CN104781276A - 肽-树枝状聚合物结合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及结合至多种靶向肽和一种或多种治疗剂、诊断剂或显像剂的、用于将这些试剂递送穿过血-脑屏障并且进入某些细胞类型的树枝状聚合物，该细胞类型包括表达LRP-1受体的细胞。还描述的是制造包含结合至靶向肽和治疗剂、诊断剂或显像剂的树枝状聚合物的化合物的方法。

Description

肽-树枝状聚合物结合物及其用途
相关申请的引用
本申请要求于2012年8月14日提交的美国序列号US 61/682,991的权益，通过引用将其内容结合于此。
技术领域
本发明涉及包含结合至靶向肽和一种或多种治疗剂、诊断剂或显像剂的树枝状聚合物(dendrimer)的化合物，并且涉及这些化合物的用途。
背景技术
大脑通过两种屏障系统：血-脑屏障(BBB)和血-脑脊液屏障(BCSFB)的存在屏蔽潜在的毒性物质。认为BBB是用于摄取血清配体的主要途径，因为它的表面积是BCSFB的表面积的大约5000倍大。构成BBB的脑内皮代表对使用潜在药物治疗许多CNS的病症的主要障碍。一般规律是，仅小的亲脂性分子可以穿过BBB，即，由循环系统血液至大脑。具有较大尺寸或较高疏水性的许多药物在用于治疗CNS病症的动物研究中示出有希望的结果。因此，由于脑毛细血管内皮壁对这些试剂的忽略不计的渗透性，肽试剂和蛋白试剂(如用作治疗剂的那些)一般被从血液至脑的运输所排除。
脑疾病的治疗可以由于另外的有效试剂(如治疗剂)不能穿过BBB而减弱。因此，需要用于将试剂高效地运输至脑的新策略。
发明内容
我们现在已经开发出包含结合至不同数量的靶向肽的树枝状聚合物的化合物。这些化合物能够以升高的效率穿过血-脑屏障(BBB)或进行特定的细胞类型(例如，肝、肺、脾、肾和肌肉)。当这些化合物与一种或多种试剂(例如，治疗剂或诊断剂)结合(例如，结合)时，与直接连接至靶向肽的试剂的运输相比，穿过BBB或特定细胞类型的试剂的传输效率升高。本发明还提供生产这种化合物的方法和这种化合物在疾病治疗中的用途。
第一方面，本发明提供包含下式的化合物：
其中，D是第一试剂；X核心是具有p个分枝的树枝状聚合物的核心部分，其中，p是1至12的整数(例如，1、2、3、4、6、8、10和12个分枝)；X分枝是所述树枝状聚合物的分枝部分，每个X分枝连接至X核心的分枝或另一个X分枝的分枝，每个X分枝具有b个分枝，其中，b是2至8的整数(例如，2、4、6和8个分枝)；l是所述树枝状聚合物的X分枝分枝的连续的层的个数，并且是2至10的整数(例如，2、4、6、8和10)；Xn th是所述树枝状聚合物的n个表面分枝中的一个，并且连接至X分枝部分的b个分枝，其中，n＝p(b)l，并且其中n为≤512(例如，≤500、≤400、≤300、≤200、≤50、≤10或≤8个分枝)；Am是连接至Xn th的靶向肽，并且包含与选自由SEQ IDNO:1-105和107-117组成的组中的序列基本同一(identical)的氨基酸序列，或其功能性片段，或者是具有选自由式Ia、Ib、IIa、IIb和IIc组成的组的化学式的肽；m是≤n的正整数；D’是可选的第二试剂，或连接至一个或多个Am或可以代替一个或多个Am并且直接连接至一个或多个Xn th，并且其中，所述化合物中的D’的个数为≤n；并且树枝状聚合物(不包括D、D’和Am)的分子量为≤500千道尔顿(例如，≤500、≤400、≤300、≤200、≤100、≤50或≤20千道尔顿)。
化合物还可以包含下式：
其中，除了p是2和6之间的整数(例如，2、3、4或6个分枝)；b是2至4的整数(例如，2、3或4个分枝)；并且l是2至5的整数(例如，2、3、4或5个分枝)外，化合物具有上式的所有性质。
另一方面，本发明提供包含下式的化合物：
其中，D是第一试剂；X核心是具有p个分枝的树枝状聚合物的核心部分，其中，p是2至6的整数(例如，2、3、4或6个分枝)；并且其中，核心部分选自由以下组成的组：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺、赖氨酸和丙烯胺；X分枝是树枝状聚合物的分枝部分，其中，每个X分枝连接至X核心的分枝或另一个X分枝的分枝，并且其中每个X分枝具有b个分枝，其中，b是1至4的整数(例如，1、2、3和4个分枝)；l是树枝状聚合物的X分枝分枝的连续的层的个数，并且是0至4的整数(例如，0、1、2、3或4个分枝)；Xn th是树枝状聚合物的n个表面分枝中的一个，并且连接至X分枝部分的b个分枝，其中，n＝p(b)l，并且其中，n≤256(例如，≤256、≤200、≤50、≤10或≤8个分枝)；Am是连接至Xn th的靶向肽，并且包含与选自由SEQ ID NO:1-105和107-117组成的组中的序列基本同一的氨基酸序列，或其功能性片段，或者是具有选自由式Ia、Ib、IIa、IIb和IIc组成的组中的化学式的肽；m是≤n的正整数；D’是可选的的第二试剂，并且或连接至一个或多个Am或可以代替一个或多个Am并且直接连接至一个或多个Xn th，并且其中，所述化合物中的D’的个数为≤n；并且树枝状聚合物(不包括D、D’和Am)的分子量为≤500千道尔顿(例如，≤500、≤400、≤300、≤200、≤100、≤50或≤20千道尔顿)。
化合物可以包含下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子。
在一个实施方式中，n，其为表面分枝的个数，可以为≤128(例如，≤64或≤32或≤16或≤8)。在另一个实施方式中，本发明的化合物的树枝状部分，不包括第一和第二试剂以及靶向肽，可以具有为≤100千道尔顿(例如，≤50千道尔顿、≤25千道尔顿或≤10千道尔顿)的分子量。
化合物的树枝状聚合物部分可以包括选自由以下组成的组的核心部分：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺和丙二胺。通常将这些核心用于合成聚(酰胺基胺)(PAMAM)树枝状聚合物。也可以将赖氨酸用作核心部分来合成聚赖氨酸树枝状聚合物。可替代地，化合物可以包含丙烯亚胺以合成POPAM树枝状聚合物。
本发明的化合物可以具有选自由以下组成的组的分枝部分：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、丙胺、丙烯亚胺、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺和赖氨酸。可替代地，分枝部分可以是炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、丙胺、丙烯亚胺、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺和赖氨酸中的任一种的衍生物。
可以使树枝状聚合物表面上的一个或多个端部分枝官能化以连接不同数量的靶向肽(例如，2、4、6、8、12、16、32或64个靶向肽)。树枝状聚合物的一些或所有表面分枝可以具有连接的靶向肽。靶向肽之间的键可以是可断裂的(cleavable)键(例如，硫酯键)或不可断裂的键(例如，马来酰亚胺键)。靶向肽可以通过本文描述的接头连接至树枝状聚合物的表面分枝。
连接至树枝状聚合物的靶向肽可以具有与选自由SEQ ID NO:1-105和107-117组成的组中的序列至少85％同一的氨基酸序列，或其片段。例如，靶向肽可以具有选自由血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)、cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQ ID NO:114)和反向的(reversed)血管肽素-2(SEQ IDNO:117)组成的组中的氨基酸序列。可替代地，靶肽可以具有选自由血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)、cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQ ID NO:114)和反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)组成的组中的氨基酸序列。
化合物还可以包含通过反应性基团(例如，马来酰亚胺、酰肼、叠氮化物、卤代乙酰胺或烷氧基胺)连接至树枝状聚合物的第一试剂D(例如，蛋白质、肽、核酸或小分子)。第一试剂可以通过接头，例如，吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼(肼)、硫醇、羧酸、多肽接头、乙炔接头、可断裂的接头、不可断裂的接头或共价键连接至树枝状聚物。第一试剂可以选自由蛋白质、肽、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。
化合物还可以包含通过反应性基团(例如，马来酰亚胺、酰肼、叠氮化物、卤代乙酰胺或烷氧基胺)连接至树枝状聚合物的可选的第二试剂D’(例如，蛋白质、肽、核酸或小分子)。第二试剂可以通过接头，例如，吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头、乙炔接头、可断裂的接头、不可断裂的接头或共价键连接至树枝状聚物。第二试剂可以选自由蛋白质、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。当存在时，第二试剂可以连接至Am肽中的一个或多个，或连接至Xn th分枝中的一个或多个。第一和第二试剂可以相同或可以是不同类型的分子。
本发明包括可以包含一种或多种用于将靶向肽、第一试剂和第二试剂连接至树枝状聚合物的接头的化合物，其中，反应性基团存在于接头中。
本发明的化合物包含：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Mal是马来酰亚胺；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括半胱氨酸的硫原子；
其中，Cys是半胱氨酸，并且Ahx是叠氮基己酸；
本发明的化合物可以进入内皮细胞或进入表达LRP-1受体的细胞，例如肝、肾和脾细胞。本发明的化合物还可以穿过BBB。
本发明还提供合成化合物的方法，包括通过接头将至少两个或更多个靶向肽连接至树枝状聚合物以形成树枝状聚合物靶向肽复合物；通过接头将一个或多个第一试剂连接至树枝状聚合物靶向肽复合物；以及随后可选地通过接头将一个或多个第二试剂连接至该复合物。可替代地，方法可以包括通过反应性基团(例如，马来酰亚胺、酰肼，叠氮化物，卤代乙酰胺，或烷氧基胺)、通过接头首先将至少一个第一试剂连接至树枝状聚合物以形成树枝状聚合物-第一试剂复合物；通过接头将至少两个靶向肽连接至树枝状聚合物-第一试剂复合物；以及随后可选地通过接头将一个或多个第二试剂连接至该复合物。
方法可以可选地包括连接接头的步骤，例如，在连接靶向肽之前，将一个或多个接头(例如，吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头、乙炔、可断裂的接头、不可断裂的接头或共价键)连接至树枝状聚合物；和/或在连接一个或多个第一或第二试剂之前，将一个或多个接头连接至所述树枝状聚合物-靶向肽复合物。在连接一个或多个第一或第二试剂之前，还可以将接头连接至树枝状聚合物，或者在连接靶向肽之前，可以将接头连接至树枝状聚合物-靶向肽复合物。
