CN104797256A

CN104797256A - 用于治疗局部晚期乳腺癌的方法

Info

Publication number: CN104797256A
Application number: CN201380058688.2A
Authority: CN
Inventors: 阿尼塔·甘地; 乔治·德马蒂诺; 拉杰什·乔普拉
Original assignee: Celgene Corp
Current assignee: Celgene Corp
Priority date: 2012-09-10
Filing date: 2013-09-09
Publication date: 2015-07-22
Also published as: PH12015500513A1; JP2015527404A; SG11201501653RA; AU2013312188A1; US9694015B2; EA201590535A1; EP2892537A1; JP6306592B2; US20150224104A1; KR20150054962A; WO2014039960A1; BR112015005243A2; MX2015003114A; NI201500032A; CA2884103A1; IL237558A0

Abstract

本文提供了治疗、预防和/或控制局部晚期乳腺癌(包括炎性乳腺癌)的方法，其包括向患者施用一种或多种免疫调节化合物或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

Description

用于治疗局部晚期乳腺癌的方法

本发明申请主张2012年9月10日提交的美国临时专利申请No.61/699170的优先权，该专利申请的全部内容作为参考并入本文。

1.技术领域

2.发明背景

2.1癌症的病理学

癌症的主要特征为来自特定正常组织中的异常细胞数量上升，这些异常细胞入侵邻近组织，或将恶性细胞通过淋巴或血源传播至局部的淋巴结和远端位点(转移)。临床数据和分子生物学研究显示癌症是一个多步过程，它起始于微小的癌前变化，并可能在特定条件下发展至瘤形成。肿瘤性病变可克隆演化并发展出提高的入侵、生长、转移和异质性的能力，特别是在肿瘤性细胞脱离了宿主免疫监视的情况下。Roitt,I.,Brostoff,J.andKale,D.,Immunology,17.1-17.12(第3版,Mosby,St.Louis,Mo.,1993)。

癌症种类繁多，其具体信息可见于医学文献。实例包括乳腺、肺、结肠、直肠、前列腺、脑和肠的癌症。随着整体人群的老龄化，新型癌症的产生，以及易感人群(例如，感染AIDS的人或是过度暴露在阳光中的人)的增长，癌症的发病率持续攀升。因此，仍非常需要可以用于治疗癌症患者的新方法和组合物。

许多类型的癌症均与新血管的形成(一种称为血管生成的过程)有关。人们已经阐明了几种涉及肿瘤诱导血管生成的机制。其中最直接的机制是由肿瘤细胞分泌具有血管生成性质的细胞因子。这些细胞因子的实例包括酸性和碱性成纤维细胞生长因子(a,b-FGF)、血管生成素、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。作为另外一种选择，肿瘤细胞可以通过蛋白酶生成以及储存某些细胞因子(例如，b-FGF)的胞外基质的后续分解释放血管生成肽。血管生成还可通过炎性细胞(特别是巨噬细胞)的募集及其后续释放血管生成细胞因子(例如，TNF-a，b-FGF)而被间接诱导。

肿瘤的病理学

实体瘤是异常组织块，它可以但通常不含囊肿或液体区域。实体瘤可以是良性的(非癌症)或恶性的(癌症)。不同类型的实体瘤通过形成它们的细胞类型来命名。实体瘤的类型的实例包括(但不限于)恶性黑色素瘤、肾上腺癌、乳腺癌、肾细胞癌、胰腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和未知的原发性癌。

另外，已经明确确定了癌症和改变的细胞代谢之间的联系。参见Cairns,R.A.,等人,Nature Rev.,2011,11:85-95。对肿瘤细胞代谢及其相关遗传变化的了解可以导致鉴别改善的癌症治疗方法。同上。例如，已经将通过提高的葡萄糖代谢的肿瘤细胞存活和增殖与PIK3途径相联系，借此肿瘤抑制基因(如PTEN)中的突变激活肿瘤细胞代谢。同上。AKT1(也称为PKB)通过与PFKFB3、ENTPD5、mTOR和TSC2(也称为马铃薯球蛋白)的多种相互作用来刺激与肿瘤细胞生长有关的葡萄糖代谢。同上。

转录因子HIF1和HIF2主要负责细胞对通常与肿瘤有关的低氧条件的反应。同上。一旦激活，HIF1促进肿瘤细胞进行糖酵解的能力。同上。因此，HIF1的抑制可以减缓或逆转肿瘤细胞代谢。HIF1的激活已与PI3K、肿瘤抑制蛋白质(如VHL)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和延胡索酸水化酶相联系。同上。HIF1还受多种炎症介质，包括多种乳腺癌细胞系中的TNF-α的调节。Kuo,H.-P.BBRC 2009,389,640。致癌转录因子MYC也与肿瘤细胞代谢，具体地糖酵解相联系。Cairns。MYC还通过谷氨酰胺代谢途径促进细胞增殖。同上。

AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)起代谢检查点的作用，为了增殖肿瘤细胞必须克服该代谢检查点。同上。已鉴别了几种抑制肿瘤细胞中AMPK信号的突变。参见，Shackelford,D.B.&Shaw,R.J.,Nature Rev.Cancer,2009,9:563-575。已将STK11鉴别为与AMPK作用有关的肿瘤抑制基因。参见，Cairns,R.A.,et al.Nature Rev.,2011,11:85-95。

作为肿瘤抑制剂的转录因子p53在细胞代谢调控中还具有重要作用。同上。肿瘤细胞中p53的丧失可以是肿瘤细胞代谢中向糖酵解途径改变的重要原因。同上。作为化疗的另一个可能目标的OCT1转录因子可以在调节肿瘤细胞代谢中与p53配合。同上。

丙酮酸激酶M2(PKM2)促进细胞代谢改变，这通过支持细胞增殖赋予癌细胞代谢优势。同上。例如，已发现表达PKM2超过PKM1的肺癌细胞具有这种优势。同上。临床上，已在多种癌症类型中将PKM2鉴别为过表达。同上。因此，PKM2可以是肿瘤早期检测的有用的生物标志物。

具体地，在成胶质细胞瘤和急性髓细胞性白血病中，已将异柠檬酸脱氢酶IDH1和IDH2中的突变与肿瘤发生相联系。参见Mardis,E.R.等人,N.Engl.J.Med.,2009,361:1058-1066；Parsons,D.W.等人,Science,2008,321:1807-1812。

随着整体人群的老龄化，新型癌症的产生，以及易感人群(例如，感染AIDS的人、老年人或是过度暴露在阳光中的人)的增长，癌症的发病率持续攀升。因此，仍非常需要可以用于治疗癌症(包括乳腺癌)患者的新方法、治疗和组合物。

乳腺癌

乳腺癌包括(但不限于)腺癌、小叶(小细胞)癌、管内癌、髓样乳腺癌、乳腺粘液腺癌、乳腺小管癌、乳头状乳腺癌、原发癌、佩吉特病和炎性乳腺癌，它是全世界妇女最常患的癌症类型，占妇女所患癌症的约23％，并且占所有妇女癌症相关死亡的约14％。(World cancer report-2008)乳腺癌最常见的形式发生在乳腺管中，其它形式发生在小叶或其它乳腺组织中。基于多种因素，不同形式的乳腺癌显示出不同的肿瘤生长速率，并且具有不同的存活率。

局部晚期乳腺癌占所有确诊的乳腺癌的约10％。参见Brito,L.G.O.,Clinical Science 2011,66,1313。与大多数乳腺癌相比，这种形式的乳腺癌具有更大的转移风险，并且具有较差的长期预后。尽管少见，但是局部晚期乳腺癌的转移性变化形式，炎性乳腺癌(IBC)具有多种独特的治疗困难。IBC是乳腺癌的侵袭性形式，由于通常不以在体检或乳房X线照片期间可检测的块状存在，以及由于可能导致误诊的不明确的症状，因此它难以诊断。另外，较小的患者群体与快速发展的癌症的双重因素可以导致诊断时患者已处于疾病晚期阶段。这些问题反映在乳腺癌患者的5-年相对存活率；确诊为IBC的妇女的5-年存活率为34％，相比之下其它阶段的侵袭性乳腺癌患者的5-年存活率为87％。参见国家癌症学会炎性乳腺癌情况说明书(http://www.cancer.gov/cancertopics/factsheet/Sites-Types/IBC)。

局部晚期乳腺癌和炎性乳腺癌的治疗通常采用多模式方法，其包括1)通过化疗以降低肿瘤的物理尺寸，然后2)通过手术除去肿瘤，然后3)放射疗法。治疗的化疗部分通常包括在选择手术除去肿瘤的任何尝试前，在几个月内抗肿瘤药物的多次循环。可以通过目标疗法确定治疗剂的选择，研究表明该目标疗法导致对治疗更好的反应和更好的存活率。参见Li,B.D.等人.Oncology 2010,79,3)

随着一般群体年龄的增大以及易感人群(例如，未产妇女和肥胖妇女)数目的增加，乳腺癌发病率持续升高，因此，仍十分需要可以用于治疗局部晚期乳腺癌，包括炎性乳腺癌患者的新方法、治疗和组合物。

因此，可以控制和/或抑制不希望的血管生成或抑制某些细胞因子，包括TNF-α的生产的化合物在局部晚期乳腺癌，包括炎性乳腺癌的治疗和预防中可能是有用的。

2.2治疗癌症的方法

目前的癌症疗法可包括通过外科手术、化学疗法、激素疗法和/或放射治疗以根除患者体内的肿瘤性细胞(参见，例如，Stockdale,1998,Medicine,vol.3,Rubenstein and Federman主编，第12章，IV节)。近来，癌症治疗还可以包括生物疗法或免疫疗法。所有这些疗法对患者均有显著的缺陷。例如，可能由于患者的健康状况或患者不愿接受而无法使用外科手术。此外，手术可能无法完全去除肿瘤性组织。放射疗法仅在肿瘤性组织比普通组织对放射具有更高的敏感度时才能有效。放射治疗还常常会引发严重的副作用。激素疗法极少作为单独的试剂使用。尽管激素疗法可能有效，它通常用于在其它疗法去除大部分癌症细胞后预防或延迟癌症的复发。某些生物疗法及其它疗法数量有限且可能产生如皮疹或肿胀、流感样症状(包括发烧)、寒战和疲劳、消化道问题或过敏反应等副作用。

关于化学疗法，现已存在多种用于治疗癌症的化学治疗剂。多数癌症化疗剂均通过直接地或间接抑制脱氧核苷酸三磷酸前体的生物合成抑制DNA合成以防止DNA复制和伴随的细胞分裂而产生作用。Gilman等人,Goodman and Gilman’s:The Pharmacological Basis of Therapeutics,第10版(McGraw Hill,New York)。

尽管已经存在多种化学治疗剂，化学疗法存在许多缺陷。Stockdale,Medicine,vol.3,Rubenstein and Federman(主编)，第12章，第10节，1998。几乎所有的化学治疗剂都有毒性，且化学疗法会引起明显的、通常危险的副作用，包括重度恶心、骨髓抑制以及免疫抑制反应。此外，即使施用化学治疗剂的组合，许多肿瘤细胞仍对化学治疗剂具有耐药性或形成耐药性。事实上，对治疗方案中所用的特定化学治疗剂具有耐药性的细胞通常被证明对其它药物也有耐药性，即使这些治疗剂与在特定治疗中使用的药物以不同的机制产生作用。这种现象被称为多药耐药性。由于这种耐药性，许多癌症对于标准的化疗治疗方案具有难治性。

对于能治疗、预防和控制癌症，特别是对于标准治疗(如，外科手术、放射疗法、化学疗法和激素疗法)具有难治性的癌症，同时能减少或避免传统疗法伴随的毒性和/或副作用的安全有效的方法仍有着巨大的需求。

3.发明概述

本文提供了治疗、预防和/或控制乳腺癌，包括局部晚期和炎性乳腺癌以及常规化疗难治的或耐受的乳腺癌的方法，其包括向需要这种治疗或预防的患者施用治疗或预防有效量的免疫调节化合物。

在一些实施方式中，所述免疫调节化合物选自作为单一试剂或作为组合疗法的一部分的来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和它们的组合，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

本文还提供了控制乳腺癌(例如，预防其复发，或延长症状缓解时间)的方法，其包括向需要这种控制的患者施用治疗有效量的本文所述的化合物，它们的组合，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

本文还提供了治疗、预防或控制乳腺癌的方法，其包括与通常用于治疗、预防或控制乳腺癌的疗法联合，向需要这种治疗、预防或控制的患者施用治疗或预防有效量的本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。这些常规疗法的实例包括(但不限于)手术、化学疗法、放射疗法、激素疗法、生物疗法和免疫疗法。

本文还提供了试剂盒，其包含本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物的剂量形式。在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒还包含其它活性剂，或其药理学活性的变体或衍生物，或者它们的组合。在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒还包含用于施用活性成分的装置。这些装置的实例包括(但不限于)注射器、滴袋(drip bags)、贴片和吸入器。

4.附图说明

图1显示了(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮(“化合物B”或“CPD B”)对抑制细胞群体中Aiolos表达的影响。

图2显示了化合物B对抑制CD20+B细胞中Aiolos表达的影响。

图3显示了化合物B对抑制CD3+T细胞中Aiolos表达的影响。

图4显示了用化合物A或化合物B处理的人全血样品中Aiolos的免疫印迹。

图5显示了用化合物B处理的人猴PMBC中Aiolos的免疫印迹。

图6-9显示了使用(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮的犬猴中Aiolos表达研究的结果。

图10显示了化合物A和B对骨髓瘤细胞中Aiolos蛋白的不同影响。

图11显示了具有低cereblon(CRBN)的泊马度胺处理的细胞系的剂量反应曲线。

图12显示了CRBN的丧失防止了来那度胺和泊马度胺的Aiolos的下调。

图13显示了Aiolos敲减诱导p21表达，降低IRF4并降低了S期细胞的数目。

图14显示了Aiolos敲减诱导p21表达。

图15显示了用化合物A处理的ZR 75-1和AU565细胞系中Aiolos的降低。

图16显示了体内药理学研究中10％的大鼠严重毒性剂量(STD10)、猴最高非严重毒性剂量(HNSTD)和有效剂量的曲线下面积(AUC)值；使用体外药理学模型的投影AUC值；和预测的人AUC值的比较。

5.发明详述

在一些实施方式中，本文所提供的化合物阻断IBC细胞HIF1α基因表达谱的诱导。不受具体理论的束缚，据信本文所提供的化合物可以在局部晚期乳腺癌和/或炎性乳腺癌的疗法中至少部分基于它们的HIFα活性而单独、组合或与其它抗癌试剂联合使用。

本文还提供了治疗、预防和/或控制乳腺癌的方法，其包括单独或与通常用于治疗、预防或控制乳腺癌的疗法联合向需要这种治疗、预防或控制的患者口服施用0.5mg至20mg剂量的本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。这些常规疗法的实例包括(但不限于)DNA损伤化学疗法、抗有丝分裂(例如，紫杉烷、长春花生物碱)、抗代谢物、激酶抑制剂、次生靶向试剂、其它细胞毒性或途径靶向试剂和放射疗法。

在另一个实施方式中，本文提供了治疗、预防和/或控制乳腺癌的方法，其包括向需要这种治疗、预防或控制的患者口服施用0.5mg至20mg连续日剂量的本文所提供的化合物，直至疾病发展停止。

本文还提供了包含一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物、多晶形物、前体药物和第二或其它活性剂的药物组合物、单一单位剂量形式、剂量方案和试剂盒。第二活性剂包括药物的特定组合或“混合物”。第二活性剂包括小分子和大分子(例如，蛋白质和抗体)，本文提供了它们的实例，以及干细胞。可以与本文所提供的化合物的施用联合使用的方法或疗法包括(但不限于)手术、输血、免疫疗法、生物学疗法、放射疗法以及目前用于治疗、预防或控制与不希望的血管生成有关或以之为特征的疾病和病况的其它非药物基疗法。

在一个实施方式中，其它活性剂选自抗有丝分裂剂，如紫杉烷(例如，紫杉醇多西他赛蛋白质联合紫杉醇)或长春花生物碱(例如，长春新碱、长春碱长春地辛、长春瑞滨)；胞苷类似物(例如，5-氮杂胞苷局部异构酶抑制剂(例如，多柔比星柔红霉素、米托蒽醌、安吖啶、金精三羧酸、伊立替康、拓扑替康、喜树碱、片螺素D、依托泊苷、替尼泊苷、elliptcine和HU-331)、卡培他滨吉西他滨)；HDAC抑制剂(例如，罗米地辛、伏立诺他、帕比司他、丙戊酸、贝利司他、恩替诺特)；HER2抑制剂(例如，曲妥珠单抗曲妥珠单抗emtansine(T-DM1)、拉帕替尼贝伐单抗帕妥珠单抗)；铂(例如，顺铂、卡铂、奥沙利铂)；Bcl-2抑制剂(例如，navitoclax)；PI3K/AKT/mTOR途径抑制剂(例如，GDC-0941、CC-223、CC-115)；依维莫司阿那曲唑依西美坦环磷酰胺艾日布林氟甲睾酮氟维司群来曲唑他莫昔芬和甲氨蝶呤

在一个实施方式中，以约5至约50mg每天的量施用本文所提供的化合物。

在一个实施方式中，以约5、10、15、25、30或50mg每天的量施用来那度胺。

在一个实施方式中，以约5、10、15、25、30或50mg每天的量施用泊马度胺。

在一个实施方式中，以约5、10、15、25、30或50mg每天的量施用沙利度胺。

在一个实施方式中，以0.5mg至20mg每天的量施用3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮。

在一个实施方式中，以0.5mg至20mg每天的量施用3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮。

在一个实施方式中，以0.5mg至20mg每天的量施用(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮。

在一个实施方式中，以0.5mg至20mg每天的量施用3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮。

在一个实施方式中，以0.5mg至20mg每天的量施用3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮。

在一个实施方式中，以0.5mg至20mg每天的量施用3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮。

在一个实施方式中，每天施用两次本文所提供的化合物。

在一个实施方式中，口服施用本文所提供的化合物。

在一个实施方式中，以胶囊或片剂施用本文所提供的化合物。

在一个实施方式中，在28天的循环中施用本文所提供的化合物21天，然后停止7天。

5.1化合物

适合在本文所提供的方法中使用的化合物是来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮(化合物A)、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物；或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

用于本文所提供的方法的化合物包括(但不限于)均授权于G.W.Muller等人的美国专利no.6281230和6316471中所述的取代的2-(2,6-二氧哌啶-3-基)邻苯二酰亚胺和取代的2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚。本文所公开的其它具体的化合物属于美国专利no.6395754、6555554、7091353、美国专利公开no.2004/0029832和国际公开No.WO 98/54170中所公开的异吲哚-亚酰胺类，以上每篇专利作为参考并入本文。

化合物A，3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮，具有以下结构：

可以根据本文所提供的实施例中所述的方法或者如美国专利No.7635700中所述制备化合物A，以上专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。还可以基于本文所教导的内容根据对本领域技术人员显而易见的其它方法合成所述化合物。在某些实施方式中，所述固体化合物A是如2012年3月9日提交的美国临时专利申请No.13/417055中所述的结晶固体，该专利以其全部内容作为参考并入本文。

