂量桑葚提取物组和二甲双胍组均可显著降低30 min血糖水平.01);大、中剂量桑葚提取物组可明显降低60 min血糖水平(P<0.05),二甲双胍组均可显著降低60 min血糖水平(P<0.01);大、中、小剂量桑葚提取物组可显著提高肝糖原含量(P<0.01),二甲双胍组可明显提高肝糖原含量(P<0.05)。
2.2对四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的影响
取雄性小鼠60只,体重20~22g,随机均匀分为6组,分别灌服大、中、小剂量的桑葚提取物(400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg,配成浓度为20mg/ml 、10mg/ml、5mg/ml,灌胃体积为0.2ml/10g)溶液,二甲双胍混悬液(0.208g/kg,0.104mg/ml,0.2ml/10g),模型组和空白组灌服同体积的生理盐水液。每天给药1次,连续给药10天。于第7天禁食后12h灌药后90min,除空白组外每鼠尾静脉注射80mg/kg(0.05ml/10g)新配制的四氧嘧啶生理盐水液,注射后72h,取血测定分离血清测血糖值(按试剂盒说明操作)。处死小鼠后,精密称取肝脏50mg左右,按试剂盒说明测定,620nm处测各管OD值。结果见表2。
表2桑葚提取物组对四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的血糖及肝糖原的影响(±s,n=10)
组别 | 血糖(mmol/L) | 肝糖原(mg/g肝湿重) |
空白组 | 3.918±0.862** | 28.218±2.898** |
模型组 | 21.834±2.966 | 13.750±2.082 |
阳性组 | 14.413±1.631** | 16.670±2.638** |
大剂量桑葚提取物组 | 15.804±1.528** | 20.240±3.505** |
中剂量桑葚提取物组 | 15.395±2.059** | 21.070±3.812** |
小剂量桑葚提取物组 | 17.879±2.780** | 18.628±2.793** |
*表示与模型组比P<0.05,**表示与模型组比P<0.01
由上表可以看出,与空白组相比,模型组小鼠血糖显著增高(P<0.01),肝糖原显著降低(P<0.01),说明造高血糖模型成功。与模型组相比,大、中、小剂量桑葚提取物组和二甲双胍组均可显著降低血糖水平(P<0.01);大、中、小剂量桑葚提取物组和二甲双胍组均可显著提高肝糖原含量(P<0.01)。
2.3对链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型的影响
取雄性小鼠,正常饲养3天,禁食12h后,尾静脉注射链脲佐菌素80 (mg/kg,0.02ml/10g),于注射第11天禁食12h后,尾部采血测空腹血糖值,选取血糖值>11.1mmol/L并具有明显多饮、多食、多尿症状的小鼠50只,按血糖值随机均分为5组,即大、中、小剂量桑葚提取物组,二甲双胍组和模型组,分别灌服大、中、小剂量的桑葚提取物(400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg,配成浓度为20mg/ml 、10mg/ml、5mg/ml,灌胃体积为0.2ml/10g)溶液,二甲双胍(0.208g/kg,10.4mg/ml,0.2ml/10g)及同体积生理盐水;另取注射缓冲液的10只小鼠作为空白对照组,灌服同体积生理盐水。每天给药1次,连续给药30天。于给药第10、20、30天尾部取血测血糖值。第30天在禁食12h末次给药1h后,取血,测血糖(按试剂盒说明)、糖基化血清蛋白(按试剂盒说明),处死小鼠,取肝测肝糖元(按试剂盒说明测);取胰腺,福尔马林液固定,做病理切片。结果见表3、表4。
枸橼酸缓冲液的配制:分别称取1292.4mg柠檬酸和1132.3mg柠檬酸钠配成100ml溶液,此溶液即为Ph为4.2枸橼酸缓冲液,为确保其准确性可用Ph仪器校正调配。链脲佐菌素不十分稳定,且对血管刺激较大,用缓冲液配制链脲佐菌素可减轻这些副面影响,临用前配制。
表3 桑葚提取物组对链尿佐菌素致小鼠糖尿病模型血糖的影响(±s,mmol/L,n=10)
组别 | 开始血糖 | 第10天 | 第20天 | 第30天 |
空白组 | 4.771±0.686** | 4.929±0.847** | 4.758±0.703** | 4.760±0.637** |
模型组 | 15.696±2.314 | 20.496±2.887 | 20.740±4.38 | 20.869±3.981 |
二甲双胍组 | 15.424±2.273 | 18.724±2.511 | 15.035±3.008** | 12.582±2.499** |
大剂量桑葚提取物组 | 15.704±2.903 | 18.641±2.638 | 15.899±3.092** | 13.848±2.428** |
中剂量桑葚提取物组 | 15.461±3.359 | 18.785±2.541 | 16.804±2.715* | 15.045±3.314** |
小剂量桑葚提取物组 | 15..472±2.382 | 19.230±2.747 | 17.371±3.301 | 16.068±2.923** |
*表示与模型组比P<0.05,**表示与模型组比P<0.01
