KR20150054962A - 국소 진행성 유방암의 치료방법 - Google Patents

Abstract

환자에게 하나 이상의 면역조절 화합물 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이상질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 투여하는 것을 포함하는, 염증성 유방암을 포함하는 국소 진행성 유방암의 치료, 예방 및/또는 관리 방법이 본원에서 제공된다.

Description

국소 진행성 유방암의 치료방법 {METHODS FOR THE TREATMENT OF LOCALLY ADVANCED BREAST CANCER}

본 출원은 2012년 9월 10일 출원된 미국 임시특허출원 제61/699,170호에 대한 우선권을 주장하며, 상기 출원은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.

본 발명은 하나 이상의 면역조절 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 염증성 유방암을 포함하는 국소 진행성 유방암의 치료, 예방 및/또는 관리하는 방법을 제공한다.

1. 암의 병리생물학

암은 일차적으로 해당 정상 세포로부터 유래된 비정상 세포의 수의 증가, 이러한 비정상 세포에 의한 인접 조직의 침습, 또는 국부 림프절 및 원위 부위로 악성 세포가 림프 또는 혈액 매개 확산(전이)되는 것을 특징으로 한다. 임상 데이터 및 분자 생물학 연구는 암이 특정 조건 하에서 종양으로 발전할 수 있는 작은 종양발현 전의 변화로 시작되는 다단계 과정임을 나타낸다. 종양 병변은 복제적으로 진화하며, 특히 종양 세포가 숙주의 면역 감시에서 벗어나는 조건 하에서 침습, 성장, 전이 및 이질성에 대한 증가된 능력을 발생시킬 수 있다( Roitt, I., Brostoff, J. and Kale, D., Immunology, 17.1-17.12 (3판., Mosby, St. Louis, Mo., 1993)).

암의 수많은 다양성에 대해서는 의학 문헌에 자세히 기술되어 있다. 그 예에는, 유방암, 폐암, 결장암, 직장암, 전립선암, 뇌암, 및 장암이 포함된다. 암의 발병률은 전반적인 인구 노령화, 새로운 암의 발견, 및 취약 인구(예를 들어, AIDS에 감염되거나, 햇빛에 과도하게 노출된 사람)의 증가 때문에 상승을 지속하고 있다. 따라서, 암 환자의 치료에 사용될 새로운 방법 및 조성물에 대한 엄청난 수요가 존재한다.

많은 유형의 암들은 신생혈관생성(angiogenesis)으로 알려진 과정인 새로운 혈관 형성과 연관된다. 종양-유도 신생혈관생성에 연관된 다수의 메카니즘이 밝혀져 있다. 이러한 메카니즘 중 가장 직접적인 것은 종양 세포에 의한 혈관 형성 특성을 갖는 사이토카인의 분비이다. 이러한 사이토카인의 예로, 산성 및 염기성 섬유모세포 성장 인자(a,b-FGF), 안지오제닌(angiogenin), 혈관 내피 성장 인자(vascular endothelial growth factor, VEGF), 및 종양괴사인자 α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)가 있다. 다르게는, 종양 세포는 프로테아제를 생산한 후 일부 사이토카인이 저장되는(예를 들어, b-FGF) 세포외 기질을 붕괴하여 혈관 생성 펩타이드를 방출할 수 있다. 또한, 신생혈관생성은 염증 세포(특히 대식세포)의 모집 및 이들에 의한 혈관 생성 사이토카인(예를 들어, TNF-α, b-FGF)의 후속 방출을 통해 간접적으로 유도될 수 있다.

종양의 병리생물학

고형 종양은 낭종 또는 액상 부분을 함유할 수도 있지만, 보통은 함유하지 않는 비정상적인 조직 덩어리이다. 고형 종양은 양성(암이 아님), 또는 악성(암)일 수 있다. 다양한 유형의 고형 종양은 그들이 형성된 세포의 유형에 따라 명명된다. 고형 종양의 유형의 예는, 악성 흑색종(melanoma), 신근 암종(adrenal carcinoma), 유방 암종, 신세포 암, 췌장 암종, 비-소세포성 폐암종(NSCLC) 및 원발 부위 불명의 암종을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

추가적으로, 암과 변경된 세포 대사 사이의 관계는 잘 정립되어 있다(Cairns, R.A., 등. Nature Rev ., 2011, 11:85-95 참조). 종양 세포 대사 및 이와 연관된 유전적 변화의 이해는 개선된 암 치료 방법의 발견을 이끌 수 있다. Id. 예를 들어, 증가된 글루코스 대사를 통한 종양 세포의 생존 및 증식은 PTEN 같은 종양 억제 인자의 돌연변이가 종양 세포 대사를 활성화 하는 PIK3 경로와 관계가 있다. Id . AKT1(일명 PKB)은 PFKFB3, ENTPD5, mTOR 및 TSC2(일명 튜베린)와의 다양한 상호작용으로 종양 세포 성장과 연관된 글루코스 대사를 자극한다. Id.

전사 인자 HIF1 및 HIF2는 종종 종양과 연관있는 저산소 상태에 대한 세포 반응의 큰 원인이 된다 Id . 한번 활성화되면, HIF1은 해당과정 수행을 위한 종양 세포의 능력을 촉진한다. Id . 따라서, HIF1의 억제는 종양 세포 대사를 지연 또는 역전시킬 수 있다. HIF1의 활성화는 PI3K, 종양 억제 단백질, 예컨대 VHL, 숙신산 탈수소효소(SDH) 및 푸마르산 수화효소와 관계가 있다. Id. HIF1은 또한, 다양한 유방암 세포주에서, TNF-α를 포함하는 다양한 염증 매개체에 의해 조절된다(Kuo, H.-P. BBRC 2009, 389, 640). 발암성 전사 인자 MYC 또한, 종양 세포 대사, 특히 해당과정과 관계가 있다. (Cairns). MYC는 또한 글루타민 대사 경로에 의해 세포 증식을 촉진한다. Id .

AMP-활성화 단백질 키나제 (AMPK)는 종양 세포가 증식하기 위해서 극복해야만 하는 대사 체크 포인트로서 기능한다. Id . 종양 세포에서 AMPK 신호전달을 억제하는 다수의 돌연변이가 확인되었다(Shackelford, D.B. & Shaw, R.J., Nature Rev. Cancer, 2009, 9: 563-575 참조). STK11은 AMPK의 역할과 관련된 종양 억제 유전자로 확인되었다(Cairns, R.A., et al. Nature Rev., 2011, 11:85-95 참조).

종양 억제제인 p53 전사인자는 또한 세포 대사의 조절에서 중요한 역할을 한다. Id . 종양 세포에서 p53의 결손은 해당 경로로의 종양 세포 대사의 변화에 있어서 중요한 기여인자일 수 있다. Id . 화학요법의 또 다른 잠재적인 표적인 OCT1 전사 인자는 종양 세포 대사의 조절에 있어서 p53과 협력할 수 있다. Id .

피루베이트 키나제 M2 (PKM2)는 세포 증식을 보조함으로써 암 세포에 대사적 이점을 부여하는 세포 대사의 변화를 촉진한다. Id . 예를 들어, PKM1보다 PKM2를 발현하는 폐암 세포가 그러한 이점을 갖는 것으로 밝혀졌다. Id . 임상적으로, PKM2는 다수의 암 유형에서 과발현되는 것으로 확인되었다. Id . 따라서, PKM2는 종양의 조기 발견을 위한 유용한 바이오마커(biomarker)가 될 수 있다.

이소시트르산 탈수소효소 IDH1 및 IDH2의 돌연변이는 종양생성, 특히 교모세포종(glioblastoma) 및 급성 골수성 백혈병에서의 종양생성과 관계가 있다(Mardis, E.R. 등, N. Engl. J. Med., 2009, 361: 1058-1066; Parsons, D.W. 등, Science, 2008, 321: 1807-1812 참조).

암의 발생률은 전반적인 인구의 노령화, 새로운 암의 발생, 및 취약 인구(예를 들어, AIDS에 감염된 사람, 노인층, 또는 과도하게 햇빛에 노출된 사람)의 증가로 인해 지속적으로 상승한다. 따라서, 유방암을 비롯한 암 환자의 치료에 사용될 수 있는 새로운 방법, 치료 및 조성물에 대한 엄청난 수요가 존재한다.

유방암

선암종(adenocarcinoma), 소엽(소분자)암(lobular carcinoma), 관내 암종(intraductal carcinoma), 수질성 유방암(medullary breast cancer), 점액성 유방암(mucinous breast cancer), 관상 유방암(tubular breast cancer), 유두성 유방암(papillary breast cancer), 원발성암, 파제트 병(Paget's disease), 및 염증성 유방암(inflammatory breast cancer)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 유방암은, 전세계 여성이 겪는 가장 흔한 유형의 암으로, 여성이 겪는 암의 대략 23%를 차지하며, 여성의 모든 암-관련 사망의 대략 14%를 차지한다(World cancer report-2008). 가장 흔한 형태의 유방암은 젖샘관에서 유래하며, 다른 형태들은 소엽 또는 다른 유방 조직에서 발달한다. 상이한 형태의 유방암은 다양한 인자에 의존하여, 상이한 종양 성장률을 보이며, 이질적인 생존률을 갖는다.

국소 진행성 유방암은 진단되는 모든 유방암 중 대략 10%를 차지한다(Brito, L. G. O., Clinical Science 2011, 66, 1313 참조). 이 형태의 유방암은 대부분의 유방암과 비교하여 전이 위험이 더 크며, 장기적인 예후가 더 나쁘다. 희귀하긴 하나, 국소 진행성 유방암 중 가장 전이성의 변이체인, 염증성 유방암(IBC)은, 치료에 많은 특유의 저항을 지닌다. IBC는 공격적 형태의 유방암이며, 일반적으로 신체검사 또는 유방조영상 중에 검출될 수 있는 덩어리(lump)로 존재하지 않고, 또한 모호한 증상 때문에 오진으로 이어질 수 있어 진단이 어렵다. 추가적으로, 젊은 환자군에서의 이러한 이중 요인은 급속히 진행하는 암과 조합되어 진단 시점에 질병이 진행 단계(advanced stage)인 환자를 초래할 수 있다. 이러한 문제들은 유방암 환자들의 5년 상대 생존률에 반영된다; 다른 단계의 침윤성 유방암 환자의 5년 생존률인 87%와 비교하여, IBC로 진단받은 여성은 34%의 5년 생존률을 갖는다(National Cancer Institute Fact Sheet on Inflammatory Breast Cancer (http://www.cancer.gov/cancertopics/factsheet/Sites-Types/IBC) 참조).

국소 진행성 유방암 및 염증성 유방암의 치료는 보통 1) 종양의 물리적 크기를 줄이는 화학요법, 이어서 2) 종양을 제거하는 수술, 그 후 3) 방사선 요법을 포함하는 다중모드 접근법을 따른다. 치료 중 화학요법 부분은 종양을 외과적으로 제거하기 위한 임의의 시도가 선택되기 전, 보통 수개월의 과정에 걸친 항종양제의 다중 순환을 포함한다. 치료제의 선택은 표적요법으로 결정될 수 있으며, 이는 더 나은 치료 반응 및 더 나은 생존률로 이어지는 것으로 연구에서 나타났다(Li, B. D. 등. Oncology 2010, 79, 3 참조).

유방암 발병률은 전반적인 인구 노령화, 및 취약 인구(예를 들어, 미분만부(nulliparous) 및 비만인)의 수의 증가 때문에 지속적으로 상승한다. 따라서, 염증성 유방암을 비롯한 국소 진행성 유방암 환자의 치료에 사용될 수 있는 새로운 방법, 치료 및 조성물에 대한 엄청난 수요가 존재한다.

그에 따라, 원치 않는 신생혈관생성의 조절 및/또는 억제 또는 TNF-α를 포함하는 특정 사이토카인의 생산을 억제할 수 있는 화합물은 염증성 유방암을 포함하는 국소 진행성 유방암의 치료 및 예방에 유용할 수 있다.

2. 암의 치료 방법

현재의 암 치료법은 환자의 종양세포를 퇴치하기 위한 수술, 화학요법, 호르몬 요법 및/또는 방사선 치료를 포함할 수 있다(예를 들어, Stockdale, 1998, Medicine, 3 권, Rubenstein 및 Federman, eds., 챕터 12, 섹션 IV 참조). 또한 최근, 암 치료법은 생물학적 요법 또는 면역요법을 포함할 수 있었다. 이 모든 접근법은 환자에 대해 상당한 취약점을 지닌다. 예를 들어, 수술은 환자의 건강으로 인해 사용 금지될 수 있거나, 또는 환자에게 허용되지 않을 수 있다. 추가적으로, 수술은 종양 조직을 완전히 제거하지 못할 수도 있다. 방사선 요법은 종양 조직이 정상 조직보다 방사선에 높은 감수성을 나타내는 경우에만 효과적이다. 방사선 요법은 또한, 자주 심각한 부작용을 이끌어낼 수 있다. 호르몬 요법은 거의 단일 제제로 주어지지 않는다. 호르몬 요법이 효과적일 수는 있지만, 이 요법은 다른 치료로 대부분의 암 세포가 제거된 후에 암의 재발을 방지 또는 지연시키기 위해 자주 사용된다. 특정 생물학적 및 다른 요법은 수에 제한이 있으며, 발진 또는 부기, 발열, 오한 및 피로를 포함하는 독감 유사 증상, 소화관 문제 또는 알레르기 반응과 같은 부작용을 생성할 수 있다.

화학 요법에 관하여, 암 치료에 사용할 수 있는 다양한 화학요법제가 있다. 다수의 암 화학요법제는 데옥시리보뉴클레오티드 삼인삼염 전구체의 생합성을 억제하여 직접 또는 간접적으로 DNA 합성을 억제하는 것에 의해 작용하여, DNA 복제 및 이에 수반되는 세포 분열을 방지한다(Gilman 등., Goodman 및 Gilman's : The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10 판. (McGraw Hill, New York)).

다양한 화학요법제의 이용가능성에도 불구하고, 화학요법은 많은 취약점을 갖는다.(Stockdale, Medicine, 3 권, Rubenstein and Federman, eds., 쳅터. 12, 섹션. 10, 1998.) 거의 모든 화학요법제는 독성이며, 화학요법은 심한 메스꺼움, 골수 쇠약, 및 면역억제를 포함하는 심각하고 종종 위험한 부작용을 야기한다. 추가적으로, 많은 종양 세포는 화학요법제의 조합을 투여할 때조차, 화학요법제에 내성이 거나 내성을 발달시킨다. 사실, 치료 프로토콜에 사용되는 특정 화학요법제에 내성이 있는 세포들은, 특정 치료에 사용되는 약물의 메커니즘과는 상이한 메커니즘에 의해 작용하는 약물일지라도, 다른 약물에 대해 대개 내성인 것으로 드러났다. 이 현상을 다제 내성이라고 한다. 약물 내성 때문에, 많은 암이 표준 화학요법 치료 프로토콜에 대해 난치성인 것으로 드러났다.

종래의 치료법과 연관된 독성 및/또는 부작용을 감소시키거나 피하면서, 암, 특히 수술, 방사선 요법, 화학요법 및 호르몬 요법과 같은 표준 치료에 불응성인 암을 치료, 예방 및 관리하는 안전하고 효과적인 방법에 대한 상당한 요구가 존재한다.

국소 진행성 및 염증성 유방암을 포함하는 유방암뿐만 아니라 통상적인 화학요법에 난치성 또는 내성인 유방암을 치료, 예방 및/또는 관리하는 방법이 본원에서 제공되며, 상기 방법을 면역조절 화합물의 치료적 또는 예방적 유효량을 상기 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

일부 실시양태에서, 면역조절 화합물은 단일제로서 또는 병용 요법의 일부로서 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 및 이의 조합, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체로 구성된 그룹 중에서 선택된다.

또한, 본원에 기재된 화합물, 이의 조합, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 치료적 유효량을 유방암의 관리를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 유방암의 관리 방법(예를 들어, 유방암 재발의 예방, 또는 차도 기간의 연장)이 본원에서 제공된다.

추가로, 유방암의 치료, 예방, 또는 관리에 통상적으로 사용되는 요법과 조합하여, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 치료적 또는 예방적 유효량을; 유방암의 치료, 예방, 또는 관리를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 유방암의 치료, 예방, 또는 관리 방법이 본 발명에서 제공된다. 상기 통상적인 요법의 예는 수술, 화학요법, 방사선 요법, 호르몬 요법, 생물학적 요법, 및 면역요법을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

추가로, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 제형을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 추가적인 활성제, 또는 이의 약리학적 활성 돌연변이 또는 유도체, 또는 이의 조합을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 활성 성분을 투여하는 장치를 추가로 포함한다. 장치의 예로는, 주사기, 드립 백(drip bag), 패치, 및 흡입기를 포함하지만, 이제 한정되지 않는다.

도 1은 세포군 내의 Aiolos 발현 억제에 대한 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온("화합물 B" 또는 "CPD B")의 효과를 나타낸다.
도 2는 CD20+ B 세포 내의 Aiolos 발현 억제에 대한 화합물 B의 효과를 나타낸다.
도 3은 CD3+ T 세포 내의 Aiolos 발현 억제에 대한 화합물 B의 효과를 나타낸다.
도 4는 화합물 A 또는 화합물 B로 처리된 인간의 전혈 샘플의 Aiolos 웨스턴 블로팅을 나타낸다.
도 5는 화합물 B로 처리된 인간 원숭이 PMBC의 Aiolos 웨스턴 블로팅을 나타낸다.
도 6 내지 도 9는 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온을 사용한 사이노몰구스 원숭이(Cyno monkey)에서의 Aiolos 발현 연구의 결과를 나타낸다.
도 10은 골수종 세포 내의 Aiolos 단백질에 대한 화합물 A 및 B의 상이한 효과를 나타낸다.
도 11은 포말리도마이드로 처리된 저 세레브론(cereblon, CRBN) 세포주의 투여량 반응 곡선(dose response curve)을 나타낸다.
도 12는 CRBN의 결손이 레날리도마이드 및 포말리도마이드에 의한 Aiolos의 하향 조절을 방지함을 나타낸다.
도 13은 Aiolos의 녹다운(knock-down)이 p21의 발현을 유도하고, IRF4의 감소시키고, 및 S기 세포 수의 감소시킴을 나타낸다.
도 14는 Aiolos 녹다운이 p21 발현을 유도함을 나타낸다.
도 15는 화합물 A로 처리된 ZR 75-1 및 AU565 세포주 모두에서의 Aiolos 감소를 나타낸다.
도 16은 랫트의 10%에서 심각한 독성을 일으키는 투여량(Severely Toxic Dose at 10%, STD10), 원숭이에게 심각한 독성이 발생하지 않는 최대 투여량(Highest Non-Severely Toxic Dose, HNSTD), 및 생체내 약리 시험에서 효과적인 투여량의 곡선 아래 면적(AUC) 값; 시험관내 약리 모델을 사용하여 예상된 AUC 값; 및 예측되는 인간 AUC 값의 비교를 나타낸다.

발명의 상세한 설명

국소 진행성 및 염증성 유방암을 포함하는 유방암뿐만 아니라, 종래 화학요법에 난치성 또는 내성인 유방암의 치료, 예방 및/또는 관리 방법이 본원에서 제공되며, 상기 방법은 치료적 또는 예방적 유효량의 면역조절 화합물을 이러한 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

일부 실시양태에서, 면역조절 화합물은 단일제 또는 병용 요법의 일부로서, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 및 이의 조합, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체로 구성된 그룹에서 선택된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 IBC 세포의 HIF1α 유전자 발현 프로파일의 유도를 차단한다. 특정 이론에 제한됨이 없이, 본원에서 제공되는 화합물은 최소한 부분적으로 그들의 HIFα 활성에 기초하여 국소 진행성 유방암 및/또는 염증성 유방암의 치료에서 독립적으로, 병용하여, 또는 다른 항암제와 조합하여 사용될 수 있다고 생각된다.

추가로, 유방암의 치료, 예방, 또는 관리를 필요로 하는 환자에게 0.5 mg 내지 20 mg 용량의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를; 단독으로 또는 유방암의 치료, 예방, 또는 관리에 종래 사용되는 요법과 조합하여 경구 투여하는 것을 포함하는 유방암의 치료, 예방, 및/또는 관리 방법이 본원에서 제공된다. 상기 통상적 요법의 예는, DNA 손상 화학요법, 항-유사분열제(예를 들어, 탁산, 빈카 알칼로이드), 항-대사물질, 키나제 억제제, 후성적 표적 치료제(epigenetic targeted agent), 다른 세포독성 또는 경로 표적 치료제, 및 방사선 요법을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

또 다른 실시양태에서, 유방암의 치료, 예방 또는 관리를 필요로 하는 환자에게 매일 0.5 mg 내지 20 mg 용량의 본원에서 제공되는 화합물을 질병 진행이 간헐적일 때까지 지속적으로 경구 투여하는 것을 포함하는 유방암의 치료, 예방, 및/또는 관리 방법이 본원에서 제공된다.

또한, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 다형체, 전구 약물(prodrug), 및 제2 또는 추가적 활성제를 포함하는 약학적 조성물, 단일 단위 제형, 투여 요법 및 키트가 본원에서 제공된다. 제2 활성제는 약물의 특정 조합, 또는 "칵테일(액체 약물의 혼합물)"을 포함한다. 제2 활성제는 그 예가 본원에서 제공되는 소분자 및 대분자(예를 들어, 단백질 및 항체)뿐만 아니라, 줄기세포도 포함한다. 본원에서 제공되는 화합물의 투여와 함께 조합하여 사용될 수 있는 방법 또는 요법은 수술, 수혈, 면역요법, 생물학적 요법, 방사선 요법, 및 원하지 않는 혈관생성과 관련되거나 또는 이를 특징으로 하는 질병 및 상태를 치료, 예방 또는 관리하기 위해 현재 사용되고 있는 기타 비-약물 기반 치료법을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

일 실시양태에서, 추가적 활성제는 탁산(예를 들어, 파클리탁셀(Taxol®), 독세탁셀(Taxotere®), 단백-결합 파클리탁셀(Abraxane®) 또는 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴(Velban®), 빈데신, 비노렐빈)과 같은 항-유사분열제; 시티딘 유사체(예를 들어, 5-아자시티딘(Vidaza®); 토포아이소머라제(topoisomerase) 억제제(예를 들어, 독소루비신(Adriamycin®), 다우노루비신, 미톡산트론, 암사크린, 아우린트리카르복실산, 이리노테칸, 토포테칸, 캄토테신, 라멜라린 D, 에토포시트, 테니포시드, 엘립티신 및 HU-331), 카페시타빈(Xeloda®), 겜시타빈(Gemzar®); HDAC 억제제(예를 들어, 로미뎁신, 보리노스타트, 파노비노스타트, 발프로 산, 벨리노스타트, 엔티노스타트); HER2 억제제(예를 들어, 트라스투주맙(Herceptin®), 트라스투주맙 엠타신(T-DM1), 라파티닙(Tykerb®), 베바시주맙(아바스타틴®), 퍼투주맙(Perjeta®)); 백금(예를 들어, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴); Bcl-2 억제제(예를 들어, 나비토클락스); PI3K/AKT/mTOR 경로 억제제(예를 들어, GDC-0941, CC-223, CC-115); 에베로리무스(Afinitor®), 아나스트로졸(Arimidex®), 엑스메스탄(Aromacin®), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 에리불린(Halaven®), 플루옥시메스테론(Halotestin®), 풀베스트란트(Faslodex®), 레트로졸(Femara®), 타목시펜(Nolvadex®), 및 메토트렉세이트(Trexall®)로 구성된 그룹 중에서 선택된다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 1일 약 5 내지 50 mg의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 레날리도마이드는 1일 약 5, 10, 15, 25, 30 또는 50 mg의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 포말리도마이드는 1일 약 5, 10, 15, 25, 30 또는 50 mg의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서,탈리도마이드는 1일 약 5, 10, 15, 25, 30 또는 50 mg의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온은 1일 0.5 mg 내지 20 mg 사이의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온은 1일 0.5 mg 내지 20 mg 사이의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 1일 0.5 mg 내지 20 mg 사이의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온은 1일 0.5mg 내지 20 mg 사이의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온은 1일 0.5 mg 내지 20 mg 사이의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온은 1일 0.5 mg 내지 20 mg 사이의 양으로 투여된다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 1일 2회 투여된다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 경구 투여된다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 캡슐 또는 정제로 투여된다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 28일 주기에서 21일간 투여되고 이후 7일간 휴약된다.

1. 화합물

본원에서 제공되는 방법에 사용하기 적합한 화합물은 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온("화합물 A"), 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 및/또는 다른 면역조절 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체이다.

본원에서 제공되는 방법을 위한 화합물은 G.W. Muller 등에 대한 미국 특허 제6,281,230호 및 제6,316,471호에 기재된 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)프탈이미드 및 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 본원에서 개시된 또다른 특정 화합물은 각각이 참조로 본원에 포함되는 미국 특허 제6,395,754호, 제6,555,554호, 제7,091,353호, 미국 특허공보 제2004/0029832호, 및 국제 특허공보 WO98/54170에 개시된 이소인돌이미드 류에 속한다.

화합물 A, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온은 하기 구조를 갖는다:

화합물 A는 본원에서 제공되는 실시예에 기재된 방법 또는 그 전문이 참조로 본원에 포함된 미국 특허 제7,635,700호에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 화합물은 또한, 본원의 교시에 기초하여 이 분야 통상의 기술자에게 명백한 다른 방법에 따라 합성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 고체 화합물 A는 그 전문이 본원에 참조로 포함된 2012년 3월 9일 제출된 미국 임시특허출원 제13/417,055호에 기재된 결정성 고체이다.