可以使用多种方法来官能化表面分枝以及将靶向肽连接至官能化的表面分枝。例如，一个方法涉及使树枝状聚合物与3-(2-吡啶基二硫代)-丙酸N-琥珀酰亚胺基酯(N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)-propionate)反应，随后与含半胱氨酸残基的靶向肽反应。可替代地，可以通过使树枝状聚合物与S-乙酰硫代乙酸N-琥珀酰亚胺基酯反应，随后与所述靶向肽的马来酰亚胺衍生物反应来连接靶向肽。
连接至树枝状聚合物的靶向肽可以具有与选自由SEQ ID NO:1-105和107-117组成的组中的序列至少85％同一的氨基酸序列或其片段。例如，靶向肽可以具有选自由血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)、cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQ ID NO:114)和反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)组成的组中的氨基酸序列。可替代地，靶向肽可以具有选自由血管肽素-1(SEQID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)、cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQ ID NO:114)和反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)组成的组中的氨基酸序列。
方法包括通过反应性基团将第一试剂D连接至树枝状聚合物。第一试剂可以选自由蛋白质、肽、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。
方法还包括通过反应性基团将可选的第二试剂D’连接至树枝状聚合物。第二试剂可以选自由蛋白质、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。当存在时，第二试剂可以连接至Am肽中的一个或多个，或连接至Xn th分枝中的一个或多个。第一和第二试剂可以相同或可以是不同类型的分子。D和D’的添加可以可选地涉及一种或多种以上描述的接头。
方法还包括合成本发明的化合物的药学上可接受的盐。
“树枝状聚合物”是指合成生产的具有从核心部分辐射的一个或多个分枝的分子。分枝包含用于将一个或多个的靶向肽和/或一个或多个试剂连接至树枝状聚合物的官能团。如本文所使用的，术语树枝状聚合物不包含靶向肽或治疗剂。示例性的树枝状聚合物包括聚(酰胺基胺)(PAMAM)和聚(丙烯胺)(POPAM)。
“核心部分”是指具有至少三个对称或不对称排列的官能团的分子。一个或多个分枝部分、一个或多个靶向试剂和一个或多个试剂可以通过官能团连接至核心部分。示例性的核心部分包括炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺、赖氨酸和丙烯胺。
“分枝部分”是指可以连接至核心部分或另一个分枝部分并且具有至少三个对称或不对称排列的官能团(例如，羧基或氨基基团)的分子。可以通过这些官能团连接另外的分枝部分或其他分子(如靶向肽或试剂)。分枝部分可以与核心部分分子或核心部分的衍生物相同，或与核心部分完全不同。
“表面分枝”是指在树枝状聚合物的表面层的端部分枝部分。表面分枝具有一个或多个官能团(例如，羧基或氨基基团)，肽或另一种分子(例如，生物分子或接头)可以连接至该一个或多个官能团。
“片段”是指全长氨基酸的部分(例如，以上描述的任何序列)。片段可以保留全长蛋白质的至少一种生物活性。
“基本同一”是指与参考氨基酸至少35％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、85％、90％、95％或甚至99％相同的多肽。对于多肽，比较序列的长度一般是至少4个(例如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50或100个)氨基酸。此处应当理解的是，在与原始多肽的氨基酸相同或类似的序列中的氨基酸之间可以发现空位(缺口，gap)。空位可以不包含氨基酸，或可以包含与原始多肽不同或类似的一种或多种氨基酸。例如，通过Wisconsin GeneticsSoftware Package Release 7.0中的n算法(n algorithm)GAP、BESTFIT或FASTA、使用默认空位权重可以确定百分数同一性。
“血-脑屏障”(BBB)是指保护脑不受血液中的化学品侵害、同时仍允许必要的代谢功能的膜结构。BBB由在脑毛细血管中非常紧密堆叠(pack)的内皮细胞组成。BBB包括血-视网膜屏障。
“靶向肽”是指可以被运输至特定的细胞类型(例如，肝、肺、肾、脾或肌肉)或穿过BBB的化合物或分子，如多肽。肽可以通过树枝状聚合物(共价或非共价)连接至或结合至试剂，从而能够将试剂运输至特定的细胞类型或穿过BBB。靶向试剂可以结合至呈递(present)于癌细胞或脑内皮细胞上的受体，从而可以被运输至癌细胞或通过胞移作用(转胞吞作用，transcytosis)穿过BBB。靶向肽可以是对于其可以得到高水平的跨内皮运输，而不影响细胞或BBB的完整性的分子。靶向肽可以是肽，并且可以是天然存在或通过化学合成或重组基因技术生产的。
“治疗剂”是指能够用于治疗或预防性治疗疾病或病症的分子。
“键”是指连接两个分子例如，树枝状聚合物与靶向肽或树枝状聚合物与第一或第二试剂的共价键或交联部分。示例性的键包括硫醚键。
“接头”是指具有可以用于将树枝状聚合物连接至靶向肽或将树枝状聚合物连接至第一或第二试剂的一个或多个官能团的分子。示例性的接头包括吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头和乙炔。
附图说明
图1A是示出将结合至PAMAM的血管肽素-2和血管肽素-2多聚体运输至脑的图像。图1B是示出血管肽素-2-PAMAM多聚体在脑、毛细血管和实质(软组织)中的分布的柱状图。
图2是示出在用β-巯基乙醇(BME)处理之前和之后，放射性标记的可断裂An2-PAMAM树枝状聚合物结合物的迁移的凝胶图像。An2通过硫醇酯连接至PAMAM树枝状聚合物，该硫醇酯通过BME切割以释放放射性标记的血管肽素-2肽。
具体实施方式
本发明涉及结合至靶向肽的树枝状聚合物，其能够以升高的效率穿过BBB或能够进入特定的细胞类型(例如，肝、脾、肾、肌肉和卵巢)。当树枝状聚合物-靶向肽复合物结合至一种或多种试剂(例如，治疗剂、诊断剂、显像剂、小分子、蛋白质和核酸)时，与直接结合至单体靶向肽的试剂相比，可以以升高的效率将试剂运输穿过BBB或进入特定的细胞类型(例如，表达LRP-1受体的细胞)。本发明的一个优势是树枝状聚合物提供用于连接靶向肽和试剂的多个位点，并且其有助于提高穿过BBB或进入特定细胞类型的运输效率。与未结合的试剂或结合至单体形式的靶向肽的试剂相比，运输效率的升高可以允许较低剂量的试剂。在治疗剂和诊断剂的情况中，这可以是有帮助的性质。在其他情况中，通过将试剂更有效地引导至它的一个或多个靶向组织，可以以比未结合试剂或结合至单体形式的靶向肽的试剂更高的剂量给予本发明的化合物，因为较高的靶向效率可以降低副作用。在以下详细描述包含这种树枝状聚合物的化合物和它们在疾病诊断及治疗中的用途。
树枝状聚合物
树枝状聚合物是具有含至少三个官能团的核心部分的支化大分子。树枝状聚合物可以具有连接至核心部分的多个分枝部分，并且表面分枝部分可以被官能化用于连接多种分子(例如，靶向肽)。使用树枝状聚合物的一个优势是多种分子(例如，靶向肽)可以与其结合的多个表面官能度的可获得性。
树枝状聚合物的核心部分可以是本领域已知的，在PAMAM树枝状聚合物的情况中，包括选自由以下组成的组的那些：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺和丙二胺。核心部分还可以是丙烯胺，在这种情况中，树枝状聚合物是聚(丙烯胺)(POPAM)。可替代地，核心部分可以是赖氨酸，在这种情况中，树枝状聚合物是聚赖氨酸。通常，核心部分可以具有1至12个分枝(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个分枝)。将核心部分官能化(例如，通过与丙烯酸甲酯反应)以形成反应性基团用于添加分枝部分。一个或多个分枝部分可以通过官能团连接至核心部分。靶向肽和试剂也可以通过官能团、用或不用接头连接至核心部分。
分枝部分形成围绕核心部分的连续层，并且在本领域中也被称为“代”。连接至核心部分的分枝的每个分枝可以具有2至8个分枝(例如，2、3、4、5、6、7或8个分枝)。分枝部分可以与核心部分相同、可以是核心部分的衍生物、并且可以选自由以下组成的组：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺、丙烯胺和赖氨酸。
树枝状聚合物可以具有2至10层(2、3、4、5、6、7、8、9或10层)分枝，终止于也被称为表面分枝的最外分枝。可以使表面分枝官能化用于连接多个化学实体(例如，靶向肽)。由下式计算表面分枝个数：n＝p(b)l，其中，n＝表面分枝的个数，b＝每个分枝部分具有的分枝的个数，并且l＝树枝状聚合物的分枝的连续层的个数。由于树枝状聚合物会连接至多个靶向肽和一个或多个试剂，所以期望树枝状聚合物的大小在一定范围内以容纳连接的这些载物(cargo)的连接。例如，期望的树枝状聚合物分子量小于500千道尔顿(例如，10、50、100、200、300或500千道尔顿)。
PAMAM可能是最熟知的树枝状聚合物。PAMAM的核心是二胺(通常是乙二胺)，其与丙烯酸甲酯、然后是另一个乙二胺反应生成代-0(G-0)PAMAM。连续反应产生出较高的代，其倾向于具有不同性质。较低的代一般是不具有适当的内部区域的柔性分子，而中间大小的(G-3或G-4)的代具有与树枝状聚合物的外壳基本分离的内部空间。非常大(G-7或更高)的树枝状聚合物由于它们的外壳的结构一般更像具有非常密的表面的固体颗粒。
树枝状聚合物的合成
如以上所描述的，用于合成树枝状聚合物的方法是本领域熟知的，并且也可以从商业供应商购得具有不同层数分枝的树枝状聚合物的支化部分(X核心和X分枝部分)。存在两种常用的合成树枝状聚合物的方法：发散合成和收敛合成。在发散合成中(以下示出)，从多官能的核心组装树枝状聚合物，其通过一系列的反应、通常是迈克尔反应向外延伸。一般驱动每一步反应至完全完成以防止树枝状聚合物中的错误，该错误可以导致拖尾(trailing)的代(一些分枝比其他的短)。这种杂质可以影响树枝状聚合物的官能度和对称性，而且因为完美的和不完美的树枝状聚合物之间的相对大小差异非常小而很难纯化除去。
在收敛合成中(以下示出)，由终止在球形表面的小分子建立树枝状聚合物，并且反应向内进行，使得最内侧的分子(其是最后连接的)连接至核心。该方法使得更容易除去杂质和沿途较短的分枝，所以最终的树枝状聚合物更加单分散。然而，因为沿着核心的位阻效应的拥挤限制，由该方式制造的树枝状聚合物没有由发散方法制造的树枝状聚合物大。
可替代地，使用Diels-Alder反应、硫醇-炔反应和叠氮化物-炔反应，还可以通过点击化学合成树枝状聚合物。
可以将树枝状聚合物合成为在核心和分枝中具有不同的官能度以控制性质如溶解性、热稳定性和连接用于特定应用的化合物。合成过程还可以精确控制大小、分枝个数、自核心的分枝的层的个数和用于连接多种反应性基团的端部分枝的官能度。