本文还提供了式(I)所表示的化合物：

或其可药用的盐、溶剂化物或立体异构体，其中：

X为C＝O或CH₂；

R¹为-Y-R³；

R²为H或(C₁-C₆)烷基；

Y为：6至10元芳基、杂芳基或杂环，它们中的每一个可以任选地被一个或多个卤素；或键取代；

R³是：-(CH₂)_n-芳基、-O-(CH₂)_n-芳基或-(CH₂)_n-O-芳基，其中芳基任选地被以下中的一个或多个取代：(C₁-C₆)烷基，其本身任选地被一个或多个卤素取代；(C₁-C₆)烷氧基，其本身被一个或多个卤素取代；氧基；氨基；羧基；氰基；羟基；卤素；氘；6至10元芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基或卤素取代；-CONH₂；或-COO-(C₁-C₆)烷基，其中所述烷基可以任选地被一个或多个卤素取代；

-(CH₂)_n-杂环、-O-(CH₂)_n-杂环或-(CH₂)_n-O-杂环，其中所述杂环任选地被以下中的一个或多个取代：(C₁-C₆)烷基，其本身任选地被一个或多个卤素取代；(C₁-C₆)烷氧基，其本身被一个或多个卤素取代；氧基；氨基；羧基；氰基；羟基；卤素；氘；6至10元芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基或卤素取代；-CONH₂；或-COO-(C₁-C₆)烷基，其中所述烷基可以任选地被一个或多个卤素取代；或者

-(CH₂)_n-杂芳基、-O-(CH₂)_n-杂芳基或-(CH₂)_n-O-杂芳基，其中所述杂芳基任选地被以下中的一个或多个取代：(C₁-C₆)烷基，其本身任选地被一个或多个卤素取代；(C₁-C₆)烷氧基，其本身被一个或多个卤素取代；氧基；氨基；羧基；氰基；羟基；卤素；氘；6至10元芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基或卤素取代；-CONH₂；或-COO-(C₁-C₆)烷基，其中所述烷基可以任选地被一个或多个卤素取代；和

n为0、1、2或3。

在一个实施方式中，式(I)所表示的化合物的实例包括(但不限于)美国专利公开No.2011/0196150中所述的化合物，该专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。在一些实施方式中，所述化合物选自3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其对映异构体或对映异构体的混合物；或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

在一些实施方式中，可以根据本文所提供的实施例中所述的方法或如2012年8月9日提交的美国临时专利申请No.61/681447所述制备本文所提供的某些化合物，以上专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。

应注意如果在所示结构和命名该结构的名称之间存在差异，则以所示结构为准。另外，如果未用(例如)加粗或短划线表示结构或结构的一部分的立体化学，则结构或结构的一部分将被理解为涵盖该结构的所有立体异构体

5.2定义

为了有利于理解本文所述的发明公开，以下定义了多个术语。

术语“受试者”或“患者”是指动物，其包括(但不限于)哺乳动物，包括灵长类(例如人)、母牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠或小鼠。在表示(例如)哺乳动物受试者(如人受试者)时，术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。

如本文所使用的并且除非另作说明，术语“治疗”表示疾病或病症，或者与疾病或病症有关的一种或多种症状的根除或改善。在某些实施方式中，术语表示由向患有该类疾病或病症的患者施用一种或多种预防或治疗剂所产生的使所述疾病或病症的扩散或恶化最小化。在一些实施方式中，所述术语表示特定疾病症状发病后，本文所提供的化合物与或不与其它额外活性剂的施用。

如本文所使用的并且除非另作说明，术语“预防”表示疾病或病症，或者其一种或多种症状的发生、复发或扩散的预防。在某些实施方式中，该术语是指在症状发生前，具体地，通过与其它额外的活性化合物一起或不一起向具有患本文所提供的疾病或病症风险的患者施用本文所提供的化合物的治疗。该术语涵盖了特定疾病症状的抑制或减轻。具体地，在某些实施方式中，具有家族病史的患者是预防方案的候选。另外，具有复发症状史的患者也是预防的可能候选。在这点上，术语“预防”可以与术语“预防性治疗”互换使用。

如本文所使用的并且除非另作说明，术语“控制”表示疾病或病症，或者其一种或多种症状的发展、扩散或恶化的预防或延缓。通常，患者得自预防和/或治疗剂的有益效果不会导致疾病或病症的治愈。在这点上，术语“控制”涵盖了治疗患有特定疾病的患者以求预防或最大程度降低疾病的复发，或者延长保持症状缓解的时间。

如本文所使用的并且除非另作说明，化合物的“治疗有效量”是在疾病或病症的治疗或控制中足以提供治疗益处，或者足以延缓或最大程度降低与所述疾病或病症有关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量表示单独或与其它疗法联合，在疾病或病症的治疗或管理中提供治疗益处的治疗剂的量。术语“治疗有效量”可以涵盖改善整体疗法，降低或避免疾病或病症的症状或原因，或者提高另一种治疗剂的治疗效力的量。

如本文所使用的并且除非另作说明，化合物的“预防有效量”是足以预防疾病或病症或预防其复发的量。化合物的预防有效量表示在疾病预防中提供预防益处的单独或与其它试剂联合的治疗剂的量。术语“预防有效量”可以涵盖改善整体预防或者提高另一种预防剂的预防效力的量。

术语“可药用的载体”、“可药用的赋形剂”、“生理学可用的载体”或“生理学可用的赋形剂”是指可药用的材料、组合物或溶媒，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。在一个实施方式中，每个组分是“可药用的”，其意义在于与药物制剂的其它组分相容并且适合于接触人和动物的组织或器官使用而无过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其它问题或并发症，与合理的受益/风险比相称。参见，Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第21版；Lippincott Williams&Wilkins:Philadelphia,PA,2005；Handbook of Pharmaceutical Excipients,第5版；Rowe等人(主编)，The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association:2005；和Handbook of Pharmaceutical Additives,第3版；Ash and Ash(主编)，Gower Publishing Company:2007；Pharmaceutical Preformulation andFormulation,Gibson(主编)，CRC Press LLC:Boca Raton,FL,2004)。

如本文所使用的，“肿瘤”是指所有新生细胞的生长和增殖，无论是恶性或良性的，并且指所有的癌前细胞和癌细胞及组织。如本文所使用的，“新生的”是指失调或不受控制的细胞生长的任何形式，无论是恶性或良性的，从而造成异常组织生长。因此，“新生细胞”包括具有失调或不受控制的细胞生长的恶性和良性细胞。

术语“复发”是指在治疗后具有癌症症状缓解的受试者或哺乳动物中癌细胞恢复的情况。

如本文所使用的，“有效患者肿瘤反应”是指任何对患者的治疗益处的增加。“有效患者肿瘤反应”可以是(例如)肿瘤发展速率的5％、10％、25％、50％或100％的降低。“有效患者肿瘤反应”可以是(例如)癌症物理症状的5％、10％、25％、50％或100％的降低。“有效患者肿瘤反应”还可以是(例如)患者反应的5％、10％、25％、50％、100％、200％或更大的提高，如通过任何合适的方法(如基因表达、细胞计数、测定结果等)所测量的。

术语“可能性”一般地是指事件可能性的提高。当表示患者肿瘤反应的有效性时，术语“可能性”一般是指肿瘤发展速率或肿瘤细胞生长将减低的可能性的提高。当用于表示患者肿瘤反应的有效性时，术语“可能性”还可以一般地表示可能表现出肿瘤治疗进展提高的指示物(如mRNA或蛋白质表达)的增加。

术语“预测”一般表示提前确定或分辩。例如，当用于“预测”癌症治疗有效性时，术语“预测”可以表示在一开始，在开始治疗之前或在进行了大部分治疗期之前，确定癌症治疗结果的可能性。

如本文所使用的，术语“监测”一般是指对活动的监督、监察、管理、监视、追踪或管制。例如，术语“监测化合物的有效性”是指追踪治疗患者中或肿瘤细胞培养中的癌症的有效性。类似地，当结合患者顺应性使用时，“监测”单独地或在临床试验中是指追踪或确认患者确实按照处方接受所测试的免疫调节化合物。可以(例如)通过追踪mRNA或蛋白质生物标志物的表达进行监测。

癌症或癌症相关疾病的改善可以鉴别为完全或部分反应。“完全反应”是指临床可检测的疾病的消失，任何先前异常的放射照相研究、骨髓和脑脊髓液(CSF)或异常单克隆蛋白测量转为正常。“部分反应”是指在不存在新的病变的情况下，所有可测量的肿瘤负荷(即受试者中存在的恶性细胞的个数，或所测量的整个肿瘤量或异常单克隆蛋白质的量)的至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的降低。术语“治疗”考虑了完全和部分反应。

术语“难治的或耐受的”是指即使在强化治疗后，受试者或哺乳动物的体内仍具有残留癌细胞的情况。

术语“耐药性”是指当疾病对药物治疗不起反应时的情况。耐药性可以是固有的，它是指疾病从来不对药物起反应，或者可以是获得的，它表示疾病对该疾病先前起反应的药物停止起反应。在某些实施方式中，耐药性是固有的。在某些实施方式中，耐药性是获得的。

当表示使用化合物治疗时，术语“敏感性”和“敏感的”是相对术语，它表示所述化合物对减轻或降低待治疗肿瘤或疾病的发展的有效程度。例如，当用于表示与化合物有关的细胞或肿瘤的治疗时，术语“提高的敏感性”是指肿瘤治疗的有效性提高了至少5％或以上。

如本文所使用的术语“表达的”或“表达”是指从基因转录以产生与该基因的两条核酸链中的一条的区域至少部分互补的RNA核酸分子。如本文所使用的术语“表达的”或“表达”还是指从RNA分子翻译以产生蛋白质、多肽或其部分。

在给定处理或条件下，“上调”的mRNA通常会提高。“下调的”mRNA一般是指对给定处理或条件起反应使mRNA的表达水平降低。在一些情况下，在给定处理或条件下，mRNA水平可以保持不变。

当用免疫调节化合物治疗时，与未治疗的对照相比，来自患者样品的mRNA可以“上调”。这种上调可以是(例如)比较对照mRNA水平的约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、90％、100％、200％、300％、500％、1000％、5000％或以上的提高。

作为另外一种选择，在对某些免疫调节化合物或其它试剂的施用起反应后，mRNA可以“下调”或以较低水平表达。下调的mRNA可以(例如)以比较对照mRNA水平的约99％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、1％或更低的水平存在。

类似地，当用免疫调节化合物治疗时，与未治疗的对照相比，来自患者样品的多肽或蛋白生物标志物的水平可以是提高的。这种提高可以是比较对照蛋白水平的约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、90％、100％、200％、300％、500％、1000％、5000％或以上。

作为另外一种选择，对某些免疫调节化合物或其它试剂的施用起反应，蛋白生物标志物的水平可以是降低的。例如，这种降低可以以比较对照蛋白水平的约99％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、1％或更小的水平存在。

如本文所使用的术语“确定”、“测量”、“评价”、“估计”和“测定”一般是指任何形式的测量，并且包括确定元素是否存在。这些术语包括定量和/或定性测定两者。估计可以是相对的或绝对的。“对存在性的估计”可以包括确定所存在的某物的量，以及确定它是否存在。

如本文所使用的并且除非另外说明，术语“可药用的盐”涵盖了该术语所提及的化合物的无毒的酸和碱加成盐。可用的无毒酸加成盐包括来源于本领域中已知的有机和无机酸或碱的那些，其包括(例如)盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、乙酸、酒石酸、乳酸、丁二酸、柠檬酸、苹果酸、马来酸、山梨酸、乌头酸、水杨酸、邻苯二甲酸、扑酸、庚酸等。

性质为酸性的化合物能够与多种可药用的碱形成盐。可用于制备这些酸性化合物的可药用的碱加成盐的碱是形成无毒的碱加成盐的那些，即含有药理学可用的阳离子的盐，如(但不限于)碱金属或碱土金属盐，并且具体地，钙、镁、钠或钾盐。适合的有机碱包括(但不限于)N,N-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲葡糖胺)、赖氨酸和普鲁卡因。

如本文所使用的并且除非另外说明，术语“溶剂化物”是指本文所提供的化合物或其盐，其进一步包含通过非共价分子间作用力结合的化学计量的或非化学计量的量的溶剂。当溶剂为水时，所述溶剂化物为水合物。

如本文所使用的并且除非另外说明，术语“前体药物”是指可以在生物条件(体外或体内)下水解、氧化或另外反应以提供所述化合物的化合物的衍生物。前体药物的实例包括(但不限于)包含生物可水解部分(如生物可水解酰胺、生物可水解酯、生物可水解氨基甲酸酯、生物可水解碳酸酯、生物可水解酰脲和生物可水解磷酸酯类似物)的本文所提供的化合物的衍生物。前体药物的其它实例包括本文所提供的化合物的衍生物，其含有-NO、-NO₂、-ONO或-ONO₂部分。可以使用如Burger’s Medicinal Chemistry andDrug Discovery,172-178,949-982(Manfred E.Wolff主编，第5版，1995)和Design of Prodrugs(H.Bundgaard主编,Elselvier,New York 19805)中所述的方法制备前体药物。

如本文所使用的并且除非另外说明，术语“生物可水解酰胺”、“生物可水解酯”、“生物可水解氨基甲酸酯”、“生物可水解碳酸酯”、“生物可水解酰脲”和“生物可水解磷酸酯”分别是指具有以下性质中任一种的化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、酰脲或磷酸酯：1)不干扰所述化合物的生物活性，但可以赋予该化合物有利的体内性质，如吸收、作用持续时间或作用的发生；或者2)是生物学失活的，但在体内转化为生物学活性化合物。生物可水解的酯的例子包括(但不限于)低级烷基酯、低级酰氧基烷基酯(如乙酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、氨基羰酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基和新戊酰氧基乙基酯)、内酯(如酞基和硫代酞基酯)、低级烷氧基酰氧烷基酯(如甲氧基羰酰氧基甲基、乙氧基羰酰氧基乙基和异丙氧基羰酰氧基乙基酯)、烷氧基烷基酯、胆碱酯和酰氨基烷基酯(如乙酰氨基甲基酯)。生物可水解酰胺的实例包括(但不限于)低级烷基酰胺、α-氨基酰胺、烷氧基酰基酰胺和烷基氨基烷基羰基酰胺。生物可水解的氨基甲酸酯的实例包括(但不限于)低级烷基胺、取代的乙二胺、氨基酸、羟基烷基胺、杂环和杂芳香胺以及聚醚胺。

如本文所使用的并且除非另外说明，术语“立体异构纯的”是指包含化合物的一个立体异构体并且基本不含该化合物的其它立体异构体的组合物。例如，具有一个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物将基本不含该化合物相反的对映异构体。具有两个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物将基本不含该化合物的其它非对映体。在某些实施方式中，立体异构纯的化合物包含大于约80wt％的所述化合物的一个立体异构体和小于约20wt％的所述化合物的另一个立体异构体，大于约90wt％的所述化合物的一个立体异构体和小于约10wt％的所述化合物的另一个立体异构体，大于约95wt％的所述化合物的一个立体异构体和小于约5wt％的所述化合物的另一个立体异构体，或大于约97wt％的所述化合物的一个立体异构体和小于约3wt％的所述化合物的另一个立体异构体。如本文所使用的并且除非另外说明，术语“立体异构富含的”是指含有大于约60wt％的该化合物的一种立体异构体，大于约70wt％或大于约80wt％的该化合物的一种立体异构体的组合物。如本文所使用的并且除非另外说明，术语“对映体纯的”是指具有一个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物。相似的，术语“立体异构富含的”是指具有一个手性中心的该化合物的立体异构富含的组合物。

术语“约”或“大约”表示如本领域的技术人员所确定的特定值的可接受误差，其部分取决于如何测量或确定该值。在某些实施方式中，术语“约”或“大约”表示在1、2、3或4个标准偏差内。在某些实施方式中，术语“约”或“大约”表示给定值或范围的50％，20％、15％，10％，9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％，2％，1％，0.5％或0.05％之内。

5.3用于癌症批准的临床试验终点

将“总体存活率”定义为从无规则分布获得的直至由任何原因所导致的死亡的时间，并且是在意图治疗的群体中测量的。应在随机对照研究中评价总体存活率。如果毒性谱图是可接受的并且通常支持新药批准，则可以认为整体存活率中统计学显著的改善的证明是临床上有意义的。

几种终点是以肿瘤评价为基础的。这些终点包括无病存活率(DFS)、客观反应率(ORR)、进展时间(TTP)、无进展存活率(PFS)和治疗失败时间(TTF)。与这些时间依赖性终点有关的数据的采集和分析是基于间接评价、计算和估计(例如，肿瘤测量)的。

通常，“无病存活率”(DFS)定义为从无规则分布获得的直至肿瘤复发或由任何原因所导致的死亡的时间。尽管整体存活率是大部分佐剂环境的常规终点，但是在可以延长存活率从而使存活期终点不实际的情况下，DFS可以是重要的终点。DFS可以是临床益处的替代或者它可以提供临床益处的直接证据。这种确定是基于效果的大小，其风险-益处关系和疾病环境。DFS的定义可以是复杂的，特别是在无先前肿瘤发展记录的情况下观察到死亡时。这些事件可以作为疾病复发或者作为审查事件来打分。尽管所有死亡的统计分析方法具有某些限制，但是将所有死亡(由所有原因导致的死亡)作为复发考虑可以最大程度降低偏倚。使用该定义可以过高估计DFS，特别是在长期未观察的死亡患者中。如果研究分组间长期随访的频率不同或者如果中途退出不是由于毒性所造成的随机的，则可以引入偏倚。

“客观反应率”(ORR)的定义是肿瘤尺寸具有预定量减小并且对于最短时间段的患者的比例。反应时间通常是从初始反应时间直至所记录的肿瘤发展来测量的。通常，FDA定义的ORR为部分反应加完全反应之和。当以这种方式定义时，ORR是药物抗癌活性的直接测量，它可以在单一分组研究中评价。如果可用，则标准化标准应用于确定反应。已认为多种反应标准是合适的(例如，RECIST标准)(Therasse等人,(2000)J.Natl.CancerInst,92:205-16)。通过其大小和时间以及完全反应的百分比来评价ORR的显著性(无可检测的肿瘤迹象)。

“进展时间”(TTP)和“无进展存活期”(PFS)已用作药物批准的主要终点。TTP的定义为从无规则分布获得的直至目标肿瘤发展的时间；TTP不包括死亡。PFS的定义为从无规则分布获得的直至目标肿瘤发展或死亡的时间。与TTP相比，PFS是优选的监管终点。PFS包括死亡并因此可以更好地与整体存活期关联。PFS假定患者死亡与肿瘤发展是随机相关的。然而，在大部分死亡与癌症无关的情况下，TTP可以是可接受的终点。

作为支持药物批准的终点，PFS可以反映肿瘤生长并且可以在确定存活期益处之前评价。它的确定不受后续疗法的混淆。对于给定样本大小，对PFS影响的大小可以大于对整体存活期的影响。然而，PFS的正规验证作为所存在的多种不同恶性肿瘤的存活期的替代可以是困难的。有时，数据不足以在对存活期和PFS的影响之间建立稳健的相关性评价。癌症试验通常是小规模的，并且现有药物已证明的存活期益处通常是适度的。在不同癌症背景中，PFS作为支持许可证批准的终点的作用是不同的。PFS的改善是代表直接临床益处还是临床益处的替代取决于与可用的疗法相比，新的治疗作用的大小以及风险-益处。

“治疗失败时间”(TTF)的定义为测量从无规则分布到由于任何原因的治疗停止的时间的复合终点，所述原因包括疾病发展、治疗毒性和死亡。不建议TTF作为药物批准的监管终点。TTF不足以将效力与这些其它变量相区分。监管终点应明确区分药物效力与毒性、患者或医生的退出或患者的不耐性。