또한, 화학식 Ⅰ의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 입체이성질체가 본원에서 제공되며:

(Ⅰ)

상기 식에서,

X는 C=O 또는 CH₂ 이고;

R¹ 은 -Y-R³ 이고;

R² 는 H 또는 (C₁-C₆)알킬 이고;

Y 는 각각이 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환될 수 있는 6 내지 10 원의 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클이거나 결합이고;

R³는 -(CH₂)_n-아릴, -O-(CH₂)_n-아릴 또는 -(CH₂)_n-O-아릴이거나, 여기서 상기 아릴은 그 자체가 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되는, (C₁-C₆)알킬; 그 자체가 하나 이상의 할로겐으로 치환되는, (C₁- C₆)알콕시; 옥소; 아미노; 카복실; 시아노; 하이드록실; 할로겐; 듀테륨(중수소); 하나 이상의 (C₁-C₆)알킬, (C₁-C₆)알콕시 또는 할로겐으로 임의로 치환되는, 6 내지 10 원의 아릴 또는 헤테로 아릴; -CONH₂; 또는 알킬이 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환 될 수 있는, -COO-(C₁-C₆)알킬 중 하나 이상에 의해 임의로 치환 된다;

-(CH₂)-헤테로사이클, -O-(CH₂)_n-헤테로사이클 또는 -(CH₂)_n-O-헤테로 사이클이거나, 여기서 상기 헤테로사이클은 하나 이상의 : 그 자체가 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되는, (C₁-C₆)알킬; 그 자체가 하나 이상의 할로겐으로 치환되는, (C₁-C₆)알콕시; 옥 소; 아미노; 카복실; 시아노; 하이드록실; 할로겐; 듀테륨(중수 소); 하나 이상의 (C₁-C₆)알킬, (C₁-C₆)알콕시 또는 할로겐으로 임의로 치환되는, 6 내지 10 원의 아릴 또는 헤테로아릴; -CONH₂; 또는 알킬이 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환될 수 있는, -COO-(C₁-C₆)알킬 중 하나 이상에 의해 임의로 치환된다; 또는

-(CH₂)_n-헤테로아릴, -O-(CH₂)_n-헤테로아릴 또는 -(CH₂)_n-O-헤테로아릴 이고, 여기서 상기 헤테로아릴은 그 자체가 하나 이상의 할로겐 으로 임의로 치환되는, (C₁-C₆)알킬; 그 자체가 하나 이상의 할 로겐으로 치환되는, (C₁-C₆)알콕시; 옥소; 아미노; 카복실; 시아 노; 하이드록실; 할로겐; 듀테륨(중수소); 하나 이상의 (C₁-C₆) 알킬, (C₁-C₆)알콕시 또는 할로겐으로 임의로 치환되는, 6 내지 10 원의 아릴 또는 헤테로아릴; -CONH₂; 또는 알킬이 하나 이상 의 할로겐으로 임의로 치환될 수 있는, -COO-(C₁-C₆)알킬 중 하 나 이상에 의해 임의로 치환된다; 및

n은 0, 1, 2 또는 3이다.

일 실시양태에서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 예는 그 전문의 개시내용이 참조로 본원에 포함되는 미국특허공보 제2011/0196150호에 기재된 화합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 화합물은 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체로 구성된 그룹 중에서 선택된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 특정 화합물은 본원에서 제공되는 실시예에 기재된 방법 또는 그 전문의 개시내용이 참조로 본원에 포함되는 2012년 8월 9일 출원된 미국 임시특허출원 제61/681,447호에 기재된 방법에 의하여 제조될 수 있다.

만약 도시된 구조 및 그 구조에 주어진 명칭 사이에 불일치가 있다면, 도시된 구조에 더 많은 무게를 부여해야 한다는 점이 인식되어야 한다. 또한, 구조 또는 구조의 일부에 대한 입체화학, 예를 들어, 굵은 선 또는 점선이 표시되어 있지 않다면, 상기 구조 또는 구조의 일부는 그 구조의 모든 입체 이성질체를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

2. 정의

본원에 제시된 개시내용에 대한 이해를 용이하게 하기 위해, 다수의 용어들이 하기에 정의된다.

용어 "대상체" 또는 "환자"는, 영장류(예를 들어, 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 랫트, 또는 마우스를 비롯한 포유동물을 포함하나, 이에 한정되지는 않는 동물을 의미한다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 예를 들어, 인간 대상체와 같은 포유동물 대상체를 지칭할 때 본원에서 상호호환하여 사용된다.

달리 특정되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 질병 또는 장애, 또는 상기 질병 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 근절 또는 개선을 의미한다. 특정 실시양태에서, 상기 용어는 그러한 질병 또는 장애를 가진 환자에게 하나 이상의 예방제 또는 치료제를 투여함으로써 상기 질병 또는 장애의 확산 또는 악화를 최소화하는 것을 의미한다. 특정 실시양태에서, 상기 용어는 특정 질병의 증상의 시작(onset) 이후, 다른 추가의 활성제와 함께 또는 없이, 본원에서 제공되는 화합물을 투여하는것을 의미한다.

달리 특정되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "예방하다", "예방하는" 및 "예방"은 질병 또는 장애, 또는 이의 하나 이상의 증상의 시작, 재발 또는 확산의 예방을 의미한다. 특정 실시양태에서, 상기 용어는, 특히 본원에서 제공되는 질병 또는 장애의 위험이 있는 환자에게, 증상의 시작 전에, 다른 추가적 활성제와 함께 또는 없이, 본원에서 제공되는 화합물로 치료하거나 또는 그 화합물을 투여하는 것을 의미한다. 상기 용어는 특정 질병의 증상의 억제 또는 감소를 포함한다. 특히, 질병의 가족력이 있는 환자들은 특정 실시양태에서 예방적 요법(regimen)을 위한 후보이다. 또한, 재발성 증상의 내력을 가진 환자들 역시 예방을 위한 잠재적인 후보이다. 이와 관련하여, 용어 "예방"은 용어 "예방적 치료(prophylactic treatment)"와 상호호환하여 사용될 수 있다.

달리 특정되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "관리하다", "관리하는" 및 "관리"는 질병 또는 장애, 또는 이들의 하나 이상의 증상의 진행, 확산 또는 악화를 예방하거나 지연시키는 것을 의미한다. 종종, 예방제 및/또는 치료제로부터 환자가 얻는 유익한 효과가 질병 또는 장애를 치료하지 않는다. 이와 관련하여, 용어 "관리하는"은 특정 질병의 재발의 예방 또는 최소화를 시도하여 상기 질병으로 고통받아온 환자의 치료, 또는 관해 상태를 유지하는 기간의 연장을 포함한다.

달리 특정되지 않는 한, 본원에서 사용되는, 화합물의 "치료적 유효량"은 질병 또는 장애의 치료 또는 관리에 치료적 이점을 제공하거나, 또는 상기 질병 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 지연 또는 최소화하기에 충분한 양이다. 화합물의 치료적 유효량은, 단독으로 또는 다른 요법과 조합되어, 질병 또는 장애의 치료 또는 관리에 치료적 이점을 제공하는 치료제의 양을 의미한다. 용어 "치료적 유효량"은 전반적 요법을 개선하고, 질병 또는 장애의 증상 또는 원인을 감소 또는 회피하거나, 또는 다른 치료제의 치료적 효능을 증강시키는 양을 포함할 수 있다.

달리 특정되지 않는 한, 본원에서 사용되는, 화합물의 "예방적 유효량"은 질병 또는 장애의 예방, 또는 이의 재발의 예방에 충분한 양이다. 화합물의 예방적 유효량은, 단독으로 또는 다른 치료제와 조합되어, 질병의 예방에 예방적 이점을 제공하는 치료제의 양을 의미한다. 용어 "예방적 유효량"은 전반적 예방을 개선하거나 또는 다른 예방제의 예방적 효능을 증강시키는 양을 포함할 수 있다.

용어 "약학적으로 허용되는 담체", "약학적으로 허용되는 부형제", "생리학적으로 허용되는 담체", 또는 "생리학적으로 허용되는 부형제"는, 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매, 또는 캡슐화 물질과 같은, 약학적으로-허용되는 물질, 조성물, 또는 비히클을 의미한다. 일 실시양태에서, 각 구성요소는 약학적 제형의 다른 성분과 양립가능하다는 의미에서 "약학적으로 허용되는" 것이고, 합당한 이점/위험 비에 비례하여 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응, 면역원성, 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직 또는 기관과 접촉하는데 사용하기 적합하다는 점에서 "약학적으로 허용된다". (Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 21판; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5판; Rowe 등, 편집, The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2005; 및 Handbook of Pharmaceutical Additives, 3판; Ash and Ash 편집, Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, Gibson 편집, CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2004 참조).

본원에서 사용되는 용어 "종양(Tumor)"은 악성 또는 양성인 모든 종양성 세포 성장 및 증식, 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 의미한다. 본원에서 사용되는 용어 "종양성(Neoplastic)"은 악성 세포이든 양성 세포이든, 비정상적 조직 성장을 초래하는, 임의의 형태의 조절에 장애가 있거나, 조절되지 않는 세포 성장을 의미한다. 따라서, "종양성 세포"는 조절에 장애가 있거나, 조절되지 않는 세포 성장을 갖는 악성 및 양성 세포를 포함한다.

용어 "재발된(relapsed)"은 치료 후 암의 관해기에 있었던 대상체 또는 포유류에서 다시 암 세포가 나타나는 상황을 의미한다.

본원에서 사용되는 용어 "효과적인 환자 종양 반응"은 환자에 대한 치료적 이익의 모든 증가를 의미한다. "효과적인 환자 종양 반응"은, 예를 들어, 종양의 진행 속도에서 5%, 10%, 25%, 50%, 또는 100% 감소일 수 있다. "효과적인 환자 종양 반응"은, 예를 들어, 암의 물리적 증상에서 5%, 10%, 25%, 50%, 또는 100% 감소일 수 있다. "효과적인 환자 종양 반응"은 또한, 예를 들어, 유전자 발현, 세포 수, 검정 결과 등과 같은 모든 적절한 수단에 의해 측정되는 환자의 반응에서의 5%, 10%, 25%, 50%, 100%, 200%, 또는 그 이상의 증가일 수 있다.

용어 "가능성"은 일반적으로 어떤 사건의 확률의 증가를 의미한다. 용어 "가능성"은 환자 종양 반응의 효과와 관련해서 사용될 때, 일반적으로 종양 진행 또는 종양 세포 성장 속도가 감소할 것이라는 확률의 증가를 고려한다. 용어 "가능성"은 또한 환자 종양 반응의 효과와 관련해서 사용될 때, 일반적으로 종양 치료에서 진행의 증가를 입증할 수 있는 mRNA 또는 단백질 발현과 같은 지표의 증가를 의미할 수 있다.

용어 "예측하다"는 일반적으로 미리 결정하거나 말하는 것을 의미한다. 암 치료의 효과를 "예측하기" 위해 사용될 때, 예를 들어, 용어 "예측하다"는 초기, 치료 시작 전, 또는 치료기간이 상당히 진행되기 전에 암 치료 결과의 가능성이 결정될 수 있음을 의미할 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "모니터하다"는 일반적으로 활성의 감독, 관리, 조절, 관찰, 추적, 또는 감시를 의미한다. 예를 들어, 용어 "화합물의 효과를 모니터하는"은 환자의 암 치료 또는 종양 세포 배양에서의 효과를 추적하는 것을 의미한다. 마찬가지로, 개인적으로, 또는 임상 실험에서, 환자 순응도와 관련해서 사용될 때 "모니터링"은 환자가 시험 중인 면역조절 화합물을 처방대로 실제로 복용하고 있는 지를 추적 또는 확인하는 것을 의미한다. 모니터링은, 예를 들어, mRNA 또는 단백질 바이오마커의 발현을 추적함으로써 수행될 수 있다.

암 또는 암 관련 질병의 개선은 완전 또는 부분 반응으로서 특징지어질 수 있다. "완전 반응"은 모든 사전의 비정상적 방사선 촬영 시험, 골수, 및 뇌척수액(CSF) 또는 비정상 단일 클론 단백질 측정의 정상화로 임상학적으로 검출될 수 있는 질병이 없는 것을 의미한다. "부분 반응"은 새로운 병변이 없을 때 모든 측정 가능한 종양 존재량(즉, 대상에 존재하는 악성 세포의 수, 또는 측정된 종양 덩어리의 규모 또는 비정상 단일 클론 단백질의 양)이 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 감소하는 것을 의미한다. 용어 "치료"는 완전 반응과 부분 반응 모두를 고려한다.

용어 "불응성 또는 내성"은 집중 치료 후에도, 대상체 또는 포유류가 체내에 잔류 암 세포를 가지고 있는 상황을 의미한다.

용어 "약물 내성"은 질병이 약물 또는 약물들의 치료에 반응하지 않는 상태를 의미한다. 약물 내성은 질병이 약물 또는 약물들에 반응한 적이 전혀 없는 경우를 의미하는 내재성일 수도 있고, 질병이 이전에는 반응하였던 약물 또는 약물들에 대하여 반응을 중단한 경우를 의미하는 후천성일 수도 있다. 특정 실시양태에서, 약물 내성은 내재성이다. 특정 실시양태에서, 약물 내성은 후천성이다.

용어 "감수성" 및 "감수성인"은 화합물을 이용한 치료와 관련하여 사용될 때 치료 중인 종양 또는 질병의 진행을 완화하거나 감소시킴에 있어서 화합물의 효과의 정도를 의미하는 상대적 용어이다. 예를 들어, 화합물과 연관된 세포 또는 종양의 치료와 관련하여 사용될 때, 용어 "증가된 감수성"은 종양 치료의 효과에 있어서 적어도 5%, 또는 그 이상의 증가를 의미한다.

본원에서 사용되는 용어 "발현되는" 또는 "발현"은 유전자의 두개의 핵산 가닥 중 하나의 영역에 적어도 부분적으로 상보적인 RNA 핵산 분자를 제공하는 유전자로부터의 전사를 의미한다. 본원에서 사용되는 용어 "발현되는" 또는 "발현"은 또한 단백질, 폴리펩티드 또는 이들의 부분을 제공하는 RNA 분자의 번역을 의미한다.

"상향 조절되는" mRNA는 일반적으로 주어진 치료 또는 조건에 따라 증가된다. "하향 조절되는" mRNA는 일반적으로 주어진 치료 또는 조건에 반응하여 mRNA의 발현 수준이 감소하는 것을 의미한다. 일부 상황에서, mRNA 레벨은 주어진 치료 또는 조건에 의해 변하지 않고 유지될 수 있다.

환자 샘플로부터의 mRNA는 면역조절 화합물로 처리되었을 때, 비처리된 대조군에 비하여 "상향 조절"될 수 있다. 이러한 상향 조절은, 예를 들어, 비교 대조군 mRNA 수준의 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 90%, 100%, 200%, 300%, 500%, 1,000%, 5,000% 또는 그 초과의 증가일 수 있다.

다르게는, mRNA는 특정 면역조절 화합물 또는 다른 약제의 투여에 반응하여 "하향 조절"되거나 또는 더 낮은 수준으로 발현될 수 있다. 하향 조절된 mRNA는, 예를 들어, 비교 대조군 mRNA 수준의 약 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 1% 또는 그 미만의 수준으로 존재할 수 있다.

마찬가지로, 환자 샘플로부터의 폴리펩티드 또는 단백질 바이오마커의 수준은 면역조절 화합물로 처리될 때 비처리된 대조군과 비교하여 증가될 수 있다. 이러한 증가는 비교 대조군 단백질 수준의 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 90%, 100%, 200%, 300%, 500%, 1,000%, 5,000% 또는 그 초과일 수 있다.

다르게는, 단백질 바이오마커의 수준은 특정 면역조절 화합물 또는 다른 약제의 투여에 반응하여 감소할 수 있다. 이러한 감소는, 예를 들어, 비교 대조군 단백질 수준의 약 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 1% 또는 그 미만의 수준으로 존재할 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "결정하는(determining)", "측정하는(measuring)", "감정하는(evaluating)", "평가하는(assessing)" 및 "검정하는(assaying)"은 일반적으로 모든 형태의 측정을 의미하며, 어떤 요소가 존재하는지 아닌지 여부의 결정을 포함한다. 이 용어들은 정량적 및/또는 정성적 결정 모두를 포함한다. 평가는 상대적이거나 절대적일 수 있다. "존재의 평가"는 존재하는 어떤 것의 양을 결정하는 것뿐만 아니라, 그것이 존재하는지 아닌지 결정하는 것도 포함할 수 있다.

달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용되는 염"은 상기 용어가 지칭하는 화합물의 비-독성 산 및 염기 첨가 염을 포함한다. 허용되는 비-독성 산 첨가 염으로는, 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 인산, 황산, 메탄술폰산, 아세트산, 주석산, 젖산, 숙신산, 구연산, 말산, 말레산, 소르브산, 아코니트산, 살리실산, 프탈산, 엠볼산, 에난트산 등을 포함하는 이 분야에 공지된 유기 및 무기 산 또는 염기로부터 유도된 것들이 포함된다.

자연에서 산성인 화합물은 다양한 약학적으로 허용되는 염기와 염을 형성할 수 있다. 이러한 산성 화합물의 약학적으로 허용되는 염기 첨가 염을 제조하기 위해 사용될 수 있는 염기는 비-독성 염기 첨가 염, 즉, 약학적으로 허용되는 양이온을 함유하는 염이며, 특히 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염, 및 칼슘, 마그네슘, 나트륨 또는 칼륨염과 같은 염으로, 이에 한정되지는 않는 염을 형성하는 것들이다. 적합한 유기 염기는, N,N-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루마인(N-메틸글루카민), 리신, 및 프로카인을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "용매화물"은, 비-공유적 분자간 힘에 의해 결합된 화학 양론적 또는 비-화학 양론적 양의 용매를 추가로 포함하는 본원에서 제공되는 화합물 또는 이의 염을 의미한다. 용매가 물인 경우, 용매화물은 수화물이다.

달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "전구 약물(프로드럭)"은 생물학적 조건(시험관 내 또는 생체 내) 하에서 가수분해, 산화, 또는 그 외 방식으로 반응하여 화합물을 제공하는 그 화합물의 유도체를 의미한다. 전구 약물의 예로는, 생가수분해가능한(biohydrolyzable) 부위, 예컨대 생가수분해가능한 아미드, 생가수분해가능한 에스테르, 생가수분해가능한 카바메이트, 생가수분해가능한 카보네이트, 생가수분해가능한 우레이드, 및 생가수분해가능한 인산염 유사체를 포함하는 본원에서 제공되는 화합물의 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 전구 약물의 다른 예는 -NO, -NO₂, -ONO, 또는 -ONO₂ 부위를 포함하는 본원에서 제공되는 화합물의 유도체를 포함한다. 전구 약물은 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff 편집, 5판. 1995), 및 Design of Prodrugs (H. Bundgaard 편집, Elselvier, New York 1985)에 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다.

달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "생가수분해가능한 아미드", "생가수분해가능한 에스테르", "생가수분해가능한 카바메이트", "생가수분해가능한 카보네이트", "생가수분해가능한 우레이드", 및 "생가수분해가능한 인산염"은 1) 화합물의 생물학적 활성을 방해하지 않으면서 생체 내에서 상기 화합물에 유리한 특성, 예컨대, 섭취, 작용의 기간, 또는 작용의 개시를 부여할 수 있거나; 또는 2) 생물학적으로 불활성이지만, 생체 내에서 생물학적으로 활성인 화합물로 전환될 수 있는, 화합물의 아미드, 에스테르, 카바메이트, 카보네이트, 우레이드, 또는 인산염을 각각 의미한다. 생가수분해가능한 에스테르의 예는 저급 알킬 에스테르, 저급 아실옥시알킬 에스테르(예컨대 아세톡실메틸, 아세톡실에틸, 아미노카보닐옥시메틸, 피발로일옥시메틸, 및 피발로일옥시에틸 에스테르), 락토닐 에스테르(예컨대 프탈리딜 및 티오프탈리딜 에스테르), 저급 알콕시아실옥시알킬 에스테르(예컨대 메톡시카보닐-옥시메틸, 에톡시카보닐옥시에틸 및 이소프로폭시카보닐옥시에틸 에스테르), 알콕시알킬 에스테르, 콜린 에스테르, 및 아실아미노 알킬 에스테르(예컨대 아세트아미도메틸 에스테르)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 생가수분해가능한 아미드의 예는 저급 알킬 아미드, α-아미노산 아미드, 알콕시아실 아미드, 및 알킬아미노알킬카보닐 아미드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 생가수분해가능한 카바메이트의 예는 저급 알킬아민, 치환된 에틸렌디아민, 아미노산, 하이드록시알킬아민, 헤테로사이클릭 및 헤테로아로마틱 아민, 및 폴리에테르 아민을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "입체이성질적으로 순수한"은 화합물의 하나의 입체이성질체를 포함하고 상기 화합물의 다른 입체이성질체는 실질적으로 존재하지 않는 조성물을 의미한다. 예를 들어, 하나의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체이성질적으로 순수한 조성물은 실질적으로 화합물의 반대 거울상 이성질체가 존재하지 않을 것이다. 두 개의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체이성질적으로 순수한 조성물은 화합물의 다른 부분 입체이성질체가 존재하지 않을 것이다. 특정 실시양태에서, 입체 이성질적으로 순수한 화합물은 화합물의 1종의 입체이성질체를 약 80 중량% 초과와 화합물의 다른 입체이성질체를 약 20 중량% 미만으로, 화합물의 1종의 입체 이성질체를 약 90 중량% 초과와 화합물의 다른 입체 이성질체를 약 10 중량% 미만으로, 화합물의 1종의 입체 이성질체를 약 95 중량% 초과와 화합물의 다른 입체 이성질체를 약 5 중량% 미만으로, 또는 화합물의 1종의 입체 이성질체를 약 97 중량% 초과와 화합물의 다른 입체 이성질체를 약 3 중량% 미만으로 포함한다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "입체 이성질적으로 풍부한"은 화합물의 하나의 입체 이성질체를 약 60 중량% 초과, 약 70 중량% 초과, 또는 화합물의 하나의 입체 이성질체를 약 80 중량% 초과로 포함하는 조성물을 의미한다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "거울상 이성질적으로(enantiomerically) 순수한"은 하나의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체 이성질적으로 순수한 조성물을 의미한다. 마찬가지로, 용어 "입체 이성질적으로 풍부한"은 하나의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체 이성질적으로 풍부한 조성물을 의미한다.

용어 "약" 또는 "대략"은 이 분야 통상의 기술자에 의해 결정된 특정 값에 대한 허용가능한 오류를 의미하는 것으로, 이는 그 값이 어떻게 측정 또는 결정되는지에 부분적으로 의존한다. 특정 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 1, 2, 3, 또는 4 표준 편차 내를 의미한다. 특정 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 50%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.05% 내를 의미한다.

3. 암 승인을 위한 임상 시험 종점

"전체 생존기간(overall survivla)"은 무작위 추출로부터 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로서 정의되며, 치료 의향(intent-to-treat) 개체군에서 측정된다. 전체 생존기간은 무작위 대조 연구로 평가되어야 한다. 전체 생존기간의 통계적으로 유의한 개선의 입증은 독성 프로파일이 허용가능하다면, 임상적으로 유의하다고 간주될 수 있으며, 종종 신규 약물 승인을 뒷받침 해왔다.

다수의 종점은 종양 평가를 기반으로 한다. 이들 종점은 무병 생존기간(disease free survival, DFS), 객관적인 반응률(objective response rate, ORR), 진행까지의 시간(time to progression, TTP), 무진행 생존기간(progression-free survival, PFS), 및 치료 실패까지의 시간(timt-to-treatment failure, TTF)을 포함한다. 이들 시간 의존성 종점에 대한 데이터의 수집 및 분석은 간접 평가, 계산 및 추정(예를 들어, 종양 측정)을 기초로 한다.

일반적으로, "무병 생존기간(disease free survival, DFS)"은 무작위 추출로부터 암의 재발 또는 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 정의된다. 전체 생존기간은 대부분의 보조 설정에 대한 통상적 종점이지만, DFS는 생존기간이 연장되어서, 생존기간 종점이 비현실적으로 된 상황에서 중요한 종점이 될 수 있다. DFS는 임상적 이점을 대신할 수 있거나, 또는 임상적 이점의 직접적인 증거를 제공할 수 있다. 이 결정은 효과의 크기, 그 위험-이점 상관 관계, 및 질병 설정(disease setting)을 기초로한다. DFS의 정의는 특히, 이전의 암 진행 증거기록 없이 사망이 기록될 때 복잡해질 수 있다. 이러한 사건은 질병 재발 또는 삭제된 사건으로서 등급될 수 있다. 사망의 통계학적 분석을 위한 모든 방법은 일부 한계가 있지만, 모든 사망(모든 원인으로부터의 사망)을 재발로서 간주하는 것은 편향을 최소화할 수 있다. 이 정의를 사용하면 특히, 관찰 없이 오랜 기간이 지난 후에 사망한 환자에게서 DFS가 과대 평가될 수 있다. 장기 후속 방문 빈도수가 실험군 사이에서 다르거나, 독성에 때문에 중도탈락이 무작위가 아니라면, 편향이 도입될 수 있다.

"객관적 반응률(objective response rate, ORR)"은 최소 기간 동안에, 종래에 정해진 양의 종양 크기가 줄어든 환자의 비율로서 정의된다. 보통, 반응 기간은 초기 반응 시간부터 암 진행이 기록될 때까지 측정된다. 일반적으로, FDA는 부분 반응과 완전 반응의 합으로서 ORR를 정의했다. 이러한 방식으로 정의될 때, ORR은 단일군 연구에서 감정될 수 있는 약물의 항종양 활성의 직접적 기준이다. 가능하다면, 표준화된 기준이 반응을 확인하기 위해 사용되어야 한다. 다양한 반응 기준이 적합한 것으로 간주되었다(예를 들어, RECIST 기준) (Therasse 등., (2000) J. Natl. Cancer Inst, 92: 205-16). ORR의 유의성은 그 크기와 기간, 및 (종양을 검출 가능한 증거가 없는) 완전 반응의 비율에 의해 평가된다.

"진행까지의 시간(time to progression, TTP)" 및 "무진행 생존기간(plrogression-free survival, PFS)"은 약물 승인을 위한 주요 종점으로서의 역할을 해왔다. TTP는 무작위 추출로부터, 객관적인 종양 진행까지의 시간으로 정의된다; TTP는 사망을 포함하지 않는다. PFS는 무작위 추출로부터, 객관적인 종양 진행 또는 사망까지의 시간으로 정의된다. TTP와 비교하여, PFS가 바람직한 조절 종점이다. PFS는 사망을 포함하기 때문에 전체 생존기간과 더 잘 연관될 수 있다. PFS는 환자의 사망이 무작위로 종양 진행에 관련되어 있다고 가정한다. 그러나, 대다수의 사망이 암과 관련이 없는 상황에서는 TTP가 허용가능한 종점이 될 수 있다.

약물 승인을 지지하는 종점으로서, PFS는 종양의 성장을 반영할 수 있으며, 생존 이점의 결정 전에 평가될 수 있다. 그 결정은 이후의 요법에 의해 혼동되지 않는다. 주어진 샘플 크기에 대해, PFS에 미치는 영향의 크기는 전체 생존율에 미치는 영향보다 크다. 그러나, 존재하는 많은 다른 악성 종양에 대한 생존기간에 대한 대용으로 PFS를 공식 검증하는 것은 어려울 수 있다. 데이터는 때때로 생존기간과 PFS에 대한 영향 사이의 상관 관계의 확실한 평가를 허용하기에 불충분하다. 암 임상 시험은 종종 소규모이고, 기존 약물의 증명된 생존 이익은 일반적으로 그다지 대단하지 않다. 면허 승인을 지지하는 종점으로서의 PFS의 역할은 상이한 암 설정에 따라 달라진다. PFS의 개선이 직접적인 임상적 이익을 나타내는지, 임상적 이익에 대한 대용으로 나타나는지 여부는 이용 가능한 치료와 비교한 새로운 치료의 효과 및 위험-이익의 크기에 의존한다.