树枝状聚合物的示例性合成示出于实施例1中，其中，炔丙胺核心首先与丙烯酸甲酯反应，随后是与乙二胺反应以连接分枝。丙烯酸甲酯和乙二胺的连续反应产生乙二胺分枝的另外的层的连接。
靶向肽与树枝状聚合物的表面分枝的结合
可以官能化树枝状聚合物的表面分枝用于结合衍生有适当的反应性基团的靶向肽。例如，表面分枝可以与化合物例如N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)(N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)，SPDP)反应生成树枝状聚合物-吡啶基-二硫化物中间产物，然后该中间产物可以与包含半胱氨酸残基的靶向肽反应。可替代地，树枝状聚合物的表面分枝可以与S-乙酰基硫代乙酸N-琥珀酰亚胺基酯(SATA)反应以形成树枝状聚合物-巯基中间产物，该中间产物可以与马来酰亚胺衍生化的靶向肽反应。SATA对于胺是反应性的并且添加保护的巯基基团和BMOE(双-马来酰亚胺乙烷)。接头可以被用于将靶向肽结合至树枝状聚合物的表面官能团，并且在以下被描述。
树枝状聚合物结构
可以单独选择给定结合物的每个部分，包括细胞毒性试剂、接头和多肽。即，只要相互作用的化合物取代基彼此相容，那么本文描述的任何接头可以用于结合描述的任何多肽和细胞毒性试剂。然后可以将结合物用于将细胞毒性试剂递送至患者用于治疗CNS癌症或其他癌症。由于包含可检测的标志物，本结合物可以被用作显像剂，提供映射细胞毒性试剂与其结合的目标和/或多肽对其具有亲和性的受体的分布的方式。
虽然在以下进一步讨论了具体的结构，但是我们注意到给定的蛋白质结合物可以包含相对于每个细胞毒素试剂一种或多种多肽部分(例如，相对于结合物内的每种细胞毒性试剂1-2种多肽)和相对于多肽一种或多种细胞毒性试剂(例如，每种多肽1-3种细胞毒性试剂)。正如提到的，给定的蛋白质结合物一般包含一种细胞毒性试剂，但是它可以包含两种或多种(例如，2、3或4种)彼此相同或彼此不同的细胞毒性试剂。当不同时，细胞毒性试剂可以具体地结合相同的目标或不同的目标。可以以多种方式结合本结合物的组成部分。总体来说，结合物可以呈现基本的线性形式，其中细胞毒性试剂连接至至少一个多肽上，该多肽反过来连接至至少一个细胞毒性试剂。可替代地，结合物可以具有如在树枝状聚合物中看到的支化结构，其中一个或多个分枝从细胞毒性试剂(D)的一些点处延伸。当现有的结合物包含分枝部分时，我们可以将结合物称作“树枝状聚合物结合物”，其中理解的是包含细胞毒性试剂不允许完全对称的树枝状聚合物形式。树枝状结合物可以为如式I中的结构：
D是直接(例如，通过细胞毒性试剂和X核心之间的键的方式)或间接(例如，通过将细胞毒性试剂部分结合至X核心的双官能接头的方式)连接至树枝状聚合物结合物的核心部分(X核心)的细胞毒性试剂。由于X核 心和X分枝都将结合物的一部分结合至另一部分，我们可以将任一部分更简单地称作“接头“。核心部分的复杂度可以变化，其中可获得的延伸点的个数p从2至6变化，包括端点。每个延伸点p可以终止(和被结合至)分枝部分，X分枝，像X核心，复杂度变化，其中每个X分枝具有2至4个分枝，b。Xn th是n个表面分枝中的一个，并且l，是1至5的整数，包括端点，是X分枝部分的连续层的个数。当l是1时，每个X分枝连接至X核心。当l大于1时，每个第一X分枝远端(distal to)的X分枝连接至另一个X分枝。关于表面分枝，Xn th是树枝状聚合物的n个表面分枝中的一个。n＝p(bl)，并且n一般是≤512(例如，≤500、≤400、≤300、≤200、≤50、≤10或≤8个分枝)。示出：当存在两个延伸点p时，l是1，以及从每个X分枝存在两个分枝b时，Xn th是4；当存在三个延伸点p时，l是1，以及当从每个X分枝存在三个分枝b时，Xn th是9；依此类推。Am是如以上所描述的连接至表面分枝Xn th的多肽。多肽Am的个数小于或等于表面分枝的个数，因为每个表面分枝可以结合至多肽，并且一些表面分枝可以不含任何另外的组分或直接结合至细胞毒性试剂D’(即，在一些表面分枝处，不存在由Am代表的多肽)。细胞毒性试剂D’连接至一个或多个Am，或正如所提到的，可以取代一个或多个(但不是所有的)Am，直接连接至一个或多个Xn th。树枝状结合物中的D’的个数可以最高达多肽个数的三倍，因为最高达三种细胞毒性试剂可以结合至每个多肽。树枝状聚合物(不包含D、D’和Am)的分子量为≤500千道尔顿(例如，≤500、≤400、≤300、≤200、≤100、≤50或≤20千道尔顿)。
用作X核心和X分枝的接头可以是相同或不同的，并且通过将双官能的接头用作X核心或X分枝可以制造较低复杂度的树枝状聚合物结合物。当X核 心是双官能接头时，p是1，并且由从X核心的多向延伸会生成的复杂度缺失。在以下的化学式中示出该排列，结合物的其余部分如以上所描述。
在该结构的一个变体中，X核心不存在，在这种情况下，细胞毒性试剂直接结合至X分枝。当X分枝而不是X核心是双官能接头时，b是1，并且由从X分枝的多向延伸会生成的复杂度缺失。在以下的化学式中示出该排列，结合物的其余部分如以上所描述。
树枝状聚合物的一个优势是包含可以结合多个多肽和/或细胞毒素的多个表面官能度。改变树枝状聚合物结合物的复杂度的能力允许容纳蛋白质结合物的多种组成部分。当X核心和X分枝都是双官能接头时，结合物是线性的而不是树枝状的。
接头
可以通过多种连接基团(接头)，例如，巯基基团、氨基基团(胺)或任何适当的反应性基团结合靶向肽。接头可以是共价键。可由许多商业来源获得同双官能的和异双官能的交联剂(结合试剂)。可以在靶向肽上找到可用于交联的位点。接头基团可以包含柔性臂，例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个碳原子。示例性的接头包括吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头和乙炔。可替代地，可以使用的其他接头包括BS3[辛二酸双(磺基琥珀酰酰亚胺基)酯](其是靶向物易接近的伯胺的同双官能的N-羟基琥珀酰亚胺酯)、NHS/EDC(N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(NHS/EDC允许伯胺基团与羧基基团结合)、磺基-EMCS([N-ε-马来酰亚胺基己酸]酰肼(磺基-EMCS是对巯基和氨基基团反应性的异双官能的反应性基团)、酰肼(包含暴露的碳水化物和酰肼的大多数蛋白质是用于将羧基基团连接至伯胺的有用试剂)。
为了形成共价键，可以将各种各样的活性羧基基团(例如，酯)用作化学反应性基团，其中，羟基部分在修饰肽所需的水平上是生理学可接受的。具体的试剂包括N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、N-羟基-磺基琥珀酰亚胺(磺基-NHS)、马来酰亚胺-苯甲酰基-琥珀酰亚胺(MBS)、γ-马来酰亚胺-丁酰氧基琥珀酰亚胺酯(GMBS)、马来酰亚胺丙酸(MPA)、马来酰亚胺己酸(MHA)和马来酰亚胺十一烷酸(MUA)。
伯胺是用于NHS酯的主要靶向物。存在于蛋白质的N端的可接近的α-氨基基团和赖氨酸的ε-胺与NHS酯反应。因此，本发明的化合物可以包含具有结合至肽的N端部氨基或赖氨酸的ε-胺的NHS酯的接头。当与伯胺反应的NHS酯结合反应释放N-羟基琥珀酰亚胺时，形成酰胺键。包含反应性基团的这些琥珀酰亚胺在本文中被称作琥珀酰亚胺基团。在本发明的某些实施方式中，蛋白质上的官能团是硫醇基团，以及化学反应性基团是含马来酰亚胺的基团，如γ-马来酰亚胺-丁酰基胺(GMBA或MPA)。这种含马来酰亚胺的基团在本文中被称作马来酰亚胺基团。
当反应混合物的pH是6.5-7.4时，酰亚胺基团对存在于肽上的巯基基团最具选择性。在pH 7.0，马来酰亚胺基团与巯基基团(例如，蛋白质如血清白蛋白或IgG上的硫醇基团)的反应速率比与胺快1000倍。因此，可以形成马来酰亚胺基团和巯基之间稳定的硫醚键。因此，本发明的化合物可以包含具有结合至靶向肽的巯基基团的马来酰亚胺基团的接头。
胺-对-胺接头包括NHS酯和酰亚胺酯。示例性的NHS酯是DSG(戊二酸二琥珀酰亚胺基酯)、DSS(辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、BS3(辛二酸双[磺基琥珀酰亚胺基]酯)、TSAT(三乙酸三-琥珀酰亚胺氨基酯)、双-琥珀酰亚胺酯活化的化合物的变体(包括聚乙二醇间隔子如BS(PEG)n，其中，n是1-20(例如，BS(PEG)5和BS(PEG)9))、DSP(丙酸二硫代双[琥珀酰亚胺基酯])、DTSSP(3,3'-二硫代双[磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯])、DST(酒石酸二琥珀酰亚胺基酯)、BSOCOES(双[2-(琥珀酰亚胺氧基羰氧基)乙基]砜)、EGS(乙二醇双[琥珀酰亚胺基琥珀酸酯])和磺基-EGS(乙二醇双[磺基琥珀酰亚胺基琥珀酸酯])。酰亚胺酯包括DMA(己二亚氨酸二甲酯·2HCl)、DMP(庚二亚氨酸二甲酯·2HCl、DMS(辛二亚氨酸二甲酯·2HCl)和DTBP(二甲基3,3’-二硫双丙酰亚胺酯·2HCl)。其他胺-胺接头包括DFDNB(1,5-二氟-2,4-二硝基苯)和THPP(β-[三(羟甲基)膦基]丙酸(甜菜碱)。
接头可以是巯基-对-巯基接头。这种接头包括马来酰亚胺和吡啶基硫醇。示例性的马来酰亚胺包括BMOE(双-马来酰亚胺基乙烷)、BMB(1,4-双马来酰亚胺基丁烷)、BMH(双马来酰亚胺基己烷)、TMEA(三[2-马来酰亚胺乙基]胺)、BM(PEG)21,8-双-马来酰亚胺基二甘醇)或BM(PEG)n(其中n是1至20(例如，2或3)、BMDB(1,4-双马来酰亚胺基-2,3-二羟基丁烷)和DTME(二硫代-双马来酰亚胺基乙烷)。示例性的吡啶基硫醇包括DPDPB(1,4-二-[3’-(2’-吡啶基二硫代)-丙酰胺基]丁烷)。其他的巯基接头包括HBVS(1,6-己烷-双-乙烯基砜)。
接头可以是胺-对-巯基接头，其包括NHS酯/马来酰亚胺化合物。这些化合物的实例是AMAS(N-(α-马来酰亚胺基乙酰氧基)琥珀酰亚胺酯)、BMPS(N-[β-马来酰亚胺基丙酰氧基]琥珀酰亚胺酯)、GMBS(N-[γ-马来酰亚胺基丙酰氧基]琥珀酰亚胺酯)、磺基-GMBS(N-[γ-马来酰亚胺基丙酰氧基]磺基琥珀酰亚胺酯、MBS(间-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)、磺基-MBS(间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯)、SMCC(4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺基酯)、磺基-SMCC(4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧酸磺基琥珀酰亚胺基酯)、EMCS([N-ε-马来酰亚胺基己酰氧基]琥珀酰亚胺酯)、磺基-EMCS([N-ε-马来酰亚胺基己酰氧基]磺基琥珀酰亚胺酯)、SMPB(4-[对-马来酰亚胺苯基]丁酸琥珀酰亚胺基酯)、磺基-SMPB(4-[对-马来酰亚胺苯基]丁酸磺基琥珀酰亚胺基酯)、SMPH(琥珀酰亚胺基-6-[β-马来酰亚胺丙酰胺基]己酸酯)、LC-SMCC(琥珀酰亚胺基-4-[N-马来酰亚胺甲基]环己烷-1-羰基-[6-氨基己酸酯])、磺基-KMUS(N-[κ-马来酰亚胺十一酰氧基]磺基琥珀酰亚胺酯)、SM(PEG)n(琥珀酰亚胺基-([N-马来酰亚胺丙酰胺基-聚乙二醇)酯)(其中，n是1至30(例如，2、4、6、8、12或24)、SPDP(3-(2-吡啶基二硫基)-丙酸N-琥珀酰亚胺基酯)、LC-SPDP(6-(3-[2-吡啶基二硫代]-丙酰胺基)己酸琥珀酰亚胺基酯)、磺基-LC-SPDP(6-(3’-[2-吡啶基二硫代]丙酰胺基)己酸磺基琥珀酰亚胺基酯)、SMPT(4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-[2-吡啶基二硫代]甲苯)、磺基-LC-SMPT(4-磺基琥珀酰亚胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫代)甲苯甲酰胺基]己酸酯)、SIA(碘乙酸N-琥珀酰亚胺基酯)、SBAP(3-[溴乙酰氨基]丙酸琥珀酰亚胺基酯)、SIAB(N-琥珀酰亚胺基[4-碘乙酰基]氨基苯甲酸酯)和磺基-SIAB(N-磺基琥珀酰亚胺基[4-碘乙酰基]氨基苯甲酸酯)。