5.4第二活性剂

在本文所提供的方法和组合物中，本文所提供的化合物可以与一种或多种其它药理学活性化合物(“第二活性剂”)联合使用。据信某些组合可以在治疗特定类型的癌和与不希望的血管生成相关或以其为特征的某些疾病和病况中起协同作用。本文所提供的化合物还可以起作用以缓解与某些第二活性剂有关的副作用，并且一些第二活性剂可用于缓解与本文所提供的化合物有关的副作用。

一种或多种第二活性成分或试剂可以与本文所提供的一种或多种化合物一起在本文所提供的方法和组合物中使用。第二活性剂可以是大分子(例如，蛋白质)或小分子(例如，合成的无机、有机金属或有机分子)。

大分子活性剂的实例包括(但不限于)造血生长因子、细胞因子以及单克隆抗体和多克隆抗体。在某些实施方式中，大分子活性剂为生物分子，如天然存在的或人工制备的蛋白质。在本发明公开中特别有用的蛋白包括能在体外或体内刺激造血前体细胞和免疫活性造血细胞的存活和/或增殖的蛋白质。其它蛋白在体外或体内刺激定向红系祖细胞分裂和分化。具体的蛋白质包括(但不限于)：白细胞介素，如IL-2(包括重组IL-II(“rIL2”)和金丝雀痘IL-2)、IL-10、IL-12和IL-18；干扰素，如干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β-Ia和干扰素γ-Ib；GM-CF和GM-CSF；和EPO。

可用于本发明的方法和组合物的具体蛋白质包括(但不限于)在美国以商品名(Amgen,Thousand Oaks,CA)出售的非格司亭；在美国以商品名(Immunex,Seattle,WA)出售的沙莫司亭；以及在美国以商品名(Amgen,Thousand Oaks,CA)出售的重组EPO。

重组和突变形式的GM-CSF可根据美国专利No.5391485；5393870；和5229496的记载而制备；以上每篇专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。重组和突变形式的G-CSF可根据美国专利No.4810643；4999291；5528823；和5580755的记载而制备；以上每篇专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。

本发明涵盖了原生的、天然产生的和重组的蛋白质的使用。本发明还涵盖了天然产生的蛋白质的突变体以及衍生物(例如，修饰型)，这些突变体在体内至少具有突变源蛋白质的一些药理学活性。突变体的实例包括(但不限于)具有一个或多个与天然产生型蛋白质的相应残基不同的氨基酸残基的蛋白质。术语“突变体”还涵盖了缺少碳水化合物部分的蛋白质，而该部分通常以天然产生型(例如，非糖基化型)存在。衍生物的实例包括(但不限于)PEG化的衍生物和融合蛋白，如通过向所关心的蛋白或蛋白的活性部分融合IgGl或IgG3形成的蛋白质。参见，例如，Penichet,M.L.and Morrison,S.L.,J.Immunol.Methods 248:91-101(2001)。

可与本文所提供的化合物联合使用的抗体包括单克隆和多克隆抗体。抗体的实例包括(但不限于)曲妥珠单抗利妥昔单抗贝伐单抗(Avastatin^TM)、帕妥珠单抗(Perjeta^TM)、托西莫单抗依决洛单抗帕尼单抗和G250。本文所提供的化合物还可以与抗-TNF-α抗体相联合或联合使用。

大分子活性剂可以抗癌疫苗的形式施用。例如，分泌或引起细胞因子(如IL-2、SCF、CXCl4(血小板因子4)、G-CSF和GM-CSF)分泌的疫苗可用于本发明的方法、药物组合物和试剂盒。参见，例如，Emens,L.A.等人,Curr.Opinion Mol.Ther.3(1):77-84(2001)。

小分子第二活性剂还可以用于减轻与本文所提供的化合物的施用有关的副作用。然而，像一些大分子一样，当与本文所提供的化合物(例如，之前，之后或同时)施用时，认为多种小分子活性剂能够提供协同作用。小分子第二活性剂的实例包括(但不限于)抗癌试剂、抗生素、免疫抑制剂和类固醇。

抗癌试剂的实例包括(但不限于)ace-11；阿西维辛；阿柔比星；阿考达唑盐酸盐；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；阿美蒽醌乙酸盐；氨柔比星；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；门冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；比生群盐酸盐；双奈法德二甲磺酸盐；比折来新；博来霉素硫酸盐；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；卡柔比星盐酸盐；卡折来新；西地芬戈；塞来考昔(COX-2抑制剂)；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉屈滨；克立那托甲磺酸盐；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；柔红霉素盐酸盐；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；地扎胍宁甲磺酸盐；地吖醌；多西他赛；多柔比星；多柔比星盐酸盐；屈洛昔芬；屈洛昔芬柠檬酸盐；屈他雄酮丙酸盐；达佐霉素；依达曲沙；依氟鸟氨酸盐酸盐；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；表柔比星盐酸盐；厄布洛唑；依索比星盐酸盐；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；依托泊苷；依托泊苷磷酸盐；氯苯乙嘧胺；法倔唑盐酸盐；法扎拉滨；芬维A胺；氮尿苷；氟达拉滨磷酸盐；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；吉西他滨盐酸盐；赫赛汀；羟基脲；伊达比星盐酸盐；异环磷酰胺；伊莫福新；异丙铂；伊立替康；伊立替康盐酸盐；兰瑞肽乙酸盐；拉帕替尼；来曲唑；亮脯利特乙酸盐；利阿唑盐酸盐；洛美曲索钠；洛莫司汀；洛索蒽醌盐酸盐；马索罗酚；美登素；氮芥盐酸盐；甲地孕酮；十六次甲基甲地孕酮；美法仑；美诺立尔；巯嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托卡星；草绿霉素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；米托蒽醌盐酸盐；麦考酚酸；诺考达唑；诺拉霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；培洛霉素硫酸盐；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；吡罗蒽醌盐酸盐；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸甲基下肼；嘌罗霉素；嘌罗霉素盐酸盐；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；romidepsin；沙芬戈；沙芬戈盐酸盐；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；锗螺胺盐酸盐；螺莫司汀；螺铂；干细胞治疗剂，如PDA-001；链黑霉素；链佐星；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；泰索帝；替加氟；替洛蒽醌盐酸盐；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酪；硫唑嘌呤胺；硫鸟嘌呤；塞替派；噻唑呋林；替拉扎明；托瑞米芬柠檬酸盐；曲托龙乙酸盐；曲西立滨磷酸盐；三甲曲沙；三甲曲沙葡萄糖醛酸盐；曲普瑞林；妥布氯唑盐酸盐；乌拉莫司汀；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸醛基长春碱；长春地辛；长春地辛硫酸盐；长春匹定硫酸盐；长春甘酯硫酸盐；长春罗新硫酸盐；长春瑞滨酒石酸盐；长春罗定硫酸盐；长春利定硫酸盐；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；和佐柔比星盐酸盐。

其它抗癌药包括(但不限于)：20-表-1,25-二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；腺环戊醇；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；3,4-二羟基苄胺肟(amidox)；氨磷汀；氨基-γ-酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯(antarelix)；抗背侧形态发生蛋白-1；抗雄激素物质，前列腺癌；抗雌激素物质；抗瘤酮；反义寡核苷酸；阿非迪霉素甘氨酸盐；细胞凋亡基因调节剂；细胞凋亡调节剂；无嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎司琼；阿扎毒素；氮杂酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯并二氢卟吩；苯甲酰星孢菌素；β内酰胺衍生物；β-alethine；β-clamycin B；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双氮丙啶基精胺；双奈法德；bistratene A；比折来新；breflate；溴匹立明；布度钛；丁硫堇；卡泊三醇；卡弗他丁C；喜树碱衍生物；卡培他滨；氨甲酰基氨基三唑；羧酰氨三唑；CaRest M3；CARN 700；软骨源性抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗精胺；杀菌肽B；西曲瑞克；绿素类(chlorlns)；氯喹喔啉磺酰胺；西卡前列素；顺式-卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；collismycin A；collismycin B；考布他丁A4；考布他丁类似物；conagenin；crambescidin 816；克立那托；cryptophycin 8；cryptophycin A衍生物；curacin A；环戊烯蒽醌(cyclopentanthraquinone)；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐；溶细胞因子；磷酸己烷雌酚；达昔单抗；地西他滨；脱水代代宁B；地洛瑞林；地塞米松；右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；代代宁B；3，4-二羟荃苯并氧肟酸(didox)；二乙基去甲精胺；二氢-5-氮胞苷；9-二氢紫杉醇；dioxamycin；二苯基螺莫司汀；多西他赛；二十二醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；多柔比星；屈洛昔芬；屈大麻酚；倍癌毒素SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；依立雄胺；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；依托泊苷磷酸盐；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；flavopiridol；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；fluorodaunorunicin盐酸盐；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；德克萨卟啉钆；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；hepsulfam；heregulin；六亚甲基双乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；伊马替尼咪喹莫特；免疫刺激剂肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘阿霉素；4-甘薯苦醇；伊罗普拉；伊索拉定；isobengazole；isohomohalicondrin B；伊他司琼；jasplakinolide；kahalalide F；片螺素-N三醋酯盐；兰瑞肽；leinamycin；来格司亭；硫酸蘑菇多糖；leptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮脯利特+雌激素+黄体酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；直链聚胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂；胍乙基磷酸丝氨酸；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛索立宾；勒托替康；德克萨卟啉镥；利索茶碱；裂解肽；美坦新；制甘糖酶素A；马立马司他；马索罗酚；maspin；基质溶解因子抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；merbarone；美替瑞林；蛋氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福新；米立司亭；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；米托毒素(mitotoxin)成纤维细胞生长因子-肥皂草素；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；爱必妥，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰酯A+分支杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；芥末抗癌剂；印度洋海绵B(mycaperoxide B)；分支杆菌细胞壁萃取；myriaporone；N-乙酰地那林；N-取代的苯甲酰胺；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；尼鲁米特；nisamycin；一氧化氮调节剂；硝基氧抗氧化剂；nitrullyn；O⁶-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；口腔细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；棕榈酰根霉素；帕米磷酸；人参三醇；帕诺米芬；副球菌素；帕折普汀；培门冬酶；培得星；木聚硫钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；苯连氮霉素；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶链菌；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛；帕斯婷A；帕斯婷B；纤维蛋白溶酶原活化因子抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼松；丙基双吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；微藻蛋白激酶C抑制剂；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；紫红素；吡唑啉吖啶；吡醇羟乙酯化血红蛋白聚氧乙烯结合物；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法呢基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；脱甲基化的瑞替普汀；羟乙二磷酸铼Re 186；根霉素；核糖酶；RII视黄酰胺；罗希吐碱；罗莫肽；罗喹美克；rubiginoneB1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙格司亭；Sdi 1模拟物；司莫司汀；衰老源抑制剂1(senescence derived inhibitor 1)；正义寡核苷酸；信号转导抑制剂；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯基乙酸钠；solverol；促生长因子结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；穗霉素D；螺莫司汀；脾脏五肽；海绵抑制素1；角鲨胺；stipiamide；基质降解酶抑制剂；sulfinosine；超强血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明；苦马豆碱；他莫司汀；他莫昔芬甲碘化物；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；未端酶抑制剂；替莫泊芬；替尼泊苷；tetrachlorodecaoxide；tetrazomine；菌体胚素；噻可拉林；促血小板生成素；促血小板生成素模拟物；胸腺法新；促胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；本紫红素乙酯锡；替拉扎明；二氯环戊二烯钛；topsentin；托瑞米芬；转化抑制剂；维甲酸；三乙酰基尿甙(triacetyluridine)；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸蛋白激酶抑制剂(tyrphostins)；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦源生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；维拉雷琐；藜芦明；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；整合素拮抗剂(Vitaxin)；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C；和净司他丁斯酯。

在一些实施方式中，其它活性剂选自奥利默森类克(remicade)、多西他赛、塞来昔布、美法仑、地塞米松类固醇、吉西他滨、顺铂、替莫唑胺、依托泊苷、环磷酰胺、替莫唑胺、卡铂、丙卡巴胼、卡莫斯汀、他莫昔芬、拓扑替康、甲氨喋呤、紫杉醇、泰索帝、氟尿嘧啶、亚叶酸、依立替康、希罗达、CPT-11、干扰素α、PEG化的干扰素α(例如，PEG INTRON-A)、卡培他滨、顺铂、塞替派、氟达拉滨、卡铂、脂质体柔红霉素、阿糖胞苷、doxetaxol、pacilitaxel、长春碱、IL-2、GM-CSF、达卡巴嗪、长春瑞滨、唑来磷酸、palmitronate、biaxin、白消安、泼尼松、双磷酸酯、三氧化二砷、长春新碱、多柔比星紫杉醇、更昔洛韦、多柔比星、雌莫司汀磷酸钠舒林酸和依托泊苷。

在其它实施方式中，其它活性剂选自紫杉烷(例如，紫杉醇多西他赛蛋白质结合紫杉醇胞苷类似物(例如，5-氮杂胞苷卡培他滨吉西他滨)、HDAC抑制剂(例如，罗米地辛、伏立诺他、帕比司他、丙戊酸、贝利司他、恩替诺特)、HER2抑制剂(例如，曲妥珠单抗曲妥珠单抗emtansine(T-DM1)、拉帕替尼贝伐单抗帕妥珠单抗)、多柔比星依维莫司阿那曲唑依西美坦环磷酰胺艾日布林氟甲睾酮氟维司群来曲唑他莫昔芬长春碱和甲氨蝶呤

5.5生物标志物

本文提供了与mRNA或蛋白质作为生物标志物以确定乳腺癌疗法有效性的使用有关的方法。mRNA或蛋白水平可以用于确定具体试剂是否有可能在乳腺癌治疗中成功。

生物学标志物或“生物标志物”是其检测表明特定生物状态(如，例如，癌症的存在)的物质。在一些实施方式中，可以单独确定生物标志物，或者可以同时测量几个生物标志物。

在一些实施方式中，“生物标志物”表明了可以与疾病风险或发展或者疾病对给定治疗的易感性相关联的mRNA表达水平的改变。在一些实施方式中，所述生物标志物是核酸，如mRNA或cDNA。

在其它实施方式中，“生物标志物”表明了可以与疾病的风险、对治疗的易感性或发展相关联的多肽或蛋白质表达水平的改变。在一些实施方式中，所述生物标志物可以是多肽或蛋白质，或其片段。可以通过本领域中已知的方法确定特定蛋白的相对水平。例如，可以使用基于抗体的方法，如免疫印迹法、酶联免疫吸附测定(ELISA)或其它方法。

在某些实施方式中，所述生物标志物是与cereblon(“CRBN”)有关的蛋白，例如，Aiolos(IKZF3)或Ikaros(IKZF1)。在2012年6月29日提交的美国临时专利申请No.61/666703中描述了这些蛋白，该专利申请的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。

本文提供了治疗或控制局部晚期乳腺癌的方法，其包括：

(i)鉴别对使用化合物治疗易感的局部晚期乳腺癌患者，所述化合物选自来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，或其对映异构体或对映异构体的混合物；或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物；和

(ii)向患者施用治疗有效量的步骤(i)中所选的化合物。在一个实施方式中，鉴别对治疗易感的局部晚期乳腺癌患者包括检测癌症内CRBN、Aiolos(IKZF3)或Ikaros(IKZF1)表达的表达水平。

在另一个实施方式中，出于预测对剂量施用3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，或其立体异构体，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物的临床反应、监控对其的临床反应或监控患者对其的顺从性的目的，本文提供了基于癌症内CRBN表达水平或Aiolos(IKZF3)或Ikaros(IKZF1)表达水平选择局部晚期乳腺癌患者的方法。

基于CRBN基因(包括(但不限于)Aiolos(IKZF3)或Ikaros(IKZF1)基因)内突变的存在或出现，本文还提供了鉴别或监控局部晚期乳腺癌患者对3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮疗法的耐受性的方法。

5.6治疗、预防和/或控制方法

在一个实施方式中，本文提供了治疗、预防和/或控制乳腺癌的方法，其包括向患者施用一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

本文还提供了治疗先前已治疗了乳腺癌但对标准疗法不起反应的患者以及先前未治疗的患者的方法。在一些实施方式中，本文提供了不考虑患者年龄来治疗患者的方法，尽管一些疾病或病症在某些年龄组中更常见。在其它实施方式中，本文提供了治疗已进行手术以尝试治疗有争论的疾病或病况的患者以及未进行手术的患者的方法。由于乳腺癌患者具有不同的临床表现和不同的临床结果，因此基于他的预后，给予患者的治疗可以是不同的。熟练的临床医师将能够容易地确定可以有效地用于治疗个体癌症患者的具体的第二试剂、手术类型和非药物基标准疗法的类型而无需过度的实验。

在某些实施方式中，乳腺癌是实体瘤。在某些实施方式中，所述实体瘤是转移性的。在某些实施方式中，所述实体瘤是抗药性的。

在某些实施方式中，化合物的治疗或预防有效量为从约0.005至约1000mg/天，从约0.01至约500mg/天，从约0.01至约250mg/天，从约0.01至约100mg/天，从约0.1至约100mg/天，从约0.5至约100mg/天，从约1至约100mg/天，从约0.01至约50mg/天，从约0.1至约50mg/天，从约0.5至约50mg/天，从约1至约50mg/天，从约0.02至约25mg/天或从约0.05至约10mg/天。

在某些实施方式中，治疗或预防有效量是每隔一天从约0.005至约1000mg/天，从约0.01至约500mg/天，从约0.01至约250mg/天，从约0.01至约100mg/天，从约0.1至约100mg/天，从约0.5至约100mg/天，从约1至约100mg/天，从约0.01至约50mg/天，从约0.1至约50mg/天，从约0.5至约50mg/天，从约1至约50mg/天，从约0.02至约25mg/天或从约0.05至约10mg。

在某些实施方式中，治疗或预防有效量是约1、约2、约5、约10、约15、约20、约25、约30、约40、约45、约50、约60、约70、约80、约90、约100或约150mg每天。

在一个实施方式中，对于本文所述的病况，本文所提供的化合物的建议日剂量范围在约0.5mg至约50mg/天的范围内，其作为单一每天一次的剂量施用，或分为几个剂量在一天内施用。在一些实施方式中，所述剂量范围从约1mg至约50mg/天。在其它实施方式中，所述剂量范围从约0.5至约5mg/天。每天具体的剂量包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50mg/天。

在具体的实施方式中，建议的起始剂量可以是0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25或50mg/天。在另一个实施方式中，建议的起始剂量可以是0.5、1、2、3、4或5mg/天。所述剂量可以逐步升高至15、20、25、30、35、40、45和50mg/天。在具体的实施方式中，可以向乳腺癌患者施用约25mg/天的量的化合物。在具体的实施方式中，可以向乳腺癌患者施用约10mg/天的量的化合物。

在某些实施方式中，治疗或预防有效量是从约0.001至约100mg/kg/天、从约0.01至约50mg/kg/天、从约0.01至约25mg/kg/天、从约0.01至约10mg/kg/天、从约0.01至约9mg/kg/天、0.01至约8mg/kg/天、从约0.01至约7mg/kg/天、从约0.01至约6mg/kg/天、从约0.01至约5mg/kg/天、从约0.01至约4mg/kg/天、从约0.01至约3mg/kg/天、从约0.01至约2mg/kg/天或从约0.01至约1mg/kg/天。

施用剂量还可以表示为除mg/kg/天之外的单位。例如，肠胃外施用的剂量可以表示为mg/m²/天。本领域的技术人员将容易地知道如何将剂量从mg/kg/天转化为对于给定的受试者高度或体重或两者的mg/m²/天(参见，www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm)。例如，对于65kg的人，1mg/kg/天的剂量近似等于38mg/m²/天。

在某些实施方式中，所施用的化合物的量足以提供处于稳态的化合物的血浆浓度，其范围从约0.001至约500μM、约0.002至约200μM、约0.005至约100μM、约0.01至约50μM,从约1至约50μM、约0.02至约25μM、从约0.05至约20μM、从约0.1至约20μM、从约0.5至约20μM或从约1至约20μM。

在其它实施方式中，所施用的化合物的量足以提供处于稳态的化合物的血浆浓度，其范围从约5至约100nM、约5至约50nM、约10至约100nM、约10至约50nM或从约50至约100nM。

如本文所使用的，术语“处于稳态的血浆浓度”是在本文所提供的化合物、或其对映异构体或对映异构体的混合物或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物施用一段时间之后所达到的浓度。一旦达到稳态，在化合物血浆浓度与时间有关的曲线上存在较少的峰值和谷值。

在某些实施方式中，所施用的化合物的量足以提供化合物的最大血浆浓度(峰值浓度)，其范围从约0.001至约500μM、约0.002至约200μM、约0.005至约100μM、约0.01至约50μM、从约1至约50μM、约0.02至约25μM、从约0.05至约20μM、从约0.1至约20μM、从约0.5至约20μM或从约1至约20μM.