"치료 실패까지의 시간(time-to-treatment failure, TTF)"은 무작위 추출로부터, 질병의 진행, 치료 독성, 및 사망을 포함하는, 임의의 이유로 인한 치료 중단까지의 시간을 측정하는 복합 종점으로서 정의된다. TTF는 약물 승인을 위한 조절 종점으로서 권장되지 않는다. TTF는 이들 추가 변수로부터 효능을 적절하게 구별하지 않는다. 조절 종점은 독성, 환자 또는 의사의 철회, 또는 환자의 과민증(intolerance)으로부터 약물의 효능을 명확하게 구별해야 한다.

4. 제2 활성제

본원에서 제공되는 화합물은, 본원에서 제공되는 방법 및 조성물에서 하나 이상의 다른 약리학적으로 활성인 화합물("제2 활성제")과 조합될 수 있다. 일부 조합은 특정 유형의 암, 및 원하지 않은 혈관생성과 관련되거나 또는 원하지 않은 혈관생성을 특징으로 하는 특정 질병 및 상태의 치료에 상승적으로 작용하는 것으로 생각된다. 또한, 본원에서 제공되는 화합물은 특정 제2 활성제와 관련된 역효과를 완화하기 위해 작용할 수 있으며, 일부 제2 활성제는 본원에서 제공되는 화합물과 관련된 역효과를 완화하기 위해 사용될 수 있다.

하나 이상의 제2 활성 성분 또는 제2 활성제는 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물과 함께 본원에서 제공되는 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 제2 활성제는 대분자(예를 들어, 단백질) 또는 소분자(예를 들어, 합성 무기 분자, 유기 금속 분자, 또는 유기 분자)일 수 있다.

대분자 활성제의 예는 조혈 성장 인자, 사이토카인, 및 단일 클론 및 다중 클론 항체를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 대분자 활성제는 자연적으로 발생하거나 인공적으로 만들어진 단백질과 같은 생물학적 분자이다. 본 개시내용에서 특히 유용한 단백질은 시험관내 또는 생체내에서 조혈 전구 세포 및 면역학적으로 활성인 포이에틱(poietic) 세포의 생존 및/또는 증식을 자극하는 단백질을 포함한다. 다른 단백질은 시험관내 또는 생체내에서 세포의 수임 적혈구 전구세포(committed erythroid progenitors)의 분열 및 분화를 자극한다. 특정 단백질로는 IL-2 (재조합 IL-II ("rIL2") 및 카나리폭스 IL-2를 포함), IL-10, IL-12, 및 IL-18과 같은 인터류킨; 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 인터페론 알파-n1, 인터페론 알파-n3, 인터페론 베타-Ia 및 인터페론 감마-Ib와 같은 인터페론; GM-CF 및 GM-CSF; 및 EPO를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

본 개시내용의 방법 및 조성물에서 사용될 수 있는 특정 단백질은 NEUPOGEN®(Amgen, Thousand Oaks, CA)이라는 상품명으로 미국에서 판매되는 필그라스팀; LEUKINE®(Immunex, Seattle, WA)이라는 상품명으로 미국에서 판매되는 사르그라모스팀; EPGEN®(Amgen, Thousand Oaks, CA)이라는 상품명으로 미국에서 판매되는 재조합 EPO를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

GM-CSF의 재조합 및 돌연변이 형태는, 그 전문의 개시내용이 본원에 참조로 포함된 각각의 미국 특허 제5,391,485호; 제5,393,870호; 및 제5,229,496호에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. G-CSF의 재조합 및 돌연변이 형태는, 그 전문의 개시내용이 본원에 참조로 포함된 각각의 미국 특허 제4,810,643호, 제4,999,291호, 제5,528,823호, 및 제5,580,755호에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.

본 개시내용은 천연, 자연 발생, 및 재조합 단백질의 사용을 포함한다. 본 개시내용은, 생체 내에서, 그들이 기반으로 한 단백질의 약리학적 활성의 적어도 일부를 나타내는 자연 발생 단백질의 돌연변이 및 유도체(예를 들어, 변형된 형태)를 추가로 포함한다. 돌연변이의 예로는 단백질의 자연 발생 형태에서의 상응하는 잔기와 하나 이상의 아미노산 잔기가 상이한 단백질을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 용어 "돌연변이"에 의해, 단백질의 자연 발생 형태(예를 들어 당화되지 않은 형태)에는 정상적으로 존재하는 탄수화물 성분이 없는 단백질도 또한 포함된다. 유도체의 예는 페길화된 유도체, 및 융합 단백질, 예컨대, 단백질 또는 해당 단백질의 활성 부분에 IgG1 또는 IgG3를 융합하여 형성된 단백질을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다(예를 들어, Penichet, M.L. 및 Morrison, S.L., J. Immunol . Methods 248:91-101 (2001) 참조).

본원에서 제공되는 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 항체로는 단일 클론 및 다중 클론 항체가 있다. 항체의 예는 트라스투주맙(Herceptin^®), 리툭시맙(Rituxan^®), 베바시주맙(Avastatin™), 퍼투주맙(Perjeta™), 토시투모맙(Bexxar^®), 에드레콜로맙(Panorex^®), 파니투무맙 및 G250를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 또한, 본원에서 제공되는 화합물은 항-TNF-α항체와 조합되거나, 또는 그와 조합하여 사용될 수 있다.

대분자 활성제는 항암 백신의 형태로 투여될 수 있다. 예를 들어, IL-2, SCF, CXCl4 (혈소판 인자4), G-CSF, 및 GM-CSF과 같은 사이토카인을 분비, 또는 분비를 야기하는 백신이 본 개시내용의 방법, 약학 조성물, 및 키트에 사용될 수 있다(예를 들어, Emens, L.A., 등., Curr . Opinion Mol . Ther . 3(1):77-84 (2001) 참조).

또한, 본원에서 제공되는 화합물의 투여와 관련된 역효과를 완화하기 위해 소분자인 제2 활성제가 사용될 수 있다. 그러나, 일부 대분자와 같이, 이들의 대다수도 본원에서 제공되는 화합물과 함께 투여될 때(예를 들어, 전, 후, 또는 동시에) 상승적 효과를 제공할 것으로 생각된다. 소분자 제2 활성제의 예는 항암제, 항생제, 면역억제제, 및 스테로이드를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

항암제의 예로는, 아브락산®; ace-11; 아시비신; 아클라루비신; 아코다졸 염산염; 아크로닌; 아도젤레신; 알데스루킨; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 암루비신; 암사크린; 아나스트로졸; 안쓰라마이신; 아스파라기나아제; 아스퍼린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스타트; 벤조데파; 바이칼루타미드; 비산트렌 염산염; 비스나피드 디메실레이트; 비젤레신; 블레오마이신 황산염; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세마이드; 카르베티머; 카보플라틴; 카르무수틴; 카루비신 염산염; 카젤레신; 세데핀골; 셀레콕시브 (COX-2 억제제); 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 시클로포스파미드; 사이타라빈; 다카바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 염산염; 데시타빈; 덱소마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 독세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 염산염; 드롤록시펜; 드롤록시펜 구연산염; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로니틴 염산염; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 염산염; 에르불로졸; 에소루비신 염산염; 에스트라무스틴; 에스트라무스틴 인산 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 인산염; 에토프린; 파드로졸 염산염; 파자라빈; 펜레티나이드; 플록스우리딘; 플루다라빈 인산염; 플루오로우라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 염산염; 헤르셉틴; 수산화요소; 이다루비신 염산염; 이포스파미드; 일모포신; 이프로플라틴; 이리노테칸; 이리노테칸 염산염; 란레오티드 아세테이트; 라파티닙; 레트로졸; 루프로라이드 아세테이트; 리아로졸 염산염; 로메트렉솔 나트륨; 로무스틴; 로소잔트론 염산염; 마소프로콜; 마이탄신; 메클로르에타민 염산염; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메투레데파; 미틴도미드; 미토카르신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미토잔트론 염산염; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시수란; 파클리탁셀; 페가스파르가아제; 펠리오마이신; 펜타무스틴; 페플로마이신 황산염; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피로잔트론 염산염; 플라카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니무스틴; 프로카바진 염산염; 푸로마이신; 푸로마이신 염산염; 피라조푸린; 리보프린; 로미뎁신; 사핑골; 사핑골 염산염; 세무스틴; 심트라젠; 스파르포세이트 나트륨; 스파르소마이신; 스피로게르마늄 염산염; 스피로무스틴; 스피로플라틴; PDA-001과 같은 줄기 세포 치료제; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 술로페누르; 탈리소마이신; 테코갈란 나트륨; 탁소텔; 테가푸르; 텔로잔트론 염산염; 테모포르핀; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸린; 티라파자민; 토레미펜 구연산염; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 인산염; 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠론산염; 트리프토렐린; 투불로졸 염산염; 우라실 머스타드; 우레데파; 바프레오타이드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 황산염; 빈크리스틴 황산염; 빈데신; 빈데신 황산염; 비네피딘 황산염; 빈글리시네이트 황산염; 빈레우로신 황산염; 비노렐빈 주석산염; 빈로시딘 황산염; 빈졸리딘 황산염; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 및 조루비신 염산염이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.

다른 항암 약물로는 20-에피-1, 25 디하이드록시비타민 D3; 5-에티닐우라실; 아비라테론; 아클라루비신; 아실풀벤; 아데시페놀; 아도젤레신; 알데스루킨; ALL-TK 길항제; 알트레타민; 암바무스틴; 아미독스; 아미포스틴; 아미노레불린산; 암루비신; 암사크린; 아나그레라이드; 아나스트로졸; 안드로그라포라이드; 혈관생성 억제제; 길항제 D; 길항제 G; 안타렐릭스; 항-등쪽화 형태형성 단백질-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1); 항안드로겐, 전립선 암좀; 항에스트로겐; 항네오플라스톤; 안티센스 올리고뉴클레오티드; 아피디콜린 글리시네이트; 세포 사멸 유전자 조절제; 세포 사멸 조절제; 애푸린산; ara-CDP-DL-PTBA; 아르기닌 탈아미노 효소; 아술라크린; 아타메스탄; 아트리무스틴; 악시나스타틴 1; 악시나스타틴2; 악시나스타틴3; 아자세트론; 아자톡신; 아자티로신; 바카틴 III 유도체; 발라놀; 바티마스타트; BCR/ABL 길항제; 벤조클로린; 벤조일스타우로스포린; 베타 락탐 유도체; 베타-알레틴; 베타클라마이신B; 베툴린산; b-FGF 억제제; 바이칼루타미드; 비산트렌; 비스아지리디닐스퍼민; 비스나피드; 비스트라텐 A; 비젤레신; 브레플레이트; 브로피리민; 부도티탄; 부티오닌 설폭시민; 칼시포트리올; 칼포스틴 C; 캄프토테신 유도체; 카페시타빈; 카르복사미드-아미노-트리아졸; 카르복시아미도트리아졸; CaRest M3; CARN 700; 연골 유래 억제제; 카르젤레신; 카세인 키나아제 억제제(ICOS); 카스타노스퍼민; 세크로핀 B; 세트로렐릭스; 클로를린; 클로로퀴녹살린 술폰아미드; 시카프로스트; 시스-포르피린; 클라드리빈; 클로미펜 유사체; 클로트리마졸; 콜리스마이신 A; 콜리스마이신 B; 콤브레타스타틴 A4; 콤브레타스타틴 유사체; 코나게닌; 크람베스시딘 816; 크리스나톨; 크립토피신 8; 크립토피신 A 유도체; 쿠라신 A; 시클로펜탄트라퀴논; 시클로플라탐; 시페마이신; 시타라빈 옥포스페이트; 세포 용해 인자; 시토스타틴; 다크릭시맙; 데시타빈; 디하이드로디뎀닌 B; 데스로레린; 덱사메타손; 덱시포스파미드; 덱스라족산; 덱스베라파밀; 디아지쿠온; 디뎀닌 B; 디독스; 디에틸노르스퍼민; 디하이드로-5-아지시티딘; 디하이드로탁솔, 9-; 디옥사마이신; 디페닐 스피로무스틴; 독세탁셀; 도코사놀; 돌라세트론; 독시플루리딘; 독소루비신; 드롤록시펜; 드로나비놀; 두오카르마이신 SA; 엡셀렌; 에코무스틴; 에델포신; 에드레콜로맙; 에플로니틴; 엘레멘; 에미테푸르; 에피루비신; 에프리스테라이드; 에스트라무스틴 유사체; 에스트로겐 작용제; 에스트로겐 길항제; 에타니다졸; 에토포시드 인산염; 엑세메스탄; 파드로졸; 파자라빈; 펜레티니드; 필그라스팀; 피나스테리드; 플라보피리돌; 플레젤라스틴; 플루아스테론; 플루다라빈; 플루오로다우노루니신 염산염; 포르페니멕스; 포르메스탄; 포스트리에신; 포테무스틴; 가돌리늄 텍사피린; 갈륨 질산염; 갈로시타빈; 가니렐릭스; 젤라티나아제 억제제; 젬시타빈; 글루타티온 억제제; 헵술팜; 헤레굴린; 헥사메틸렌 비스아세타미드; 히페리신; 이반드론산; 이다루비신; 이독시펜; 이드라만톤; 일모포신; 일로마스타트; 이마티닙 (예를 들어, GLEEVEC^®), 이미퀴모드; 면역 자극 펩티드; 인슐린 유사 성장 인자-1 수용체 억제제; 인터페론 작용제; 인터페론; 인터루킨; 이오벤구안; 이오도독소루비신; 이포메아놀, 4-; 이로플락트; 이르소글라딘; 이소벤가졸; 이소호모할리콘드린 B; 이타세트론; 자스플라키놀라이드; 카할라라이드 F; 라멜라린-N 트리아세테이트; 란레오타이드; 레이나마이신; 레노그라스팀; 렌티난 황산염; 렙톨스타틴; 레트로졸; 백혈병 억제 인자; 백혈구 알파 인터페론; 레우프로라이드+에스트로겐+프로게스테론; 레우프로렐린; 레바미솔; 리아로졸; 선형 폴리아민 유사체; 친유성 이당류 펩티드; 친유성 플라티늄 화합물; 리소클린아미드 7; 로바플라틴; 롬브리신; 로메트렉솔; 로니다민; 로속산트론; 록소리빈; 루르토테칸; 루테튬 텍사피린; 리소필린; 용해 펩티드; 마이탄신; 만노스타틴 A; 마리마스타트; 마소프로콜; 마스핀; 마트릴리신 억제제; 매트릭스 메탈로프로테이나아제 억제제; 메노가릴; 메르바론; 메테렐린; 메티오니나아제; 메토클로프라미드; MIF 억제제; 미페프리스톤; 밀테포신; 미리모스팀; 미토구아존; 미토락톨; 미토마이신 유사체; 미토나피드; 미토톡신 섬유모세포 성장 인자-사포린; 미토잔트론; 모파로텐; 몰그라모스팀; 에르비툭스, 인간 융모성 성선자극호르몬; 모노포스포릴 지질 A+미오박테리아 세포벽 sk; 모피다몰; 머스타드 항암제; 미카퍼옥사이드 B; 마이코박테리아 세포벽 추출물; 미리아포론; N-아세틸디날린; N-치환 벤즈아미드; 나파렐린; 나그레스팁; 날록손+펜타조신; 나파빈; 나프테르핀; 나르토그라스팀; 네다플라틴; 네모루비신; 네리드론산; 닐루타미드; 니사마이신; 산화질소 조절제; 니트록시드 산화방지제; 니트룰린; O⁶-벤질구아닌; 옥트레오타이드; 오키세논; 올리고뉴클레오티드; 오나프리스톤; 온단세트론; 온단세트론; 오라신; 경구용 사이토카인 유도 인자; 오르마플라틴; 오사테론; 옥살리플라틴; 옥사우노마이신; 파클리탁셀; 파클리탁셀 유사체; 파클리탁셀 유도체; 팔라우아민; 팔미토일리족신; 파미드론산; 파낙시트리올; 파노미펜; 파라박틴; 파젤립틴; 페가스파가제; 펠데신; 펜토산 폴리설페이트 나트륨; 펜토스타틴; 펜트로졸; 퍼플루브론; 퍼포스파미드; 페릴릴 알코올; 페나지노마이신; 페닐아세테이트; 포스파타아제 억제제; 피시바닐; 필로카르핀 염산염; 피라루비신; 피리트렉심; 플라세틴 A; 플라세틴 B; 플라스미노겐 활성화 인자 억제제; 플라티늄 복합체; 플라티늄 화합물; 플라티늄-트리아민 복합체; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니손; 프로필 비스-아크리돈; 프로스타글란딘 J2; 프로테아좀 억제제; 단백질A-기재 면역 조절제; 단백질 키나아제 C 억제제; 단백질 키나아제 C 억제제, 마이크로알갈; 단백질 티로신 포스파타아제 억제제; 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라아제 억제제; 퍼퓨린; 피라졸로아크리딘; 피리독실화된 헤모글로빈 폴리옥시에틸렌 콘쥬게이트; raf 길항제; 랄티트렉세드; 라모세트론; ras 파르네실 단백질 전이 효소 억제제; ras 억제제; ras-GAP 억제제; 디메틸화 레텔립틴; 레늄 Re 186 에티드로네이트; 리족신; 리보자임; RII 레틴아미드; 로히투킨; 로무르티드; 로퀴니멕스; 루비기논 B1; 루복실; 사핑골; 사인토핀; SarCNU; 사르코피톨 A; 사르그라모스팀; Sdi 1 모방체; 세무스틴; 노화 유도된 억제제 1; 센스 올리고뉴클레오티드; 신호 전달 억제제; 시조피란; 소부족산; 나트륨 보로캅테이트; 나트륨 페닐아세테이트; 솔베롤; 소마토메딘 결합 단백질; 소네르민; 스파르포스산; 스피카마이신 D; 스피로무스틴; 스플레노펜틴; 스폰기스타틴 1; 스쿠알라민; 스티피아미드; 스트로멜리신 억제제; 술피노신; 과활성 혈관 작용성 장 펩티드 길항제; 수라디스타; 수라민; 스와인소닌; 탈리무스틴; 타목시펜 메티오디드; 타우로무스틴; 타자로텐; 테코갈란 나트륨; 테가푸르; 텔루라피릴륨; 텔로머라아제 억제제; 테모포르핀; 테니포사이드; 테트라클로로데카옥시드; 테트라조민; 탈리블라스틴; 티오코랄린; 트롬보포이에틴; 트롬보포이에틴 모방체; 티말파신; 티모포이에틴 수용체 작용제; 티모트리난; 갑상선 자극 호르몬; 주석 에틸 에티오푸르푸린; 티라파자민; 티타노센 이염화물; 톱센틴; 토레미펜; 번역 억제제; 트레티노인; 트리아세틸우리딘; 트리시리빈; 트리메트렉세이트; 트립토렐린; 트로피세트론; 투로스테리드; 티로신 키나아제 억제제; 티르포스틴; UBC 억제제; 우베니멕스; 비뇨생식동-유도 성장 억제 인자; 우로키나아제 수용체 길항제; 바프레오티드; 바리올린 B; 벨라레솔; 베라민; 베르딘; 베르테포르핀; 비노렐빈; 빈잘틴; 비탁신; 보로졸; 자노테론; 제니플라틴; 질라스코르브; 및 지노스타틴 스티말라머가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.

일부 실시양태에서, 추가적 활성제는 오블리메르센(GENASENSE^®), 레미케이드, 독세탁셀, 셀레콕시브, 멜팔란, 덱사메타솔(DECADRON^®), 스테로이드, 젬시타빈, 시스플라티늄, 테모졸로미드, 에토포시드, 시클로포스파미드, 테모다르, 카보플라틴, 프로카바진, 글리아델, 타목시펜, 토포테칸, 메토트렉세이트, ARISA^®, 탁솔, 탁소텔, 플루오로우라실, 류코보린, 이리노테칸, 젤로다, CPT-11, 인터페론 알파, 페길화된 인터페론 알파(예를 들어, PEG INTRON-A), 카페시타빈, 시스플라틴, 티오테파, 플루다라빈, 카보플라틴, 리포솜 다우노루비신, 사이타라빈, 독세탁솔, 파클리탁셀, 빈블라스틴, IL-2, GM-CSF, 다카바진, 비노렐빈, 졸레드론산, 팔미트로네이트, 비악신, 부설판, 프레드니손, 비스포스포네이트, 삼산화 비소, 빈크리스틴, 독소루비신(DOXIL^®), 파클리탁셀, 간시클로비르, 아드리아마이신, 에스트라무스틴 인산 나트륨(EMCYT^®), 설린닥, 및 에토포시드로 구성된 그룹 중에서 선택된다.

다른 실시양태에서, 추가적 활성제는 탁산(예를 들어, 파클리탁셀(Taxol®), 독세탁셀(Taxotere®), 단백-결합 파클리탁셀(Abraxane®), 시티딘 유사체(예를 들어, 5-아자시티딘(Vidaza®), 카페시타빈(Xeloda®), 젬시타빈(Gemzar®)), HDAC 억제제(예를 들어, 로미뎁신, 보리노스타트, 판노비노스타트, 발프로 산, 벨리노스타트, 엔티노스타트), HER2 억제제(예를 들어, 트라스투주맙(Herceptin®), 트라스투주맙 엠타신(T-DM1), 라파티닙(Tykerb®), 베바시주맙(아바스타틴®), 퍼투주맙(Perjeta®)), 독소루비신(Adriamycin®), 에베로리무스(Afinitor®), 아나스트로졸(Arimidex®), 엑스메스탄(Aromacin®), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 에리불린(Halaven®), 플루옥시메스테론(Halotestin®), 풀베스트란트(Faslodex®), 레트로졸(Femara®), 타목시펜(Nolvadex®), 빈블라스틴(Velban®), 및 메토트렉세이트(Trexall®)로 구성된 그룹 중에서 선택된다.

5. 바이오마커

유방암 치료법의 유효성을 확인하기 위해 바이오마커로서 mRNA 또는 단백질의 사용에 관련된 방법이 본원에서 제공된다. mRNA 또는 단백질 수준은 특정 제제가 유방암 치료에 성공적인지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다.

생물학적 마커 또는 "바이오마커"는 그것의 검출이 특정 생물학적 상태, 예컨대, 예를 들어, 암의 존재를 나타내는 물질이다. 일부 실시양태에서, 바이오마커는 개별적으로 결정될 수도 있고, 또는 여러개의 바이오마커가 동시에 측정될 수도 있다.

일부 실시양태에서, "바이오마커"는 질병의 위험 또는 진행, 또는 주어진 치료에 대한 질병의 감수성과 관련될 수 있는 mRNA 발현 수준의 변화를 나타낸다. 일부 실시양테에서, 바이오마커는 mRNA 또는 cDNA와 같은 핵산이다.

추가적 실시양태에서, "바이오마커"는 치료에 대한 위험, 감수성, 또는 질병의 진행과 관련될 수 있는 폴리펩티드 또는 단백질 발현 수준의 변화를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 바이오마커는 폴리펩티드나 단백질, 또는 이의 단편일 수 있다. 특정 단백질의 상대적 수준은 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 면역 블롯, 효소-결합 면역 흡착 분석법(ELISA)과 같은 항체 기반의 방법, 또는 다른 방법들이 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 바이오마커는 세레브론("CRBN"), 예를 들어, Aiolos(IKZF3) 또는 Ikaros(IKZF1)와 연관된 단백질이다. 이 단백질들은 2012년 6월 29일 출원된 미국 임시특허출원 제61/666,703호에 기재되어 있으며, 그 전문의 개시내용은 참조로 본원에 포함된다.

(ⅰ) 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체 중에서 선택되는 화합물로의 치료에 감수성인 국소 진행성 유방암 환자의 식별 단계; 및

(ⅱ) 단계(ⅰ)에서 선택된 화합물의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 단계

를 포함하는 국소 진행성 유방암을 치료 또는 관리하는 방법이 본원에서 제공된다. 일 실시양태에서, 치료에 감수성인 국소 진행성 유방암 환자의 식별은 암 내부의 CRBN, Aiolos(IKZF3) 또는 Ikaros(KIZF1) 발현의 발현 수준을 검출하는 것을 포함한다.

다른 실시양태에서, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 투여에 대한 임상적 반응의 예측, 임상적 반응의 모니터링, 또는 환자 순응도의 모니터링을 할 목적으로 암 내부의 CRBN 발현 수준, 또는 Aiolos(IKZF3) 또는 Ikaros(IKZF1) 발현 수준에 기초하여 국소 진행성 유방암 환자군을 선택하는 방법이 본원에서 제공된다.

또한, Aiolos(IKZF3) 또는 Ikaros(IKZF1) 유전자를 포함하지만, 이에 한정되지 않는, CRBN 유전자 내의 돌연변이의 존재 또는 출현에 기초하여, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 및 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온 치료법에 내성인 국소 진행성 유방암 환자를 식별 또는 모니터링 하는 방법이 본원에서 제공된다.

6. 치료, 예방 및/또는 관리 방법

일 실시양태에서, 유방암의 치료, 예방 및/또는 관리 방법이 본원에서 제공되며, 이 방법은 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

또한, 이전에 유방암 치료를 받았지만 표준 치료법에 반응하지 않은 환자뿐만 아니라, 이전에 유방암을 치료받은 적 없는 환자들을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 일부 질병 또는 장애가 특정 연령군에서 더 일반적임에도 불구하고, 환자의 연령에 상관없이 환자를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 다른 실시양태에서, 문제가 되고 있는 질병 또는 장애를 치료하려는 시도로 수술을 받았던 환자뿐만 아니라, 수술을 받은 적이 없는 환자를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 유방암 환자는 불균질한 임상적 징후 및 다양한 임상 결과를 갖기 때문에, 환자에게 주어지는 치료는 환자의 예후에 따라 달라질 수 있다. 숙련된 임상의는 개별 암 환자를 치료하기 위해 효과적으로 사용될 수 있는 특정 보조제, 수술의 유형, 및 비-약물 기반 표준 요법의 유형을 과도한 실험 없이 쉽게 결정할 수 있을 것이다.