接头可以是氨基-对-非选择性接头。这种接头的实例包括NHS酯/芳基叠氮化物和NHS酯/重氮甲烷接头。NHS酯/芳基叠氮化物接头包括NHS-ASA(N-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸)、ANB-NOS(N-5-叠氮基-2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亚胺)、磺基-HSAB(N-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基苯甲酸酯)、磺基-NHS-LC-ASA(磺基琥珀酰亚胺基[4-叠氮基水杨基氨基]己酸酯)、SANPAH(N-琥珀酰亚胺基-6-(4'-叠氮基-2'-硝基苯基氨基)己酸酯)、磺基-SANPAH(N-磺基琥珀酰亚胺基-6-(4'-叠氮基-2'-硝基苯基氨基)己酸酯)、磺基-SFAD(磺基琥珀酰亚胺基-(全氟叠氮基苯甲酰氨基)-乙基-1,3'-二硫代丙酸酯、磺基-SAND(磺基琥珀酰亚胺基-2-(间-叠氮基-邻-硝基苯甲酰氨基)乙基-1,3'-丙酸酯)和磺基-SAED(2-[7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酰氨基]乙基-1,3’二硫代丙酸磺基琥珀酰亚胺基酯)。NHS酯/重氮甲烷接头包括SDA(4,4’-叠氮戊酸琥珀酰亚胺基酯)、LC-SDA(6-(4,4’-叠氮戊酰胺)己酸琥珀酰亚胺基酯)、SDAD(2-([4,4’-叠氮戊酰胺]乙基)-1,3’-二硫代丙酸琥珀酰亚胺基酯)、磺基-SDA(4,4’-叠氮戊酸磺基琥珀酰亚胺基酯)、磺基-LC-SDA(6-(4,4'-叠氮戊酰胺)己酸磺基琥珀酰亚胺基酯)和磺基-SDAD(2-([4,4’-叠氮戊酰胺]乙基)-1,3'-二硫代丙酸磺基琥珀酰亚胺基酯)。
示例性的氨基-对-羧基接头包括碳二亚胺化合物(例如，DCC(N,N-二环己基碳二亚胺)和EDC(1-乙基-3-[3-二甲基氨丙基]碳二亚胺))。示例性的巯基-对-非选择性接头包括吡啶基硫醇/芳基叠氮化合物(例如，APDP((N-[4-(对-叠氮基水杨酰胺基)丁基]-3’-(2’-吡啶基二硫代)丙酰胺))。示例性的巯基-对-碳水化合物接头包括马来酰亚胺/酰肼化合物(例如，BMPH(N-[β-马来酰亚胺基丙酸]酰肼)、EMCH([N-ε-马来酰亚胺基己酸]酰肼)、MPBH 4-(4-N-马来酰亚胺基苯基)丁酸酰肼)和KMUH(N-[κ-马来酰亚胺基十一烷酸]酰肼))以及吡啶基二硫醇/酰肼化合物(例如，PDPH(3-(2-吡啶基二硫代)丙酰基酰肼)。示例性的碳水化合物-对-非选择性接头包括酰肼/芳基叠氮化合物(例如，ABH(对-叠氮基苯甲酰基酰肼)。示例性的羟基-对-巯基接头包括异氰酸酯/马来酰亚胺化合物(例如(N-[对-马来酰亚胺基苯基]异氰酸酯))。示例性的氨基-对-DNA接头包括NHS酯/补骨脂素化合物(例如，SPB(琥珀酰亚胺基-[4-(补骨脂素-8-基氧基)]丁酸酯)(succinimidyl-[4-(psoralen-8-yloxy)]-butyrate))。
接头也可以是三官能的、四官能的或更高的连接试剂。示例性的三官能的接头包括TMEA、THPP、TSAT、LC-TSAT((6-氨基己酰基)氨基三乙酸三-琥珀酰亚胺基酯)、三-琥珀酰亚胺基-1,3,5-苯三羧酸酯、MDSI(间苯二甲酸马来酰亚胺-3,5-二琥珀酰亚胺基酯)、SDMB(苯甲酸琥珀酰亚胺基-3,5-二马来酰亚胺基苯基酯、MAL-4(四-(3-马来酰亚胺基)季戊四醇、NHS-4(四-(N-琥珀酰亚胺基羧丙基)季戊四醇))。
TMEA具有以下结构：
TMEA可以通过它的马来酰亚胺基团与巯基基团反应(例如，通过半胱氨酸氨基酸侧链)。
THPP具有以下结构：
THPP的羟基基团和羰基基团可以与伯胺或仲胺反应。
美国专利号US 4,680,338也描述了接头，其具有式Y＝C＝N–Q–A–C(O)–Z，其中，Q是同芳香族或杂芳香族环体系；A是单键或未取代的或取代的二价C1-30桥接基团，Y是O或S；并且Z是Cl、Br、I、N3、N-琥珀酰亚胺基氧基、咪唑基、1-苯并三唑基氧基、OAr(其中，Ar是缺电子活化芳基基团)或OC(O)R(其中，R是–A–Q–N＝C＝Y或C4-20三烷基(tertiary-alkyl)。
美国专利号US 5,306,809中也描述了接头，其描述了具有式的接头，其中，R1是H、C1-6烷基、C2-6烯基、C6-12芳基或芳烷基或与二价有机–O–、–S–或偶联的这些，其中，R’是C1-6烷基、连接部分；R2是H、C1-12烷基、C6-12芳基或C6-12芳烷基，R3是 或能够使临近的氮的孤对电子离域的其他化学结构，并且R4是能够将R3连接至肽载体或将R3连接至试剂的悬垂反应性基团。
接头可以包括至少一个氨基酸(例如，至少2、3、4、5、6、7、10、15、20、25、40或50个氨基酸的肽)。例如，接头是单个氨基酸(例如，天然存在的氨基酸，如Cys)。如美国专利号US 7,271,149中所描述的，使用了富含甘氨酸的肽，如具有序列[Gly-ly-Gly-Gly-Ser]n的肽，其中，n是1、2、3、4、5或6，或如美国专利号US 5,525,491中所描述的，可以使用富含丝氨酸的肽接头。富含丝氨酸的肽接头包括式[X-X-X-X-Gly]y的那些，其中，X中的至多两个是Thr，并且剩余的X是Ser，以及y是1至5(例如，Ser-Ser-Ser-Ser-Gly，其中，y大于1)。
在一些情况中，接头是单个氨基酸(例如，任何氨基酸，如Gly或Cys)。在一些情况中，接头可以是多氨基酸或多肽接头。可以根据柔性(例如，柔性或刚性)选择或可以基于电荷(例如，正、负或中性)选择氨基酸接头和多肽接头。柔性接头通常包括具有Gly残基的那些(例如，[Gly-Gly-Gly-Gly-Ser]n，其中，n是1、2、3、4、5或6)。其他接头包括刚性接头(例如，PAPAP和(PT)nP，其中，n是2、3、4、5、6或7)和α-螺旋接头(例如，A(EAAAK)nA，其中，n是1、2、3、4或5)。
合适的氨基酸接头的实例是琥珀酸、Lys、Glu和Asp或二肽如Gly-Lys。当接头是琥珀酸时，它的一个羧基基团可以与氨基酸残基的氨基基团形成酰胺键，并且，它的其他羧基基团可以例如与肽或取代基的氨基基团形成酰胺键。当接头是Lys、Glu或Asp时，它的羧基基团可以与氨基酸残基的氨基基团形成酰胺键，并且例如，其的氨基基团可以与取代基的羧基基团形成酰胺键。当将Lys用作接头时，可以在Lys的ε-氨基基团和取代基之间插入另外的接头。另外的接头可以是琥珀酸，其可以与Lys的ε-氨基基团并且与存在于取代基中的氨基基团形成酰胺键。在一个实施方式中，另外的接头是Glu或Asp(例如，其与Lys的ε-氨基基团形成酰胺键并且与存在于取代基中的羧基基团形成另一个酰胺键)，即，取代基是Nε-酰化的赖氨酸残基。
肽接头还可以是支化的多肽。在美国专利号US 6,759,509中描述了示例性的支化肽。这种接头包括下式的那些：
其中，A是硫醇受体；W是桥接部分；c是0至1的整数；a是2至12的整数；Q是O、NH或较少N的烷基；p是0或1的整数；d是0或1的整数；E是多价原子；每个b是1至10的整数；每个X是下式：
—CO—Y—Zm—Gn，
其中，Y是L形式的两种氨基酸；Z是一种或多种氨基酸残基；m是0或1的整数；G是自分解(self-immolative)间隔子；并且n是0或1的整数；条件是当n是0时，那么—Y—Zm是Ala-Leu-Ala-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly；或每个X是下式：
其中，每个X1是式—CO—Y—Zm—Gn；并且其中，Y、Z、Q、E、G、m、d、p、a、b和n如以上所定义；或每个X1是下式：
其中，每个X2是式—CO—Y—Zm—Gn；并且其中，Y、Z、G、Q、E、m、d、p、a、b和n如以上所定义；或每个X2是下式：
其中，每个X3是式—CO—Y—Zm—Gn；并且其中，Y、Z、G、Q、E、m、d、p、a、b和n如以上所定义；或每个X3是下式：
其中，每个X4是式—CO—Y—Zm—Gn；并且其中，Y、Z、G、Q、E、m、d、p、a、b和n如以上所定义。
支化的接头可以使用中间体自分解的间隔部分(G)，其将试剂或肽载体和支化的肽接头共价连接在一起。自分解的间隔子可以是能够将两个化学部分共价连接在一起以及通过酶裂解(例如，本文描述的任何适当的接头)的方式从三元(tripartate)分子释放所述间隔的化学部分中的一种的双官能化学部分。在某些实施方式中，G是自分解的间隔部分，其将试剂或肽载体和肽接头共价连接在一起，其中，间隔子通过T部分连接至肽载体或试剂(如用于以下式中的，“T”代表已经包含在试剂或肽载体中的亲核原子)，并且其可以由以下表示：其中，T是O、N或S；—HN—R1—COT，其中，T是O、N或S，并且R1是C1-5烷基；其中，T是O、N或S，以及R2是H或C1-5烷基；其中，T是O、N或S；或其中，T是O、N或S。优选的G包括PABC(对-氨基苄基-氨基甲酰)、GABA(γ-氨基丁酸)、α,α-二甲基GABA和β,β-二甲基GABA。
在支化的接头中，硫醇受体“A”通过源自肽载体或试剂的硫原子连接至肽载体或试剂。例如，硫醇受体可以是α-取代的乙酰基基团。这种基团具有下式：其中，Y是离去基团，如Cl、Br、I、甲磺酸根、甲苯磺酸根等。如果硫醇受体是α-取代的乙酰基基团，那么连接至配体之后的硫醇加合物形成键—S—CH2—。优选地，硫醇受体是Michael加成受体。该发明的代表性Michael加成受体具有式连接配体的硫醇基团之后，Michael加成受体变成Michael加成加合物，例如，其中，L是试剂或肽载体。