在某些实施方式中，所施用的化合物的量足以提供化合物的最小血浆浓度(谷值浓度)，其范围从约0.001至约500μM、约0.002至约200μM、约0.005至约100μM、约0.01至约50μM、从约1至约50μM、约0.01至约25μM,从约0.01至约20μM,从约0.02至约20μM、从约0.02至约20μM或从约0.01至约20μM.

在某些实施方式中，所施用的化合物的量足以提供化合物的曲线下面积(AUC)，其范围从约100至约100000ng*hr/mL、从约1000至约50000ng*hr/mL、从约5000至约25000ng*hr/mL或从约5000至约10000ng*hr/mL。

在某些实施方式中，要使用本文所提供的方法之一治疗的患者在施用一种或多种本文所提供的化合物之前未用抗癌疗法治疗。在某些实施方式中，要使用本文所提供的方法之一治疗的患者在施用一种或多种本文所提供的化合物之前已用抗癌疗法治疗。在某些实施方式中，要使用本文所提供的方法之一治疗的患者对抗癌疗法发展出耐药性。

本文所提供的方法涵盖了不考虑患者年龄来治疗患者，尽管一些疾病或病症在某些年龄组中更常见。本文还提供了治疗已进行手术以尝试治疗有争论的疾病或病况的患者以及未进行手术的患者的方法。由于癌症受试者具有不同的临床表现和不同的临床结果，因此基于他的预后，给予特定受试者的治疗可以是不同的。熟练的临床医师将能够容易地确定可以有效地用于治疗个体癌症受试者的具体的第二试剂、手术类型和非药物基标准疗法的类型而无需过度的实验。

在一些实施方式中，可以通过口服、肠胃外(例如，肌内、腹膜内、静脉内、CIV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入、鼻部、阴道、直肠、舌下或局部(例如，透皮或局部)施用途径施用本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。可以单独配制本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，或者可以以适合的剂量单位与适合于每种施用途径的可药用的赋形剂、溶媒、佐剂和载体一起配制。

在一个实施方式中，口服施用本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。在另一个实施方式中，肠胃外施用一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。在另一个实施方式中，静脉内施用本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物可以作为单一剂量递送，例如，单一弹丸注射剂或口服片剂或丸剂；或随时间递送，如(例如)随时间连续输注或随时间分为弹丸剂量。如有必要，可以反复施用所述化合物，例如，直至患者病情稳定或疾病消退，或直至患者疾病发展或经受不可接受的毒性。例如，实体瘤稳定的病情一般是指与上次测量相比，可测量病变的垂直直径增加不到25％或以上。Response EvaluationCriteria in Solid Tumors(RECIST)Guidelines,Journal of the National CancerInstitute 92(3):205-216(2000)。通过本领域中已知的方法确定稳定的疾病或缺少稳定的疾病，所述方法如患者症状评价、身体检查、已使用X射线、CAT、PET或MRI扫描成像的肿瘤显象以及其它通常接受的评价方式。

本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物可以每天施用一次(QD)，或者每天分成多个剂量，如每天两次(BID)、每天三次(TID)和每天四次(QID)。另外，所述施用可以是连续的(即，连续日每日施用或者每日施用)、间歇的，例如，循环施用(即包括不施用药物停止数天、数周或数月)。如本文所使用的，术语“每天”旨在表示每天施用治疗性化合物，如本文所提供的化合物一次或一次以上，并施用(例如)一段时间。术语“连续”旨在表示每天施用治疗性化合物，如本文所提供的化合物，并施用至少10天至52周的不间断的一段时间。如本文所使用的术语“间歇的”或“间歇地”旨在表示以规则或不规则的间隔停止和开始。例如，本文所提供的化合物的间歇施用是每周施用1至6天，循环施用(例如，每天施用，连续施用2至8周，然后是停止期，不施用多至一周)，或者隔日施用。如本文所使用的术语“循环”旨在表示每天或连续施用治疗性化合物，但是有停止期。

在一些实施方式中，施用频率在约每日剂量至约每月剂量的范围内。在某些实施方式中，施用是每天一次，每天两次，每天三次，每天四次，每隔一天一次，每周两次，每周一次，每两周一次，每三周一次或每四周一次。在一个实施方式中，每天施用一次一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物；或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。在另一个实施方式中，每天施用两次一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。在另一个实施方式中，每天施用三次一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。在另一个实施方式中，每天施用四次一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其药物然而用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

在某些实施方式中，每天施用一次一种或多种本文所提供的化合物，或对映异构体或其对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，施用一天至六个月，一周至三个月，一周至四周，一周至三周或一周至两周。在某些实施方式中，每天施用一次一种或多种本文所提供的化合物，或其可药用的盐或溶剂化物，施用一周、两周、三周或四周。在一个实施方式中，每天施用一旦一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，施用一周。在另一个实施方式中，每天施用一次一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，施用两周。在另一个实施方式中，每天施用一次一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，施用三周。在另一个实施方式中，每天施用一次一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其药物然而用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，施用四周。

5.6.1与第二活性剂的组合疗法

本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物还可以与在本文所述的癌症的治疗和/或预防中有用的其它治疗剂混合或组合使用。

如本文所使用的，术语“联合”包括不止一种疗法(例如，一种或多种预防剂和/或治疗剂)的使用。然而，术语“联合”的使用不限制向患有疾病或病症的患者施用疗法(例如，预防剂和/或治疗剂)的顺序。可以在向受试者施用第二疗法(例如，预防剂或治疗剂)之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1星期、2星期、3星期、4星期、5星期、6星期、8星期或12星期之前)；与所述第二疗法一起或者在施用所述第二疗法之后(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1星期、2星期、3星期、4星期、5星期、6星期、8星期或12星期)，施用第一疗法(例如，预防剂或治疗剂，如本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物；或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物)。本文还考虑了三重疗法。

本文所提供的化合物和一种或多种第二活性剂向患者的施用可以同时进行或者通过相同或不同的施用途径顺序进行。用于特定活性剂的特定施用途径的适合性将取决于活性剂本身(例如，它是否可以口服施用而不会在进入血流之前分解)和待治疗的癌症。

本文所提供的化合物的施用途径与第二疗法的施用途径无关。在一个实施方式中，口服施用本文所提供的化合物。在另一个实施方式中，静脉内施用本文所提供的化合物。因此，根据这些实施方式，口服或静脉内施用本文所提供的化合物，并且可以口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、动脉内、经皮、舌下、肌内、直肠、经口含化、鼻内、脂质体、通过吸入法、阴道、眼内、通过导管或支架的局部递送、皮下、脂肪内、关节内、鞘内或以缓释剂量形式施用所述第二疗法。在一个实施方式中，通过相同施用方式(口服或通过IV)施用本文所提供的化合物和第二疗法。在另一个实施方式中，通过一种施用方式(例如，通过IV)施用本文所提供的化合物，而通过另一种施用方式(例如，口服)施用第二试剂(抗癌剂)。

在一个实施方式中，以约1至约1000mg，约5至约500mg，约10至约350mg或约50至约200mg的量静脉内或皮下施用第二活性剂，每天施用一次或两次。第二活性剂的具体的量将取决于所使用的具体试剂、待治疗或控制的疾病类型、疾病的严重程度和阶段以及第一活性剂的量和同时施用给患者的任何任选的其它活性剂。在某些实施方式中，所述第二活性剂是奥利默森GM-CSF、G-CSF、SCF、EPO、泰索帝、伊立替康、达卡巴嗪、反式视黄酸、拓扑替康、己酮可可碱、环丙沙星、地塞米松、长春新碱、多柔比星、COX-2抑制剂、IL2、IL8、IL18、IFN、阿糖胞苷、长春瑞滨或它们的组合。

在某些实施方式中，在4周或6周循环中在约5天内，以约1至约750mg/m²/天，约25至约500mg/m²/天，约50至约250mg/m²/天或约50至约200mg/m²/天的量皮下施用GM-CSF、G-CSF、SCF或EPO。在某些实施方式中，可以以约60至约500mcg/m²的量在2小时内静脉内施用GM-CSF，或者以约5至约12mcg/m²/天的量皮下施用。在某些实施方式中，可以开始以约1mcg/kg/天的量皮下施用G-CSF，然后可以根据粒性白细胞总数的升高进行调节。可以以约300(在较小的患者中)或480mcg的量皮下施用维持剂量的G-CSF。在某些实施方式中，可以以10000单位的量每周皮下施用EPO三次。

本文还涵盖了增加抗癌药物或试剂的剂量的方法，该抗癌药物或试剂可安全有效的向患者施用，该方法包括向患者(例如，人)施用本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。可以得益于该方法的患者是可能遭受与治疗特定乳腺癌的抗癌药物有关的副作用的那些患者。施用本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物能减缓或减轻副作用，所述副作用是如此严重以致限制了抗癌药物的用量。

在一个实施方式中，本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物以约0.1至约150mg、约1至约50mg或约2至约25mg的量在与施用抗癌药物有关的副作用发生之前、期间或之后每天口服施用于患者。在某些实施方式中，一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物与具体的试剂(如肝素、阿司匹林、苄丙酮香豆素钠或G-CSF)联合施用，以避免与抗癌药物有关的副作用，如(但不限于)中性粒细胞减少或血小板减少。

在一个实施方式中，本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物与其它活性成分(其包括(但不限于)抗癌药、抗炎剂、抗组胺药、抗生素和类固醇)联合施用于患有与不希望的血管生成有关或以之为特征的疾病和病症的患者。

在另一个实施方式中，本文涵盖了治疗、预防和/或控制癌症的方法，其包括联合常规疗法(例如，在此之前、与此同时或在此之后)施用一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，所述常规疗法包括(但不限于)目前用于治疗、预防或控制癌症的手术、免疫疗法、生物学疗法、放射疗法或其它非药物基疗法。本文所提供的化合物与常规疗法的联合使用可以提供独特的治疗方案，该治疗方案对于某些患者具有意想不到的效果。不受理论的限制，据信当与常规疗法一同使用时，本文所提供的化合物可以提供相加或协同效果。

如在本文中其它部分所讨论的，本文涵盖了减少、治疗和/或预防与常规疗法有关的副作用或不希望的作用的方法，所述常规疗法包括(但不限于)手术、化学疗法、放射疗法、激素疗法、生物学疗法和免疫疗法。本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物以及其它活性成分可以在与常规疗法有关的副作用发生之前、期间或之后施用于患者。

在一个实施方式中，本文所提供的化合物可以在使用常规疗法之前、期间或之后以约0.1至约150mg，约1至约25mg，约2至约10mg的量单独或联合本文所公开的第二活性剂(参见，例如，4.3节)每天口服施用。

5.6.2循环疗法

在某些实施方式中，向患者循环施用本文所提供的预防性或治疗性试剂。循环疗法涉及在一段时间内施用活性剂，然后停止一段时间，然后重复此施用顺序。循环疗法可减少对一种或多种疗法的耐药性的发展、避免或减少一种疗法的副作用和/或提高治疗效力。

因此，在某些实施方式中，在4-6个星期(其中停止施用约1或2周)内以单个或分开剂量每日施用一种或多种本文所提供的化合物。循环法还允许增加给药循环的频率、次数和时长。因此，在某些实施方式中，本文涵盖了当单独施用时，本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物比典型情况下更多次循环的施用。在某些实施方式中，本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物以可典型地引起患者剂量限制性毒性的更多次循环施用，且该患者没有施用第二活性成分。

在一个实施方式中，按从约0.1至约150mg/d的剂量每天连续施用本文所提供的化合物3或4周，接着休息1或2周。

在另一个实施方式中，在4-6周的循环中，口服施用本文所提供的化合物和第二活性成分，其中在施用第二活性成分之前30-60分钟，施用本文所提供的化合物。在某些实施方式中，本文所提供的化合物和第二活性成分的组合在每次循环内通过静脉输注而施用约90分钟。在某些实施方式中，一个循环包括每天施用约0.1至约150mg/天的本文所提供的化合物和约50至约200mg/m²/天的第二活性成分，施用3至4周，然后停止1或2周。在某些实施方式中，将组合治疗施用于患者的循环次数将为约1至约24次循环，约2至约16次循环，或约4至约3次循环。

5.7药物组合物和剂型

在一个实施方式中，本文提供了药物组合物和剂型，其包含一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。在另一个实施方式中，药物组合物和剂型还包含一种或多种赋形剂。

在某些实施方式中，本文所提供的药物组合物和剂型还包含一种或多种其它活性成分。因此，本文所提供的药物组合物和剂型包含一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物和第二活性剂。本文公开了任选的第二或其它活性成分的实例。参见5.6.1节。

本文所提供的单一单位剂型适合于口服、粘膜(例如，鼻部、舌下、阴道、口腔或直肠)、肠胃外(例如，皮下、静脉内、弹丸注射、肌内或动脉内)、局部(例如，滴眼剂或其它眼科制剂)、透皮或经皮方式施用患者。剂型的实例包括(但不限于)片剂；囊片剂；胶囊，如弹性软明胶胶囊；扁囊剂；锭剂；糖锭剂；分散剂；栓剂；粉末；气溶剂(例如，鼻部喷雾剂或吸入剂)；凝胶剂；适于口腔或粘膜施用患者的液体剂型，包括混悬液(例如，水性或非水性液体混悬液、水包油乳液或油包水液体乳液)、溶液剂和酏剂；适于向患者肠胃外施用的液体剂型；适于局部施用的滴眼剂或其它眼科制剂；以及可重新配制以提供适于患者肠胃外施用的无菌固体(例如，结晶或无定形固体)。

本文所提供的剂型的组成、形状和类型可以根据它们的用途而改变。例如，用于疾病的急性治疗的剂型与用于相同疾病慢性治疗的剂型相比，可以含有更大量的一种或多种活性成分。相似地，肠胃外剂型与用于治疗相同疾病的口服剂型相比，可以含有更少量的一种或多种活性成分。参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing,Easton PA(1990)。

特定赋形剂是否适合掺入到本文所提供的药物组合物或剂型中取决于多种因素，其包括(但不限于)施用途径。例如，口服剂型(如片剂)可能含有不适合于在肠胃外剂型中使用的赋形剂。特定赋形剂的适合性还可以取决于所述剂型中具体的活性成分。例如，通过一些赋形剂(如乳糖)，或者当暴露于水时，可以加快一些活性成分的分解。包含伯胺或仲胺的活性成分对这种加速分解是特别敏感的。因此，本文涵盖了含有少量(如果有的话)乳糖的药物组合物和剂型。如本文所使用的，术语“不含乳糖的”是指所存在的乳糖的量(如果有的话)不足以显著提高活性成分的降解速率。

本文所提供的不含乳糖的组合物可以包含(例如)美国药典(USP)25-NF20(2002)中所列的赋形剂。在某些实施方式中，不含乳糖的组合物包含药物相容的并且可药用的量的活性成分、粘结剂/填充剂和润滑剂。在某些实施方式中，不含乳糖的剂型包含活性成分、微晶纤维素、预胶凝淀粉和硬脂酸镁。

由于水可以有利于一些化合物的降解，因此本文还涵盖了包含活性成分的无水药物组合物和剂型。例如，在药学领域中加入水(例如，5％)作为模拟长期储存的方式以确定制剂随时间的特性(如货架期或稳定性)是广泛接受的。参见，例如，Jens T.Carstensen,Drug Stability:Principles&Practice,第2版,Marcel Dekker,NY,NY,1995,第379-80页。实际上，水和热加快了一些化合物的分解。因此，水对制剂的影响可以是显著的，这是因为在制剂的生产、处理、包装、存储、运输和使用期间一般会遇到水分和/或潮气。

可以使用无水或含有低水分的成分以及低水分或低湿度条件制备本文所提供的无水药物组合物和剂型。如果预期在生产、包装和/或存储期间会与水分和/或潮气发生显著接触，则包含乳糖和至少一种含有伯氨或仲胺的活性成分的药物组合物和剂型优选地为无水的。

应制备和存储无水药物组合物从而维持其无水性质。因此，在某些实施方式中，本文提供了使用防止暴露于水的材料包装的无水组合物，从而使它们可以包含在适合的配方试剂盒中。适合的包装的实例包括(但不限于)气密性箔片、塑料制品、单位剂量容器(例如，小瓶)、泡罩包装和条状包装。

本文涵盖了药物组合物和剂型，其包含一种或多种降低活性成分分解速率的化合物。这些化合物(在本文中称为“稳定剂”)包括(但不限于)抗氧化剂(如抗坏血酸)、pH缓冲剂或盐缓冲剂。

像赋形剂的量和类型一样，剂型中活性成分的量和特定类型可以根据因素而不同，如(但不限于)其向患者施用的途径。在某些实施方式中，本文所提供的剂型包含一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，其量在约0.10至约1000mg，从约0.10至约500mg，从约0.10至约200mg，从约0.10至约150mg，从约0.10至约100mg或从约0.10至约50mg的范围内。在某些实施方式中，本文所提供的剂型包含一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，其量为约0.1、约1、约2、约5、约7.5、约10、约12.5、约15、约17.5、约20、约25、约50、约100、约150或约200mg。

5.7.1口服剂型

在某些实施方式中，将适合于口服的本文所提供的药物组合物作为分开的剂型配制，其实例包括(但不限于)片剂(例如，咀嚼片)、囊片剂、胶囊和液体剂(例如，调味糖浆)。这些剂型含有预定量的活性成分，并且可以通过一些已知的药学方法制备。一般地，参见，Remington'sPharmaceutical Sciences，第19版，Mack Publishing,Easton PA(1990)。

在某些实施方式中，本文所提供的口服剂型是根据常规药物混合技术通过将活性成分与至少一种赋形剂密切混合制备的。根据施用所期望的制剂形式，赋形剂可以采取多种形式。例如，适用于在口服液体或气溶胶剂型中使用的赋形剂包括(但不限于)水、乙二醇、油剂、醇、调味剂、防腐剂和着色剂。适用于在固体口服剂型(例如，粉剂、片剂、胶囊和囊片)中使用的赋形剂的实例包括(但不限于)淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘结剂和崩解剂。

由于它们易于施用，因此片剂和胶囊代表了最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下使用固体赋形剂。如果需要，可以通过标准水性或非水性技术涂覆片剂。可以通过一些已知的药学方法制备这些剂型。在某些实施方式中，通过将活性成分与液体载体、细碎的固体载体或两者均匀并且密切地混合，然后如有必要将产物成形为所需的外观来制备药物组合物和剂型。