특정 실시양태에서, 유방암은 고형 종양이다. 특정 실시양태에서, 고형 종양은 전이성이다. 특정 실시양태에서, 고형 종양은 약물-내성이다.

특정 실시 양태에서, 화합물의 치료적 또는 예방적 유효량은 약 0.005 내지 약 1,000 mg/일, 약 0.01 내지 약 500 mg/일, 약 0.01 내지 약 250 mg/일, 약 0.01 내지 약 100 mg/일, 약 0.1 내지 약 100 mg/일, 약 0.5 내지 약 100 mg/일, 약 1 내지 약 100 mg/일, 약 0.01 내지 약 50 mg/일, 약 0.1 내지 약 50 mg/일, 약 0.5 내지 약 50 mg/일, 약 1 내지 약 50 mg/일, 약 0.02 내지 약 25 mg/일, 또는 약 0.05 내지 약 10 mg/일이다.

특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 유효량은 약 0.005 내지 약 1,000 mg/일, 약 0.01 내지 약 500 mg/일, 약 0.01 내지 약 250 mg/일, 약 0.01 내지 약 100 mg/일, 약 0.1 내지 약 100 mg/일, 약 0.5 내지 약 100 mg/일, 약 1 내지 약 100 mg/일, 약 0.01 내지 약 50 mg/일, 약 0.1 내지 약 50 mg/일, 약 0.5 내지 약 50 mg/일, 약 1 내지 약 50 mg/일, 약 0.02 내지 약 25 mg/일, 또는 약 0.05 내지 약 10 mg/격일이다.

특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 유효량은 1일 약 1, 약 2, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 40, 약 45, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 또는 약 150 mg이다.

일 실시양태에서, 본원에 기재된 상태에 대한, 본원에서 제공되는 화합물의 권장 1일 투여 범위는 1일 약 0.5 내지 약 50 mg의 범위 이내이며, 바람직하게는, 1일 1회 단일투여, 또는 1일 동안 분할 투여한다. 일부 실시양태에서, 투여량은 1일 약 1 내지 약 50 mg의 범위이다. 다른 실시양태에서, 투여량은 1일 약 0.5 내지 약 5 mg의 범위이다. 구체적인 1일 투여량은 1일 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50 mg을 포함한다.

특정 실시양태에서, 권장 초회 투여량은 1일 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 또는 50 mg 일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 권장 초회 투여량은 1일 0.5, 1, 2, 3, 4, 또는 5 mg 일 수 있다. 투여량은 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 및 50 mg/일로 증가될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화합물은 유방암 환자에게 약 25 mg/일의 양으로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화합물은 유방암 환자에게 약 10 mg/일의 양으로 투여될 수 있다.

특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 유효량은 약 0.001 내지 약 100 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 50 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 25 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 10 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 9 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 8 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 7 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 6 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 5 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 4 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 3 mg/kg/일, 약 0.01 내지 약 2 mg/kg/일, 또는 약 0.01 내지 약 1 mg/kg/일이다.

또한, 투여 용량은 mg/kg/일 이외의 단위로도 표현될 수 있다. 예를 들어, 비경구 투여를 위한 투여량은 mg/m²/일로 표현될 수 있다. 대상체의 키 또는 몸무게, 또는 둘 다가 주어지면, 용량을 mg/kg/일에서 mg/m²/일로 변환하는 것은 이 분야 통상의 기술자라면 바로 알 수 있다(www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm 참조). 예를 들어, 65 kg인 사람에 대한 1 mg/kg/일의 용량은 대략 38 mg/m²/일과 동일하다.

특정 실시양태에서, 투여되는 화합물의 양은 장상 상태에서의 화합물의 혈장농도를 약 0.001 내지 약 500 μM, 약 0.002 내지 약 200 μM, 약 0.005 내지 약 100 μM, 약 0.01 내지 약 50 μM, 또는 약 1 내지 약 50 μM, 약 0.02 내지 약 25 μM, 약 0.05 내지 약 20 μM, 약 0.1 내지 약 20 μM, 약 0.5 내지 약 20 μM, 또는 약 1 내지 약 20 μM의 범위로 제공하기에 충분하다.

다른 실시양태에서, 투여되는 화합물의 양은 정상 상태에서의 화합물의 혈장 농도를 약 5 내지 약 100 nM, 약 5 내지 약 50 nM, 약 10 내지 약 100 nM 약 10 내지 약 50 nM, 또는 약 50 내지 약 100 nM의 범위로 제공하기에 충분하다.

본원에서 사용되는 용어 "정상 상태에서의 혈장 농도"는 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 투여 기간 이후에 도달되는 농도이다. 일단 정상 상태에 도달되면, 화합물의 혈장 농도의 시간 의존성 곡선 상에 작은 피크 및 골(trough)이 존재한다.

특정 실시양태에서, 투여되는 화합물의 양은 화합물의 최대 혈장 농도(피크 농도)를 약 0.001 내지 약 500 μM, 약 0.002 내지 약 200 μM, 약 0.005 내지 약 100 μM, 약 0.01 내지 약 50 μM, 약 1 내지 약 50 μM, 약 0.02 내지 약 25 μM, 약 0.05 내지 약 20 μM, 약 0.1 내지 약 20 μM, 약 0.5 내지 약 20 μM, 또는 약 1 내지 약 20 μM의 범위로 제공하기에 충분하다.

특정 실시양태에서, 투여되는 화합물의 양은 화합물의 최소 혈장 농도(골 농도)를 약 0.001 내지 약 500 μM, 약 0.002 내지 약 200 μM, 약 0.005 내지 약 100 μM, 약 0.01 내지 약 50 μM, 약 1 내지 약 50 μM, 약 0.01 내지 약 25 μM, 약 0.01 내지 약 20 μM, 약 0.02 내지 약 20 μM, 약 0.02 내지 약 20 μM, 또는 약 0.01 내지 약 20 μM의 범위로 제공하기에 충분하다.

특정 실시양태에서, 투여되는 화합물의 양은 화합물의 곡선 아래 면적(area under the curve, AUC)을 약 100 내지 약 100,000 ng*hr/mL, 약 1,000 내지 약 50,000 ng*hr/mL, 약 5,000 내지 약 25,000 ng*hr/mL, 또는 약 5,000 내지 약 10,000 ng*hr/mL의 범위로 제공하기에 충분하다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 방법 중 하나로 치료될 환자는, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물의 투여 이전에 항암 요법으로 치료받지 않았다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 방법 중 하나로 치료될 환자는, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물의 투여 이전에 항암 요법으로 치료받았다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 방법 중 하나로 치료될 환자는 항암 요법에 대한 약물 내성이 생겼다.

일부 질병 또는 장애가 특정 연령군에서 더 일반적임에도 불구하고, 본원에서 제공되는 방법은 환자의 연령에 상관없이 환자를 치료하는 것을 포함한다. 추가로, 문제가 되는 질병 또는 상태를 치료하기 위한 시도로 수술을 받았던 환자뿐만 아니라, 수술을 받은 적이 없는 환자를 치료하기 위한 방법이 본원에서 제공된다. 암에 걸린 대상체는 불균질한 임상적 징후 및 다양한 임상 결과를 갖기 때문에, 특정 대상체에게 주어지는 치료는 대상체의 예후에 따라 달라질 수 있다. 숙련된 임상의는 암에 걸린 각각의 대상체를 치료하기 위해 효과적으로 사용될 수 있는 특정 보조제, 수술의 유형, 및 비-약물 기반 표준 요법의 유형을 과도한 실험 없이 쉽게 결정할 수 있을 것이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 경구, 비경구(예를 들어, 근육내, 복강내, 정맥내, CIV, 낭내(intracisternal) 주사 또는 투입, 피하 주사, 또는 이식), 흡입, 비강, 질, 직장, 설하, 또는 국소(예를 들어, 경피 또는 국부)의 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는, 단독으로 또는 각각의 투여 경로에 적합한 약학적으로 허용되는 부형제, 담체, 보조제 및 비히클과 함께 적절한 투여량 단위로 제형화될 수 있다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 경구 투여된다. 다른 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 비경구 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 정맥내로 투여된다.

본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는, 예를 들어, 한번의 볼루스 주사(bolus injection), 또는 경구 정제 또는 알약과 같은 단일 용량으로; 또는 예를 들어, 시간에 걸친 지속적 주입 또는 시간에 걸친 분할된 볼루스 용량(bolus dose)과 같이 시간에 걸쳐 전달될 수 있다. 화합물은 필요하다면, 예를 들어, 환자가 안정 병변(stable disease) 또는 관해를 경험하거나, 환자가 질병 진행 또는 허용되지 않는 독성을 경험할 때까지 반복적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 고형 종양에 대한 안정 병변은 일반적으로 측정가능한 병변의 수직 직경이 마지막 측정으로부터 25% 이상 증가하지 않은 경우를 의미한다(고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST) 가이드라인, Journal of the National Cancer Institute 92(3): 205-216 (2000)). 안정 병변 또는 이의 부족은 환자 증상 평가, 신체 검사, X-ray, CAT, PET, 또는 MRI 스캔을 사용하여 영상화된 종양의 시각화, 및 일반적으로 허용되는 평가 양상과 같이 당업계에 알려져 있는 방법에 의해 결정된다.

본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 1일 1회(QD) 투여되거나, 1일 2회(BID), 1일 3회(TID), 및 1일 4회(QID)와 같이 1일 다회 투여량으로 분할될 수 있다. 또한, 투여는 지속적(즉, 연일 동안 매일, 또는 매일), 간헐적, 예를 들어 순환적(즉, 수일, 수주, 또는 수개월의 휴약을 포함)일 수 있다. 본원에서 사용되는, 용어 "매일"은 치료 화합물, 예컨대 본원에서 제공되는 화합물을, 예를 들어 일정 기간 동안, 하루에 1회 이상 투여되는 것을 의미하는 것이다. 용어 "지속적"은 치료 화합물, 예컨대 본원에서 제공되는 화합물이 최소 10일 내지 52주의 연속된 기간 동안 매일 투여되는 것을 의미하는 것이다. 본원에서 사용되는 용어 "간헐적" 또는 "간헐적으로"는 규칙적 또는 불규칙적 간격으로 중지 및 개시하는 것을 의미하는 것이다. 예를 들어, 본원에서 제공되는 화합물의 간헐적 투여는 주당 1일 내지 6일 동안의 투여, 순환적 투여(예를 들어, 연속 2주 내지 8주 동안 매일 투여한 후, 최대 1주 동안 어떠한 투여도 없는 휴식 기간), 또는 격일 투여이다. 본원에서 사용되는 용어 "순환"은 치료 화합물이 매일 또는 연속적으로 투여되지만, 휴식기가 있는 것을 의미하는 것이다.

일부 실시양태에서, 투여 빈도는 약 매일 투여 내지 약 한달에 한번 투여의 범위이다. 특정 실시양태에서, 투여는 하루에 한번, 하루에 두번, 하루에 세번, 하루에 네번, 격일에 한번, 일주일에 두번, 매주 한번, 2주에 한번, 3주에 한번, 또는 4주에 한번이다. 일 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 하루에 한번 투여된다. 다른 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 하루에 두번 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 하루에 세번 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 하루에 네번 투여된다.

특정 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 1일 내지 6달까지, 1주 내지 3달까지, 1주 내지 4주까지, 1주 내지 3주까지, 또는 1주 내지 2주까지 하루에 한번 투여된다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물은 1주, 2주, 3주, 또는 4주 동안 하루에 한번 투여된다. 일 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 1주 동안 하루에 한번 투여된다. 다른 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 2주 동안 하루에 한번 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 3주 동안 하루에 한번 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 4주 동안 하루에 한번 투여된다.

6.1 제2 활성제와의 조합 요법

본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 본원에 기재된 암의 치료 및/또는 예방에 유용한 다른 치료제와 조합될 수 있거나, 조합하여 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "조합하여"는 1종 초과의 요법(예를 들어, 하나 이상의 예방제 및/또는 치료제)의 사용을 포함한다. 그러나, 용어 "조합하여"의 사용은 요법(예를 들어, 예방제 및/또는 치료제)이 질병 또는 장애를 가진 환자에게 투여되는 순서를 제한하지는 않는다. 제1 요법(예방제 또는 치료제, 예를 들어, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체)는 대상체에게 제2 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)을 투여하기 이전에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전), 투여와 동시에, 또는 투여 이후에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후) 투여될 수 있다. 또한, 삼중 요법이 본원에서 고려된다.

환자에게 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물 및 하나 이상의 제2 활성제를 투여하는 것은 동일하거나 다른 투여 경로에 의해 동시에 또는 연속적으로 일어날 수 있다. 특정 활성제를 위해 사용되는 특정 투여 경로의 적합성은 활성제 자체(예를 들면, 혈류로 들어가기 전에 분해되지 않고 경구 투여될 수 있는지 여부) 및 치료되는 암에 따라 좌우될 것이다.

본원에서 제공되는 화합물의 투여 경로는 제2 요법의 투여 경로와 독립적이다. 일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 경구 투여된다. 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 정맥내로 투여된다. 따라서, 이들 실시양태에 따라서, 본원에서 제공되는 화합물은 경구 또는 정맥내로 투여되고, 제2 요법은 경구, 비경구, 복강내, 정맥내, 동맥내, 경피, 설하, 근육내, 직장, 구강내, 비강내, 리포솜, 호흡, 질 동맥, 안구내, 카테터 또는 스텐트에 의한 국소 전달, 피하, 지방질내, 관절내, 척수내로, 또는 느린 방출 제형으로 투여될 수 있다. 일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물 및 제2 요법은 동일한 투여 방법에 의해 경구적으로, 또는 IV에 의해 투여된다. 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 하나의 투여 방법, 예를 들어, IV에 의해 투여되는 반면에, 제2 제제(항암제)는 다른 투여 방법, 예를 들어, 경구적으로 투여된다.

일 실시양태에서, 제2 활성제는 약 1 내지 약 1000 mg, 약 5 내지 약500 mg, 약 10 내지 약 350 mg, 약 50 내지 약 200 mg의 양으로 하루에 한번 또는 두번 정맥내 또는 피하로 투여된다. 제2 활성제의 특정량은 사용되는 특정 제제, 치료 또는 관리되고 있는 질병의 유형, 질병의 심각성 및 단계, 및 제1 활성제 및 환자에게 동시에 투여되는 임의의 추가 활성제의 양에 따라 달라질 것이다. 특정 실시양태에서, 제2 활성제는 오블리메르센(GENASENSE^®), GM-CSF, G-CSF, SCF, EPO, 탁소텔, 이리노테칸, 다카바진, 트랜스레티노산, 토포테칸, 펜톡시필린, 시프로플록사신, 덱사메타손, 빈크리스틴, 독소루비신, COX-2 억제제, IL2, IL8, IL18, IFN, Ara-C, 비노렐빈, 또는 이들의 조합이다.

특정 실시양태에서, GM-CSF, G-CSF, SCF 또는 EPO는 약 1 내지 약 750 mg/m²/일, 약 25 내지 약 500 mg/m²/일, 약 50 내지 약 250 mg/m²/일, 또는 약 50 내지 약 200 mg/m²/일 범위의 양이 4주 또는 6주 주기로 약 5일 동안 피하로 투여된다. 특정 실시양태에서, GM-CSF는 약 60 내지 약 500 mcg/m² 의 양이 2시간에 걸쳐서 정맥내로, 또는 약 5 내지 약 12 mcg/m²/일의 양이 피하로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, G-CSF는 초기에 약 1 mcg/kg/일의 양이 피하로 투여될 수 있으며, 총 과립구 수의 상승에 따라 조절될 수 있다. G-CSF의 유지 용량은 약 300(작은 환자의 경우) 또는 480 mcg의 양이 피하로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, EPO는 일주일에 세번 10,000 Unit의 양이 피하로 투여될 수 있다.

또한, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 환자(예를 들어, 인간)에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 안전하고 효과적으로 투여될 수 있는 항암 약물 또는 항암제의 투여량을 증가시키는 방법이 본원에 포함된다. 이 방법에 의한 이익을 받을 수 있는 환자는 유방의 특정 암을 치료하는 항암 약물과 관련된 역효과로 고통받을 가능성이 있는 환자들이다. 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 투여는, 항암 약물의 양을 제한해야 할 정도의 심각성을 갖는 역효과를 완화 또는 감소시킨다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 환자에게 항암 약물을 투여하는 것과 관련 있는 역효과의 발생 전에, 발생 도중에, 또는 발생 후에 0.1 내지 약 150 mg, 약 1 내지 약 50 mg, 또는 약 2 내지 약 25 mg의 범위의 양으로, 매일 경구 투여된다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는, 호중구 감소증 또는 혈소판 감소증과 같은, 그러나 이에 한정되지는 않는, 항암 약물과 관련된 역효과를 방지하기 위해 헤파린, 아스피린, 쿠마딘, 또는 G-CSF와 같은 특정 제제와 조합하여 투여된다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 항암 약물, 항염증제, 항히스타민제, 항생제, 및 스테로이드를 포함하나 이에 한정되지는 않는 추가적 활성 성분과 조합하여 원하지 않은 혈관생성과 관련되거나 혈관생성을 특징으로 하는 질병 및 장애를 가진 환자에게 투여된다.

다른 실시양태에서, 수술, 면역요법, 생물학적 요법, 방사선 요법, 또는 암을 치료, 예방 또는 관리하기 위해 현재 사용되는 다른 비-약물 기반 요법을 포함하나 이에 한정되지는 않는 통상적인 요법과 함께(예를 들어, 그 전에, 그 동안, 또는 그 후에) 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료, 예방 및/또는 관리 방법이 본원에 포함된다. 본원에서 제공되는 화합물과 통상적인 요법을 조합한 사용은 일부 환자에게 예상외로 효과적인 특별한 치료 요법을 제공할 수 있다. 이론에 의해 제한받지 않고, 본원에서 제공되는 화합물은 통상적인 요법과 함께 제공될 때 부가 또는 상승 효과를 제공할 수 있다고 생각된다.

본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이, 수술, 화학요법, 방사선 요법, 호르몬 요법, 생물학적 요법 및 면역 요법을 포함하나 이에 한정되지는 않는 통상적인 치료와 관련된 역효과 또는 원하지 않는 효과를 감소, 치료 및/또는 예방하는 방법이 본원에 포함된다. 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체, 및 다른 활성 성분은 통상적인 요법과 관련된 역효과가 발생하기 전, 발생하는 동안, 또는 발생한 후에 투여될 수 있다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 단독으로, 또는 통상적인 요법을 사용하기 전, 사용하는 동안, 또는 사용한 후에 단독으로 또는 본원에 개시된 제2 활성제(예를 들어, 섹션 4.3 참조)와 조합되어 약 0.1 내지 약 150 mg, 약 1 내지 약 25 mg, 또는 약 2 내지 약 10 mg 범위의 양으로 매일 경구 투여될 수 있다.

6.2 순환 요법

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 예방제 또는 치료제는 환자에게 순환적으로 투여된다. 순환 요법은 일정 기간 동안 활성제를 투여한 후에, 얼마간 휴약기를 갖고, 다시 이러한 순차적 투여를 반복하는 것을 포함한다. 순환 요법은 하나 이상의 요법에 대한 내성의 발생을 막을 수 있고, 상기 요법 중 하나의 부작용을 피하거나 줄여주고, 및/또는 치료의 효능을 향상시킬 수 있다.

따라서, 특정 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물은 4주 내지 6주 주기 동안 단일 용량 또는 분할 용량으로 매일 투여되고, 1주 내지 2주의 휴약기를 갖는다. 순환 방법은 투여 주기의 빈도, 횟수, 및 기간의 증가를 추가로 허용한다. 따라서, 특정 실시양태에서 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 단독 투여시의 전형적인 주기보다 더 많은 주기 동안 투여되는 것이 본원에 포함된다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체는 제2 활성 성분이 또한 투여되고 있지 않은 환자에게서 용량-제한 독성을 전형적으로 야기하는 주기보다 더 많은 횟수의 주기 동안 투여된다.

일 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물은 약 0.1 내지 약 150 mg/d의 용량으로 3주 내지 4주 동안 매일 지속적으로 투여되고, 이어서 1주 또는 2주의 휴약기를 갖는다.

다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물 및 제2 활성 성분은, 본원에서 제공되는 화합물의 투여가 제2 활성 성분보다 30분 내지 60분 전에 발생하면서, 4주 내지 6주의 주기 동안 경구 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 화합물과 제2 활성 성분의 조합은 매 주기마다 약 90 분에 걸쳐 정맥내 주입에 의해 투입된다. 특정 실시양태에서, 한 주기는 3주 내지 4주 동안 매일 본원에서 제공되는 화합물 약 0.1 내지 약 150 mg/일, 및 제2 활성 성분 약 50 내지 약 200 mg/m²/일의 투여, 및 이어서 1주 내지 2주의 휴약기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 조합 치료가 환자에게 투여되는 주기의 횟수는 약 1 내지 약 24 주기, 약 2 내지 약 16 주기, 또는 약 4 내지 3 주기의 범위이다.

7. 약학적 조성물 및 제형

일 실시양태에서, 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 포함하는 약학적 조성물 및 제형이 본원에서 제공된다. 다른 실시양태에서, 약학적 조성물 및 제형은 하나 이상의 부형제를 추가로 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물 및 제형는 하나 이상의 추가적 활성 성분을 또한 포함한다. 따라서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물 및 제형은 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체, 및 제2 활성제를 포함한다. 선택적인 제2, 또는 추가적, 활성 성분의 예는 본원에 개시되어 있다(예를 들어, 섹션 6.1 참조).

본원에서 제공되는 단일 단위 제형은 환자에로의 경구, 점막(예를 들어, 코, 설하, 질, 구상, 또는 직장), 비경구(예를 들어, 피하, 정맥내, 볼루스 주사, 근육내, 또는 동맥내), 국소(예를 들어, 점안액 또는 다른 안과용 제제), 경피(transdermal 또는 transcutaneous) 투여에 적합하다. 제형의 예는 정제; 캐플릿제(caplet); 캡슐, 예컨대 부드러운 탄력의 젤라틴 캡슐; 카시에제(cachet); 트로키제; 로젠지제(lozenge); 분산제; 좌약; 분말; 에어로졸(예를 들어, 비강 스프레이 또는 흡입기); 젤; 현탁물(예를 들어, 수성 또는 비수성 액상 현탁물, 수중 유적형 에멀젼, 또는 유중 수적형 액상 에멀젼), 용액, 및 엘릭서를 포함하는 환자에게 경구 또는 점막 투여하기 적합한 액상 제형; 환자에게 비경구 투여하기 적합한 액상 제형; 국소 투여에 적합한 점안액 또는 안과용 제제; 및 환자에게 비경구 투여하기 적합한 액상 제형을 제공하기 위해 재구성될 수 있는 무균 고형물(예를 들어, 결정성 또는 비결정성 고형물)을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

본원에서 제공되는 제형의 조성, 형태, 및 유형은 일반적으로 그 용도에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 동일 질병의 만성 치료에 사용되는 제형보다, 질병의 급성 치료에 사용되는 제형이, 하나 이상의 활성 성분의 더 많은 양을 함유할 수 있다. 마찬가지로, 비경구 제형은 동일 질환을 치료하기 위해 사용되는 경구 제형보다 더 적은 양의 하나 이상의 활성 성분을 포함할 수 있다(예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18판., Mack Publishing, Easton PA (1990) 참조).

특정 부형제가 본원에서 제공되는 약학적 조성물 또는 제형에 포함되기 적합한지 여부는 투여 경로를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는 다양한 인자에 의존한다. 예를 들어, 정제와 같은 경구 제형은 비경구 제형에 사용하기에 적합하지 않은 부형제를 포함할 수 있다. 또한, 특정 부형제의 적합성은 제형의 특정 활성 성분에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 일부 활성 성분의 분해는 락토스같은 일부 부형제에 의해, 또는 물에 노출될 때 가속화될 수 있다. 일차 또는 이차 아민을 포함하는 활성 성분은 이러한 가속화된 분해에 특히 민감하다. 결과적으로, 락토스가 존재하더라도, 거의 함유하지 않는 약학적 조성물 및 제형이 본원에서 제공된다. 본원에서 사용되는, 용어 "무-락토스"는, 만약 있더라도, 존재하는 락토스의 양이 활성 성분의 분해 속도를 실질적으로 증가시키기에는 불충분한 것을 의미한다.

본원에서 제공되는 무-락토스 조성물은 예를 들어, U.S. Pharmacopeia (USP) 25-NF20 (2002)에 개시되어 있는 부형제를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 무-락토스 조성물은 활성 성분, 결합제/충전제, 및 윤활제를 약학적으로 적합하고, 약학적으로 허용되는 양으로 포함한다. 특정 실시양테에서, 무-락토스 제형은 활성성분, 미결정 셀루로오스, 호화 전분, 및 스테아르산마그네슘을 포함한다.

물이 일부 화합물의 분해를 촉진할 수 있기 때문에, 활성 성분을 포함하는 무수 약학적 조성물 및 제형이 본원에 추가로 포함된다. 예를 들어, 물의 첨가(예를 들어, 5%)는 보존 기간 또는 시간에 따른 제형의 안정성과 같은 특징을 결정하기 위해 장기간 저장을 시뮬레이션하는 수단으로 약학 분야에서 널리 허용된다(예를 들어, Jens T. Carstensen, Drug Stability : Principles & Practice, 2판 Marcel Dekker, NY, NY, 1995, 페이지 379-80 참조). 사실상, 물과 열은 일부 화합물의 분해를 가속화시킨다. 따라서, 수분 및/또는 습기는 제형의 제조, 취급, 포장, 저장, 수송, 및 사용 중에 일반적으로 직면되기 때문에 물이 제형에 미치는 영향은 큰 의미가 될 수 있다.

본원에서 제공되는 무수 약학적 조성물 및 제형은 무수 또는 저수분 함유 성분, 및 저수분 또는 저습도 조건을 사용하여 제조될 수 있다. 락토스 및 일차 또는 이차 아민을 포함하는 적어도 하나의 활성 성분을 포함하는 약학적 조성물 및 제형은, 만약 제조, 포장, 및/또는 저장 중에 수분 및/또는 습기와 실질적 접촉이 예상된다면, 무수가 바람직하다.

무수 약학적 조성물은 그 무수 성질이 유지되도록 제조 및 저장되어야 한다.따라서, 특정 실시양태에서, 무수 조성물이 적합한 방식의 키트에 포함될 수 있도록, 물에 대한 노출을 방지할 수 있는 물질을 사용하여 포장된 무수 조성물이 본원에서 제공된다. 적합한 포장의 예는 밀봉 호일, 플라스틱, 단위 용량 용기(예를 들어, 바이알), 블리스터 팩(blister pack), 및 스트립 팩(strip pack)을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

활성 성분이 분해되는 속도를 감소시키는 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학적 조성물 및 제형이 본원에서 제공된다. 본원에서 "안정제"로 언급되는, 상기 화합물로는 아스코르브산과 같은 항산화제, pH 완충제, 또는 염 완충제가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.