桥接基团“W”是能够将两个隔开的化学部分一起共价连接为稳定的三元分子的双官能化学部分。在S.S.Wong,Chemistry of ProteinConjugation and Crosslinking RC Press,Florida,(1991)；和G.E.Means and R.E.Feeney,Bioconiugate Chemistry,vol.1,pp.2-12,(1990)中描述了桥接基团的实例，通过引用将其公开结合于此。W可以将硫醇受体共价连接至酮部分。示例性的桥接基团具有式—(CH2)f—(Z)g—(CH2)h—，其中，f是0至10；h是0至10；g是0或1，条件是当g是0时，那么f+h是1至10；Z是S、O、NH、SO2、苯基、萘基、聚乙二醇、包含3至10个碳原子的脂环族烃环或包含3至6个碳原子和1或2个选自O、N或S的杂原子的杂芳香族烃环。优选的脂环族部分包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。优选的杂芳香族部分包括吡啶基、聚乙二醇(1-20个重复单元)、呋喃基、吡喃基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噁嗪基、吡咯基、噻唑基、吗啉基等。在桥接基团中，优选的是当g是0时，f+h是2至6(例如，2至4，如2)的整数。当g是1时，优选的是f是0、1或2；并且优选的是h是0、1或2。优选的偶联至硫醇受体的桥接基团在Pierce Catalog,pp.E-12、E-13、E-14、E-15、E-16和E-17(1992)中示出。
靶向肽和树枝状聚合物之间的接头可以是可断裂的接头(例如，硫醇接头)或不可断裂的接头。
靶向肽
本发明的靶向肽可以连接至树枝状聚合物以形成树枝状聚合物-靶向肽复合物。靶向肽可以是与表1中的任何序列或其片段基本同一的多肽。靶向肽可以具有以下的序列：血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(SEQ ID NO:97)、血管肽素-3(SEQ ID NO:107)、血管肽素-4a(SEQ IDNO:108)、血管肽素-4b(SEQ ID NO:109)、血管肽素-5(SEQ ID NO:110)、血管肽素-6(SEQ ID NO:111)、血管肽素-7(SEQ ID NO:112)或反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)。本发明的靶向肽或化合物可以被有效地运输至特定的细胞类型(例如，肝、肺、肾、脾和肌肉中的任何一种、两种、三种、四种或五种)或可以有效穿过哺乳动物的BBB(例如，血管肽素-1、-2、-3、-4a、-4b、-5和-6)。靶向肽或化合物能够进入特定的细胞类型(例如，肝、肺、肾、脾和肌肉中的任何一种、两种、三种、四种或五种)，但是不能有效穿过BBB(例如，包括血管肽素-7的结合物)。靶向肽可以具有任何长度，例如，至少6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、25、35、50、75、100、200或500个氨基酸，或这些数字之间的任何范围。靶向肽在长度上是10至50个氨基酸，并且可以通过基因重组技术或化学合成生产。
表1：示例性的靶向肽
多肽编号5、67、76和91分别包括SEQ ID NO:5、67、76和91的序列，并且在C端被酰胺化。
多肽编号107、109和110分别包括SEQ ID NO:97、109和110的序列，并且在N端被乙酰化。
靶向肽可以包括具有下式的氨基酸序列：
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19，其中，X1-X19中的每一个(例如，X1-X6、X8、X9、X11-X14和X16-X19)独立地是任何氨基酸(例如，天然存在的氨基酸，如Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val)或是不存在，并且X1、X10和X15中的至少一个(例如，2或3个)是精氨酸。X7可以是Ser或Cys；或X10和X15各自独立地是Arg或Lys。X1至X19的残基(包括端点)可以与SEQ ID NO:1-105和107-117(例如，血管肽素-1、血管肽素-2、血管肽素-3、血管肽素-4a、血管肽素-4b、血管肽素-5、血管肽素-6、血管肽素-7和反向的血管肽素-2)中的任一种的氨基酸序列基本同一。来自X1-X19的氨基酸中的至少一个(例如，2、3、4或5个)是Arg。多肽在多肽的N端、C端或两者处可以具有一个或多个另外的半胱氨酸残基。例如，靶向肽可以具有选自由cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQ ID NO:114)组成的组中的氨基酸序列。
靶向肽可以是被修饰的，例如，酰胺化、乙酰化或酰胺化和乙酰化。这种修饰可以是在多肽的氨基端或羧基端。肽或多肽还可以包括本文描述的任何多肽的模拟肽(例如，本文描述的那些)。
靶向肽可以具有本文描述的氨基酸序列，存在至少一个氨基酸置换(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个置换)、插入或删除，或与本文描述的氨基酸序列基本同一。例如，肽或多肽可以包含1至12、1至10、1至5或1至3个氨基酸置换，例如，1至10个(例如，1至9、8、7、6、5、4、3、2个)氨基酸置换。氨基酸置换可以是保守的或非保守的。例如，靶向肽在对应于任何SEQ ID NO:1、血管肽素-1、血管肽素-2、血管肽素-3、血管肽素-4a、血管肽素-4b、血管肽素-5、血管肽素-6、血管肽素-7和反向的血管肽素-2的氨基酸序列的位置1、10和15的位置的一个、两个或三个处具有精氨酸。
本发明还提供了这些多肽的片段(例如，功能性片段)。多肽的截短可以是来自多肽的N端或多肽的C端或它们的组合的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个氨基酸。包括多肽中间部分的序列的片段被删除。
本发明的靶向肽还可以具有下式：
Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys       (式Ia)，
其中，
X3是Asn或Gln；
X4是Asn或Gln；并且
X5是Phe、Tyr或Trp。
本发明的靶向肽还可以具有下式：
Z1-Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys-Z2    (式Ib)，
其中，
X3是Asn或Gln；
X4是Asn或Gln；
X5是Phe、Tyr或Trp；
Z1是不存在、Cys、Gly、Cys-Gly、Arg-Gly、Cys-Arg-Gly、Ser-Arg-Gly、Cys-Ser-Arg-Gly、Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Gly-Ser-Arg-Gly、Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly或Cys-Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly；并且
Z2是不存在、Cys、Tyr、Tyr-Cys、Cys-Tyr、Thr-Glu-Glu-Tyr或Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys。
式(Ia)和(Ib)的靶向肽包括氨基酸序列Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys和保守置换。氨基酸和肽的保守置换和衍生物是本领域熟知的，并且可以由任何有用的方法(例如，通过使用置换基质或本文描述的任何方法)确定。靶向肽的衍生物包括包含选自以下基团或这些基团的子集的一个或多个保守置换的靶向部分：Ser、Thr和Cys；Leu、Ile和Val；Glu和Asp；Lys和Arg；Phe、Tyr和Trp(例如，Phe和Tyr)；和Gln、Asn、Glu、Asp和His(例如，Gln和Asn)。也可以通过其他方法确定保守置换，如通过BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)算法、BLOSUM置换矩阵(例如，BLOSUM 62矩阵)和PAM置换矩阵(例如，PAM 250矩阵)。
靶向肽还可以包括具有一个或多个D-氨基酸置换的那些，其中，式(Ia)或(Ib)中的一个或多个氨基酸残基被对应的D-异构体置换。D-氨基酸置换可以提供具有增强的耐消化酶(例如，胃蛋白酶和/或胰蛋白酶)切割的肽。例如，具有胃蛋白酶或胰蛋白酶的可能的切割位点的式(Ia)或(Ib)中的一个或多个氨基酸可以被该氨基酸的D-异构体置换。式(Ia)或(Ib)中的胃蛋白酶和胰蛋白酶的示例性切割位点包括N端或C端与以下的键：Lys的位置1；Arg的位置2；对于X5是Phe、Tyr或Trp时的位置5；和对于Lys时的位置6。因此，本发明的多肽还包括具有在式(Ia)或(Ib)的位置1、2、5和/或6处列举的氨基酸的一个或多个D-异构体的那些。
本发明的靶向肽还可以具有下式：
X1-X2-Asn-Asn-X5-X6        (式IIa)，
其中，
X1是Lys或D-Lys；
X2是Arg或D-Arg；
X5是Phe或D-Phe；并且
X6是Lys或D-Lys；并且
其中，X1、X2、X5或X6中的至少一个是D-氨基酸。
本发明的靶向肽还可以具有下式：
X1-X2-Asn-Asn-X5-X6-X7        (式IIb)，
其中，
X1是Lys或D-Lys；
X2是Arg或D-Arg；
X5是Phe或D-Phe；
X6是Lys或D-Lys；
X7是Tyr或D-Tyr；并且
其中，X1、X2、X5、X6或X7中的至少一个是D-氨基酸。
本发明的靶向肽还可以具有下式：
Z1-X1-X2-Asn-Asn-X5-X6-X7-Z2    (式IIc)，
其中，
X1是Lys或D-Lys；
X2是Arg或D-Arg；
X5是Phe或D-Phe；
X6是Lys或D-Lys；
X7是Tyr或D-Tyr；
Z1是不存在、Cys、Gly、Cys-Gly、Arg-Gly、Cys-Arg-Gly、Ser-Arg-Gly、Cys-Ser-Arg-Gly、Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Gly-Ser-Arg-Gly、Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly或Cys-Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly；并且Z2是不存在、Cys、Tyr、Tyr-Cys、Cys-Tyr、Thr-Glu-Glu-Tyr或Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys；其中，X1、X2、X5、X6或X7中的至少一个是D-氨基酸；并且其中，多肽可选地包括列举于Z1或Z2中的氨基酸的一种或多种D-异构体。