在某些实施方式中，通过挤压或模制制备片剂。在某些实施方式中，通过将任选地与赋形剂混合的自由流动形式(例如，粉末或颗粒)的活性成分在适合的机械中挤压来制备压制片剂。在某些实施方式中，通过将用惰性液体稀释剂湿润的粉末化合物的混合物在适合的机械中模制来制备模制片剂。

可以在本文所提供的口服剂型中使用的赋形剂的实例包括(但不限于)粘结剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适用在本文所提供的药物组合物和剂型中使用的粘结剂包括(但不限于)玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉、明胶、天然和合成树胶，如阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、其它海藻酸盐、粉末黄芪胶、瓜耳豆胶、纤维素及其衍生物(例如，乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶凝淀粉、羟丙基甲基纤维素(例如，No.2208、2906、2910)、微晶纤维素及其混合物。

适合的微晶纤维素的形式包括(但不限于)AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105(FMC Corporation,American Viscose Division,Avicel Sales,Marcus Hook,PA)及其混合物。具体的粘结剂为微晶纤维素和羧甲基纤维素钠(例如，AVICEL RC-581)的混合物。适合的无水或低水分赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^TM和淀粉1500LM。

适合在本文所提供的药物组合物和剂型中使用的填充剂的实例包括(但不限于)滑石、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末纤维素、葡聚糖结合剂、白陶土、甘露醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预胶凝淀粉及其混合物。在某些实施方式中，本文所提供的药物组合物中的粘结剂或填充剂以所述药物组合物或剂型的约50至约99wt％存在。

在本文所提供的组合物中使用崩解剂以为片剂提供当暴露于水相环境时分解的能力。含有过多崩解剂的片剂可能会在储存时分解，而含有过少的那些可能不会以所需的速率或者在所需的条件下分解。因此，应使用既不多也不少的不会有害地改变活性成分释放的足够量的崩解剂来形成本文所提供的固体口服剂型。所使用的崩解剂的量基于制剂类型改变。在某些实施方式中，本文所提供的药物组合物包含约0.5至约15wt％或约1至约5wt％的崩解剂。

适合于在本文所提供的药物组合物和剂型中使用的崩解剂包括(但不限于)琼脂，海藻酸，碳酸钙，微晶纤维素，交联羧甲纤维素钠，交聚维酮，波拉克林钾，淀粉羟基乙酸钠，马铃薯或木薯淀粉、其它淀粉、预胶凝淀粉、其它淀粉、粘土，其它褐藻胶，其它纤维素，树胶及其混合物。

适合在本文所提供的药物组合物和剂型中使用的润滑剂包括(但不限于)硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露醇、聚乙二醇、其它乙二醇、硬脂酸、月桂基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如，花生油、棉花子油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂及其混合物。其它润滑剂包括(但不限于)syloid硅胶(AEROSIL200,W.R.Grace Co.,Baltimore,MD)、凝固的合成二氧化硅气溶胶(Degussa Co.of Plano,TX)、CAB-O-SIL(焦化二氧化硅,Cabot Co.of Boston,MA)及其混合物。在某些实施方式中，如果非要使用，则润滑剂以小于其所掺入的药物组合物或剂型的约1wt％的量使用。

在某些实施方式中，本文提供了固体口服剂型，其包含一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物；和一种或多种赋形剂，其选自无水乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸、胶体无水氧化硅和明胶。

在某些实施方式中，本文提供了固体口服剂型，其包含一种或多种本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物；和无水乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸、胶体无水氧化硅和明胶。

在某些实施方式中，本文提供了固体口服剂型，其包含一种或多种本文所提供的化合物的盐酸盐，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物；和一种或多种赋形剂，其选自无水乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷、硬脂酸、胶体无水氧化硅和明胶。

在某些实施方式中，本文提供了固体口服剂型，其包含一种或多种本文所提供的化合物的盐酸盐，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物；和无水乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷、硬脂酸、胶体无水氧化硅和明胶。

5.7.2缓释剂型

在某些实施方式中，通过缓释方式或通过递送装置施用本文所提供的活性成分。实例包括(但不限于)美国专利No.：3845770；3916899；3536809；3598123；4008719；5674533；5059595；5591767；5120548；5073543；5639476；5354556和5733566，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在某些实施方式中，通过以不同的比例使用(例如)羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层涂层、微粒、脂质体、微球或它们的组合以提供所需的释放分布图，这些剂型可以用于提供一种或多种活性成分的缓慢或控制释放。本文涵盖了适合于口服的单一单位剂型，其包括(但不限于)适合于缓释的片剂、胶囊、胶丸(gelcaps)和囊片剂。

所有控释药物产品具有共同的目标：改善药物疗法以优于其不控释的对应物。理想地，在医学治疗中优化设计的控释制剂的使用的特征在于在最短的时间内使用最少的药物物质来治愈或控制病况。控释制剂的优势包括延长的药物活性、降低的剂量频率和提高的患者顺应性。另外，控释制剂可以用于影响作用或其它特征的发生时间，如药物的血液水平，并因此可以影响副作用(例如，不良作用)的发生。

大部分控释制剂设计在开始时释放快速产生所需治疗效果的药物(活性成分)量，并逐渐和不断地释放其它量的药物以在延长的一段时间内维持这种治疗或预防效果的水平。为了在体内维持药物的这种恒定水平，必须以将替代代谢掉和从体内排出的药物量的速率从所述剂型中释放药物。可以通过多种条件刺激活性成分的控释，其包括(但不限于)pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物。

5.7.3肠胃外剂型

肠胃外剂型可以通过多种途径施用至患者，包括(但不限于)皮下、静脉内(包括弹丸注射)、肌内和动脉内施用。由于肠胃外剂型的施用通常绕过了患者对污染物的天然防御，因此肠胃外剂型优选地为无菌的或者能够在施用至患者前灭菌。肠胃外剂型的实例包括(但不限于)注射用溶液、溶解或悬浮在注射用可药用溶媒中的干产品、注射用混悬剂和乳剂。

可用于提供本文所提供的肠胃外剂型的一些适合的溶媒包括(但不限于)：注射用水USP；水性溶媒，如(但不限于)氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液以及乳酸林格氏注射液；水可混溶的溶媒，如(但不限于)乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水溶媒，如(但不限于)玉米油、棉花子油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

本文所公开的提高一种或多种活性成分溶解性的化合物也可以加入到本文所提供的肠胃外剂型中。例如，环糊精及其衍生物可用于提高本文所提供的化合物的溶解度，例如，本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。参见(例如)美国专利No.5134127，该专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。

5.7.4局部和粘膜剂型

本文所提供的局部和粘膜剂型包括(但不限于)喷雾剂、气溶剂、溶液、乳液、混悬液、滴眼剂或其它眼科制剂或者其它本领域技术人员已知的形式。参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16和18版，Mack Publishing,Easton PA(1980&1990)；和Introduction to PharmaceuticalDosage Forms,第4版，Lea&Febiger,Philadelphia(1985)。适用于治疗口腔内粘膜组织的剂型可以配制成漱口药或口腔凝胶剂。

本文所涵盖的可用于提供局部和粘膜剂型的适合的赋形剂(例如，溶媒和稀释剂)和其它材料取决于将施用给定药物组合物或剂型的特定组织。考虑到该事实，在某些实施方式中，所述赋形剂包括(但不限于)水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇、豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其混合物，以形成无毒的和可药用的溶液、乳剂或凝胶剂。如果需要，也可以向药物组合物和剂型中加入增湿剂或润湿剂。这些成分的其它实例可见于，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16和18版，Mack Publishing,Easton PA(1980&1990)。

还可以调节药物组合物或剂型的pH以改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可以调节溶剂载体的极性、其离子强度或渗涨度来改善递送。还可以将化合物(如硬脂酸酯)加入至药物组合物或剂型中以有利地改变一种或多种活性成分的亲水性或亲油性，从而改善递送。在这点上，硬脂酸酯可以用作制剂的脂质溶媒、用作乳化剂或表面活性剂以及用作递送增强剂或透过增强剂。可以使用活性成分的不同的盐、水合物或溶剂化物以进一步调节得到的组合物的性质。

5.7.5试剂盒

在某些实施方式中，本文所提供的活性成分未同时或通过相同施用途径施用于患者。因此，本文涵盖了试剂盒，当开业医生使用时，所述试剂盒可以简化适当量的活性成分向患者的施用。

在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒包含本文所提供的化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物的剂型。在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒还包含其它活性剂，或其药理学活性的变体或衍生物，或者它们的组合。其它活性成分的实例包括(但不限于)本文所公开的那些(参见，例如，4.3节)。

在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒还包含用于施用活性成分的装置。这些装置的实例包括(但不限于)注射器、滴袋(drip bags)、贴片和吸入器。

在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒还包含用于移植的细胞或血液以及可用于施用一种或多种活性成分的可药用的溶媒。例如，如果活性成分是以必须复原以用于肠胃外施用的固体形式提供的，则所述试剂盒可以包括适合溶媒的密封容器，在所述容器中，所述活性成分可以溶解以形成适合于肠胃外施用的不含颗粒的无菌溶液。可药用的溶媒的实例包括(但不限于)：注射用水USP；水性溶媒，如(但不限于)氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液以及乳酸林格氏注射液；水可混溶的溶媒，如(但不限于)乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水溶媒，如(但不限于)玉米油、棉花子油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

在其它实施方式中，本文提供了用于预测有效治疗的可能性或用于监控使用一种或多种本文所提供的化合物治疗的有效性的试剂盒。所述试剂盒包含固体载体，与所述载体接触的核酸，其中所述核酸与mRNA的至少20、50、100、200、350或更多个碱基互补，以及用于检测生物样品中mRNA表达的方式。

在另一个实施方式中，本文提供了用于预测有效治疗的可能性或用于监控使用一种或多种本文所提供的化合物治疗的有效性的试剂盒。所述试剂盒包含固体载体，与所述载体接触的至少一种核酸，其中所述核酸与mRNA的至少20、50、100、200、350、500或更多个碱基互补，以及用于检测生物样品中mRNA表达的方式。

在某些实施方式中，本文所提供的试剂盒使用了通过实时定量PCR(QRT-PCR)、微阵列、流式细胞术或免疫荧光检测生物标志物表达的方式。在其它实施方式中，生物标志物的表达是通过基于酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法或本领域中已知的其它类似方法测量的。

在另一个实施方式中，所述试剂盒包含固体载体，与所述载体接触的核酸，其中所述核酸与mRNA的至少20、50、100、200、350或更多个碱基互补，以及用于检测生物样品中mRNA表达的方式。

6.实施例

通过以下非限制性实施例说明了本文所提供的某些实施方式。

6.13-(4-氨基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮(来那度胺)的制备

甲基2-溴甲基-3-硝基苯甲酸盐

将甲基-2-甲基-3-硝基苯甲酸盐(14.0g，71.7mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(15.3g，86.1mmol)在四氯化碳(200mL)中的搅拌混合物在温和回流下加热15小时，同时将置于三角瓶2cm处的100W灯泡在三角瓶上照射。将所述混合物过滤并用二氯甲烷(50mL)清洗固体。用水(2×100mL)、盐水(100mL)清洗滤液并干燥。真空下除去溶剂并通过快速色谱法(己烷/乙酸乙酯，8/2)纯化残余物以提供19g黄色固体状产物(96％)：mp70.0-71.5℃；1ΗNMR(CDC1₃)δ8.12-8.09(dd,J＝1.3and 7.8Hz,1H),7.97-7.94(dd,J＝1.3and 8.2Hz,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H).5.15(s,2H),4.00(s,3H)；¹³C NMR(CDC1₃)δ165.85,150.58,134.68,132.38,129.08,127.80,53.06,22.69；HPLC,Water Nove-Pak/C18,3.9x150mm,4微米,1mL/min,240nm,40/60 CH₃CN/0.1％H₃PO₄(aq)7.27min(98.92％)；C₉H₈NO₄Br的理论值：C,39.44；H,2.94；N,5.11；Br,29.15。实测值：C,39.46；H,3.00；N,5.00；Br,29.11。

叔丁基N-(1-氧-4-硝基异吲哚啉-2-基)-L-谷氨酰胺

将三乙胺(2.9g，28.6mmol)滴加至甲基-2-溴甲基-3-硝基苯甲酸盐(3.5g，13.0mmol)和L-谷氨酰胺叔丁酯盐酸盐(3.1g，13.0mmol)在四氢呋喃(90mL)中的搅拌混合物中。将混合物加热回流24小时。向冷却的混合物中加入二氯甲烷(150mL)，并用水(2×40mL)、盐水(40mL)清洗混合物并干燥。真空下除去溶剂，并通过快速色谱法(3％CH3OH在二氯甲烷中的溶液)纯化残余物以提供2.84g粗产物(60％)，该粗产物在下一反应中直接使用：1ΗNMR(CDC1₃)δ8.40(d,J＝8.1Hz,1H),8.15(d,J＝7.5Hz,1H),7.71(t,J＝7.8Hz,1H),5.83(s,1H),5.61(s,1H),5.12(d,J＝19.4Hz,1H),5.04-4.98(m,1H),4.92(d,J＝19.4Hz,1H),2.49-2.22(m,4H).1.46(s,9H)；HPLC,Waters Nova-Pak C18,3.9x150mm,4微米,1mL/min,240nm,25/75CH₃CN/0.1％H₃PO₄(aq)6.75min(99.94％)。

N-(1-氧-4-硝基异吲哚啉-2-基)-L-谷氨酰胺

将氯化氢气体鼓泡至叔丁基N-(1-氧-4-硝基-异吲哚啉-2-基)-L-谷氨酰胺(3.6g，9.9mmol)在二氯甲烷(60mL)中搅拌的5℃溶液中1小时。然后，将混合物在室温下再搅拌1小时。加入乙醚(40mL)，并将所得混合物搅拌30分钟。过滤浆液，用乙醚清洗并干燥以提供3.3g产物：1ΗNMR(DMSO-d₆)δ8.45(d,J＝8.1Hz,1H),8.15(d,J＝7.5Hz,1H),7.83(t,J＝7.9Hz.1H),7.24(s,1H),6.76(s,1H),4.93(s,2H),4.84-4.78(dd,J＝4.8amd 10.4Hz,1H),2.34-2.10(m,4H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ173.03,171.88,165.96,143.35,137.49,134.77,130.10,129.61,126.95,53.65,48.13,31.50,24.69；C₁₃H₁₃N₃O₆的理论值：C,50.82；H,4.26；N,13.68。实测值：C,50.53；H.4.37；N,13.22。

(S)-3-(1-氧-4-硝基异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

用异丙醇/干冰浴将N-(1-氧-4-硝基异吲哚啉-2-基)-L-谷氨酰胺(3.2g，10.5mmol)在无水二氯甲烷(150mL)中的搅拌悬液混合物冷却至-40℃。将亚硫酰氯(0.82mL，11.3mmol)滴加至冷却混合物，然后加入吡啶(0.9g，11.3mmol)。30分钟后，加入三乙胺(1.2g，11.5mmol)，并将混合物在-30至-40℃搅拌3小时。将该混合物倒入冰水(200mL)中，并用二氯甲烷(40mL)萃取水层。用水(2×60mL)、盐水(60mL)清洗二氯甲烷溶液并干燥。真空下除去溶剂并将固体残余物与乙酸乙酯(20mL)混合成浆以提供2.2g白色固体状产物(75％)：mp 285℃；1ΗNMR(DMSO-d₆)δ:1.04(s,1H),8.49-8.45(dd,J＝0.8and 8.2Hz,1H),8.21-8.17(dd,J＝7.3Hz,1H),7.84(t,J＝7.6Hz,1H),5.23-5.15(dd,J＝4.9and 13.0Hz,1H),4.96(dd,J＝19.3and 32.4Hz,2H),3.00-2.85(m,1H),2.64-2.49(m,2H),2.08-1.98(m,1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ172.79,170.69,165.93,143.33,137.40,134.68,130.15,129.60,127.02,51.82,48.43,31.16.22.23；HPLC,Waters Nove-Pak/C18,3.9x150mm,4微米,1mL/min,240nm,20/80 CH₃CN/0.1％H₃PO₄(aq)3.67min(100％)；C₁₃H_nN₃O₅的理论值：C,53.98；H,3.83；N,14.53。实测值:C,53.92；H,3.70；N,14.10。

3-(4-氨基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮

将(S)-3-(1-氧-4-硝基异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.0g，3.5mmol)和10％Pd/C(0.3g)在甲醇(600mL)中的混合物在Parr-振荡装置中用50psi的氢气氢化5小时。通过硅藻土过滤混合物并真空浓缩滤液。将固体在热乙酸乙酯中混合成浆30min，过滤并干燥以提供0.46g(51％)白色固体状产物：mp 235.5-239℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δ11.01(s,1H).7.19(t,J＝7.6Hz,1H).6.90(d.J＝7.3Hz,1H),6.78(d,J＝7.8Hz,1H),5.42(s,2H).5.12(dd.J＝5.1and 13.1Hz,1H),4.17(dd,J＝17.0and 28.8Hz,2H),2.92-2.85(m,1H).2.64-2.49(m,1H).2.34-2.27(m,1H),2.06-1.99(m,1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ172.85,171.19,168.84,143.58,132.22.128.79,125.56,116.37,110.39,51.48,45.49,31.20,22.74；HPLC.Waters Nova-Pak/C18,3.9x150mm,4微米,1mL/min,240nm,10/90 CH₃CN/0.1％H₃PO₄(aq)0.96min(100％)；手性分析,Daicel Chiral Pak AD,40/60Hexane/IPA,6.60min(99.42％)；C₁₃H₁₃N₃O₃的理论值:C,60.23；H,5.05；N,16.21。实测值:C,59.96；H.4.98；N,15.84。

还可以通过本领域中已知的方法制备3-(4-氨基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，例如，如Drugs of the Future,2003,28(5):425-431中所提供的，该参考文献的全部内容作为参考并入。

6.24-氨基-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1H-异吲哚-1,3-二酮(泊马度胺)的制备

在(例如)美国专利No.7812169和7709502中描述了4-氨基-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1H-异吲哚-1,3-二酮的制备，以上每篇专利的全部内容作为参考并入。

向羧基苄氧基-L-谷氨酰胺(2.8g，10mmol)在40mL无水THF的搅拌溶液中加入1,1-羰二咪唑(1.92g，12mmol)。将反应混合物加热回流18小时。蒸发THF，并将产物溶于氯仿。用水和盐水清洗氯仿层，并用无水CaSO₄干燥，过滤并蒸发以提供白色固体。将固体产物从乙醚中结晶以提供2.4克结晶粉末(90％)。(作为另外一种选择，可以通过用在N,N-二甲基甲酰胺中的SOCl₂溶液在-7℃至0℃处理1小时使羧基苄氧基-L-谷氨酰胺环化以形成产物)。用CHCl₃稀释反应混合物，并用5％Na₂CO₃清洗，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发以提供2.5g S(-)-(3-苄氧基羰基氨基)-戊二酰亚胺)(90％得率)。¹H NMR(CDCl₃)δ8.2(1H,s宽峰),7.4(5H,s,芳香族),5.8(1H,d),5.15(2H,s),4.4(1H,dd,J＝4.5,3),2.95-2.4(3H,m),1.86(1H,d,t,J＝11.5,6.5)。m.p.122-124℃(lit.122-124℃)。

在20℃，向S(-)-(2-苄氧基羰基氨基)戊二酰亚胺(1.2g，4.6mmol)在15mL冰乙酸中的溶液中加入8mL 30％HBr/乙酸溶液。将反应混合物的温度升至RT并搅拌1小时。在反应混合物中开始出现S-(-)-2-氨基-戊二酰亚胺HBr的白色固体粉末。过滤固体，并用5mL冰乙酸，然后用乙醚清洗以提供1.8g产物(80％)。用旋光仪对产物的分析显示(-)旋转，[a]²⁵D(c＝1，水)＝37.5°，并确认产物是S-(-)-2-氨基-戊二酰亚胺。DMSO-D₆中的1H NMR确认产物是2-氨基-L-戊二酰亚胺HBr。