부형제의 양 및 유형처럼, 제형 내 활성 성분의 양 및 특정 유형은, 비제한적으로 환자에게 투여되는 경로와 같은 인자들에 따라 다를 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 제형은 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 약 0.10 내지 약 1000 mg, 약 0.10 내지 약 500 mg, 약 0.10 내지 약 200 mg, 약 0.10 내지 약 150 mg, 약 0.10 내지 약 100 mg, 또는 약 0.10 내지 약 50 mg의 범위의 양으로 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 제형은 하나 이상의 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체를 약 0.1, 약 1, 약 2, 약 5, 약 7.5, 약 10, 약 12.5, 약 15, 약 17.5, 약 20, 약 25, 약 50, 약 100, 약 150, 또는 약 200 mg의 양으로 포함한다.

7.1 경구 제형

특정 실시양태에서, 경구 투여에 적합한 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 별개의 제형으로서 제형화될 수 있으며, 제형의 예로 정제(예를 들어, 씹어 먹을 수 있는 정제), 캐플릿, 캡슐, 및 액제(예를 들어 향미 시럽)를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 이러한 제형은 소정의 활성 성분 양을 포함하며, 약학 분야의 일부 공지된 방법으로 제조될 수 있다(일반적으로, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18 판., Mack Publishing, Easton PA (1990) 참조).

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 경구 제형은 통상의 약제학적 배합(compounding) 기술에 따라 활성 성분을 친밀한 혼합물에서 적어도 하나의 부형제와 조합하여 제조된다. 부형제는 투여를 위해 원하는 제제 형태에 따라 폭넓고 다양한 형태를 가질 수 있다. 예를 들어, 경구용 액상 또는 에어로졸 제형으로의 사용에 적합한 부형제로는 물, 글리콜, 오일, 알코올, 착향료, 보존제, 및 착색제가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 고형 경구 제형(예를 들어, 분말, 정제, 캡슐, 및 캐플릿)으로의 사용에 적합한 부형제의 예로는 전분, 당분, 미결정 셀룰로오스, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 및 붕해제가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.

투여 용이성 때문에, 정제 및 캡슐제는 가장 유리한 경구 투여 단위 형태를 대표하며, 이 경우 고형 부형제가 사용된다. 원한다면, 정제는 표준 수성 또는 비수성 기술로 코팅될 수 있다. 이러한 제형은 약학 분야의 일부 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 특정 실시양태에서, 약학적 조성물 및 제형은 활성 성분을 액상 담체, 미분 고형 담체, 또는 둘 다와 균일하고 친밀하게 혼합한 후, 필요하다면 제품을 원하는 형태로 성형하는 것에 의해 제조된다.

특정 실시양태에서, 정제는 압축(compression) 또는 성형(molding)에 의해 제조될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분말 또는 과립과 같이 자유-유동 형태의 활성 성분을, 선택적으로 부형제와 혼합하여 적합한 기계로 압축함으로써 제조된다. 특정 실시 양태에서, 성형 정제는 불활성 액체 희석제로 촉촉해진 분말 화합물의 혼합물을 적합한 기계로 성형하여 제조할 수 있다.

본원에서 제공되는 경구 제형으로 사용될 수 있는 부형제의 예로는 결합제, 충전제, 붕해제, 및 윤활제가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 약학적 조성물 및 제형에 사용하기 적합한 결합제는 옥수수 전분, 감자 전분, 또는 다른 전분, 젤라틴, 아카시아와 같은 천연 및 합성 검, 알긴산나트륨, 알긴산, 다른 알긴산 염, 분말 트래거캔스(tragacanth), 구아 검, 셀룰로오스 및 그 유도체(예를 들어, 에틸셀룰로오스, 아세트산셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨), 폴리비닐필로리돈, 메틸 셀룰로오스, 호화 전분, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스(예를 들어, Nos. 2208, 2906, 2910), 미결정 셀룰로오스, 및 이의 혼합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

미결정 셀룰로오스의 적합한 형태는 AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA), 및 이의 혼합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 특정 결합제는 미결정 셀룰로오스와 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨(예를 들어, AVICEL RC-581)의 혼합물이다. 적합한 무수 또는 저수분 부형제 또는 첨가제는 AVICEL-PH-103™ 및 Starch 1500 LM을 포함한다.

본원에서 제공되는 약학적 조성물 및 제형에 사용하기 적합한 충전제의 예는 활석, 탄산 칼슘(예를 들어, 과립 또는 분말), 미결정 셀룰로오스, 분말 셀룰로오스, 덱스트레이트, 카올린, 만니톨, 규산, 소르비톨, 전분, 호화 전분, 및 이의 혼합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물의 결합제 또는 충전제는 약학적 조성물 또는 제형의 약 50 내지 약 99 중량%로 존재한다.

붕해제는 수성 환경에 노출될 때 분해되는 능력을 정제에 제공하기 위해 본원에서 제공되는 조성물에 사용된다. 너무 많은 붕해제를 포함하는 정제는 저장 중 분해될 수 있는 반면에, 너무 적은 양을 포함하는 정제는 원하는 속도에서 또는 원하는 조건 하에서 분해되지 않을 수 있다. 따라서, 활성 성분의 방출을 불리하게 변화시키는 너무 많은 양도, 너무 적은 양도 아닌 충분한 양의 붕해제를 본원에서 제공되는 고형 경구 제형 형성에 사용해야 한다. 사용되는 붕해제의 양은 제제의 유형에 따라 다르다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 약 0.5 내지 약 15 중량% 또는 약 1 내지 약 5 중량%의 붕해제를 포함한다.

본원에서 제공되는 약학적 조성물 및 제형에 사용하기에 적합한 붕해제로는 한천, 알긴산, 탄산 칼슘, 미결정 셀룰로오스, 크로스카멜로오스 나트륨, 크로스포비돈, 폴라크릴린 칼륨, 전분 글리콜산염나트륨, 감자 또는 타피오카 전분, 기타 전분, 호화 전분, 기타 전분, 점토, 기타 알긴류, 기타 셀룰로오스, 고무, 및 이의 혼합물이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.

본원에서 제공되는 약학적 조성물 및 제형에 사용하기에 적합한 윤활제로는 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 미네랄 오일, 경량 미네랄 오일, 글리세린, 소르비톨, 만니톨, 폴리에틸렌글리콜, 기타 글리콜, 스테아르산, 라우릴황산나트륨, 활석, 수소화 식물성 기름(예를 들어, 땅콩 유, 면실유, 해바라기 유, 참기름, 올리브 유, 옥수수 유, 및 콩유), 스테라르산아연, 올레산에틸, 라우레산에틸, 한천, 및 이의 혼합물이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 추가 윤활제로는, 예를 들어, 실로이드 실리카 겔(AEROSIL200, W.R. Grace Co. of Baltimore, MD), 합성 실리카의 응고 에어로졸(Degussa Co. of Plano, TX), CAB-O-SIL(발열성 이산화규소, Cabot Co. of Boston, MA), 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정 실시양태에서, 만약 사용된다면, 윤활제는 그들이 포함되는 약학적 조성물 또는 제형의 약 1 중량% 미만의 양이 사용된다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 하나 이상의 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체; 및 무수 락토스, 미결정 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 스테아르산, 콜로이드성 무수 실리카, 및 젤라틴으로부터 선택되는 하나 이상의 부형제를 포함하는 고형 경구 제형이 본원에서 제공된다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 하나 이상의 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체; 및 무수 락토스, 미결정 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 스테아르산, 콜로이드성 무수 실리카, 및 젤라틴을 포함하는 고형 경구 제형이 본원에서 제공된다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 하나 이상의 화합물의 염산염, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체; 및 무수 락토스, 미결정 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 스테아르산, 콜로이드성 무수 실리카, 및 젤라틴으로부터 선택되는 하나 이상의 부형제를 포함하는 고형 경구 제형이 본원에서 제공된다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 하나 이상의 화합물의 염산염, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체; 및 무수 락토스, 미결정 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 스테아르산, 콜로이드성 무수 실리카, 및 젤라틴을 포함하는 고형 경구 제형이 본원에서 제공된다.

7.2 지연 방출 제형

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 활성 성분은 방출 제어 수단 또는 전달 장치에 의해 투여될 수 있다. 그 전문이 본원에 각각 참조로 포함된, 미국 특허 제3,845,770호, 제3,916,899호, 제3,536,809호, 제3,598,123호, 제4,008,719호, 제5,674,533호, 제5,059,595호, 제5,591,767호, 제5,120,548호, 제5,073,543호, 제5,639,476호, 제5,354,556호, 및 제5,733,566호에 개시된 것이 예로서 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 이러한 제형은, 예를 들어, 하이드로프로필메틸셀룰로오스, 기타 고분자 매트릭스, 겔, 투과성 막, 삼투 시스템, 다층 코팅, 미세 입자, 리포솜, 미소 구체, 또는 이의 조합을 사용하여 다양한 비율로 원하는 방출 프로파일을 제공하는 하나 이상의 활성 성분의 지연 또는 조절 방출을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 방출 제어에 적합한 정제, 캡슐, 젤라틴 캡슐, 및 캐플릿을 포함하지만, 이에 한정되지 않는, 경구 투여에 적합한 단일 단위 제형이 본원에 포함된다.

모든 방출 제어 제약품은 그들의 비-제어 대응물에 의해 달성되는 것을 넘는 약물 요법의 개선이라는 공통된 목표를 갖는다. 이상적으로, 의학적 치료에서 최적으로 설계된 방출 제어 제제의 사용은 상태를 치료 또는 제어하기 위해 최소의 시간 내에 사용되는 최소의 약물 물질을 특징으로 한다. 방출 제어 제제의 장점으로는 약물의 활성 연장, 투여 빈도 감소, 및 환자 순응도의 증가를 포함한다. 또한, 방출 제어 제제는 작용의 개시 시간 또는 약물의 혈중 농도와 같은 기타 특성에 영향주기 위해 사용될 수 있으며, 따라서, 부작용(예를 들어, 역효과)의 발생에 영향을 줄 수 있다.

대부분의 방출 제어 제제는 처음에 원하는 치료 효과를 신속하게 생성하는 약물(활성 성분)의 양을 방출하고, 연장된 기간 동안 이 수준의 치료 또는 예방 효과를 유지하기 위해 약물의 다른 양을 점진적이고 지속적으로 방출하도록 설계된다. 신체에 이러한 일정 수준의 약물을 유지하기 위해서, 약물은 대사되어 몸에서 배출되는 약물의 양을 대체할 속도로 제형으로부터 방출되어야 한다. 활성 성분의 방출 제어는 pH, 온도, 효소, 물, 또는 기타 생리적 조건 또는 화합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는, 다양한 조건에 의해 자극될 수 있다.

7.3 비경구용 제형

비경구용 제형은 피하, 정맥내(볼루스 주사 포함), 근육내, 및 동맥내를 포함하지만, 이제 한정되지 않는, 다양한 경로를 통해 환자에게 투여될 수 있다. 그들의 투여는 일반적으로 오염 물질에 대한 환자의 자연 방어를 우회하기 때문에, 비경구용 제형은 환자에게 투여하기 전에 살균되거나 또는 살균될 수 있는 것이 바람직하다. 비경구용 제형의 예로는 주사용으로 준비된 용액, 주사용으로 약학적으로 허용되는 비히클에 용해 또는 현탁되도록 준비된 건조 제품, 주사용으로 준비된 현탁물, 및 에멀젼이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.

본원에서 제공되는 비경구 제형을 제공하기 위해 사용될 수 있는 적합한 비히클에는 주사용수 USP; 염화나트륨 주사, 링거 주사, 포도당 주사, 포도당 및 염화나트륨 주사, 및 유당 링거 주사와 같은, 그러나 이에 한정되지는 않는, 수성 비히클; 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜과 같은, 그러나 이에 한정되지는 않는, 물-혼화성 비히클; 및 옥수수 유, 면실유, 땅콩 유, 참기름, 올레산에틸, 미리스트산이소프로필, 및 벤조산벤질과 같은, 그러나 이에 한정되지는 않는, 비-수성 비히클이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.

본원에 개시된 하나 이상의 활성 성분의 용해도를 증가시키는 화합물은 또한 본원에서 제공되는 비경구용 제형에 포함될 수 있다. 예를 들어, 사이클로덱스트린 및 그 유도체가 본원에서 제공되는 화합물, 예를 들어, 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 용해도를 증가시키기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 그 전문의 개시내용이 본원에 참조로 포함된 미국 특허 제5,134,127호 참조).

7.4 국소용 및 점막용 제형

본원에서 제공되는 국소용 및 점막용 제형은 스프레이, 에어로졸, 용액, 에멀젼, 현탁액, 점안액 또는 다른 안과용 제제, 또는 당업자에게 공지된 다른 형태를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다(예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, 16판 및 18판., Mack Publishing, Easton PA (1980 & 1990); 및 Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4판., Lea & Febiger, Philadelphia (1985) 참조). 구강 내 점막 조직 치료에 적합한 제형은 구강세척제 또는 경구용 겔로서 제제화될 수 있다.

본원에 포함되는 국소용 및 점막용 제형을 제공하기 위해 사용될 수 있는 적합한 부형제(예를 들어, 담체 및 희석제) 및 다른 물질들은 해당 약학적 조성물 또는 제형이 적용될 특정 조직에 따라 달라진다. 그러한 이유로, 특정 실시양태에서, 부형제는 비독성이며 약학적으로 허용되는 용액, 에멀젼 또는 겔을 형성하기 위한 물, 아세톤, 에탄올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-디올, 미리스트산이소프로필, 팔미트산이소프로필, 미네랄 오일, 및 이의 혼합물을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 원한다면 약학적 조성물 및 제형에 보습제 또는 습윤제가 또한 첨가될 수 있다. 이러한 성분의 추가적인 예는, 예를 들어 Remington's Pharmaceutical Sciences, 16판 및 18판., Mack Publishing, Easton PA (1980 & 1990)에서 찾을 수 있다.

또한, 하나 이상의 활성 성분의 전달을 개선하기 위해 약학적 조성물 또는 제형의 pH가 조절될 수 있다. 마찬가지로, 전달을 개선하기 위해 용매 운반체의 극성, 이의 이온 강도, 또는 긴장성이 조절될 수 있다. 하나 이상의 활성 성분의 친수성 또는 친유성을 유리하게 변화시켜서 전달을 개선하기 위해 약학적 조성물 또는 제형에 스테아르산염과 같은 화합물이 또한 첨가될 수 있다. 이점에서, 스테아르산염은 제제에 대한 지질 비히클, 유화제 또는 계면활성제, 및 전달-강화제 또는 침투 강화제로서 작용할 수 있다. 생성된 조성물의 특성을 추가로 조절하기 위해 활성 성분의 다른 염, 수화물 또는 용매화물이 사용될 수 있다.

7.5 키트

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 활성 성분들은 동시에 또는 동일한 투여 경로를 통해 환자에게 투여되지 않는다. 따라서, 의사에 의해 사용될 때, 환자에게 적절한 양의 활성 성분을 투여하는 것을 단순화할 수 있는 키트가 본원에 포함된다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 본원에서 제공되는 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 제형을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 추가적 활성 성분, 또는 이들의 약리학적 활성 돌연변이 또는 이의 유도체, 또는 이의 조합을 추가로 포함한다. 추가적 활성 성분의 예는 본원에 개시된 것들을 포함하나, 이에 한정되지 안는다(예를 들어, 섹션 4.3 참조).

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 활성 성분을 투여하기 위해 사용되는 장치를 추가로 포함한다. 이러한 장치의 예는 주사기, 드립백(drip bag), 패치, 및 흡입기를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 이식을 위한 세포 또는 혈액 뿐만 아니라 하나 이상의 활성 성분을 투여하기 위해 사용될 수 있는 약학적으로 허용가능한 비히클을 추가로 포함한다. 예를 들어, 활성 성분이 비경구 투여용으로 재구성되어야 하는 고체 형태로 제공된다면, 키트는 활성 성분이 용해되어 비경구 투여에 적합한 무미립자(particulate free) 멸균 용액을 형성할 수 있는 적합한 비히클의 밀폐 용기를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 비히클의 예로는 주사용수 USP; 염화나트륨 주사, 링거 주사, 포도당 주사, 포도당 및 염화나트륨 주사, 및 유당 링거 주사와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 수성 비히클; 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 물-혼화성 비히클; 옥수수유, 면실유, 땅콩유, 참기름, 올레산 에틸, 미리스트산이소프로필, 벤조산벤질과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 비-수성 비히클이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.

추가적 실시양태에서, 본원에서 제공되는 하나 이상의 화합물의 유효한 치료 가능성을 예측하거나 그 치료 유효성을 모니터링하는데 유용한 키트가 본원에서 제공된다. 상기 키트는 고체 지지체, 지지체에 접촉하는 핵산으로서, 적어도 20, 50, 100, 200, 350, 또는 그 초과의 mRNA 염기에 상보적인 핵산, 및 생물학적 샘플에서 mRNA의 발현을 검출하기 위한 수단을 포함한다.

다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 하나 이상의 화합물의 유효한 치료 가능성을 예측하거나 그 치료 유효성을 모니터링하는데 유용한 키트가 본원에서 제공된다. 상기 키트는 고체 지지체, 지지체에 접촉하는 하나 이상의 핵산으로서, 적어도 20, 50, 100, 200, 350, 500, 또는 그 초과의 mRNA 염기에 상보적인 핵산, 및 생물학적 샘플에서 mRNA의 발현을 검출하기 위한 수단을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 정량적 실시간 PCR(QRT-PCR), 마이크로어레이, 유세포분석기(flow cytometry) 또는 면역형광분석법을 바이오마커의 발현을 검출하는 수단으로 사용한다. 다른 실시양태에서, 바이오마커의 발현은 ELISA-기반 방법론 또는 당업계에 알려진 다른 유사한 방법들에 의해 측정된다.

또 다른 실시양태에서, 키트는 고체 지지체, 지지체에 접촉하는 핵산으로서, 적어도 20, 50, 100, 200, 350, 또는 그 초과의 mRNA 염기에 상보적인 핵산, 및 생물학적 샘플에서 mRNA 발현을 검출하기 위한 수단을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 정량적 실시간 PCR(QRT-PCR), 마이크로어레이, 유세포분석기 또는 면역형광분석법에 의해 바이오마커의 발현을 검출하는 수단으로 사용한다. 다른 실시양태에서, 바이오마커의 발현은 ELISA-기반 방법론 또는 당업계에 공지된 다른 유사한 방법들에 의해 측정된다.

실시예

본 발명의 특정 실시양태들은 하기 비-제한적 실시예에 의해 설명된다.

1. 3-(4-아미노-1-옥소-1,3- 디하이드로 - 이소인돌 -2-일)-피페리딘-2,6-디온(레 날리도마이드 ) 의 제조

메틸 2- 브로모메틸 -3- 니트로벤조에이트

사염화탄소(200ml) 중의 2-메틸-3-니트로벤조산메틸(14.0,g 71.7mmol) 및 N-브로모석신이미드 (15.3g, 86.1 mmol)의 교반 혼합물을 2 cm 거리에 위치한 100 W의 전구가 플라스크를 비추면서 15시간 동안 완만한 환류(gentle reflux)하에 가열하였다. 혼합물을 여과하고 고체를 메틸렌 클로라이드(50ml)로 세척하였다. 여과물을 물(2X100ml), 브라인(100ml)으로 세척하고 건조하였다. 용매를 진공하에 제거하고 잔류물을 플래시 크로마토그래피(flash chromatography) (핵산/아세트산에틸, 8/2)로 정제하여 노란색 고체 생성물 19 g(96%)을 얻었다: mp 70.0-71.5℃; 1H NMR (CDC1₃) δ8.12-8.09(dd, J=1.3 및 7.8 Hz, 1H), 7.97-7.94 (dd, J=1.3 및 8.2 Hz, 1H), 7.54(t, J=8.0 Hz, 1H). 5.15(s, 2H), 4.00(s, 3H); ¹³C NMR (CDC1₃) δ 165.85, 150.58, 134.68, 132.38, 129.08, 127.80, 53.06, 22.69; HPLC, Water Nove-Pak/C18, 3.9x150 mm, 4 micron, 1mL/min, 240 nm, 40/60 CH₃CN/0.1%H₃PO₄(aq) 7.27 min(98.92%); Anal. Calcd for C₉H₈NO₄Br : C, 39.44; H, 2.94; N, 5.1 1 ; Br, 29.15. Found : C, 39.46; H, 3.00; N, 5.00; Br, 29.1 1.

t-부틸 N-(1-옥소-4- 니트로이소인돌린 -2-일)-L-글루타민

트리에틸아민(2.9g, 28.6 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (90ml) 중의 2-브로모메틸-3-니트로벤조산메틸(3.5g, 13.0mmol) 및 L-글루타민 t-부틸 에스테르 염산염(3.1g, 13.0mmol)의 교반 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 24시간 동안 환류하며 가열하였다. 냉각된 혼합물에 메틸렌 클로라이드(150ml)를 첨가하고 혼합물을 물 (2X40ml), 브라인 (40ml)으로 세척하고 건조하였다. 용매를 진공에서 제거하고 잔류물을 플래시 크로마토그래피(메틸렌 클로라이드 중의 3% CH₃OH)에 의해 정제하여 2.84 g (60%)의 조 생성물을 얻었고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다: 1H NMR (CDC1₃) δ8.40(d, J=8.1 Hz, 1H), 8.15(d, J=7.5 Hz, 1H), 7.71(t, J=7.8 Hz, 1H), 5.83(s, 1H), 5.61(s, 1H), 5.12(d, J=19.4 Hz, 1H), 5.04-4.98(m, 1H), 4.92(d, J=19.4 Hz, 1H), 2.49-2.22(m, 4H). 1.46(s, 9H); HPLC, Waters Nova-Pak C18, 3.9x150 mm, 4 micron, 1 mL/min, 240 nm, 25/75 CH₃CN/0.1%H₃PO₄(aq) 6.75 min(99.94%).

N-(1-옥소-4- 니트로이소인돌린 -2-일)-L-글루타민

염화수소 기체를 메틸렌 클로라이드(60ml) 중의 t-부틸 N-(1-옥소-4-니트로-이소인돌린-2-일)-L-글루타민(3.6g, 9.9mmol)의 5℃ 교반 용액에 1시간 동안 버블링하였다. 혼합물을 한시간 더 실온에서 교반하였다. 에테르(40ml)를 첨가하고 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 슬러리(slurry)를 여과하고, 에테르로 세척하고 건조하여 3.3g의 생성물을 얻었다: 1H NMR (DMSO-d₆) δ8.45(d, J=8.1 Hz, 1H), 8.15(d, J=7.5 Hz, 1H), 7.83(t, J=7.9 Hz. 1H), 7.24(s, 1H), 6.76(s, 1H), 4.93(s, 2H), 4.84-4.78(dd, J=4.8 및 10.4 Hz, 1H), 2.34-2.10(m, 4H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 173.03, 171.88, 165.96, 143.35, 137.49, 134.77, 130.10, 129.61, 126.95, 53.65, 48.13, 31.50, 24.69; Anal. Calcd for C₁₃H₁₃N₃O₆ : C, 50.82; H, 4.26; N, 13.68. Found : C, 50.53; H. 4.37; N, 13.22.

(S)-3-(1-옥소-4- 니트로이소인돌인 -2-일)피페리딘-2,6- 디온

무수 메틸렌 클로라이드(150ml) 중의 N-(1-옥소-4-니트로이소인돌인-2-일)-L-글루타민(3.2g, 10.5 mmol)의 교반 현탁 혼합물을 이소프로판올/드라이아이스 배스 (bath)에서 -40℃로 냉각하였다. 티오닐 클로라이드 (0.82ml, 11.3mmol)를 냉각된 혼합물에 적가하고 이어서 피리딘(0.9g, 11.3mmol)을 적가하였다. 30분 후, 트리에틸아민(1.2g, 11.5 mmol)을 첨가하고 혼합물을 3시간 동안 -30℃ 내지 -40℃에서 교반하였다. 혼합물을 얼음물(200ml)에 붓고 수성층을 메틸렌 클로라이드(40ml)로 추출하였다. 메틸렌 클로라이드 용액을 물(2X60ml), 브라인(60ml)으로 세척하고 건조시켰다. 용매를 진공에서 제거하고 고체 잔류물을 아세트산에틸(20ml)로 슬러리화하여 2.2g(75%)의 생성물을 백색 고체로 얻었다: mp 285℃; 1H NMR (DMSO-d₆) δ: 1.04(s, 1H), 8.49-8.45(dd, J=0.8 및 8.2 Hz, 1H), 8.21-8.17(dd, J=7.3 Hz, 1H), 7.84(t, J=7.6 Hz, 1H), 5.23-5.15(dd, J=4.9 및 13.0 Hz, 1H), 4.96(dd, J=19.3 및 32.4 Hz, 2H), 3.00-2.85(m, 1H), 2.64-2.49(m, 2H), 2.08-1.98(m, 1H); ¹³C NMR (DMSO- d₆) δ 172.79, 170.69, 165.93, 143.33, 137.40, 134.68, 130.15, 129.60, 127.02, 51.82, 48.43, 31.16. 22.23; HPLC, Waters Nove-Pak/C18, 3.9x150 mm, 4 micron, 1 mL/min, 240 nm, 20/80 CH₃CN/0.1%H₃PO₄(aq) 3.67 min(100%); Anal. Calcd for C₁₃H_nN₃O₅ : C, 53.98; H, 3.83; N, 14.53. Found : C, 53.92; H, 3.70; N, 14.10.