如本文所描述的，本发明的靶向肽包括添加和删除氨基酸至：式Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys(式Ia)(其中，X3-X5如以上所定义)；式X1-X2-Asn-Asn-X5-X6和X1-X2-Asn-Asn-X5-X6-X7(分别是式IIa和IIb)(其中，X1、X2、X5、X6和X7如以上所定义)；或3D-An2的较长的多肽。删除或添加可以包括式Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys、X1-X2-Asn-Asn-X5-X6、X1-X2-Asn-Asn-X5-X6-X7、Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys、D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys或D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-D-Tyr或较长序列3D-An2的中的任何部分。可以在靶向部分的共有序列进行1、2、3、4或5个氨基酸的删除或添加。可以在不显著损坏靶向肽的期望生物活性(例如，穿过BBB的能力或激动剂活性)下进行任何有用的置换、添加和删除。修饰可以降低(例如，至少5％、10％、20％、25％、35％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或95％)或没有影响或可以升高(例如，至少5％、10％、25％、50％、100％、200％、500％或1000％)共有序列或原始多肽的生物活性。
具体地，可以在靶向肽内进行D-氨基酸的置换或添加。这种置换或添加可以提供对酶的切割具有升高的耐性的肽，其中，用于切割位点的多种氨基酸中一种可以被它的D-异构体置换。示例性的酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、Arg-C蛋白酶、Asp-N内肽酶、胰凝乳蛋白酶、谷氨酰内肽酶、LysC赖氨酰内肽酶、LysN肽基-Lys金属内肽酶、蛋白酶K和嗜热菌蛋白酶；并且在本文中描述了用于这些酶的示例性切割位点。
此外，置换、添加和删除可以具有或可以优化靶向肽的特征，如电荷(例如，正或负电荷)、亲水性、疏水性、体内稳定性、生物利用率、毒性、免疫活性、免疫识别和结合性质。例如，可以通过删除一个或多个为非碱性的/带正电荷(not basic/positively charged)(如以下描述的，基于通常的侧链性质)或较少带正电荷(例如，通过pKa确定)的氨基酸(例如，1至3个氨基酸)提高正电荷。在另一个实施例中，可以通过插入一个或多个为碱性的/带正电荷或更多带正电荷(例如，通过pKa确定)的氨基酸(例如，1至3个氨基酸)提高正电荷。
试剂以及将试剂结合至树枝状聚合物-靶向肽复合物
可以将任何试剂化学地结合至树枝状聚合物-靶向肽复合物。这样的试剂包括小分子药物、抗生素、抗癌剂、显像剂(例如，放射性显像剂(radioimaging agent))、诊断剂、治疗剂、报告分子、RNAi试剂、以及肽和多肽治疗剂。通过存在于树枝状聚合物-靶向肽复合物上的官能团结合试剂。官能团可以包括但不限于马来酰亚胺、酰肼、叠氮化物、卤代乙酰胺和烷氧基胺。此外，以上描述的任何接头也可以被用于将试剂结合至树枝状聚合物-靶向肽复合物。
本发明的化合物可以具有在一个位置连接至树枝状聚合物-靶向肽复合物的第一试剂，例如，可以连接至核心部分的第一试剂。本发明的化合物还可以具有在第二位置连接至树枝状聚合物-靶向肽复合物的可选的第二试剂，例如连接至一个或多个靶向肽或连接至一个或多个表面分枝的一种或多种第二试剂。第二试剂可以通过接头连接至靶向肽或表面分枝。存在时，第二试剂可以与试剂相同或可以是与第一试剂相比不同类型的试剂，例如，第一试剂是一种细胞毒性试剂而第二试剂是第二细胞毒性试剂，并且细胞毒性试剂的组合是用于疾病的组合疗法。
制造本发明的化合物
本发明提供合成包含树枝状聚合物、靶向肽和一种或多种试剂的复合物的化合物的方法。具有多个核心部分和分枝部分并且具有不同数量的表面分枝和反应基团的树枝状聚合物是商业可获得的。树枝状聚合物可以通过表面分枝上的反应基团结合至多个血管肽素肽。例如，这可以通过以下完成：使树枝状聚合物与3-(2-吡啶基二硫代)-丙酸N-琥珀酰亚胺基酯反应形成树枝状聚合物-吡啶基-二硫化物中间产物；然后使树枝状聚合物-吡啶基-二硫化物中间产物与包含半胱氨酸残基的靶向肽反应以将靶向肽连接至表面分枝中的每个。可替代地，可以使树枝状聚合物与S-乙酰基硫代乙酸N-琥珀酰亚胺基酯反应形成树枝状聚合物-巯基中间产物，随后通过与靶向肽的马来酰亚胺衍生物的反应形成树枝状聚合物-靶向肽复合物。
然后使树枝状聚合物-靶向肽复合物与以上描述的第一试剂反应，以及可以以药学上可接受的形式(例如，药学上可接受的盐)生产得到的树枝状聚合物-靶向肽-第一试剂复合物。
可替代地，可以首先通过官能团(例如，叠氮化物)使树枝状聚合物与第一试剂反应，然后可以将得到的树枝状聚合物-第一试剂复合物的表面分枝官能化以连接表面分枝。
制造本发明的化合物的方法可以另外涉及在连接靶向肽或第一试剂之前，将任何以上描述的接头连接至树枝状聚合物。
制造本发明的化合物的方法可以可选地涉及在与第一试剂不同的位置将一个或多个第二试剂连接至化合物。例如，可以将一个或多个第二试剂连接至靶向肽中的一个或多个。可替代地，一个或多个试剂可以连接至树枝状聚合物的表面分枝中的一个或多个。在这些位置中的每个处，连接第二试剂可以涉及使用以上描述的接头。
确定本发明的化合物在组织中的累积的测定
可以进行确定本发明的化合物在组织中的累积的测定来评价连接至树枝状聚合物的不同数量的靶向肽的运输能力。可以将标记的化合物给予至动物，并且可以测量不同器官中的累积。例如，结合至可检测的标签(例如，近IR荧光光谱标签，如Cy5.5)的树枝状聚合物-靶向肽复合物允许在活体内可视化。这种化合物可以被给予至动物，并且可以检测器官中多肽的存在，从而允许确定多肽在期望器官中的累积速率和量。还可以用放射性同位素(例如，125I)标记化合物。然后将该化合物给予至动物。一段时间后，处死动物并且取出器官。然后可以使用本领域任何已知的方式测量每个器官中放射性同位素的量。通过比较特定器官中被标记的候选化合物的量相对于被标记的对照化合物的量，可以确定候选化合物进入特定组织以及在特定组织中累积的能力。在本发明的一个方面，比较多个血管肽素肽(例如，血管肽素-2)穿过BBB的运输与单个血管肽素肽(例如，血管肽素-2)的运输。
本发明的化合物的给予和剂量
本发明还特征在于包含治疗有效量的本发明的化合物的药物组合物。可以配制该组合物用于多种药物递送系统。也可以将一种或多种生理上可接受的赋形剂或载体包含在组合物中用于适当的制剂。在Remington’sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Philadelphia,PA,17thed.,1985中找到用于本发明的合适的制剂。为了简化用于药物递送的方法的回顾，参见，例如，Langer(Science 249:1527-1533,1990)。
该药物组合物意在用于肠胃外、鼻内、外用、口服或局部给予，例如通过经皮方式，用于预防和/或治疗性处置。可以肠胃外给予(例如，通过静脉内、肌肉内或皮下注射)或通过口服或通过在受血管或癌病况影响的区域局部施用或关节内注射给予该药物组合物。另外的给予途径包括血管内、动脉内、瘤内、腹膜内、心室内、硬膜内、以及鼻、眼、巩膜内、眶内、直肠、局部或吸入气雾剂给予。通过如积存注射(depot injection)或易蚀植入物或组件的方式，持续释放给予也被特别包含在本发明中。因此，本发明提供用于肠胃外给予的组合物，其包含溶解或悬浮在可接受的载体、优选地水性载体，例如水、缓冲水、生理盐水、PBS等中的以上提及的试剂。该组合物可以包含接近生理条件所需要的药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、润湿剂、洗涤剂等。本发明还提供用于口服递送的组合物，其可以包含惰性成分，如用于配制片剂、胶囊剂等的粘合剂或填料。此外，本发明提供用于局部给予的组合物，其可以包含惰性成分，如用于配制乳膏、软膏等的溶剂或乳化剂。
可以通过常规的灭菌技术灭菌这些组合物，或可以无菌过滤这些组合物。可以原样包装或冻干所得到的水溶液，在给予之前组合冻干的制剂与无菌水性载体组合。制剂的pH通常在3和11之间，更优选地在5和9之间或在6和8之间，以及最优选地在7和8之间，如7至7.5。可以以多个单一剂量单元包装固体形式的得到的组合物，每个剂量单元包含固定量的如在片剂或胶囊剂的密封包装中的以上提及的试剂或多种试剂。也可以将该组合物包装在灵活量的容器中，如包装在设计用于局部施用的乳膏或软膏的可挤压管中。
可以给予包含有效量的组合物用于预防性或治疗性处置。可以以足以延迟、减少或优选地预防临床疾病发病的量将本发明的组合物给予至受试者(例如，人)。在治疗应用中，可以以足以治愈或至少部分阻止病症症状和它的并发症的量将组合物给予至已经患有疾病的受试者(例如，人)。将足以实现该目的量定义为“治疗有效量”，这是足以基本改善与疾病或医学病症相关的一些症状的化合物的量。例如，在神经退行性疾病(例如，本文中描述的那些)的治疗中，降低、预防、延迟、抑制或阻止疾病或病症的任何症状的试剂或化合物是治疗有效的。试剂或化合物的治疗有效量不是治愈疾病或病症所需的，但是提供对于疾病或病症的治疗，使得疾病或病症的发病被延迟、阻碍或预防，或疾病或病症的症状改善，或疾病或病症的状态改变，例如，变得不严重或在个体中的恢复加快。
有效用于该用途的量可以取决于疾病或病症的严重度和受试者的重量和一般状态，但是一般在每个受试者中约0.05μg至约1000μg(例如，0.5-100μg)当量试剂/剂量的范围内。用于初始给予和加强给予的合适方案典型地是初始给予，随后一次或多次的每小时、每天、每周或每月间隔后通过随后给予重复剂量。可以作为单次剂量将总的有效量的存在于组合物中的试剂给予至哺乳动物，无论是在较短的时间段内通过推注或通过输注，或可以使用分次治疗方案给予，其中，在更长的时间段给予多次剂量(例如，每4-6、8-12、14-16或18-24小时或2-4周、1-2周、每一个月一次剂量)。可替代地，考虑了足以维持在血液中的治疗有效浓度的持续静脉滴注。
在考虑个体年龄、体重和哺乳动物病症的情况下，可以由普通技术人员确定存在于本发明的组合物内以及用于施加至哺乳动物(例如，人)的该发明的方法中的一种或多种试剂的治疗有效量。由于本发明的某些化合物表现出增强的穿过BBB的能力，所以本发明的化合物的剂量可以低于对于未结合的激动剂(拮抗剂，agonist)的治疗效果所需的等效剂量(例如，小于或等于该等效剂量的约90％、75％、50％、40％、30％、20％、15％、12％、10％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％)。可以以有效量将本发明的试剂给予至受试者(例如，哺乳动物，如人)，其是在被治疗的受试者中产生期望结果(例如，保护神经元、新神经元生长)的量。本领域的技术人员也可以凭经验确定治疗有效量。
可以用由主治医生选择的剂量水平和模式进行包含有效量的本发明的组合物的单次或多次给予。可以基于受试者中疾病或病症的严重度确定和调整剂量和给予方案，可以根据临床医生通常实施的方法或本文描述的那些在整个治疗过程中监测受试者。
可以与治疗或疗法的常规方法组合使用或与治疗或疗法的常规方法分开使用本发明的化合物。
当以与其他试剂组合疗法给予本发明的组合物时，可以顺序或同时将它们给予至个体。可替代地，根据本发明的药物组合物可以由与药学上可接受的赋形剂(如本文所描述的)相关的化合物和本领域已知的其他治疗剂或预防剂的组合组成。
实施例
实施例1：合成炔丙基-PAMAM树状分子。使用在Lee等人中记载的合成方案(Macromolecules 2006,39,2418-2422，通过引用结合于此)的修改的版本(如在以下的方案中示出的)制备炔丙基-PAMAM树状分子1-D0、1-D1、1-D2。
实施例2：合成叠氮基-PAMAM树状分子。使用在Lee等人中记载的合成方案(Tetrahedron 2006,62,9193-9200，通过引用结合于此)的修改的版本(如在以下的方案中示出的)制备叠氮基-PAMAM树状分子2-D0、2-D1、2-D2。