向4.18g，20mmol的S-(-)-2-氨基-戊二酰亚胺HBr在50mL无水DMF中的溶液中加入3.8g(20mmol)的3-硝基苯二甲酸酐。加入100mL(冰)乙酸后，将反应混合物在约70℃至约80℃加热约24小时。此后，在真空下蒸发溶剂以获得黄白色固体。向固体中加入10mL乙醇时，形成黄白色粉末产物。分离产物并用20mL乙醇清洗。¹H NMR(DMSO-D₆)δ11.25(1H,s宽峰),8.35(1H,d,J＝7.2),8.25(1H,d,J＝7.0),8.15(1H,t,J＝8.0),5.2(1H,dd,J＝5.5,7.2),3.00-2.85(1H,m),2.65-2.4(2H,m),2.15-2.05(1H,m)。m.p.:228-229℃(lit.228.5-229.5℃)。

将4-硝基-沙利度胺(1g，3.3mmol)溶于50mL二恶烷/甲醇(4:1)混合物中，并在存在Pd/C 5％催化剂的情况下，用40psi氢在Parr氢化器中氢化约4小时。通过硅藻土过滤剂过滤反应混合物后，在真空下蒸发溶剂以获得黄色粉末。从乙酸乙酯/二恶烷中重结晶产物以获得800mg S(-)-4-氨基-沙利度胺(85％纯度)。¹H NMR in DMSO-D₆:11.10(1H,s宽峰),7.45(1H,t,J＝7.5),7.05(1H,d,J＝5.2),6.95(1H,d,J＝5.2),6.5(2H,s宽峰),5.05(1H,dd,J＝5.0,13.42),2.95-2.80(1H,m),2.65-2.5(2H,m),2.05-1.95(1H,m)。m.p.318.2-319.5℃。通过将(R)-和(S)-4-氨基-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1H-异吲哚-1,3-二酮的比旋度[a]²⁵D与类似化合物R(+)-和S(-)-沙利度胺相比较来确定绝对构型。用旋光仪对产物的分析显示(-)旋转，[a]²⁵D(C＝0.5，二恶烷)＝-27.70°，并确认产物是S(-)-4-氨基-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1H-异吲哚-1,3-二酮。

通过手性HPLC柱Welk-01(10mm×750mm)并用CH₃CN/MeOH/H₂O(1:1:5)混合物洗脱来拆分两种对映异构体。在2mL/min的流速，240nm下，S(-)对映异构体的保留时间为33.74分钟，R(+)对映异构体的为35.62分钟。

6.33-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮的制备

在0℃，向氢氧化钾(16.1g，286mmol)的水溶液(500mL)中部分地加入3-硝基邻苯二甲酰亚胺(25.0g，130mmol)。在0℃，将混悬液搅拌3小时，然后加热至30℃三小时。向所述溶液中加入HCl(100mL，6N)。将所得的混悬液冷却至0℃一小时。将所述混悬液过滤并用冷水清洗(2×10mL)以获得白色固体状3-硝基-酞氨酸(24.6g，90％的得率)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ7.69(brs,1H,NHH),7.74(t,J＝8Hz,1H,Ar),7.92(dd,J＝1,8Hz,1H,Ar),8.13(dd,J＝1,8Hz,1H,Ar),8.15(brs,1H,NHH),13.59(s,1H,OH)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ125.33,129.15,130.25,132.54,136.72,147.03,165.90,167.31。

在0℃，向3-硝基-酞氨酸(24.6g，117mmol)和氢氧化钾(6.56g，117mmol)在水(118mL)中的混合物中加入溴(6mL)、氢氧化钾(13.2g，234mmol)在水(240mL)中的混合物，然后加入氢氧化钾(19.8g，351mmol)在水(350mL)中的溶液。在0℃，5分钟后，将混合物在100℃的油浴中加热1小时。将反应溶液冷却至室温，然后在冰-水浴中保持30分钟。在0℃向所述混合物中滴加HCl溶液(240mL，2N)，并将所得混合物保持1小时。将混悬液过滤并用水清洗(5mL)以获得黄色固体状2-氨基-6-硝基-苯甲酸(15.6g，73％得率)：HPLC:Waters Symmetry C₁₈,5μm,3.9x 150mm,1mL/min,240nm,CH₃CN/0.1％H₃PO₄,5分钟内5％至95％的梯度,5.83min(85％)；¹H NMR(DMSO-d₆)δ6.90(dd,J＝1,8Hz,1H,Ar),7.01(dd,J＝1,9Hz,1H,Ar),7.31(t,J＝8Hz,1H,Ar),8.5-9.5(brs,3H,OH,NH₂)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ105.58,110.14,120.07,131.74,149.80,151.36,166.30；LCMS:MH＝183。

将2-氨基-6-硝基-苯甲酸(1.5g，8.2mmol)在乙酸酐(15mL)中的混合物在微波炉中在200℃加热30分钟。将混合物过滤并用乙酸乙酯(20mL)清洗。真空浓缩滤液。将固体在乙醚(20mL)中搅拌2小时。将混悬液过滤并用乙醚(20mL)清洗以获得浅棕色固体状2-甲基-5-硝基-苯并[d][1,3]恶嗪-4-酮(1.4g，85％得率)：HPLC:Waters Symmetry C₁₈,5μm,3.9x 150mm,1mL/min,240nm,CH₃CN/0.1％H₃PO₄,5min内5％至95％的梯度,5.36min(92％)；¹H NMR(DMSO-d₆)δ2.42(s,3H,CH₃),7.79(dd,J＝1,8Hz,1H,Ar),7.93(dd,J＝1,8Hz,1H,Ar),8.06(t,J＝8Hz,1H,Ar)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ20.87,107.79,121.54,128.87,137.19,147.12,148.46,155.18,161.78；LCMS:MH＝207。

将分别装有5-硝基-2-甲基-苯并[d][1,3]恶嗪-4-酮(0.60g，2.91mmol)和3-氨基-哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.48g，2.91mmol)在吡啶(15mL)中的混悬液的两个小瓶在微波炉中在170℃加热10分钟。将混悬液过滤并用吡啶(5mL)清洗。真空浓缩滤液。将所得混合物在HCl(30mL，1N)、乙酸乙酯(15mL)和乙醚(15mL)中搅拌2小时。将所述混悬液过滤并用水(30mL)和乙酸乙酯(30mL)清洗以获得深棕色固体，将该固体与甲醇(50mL)在室温下搅拌过夜。将所述混悬液过滤并用甲醇清洗以获得黑色固体3-(2-甲基-5-硝基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮(490mg，27％得率)。将所述固体不用进一步纯化而用于下一步。

将3-(2-甲基-5-硝基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮(250mg)和负载在碳上的Pd(OH)2(110mg)在DMF(40mL)中的混合物在氢气(50psi)下振荡12小时。将混悬液通过硅藻土垫过滤并用DMF(10mL)清洗。真空浓缩滤液并将所得的油通过快速柱色谱(硅胶，甲醇/二氯甲烷)纯化以获得白色固体状3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮(156mg，69％得率)：HPLC:Waters Symmetry C₁₈,5μm,3.9x 150mm,1mL/min,240nm,10/90 CH₃CN/0.1％H₃PO₄,3.52min(99.9％)；mp:293-295℃；¹HNMR(DMSO-d₆)δ2.10-2.17(m,1H,CHH),2.53(s,3H,CH₃),2.59-2.69(m,2H,CH₂),2.76-2.89(m,1H,CHH),5.14(dd,J＝6,11Hz,1H,NCH),6.56(d,J＝8Hz,1H,Ar),6.59(d,J＝8Hz,1H,Ar),7.02(s,2H,NH₂),7.36(t,J＝8Hz,1H,Ar),10.98(s,1H,NH)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ20.98,23.14,30.52,55.92,104.15,110.48,111.37,134.92,148.17,150.55,153.62,162.59,169.65,172.57；LCMS:MH＝287；C₁₄H₁₄N₄O₃+0.3H₂O的理论值:C,57.65；H,5.05；N,19.21。实测值:C,57.50；H,4.73；N,19.00。

6.43-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮的制备

3-羟基-2-甲基-苯甲酸甲酯

将3-羟基-2-甲基苯甲酸(105g，690mmol)加入到配备有冷凝器、温度计和搅拌棒的2L三口圆底烧瓶中的MeOH(800mL)中，然后加入甲醇(250ml)。将H₂SO₄(10mL，180mmol)加入上述溶液。将反应混合物在62℃搅拌17小时。真空下除去溶剂。将残余物(200mL)在室温下缓慢加入水(600mL)中，并形成白色固体。将混悬液在冰浴中搅拌30分钟并过滤。用水清洗(5×250mL)固体并干燥以提供白色固体状3-羟基-2-甲基-苯甲酸甲酯(100g，得率87％)。在下一步中使用所述化合物而无需进一步纯化：LCMS MH＝167；¹H NMR(DMSO-d₆)2.28(s,3H,CH₃),3.80(s,3H,CH₃),6.96-7.03(m,1H,Ar),7.09(t,J＝7.8Hz,1H,Ar),7.14-7.24(m,1H,Ar),9.71(s,1H,OH)。

3-(叔丁基-二甲基-硅基氧)-2-甲基-苯甲酸甲酯

向配备有搅拌棒和温度计的1L三口RB烧瓶中加入DMF(300mL)、甲基3-羟基-2-甲基苯甲酸酯(90g，542mmol)和咪唑(92g，1.354mmol)。在20分钟内将TBDMS-Cl(90g，596mmol)部分地加入到上述溶液中，从而将内部温度控制在15-19℃之间，在加入后，将内部温度降低至1℃以下。除去冰浴，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物加入到冰水(500mL)中，并将所得溶液分成两部分(700mL×2)。用EtOAc(700mL)萃取每个部分。用冷水(350mL)和盐水(350mL)清洗每个有机层。合并有机层并用MgSO4干燥。浓缩合并的有机层以提供浅棕色油状3-(叔丁基-二甲基-硅基氧)-2-甲基-苯甲酸甲酯(160g，粗得率100％)。在下一步中使用所述化合物而无需进一步纯化：LCMS MH＝281；¹H NMR(DMSO-d₆)-0.21(s,6H,CH₃,CH₃),0.73-0.84(m,9H,CH₃,CH₃,CH₃),2.10(s,3H,CH₃),3.60(s,3H,CH₃),6.82(dd,1H,Ar),6.97(t,J＝7.9Hz,1H,Ar),7.13(dd,J＝1.1,7.7Hz,1H,Ar)。

2-溴甲基-3-(叔丁基-二甲基-硅基氧)-苯甲酸甲酯

在室温下，将NBS(49.8g，280mmol)加入到乙酸甲酯(500mL)中的甲基3-(叔丁基-二甲基甲硅烷基氧)-2-甲基苯甲酸酯(78.4g，280mmol)中以提供橙色混悬液。将所得反应混合物在40℃在油浴中加热并用300wt日光灯泡照射回流4小时。将反应混合物冷却，并用Na₂SO₃溶液(2×600mL，50％饱和浓度)、水(500mL)和盐水(600mL)清洗。用MgSO₄干燥有机层，并用活性炭脱色。浓缩有机层以提供浅棕色油状的2-溴甲基-3-(叔丁基-二甲基-硅基氧)-苯甲酸甲酯(96g，粗得率91％)。在下一步中使用所述化合物而无需进一步纯化：LCMS M-Br＝279；¹H NMR(DMSO-d₆)0.05-0.11(m,6H,CH₃,CH₃),0.82(s,9H,CH₃,CH₃,CH₃),3.65(s,3H,CH₃),4.74(s,2H,CH₂),6.94(dd,J＝1.3,8.1Hz,1H,Ar),7.10-7.20(m,1H,Ar),7.21-7.29(m,1H,Ar)。

4-氨甲酰基-丁酸甲酯

在2L圆底烧瓶中，向甲基2-(溴甲基)-3-(叔丁基二甲基甲硅氧基)苯甲酸酯(137.5g，325mmol)在乙腈(1100mL)中的搅拌溶液中加入甲基4,5-二氨基-5-氧戊酸酯盐酸盐(70.4g，358mmol)。通过加料漏斗，在10分钟内向混悬液中加入DIPEA(119mL，683mmol)，并在将混合物在油浴中在40℃加热23小时前，将混悬液在室温下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。将残余物在乙醚(600mL)中搅拌，并沉淀出白色固体。将所述混合物过滤并用乙醚(400mL)清洗固体。用HCl(1N，200mL)、NaHCO₃(饱和，200mL)和盐水(250mL)清洗滤液。分别保存酸的水溶液层和碱的水溶液层。然后，用乙醚(250mL)进一步清洗固体，并用上述酸溶液和碱溶液清洗液体。合并两有机层并真空浓缩以提供棕色油状的4-[4-(叔丁基-二甲基-硅基氧)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基]-4-氨甲酰基-丁酸甲酯(152g，115％的粗得率，H NMR鉴定的纯度为77％)。在下一步中使用所述化合物而无需进一步纯化：LCMS MH＝407。

4-氨甲酰基-4-(4-羟基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-丁酸甲酯

在5分钟内，向甲基5-氨基-4-(4-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-5-氧戊酸酯(152g，288mmol)在DMF(500mL)和水(55mL)中的冷的搅拌溶液中部分加入K₂CO₃(19.89g，144mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌40分钟。将反应混合物在冰浴中冷却。向混合物中，缓慢加入HCl(12M，23.99mL，288mmol)。加入后，将乙腈(280mL)加入到混合物中并沉淀出固体。将混合物在室温下搅拌10分钟并过滤。用乙腈(50mL×4)清洗固体。在高度真空下浓缩滤液以提供黄色油(168g)。将油溶于乙腈(600mL)并在室温下搅拌10分钟。过滤混合物并用乙腈(25mL×2)清洗固体。在高度真空下浓缩滤液以提供黄色油(169g)，并将其加入到水(1200mL)和乙醚(1000mL)的混合物中。将混合物搅拌3分钟并分层。在高度真空下浓缩水溶液并将残余物在乙腈(160mL)中搅拌，并在搅拌过夜后形成白色固体。过滤混合物以提供白色固体状4-氨甲酰基-4-(4-羟基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-丁酸甲酯(46g，54％得率)。浓缩滤液，并将残余物在乙腈(60mL)中进一步结晶以提供更多的白色固体状4-氨甲酰基-4-(4-羟基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-丁酸甲酯(11.7g，14％得率)。浓缩滤液，并通过ISCO色谱法纯化残余物以提供更多的白色固体状4-氨甲酰基-4-(4-羟基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-丁酸甲酯(13.2g，15％得率)。所得的总产物为70.9g，得率83％：LCMS MH＝293；¹H NMR(DMSO-d₆)1.95-2.34(m,4H,CH₂,CH₂),3.51(s,3H,CH₃),4.32(d,J＝17.6Hz,1H,CHH),4.49(d,J＝17.4Hz,1H,CHH),4.73(dd,J＝4.7,10.2Hz,1H,CHH),6.99(dd,J＝0.8,7.9Hz,1H,Ar),7.10-7.23(m,2H,Ar,NHH),7.25-7.38(m,1H,Ar),7.58(s,1H,NHH),10.04(s,1H,OH)。

3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮

步骤1：向3-(4-羟基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮(2.5g，8.56mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入三苯膦(聚合物负载，1.6mmol/g，12g，18.8mmol)。将混合物在室温下搅拌15分钟。在0℃加入偶氮二甲酸二异丙酯(3.96mL，18.8mmol)，并将混合物在0℃搅拌30分钟。在0℃加入(4-吗啉-4-基甲基-苯基)甲醇(2.62g，12.4mmol)，并将混合物加热到室温并在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，并浓缩滤液。在硅胶柱上用二氯甲烷和甲醇洗脱(梯度，产物在6％甲醇流出)纯化所得的油以提供4-氨甲酰基-4-[4-(4-吗啉-4-基甲基-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基]-丁酸甲酯(2.2g，54％得率)。在下一步中使用所述产物而无需进一步纯化。

步骤2：在0℃，向4-氨甲酰基-4-[4-(4-吗啉-4-基甲基-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-丁酸甲酯(2.2g，4.57mmol)的THF溶液(50mL)中加入叔丁醇钾(0.51g，4.57mmol)。将混合物在0℃搅拌10分钟，并用1N HCl(5mL，5mmol)，然后用饱和NaHCO₃(25mL)淬灭。用EtOAc(2×50mL)萃取混合物。用水(30mL)、盐水(30mL)清洗有机层，用MgSO₄干燥并浓缩。边搅拌，边向所得固体中加入EtOAc(10mL)，然后加入己烷(10mL)。过滤混悬液以提供白色固体状3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.5g，73％得率)。HPLC:Waters SymmetryC₁₈,5μm,3.9x 150mm,1mL/min,240nm,5min内梯度至95/5乙腈/0.1％H₃PO₄:t_R＝4.78min(97.5％)；mp:210-212℃；¹H NMR(DMSO-d₆)1.86-2.09(m,1H,CHH),2.29-2.38(m,4H,CH₂,CH₂),2.44(dd,J＝4.3,13.0Hz,1H,CHH),2.53-2.64(m,1H,CHH),2.82-2.99(m,1H,CHH),3.46(s,2H,CH₂),3.52-3.61(m,4H,CH₂,CH₂),4.18-4.51(m,2H,CH₂),5.11(dd,J＝5.0,13.3Hz,1H,NCH),5.22(s,2H,CH₂),7.27-7.38(m,5H,Ar),7.40-7.53(m,3H,Ar),10.98(s,1H,NH)¹³C NMR(DMSO-d₆)22.36,31.21,45.09,51.58,53.14,62.10,66.17,69.41,114.97,115.23,127.64,128.99,129.81,129.95,133.31,135.29,137.68,153.50,168.01,170.98,172.83；LCMS:465；C₂₅H₂₇N₃O₅+0.86H₂O的理论值:C,64.58；H,6.23；N,9.04；实测值:C,64.77；H,6.24；N,8.88。

通过手性分离，从3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮制备了化合物(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮和(R)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮。

6.53-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮

步骤1：将4-羟基苯甲醛(4.0g，32.8mmol)和Cs₂CO₃(26.7g，81.9mmol)在DMF(80mL)中的混合物在室温下搅拌10分钟。向该混合物中加入1-(2-氯乙烷)吡咯烷盐酸盐(6.7g，39.3mmol)。将混合物在60℃加热2小时，然后在80℃加热过夜。将反应混合物冷却并过滤，用EtOAc(100mL)清洗固体。将滤液与冷水(200mL)一起搅拌，并用EtOAC(3×50mL)萃取水层。用2N NaOH(40mL)、水(3×40mL)和盐水(40mL)清洗合并的EtOAc溶液，并干燥(K₂CO₃)。除去溶剂以提供4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)苯甲醛(5.9g，81％得率)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.76-1.84(m,4H),2.60-2.65(m,4H),2.91-2.95(m,2H),4.19(t,J＝6.0Hz,2H),7.00-7.04(m,2H),7.80-7.95(m,2H),9.88(s,1H)。