3-(4-아미노-1-옥소-1,3- 디하이드로 - 이소인돌 -2-일)-피페리딘-2,6- 디온

메탄올(600 mL) 중의 (S)-3-(1-옥소-4-니트로이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (1.0g, 3.5 mmol) 및 10% Pd/C(0.3g)의 혼합물을 5시간 동안 50 psi 수소로 Parr-Shaker 기기에서 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트(Celite)를 통해 여과시키고 여과물을 진공에서 농축하였다. 고체를 30분간 뜨거운 아세트산에틸에서 슬러리화하고, 여과 및 건조하여 0.46 g(51%)의 생성물을 백색 고체로 얻었다: mp 235.5-239℃; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ11.01 (s, 1H). 7.19(t, J=7.6 Hz, 1H). 6.90(d. J=7.3 Hz, 1H), 6.78(d, J=7.8 Hz, 1H), 5.42(s, 2H). 5.12(dd. J=5.1 및 13.1 Hz, 1H), 4.17(dd, J=17.0 and 28.8 Hz, 2H), 2.92-2.85(m, 1H). 2.64-2.49(m, 1H). 2.34-2.27(m, 1H), 2.06-1.99(m, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ172.85, 171.19, 168.84, 143.58, 132.22. 128.79, 125.56, 1 16.37, 1 10.39, 51.48, 45.49, 31.20, 22.74; HPLC. Waters Nova-Pak/C18, 3.9x150 mm, 4 micron, 1 mL/min, 240 nm, 10/90 CH₃CN/0.1%H₃PO₄(aq) 0.96 min(100%); Chiral analysis, Daicel Chiral Pak AD, 40/60 Hexane/IPA, 6.60 min(99.42%); Anal. Calcd for C₁₃H₁₃N₃O₃ : C, 60.23; H, 5.05; N, 16.21. Found : C, 59.96; H. 4.98; N, 15.84.

또한 3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온은 이 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함된 Drugs of the Future, 2003, 28(5): 425-431에서 제공되는 방법에 의해 제조될 수 있다.

2. 4-아미노-2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1H- 이소인돌 -1,3-디온( 포말리도마이드 )의 제조

4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1H-이소인돌-1,3-디온의 제조는 예를 들어, 그 전문이 각각 참조로 포함된 미국 특허 제7,812,169호 및 제7,709,502호에 기재되어 있다.

40ml 무수 THF 중의 카복시벤질옥시-L-글루타민(2.8g, 10mmol)의 교반 용액에 1,1-카보닐디이미다졸(1.92g, 12mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 환류 하에 가열하였다. THF는 증발되고 생성물은 클로로폼 내에 용해시켰다. 클로로폼 층을 물과 브라인으로 세척하고 무수 CaSO₄로 건조시고, 여과 및 증발하여 백색 고체를 얻었다. 고체 생성물을 에틸 에테르로부터 결정화하여 2.4 g의 결정화된 파우더(90%)를 얻었다. (다르게는, 카복시벤질옥시-L-글루타민을 N,N-디메틸포름아마이드 중의 SOCl₂로 1시간 동안 -70℃ 내지 0℃에서 처리하여 고리화시켜, 상기 생성물을 형성할 수 있다). 반응 혼합물을 CHCl₃로 희석한 후 5%의 Na₂CO₃로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조하고, 여과, 및 증발시켜 S(-)-(3-벤질옥시카보닐아미노)-글루타리마이드) 2.5g(90% 수율)을 얻었다. ¹H NMR (CDCl₃) δ8.2 (1H, s broad), 7.4 (5H, s, aromatic), 5.8 (1H, d), 5.15 (2H, s), 4.4 (1H, dd, J=4.5, 3), 2.95-2.4 (3H, m), 1.86 (1H, d, t, J=11.5, 6.5). m.p. 122-124℃ (lit. 122-124℃).

15 mL의 빙초산 중의 S(-)-(2-벤질옥시카보닐아미노)글루타리마이드 (1.2g, 4.6mmol)의 용액에 8ml의 30% HBr/아세트산 용액을 20℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물의 온도를 실온으로 상승시키고 1시간 동안 교반하였다. S-(-)-2-아미노-글루타리마이드 HBr의 백색 고체 파우더가 반응 혼합물에서 보이기 시작하였다. 고체를 여과하고 5ml의 빙초산으로 세척한 후 에테르로 세척하여 1.8g(80%)의 생성물을 얻었다. 생성물의 편광계상 분석은 (-) rotation, [a]²⁵ _D (c=1, water)　= -37.5°을 나타내었고 생성물은 S-(-)-2-아미노-글루타리마이드로 확인되었다. DMSO-D₆ 에서 ¹HNMR은 생성물은 2-아미노-L-글루타리마이드 HBr로 확인되었다.

50ml 무수 DMF 중의 S-(-)-2-아미노-글루타리마이드 HBr(4.18g, 20mmol) 용액에 3.8g(20mmol)의 3-니트로프탈 무수물을 첨가하였다. 100ml의 빙초산을 첨가한 후에, 반응 혼합물을 24시간 동안 약 70℃ 내지 약 80℃에서 가열하였다. 그 후에, 용매를 진공 하에서 증발시켜 황백색의 고체를 수득하였다. 상기 고체에 10ml의 에틸 알코올을 첨가하여 황백색의 파우더를 형성시켰다. 생성물을 분리하고 20ml 에틸알코올로 세척하였다. ¹H NMR (DMSO-D₆) δ11.25 (1H, s broad), 8.35 (1H, d, J=7.2), 8.25 (1H, d, J=7.0), 8.15 (1H, t, J=8.0), 5.2 (1H, dd, J=5.5, 7.2), 3.00-2.85 (1H, m), 2.65-2.4 (2H, m), 2.15-2.05 (1H, m). m.p.: 228-229℃ (lit. 228.5-229.5℃).

4-니트로-탈리도마이드(1g, 3.3mmol)를 4:1 디옥산/메탄올 혼합물 50ml에 녹이고 약 4시간 동안 Pd/C 5% 촉매 존재하의 40 psi의 수소에서 Parr hydrogenater로 수소화시켰다. 셀라이트 여과 제제를 통해 반응 혼합물을 여과한 후에, 용매를 진공하에 증발시켜 노란색 파우더를 수득하였다. 생성물을 아세트산에틸/디옥산으로 재결정화하여 800mg(85% 순도)의 S(-)-4-아미노-탈리도마이드를 수득하였다. ¹H NMR in DMSO-D₆: 11.10 (1H, s broad), 7.45 (1H, t, J=7. 5), 7.05 (1H, d, J=5.2), 6.95 (1H, d, J=5.2), 6.5 (2H, s broad), 5.05 (1H, dd, J=5.0, 13.42),2.95-2.80 (1H, m), 2.65-2.5 (2H, m), 2.05-1.95 (1H, m). m.p. 318.2-319.5℃. 절대 배위(Absolute configuration)는 R(+) 및 S(-)-탈리도마이드 유사체 화합물에 대한 (R)- 및 (S)-4-아미노-2-(2,6-디옥시피페리딘-3-일)-1H-이소인돌-1,3-디온의 [a]²⁵ _D 비선광도의 비교에 의해 결정되었다. 생성물의 편광계상의 분석은 (-)rotation, [a]²⁵ _D (C=0.5, 디옥산) = -27.70°를 나타내었으며, 생성물은 S(-)-4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1H-이소인돌-1,3-디온으로 확인되었다.

두 거울상 이성질체는 키랄 HPLC 컬럼 Welk-01 (10 mm x 750 mm) 에 의해 분리하였으며 CH₃CN/MeOH/H₂0 1:1:5 혼합물로 용리하였다. 240 nm의 2 ml/min 유속에서 보존 시간 (retention time)은 각각 S(-) 거울상 이성질체에 대해 33.74 분 R(+) 거울상 이성질체에 대해 35.62분이었다.

3. 3-(5-아미노-2- 메틸 -4-옥소-4H- 퀴나졸린 -3-일)-피페리딘-2,6- 디온의 제조

물(500ml) 중의 수산화칼륨(16.1g, 286 mmol)의 용액에, 3-니트로프탈이미드 (25.0g, 130mmol)를 분할하여 0℃에서 첨가하였다. 현탁액을 3시간동안 0℃에서 교반하였고, 그 후 30℃에서 3시간 동안 가열하였다. 상기 용액에 HCl(100ml, 6N)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 1 시간 동안 0℃로 냉각시켰다. 현탁액을 여과하고 냉수(2X10ml)로 세척하여 3-니트로-프탈라믹 산(3-nitro-phthalamic acid)을 백색 고체(24.6g, 90% 수율)로 얻었다: ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 7.69 (brs, 1H, NHH), 7.74 (t, J = 8 Hz, 1H, Ar), 7.92 (dd, J = 1, 8 Hz, 1H, Ar), 8.13 (dd, J = 1, 8 Hz, 1H, Ar), 8.15 (brs, 1H, NHH), 13.59 (s, 1H, OH); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 125.33, 129.15, 130.25, 132.54, 136.72, 147.03, 165.90, 167.31.

물(118ml) 중의 3-니트로-프탈라믹 산(24.6g, 117mmol) 및 수산화칼륨(6.56g, 117mmol)의 혼합물에 물(240ml) 중의 브롬(6ml), 수산화칼륨 (13.2g, 234 mmol)의 혼합물을 0℃에서 첨가하고, 이어서 물(350ml) 중의 수산화칼륨(19.8g, 351mmol) 용액을 첨가하였다. 0℃에서 5분 후에, 혼합물을 1시간 동안 100℃ 오일 배스(Oil bath)에서 가열하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 그 후, 얼음-물 배스에서 30분간 냉각시켰다. 상기 혼합물에 HCl 용액(240ml, 2N)을 0℃에서 적가하고, 생성된 혼합물을 1시간 동안 유지하였다. 현탁액을 여과하고 물(5ml)로 세척하여 2-아미노-6-니트로-벤조산을 노란색 고체(15.6g, 73% 수율)로 얻었다: HPLC: Waters Symmetry C₁₈, 5um, 3.9 x 150 mm, 1 mL/min, 240 nm, CH₃CN/0.1% H₃PO₄, 5% grad to 95% over 5 min, 5.83 min (85%); ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 6.90 (dd, J = 1, 8 Hz, 1H, Ar), 7.01 (dd, J = 1, 9 Hz, 1H, Ar), 7.31 (t, J = 8 Hz, 1H, Ar), 8.5-9.5 (brs, 3H, OH, NH ₂); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ105.58, 110.14, 120.07, 131.74, 149.80, 151.36, 166.30; LCMS: MH = 183.

아세트산 무수물(15ml) 중의 2-아미노-6-니트로-벤조산 혼합물을 전자레인지에서 30분간 200℃에서 가열하였다. 혼합물을 여과하고 아세트산에틸(20ml)로 세척하였다. 여과물을 진공하에 농축시켰다. 고체를 2시간 동안 에테르 (20ml)에서 교반하였다. 현탁액을 여과하고 에테르(20ml)로 세척하여 2-메틸-5-니트로-벤조[d][1,3]옥사진-4-온을 밝은 갈색 고체 (1.4g, 85% 수율)로 얻었다: HPLC: Waters Symmetry C₁₈, 5um, 3.9 x 150 mm, 1 mL/min, 240 nm, CH₃CN/0.1% H₃PO₄, 5% grad 95% in 5 min, 5.36 min (92%); ¹H NMR (DMSO-d₆) δ2.42 (s, 3H, CH ₃), 7.79 (dd, J = 1, 8 Hz, 1H, Ar), 7.93 (dd, J = 1, 8 Hz, 1H, Ar), 8.06 (t, J = 8 Hz, 1H, Ar); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 20.87, 107.79, 121.54, 128.87, 137.19, 147.12, 148.46, 155.18, 161.78; LCMS: MH = 207.

피리딘(15ml) 중의 5-니트로-2-메틸-벤조[d][1,3]옥사진-4-온 (0.60g, 2.91 mmol) 및 3-아미노-피페리딘-2,6-디온 염화수소(0.48g, 2.91mmol) 현탁액의 각각의 2개의 바이알을 전자레인지에 10분 동안 170℃에서 가열하였다. 현탁액을 여과하고 피리딘(5ml)으로 세척하였다. 여과물을 진공하에 농축시켰다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 HCl (30ml, 1N), 아세트산에틸(15ml) 및 에테르 (15ml)에서 교반하였다. 현탁액을 여과하고 물(30ml) 및 아세트산에틸(30ml)로 세척하여 진한 갈색 고체를 얻었고, 실온에서 밤새 메탄올(50ml)과 함께 교반하였다. 현탁액을 여과하고 메탄올로 세척하여 3-(2-메틸-5-니트로-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온을 흑색 고체(490mg, 27% 수율)로 얻었다. 고체는 추가적 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

DMF(40ml) 중의 3-(2-메틸-5-니트로-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온(250mg) 및 탄소상의 Pd(OH)₂(110 mg)의 혼합물을 12시간 동안 수소 하(50 psi)에서 진탕하였다. 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 DMF(10ml)로 세척하였다. 여과액을 진공하에 농축시키고 생성된 오일을 플래시 컬럼 크로마토그래피(실리카겔, 메탄올/메틸렌 클로라이드)로 정제하여 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘--2,6-디온을 백색 고체(156ml, 69% 수율)로 얻었다: HPLC: Waters Symmetry C₁₈, 5um, 3.9 x 150 mm, 1 mL/min, 240 nm, 10/90 CH₃CN/0.1% H₃PO₄, 3.52 min (99.9%); mp: 293-295 ℃; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ2.10-2.17 (m, 1H, CHH), 2.53 (s, 3H, CH ₃), 2.59-2.69 (m, 2H, CH ₂), 2.76-2.89 (m, 1H, CHH), 5.14 (dd, J = 6, 11 Hz, 1H, NCH), 6.56 (d, J = 8 Hz, 1H, Ar), 6.59 (d, J = 8 Hz, 1H, Ar), 7.02 (s, 2H, NH ₂), 7.36 (t, J = 8 Hz, 1H, Ar), 10.98 (s, 1H, NH); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ20.98, 23.14, 30.52, 55.92, 104.15, 110.48, 111.37, 134.92, 148.17, 150.55, 153.62, 162.59, 169.65, 172.57; LCMS: MH = 287; Anal. Calcd. for C₁₄H₁₄N₄O₃ + 0.3 H₂O: C, 57.65; H, 5.05; N, 19.21. Found: C, 57.50; H, 4.73; N, 19.00.

4. 3-(4-((4-( 몰폴리노메틸 )벤질)- 옥시) -1- 옥소이소인돌린 -2-일)피페리딘-2,6-디온의 제조

3- 하이드록시 -2- 메틸 -벤조산 메틸 에스테르

응축기, 온도계 및 교반 막대(stirring bar)가 장치된 2L 3구 둥근바닥 플라스크에서 3-하이드록시-2-메틸벤조산(105g, 690mmol)을 MeOH(800mL)에 첨가하고, 이어서 MeOH(250mL)를 첨가하였다. H₂SO₄(10mL, 180mmol)을 상기 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 62℃에서 17시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 잔류물(200mL)을 천천히 실온에서 물(600mL)에 첨가하여, 백색 고체를 형성시켰다. 현탁액을 얼음 배스(ice bath)에서 30분간 교반하고, 여과하였다. 상기 고체를 물(5x250mL)로 세척하고 건조하여 3-하이드록시-2-메틸-벤조산 메틸 에스테르를 백색 고체(100g, 87% 수율)로 얻었다. 화합물은 추가적 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다: LCMS MH = 167; ¹H NMR (DMSO-d₆) d 2.28 (s, 3H, CH₃), 3.80 (s, 3H, CH₃), 6.96 - 7.03 (m, 1H, Ar), 7.09 (t, J = 7.8 Hz, 1H, Ar), 7.14 - 7.24 (m, 1H, Ar), 9.71 (s, 1H, OH).

3-( tert -부틸-디메틸- 실라닐록시 )-2- 메틸 -벤조산 메틸 에스테르

교반 막대 및 온도계가 장치된 1L의 3구 둥근바닥 플라스크에 DMF(300mL), 3-하이드록시-2-메틸벤조산메틸(90 g, 542 mmol) 및 이미다졸(92 g, 1,354 mmol)을 첨가하였다. 내부 온도를 15 내지 19℃로 조절하기 위해 TBDMS-Cl(90 g, 596 mmol)를 분할하여 상기 용액에 20분간 첨가하였고, 첨가 후에 내부 온도를 1℃ 아래로 떨어뜨렸다. 얼음 배스를 제거하고, 반응 혼합물을 상온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음 물(500 mL)에 첨가하고, 생성된 용액을 두 부분으로 나누었다(700mL x 2). 각각의 부분을 EtOAc(700 mL)로 추출하였다. 각각의 유기층을 냉수(350 mL) 및 브라인(350 mL)로 세척하였다. 유기층을 결합하고, MgSO₄로 건조하였다. 결합된 유기층을 농축하여 3-(tert-부틸-데메틸-실라닐록시)-2-메틸-벤조산 메틸 에스테르를 밝은 갈색 오일(160 g, 100% 조 수율)로 얻었다. 화합물은 다음 단계에 추가적 정제 없이 사용되었다: LCMS MH = 281; ¹H NMR (DMSO-d₆) d -0.21 (s, 6H, CH₃, CH₃), 0.73 - 0.84 (m, 9H, CH₃, CH₃, CH₃), 2.10 (s, 3H, CH₃), 3.60 (s, 3H, CH₃), 6.82 (dd, 1H, Ar), 6.97 (t, J = 7.9 Hz, 1H, Ar), 7.13 (dd, J = 1.1, 7.7 Hz, 1H, Ar).

2- 브로모메틸 -3-(- tert -부틸-디메틸- 실라닐록시 )-벤조산 메틸 에스테르

NBS(49.8 g, 280 mmol)를 아세트산메틸(500 mL) 중의 3-(tert-부틸-디메틸실릴옥시)-2-메틸벤조산메틸(78.4 g, 280 mmol)에 실온에서 첨가하여, 오렌지색 현택액을 얻었다. 생성된 반응 혼합물은 40℃의 오일 배스에서 가열하고, 300 wt 햇빛 전구(sunlight bulb)로 비추면서, 4시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고 Na₂SO₃ 용액(2 x 600 mL, 50% 포화 농도), 물(500 mL) 및 브라인(600 mL)으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 로 건조하고, 숯으로 탈색하였다. 유기층을 농축하여 2-브로모메틸-3-(터트-부틸-디메틸-실라닐록시)-벤조산 메틸 에스테르를 밝은 갈색 오일(96 g, 91% 조 수율)로 얻었다. 화합물은 다음 단계에 추가적 정제 없이 사용되었다: LCMS M-Br = 279; ¹H NMR (DMSO-d₆) d 0.05 - 0.11 (m, 6H, CH₃, CH₃), 0.82 (s, 9H, CH₃, CH₃, CH₃), 3.65 (s, 3H, CH₃), 4.74 (s, 2H, CH₂), 6.94 (dd, J = 1.3, 8.1 Hz, 1H, Ar), 7.10 - 7.20 (m, 1H, Ar), 7.21 - 7.29 (m, 1H, Ar).

4- 카바모일 -부티르산 메틸 에스테르

2L 둥근 바닥 플라스크에서 아세토니트릴(1100 mL) 중의 2-(브로모메틸)-3-(터트-부틸디메틸실릴옥시)-벤조산메틸(137.5 g, 325 mmol) 교반 용액에 4,5-디아미노-5-옥소멘타노산메틸 염산염(70.4 g, 358 mmol)을 첨가하였다. 10분 동안 투입 깔때기(addition funnel)를 통해 DIPEA(119 ml, 683 mmol)를 현탁액에 첨가하고, 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 40℃ 오일 배스에서 23시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압하에서 농축하였다. 잔류물을 에테르(600 mL)에서 교반하여, 백색 고체를 석출하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 고체는 에테르(400 mL)로 세척하였다. 여과물을 HCl(1N, 200 mL), NaHCO₃(sat. 200 mL) 및 브라인(250 mL)으로 세척하였다. 수성 산성층 및 염기층을 분리하여 보관하였다. 그 후 상기 고체를 에테르(250 mL)로 추가 세척하고 액체를 상기 산성 용액 및 염기성 용액으로 세척하였다. 두개의 유기층을 결합하고 감압 하에서 농축하여 4-[4-(터트 부틸-디메틸-실라닐록시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-4-카바모일-부티르산 메틸 에르테르를 갈색 오일(152 g, 115% 조 수율, H NMR 77% 순도)로 얻었다. 화합물은 추가적 정제 없이 다음 단계에 사용되었다: LCMS MH=407.

4- 카바모일 -4-(4- 하이드록시 -1-옥소-1,3- 디하이드로 - 이소인돌린 -2-일)-부티르산 메틸 에스테르

DMF(500 mL) 및 물(55 mL) 중의 5-아미노-4-(4-(터트-부틸디메틸실록시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노산메틸(152 g, 288 mmol)의 차가운 교반 용액에 K₂CO₃(19.89 g, 144 mmol)를 5분간 분할하여 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음 배스에서 냉각하였다. 상기 혼합물에 HCl(12M, 23.99 ml, 288 mmol)을 천천히 첨가하였다. 첨가 후에, 아세토니트릴(280 mL)을 혼합물에 첨가하고, 고체를 석출하였다. 혼합물을 실온에서 10분간 교반하고, 여과하였다. 고체를 아세토니트릴(50 mL x 4)로 세척하였다. 여과물을 고진공 하에서 농축하여 노란색 오일(168 g)을 얻었다. 상기 오일을 아세토니트릴(600 mL)에 녹이고 실온에서 10분간 교반하였다. 혼합물을 여과하고 고체를 아세토니트릴(25 mL x 2)로 세척하였다. 여과물을 고진공 하에서 농축하여 노란색 오일(169 g)을 얻고, 이를 물(1200 mL) 및 에테르(1000 mL) 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 3분 동안 교반하여, 층을 나누었다. 수성 용액을 고진공 하에서 농축하고, 잔류물을 아세토니트릴(160 mL)에서 교반한 후, 밤새 교반하여 백색 고체가 형성되었다. 혼합물을 여과하여 4-카바모일-4-(4-하이드록시-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-부티르산 메틸 에스테르를 백색 고체(46 g, 54% 수율)로 얻었다. 여과물을 농축하고, 잔류물을 아세토니트릴(60 mL)에서 추가로 결정화하여 4-카바모일-4-(4-하이드록시-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-부티르산 메틸 에스테르 백색 고체(11.7 g, 14% 수율)를 더 얻었다. 여과물을 농축하고 잔류물을 ISCO 크로마토그래피로 정제하여 4-카바모일-4-(4-하이드록시-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-부티르산 메틸 에스테르의 백색 고체(13.2 g, 15% 수율)를 더 얻었다. 총 얻어진 생성물은 수율 83%의 70.9 g이다: LCMS MH = 293; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 1.95 - 2.34 (m, 4H, CH₂, CH₂), 3.51 (s, 3H, CH₃), 4.32 (d, J = 17.6 Hz, 1H, CHH), 4.49 (d, J = 17.4 Hz, 1H, CHH), 4.73 (dd, J = 4.7, 10.2 Hz, 1H, CHH), 6.99 (dd, J = 0.8, 7.9 Hz, 1H, Ar), 7.10 - 7.23 (m, 2H, Ar, NHH), 7.25 - 7.38 (m, 1H, Ar), 7.58 (s, 1H, NHH), 10.04 (s, 1H, OH).

3-(4-((4-( 몰폴리노메틸 )벤질) 옥시 )-1- 옥소이소인돌린 -2-일)피페리딘-2,6- 디온

단계 1: THF(60 mL) 중의 3-(4-하이드록시-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온(2.5 g, 8.56 mmol) 용액에 트리페닐 포스핀(1.6mmol/g, 12g, 18.8 mmol을 지지하는 중합체)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 아조디카복실산 디이소프로필염(3.96 mL, 18.8 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 30분간 교반하였다. (4-몰폴린-4-일메틸-페닐)-메탄올(2.62 g, 12.4 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 가온하게 하고, 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축하였다. 생성된 오일을 메틸렌 클로라이드 및 메탄으로 용리되는 실리카겔 컬럼에서 정제하여(구배, 6% 메탄올에서 생성물 산출), 4-카바모일-4-[4-(4-몰폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌린-2-일]-부티르산 메틸 에스테르(2.2 g, 54% 수율)을 얻었다. 생성물은 추가적인 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.

단계 2: 4-카바모일-4-[4-(4-몰폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-부티르산 메틸 에스테르(2.2 g 4.57 mmol)의 THF 용액(50 mL)에 칼륨 tert-부톡사이드(0.51 g, 4.57 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 1N HCl(5 mL, 5 mmol), 이어서 포화 NaHCO₃(25 mL)로 퀀치(quench)하였다. 상기 혼합물을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 물(30 mL), 브라인(30 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조하고 농축하였다. 생성된 고체에 EtOAc(10 mL), 이어서 헥산(10 mL)을 교반 하에서 첨가하였다. 현탁액을 여과하여 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온을 백색 고체(1.5 g, 73% 수율)로 얻었다. HPLC: Waters Symmetry C₁₈, 5μm, 3.9 x 150 mm, 1 mL/min, 240 nm, gradient to 95/5 acetonitrile/0.1% H₃PO₄ in 5 min,: t_R = 4.78 min (97.5%); mp: 210-212℃; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 1.86 - 2.09 (m, 1H, CHH), 2.29 - 2.38 (m, 4H, CH₂,CH₂), 2.44 (dd, J = 4.3, 13.0 Hz, 1H, CHH), 2.53 - 2.64 (m, 1H, CHH), 2.82 - 2.99 (m, 1H, CHH), 3.46 (s, 2H, CH₂), 3.52 - 3.61 (m, 4H, CH₂,CH₂), 4.18 - 4.51 (m, 2H, CH₂), 5.11 (dd, J = 5.0, 13.3 Hz, 1H, NCH), 5.22 (s, 2H, CH₂), 7.27 - 7.38 (m, 5H, Ar), 7.40 - 7.53 (m, 3H, Ar), 10.98 (s, 1H, NH) ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 22.36, 31.21, 45.09, 51.58, 53.14, 62.10, 66.17, 69.41, 114.97, 115.23, 127.64, 128.99, 129.81, 129.95, 133.31, 135.29, 137.68, 153.50, 168.01, 170.98, 172.83; LCMS: 465; Anal Calcd for C₂₅H₂₇N₃O₅ + 0.86 H₂O: C, 64.58; H, 6.23; N, 9.04; Found: C, 64.77; H, 6.24; N, 8.88.

(S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 및 (R)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 화합물을 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온의 키랄 분리를 통해 제조하였다.

5. 3-(1-옥소-4-(4-(2-( 피롤리딘 -1-일) 에톡시 ) 벤질옥시 ) 이소인돌린 -2-일)-피페리딘-2,6- 디온

단계 1: DMF(80 mL) 중의 4-하이드록시벤즈알데하이드(4.0 g, 32.8 mmol)와 Cs₂CO₃(26.7 g, 81.9 mmol) 혼합물을 실온에서 10분간 교반하였다. 이 혼합물에 1-(2-클로로에틸)피롤리딘 염산염(6.7 g, 39.3 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 가온하고, 그 후 80℃에서 하룻밤 동안 가온하였다. 반응 혼합물을 냉각하고 여과하고, 고체를 EtOAc(100 mL)로 세척하였다. 여과물을 냉수(200 mL)에서 교반하고 수성층을 EtOAc(3 X 50 mL)로 추출하였다. 결합된 EtOAc 수용액을 2N NaOH(40 mL), 물(3 X 40 mL) 및 브라인(40 mL)으로 세척하고, K₂CO₃로 건조하였다. 용매를 제거하여 4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)벤즈알데하이드(5.9 g, 81% 수율)를 얻었다:¹H NMR (CDCl₃) δ 1.76-1.84 (m, 4H), 2.60-2.65 (m, 4H), 2.91-2.95 (m, 2H), 4.19 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 7.00-7.04 (m, 2H), 7.80-7.95 (m, 2H), 9.88 (s, 1H).