由上表可以看出,在实验开始,与空白组相比,各组血糖均显著升高(P<0.01),说明造糖尿病模型成功;各组血糖值之间无显著性差异,说明分组均匀。与空白对照组比,模型组在给药10天、20天、30天血糖值均显著升高(P<0.01),说明在实验时间内小鼠一直是糖尿病模型成功。与模型组相比,在第10天,各给药组血糖仅有降低趋势;在第20天,大剂量桑葚提取物组和二甲双胍组可显著降低血糖水平(P<0.01),中剂量桑葚提取物组可明显降低血糖水平(P<0.05);在第30天,大、中、小剂量桑葚提取物组和二甲双胍组均可显著降低血糖水平(P<0.01)。
表4 桑葚提取物组对链尿佐菌素致小鼠糖尿病模型肝糖原及糖化血清蛋白的影响(±s,n=10)
组别 | 肝糖原(mg/g) | 糖化血清蛋白(mmol/L) |
空白组 | 28.754±5.251** | 1.514±0.297** |
模型组 | 11.477±1.982 | 2.648±0.542 |
二甲双胍组 | 16.920±2.307** | 1.729±0.204** |
大剂量桑葚提取物组 | 20.036±4.221** | 1.776±0.326** |
中剂量桑葚提取物组 | 18.703±3.614** | 1.949±0.552* |
小剂量桑葚提取物组 | 15.212±4.568* | 2.177±0.527 |
*表示与模型组比P<0.05,**表示与模型组比P<0.01
由上表可以看出,与空白组相比,模型组肝糖原显著降低(P<0.01),糖化血清蛋白显著增高(P<0.01),说明造糖尿病模型成功。与模型组相比,大、中剂量桑葚提取物组和二甲双胍组均可显著升高肝糖原含量(P<0.01),小剂量桑葚提取物组可明显升高肝糖原含量(P<0.01);大剂量桑葚提取物组和二甲双胍组均可显著降低糖化血清蛋白值(P<0.05),中剂量桑葚提取物组可明显降低糖化血清蛋白值(P<0.05)。
各组胰脏组织形态观察:空白对照组小鼠胰岛细胞胞浆丰富、胞体大、胰岛体积也大;模型组小鼠胰岛细胞胞浆明显减少、胞体缩小、细胞显得密集,胰岛细胞部分出现空泡变;二甲双胍组小鼠胰岛中的胰岛细胞部分细胞胞浆较丰富,部分细胞胞浆明显减少,胞体明显缩小,核密集;大剂量桑葚提取物组小鼠胰岛细胞大部分细胞胞浆丰富,体积增大,少数细胞特别周边细胞体积缩小,胞浆明显减少、核密集;中剂量桑葚提取物组小鼠胰岛细胞大部分出现萎缩,胞浆减少,胞体缩小,细胞核显密集,少数胰岛细胞呈空泡变;小剂量桑葚提取物组小鼠胰岛细胞胞浆明显减少,细胞体积缩小,细胞显得密集,个别细胞呈空泡变。
表5 桑葚提取物对链尿佐菌素致小鼠糖尿病模型胰脏组织形态的影响
组别 | n | - | + | ++ | +++ |
空白对照组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
模型组 | 10 | 0 | 0 | 1 | 9 |
二甲双胍组 | 10 | 0 | 2 | 8 | 0 |
大剂量桑葚提取物组 | 10 | 0 | 7 | 3 | 0 |
中剂量桑葚提取物组 | 10 | 0 | 0 | 9 | 1 |
小剂量桑葚提取物组 | 10 | 0 | 0 | 8 | 2 |
“-”:胰岛细胞胞浆丰富,未出现萎缩,水肿和空泡变性均正常德;“+”:胰岛细胞呈现萎缩现象,而无水肿和空泡变性的;“++”:胰岛细胞大部分出现萎缩,细胞少数出现水肿而无空泡变性的;“+++”胰岛细胞出现萎缩,同时出现水肿和空泡变性明显者。
由上表可以看出,经Ridit检验,与空白组相比,模型组胰脏出现显著病理变化(P<0.01),说明造糖尿病模型成功。与模型组相比,大、中、小剂量桑葚提取物组和二甲双胍组均可显著改善胰脏病理变化(P<0.01)。
试验充分证明桑葚提取物具有降糖作用,有效用于制备降糖药物,并经对糖尿病患者58例进行临床应用,每天服用3次,每次0.5-1g,15天后统计结果,结果显示,除1例未发现有糖尿病血糖无变化后(但也未加重),其它均有不同程度的血糖降低和症状上的改善,有效率高达98%以上,从而证明本发明桑葚提取物可用于制备治疗糖尿病的药物,解决糖尿病治疗的用药问题,开拓了桑葚的新用途,具有巨大的经济和社会意义。
Claims (1)
1.一种桑葚提取物在制备降糖药物中的应用,该桑葚提取物是,取干桑葚药材,粉碎成过20目筛的粗粉,每次加10倍重量、质量浓度80%的乙醇用闪式提取器提取2次,每次5min,过滤,合并提取液,减压浓缩至无醇味,得浓缩液,将浓缩液加蒸馏水分散至相当于含生药量0.2g/ml的分散液;分散液过AB-8型大孔吸附树脂,先用4倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液;继用2倍柱体积的质量浓度10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用8倍柱体积的质量浓度80%的乙醇洗脱,收集质量浓度80%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,50℃干燥、粉碎,得桑葚提取物,其中桑葚总黄酮含量60%以上。
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C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20141210 |