实施例3：合成叠氮基-PAMAM(0)-(SSPy)2。将叠氮基-PAMAM 2-D0(66mg，0.2mmol)溶解在DMF(1.3ml)中。然后添加SPDP(125mg，0.4mmol)。在室温下搅拌混合物1h，用水中的0.1％TFA(20ml)稀释。将得到的溶液直接负载至苯基42ml柱。制备性HPLC纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)产生65mg纯的叠氮基-PAMAM(0)-SSPy，45％。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C29H42N10O4S4，计算值，722.2273，发现，723.2184(M+1)。
实施例4：合成叠氮基-PAMAM(0)-(SSCysAn2)2。在氩气下在室温下搅拌叠氮基-PAMAM(0)-SSPy(40mg，55.5μmol)、An2Cys(240mg，80μmol)和NaHCO3(30mg，0.35mmol)在DMSO(1.5ml)和DMF(1.5ml)中的混合物1h。冷却至0℃后，用水(30ml)中的0.1％TFA稀释反应混合物，并且将其直接负载至苯基42ml柱用于纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)。冻干之后得到纯产物叠氮基-PAMAM(0)-(SSAn2)2(127mg，43％)的无色粉末。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C233H340N68O68S4，计算值，5308.4187，发现1327.8346(4+)、1062.6763(5+)、885.5691(6+)。
实施例5：合成炔丙基-PAMAM(1)-(SSPy)4。将炔丙基-PAMAM 1-D1(45mg，0.06mmol)溶解在DMF(1.0ml)中。然后添加SPDP(75mg，0.24mmol)。在室温下搅拌混合物1h，用水中的0.1％TFA(20ml)稀释。将得到的溶液直接负载在苯基42ml柱上用于HPLC纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)，得到炔丙基-PAMAM(1)-(SSPy)4的纯产物，50mg，55％。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C65H93N17O10S8，计算值，1527.5057，发现1528.4723(M+1)。
实施例6：合成炔丙基-PAMAM(1)-(SSCysAn2)4。在氩气下在室温下搅拌炔丙基-PAMAM(1)-(SSPy)4(20mg，13μmol)、An2Cys(125mg，52μmol)和NaHCO3(12mg，0.14mmol)在DMSO(0.8ml)和DMF(0.8ml)中的混合物2.5h。冷却至0℃后，用水中的0.1％TFA(15ml)稀释反应混合物，并且将其直接负载至苯基42ml柱用于纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)。冻干之后得到纯产物炔丙基--PAMAM(1)-(SSCysAn2)4(91mg，65％)的无色粉末。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C473H689N133O138S8，计算值，10700.8918，发现2675.6306(4+)、2140.7530(5+)、1529.4280(7+)。
实施例7：合成炔丙基-PAMAM(1)-(SAc)4。将炔丙基-PAMAM 1-D1(111mg，0.15mmol)溶解在DMF(2.0ml)中。然后添加DMSO(1ml)中的SATA(139mg，0.6mmol)。在室温下搅拌混合物1.5h，用水中的0.1％TFA(40ml)稀释。将得到的溶液直接负载至苯基42ml柱用于HPLC纯化(4％ACN/H2O至30％ACN/H2O与0.05％TFA)，得到炔丙基-PAMAM(1)-(Sac)4的纯产物，72mg，40％。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C49H81N13O14S4，计算值，1203.4909，发现1204.4896(M+1)。
实施例8：合成炔丙基-PAMAM(1)-(SMal-An2)4。向炔丙基--PAMAM(1)-(Sac)4(17.4mg，14.4μmol)在磷酸盐缓冲液pH 7.2(1ml)中的溶液中添加NH2OH.HCl(0.5M，0.07ml)。在室温下搅拌该混合物2h。接下来，添加DMSO(1.5ml)中的马来酰亚胺-An2(78mg，66μmol)，并且在室温下搅拌该反应混合物过夜。冷却至0℃之后，用水中的0.1％TFA(40ml)稀释反应混合物，并直接将其负载至C424ml柱用于纯化(4％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)。冻干之后得到纯产物炔丙基-PAMAM(1)-(SMal-An2)4(33mg，21％)的无色粉末。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C505H729N133O158S4，计算值，11317.2149，发现2830.8163(4+)、2264.8163(5+)、1887.5322(6+)。
实施例9：合成叠氮基-PAMAM(1)-(SSPy)4。将叠氮基-PAMAM 2-D1(86mg，0.11mmol)溶解在DMF(2.0ml)中。然后添加DMSO(1ml)中的SATA(137mg，0.44mmol)。在室温下搅拌混合物1h，用水中的0.1％TFA(30ml)稀释。将得到的溶液直接负载在苯基42ml柱上用于HPLC纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)，得到叠氮基-PAMAM(1)-SSPy的纯产物，85mg，49％。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C65H96N20O10S8，计算值，1572.5384，发现1573.4874(M+1)。
实施例10：合成叠氮基-PAMAM(1)-(SSCysAn2)4。在氩气下在室温下搅拌叠氮基-PAMAM(1)-(SSPy)4(30mg，19μmol)、An2Cys(183mg，76μmol)和NaHCO3(18mg，0.14mmol)在DMSO(1.2ml)和DMF(1.2ml)中的混合物3h。冷却至0℃后，用水中的0.1％TFA(25ml)稀释反应混合物，并且将其直接负载至C424ml柱用于纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)。冻干之后得到纯产物叠氮基-PAMAM(1)-(SSCysAn2)4(88mg，43％)的无色粉末。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C473H692N136O138S8，计算值，10745.9245，发现1791.6586(6+)、1535.8257(7+)、1343.9730(8+)、1075.3835(10+)。
实施例11：合成叠氮基-PAMAM(1)-(SAc)4。将叠氮基-PAMAM 2-D1(102mg，0.13mmol)溶解在DMF(2.0ml)中。然后添加DMSO(1.5ml)中的SATA(120mg，0.52mmol)。在室温下搅拌混合物1.5h，用水(30ml)中的0.1％TFA稀释。将得到的溶液直接负载至苯基42ml柱用于HPLC纯化(4％ACN/H2O至30％ACN/H2O与0.05％TFA)，产生叠氮基-PAMAM(1)-(Sac)4的纯产物，57mg，35％。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，计算值，对于C49H80N16O14S4，1248.5236，发现1249.4825(M+1)。
实施例12：合成叠氮基-PAMAM(1)-(SMal-An2)4。向叠氮基--PAMAM(1)-(Sac)4(30mg，24μmol)在磷酸盐缓冲液pH 7.2(1.5ml)中的溶液中添加NH2OH.HCl(0.5M，0.3ml)。在室温下搅拌该混合物2h。添加DMSO(2ml)中的马来酰亚胺-An2(160mg，65μmol)，并且在室温下搅拌反应混合物另外2h。冷却至0℃之后，用水中的0.1％TFA(30ml)稀释反应混合物，并直接将其负载至C424ml柱用于纯化(4％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)。冻干之后得到纯产物叠氮基-PAMAM(1)-(SMal-An2)4(54mg，20％)的无色粉末。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C505H728N136O158S4，计算值，11358.2163，发现2841.9829(4+)、2273.7718(5+)、1894.9193(6+)、1421.5047(8+)。
实施例13：合成炔丙基-PAMAM(2)-(SSPy)8。将炔丙基-PAMAM 1-D2(84mg，0.05mmol)溶解在DMF(1.2ml)中。然后添加DMSO(8ml)中的SPDP(129mg，0.41mmol)。在室温下搅拌混合物1h，用水中的0.1％TFA(20ml)稀释。将得到的溶液直接负载至苯基42ml柱用于HPLC纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)，产生炔丙基-PAMAM(2)-(SSPy)8的纯产物，36mg，22％。％。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C137H201N37O22S16，计算值，3229.1312，发现1616.5492(2+)、1077.7144(3+)。
实施例14：合成炔丙基-PAMAM(2)-(SSCysAn2)8。在氩气下在室温下搅拌炔丙基-PAMAM(2)-(SSPy)8(35mg，11μmol)、An2Cys(200mg，88μmol)和NaHCO3(22mg，0.26mmol)在DMSO(2ml)和DMF(2ml)中的混合物2h。冷却至0℃后，用水中的0.1％TFA(25ml)稀释反应混合物，并且将其直接负载至C424ml柱用于纯化(8％ACN/H2O至40％ACN/H2O与0.05％TFA)。冻干之后得到纯产物炔丙基-PAMAM(2)-(SSCysAn2)8(70mg，30％)的无色粉末。UPLC纯度，95％。HRMS(Microtof,ESI)m/z，对于C953H1393N269O278S19，计算值，21575.2346，发现2397.8071(9+)、2158.0533(10+)、1962.0438(11+)。
实施例15：合成基于支化的赖氨酸核心的肽树枝状聚合物。使用固相方法来合成基于支化的赖氨酸核心的树枝状聚合物。将α-和ε-基团都被相同的不稳定保护基团(Fmoc)封端的赖氨酸残基偶联至先前附连至树脂的接头(如以下图解所示)。当脱保护时，重复这种Lys偶联一次或两次，使得或是4个或是8个氨基酸基团可用于另外的偶联反应。可选地，可以每条链添加3个Gly残基以在基质的聚赖氨酸核心和待连接的肽之间提供柔性链。