步骤2：将4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)苯甲醛(5.8g，26.5mmol)在试剂乙醇(60mL)中的溶液在干冰/丙酮浴中冷却至-60℃。在-60℃，缓慢加入LiBH4/THF(2M，15.9mL，31.9mmol)。将混合物在-60℃搅拌1h。用水(20mL)缓慢淬灭反应混合物，然后加热至室温。浓缩混合物并将残余物与EtOAc(80mL)和2N NaOH(20mL)一起搅拌。用EtOAc(2×30mL)萃取水层，并用水(30mL)和盐水(30mL)清洗合并的EtOAc溶液，并干燥。除去溶剂，并通过色谱法(SiO₂，NH₄OH：CH₃OH：CH₂Cl₂(0.5：3：97))纯化残余物以提供4-[(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-甲醇(2.5g，42％得率)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.74-1.83(m,4H),2.56-2.63(m,4H),2.86(t,J＝6.1Hz,2H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),4.57(s,2H),6.82-6.87(m,2H),7.23-7.27(m,2H)。

步骤3：在5-8℃，将偶氮二甲酸二异丙酯(1.1g，5.5mmol)缓慢加入到甲基5-氨基-4-(4-羟基-1-氧异二氢吲哚-2-基)-5-氧戊酸酯(0.8g，2.7mmol)、4-[(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-甲醇(0.9g，4.1mmol)和聚合物键合型三苯基膦(1.8g，5.5mmol)在THF(60mL)中的搅拌混悬液中。加入后，在室温下将混合物搅拌过夜。将反应混合物过滤并用CH2Cl2(30mL)清洗固体。浓缩滤液并通过色谱法(SiO₂，CH₃OH：CH₂Cl₂＝3：97)纯化残余物以提供甲基5-氨基-5-氧-4-(1-氧-4-(4-(2-吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)戊酸(1.0g，77％)。

步骤4：在5℃，将KO-t-Bu/THF(1M，2.5mL，2.5mmol)溶液缓慢加入到甲基5-氨基-5-氧-4-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)戊酸(1.0g，2.1mmol)在THF(30mL)中的搅拌溶液中。将混合物在5℃搅拌10分钟，然后加热至室温2小时。将反应混合物在冰浴中冷却并用4N HCl(4mL)淬灭。将混合物与EtOAc(40mL)和饱和Na₂CO₃(25mL)一起搅拌。用EtOAc(3×40mL)萃取水层，并用水(40mL)和盐水(40mL)清洗合并的EtOAc溶液，并干燥(K₂CO₃)。除去溶剂并通过色谱法(SiO₂，CH₃OH：CH₂Cl₂＝5：95)纯化残余物以提供3-(1-氧-4-(4-(2-吡咯烷-1-基)乙氧基)-苄氧基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.2g，20％得率)：mp 153-155℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.66-1.69(m,4H),1.94-1.99(m,1H),2.40-2.59(m,2H),2.77(t,J＝5.7Hz,2H),2.84-2.90(m,1H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),4.24(d,J＝17.4Hz,1H),4.35(d,J＝17.7Hz,1H),5.07-5.13(dd,J＝5.1and 13.2Hz,1H),5.15(s,2H),6.92-6.97(m,2H),7.30-7.50(m,5H),10.96(s,1H)；13C NMR(DMSO-d6)δ22.33,23.09,31.17,45.06,51.54,53.93,54.24,66.69,69.34,114.35,115.04,115.12,128.42,129.50,129.75,129.95,133.25,153.50,158.33,168.00,170.96,172.81；C₂₆H₂₉N₃O₅+0.5Et2O的理论值:C,66.65；H,6.63；N,8.64.实测值:C,66.95；H,6.62；N,8.71。

6.63-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮

步骤1：将4-羟基苯甲醛(4.0g，32.8mmol)和Cs₂CO₃(26.7g，81.9mmol)在DMF(80mL)中的混合物在室温下搅拌10分钟。向该混合物中加入4-(2-氯乙烷)吗啉盐酸盐(7.3g，39.3mmol)。将所得混合物在80℃在油浴中加热过夜。将反应混合物冷却至室温并过滤，用EtOAc(100mL)清洗固体。将滤液用冷水(200mL)稀释，并用EtOAC(3×50mL)萃取水层。用2N NaOH(25mL)、水(3×40mL)和盐水(40mL)清洗合并的EtOAc溶液，并干燥(K2CO3)。除去溶剂以提供4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯甲醛(6.2g，81％得率)：¹H NMR(CDCl₃)δ2.57-2.60(m,4H),2.83(t,J＝5.7Hz,2H),3.70-3.75(m,4H),4.19(t,J＝5.7Hz,2H),6.98-7.03(m,2H),7.81-7.85(m,2H),9.88(s,1H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ53.52,56.73,65.77,66.11,114.93,129.58,131.73,163.40,191.21。

步骤2：在-60℃，将LiBH₄/THF(2M，15.9mL，31.7mmol)缓慢加入到4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯甲醛(6.2g，26.4mmol)在试剂乙醇(60mL)中的搅拌溶液中。将所得混合物在-60℃搅拌1小时，然后用水(20mL)淬灭。浓缩混合物并将残余物与EtOAc(80mL)和1N NaOH(30mL)一起搅拌。用EtOAc(2×30mL)萃取水层，并用水(40mL)和盐水(40mL)清洗合并的EtOAc溶液，并干燥(K₂CO₃)。除去溶剂，并通过色谱法(SiO₂，NH₄OH：CH₃OH：CH₂Cl₂(0.5：3：100))纯化残余物以提供[4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯基]-甲醇(4.2g，67％得率)：¹H NMR(CDCl₃)δ2.25(s,1H),2.54-2.57(m,4H),2.78(t,J＝5.7Hz,2H),3.70-3.73(m,4H),4.08(t,J＝5.7Hz,2H),4.59(s,2H),6.85-6.89(m,2H),7.25-7.29(m,2H)；¹³C NMR(CDCl₃)δ54.06,57.61,65.79,66.85,114.62,128.57,133.52,158.24。

步骤3：聚合物键合型三苯基膦(1.8g，5.5mmol)与干CH₂Cl₂(20mL)一起搅拌10分钟。向该混合物中加入甲基5-氨基-4-(4-羟基-1-氧异二氢吲哚-2-基)-5-氧戊酸酯(0.8g，2.7mmol)和[4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯基]-甲醇(1.0g，4.1mmol)在THF(60mL)中的溶液。将所得混合物冷却至5℃，并在5-8℃缓慢加入偶氮二甲酸二异丙酯(1.1g，5.5mmol)。加入后，在室温下将混合物搅拌过夜。将反应混合物过滤并用CH₂Cl₂(30mL)清洗固体。浓缩滤液并通过色谱法(SiO₂，CH₃OH：CH₂Cl₂(3：97))纯化残余物以提供甲基5-氨基-4-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-5-氧-戊酸(1.0g，71％)。

步骤4：在5℃，将叔丁醇钾/THF(1M，2.6mL，2.6mmol)的溶液缓慢加入到甲基5-氨基-4-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-5-氧戊酸酯(1.1g，2.1mmol)在THF(30mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在5℃搅拌10分钟，然后加热至室温2小时。将反应混合物在冰浴中冷却并用4N HCl(4mL)淬灭。将混合物与EtOAc(40mL)和饱和Na₂CO₃(25mL)一起搅拌。用EtOAc(3×40mL)萃取水层，并用水(40mL)和盐水(40mL)清洗合并的EtOAc溶液，并干燥(K₂CO₃)。除去溶剂并通过色谱法(Al₂O₃，CH₃OH：CH₂Cl₂(3：97))将残余物纯化为3-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮(0.2g，16％得率)：mp:203-205℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.90-2.05(m,1H),2.40-2.70(m,8H),2.84-2.96(m,1H),3.55-3.58(m,4H),4.06-4.10(m,2H),4.24(d,J＝17.4Hz,1H),4.35(d,J＝17.4Hz,1H),5.07-5.15(m,3H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),7.30-7.50(m,5H),10.96(s,1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ22.32,31.17,45.06,51.55,53.56,56.92,65.29,66.11,63.31,114.41,115.04,115.11,128.50,129.47,129.74,129.94,133.25,153.49,158.27,167.99,170.94,172.80；C₂₆H₂₉N₃O₆+0.2H₂O的理论值:C,64.64；H,6.10；N,8.70。实测值:C,64.54；H,6.06；N,8.63。

6.73-{4-[4-(2-吗啉-4-基-乙基]-苄氧基]-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮

步骤1：在0℃，在2小时内，通过滴液漏斗向4-(2-溴甲基)苯甲酸(25g，109mmol)和三氟化硼乙醚(13.71mL，109mmol)的THF溶液中滴加硼烷(196ml，196mmol)。在室温下将混合物搅拌过夜，并在室温下滴加MeOH直至浑浊的混悬液变澄清并且不再形成气泡。将澄清的溶液在旋转蒸发仪上浓缩，并将所得固体在室温下在水中(100mL)中搅拌30分钟。过滤混悬液以提供白色固体状4-(2-氯-乙基)-苯甲酸(25g，107％)。

步骤2：向(4-(2-溴甲基)苯基)甲醇(25g，116mmol)的乙腈溶液中加入吗啉(25.3ml，291mmol)。一次加入全部的NaI。将混合物在室温下搅拌整个周末。过滤反应混悬液。浓缩滤液并在室温下在乙醚(100mL)中搅拌30分钟。过滤所述混悬液。将所得固体在1N HCl中溶解，并用EtOAc(50mL×2)萃取。用1N NaOH中和水层至pH＝7-8。过滤所得混悬液以提供白色固体状[4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苯基]-甲醇(13g，60％)。

步骤3：在0℃，向4-氨甲酰基-4-(4-羟基-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-丁酸甲酯(0.5g，1.7mmol)的THF溶液中加入三苯膦树脂(2.3g，1.6mmol/g加载量，3.74mmol)和DIAD(0.73mL，3.74mmol)。在0℃搅拌10分钟后，将混合物加入[4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苯基]-甲醇(0.65g，2.94mmol)并在室温下搅拌过夜。过滤混合物，并将滤液浓缩并用EtOAc(30mL)和Na2CO3(20mL)萃取。用水(20mL)和盐水(20mL)清洗有机层，并浓缩。在硅胶柱上纯化所得的油以提供白色固体状4-氨甲酰基-4-{4-[4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基]-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸甲酯(0.74g，88％)。

步骤4：在0℃，向4-氨甲酰基-4-{4-[4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基]-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸甲酯(0.74g，1.5mmol)的THF溶液(20mL)中加入叔-丁醇钾(0.16g，1.5mmol)。将混合物在0℃搅拌15分钟，并用5mL的1N HCl溶液，然后用15mL饱和NaHCO₃溶液淬灭。用EtOAc(20mL)萃取混合物。真空浓缩有机层。在硅胶柱上用CH₂Cl₂和甲醇洗脱来纯化所得的油以提供白色固体状3-{4-[4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基]-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮(620mg，87％得率)：mp:230-232℃.HPLC:Waters Symmetry C-18,3.9X 150mm,5micro,1mL/min,240nm,5min内乙腈/0.1％H₃PO₄的水溶液从5/95至100/0梯度，并在100/0保持5分钟:t_R＝4.86min(97％)；¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.80-2.12(m,1H,CHH),2.40-2.44(m,4H,CH₂,CH₂),2.45-2.48(m,1H,CHH),2.55-2.64(m,1H,CHH),2.69-2.80(m,2H,CH₂),2.81-3.00(m,1H,CHH),3.52-3.61(m,4H,CH₂,CH₂),4.18-4.48(m,2H,CH₂),5.11(dd,J＝5.1,13.2Hz,1H,NCH),5.20(s,2H,CH₂),7.19-7.54(m,7H,Ar),10.97(s,1H,NH)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ22.36,31.21,32.04,45.10,51.58,53.21,59.93,66.13,69.47,114.98,115.19,127.80,128.70,128.74,129.79,129.95,133.29,134.08,140.25,153.50,168.01,170.96,172.82；LCMS MH＝464；C₂₆H₂₉N₃O₅+0.5H₂O的理论值:C,66.09；H,6.40；N,8.89；测定值:C,65.96；H,6.33；N,9.07。

6.8测定

6.8.1通过T细胞产生细胞因子

使用T细胞富集混合物通过阴性选择从白细胞层中分离T细胞。相应地，根据生产商的程序进行。在37℃，用3mg/ml抗人CD3抗体在100ml 1×PBS中的溶液预涂覆所有96孔板4小时。在T细胞测定之前用RPMI-1640完全培养基清洗板三次。然后，将T细胞在CD3预涂覆的板中以2.5×10⁵个细胞/孔的密度在180ml RPMI-1640完全培养基中铺板。将细胞用20μl 10、1、0.1、0.01、0.001、0.0001和0.00001mM的10×滴定的化合物处理。DMSO的最终浓度为0.25％。将板在37℃，5％CO₂下培育48小时。48小时后，收获上清液并通过multi-plex流式微珠阵列(CBA)测定测试以下细胞因子/趋化因子：IL-2、IL-3、IL-5、IL-10、IL-13、IL-15、IL-17a、GM-CSF、G-SCF、IFN-γ、TNF-α和RANTES。在Luminex IS100仪上分析CBA板。使用GraphPad Prism 5.0软件将来自供体的数据作图并表示为平均值pg/mL±SEM以及DMSO对照的％±SEM。

将细胞因子水平归一化为在存在所测试化合物的量的情况下所产生的量，并且使用非线性回归、S形剂量-应答计算EC₅₀值，限制顶部为100％而底部为0％，允许可变斜率(GraphPad Prism 3.02版)。

抗CD3刺激的人T细胞测定

在37℃，用3μg/mL抗人CD3抗体在100μL 1×PBS中的溶液预涂覆所有的96孔板。在T细胞测定之前用RPMI-1640完全培养基清洗板三次。然后，将T细胞在抗CD3预涂覆板中以2.5×10⁵个细胞/孔的密度在180μLRPMI-1640完全培养基中铺板。将细胞用20μL 10、1、0.1、0.01、0.001、0.0001和0.00001μM的10×滴定的Celgene化合物处理，重复两次。所述DMSO的最终浓度为0.25％。将板在37℃，5％CO₂下培育48小时。48小时后，收获上清液并通过multiplex流式微珠阵列(CBA)测定测试以下细胞因子/趋化因子：IL-2、IL-3、IL-5、IL-10、IL-13、IL-15、IL-17a、GM-CSF、G-CSF、IFN-γ、TNF-α和RANTES。在Luminex IS100仪上分析CBA板。

6.8.2免疫印迹分析

使用标准细胞培养技术维持细胞系。对于内源Aiolos表达，以0.5e6个细胞/孔，将细胞接种到6孔板中的3mL体积的培养基中。将细胞附着在板上过夜。将细胞暴露于0、1和10uM CC-1220-24小时或5天。

在一些实验中，使用Lipofectamine试剂，以分批法用Aiolos过表达载体转染细胞系。以1e5个细胞，将细胞接种到12孔板中每孔的3mL体积。按照说明，用10uM的MG132预处理细胞1小时，或者作为对照加入DMSO。预处理后，以指定浓度将CC-122直接加入到细胞培养基中。

收获细胞，并在含有得自Pierce#78442的2×蛋白酶抑制剂混合物的Pierce#89900Ripa缓冲液中裂解。将裂解液应用于QiaShredder以除去DNA。使用Bio Rad DC蛋白质测定试剂盒(Cat#500-0112)测量总蛋白得率。

将样品应用于10％的BioRad标准预制胶(Bio-Rad#345-0010)并转移至Bio-Rad硝酸纤维素/滤纸夹层#162-0233上。使用Aiolos抗体测量0233和Aiolos蛋白的表达并在LiCor仪器上读取。

6.8.3 Aiolos抗体的结合和测试

本实施例显示了在本文所提供的方法的某些实施方式中使用的Aiolos抗体与Alexa Fluor 647的结合以及结合抗体的测试。简要地，将Aiolos 0-21兔多克隆抗体(SantaCruz cat#sc-101982)或其它适合的多克隆或单克隆抗体直接结合至Alexa Fluor 647，然后测试对阳性(周围血液)和阴性对照细胞系的特异性。用BD Lyse/Fix，然后用BD Perm缓冲液I固定细胞。与和不与测试化合物一起进行抗体的特异性。

首先，将100μg纯化的抗体与5摩尔过量(ME)和10ME的Alexa Fluor647结合以确定最佳的结合条件。通过将0.5μg的每种测试结合物和纯化的抗体与特异性肽阻断剂单独培育来确定结合后的特异性。单独处理正常全血细胞(阳性对照)和HEK-293细胞(阴性对照)，并用结合的和纯化的抗体(有和没有阻断剂)染色。用适当的抗物种Alexa Fluor 647第二抗体发展纯化试剂。确定信噪比和特异荧光百分比。如果结合抗体和纯化抗体的信噪比和特异荧光百分比相当，那么确定荧光染料和抗体的最佳摩尔比。以最佳摩尔比将剩余的纯化抗体结合。对用测试化合物处理或未处理的正常全血细胞进行用于饱和度确定的结合抗体的完全滴定。

6.8.4细胞的固定确定

目的：确定检测所有所关心的标志物同时维持PBMC中表面标志物表达的最佳方法。用载体对照或1微摩尔的本文所提供的化合物处理PBMC或新鲜的正常供体全血2小时，然后如下处理。还使用了未处理的MM-BMMC。

将冷冻的PBMC(对照和处理)、新鲜的正常供体全血(对照和处理)和冷冻的MM-BMMC(仅处理)融化，然后通过以下固定/透化方法中的一种固定：(1)BD Lyse/Fix+Perm缓冲液I；(2)BD Lyse/Fix+Perm缓冲液II；或者(3)Esoterix专有固定剂。

6.8.5测定稳定性

检验了新鲜正常供体全血样品的稳定性。吸取五(5)个正常供体全血样品(仅基础表达)，并通过以上实施例确定的方法固定。将固定的样品分成两等份。将1等份在4℃放置1小时，将另一等份在-20℃放置1小时。立即测试这些样品(第0天)。在4℃或-20℃储存剩余等份，并在第1天离体、第2天离体和第3天离体测试。

通过分析来自5个不同供体的正常全血中Aiolos的基础差异来测试样品的生物差异。

6.8.6测定内的可重复性和操作者间的精确度

为了确定测定的可重复性，在1个时间点测试了上文中用于稳定性测试的相同的5个NWB样品，重复三次。在第0天，4℃制备的样品中，测试了这些样品，重复三次。为了测试操作者间的精确度，在同一天，由第二位操作者处理相同的样品。分析包括CD19+a、CD3+和总CD45+淋巴细胞群体和(MEFL中报道的)中的Aiolos定量表达水平。在重复实验间以及操作者间计算平均值、标准偏差和％CV。

6.8.7在细胞系中通过FACS分析的Aiolos确定

本实施例显示了使用FACS分析，细胞系和PBMC中Aiolos的确定。

材料：BD固定缓冲液I(cat#55870)；BD Perm缓冲液III(cat#558050)；BD染色缓冲液(cat#554657)；抗IKZF3抗体(Santa Cruz，批次#B1612)和第二抗体(BD FITC山羊抗兔Ig cat#554020)。

测定程序

使用前，在培育器或水浴中将固定缓冲液I加热至37℃。使用前，将Perm缓冲液III在-20℃冰箱中冷冻。在用测试化合物处理结束时，收集细胞。将1体积预热的固定缓冲液I与1体积细胞悬液混合。如果细胞悬液的体积大于100μL，则将细胞旋转沉降并重悬于100μL培养基或PBS中。将缓冲液和细胞悬液充分混合，并在37℃水浴中培育10分钟。以250×g将细胞旋转沉降10分钟，并吸出上清液。用BD染色缓冲液清洗细胞1次。将颗粒旋转沉降并除去上清液。将细胞涡旋至松散，并在涡旋或混合的同时通过缓慢加入冷的Perm缓冲液III使细胞透化。随后，在冰上将细胞培育30分钟。然后，将细胞旋转沉降，并用染色缓冲液清洗两次。将上清液旋转沉降并吸出。将细胞在较小体积的染色缓冲液(50或100μL，包含200000至1百万个细胞)中重悬。以1:1000稀释，将抗IKFZ3抗体加入到细胞悬液中，并在4℃培育45分钟。然后，将细胞旋转沉降，并用染色缓冲液清洗1次。以1:5000稀释将第二抗体加入到细胞中，并在黑暗中，在室温下培育20分钟。在通过FACS分析前，用染色缓冲液清洗细胞1次。