단계 2: 알콜 시약(60 mL) 중의 4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)벤즈알데하이드(5.8 g, 26.5 mmol)을 드라이아이스/아세톤 배스에서 -60℃로 냉각하였다. LiBH₄/THF(2M, 15.9 mL, 31.9 mmol)을 -60℃에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 천천히 퀀치한 후, 실온으로 가온하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 EtOAc(80 mL) 및 2N NaOH(20 mL)와 교반하였다. 수성층을 EtOAc(2 X 30 mL)로 추출하고, 결합된 EtOAc 용액을 물(30 mL) 및 브라인(30 mL)으로 세척하고 건조하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 크로마토그래피(SiO₂, NH₄OH: CH₃OH: CH₂Cl₂ 0.5: 3: 97)로 정제하여 4-[(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-메탄올(2.5 g, 42% 수율)을 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 1.74-1.83 (m, 4H), 2.56-2.63 (m, 4H), 2.86 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 4.03 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.57 (s, 2H), 6.82-6.87 (m, 2H), 7.23-7.27 (m, 2H).

단계 3: 아조디카복실산 디이소프로필(1.1 g, 5.5 mmol)을 THF(60 mL) 중의 5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜나노산메틸(0.8 g, 2.7 mmol), 4-[(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-메탄올(0.9 g, 4.1 mmol) 및 중합체 결합-트리페닐포스핀(1.8 g, 5.5 mmol) 교반 현탁액에 5 내지 8℃에서 천천히 첨가하였다. 첨가 후에, 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 고체를 CH₂Cl₂(30 mL)로 세척하였다. 여과물을 농축하고 잔류물을 크로마토그래피(SiO₂, CH₃OH:CH₂Cl₂ = 3:97)로 정제하여 5-아미노-5-옥소-4-(1-옥소-4-(4-(2-피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)펜타노산메틸(1.0 g, 77%)을 얻었다.

단계 4: KO-t-Bu/THF(1M, 2.5 mL, 2.5 mmol) 용액을 THF(30 mL) 중의 5-아미노-5-옥소-4-(1-옥소-4-(4-(2-피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)펜타노산 메틸(1.0 g, 2.1 mmol) 교반 용액에 5℃에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 5℃에서 10분 동안 교반한 후 2시간 동안 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물을 얼음 배스에서 냉각하고 4N HCl(4 mL)로 퀀치하였다. 혼합물을 EtOAc(40 mL) 및 Na₂CO₃(25 mL)와 교반하였다. 수성층을 EtOAc(3 X 40 mL)로 추출하고 결합된 EtOAc 용액은 물(40 mL) 및 브라인(40 mL)으로 세척하고 K₂CO₃로 건조하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 크로마토그래피(SiO₂, CH₃OH:CH₂Cl₂ = 5:95)로 정제하여 3-(1-옥소-4-(4-(2-피롤리딘-1-일)-에톡시)-벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온(0.2 g, 수율 20%)을 얻었다: mp 153-155 ℃; 1H NMR (DMSO-d6) δ 1.66-1.69 (m, 4H), 1.94-1.99 (m, 1H), 2.40-2.59 (m, 2H), 2.77 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.84-2.90 (m, 1H), 4.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.24 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.07-5.13 (dd, J = 5.1 and 13.2 Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 6.92-6.97 (m, 2H), 7.30-7.50 (m, 5H), 10.96 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6) δ 22.33, 23.09, 31.17, 45.06, 51.54, 53.93, 54.24, 66.69, 69.34, 114.35, 115.04, 115.12, 128.42, 129.50, 129.75, 129.95, 133.25, 153.50, 158.33, 168.00, 170.96, 172.81; Calcd for C₂₆H₂₉N₃O₅ + 0.5 Et2O: C, 66.65; H, 6.63; N, 8.64. Found: C, 66.95; H, 6.62; N, 8.71.

6. 3-(4-(4-(2- 몰폴린 -4-일- 에톡시 )- 벤질옥시 )-1- 옥소이소인돌린 -2-일)-피페리딘-2,6- 디온

단계 1: DMF (80 mL) 중의 4-하이드록시벤즈알데하이드(4.0 g, 32.8 mmol) 및 Cs₂CO₃ (26.7 g, 81.9 mmol)을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 4-(2-클로로에틸)몰폴린 염산염(7.3 g, 39.3 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물 하룻밤 동안 오일 배스에서 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 여과하여, 고체를 EtOAc(100 mL)로 세척하였다. 여과물을 냉수(200 mL)로 희석하고 수성층을 EtOAc(3 X 50 mL)로 추출하였다. 결합된 EtOAc 용액을 2N NaOH(25 mL), 물(3 X 40 mL) 및 브라인(40 mL)으로 세척하고, K₂CO₃로 건조하였다. 용매를 제거하여 4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤즈알데하이드(6.2 g, 수율 81% )를 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 2.57-2.60 (m, 4H), 2.83 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.70-3.75 (m, 4H), 4.19 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 6.98-7.03 (m, 2H), 7.81-7.85 (m, 2H), 9.88 (s, 1H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 53.52, 56.73, 65.77, 66.11, 114.93, 129.58, 131.73, 163.40, 191.21.

단계 2: LiBH₄/THF(2M, 15.9 mL, 31.7 mmol)를 -60℃에서 알콜 시약(60 mL) 중의 4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤즈알데하이드(6.2 g, 26.4 mmol) 교반 용액에 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반한 후 물(20 mL)로 퀀치하였다. 상기 혼합물을 농축하고 잔류물을 EtOAc(80 mL) 및 1N NaOH(30 mL)와 교반하였다. 수성층을 EtOAc(2X30 mL)로 추출하고 결합된 EtOAc 용액을 물(40 mL) 및 브라인(40 mL)로 세척하고 건조하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 크로마토그래피(SiO₂, NH₄OH: CH₃OH: CH₂Cl₂ 0.5: 3: 100)로 정제하여 [4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-페닐]-메탄올(4.2 g, 수율 67%)을 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 2.25 (s, 1H), 2.54-2.57 (m, 4H), 2.78 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.70-3.73 (m, 4H), 4.08 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.59 (s, 2H), 6.85-6.89 (m, 2H), 7.25-7.29 (m, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 54.06, 57.61, 65.79, 66.85, 114.62, 128.57, 133.52, 158.24.

단계 3: 중합체 결합-트리페닐포스핀(1.8 g, 5.5 mmol)을 10분간 건조 CH₂Cl₂(20 mL)와 교반하였다. 이 혼합물에 THF(60 mL) 중의 5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노산메틸(0.8 g, 2.7 mmol) 및 [4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-페닐]-메탄올(1.0 g, 4.1 mmol) 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5℃로 냉각시키고 아조디카복실산 디이소프로필(1.1 g, 5.5 mmol) 을 5 내지 8℃에서 천천히 첨가하였다. 첨가 후에, 상기 혼합물을 하룻밤 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 고체를 CH₂Cl₂(30 mL)로 세척하였다. 여과물을 농축하고 잔류물을 크로마토그래피(SiO₂, CH₃OH: CH₂Cl₂ 3: 97)로 정제하여 5-아미노-4-(4-(4-(2-몰폴리노에톡시)벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소-펜타노산메틸(1.0 g, 71%)을 얻었다.

단계 4: 칼륨 t-부톡사이드/THF 용액(1M, 2.6 mL, 2.6 mmol)을 5℃에서 THF(30 mL) 중의 5-아미노-4-(4-(4-(2-몰폴리노에톡시)벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소-펜타노산메틸(1.1 g, 2.1 mmol) 교반 용액에 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 5℃에서 교반하고 2시간 동안 실온에서 가온하였다. 반응 혼합물을 얼음 배스에서 냉각시키고 4N HCl(4 mL)로 퀀치하였다. 혼합물을 EtOAc(40 mL) 및 포화 Na₂CO₃ (25 mL)와 교반하였다. 수성층을 EtOAc(3 X 40 mL)로 추출하고 결합된 EtOAc 용액을 물(40 mL) 및 브라인(40 mL)로 세척하고, K₂CO₃로 건조하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 크로마토그래피(Al₂O₃, CH₃OH: CH₂Cl₂ 3: 97)로 정제하여 3-(4-(4-(2-몰폴리노에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온(0.2 g, 수율 16%)을 얻었다:¹H NMR (DMSO-d₆) δ 1.90-2.05 (m, 1H), 2.40-2.70 (m, 8H), 2.84-2.96 (m, 1H), 3.55-3.58 (m, 4H), 4.06-4.10 (m, 2H), 4.24 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 5.07-5.15 (m, 3H), 6.97 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.30-7.50 (m, 5H), 10.96 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 22.32, 31.17, 45.06, 51.55, 53.56, 56.92, 65.29, 66.11, 63.31, 114.41, 115.04, 115.11, 128.50, 129.47, 129.74, 129.94, 133.25, 153.49, 158.27, 167.99, 170.94, 172.80; Calcd for C₂₆H₂₉N₃O₆ + 0.2 H₂O: C, 64.64; H, 6.10; N, 8.70. Found: C, 64.54; H, 6.06; N, 8.63.

7. 3-{4-[4-(2- 몰폴린 -4-일-에틸)- 벤질옥시 ]-1-옥소-1,3- 디하이드로 - 이소인돌 -2-일}-피페리딘-2,6- 디온

단계 1: 4-(2-브로모에틸)벤조산(25 g, 109 mmol) 및 에테르산트리플루오로보레인(13.71 ml, 109 mmol)의 THF 용액에 보레인(196 ml, 196 mmol)을 0℃에서 2시간 동안 적하 깔때기(dripping funnel)를 통해 적가하였다. 혼합물을 하룻밤 동안 실온에서 교반하고, 탁한 현탁액이 투명해지고 더이상 기포가 형성되지 않을때까지 MeOH를 실온에서 적하하였다. 투명한 용액을 회전증발기(rota-vap)에서 농축시키고 생성된 고체를 물(100 mL)에서 30분 동안 실온에서 교반하였다. 현탁액을 여과하여 4-(2-클로로-에틸)-벤조산을 백색 고체(25g, 107%)로 얻었다.

단계 2: (4-(2-브로모에틸)페닐)메탄올(25 g, 116 mmol)의 아세토니트릴 용액에 몰폴린(25.3 ml, 291 mmol)을 첨가하였다. NaI를 한번에 모두 첨가하였다. 혼합물을 주말 동안 실온에서 교반하였다. 반응 현탁액을 여과하였다. 여과물을 농축하고 에테르(100 mL)에서 30분간 실온에서 교반하였다. 현탁액을 여과하였다. 생성된 고체를 1N HCl에 녹이고, EtOAc(50 mL x 2)로 추출하였다. 수성층을 1N NaOH를 중성화하여 pH를 7내지 8로 하였다. 생성된 현탁물을 여과하여 [4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-페닐]-메탄올을 백색 고체(13g, 60%)로 얻었다.

단계 3: 4-카바모일-4-(4-하이드록시-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-부티르산 메틸 에스테르(0.5 g, 1.7 mmol)의 THF 용액에 트리페닐포스핀 수지(2.3 g, 1.6 mmol/g 로딩, 3.74 mmol) 및 DIAD(0.73 mL, 3.74 mmol) 를 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 혼합물에 [4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-페닐]-메탄올(0.65 g, 2.94 mmol)을 첨가하고 하룻밤 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고 여과물을 EtOAc(30 mL) 및 Na₂CO₃(20 mL)로 농축하고 추출하였다. 유기층을 물(20 mL) 및 브라인(20 mL)로 세척하고, 농축하였다. 생성된 오일을 실리카겔 컬럼으로 정제하여 4-카바모일-4-{4-[4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시]-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-부티르산 메틸 에스테르를 백색 고체(0.74 g, 88%)로 얻었다.

단계 4: 4-카바모일-4-{4-[4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시]-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-부티르산 메틸 에스테르(0.74 g, 1.5 mmol) 의 THF 용액(20 mL)에 0℃에서 칼륨 t-부톡사이드(0.16 g, 1.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분간 교반하고 5 mL의 HCl 용액, 이어서 15 mL의 포화 NaHCO₃ 용액으로 퀀치하였다. 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 유기층을 감압으로 농축하였다. 생성된 오일을 CH₂Cl₂ 및 메탄올에 의해 용리되는 실리카겔 컬럼에서 정제하여 3-{4-[4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시]-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온을 백색 고체(620 mg, 수율 87%)로 얻었다: mp: 230-232 ^oC. HPLC: Waters Symmetry C-18, 3.9 X 150 mm, 5 micro,1 mL/min, 240 nm, gradient acetonitrile/ 0.1% H₃PO₄ in H₂O from 5/95 to 100/0 in 5 min and stayed at 100/0 for 5min: t_R = 4.86 min (97%); ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 1.80 - 2.12 (m, 1H, CHH), 2.40-2.44 (m, 4H, CH₂,CH₂), 2.45 - 2.48 (m, 1H, CHH), 2.55 - 2.64 (m, 1H, CHH), 2.69 - 2.80 (m, 2H, CH₂), 2.81 - 3.00 (m, 1H, CHH), 3.52 - 3.61 (m, 4H, CH₂, CH₂), 4.18 - 4.48 (m, 2H, CH₂), 5.11 (dd, J = 5.1, 13.2 Hz, 1H, NCH), 5.20 (s, 2H, CH₂), 7.19 - 7.54 (m, 7H, Ar), 10.97 (s, 1H, NH); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 22.36, 31.21, 32.04, 45.10, 51.58, 53.21, 59.93, 66.13, 69.47, 114.98, 115.19, 127.80, 128.70, 128.74, 129.79, 129.95, 133.29, 134.08, 140.25, 153.50, 168.01, 170.96, 172.82; LCMS MH = 464; Anal Calcd for C₂₆H₂₉N₃O₅ + 0.5 H₂O: C, 66.09; H, 6.40; N, 8.89; Found: C, 65.96; H, 6.33; N, 9.07.

8 검정

8.1 T 세포에 의한 사이토카인 생성

RosetteSep® T 세포 농축 칵테일을 사용하여 음성 선택(negative selection)에 의해 T 세포를 버피 코트로부터 분리하였다. 제조사의 과정을 그대로 따랐다. 모든 96-웰 플레이트를 37℃에서 4시간 동안 1X PBS 100 μl 중의 3 μg/ml 항-인간 CD3 항체로 예비코팅하였다. T 세포 검정에 앞서 플레이트를 RPMI-1640 완전배지를 이용하여 3회 세척하였다. 그 후, T 세포를 RPMI-1640 완전 배지 180 μL 중에서 2.5 x 10⁵ 세포/웰의 밀도로 CD3 예비코팅된 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 10X 적정된 화합물 20 μl로 10, 1, 0.1, 0.01, 0.001, 0.0001 및 0.00001 μM에서 처리하였다. 최종 DMSO 농도는 0.25%였다. 플레이트를 48 시간 동안 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 48 시간 후에, 상청액을 수확하여 다음의 사이토카인/케모카인에 대해 다중 혈구계산 비드 어레이(CBA) 검정으로 시험하였다: IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, IL-15, IL-17a, GM-CSF, G-SCF, IFN-γ, TNF-α 및 RANTES. CBA 플레이트를 루미넥스 IS100 장치에서 분석하였다. 각 공여물로부터의 데이터를 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 5.0 소프트웨어를 사용하여 그래프화하고, 평균 pg/mL ± SEM 및 % DMSO 대조 ± SEM으로 나타내었다.

사이토카인 수준을 시험 화합물의 양이 존재할 때 생산된 양으로 표준화하고, EC₅₀ 값을 최고점을 100%로, 최하점을 0%로 제한한, 가변성 기울기를 허용하는, S자형 용량-반응의 비선형 회귀를 사용하여 계산하였다(그래프패드 프리즘 v3.02).

항- CD3 -자극 인간 T 세포 검정

모든 96-웰 플레이트를 37℃에서 4시간 동안 1X PBS 100μL중의 3 μg/ml 항-인간 CD3 항체로 예비코팅하였다. T 세포 검정에 앞서 상기 플레이트를 RPMI-1640 완전배지로 3회 세척하였다. 그 후, T 세포를 RPMI-1640 완전 배지 180 μL 중에 2.5 x 10⁵ 세포/웰의 밀도로 항-CD3 예비코팅된 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 10X 적정된 셀진(Celgene) 화합물 20μL로 10, 1, 0.1, 0.01, 0.001, 0.0001 및 0.00001μM에서 이중으로 처리하였다. 최종 DMSO 농도는 0.25%였다. 플레이트를 48 시간 동안 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 48 시간 후에, 상청액을 수확하여 다음의 사이토카인/케모카인에 대해 다중 혈구계산 비드 어레이(CBA) 검정으로 시험하였다: IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, IL-15, IL-17A, GM-CSF, G-CSF, IFN-γ, TNF-α 및 RANTES. CBA 플레이트를 루미넥스 IS100 장치에서 분석하였다.

8.2. 웨스턴 블롯 분석

세포주를 표준의 세포 배양 기술을 사용하여 유지하였다. 내인성 Aiolos 발현을 위해, 3 mL 부피의 배지에서 6웰 플레이트에 웰당 0.5e6 세포수로 세포를 씨드하였다. 세포가 플레이트에 부착되도록 밤새 놓아두었다. 세포를 0 내지 24시간 또는 5일 동안 0, 1, 및 10μM CC-122에 노출하였다.

일부 실험에서, 배치 법(batch method) 중 리포펙타민(Lipofectamine) 시약을 사용하여 세포주를 Aiolos 과발현 벡터로 트렌스펙션시켰다. 세포를 12 웰 플레이트에 웰당 3 mL 부피의 1e5 세포로 씨드하였다. 구체적으로, 세포를 10μM의 MG132로 1시간 동안 전처리 하거나, DMSO를 대조군으로 첨가하였다. 전처리에 이어서, CC-122를 특정 농도로 세포 배양 배지에 직접 첨가하였다.

세포를 수확하여, Pierce #78442로부터의 2x 프로테아제 억제제 칵테일을 함유한 Pierce #89900 Ripa 버퍼에 용해시켰다. 용해물을 QiaShredder에 적용하여 DNA를 제거하였다. 바이오 래드(Bio Rad) DC 단백질 결정 키트를 사용하여 총 단백질 수율을 측정하였다(Cat#500-0112).

샘플을 바이오래드 크리테리온 프리캐스트 겔(BioRad Criterion PreCast gels), 10%(Bio-Rad #345-0010)에 적용하고, 바이오-래드 니트로셀룰로오스/필터 페이퍼 샌드위치(Bio-Rad Nitrocellose/Filter Paper Sandwiches) #162-0233에 옮겼다. 0233 및 Aiolos 단백질 발현을 Aiolos 항체로 측정하고, LiCor 장치에 의해 판독하였다.

8.3 Aiolos 항체의 접합과 시험( Conjugation and Testing of Aiolos Antibody )

본 실시예는 본원에서 제공되는 방법의 특정 실시양태에서 사용되는 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 647과 Aiolos 항체와의 접합 및 접합된 항체에 대한 시험을 설명한다. 간단하게, Aiolos 0-21 래빗 다중클론 항체(SantaCruz Cat# sc-101982) 또는 다른 적합한 다중 또는 단일클론 항체들을 알렉사 플루오르 647과 직접 접합하고, 그 후 양성(말초 혈액) 및 음성 대조 세포주에 대한 특이성을 시험한다. 세포들을 BD 용해/고정(Lyse/Fix), 이어서 BD 투과(Perm) 버퍼 I로 고정시킨다. 항체의 특이성은 시험 화합물과 함께 또는 시험 화합물 없이 수행된다.

먼저, 100μg의 정제된 항체들을 5 몰 초과(molar excess ME) 및 10 ME의 알렉사 플루오르 647과 접합시켜, 최적의 접합 상태를 결정한다. 접합 후의 특이성은 각 시험의 접합 및 정제된 항체 0.5μg를 각각 특정 단백질 차단제와 배양하여 결정한다. 정상 전혈 세포(양성 대조) 및 HEK-923 세포(음성 대조)를 (차단제와 함께 또는 차단제 없이) 접합 및 정제된 항체로 각각 가공 및 염색한다. 정제된 시약은 적합한 항-종(anti-species) 2차 알렉사 플루오르 647과 함께 성장한다. 신호대 잡음비 및 특정 형광 비율(flurescence percentage)을 결정한다. 접합된 항체 및 정제된 항체에 대한 신호대 잡음비 및 특정 형광 비율이 비슷하다면, 형광 염료 및 항체에 대한 최적의 몰 비율이 결정된다. 정제된 항체의 신호는 최적의 몰 비율에서 접합된다. 포화 결정을 위해 접합된 항체의 적정 완료는 시험 화합물로 처리되거나 또는 처리되지 않는 정상 전혈 세포에서 수행된다.

8.4. 세포의 고정 결정( Fixation Determination for Cells )

목적: PBMCs에서의 표면 마커의 발현을 유지하면서 관심있는 모든 마커의 검출을 위한 최적의 방법을 결정하기 위함이다. PBMCs 또는 신선한 정상 제공 전혈을 대조 담체 또는 본원에서 제공되는 화합물 1 micomolar로 2시간 동안 처리한 후, 하기와 같이 가공한다. 처리되지 않은 MM-BMMCs 또한 사용된다.

냉동 PBMCs(대조군 및 처리군), 신선한 정상 공여자의 전혈(대조군 및 처리군), 및 냉동 MM-BMMCs(처리되지 않는것)을 해동한 후 하기의 고정/투과성화 방법중 하나에 의해 고정시킨다: (1) BD 용해/고정 + 투과 버퍼 Ⅰ; (2) BD 용해/고정 + 투과 버퍼 Ⅱ; 또는 (3) 에소테릭스(Esoterix) 소유의(Proprietary) 고정제

8.5. 검정 안정성

신선한 정상 공여자의 전혈 샘플의 안정성을 조사하였다. 다섯명의 정상 공여자의 전혈 샘플(기저 발현)을 이전 실시예에서 결정된 방법으로 채혈 및 고정하였다. 고정된 샘플들을 두개의 표본으로 나누었다. 하나의 표본은 4℃에서 1시간 동안 두고, 다른 표본은 -20℃에서 1시간 동안 두었다. 이들 샘플들을 즉시 시험 하였다(0일). 남은 표본들을 4℃ 또는 -20℃에서 저장하고, 1일 생체외(ex-vivo), 2일 생체외 및 3일 생체외에서 시험하였다.

5명의 상이한 공여자의 정상 전혈에서의 Aiolos의 기초 차이를 분석하여, 샘플들의 생물학적 변이성(biological variability)을 시험한다.

8.6. 검정 내( Intra - Assay ) 재현성 및 실험자 간( Inter - Operator ) 정확성

검정의 반복성을 결정하기 위해, 상기 안정성을 위해 시험한 것과 동일한 5-NWB(5명의 정상 전혈) 샘플들을 한 시점에 3회 시험하였다. 이 샘플들을 0일째에 4℃의 예비샘플에서 3번 시험하였다. 실험자 간(Inter-operator) 정확성을 시험하기 위해, 동일한 샘플이 2번째 실험자에 의해 같은날에 가공되었다. 분석은 CD19+a, CD3+ 및 총 CD45+ 림프구 집단 내 및 (MEFL에서 보고된) Aiolos 정량 발현 수준을 포함한다. 평균, 표준편차 및 %CV는 반복실험 간 및 실험자 간에 계산된다.

8.7. 세포주의 FACS 분석에 의한 Aiolos 결정( Aiolos Determination by FACS Analysis Cell Lines )

본 실시예는 FACS 분석법을 사용한 세포주 및 PBMCs에서의 Aiolos 결정을 설명한다.

재료: BD 고정 버퍼Ⅰ(Fix BufferⅠ)(cat# 55870); BD 투과 버퍼Ⅲ(Perm Buffer Ⅲ)(cat# 558050); BD 염색 버퍼(Stain Buffer)(cat# 554657); Anti-IKZF3 항체(Santa Cruz lot # B1612) 및 2차 항체(BD FITC Goat Anti-Rabbit Ig cat# 554020)

검정 과정

상기 고정 버퍼Ⅰ을 사용하기 전, 인큐베이터 또는 워터 배스에서 37℃ 까지 가온하였다. 상기 투과 버퍼 Ⅲ을 사용하기 전, -20℃의 냉동고에서 냉각시켰다. 시험 화합물로의 처리 마지막에 세포들을 회수하였다. 예비-가온된 고정 버퍼Ⅰ 일 부피를 일 부피의 세포 현탁액과 혼합하였다. 세포 현탁액의 부피가 100μL보다 크다면, 세포들을 회전시켜 100μL 배지 또는 PBS에서 재현탁시킨다. 버퍼 및 세포 현탁액을 잘 혼합하여 37℃ 워터 배스에서 10분 동안 배양하였다. 세포들을 250 x g에서 10분간 회전분리(spin down)하고, 상청액을 흡인하였다. 세포들을 BD 염색 버퍼로 한번 세척하였다. 펠렛을 회전하고 상청액을 제거하였다. 세포들을 볼텍스하여 느슨하게하고, 볼텍싱 또는 혼합하면서 차가운 투과 버퍼 Ⅲ을 천천히 첨가하여 투과성 있게 만들었다. 그 뒤에, 세포들을 얼음에서 30분 동안 배양하였다. 세포들을 회전분리하고, 염색 버퍼로 두번 세척하였다. 상청액을 회전하고 흡인하였다. 세포들을 작은 부피의 염색 버퍼(200,000 내지 1,000,000개의 세포를 함유하는 50 또는 100μL)에서 재현탁 하였다. 항-IKFZ3 항체를 1:1000 희석으로 세포 현탁액에 첨가하고 4℃에서 45분 동안 배양하였다. 그 후, 세포들을 원심분리하고 염색 버퍼로 한번 세척하였다. 2차 항체를 1:5000 희석으로 세포에 첨가하고 암실에서 20분간 실온으로 배양하였다. FACS로 분석하기 전에, 세포들을 염색 버퍼로 한번 세척하였다.

9 결과

지질다당류(lipopolysaccharide, LPS)-자극 인간 말초 혈액 단핵 세포(hPBMC) 시토카인/케모카인 생산에 대한 시험 화합물(레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온)의 억제 효과는 상기 시험 화합물이 다양한 효능으로 IL-6, IL-8, IL-1β, GM-CSF, MDC, MIP-1α, MIP-1β, 및 TNF-α 생산을 억제함을 보여준다(표 1). 데이터는 또한, 시험 화합물이 IL-10, MCP-1, 및 RANTES의 생산 향상에 효과적임을 보여준다(표 2). 주어진 데이터는 기재된 사이토카인의 IC₅₀ 값(μM)이다.

표 1 시험 화합물의 시토카인 억제 프로파일 요약

표 2 시험 화합물의 사이토카인 프로파일 요약

9.1 Aiolos 발현에 대한 효과

림프구(왼쪽 구획), 과립구(상층 구획) 및 단핵구(오른쪽 구획)에서 Aiolos의 발현을 억제하는 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온의 효과가 도 1에 나타나 있다. 도 2 및 도 3에 각각 나타나 있듯이, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온은 CD20+ B 세포 및 CD3+ T 세포에서의 Aiolos 발현을 현저하게 억제한다.

250 nM의 화합물로 18 시간 동안 처리된 인간 전혈에 대한 웨스턴 블롯 분석이 도 4에 나타나 있으며, 같은 조건으로 마우리티우스 원숭이(Mauritius Monkey)의 PMBCs에 대한 분석이 도 5에 나타나 있다. (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온은, 처치한지 18시간 이후, Aiolos의 발현을 억제하였다.

(S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온를 사용한 사이노몰구스 원숭이(Cyno Monkey)에 대한 연구는 다음의 처치 요법으로 수행되었다.

간단하게, 4가지 처치 그룹을 배정하였고, 각각은 상기 특정된 투여 스케쥴 및 용량에 따라 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온에 의해 처치되었다. 그 결과는 도 6 내지 도 9에 나타나 있으며, Aiolos 발현에 대한 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온의 효과는 투여 요법에 따라 달라질 수 있지만, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온은 일반적으로 Aiolos의 발현을 억제함을 보여주었다.

또한, Aiolos의 발현에 대한 화합물 A 및 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 레날리도마이드("len") 및 포말리도마이드("pom")의 효과도 평가하였다. 화합물 A는 프로테아좀 억제제가 없을 때 60, 120, 240, 500 및 100 nM의 농도에서 Aiolos의 발현을 억제함을 보여주었지만, 프로테아좀 억제제가 존재하면 억제가 거의 관찰되지 않았다. 도 10에 나타나 있듯이, len, pom, 화합물 A 및 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 모두가 Aiolos 발현의 억제 효과를 보였다. 억제 효과는 화합물의 골수종 세포에서의 항-증식 활성과 상관관계가 있다고 보인다.

포말리도마이드를 사용하면 저 세레브론 발현 세포에서는 Aiolos 발현의 억제가 거의 없거나 완전히 없는 것으로 보인다(도 11). 마찬가지로, 세레브론의 결손은 레날리도마이드 또는 포말리도마이드에 의한 Aiolos 발현의 하향 조절을 막는 것으로 나타나며(도 12), 본 과정에서 세레브론이 관련되어 있음을 시사한다. 마지막으로, Aiolos 녹-다운(knock-down)은 p21 발현의 유도, IRF4의 감소, 및 S 상 세포 수의 감소를 보였다(도 13 및 도 14).

9.2 유방암 새포의 내인성 Aiolos 에 대한 화합물 A의 효과

세포주(AU565, ZR 75-1, BT-474, EFM-192A, HCC1954, HCC70, MB436 및 BT549)를 표준의 세포 배양 기술을 사용하여 유지하였다. 내인성 Aiolos 발현을 위해, 3 mL 부피의 배지에서 6웰 플레이트에 웰당 0.5 x 10⁶ 세포수로 세포를 씨드하였다. 세포가 플레이트에 부착되도록 밤새 놓아두었다. 세포는 0 내지 24시간 또는 5일 동안 특정된 양의 시간에 0, 1, 및 10μM의 화합물 A에 노출하엿다.

일부 실험예에서, 배치 법(batch method) 중의 리포펙타민(Lipofectamine) 시약을 사용하여 세포주를 Aiolos 과발현 벡터로 트랜스펙션시켰다. 세포를 12 웰 플레이트에 웰당 3 mL 부피의 1x10⁵ 세포로 씨드하였다. 구체적으로, 세포를 10μM의 MG132로 1시간 동안 전처리 하거나, DMSO를 대조군으로 첨가하였다. 전처리에 이어서, 화합물 A를 특정 농도로 세포 배양 배지에 직접 첨가하였다.

세포를 수확하여, Pierce #78442로부터의 2x 프로테아제 억제제 칵테일을 함유한 Pierce #89900 Ripa 버퍼에 용해시켰다. 용해물을 QiaShredder에 적용하여 DNA를 제거하였다. 총 단백질 수율은 바이오 래드 DC 단백질 결정 키트를 사용하여 측정하였다(Cat#500-0112). 용해물은 -80℃에서 사용될 때까지 저장되었다. 웨스턴 블롯 분석을 위해 샘플을 바이오래드 크리테리온 프리캐스트 겔(BioRad Criterion PreCast gels), 10%(Bio-Rad #345-0010)에 적용하고, 바이오-래드 니트로셀룰로오스/필터 페이퍼 샌드위치(Bio-Rad Nitrocellose/Filter Paper Sandwiches)(#162-0233)에 옮겼다.

도 15에 나타나 있듯이, 처리 후 24시간이 경과하면, 화합물 A는 ZR 75-1 및 AU565 세포주 모두에서 Aiolos의 수준(60 kD 근처에서 나타나는 밴드)을 감소시켰다. 특정 실험예에서, flag-Aiolos-myc 융합 단백질이 AU565 세포에서 과발현되며, 세포는 화합물 A로 처리되었다. 이러한 경우에, 항-myc 항체를 사용한 웨스턴 블롯 분석은 65 KD 근처에서 하나의 Aiolos 밴드를 제공하였고, 반면 같은 분석에서 항-flag 항체를 사용한 경우 다중 밴드가 제공되었다. 추가로, 화합물 A로 처리된지 5시간 경과 후 과발현된 Aiolos의 감소가 나타나기 시작하며, 화합물 A에 의한 Aiolos의 억제는 프로테아좀 억제제인 MG-132를 첨가하여 회복됨을 발견하였다. 마지막으로, 내인성 Aiolos는 Her2⁺ 세포(AU565, BT-474, EFM-192A 및 HCC1954) 내의 화합물 A에 의하여 억제되지만, 삼중 음성 세포(HCC70, MB436 및 BT549)는 억제되지 않음이 나타났다. 이러한 결과는 Aiolos가 화합물 A에 의하여 억제되며, 그리하여 화합물 A에 의한 치료의 바이오마커로 사용될 수 있음을 제시한다.

9.3 Aiolos 및 Ikaros 발현에 대한 화합물의 효과

Aiolos 및 Ikaros의 발현에 대한 시험 화합물(포말리도마이드, 레날리도마이드, 화합물 A 및 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온)의 효과를 화합물에 의한 처치의 6시간 경과 후, 상기 기재된 웨스턴 블롯팅과 연관된 사용과 유사한 과정을 사용한 웨스턴 블롯 분석으로 평가하였다. 시험 화합물이,각기 다른 정도로, Aiolos 및 Ikaros 모두의 발현을 저해하는 것으로 나타났다(도 15 참조).

10. 임상 연구에서 종양 유형 선택의 정당성( Justification for Tumor Type Selection in Clinical Studies )

화합물 A의 시험관내(in vitro)와 생체내(in vivo) 활성에 차이가 있다. 종양 세포에 대한 직접 시험관내 활성은 제한적이지만, 반면 U87 (GBM), H929 (MM) 및 WSU-DLCL2 및 DOHH2 (비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's Lymphoma, NHL))을 포함하는 이종 이식(xenografts)에서는 단일제 활성이 관찰된다. 이러한 차이는 화합물 A의 활성이 면역 조절 및/또는 항-혈관생성 및 기질 효과를 통한 숙주에 대한 효과와 부분적으로 매개되어 있음을 제시한다.

화합물 A는 DLBCL 세포에서의 NFKB DNA 결합 활성을 부분적으로 억제한다. 그러므로, 화합물 A HCl은 유방암과 같이 NFKB 경로가 종양형성과 관련되어 있는 종양에서 조사될 것이다(Boehm, J. S.; Zhao, J. J.; Yao J. et al. Cell 2007, 129, 1065-1079). 화합물 A는 또한, 저산소증에 대한 반응에 의한 HIF1α 유도를 억제하며, 염증성 유방암의 탐구에 있어서 강력한 생물학적 근거를 제공한다(Brito, L. G. O., Clinical Science 2011, 66, 1313.). 추가적인 종양 유형 선택의 정당성은 활성의 신호 또는 임상 연구에서의 약력학적(PD) 마커 분석에서 수집되는 데이터로부터 획득될 수 있다. PD 마커 분석은 화합물 A HCl의 투여 전 또는 투여 후의 유전자 시그니처(gene signature) 프로파일링 또는 단백질 분석(예를 들어, NFKB, IRF4)을 포함할 수 있는데, 이는 반응 또는 반응이 예측되는 변화에 대한 예측되는 특성을 제공할 수 있다.

11. 고형 종양 모델

다양한 조직(예를 들어, 유방, 난소, 결장직장, HCC)으로부터의 고형 종양 세포주에 대한 화합물 A의 효과에 대하여 평가하였다. 화합물 A는 다수의 그러한 고형 종양 세포주에서 저산소증-유도성 HIF1-α 발현을 억제한다. 또한, 화합물 A는 다양한 정도로 고형 종양 세포의 침습을 억제하고(표 3) 세포 콜로니 형성을 억제한다(표 4). 고형 종양 세포 콜로니 형성의 억제를, 1일째에 화합물 A의 단일 고농도 처리(10 μM)에 이어서, 10 내지 20일에 걸쳐서 세포 콜로니 형성을 모니터링함으로써 연구하였다.

표 3: 고형 종양 세포의 침습에 대한 화합물 A의 효과

표 4: 고형 종양 세포의 콜로니 형성에 대한 화합물 A의 효과

a: 화합물 A 10μM

*: p<0.5; **: p<0.001( DMSO 대비)

12. 투여량 연구( DOSAGE STUDY )

GLP 28-일 랫트 및 원숭이 연구에서 발생하는 주된 치료-연관 효과에서 드러난 것에 기초하여(표 5), 사이노몰구스 원숭이(cynomolgus monkey)가 화합물 A의 투여와 관련된 독성에 더 감수성인 것으로 생각된다. 따라서, 원숭이의 HNSTD(0.5 mg base/kg/day 또는 6 mg/m²)가 화합물 A의 최초 임상 연구의 초회 투여량(starting dose)의 추정에 사용하기 더 적합한 투여량이라고 생각된다. HNSTD 및 ICH S9에서 암 연구 환자에게 권장되는 6-배 마진에 기초하여, 초회 인간 투여량은 1.7 mg base 만큼 높을 수 있다(표 5). 그러나, 화합물 A의 약리학적 모델 및 시험관내 효능에 기초하면, 30-배의 마진 노출이 예측되는 결과와 함께 0.5 mg의 초회 투여량의 화합물 A HCl(0.44 mg 유리 염기 당량)가 제안된다(도 16 참조).

표 5: 28-일 독성 연구로 부터의 랫트 STD10 및 원숭이 HNSTD 에 기초한 임상적 초회 투여량

HNSTD = 심각한 독성이 발생하지 않는 최대 투여량(highest non-severely toxid dose); HED = 인간 등가 용량(human equivalent dose); STD10 = 동물의 10%에서 심각한 독성을 일으키는 투여량(severely toxid dose in 10% of animals)

a " Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers."라는 제목의 July 2005 FDA Guidance for Industry의 변환 인자(conversion factor)

b dose/사람은 60-kg의 인간 신체 무게를 기초로 계산하였다.

c October 2009 ICH Harmonized Tripartite Guideline: "S9 Nonclinical Evaluation for Anticancer Pharmaceuticals,"에 기초하여 인간에게 처음 투여시의 초회 투여량은 설치류 STD10의 10분의 1, 또는 만약 비-설치류가 가장 적합한 종이라면 HNSTD의 6분의 1이어야 한다.

상대성장 스케일링(allometric scaling)에 기초하여 유도된 혈장 청소율 및 분포 용적 값을 사용하고, 인간의 경구 생체이용률을 82%로 가정하여, 0.5 mg 화합물 A/HCl/일로 계획된 인간 초회 투여량에서의 예측되는 C_max 및 0 부터 24시간 까지의 곡선 아래 면적(AUC_24hr)은 각각 5.5 ng/mL 와 62 ng·hr/mL 이다. 예상했던 인간 초회 투여량에서의 화합물 A HCl에 대한 전신 노출(systemic exposure, AUC_24hr)은 랫트의 STD10에 비해 대략 1160-배 낮고, 원숭이의 HNSTD에 비해 대략 30-배 낮다.

계획된 인간 초회 투여량(0.5 mg 화합물 A/HCl/일)에서 예측되는 혈장 농도( 5.5 ng/mL의 C_max 및 62 ng·hr/mL의 AUC_24hr)는 면역 조절((T 세포 IL-2 EC₅₀　= 14 nM; 4　ng/mL), 항-증식(OCI-LY10 세포주 IC₅₀ = 8.5 nM; 2.4　ng/mL), 및 혈관생성 억제(인간 제동맥 분석 IC₅₀ = 9.4 nM; 2.7　ng/mL)에 대한 많은 시험관내 EC₅₀ 및 IC₅₀ 값의 범위 안이다.

13. 임상 프로토콜

레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온 및/또는 다른 면역조절 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체, 및/또는 다른 면역조절 화합물이 IBC인 대상체에 경구투여되었을 때의 안전성, 용인성, 약동학 및 유효성을 결정하기 위한 1a/1b 상 임상 연구가 제공된다. 비-용인 용량(NTD), 최대 용인 용량(MTD) 및 권장 2상 용량(RP2D)이 상기 연구에서 결정된다. 치료전 및 치료중의 종양 생검물에서 혈관생성의 바이오마커에 대한 상기 화합물의 효과가 평가될 것이다.

연구 디자인

연구는 2개의 파트로 구성된 1a/1b상 연구로 디자인된다: 용량 증가(파트 A), 및 용량 확장(파트 B). 파트 A에서, 약동학(PK)을 측정하고 최대 용인 용량(MTD) 및 권장 2상 용량(PR2D)를 확인하기 위해, 대상체는 단일 및 다중 상승 용량의 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온, 및/또는 다른 면역조절 화합물을 받을 것이다. 표준 용량 (3+3) 증가 디자인(Simon 등, 1997)은 초기 독성을 확인하기 위해 사용될 것이다. 3명의 대상체의 초기 코호트(cohort)에 제1 주기에서 약물-관련된 것으로 의심되는 3등급 이상의 독성의 최초 발생시까지 100%의 용량 증분으로 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온, 및/또는 다른 면역조절 화합물을 (1일 1회 0.5 mg) 제공할 것이고, 그 시점에서 특정의 코호트는 총 6명의 대상체로 확대될 것이다. 이러한 표준 증가 스케쥴은 비-용인 용량(NTD) 및 MTD를 확인하기 위해 개시될 것이다. 더 적은 증분 및 용량 코호트 내의 추가적 대상체는 또한 안전성을 위해 평가될 수 있다. 대략 20 내지 40 대상체가 파트 A에서 처리되고 평가된다; 그러나 파트 A의 대상체의 총 수는 MTD를 확인하기 위해 필요한 용량 코호트의 수에 의존한다. 코호트 내 6명의 평가가능한 대상체 중 2명 이상이 주기 1 동안 약물-관련된 용량 제한적 독성(DLT)를 경험할 때 용량은 NTD로 간주될 것이다. NTD가 확인되면, 용량 증가를 중단할 것이다. MTD는 6명의 평가가능한 대상체 중 0 또는 1명이 주기 1 동안 DLT를 경험하는 NTD보다 낮은 마지막 용량 수준으로 정의된다. 보다 정확하게 MTD 및 RP2D를 결정하기 위해 중간 용량(즉, NTD와 NTD 전 마지막 용량 수준 사이의 어느 하나) 또는 임의의 용량 코호트 내에서 추가의 대상체가 필요할 수 있다.

파트 B에서, 대상체는 파트 A로부터의 안전성, PK 및/또는 PD 데이터에 기초하여 MTD 및/또는 보다 낮은 용량 수준에서 투여를 시작할 수 있다. 종양 유형에 의해 계층화된 대략 100명의 대상체(코호트 당 20명까지)가 치료되고 요법의 매 2회 주기 후 안전성 및 항종양 활성에 대해 평가될 것이다. 또한, 적절한 용량, 용량들 또는 스케쥴이 결정될 것이다. 파트 B 동안, 연구 지속이 적절한지에 관하여 안전성 데이터가 정기적으로 검토될 것이다.

연구 집단

유방암인 18세 이상의 여성으로, 표준 요법을 진행하였거나(또는 용인할 수 없었거나) 또는 표준 항암 요법이 존재하지 않는 대상체를 포함한다.

투여 및 연구의 기간

제1 주기 동안, 파트 A에서만, 각 대상체를 1일째에 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온, 및/또는 다른 면역조절 화합물의 단일 1회 투여량으로 투여하고, 48-시간 관찰 및 PK 샘플 추출 기간이 후속되고, 1일째에 이어서 28일 동안 매일 연속된 투여가 후속된다(주기 1 = 30 일). 다음의 파트 A 주기에서, 대상체를 1일째부터 28일째까지 연속된 투여로 28-일 주기 동안 치료한다. 화합물 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온 화합물, 및/또는 다른 면역조절 화합물은 초기 투여량에서 0.1, 0.5, 1, 2, 4 ,5, 7.5, 10, 20, 25, 또는 50 mg의 투여량으로 1일 1회 또는 2회 제공될 것이다. 투여량은 0.1, 0.5, 1, 2, 4, 5, 7.5, 10 mg으로 1일 1회 제공될 수 있다. 투여량은 50, 25, 또는 10 mg으로 1일 2회 제공될 수 있다. 투여량은 치료기간 동안 초회 투여량보다 높게, 또는 낮게 조절될 수 있다. 상기 기재한 바와 같이, 필요하다면, 약물은 순환 방식으로 제공될 수 있다.

파트 B에서, 대상체는 처음부터 28일 동안 연속된 투여를 받는다 - 초기 단일 투여량 후의 48-시간 PK 수집 기간이 없다.

질병 진행의 증거, 허용될 수 없는 독성 또는 대상체/의사의 중단 결정이 있다면 치료는 중단될 것이다. 조사관이 판단했을 때 대상체가 이득을 얻는 한 대상체는 중단 없이 화합물을 계속해서 받을 수 있다.

등록은 대략 24 개월이 걸쳐 발생할 것으로 예상된다. 유효 치료 및 대상체 사후관리의 완료는 추가로 3 내지 6개월이 걸릴 것으로 예상된다.

연구 치료

셀진 코포레이션은 예를 들어, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온, 및/또는 다른 면역조절 화합물을 포함하는 화합물을 경구투여를 위한 0.1 mg, 0.5 mg, 1 mg 및 3 mg의 캡슐제로 공급할 것이다. 상기 화합물은 28일간 약물이 들어있는 박스 내부의 병에 포장될 것이다.

파트 A(용량 증가 단계)에서, 용량 수준은 단일 PK 용량 후 1일 1회 0.5 mg으로 시작할 것이다. 첫 번째 용량을 임의의 코호트 내 마지막 대상체에게 투여한 후, 대상체를 최소 30일 동안 관찰한 다음에, 더 고용량의, 프로토콜-특정 용량 코호트를 시작할 수 있다. 책임 조사관 및 셀진의 의료 모니터로 구성될 안전성 검토 위원회(Safety Review Committee, SRC)에 의해 승인되지 않는 한, 대상체 내 용량 증가는 허용되지 않는다.

파트 B에서, 대상체는 파트 A로부터의 안전성, PK 및 PD 평가에 기초한, MTD 및/또는 더 낮은 용량 수준의 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 화합물 A, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 및/또는 다른 면역조절 화합물을 받을 수 있다. 대략 100명의 대상체(최대 20명인 사전에 선택된 종양 유형의 그룹)가 안전성 및 항종양 효과에 대해 평가될 것이다.

유효성 평가의 개요

대상체는 매 2 주기 후에 유효성에 대해 평가될 것이다. 1차 효능 변수는 반응이다. 종양 반응은 고형 종양의 반응 평가 기준(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, RECIST 1.1), 또는 GBM에 대한 신경-종양학 반응 평가(Responses Assessment for Neuro-Oncology, RANO) 조사위원회를 기초로 할 것이다.

2차/탐색 종점은 혈액 및 종양의 바이오마커 측정, 병리조직학적 반응 및 약리유전체학적 발견과의 상관관계를 포함한다. 보충적 효능 변수(예를 들어, ECOG 활동도, PET 결과) 또한 검사될 것이고; 추가로, DCE-MRIs를 사용하여 부피 이동 상수(Ktrans) 및 초기 AUC(IAUC)에 의해 저혈관형성(hypovascularization) 변화가 측정될 것이다.

안전성 평가의 개요

이 연구에 대한 안전성 변수는 유해 사례(adverse events), 임상 실험적 변수, 12-lead ECGs (중심적으로 검토됨), LVEF 평가, 신체검사 및 바이탈 사인(vital sign)이다.

약동학 평가의 개요

본원에서 제공되는 화합물 및 그 대사물의 PK 프로파일은 1차 치료 주기 동안 일련의 혈액 및 소변 수집물로 부터 결정될 것이다. 가능한 경우 이들은 약력학(PD) 결과와 상관관계가 있을 것이다.

상기 제시된 실시예들은 청구하는 실시양태들을 어떻게 제조하고 사용하는지에 대한 완전한 개시 및 설명을 이 분야 통상의 기술자에게 주기 위해 제공된 것으로, 본원에서 개시된 발명의 범위를 제한하려는 의도는 아니다. 통상의 기술자에게 자명한 변형은 후술하는 청구항의 범위 내인 것으로 의도된다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허, 및 특허출원은, 그러한 각 간행물, 특허 또는 특허출원이 본원에 참고로 포함되는 것으로 구체적이고도 개별적으로 지시된 것처럼 본원에 참고로 포함된다.

Claims (28)

1. 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체 중에서 선택되는 화합물의 치료적 유효량을 국소 진행성 유방암의 치료 또는 관리를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 국소 진행성 유방암의 치료 또는 관리 방법.
2. 제1항에 있어서, 국소 진행성 유방암이 염증성 유방암인 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 암이 재발성 또는 난치성인 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 약물-내성인 방법.
5. 제1항에 있어서, 화합물이 레날리도마이드, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
6. 제1항에 있어서, 화합물이 포말리도마이드, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
7. 제1항에 있어서, 화합물이 탈리도마이드, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
8. 제1항에 있어서, 화합물이 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
9. 제1항에 있어서, 화합물이 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-(옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
10. 제1항에 있어서, 화합물이 (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
11. 제1항에 있어서, 화합물이 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
12. 제1항에 있어서, 화합물이 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
13. 제1항에 있어서, 화합물이 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 염, 용매화물 또는 수화물인 방법.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 추가적 활성제의 치료적 유효량의 투여를 추가로 포함하는 방법.
15. 제14항에 있어서, 추가적 활성제가 파클리탁셀, 독세탁셀, 단백결합 파클리탁셀, 5-아자시티딘, 카페시타빈, 겜시타빈, 로미뎁신, 보리노스타트, 파노비노스타트, 발프론 산, 벨리노스타트, 엔티노스타트, 트라스주맙, 트라스주맙 엠탄신, 라파티닙, 베바시주맙, 퍼투주맙, 독소루비신, 다우노루비신, 미토산트론, 암사크린, 아우린트리카르복시산, 이리노테칸, 토포데칸, 캄토테신, 라멜라린 D, 에토포시드, 테니포시드, 타목시펜, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 나비토클락스, Bcl-2 억제제, 및 PI3K/AKT/mTOR 경로 억제제로 구성된 그룹 중에서 선택되는 방법.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 1일 약 0.5 내지 약 50 mg의 양으로 투여되는 방법.
17. 제16항에 있어서, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 1일 약 0.5 내지 약 5 mg의 양으로 투여되는 방법.
18. 제16항에 있어서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 1일 약 0.5, 1, 2, 4, 5, 10, 15, 20, 25 또는 50 mg의 양으로 투여되는 방법.
19. 제16항에 있어서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 경구 투여되는 방법.
20. 제16항에 있어서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 캡슐 또는 정제로 투여되는 방법.
21. 제16항에 있어서, 화합물이 10mg 또는 25mg의 캡슐로 투여되는 방법.
22. 제1항에 있어서, 화합물이 28일 주기에서 21일 투여되고 이어서 7일 휴약되는 방법.
23. (ⅰ) 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체 중에서 선택되는 화합물로의 치료에 감수성인 국소 진행성 유방암 환자의 식별 단계; 및
    (ⅱ) 단계(ⅰ)에서 선택된 화합물의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 국소 진행성 유방암의 치료 또는 관리 방법.
24. 제23항에 있어서, 국소 진행성 유방암이 염증성 유방암인 방법.
25. 제23항 또는 제24항에 있어서, 치료에 감수성 있는 국소 진행성 유방암 환자의 식별이 암 내부의 CRBN, Aiolos(IKZF3) 또는 Ikaros(IKZF1) 발현의 발현 수준을 검출하는 것을 포함하는 방법.
26. 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 또는 이의 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정형, 포접체, 또는 다형체의 투여에 대한 임상적 반응의 예측, 임상적 반응의 모니터링, 또는 환자 순응도의 모니터링을 할 목적으로 암 내부의 CRBN 발현 수준, 또는 Aiolos(IKZF3) 또는 Ikaros(IKZF1) 발현 수준에 기초하여 국소 진행성 유방암 환자군을 선택하는 방법.
27. CRBN 유전자 내의 돌연변이의 존재 또는 출현에 기초하여, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, (S)-3-(4-((4-(몰폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온, 3-(1-옥소-4-(4-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)벤질옥시)이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에톡시)-벤질옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-피페리딘-2,6-디온, 및 3-(4-(4-(2-몰폴린-4-일-에틸)-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-피페리딘-2,6-디온 치료법에 내성인 국소 진행성 유방암 환자를 식별 또는 모니터링 하는 방법.
28. 제27항에 있어서, CRBN 유전자가 Aiolos(IKZF3) 또는 Ikaros(IKZF1)인 방법.
    
    

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