6.9结果

测试化合物(来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)对脂多糖(LPS)-刺激的人周围血单核细胞(hPBMC)细胞因子/趋化因子产生的抑制作用表明测试化合物以不同的效力抑制IL-6、IL-8、IL-1β、GM-CSF、MDC、MIP-1α、MIP-1β和TNF-α的产生(表1)。数据还表明测试化合物对提高IL-10、MCP-1和RANTES的产生是有效的(表2)。所提供的数据是指定细胞因子的IC₅₀(μM)值。

表1.测试化合物的细胞因子抑制谱总结

表2.测试化合物的细胞因子谱总结

6.9.1对Aiolos表达的影响

图1中显示了(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮在抑制淋巴细胞(左侧部分)、粒性白细胞(顶部部分)和单核细胞(右侧部分)中Aiolos表达中的作用。分别如图2和3所示，(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮显著抑制CD20+B细胞和CD3+T细胞中Aiolos的表达。

图4中显示了按照说明，用250nM的化合物处理18小时的人全血免疫印迹分析，图5中显示了毛里求斯猴PMBC的相同分析。处理后18小时，(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮抑制Aiolos的表达。

根据以下处理方案进行使用(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮对食蟹猴的研究。

简要地，分配四个处理组，每个处理组根据以上指定的剂量计划表和剂量接受通过(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮的处理。图6-9中显示了结果，其显示根据剂量方案，(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮对Aiolos表达的影响可以是不同的，但是(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮通常抑制Aiolos的表达。

还评价了化合物A和(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、来那度胺(“len”)和泊马度胺(“pom”)对Aiolos表达的影响。在60、120、240、500和100nM的浓度下，化合物A显示在不存在蛋白酶体抑制剂的情况下抑制Aiolos的表达，但是当存在蛋白酶体抑制剂时几乎未观察到抑制。如图10所示，len、pom、化合物A和(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮均显示出对Aiolos表达的抑制作用。看起来抑制作用与化合物在骨髓瘤细胞中的抗增殖活性相关。

已表明使用泊马度胺在低cereblon表达的细胞中几乎没有发生Aiolos表达抑制(图11)。类似地，cereblon的丧失显示防止来那度胺或泊马度胺对Aiolos表达的下调(图12)，表明该过程涉及cereblon。最后，已表明Aiolos的敲减诱导p21表达，降低IRF4并降低了S期细胞的数目(图13和14)。

6.9.2化合物A对乳腺癌细胞中内源Aiolos的影响

使用标准细胞培养技术维持细胞系(AU565、ZR 75-1、BT-474、EFM-192A、HCC1954、HCC70、MB436和BT549)。对于内源Aiolos表达，以0.5×10⁶个细胞/孔，将细胞接种到6孔板中的3mL体积的培养基中。将细胞附着在板上过夜。将细胞对0、1和10μM化合物A暴露指定的时间量。

在一些实验中，使用Lipofectamine试剂，以分批法用Aiolos过表达载体转染细胞系。以1×10⁵个细胞，将细胞接种到12孔板中每孔的3mL体积。当指明时，用10uM的MG132预处理细胞1小时，或作为对照加入DMSO。预处理后，以指定浓度将化合物A直接加入到细胞培养基中。

收获细胞，并在含有得自Pierce #78442的2×蛋白酶抑制剂混合物的Pierce #89900 Ripa缓冲液中裂解。将裂解液应用于QiaShredder以除去DNA。使用BioRad DC蛋白质测定试剂盒(Cat# 500-0112)测量总蛋白得率。将裂解液在-80℃储存直至使用。将样品应用于BioRad标准预制胶(Bio-Rad# 345-0010)并转移至Bio-Rad硝酸纤维素/滤纸夹层(#162-0233)上进行免疫印迹分析。

如图15所示，发现在处理后24小时，在ZR 75-1和AU565细胞系中化合物A降低Aiolos的水平(条带出现在60kD附近)。在某些实验中，AU565细胞中flag-Aiolos-myc融合蛋白过表达，并用化合物A处理细胞。在这些情况下，发现使用抗myc抗体的免疫印迹分析在65KD附近提供了一条Aiolos条带，而抗flag抗体的相同分析提供了多个条带。另外，发现在化合物A处理后约5小时，开始出现过表达的Aiolos的减少，并且通过加入蛋白酶体抑制剂MG-132挽回了化合物A对Aiolos的抑制。最后，已表明Her2⁺细胞(AU565、BT-474、EFM-192A和HCC1954)中化合物A抑制内源Aiolos，而在三种阴性细胞(HCC70、MB436和BT549)中不会抑制。这些结果表明化合物A抑制Aiolos，并因此Aiolos可以用作化合物A治疗的生物标志物。

6.9.3化合物对Aiolos和Ikaros表达的影响

在化合物处理后6小时，使用类似于与如上所述的免疫印迹有关的那些用途的程序通过免疫印迹分析评价测试化合物(泊马度胺、来那度胺、化合物A和(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)对Aiolos和Ikaros表达的影响。已表明测试化合物不同程度地抑制Aiolos和Ikaros两者的表达。参见图15。

6.10临床研究中肿瘤类型选择的理由

化合物A的体外和体内活性存在差异。对肿瘤细胞存在有限的直接体外活性，同时在异种移植，包括U87(GBM)、H929(MM)和WSU-DLCL2和DOHH2(非霍奇金淋巴瘤[NHL])中观察到了单一试剂活性。这些差异表明通过免疫调节和/或抗血管生成对宿主的影响以及基质影响部分介导了化合物A的活性。

化合物A部分抑制DLBCL细胞中NFΚB DNA的结合活性。因此，将在其中NFKB途径已与肿瘤发生(如乳腺癌)相关联的肿瘤中研究化合物A的盐酸盐(Boehm,J.S.；Zhao,J.J.；Yao J.等人.Cell 2007,129,1065–1079)。化合物A还抑制对缺氧起反应的HIF1α诱导，从而为其在炎性乳腺癌中的探索提供了坚实的生物原理(Brito,L.G.O.,Clinical Science2011,66,1313)。通过活性信号或从临床研究中的药效(PD)标志物分析采集的数据可以获得肿瘤类型选择的其它理由。PD标志物分析可以包括化合物A盐酸盐剂量施用前后的基因特征谱或蛋白质分析(例如，NFKB、IRF4)，其可以提供反应指示特征或指示反应的变化。

6.11实体瘤模型

评价了化合物A对来自多种组织(例如，乳腺、卵巢、结肠直肠、HCC)的实体瘤细胞系的作用。化合物A在多种这些实体瘤细胞系中抑制缺氧诱导的HIF1-α表达。另外，化合物A不同程度地抑制实体瘤细胞的侵袭(表3)和细胞集落形成(表4)。通过在第1天用单一高浓度化合物A处理(10μM)，然后在10至20天的过程中监控细胞集落形成来研究实体瘤细胞集落形成的抑制。

表3：化合物A对实体瘤细胞侵袭的影响

表4：实体瘤细胞集落形成中化合物A的作用

a：10μM的化合物A。

*：p<0.5；**：p<0.001(相对于DMSO)。

6.12剂量研究

基于在GLP 28天的大鼠和猴子的研究中主要处理相关影响发生时的暴露(表5)，认为食蟹猴对与化合物A施用有关的毒性是最易感的。因此，在猴子中，认为HNSTD(0.5mg基/kg/天或6mg/m²)是在使用化合物A盐酸盐的初始临床研究中用于估计起始剂量的适当剂量。基于在肿瘤学患者中的HNSTD和ICH S9推荐的6倍阈值，人起始剂量可以高达1.7mg基(表5)。然而，基于药理学模型和化合物A的体外效力，建议化合物A盐酸盐的起始剂量为0.5mg(0.44mg游离碱当量)，其所得的预测暴露阈值为30倍。参见图16。

表5：基于28天毒性研究的大鼠STD10和猴HNSTD的临床起始剂量

HNSTD＝最高非严重毒性剂量；HED＝人当量剂量；STD10＝动物的10％中的严重毒性剂量。

^a来自2005年7月，标题为“成年健康志愿者中用于治疗的初始临床试验中最大安全起始剂量的估计(Estimating the Maximum Safe StartingDose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)”的FDA行业指导的转换系数。

^b根据60kg人体重计算的剂量/人。

^c基于2009年10月的ICH三方协调指导：“用于抗癌药物的S9非临床评价”，在人中第一次施用的起始剂量应是啮齿类中STD10的十分之一，或者如果非啮齿类是最适合的物种，则是HNSTD的六分之一。

使用基于类比法所得出的血浆清除率和分布体积值并假设人中口服生物利用率为82％，则以0.5mg化合物A盐酸盐/天为预期人起始剂量，预测的C_max和0至24小时曲线下面积(AUC_24hr)分别为5.5ng/mL和62ng·hr/mL。以预期人起始剂量对化合物A盐酸盐全身暴露(AUC_24hr)比大鼠中STD10低约1160倍，并且比猴子中的HNSTD低约30倍。

预期人起始剂量(0.5mg化合物A盐酸盐/天)时的预测血浆浓度(5.5ng/mL的C_max和62ng·hr/mL的AUC_24hr)在用于免疫调节(T细胞IL-2EC₅₀＝14nM；4ng/mL)、抗增殖(OCI-LY10细胞系IC₅₀＝8.5nM；2.4ng/mL)和血管生成抑制(人脐动脉测定IC₅₀＝9.4nM；2.7ng/mL)的众多体外EC₅₀和IC₅₀值的范围内。

6.13临床规程

提供了确定当口服施用于IBC受试者时，来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物，或其对映异构体或对映异构体的混合物；或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物，和/或其它免疫调节化合物的安全性、耐受性、药物动力学和效力的1a/1b期临床研究。在本研究中将定义非耐受剂量(NTD)、最大耐受剂量(MTD)和建议2期剂量(RP2D)。将评价化合物对治疗前和治疗期间肿瘤活组织检查中血管生成生物标志物的影响。

研究设计

研究设计为1a/1b期研究，其包括两部分：剂量递增(部分A)和剂量扩大(部分B)。在部分A中，受试者将接受单次和多次递增剂量的来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物以测量药物动力学(PK)并鉴别最大耐受剂量(MTD)和建议2期剂量(RP2D)。标准剂量(3+3)扩大设计(Simon等人,1997)将用于鉴别初始毒性。将向三位受试者的初始组以100％的剂量增加施用来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物(0.5mg，每天一次)直至在第一循环中首次出现怀疑与药物相关的3级或更高级毒性，此时将该组扩大为总计6位受试者。为了建立非耐受剂量(NTD)和MTD，起始了标准扩大计划表。还可以评价较小增量和剂量组内其它受试者的安全性。在部分A中，将处理和评价约20至40位受试者；然而，部分A中受试者的总数取决于需要建立MTD的剂量组的数目。当在循环1期间，组中6位可评价受试者中有2位或以上的受试者经受药物相关剂量限制性毒性(DLT)时，将认为剂量是NTD。当建立NTD时，剂量递增将停止。MTD定义为在循环1期间6位可评价受试者中0或1位受试者经受DLT时低于NTD的上一次剂量水平。可能需要中间剂量(即，在NTD和NTD之前的上一次剂量水平之间的一个剂量)或者任何剂量组内的其它受试者以更准确地确定MTD和RP2D。

在部分B中，受试者可以基于来自部分A的安全性、PK和/或PD数据以MTD和/或较低剂量水平开始剂量施用。在每两次疗法循环后，将处理并评价通过肿瘤类型分级的约100位受试者(高达每组20位)的安全性和抗癌活性。还将确定适当的剂量或计划表。在部分B期间，根据情况，将定期回顾安全性数据，从而考虑研究的继续。

研究群体

18岁或以上患有乳腺癌的妇女，包括进行(或不能耐受)标准疗法的受试者或不存在标准抗癌疗法的受试者。

剂量施用和研究长度

在第一循环期间，仅在部分A中，将在第1天向每位受试者施用单一日剂量的来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物，然后是48小时的观测和PK采样期，接着从第1天开始，每天不间断剂量施用28天(循环1＝30天)。在后续部分A循环中，通过从第1天至第28天的连续剂量施用，在28天循环中处理受试者。在初始剂量中以0.1、0.5、1、2、4、5、7.5、10、20、25或50mg的剂量，每天施用1次或2次化合物来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物。剂量可以是0.1、0.5、1、2、4、5、7.5、10mg，每天施用一次。剂量可以是50、25或10mg，每天施用两次。在治疗期间，剂量可以从起始剂量开始上调或下调。如上所述，如果需要，可以以循环方式施用药物。

在部分B中，受试者从开始接受连续28天剂量施用—无初始、单一剂量后48小时的PK采集期。

如果有疾病发展的迹象、不可接受的毒性或受试者/医生的停止决策，则将停止疗法。只要研究人员判断受试者获得益处，则受试者可以继续接受化合物。

预计将在约24个月内进行受试者招募。积极治疗的完成和受试者随访预期将花费另外3-6个月。

研究治疗

Celgene公司将作为用于口服的0.1mg、0.5mg、1mg和3mg胶囊提供化合物，包括(例如)来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物。化合物将包装在瓶中，瓶放置在盒中，其含有28天的药物。

在部分A(剂量递增期)中，在单一PK剂量后，将每天一次以0.5mg开始剂量水平。在将第一剂量施用于任何组中的最后一位受试者后，在可以开始下一个更高的、规程指定的剂量组之前，观察受试者至少30天。除非经由主要研究者和Celgene医学监控组成的安全审查委员会(SRC)批准，否则不允许受试者内的剂量递增。

在部分B中，基于部分A的安全性、PK和PD评价，受试者可以接受MTD和/或较低剂量水平的来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、化合物A、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮和/或其它免疫调节化合物。将对约100位受试者(在高达20人的组中的预选择的肿瘤类型)评价安全性和抗癌效果。

效力评价总览

在每2次循环后，评价受试者的效力。主要的效力变量是反应。肿瘤反应将基于实体瘤中的反应评价标准(Response Evaluation Criteria in SolidTumors)(RECIST 1.1)、神经肿瘤学反应评价(Responses Assessment forNeuro-Oncology，RANO)、GBM工作组。

第二/探索性终点包括血液和肿瘤中生物标志物的测量，组织病理学反应和与药物基因组学发现的相关性。还将检验补充效力变量(例如，ECOG性能状态、PET结局)；另外，将使用DCE-MRIs，通过容量转移常数(Ktrans)和初始AUC(IAUC)测量血管增生減少(hypovascularization)变化。

安全评价总览

本研究的安全变量是不良事件、临床实验室变量、12导联ECGs(集中审查)、LVEF评价、身体检查和生命体征。

药物动力学评价总览

将根据第一治疗循环期间的连续血液和尿液采集确定本文所提供的化合物和它们的代谢产物的PK谱。在可能的情况下，这些将与药效(PD)结局相关。

提供了上述实施例，从而为本领域的一般技术人员提供如何实施和使用所主张的实施方式的完整发明公开和说明，并且上述实施例不意欲限制本文所公开内容的范围。对于本领域技术人员显而易见的改变旨在处于以下权利要求的范围内。在本说明书中引用的所有专利公开、专利和专利申请如具体并且单独指明每个专利公开，专利或专利申请作为参考并入本文的一样作为参考并入本文。

Claims

1.治疗或控制局部晚期乳腺癌的方法，其包括向需要这种治疗或控制的患者施用治疗有效量的化合物，所述化合物选自来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其对映异构体或对映异构体的混合物；或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述局部晚期乳腺癌是炎性乳腺癌。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述癌症为复发性或难治性的。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述癌症是抗药性的。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物为来那度胺，或其盐、溶剂化物或水合物。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物为泊马度胺，或其盐、溶剂化物或水合物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物为沙利度胺，或其盐、溶剂化物或水合物。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物为3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮，或其盐、溶剂化物或水合物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物为3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮，或其盐、溶剂化物或水合物。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物为(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮，或其盐、溶剂化物或水合物。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物是3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮，或其盐、溶剂化物或水合物。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物是3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，或其盐、溶剂化物或水合物。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物是3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，或其盐、溶剂化物或水合物。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，还包括施用治疗有效量的一种或多种其它活性剂。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述其它活性剂选自紫杉醇、多西他赛、蛋白质联合紫杉醇、5-氮杂胞苷、卡培他滨、吉西他滨、罗米地辛、伏立诺他、帕比司他、丙戊酸、贝利司他、恩替诺特、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗emtansine、拉帕替尼、贝伐单抗、帕妥珠单抗、多柔比星、柔红霉素、米托蒽醌、安吖啶、金精三羧酸、伊立替康、拓扑替康、喜树碱、片螺素D、依托泊苷、替尼泊苷、他莫昔芬、顺铂、卡铂、奥沙利铂、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、navitoclax、Bcl-2抑制剂和PI3K/AKT/mTOR途径抑制剂。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中以约0.5至约50mg每天的量施用所述化合物或其可药用的盐、溶剂化物或水合物。

17.根据权利要求16所述的方法，其中以约0.5至约5mg每天的量施用所述化合物或其可药用的盐、溶剂化物或水合物。

18.根据权利要求16所述的方法，其中以约0.5、1、2、4、5、10、15、20、25或50mg每天的量施用所述化合物，或其可药用的盐、溶剂化物或水合物。

19.根据权利要求16所述的方法，其中口服施用所述化合物，或其可药用的盐、溶剂化物或水合物。

20.根据权利要求16所述的方法，其中以胶囊或片剂施用所述化合物，或其可药用的盐、溶剂化物或水合物。

21.根据权利要求16所述的方法，其中以10mg或25mg的胶囊施用所述化合物。

22.根据权利要求1所述的方法，其中在28天的循环中施用所述化合物21天，然后停止7天。

23.治疗或控制局部晚期乳腺癌的方法，其包括：

(ii)向患者施用治疗有效量的步骤(i)中所选的化合物。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述局部晚期乳腺癌是炎性乳腺癌。

25.根据权利要求23或24所述的方法，其中鉴别患有局部晚期乳腺癌的患者对治疗敏感包括检测癌症内CRBN、Aiolos(IKZF3)或Ikaros(IKZF1)表达的表达水平。

26.出于预测患者对剂量施用沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-哌啶-2,6-二酮，或其立体异构体，或其可药用的盐、溶剂化物、水合物、共晶体、笼形物或多晶形物的临床反应、监控临床反应或监控患者的顺从性的目的，基于癌症内CRBN的表达水平，或者Aiolos(IKZF3)或Ikaros(IKZF1)的表达水平选择局部晚期乳腺癌患者组的方法。

27.基于CRBN基因内存在或出现突变，鉴别或监控局部晚期乳腺癌患者对沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、3-(5-氨基-2-甲基-4-氧-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、(S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧)-1-氧异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮、3-(1-氧-4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄氧基)异吲哚啉-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄氧基)-1-氧异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮、3-(4-(4-(2-吗啉-4-基-乙基)-苄氧基)-1-氧-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮疗法的耐受性的方法。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述CRBN基因是Aiolos(IKZF3)或Ikaros(IKZF1)。