合成和切割聚赖氨酸-AN2多聚体类似物。使用人工固相肽合成、用HCTU-(2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵六氟磷酸盐)激活用于Fmoc(N-(9-芴)甲氧羰基)化学的步骤，将所有肽组装在RINK酰胺甲基二苯甲基胺树脂上。通过用作为清除剂的三氟乙酸、三异丙基硅烷和水(95:2:3三氟乙酸:三异丙基硅烷:水)处理实现肽由树脂的切割。允许反应在室温(20-23℃)下进行2.0h。然后蒸发三氟乙酸，并且用冰冷的醚沉淀、过滤肽，将其溶解在20％乙酸/80％H2O中以及冻干。在45min内，通过反相-HPLC，使用20-80％B的梯度、在C4柱上纯化粗肽，在229下监测洗脱液(缓冲液A：H2O/0.1％三氟乙酸；缓冲液B：40％CH3CN/60％H2O/0.1％三氟乙酸)。Waters Acquity UPLC与Bruker Q-TOF质谱检测确定收集成分的分子质量和纯度，汇集并冻干显示期望肽的准确纯度和分子质量的那些。
为了消除树枝状聚合物混合物被包含氨基酸侧链保护基团(Pbf基团、Trt基团或tBu基团)的副产物污染，优化合成和脱保护步骤以使粗的、冻干的产物尽可能均匀。使用由2-氯三苯甲基氯化物树脂得到的完全保护的血管肽素-2片段在无删除的情况下实现整体较好质量的产物上也是成功的。
可替代地，将纯肽结合至树脂基质上的聚赖氨酸核心上，用于稍后的纯化。例如，将包含半胱氨酸的血管肽素-2偶联至被马来酰亚胺或SPDP活化的聚赖氨酸得到具有降低的副产物污染的产物。这主要是因为在结合步骤之前血管肽素-2单体被纯化。

Claims (105)

1.一种包含下式的化合物：
其中，
D是第一试剂；
X核心是具有p个分枝的树枝状聚合物的核心部分，其中，p是1至12的整数；
X分枝是所述树枝状聚合物的分枝部分，其中，每个X分枝连接至X核心的分枝或连接至另一个X分枝的分枝，并且其中，每个X分枝具有b个分枝，并且其中，b是2至8的整数；
l是所述树枝状聚合物的X分枝分枝的连续的层的个数，并且是2至10的整数；
Xn th是所述树枝状聚合物的n个表面分枝中的一个，并且连接至X分枝部分的b个分枝，其中，n＝p(b)l，并且其中，n为≤512；
Am是连接至Xn th的靶向肽，并且包含与选自由SEQ IDNO:1-105和107-117组成的组的序列基本同一的氨基酸序列，或其功能性片段；
m是≤n的正整数；
D’是可选存在的第二试剂，并且或连接至一个或多个Am或代替一个或多个Am并且直接连接至一个或多个Xn th，其中，所述化合物中的D’的个数为≤n；并且
所述树枝状聚合物的分子量为≤500千道尔顿，所述分子量不包括D、D’和Am。
2.根据权利要求1所述的化合物，包含下式：
其中，
p是2和6之间的整数；
b是2至4的整数；以及
l是2至5的整数。
3.一种包含下式的化合物：
其中，
D是第一试剂；
X核心是具有p个分枝的树枝状聚合物的核心部分，其中，p是2至6的整数；并且其中，所述核心部分选自由以下组成的组：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺、赖氨酸和丙烯胺；
X分枝是所述树枝状聚合物的分枝部分，其中，每个X分枝连接至X核心的分枝或连接至另一个X分枝的分枝，并且其中，每个X分枝具有b个分枝，并且其中，b是1至4的整数；
l是所述树枝状聚合物的X分枝分枝的连续层的个数，并且是0至4的整数；
Xn th是所述树枝状聚合物的n个表面分枝中的一个，并且连接至X分枝部分的b个分枝，其中，n＝p(b)l，并且其中，n≤256；
Am是连接至Xn th的靶向肽，并且包含与选自由SEQ IDNO:1-105和107-117组成的组的序列至少基本同一的氨基酸序列，或其功能性片段；
m是≤n的正整数；
D’是可选存在的第二试剂，并且或连接至一个或多个Am或代替一个或多个Am，并且直接连接至一个或多个Xn th，其中，所述化合物的D’的个数为≤n；并且
所述树枝状聚合物的分子量为≤500千道尔顿，所述分子量不包括D、D’和Am。
4.根据权利要求3所述的化合物，包含：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中，所述n为≤128。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中，所述n为≤64。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中，所述n为≤32。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物的所述分子量为≤100千道尔顿。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物的所述分子量为≤50千道尔顿。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物的所述分子量为≤25千道尔顿。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中，所述核心部分选自由以下组成的组：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺和丙二胺。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物是聚(酰氨基胺)(PAMAM)。
13.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中，所述核心部分是赖氨酸或赖氨酸类似物。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物是聚赖氨酸。
15.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中，所述核心部分是炔丙胺。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物是聚(丙烯亚胺)(POPAM)。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中，所述分枝部分选自由以下组成的组：炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、丙胺、丙烯亚胺、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺和赖氨酸。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，其中，所述分枝部分是炔丙胺、乙二胺、三乙醇胺、季戊四醇、丙胺、丙烯亚胺、叠氮基-丙基(烷基)胺、羟乙基(烷基)胺、四苯基甲烷、均苯三甲酰氯、二氨基己烷、二氨基丁烷、胱胺、丙二胺和赖氨酸中的任一种的衍生物。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物的至少两个所述表面分枝具有连接的靶向肽。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物的多于两个表面分枝具有连接的靶向肽。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中，所有的所述表面分枝具有连接的靶向肽。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中，所述靶向肽通过接头连接至所述表面分枝。
23.根据权利要求22所述的化合物，其中，所述接头选自由以下组成的组：吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头和乙炔。
24.根据权利要求22所述的化合物，其中，所述接头是共价键。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中，所述靶向肽通过可断裂的连接附连至所述表面分枝。
26.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中，所述靶向肽通过不可断裂的连接附连至所述表面分枝。
27.根据权利要求25所述的化合物，其中，所述连接是酯连接。
28.根据权利要求26所述的化合物，其中，所述连接是马来酰亚胺连接。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的化合物，其中，连接至所述树枝状聚合物的所述靶向肽中的至少一种包含与选自由SEQ IDNO:1-105和107-117组成的组的序列至少85％同一的氨基酸序列或其片段。
30.根据权利要求29所述的化合物，其中，连接至所述树枝状聚合物的所述靶向肽中的至少一种包含选自由SEQ ID NO:1-105和107-117组成的组的氨基酸序列或其片段。
31.根据权利要求30所述的化合物，其中，连接至所述树枝状聚合物的所有所述靶向肽包含选自由SEQ ID NO:1-105和107-117组成的组的氨基酸序列或其片段。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的化合物，其中，连接至所述树枝状聚合物的所述靶向肽中的至少一种包含选自由血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)、cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQ IDNO:114)和反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)组成的组中的氨基酸序列。
33.根据权利要求32所述的化合物，其中，所有的所述靶向肽包含选自由血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)、cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQID NO:114)和反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)组成的组中的氨基酸序列。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的化合物，其中，所述靶向肽是血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中，所述靶向肽是cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的化合物，其中，所述第一试剂通过反应性基团连接至所述树枝状聚合物。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物，其中，一种或多种所述第二试剂是可选的，并且当存在时，所述第二试剂通过反应性基团连接至一个或多个所述Am。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的化合物，其中，一种或多种所述第二试剂是可选的，并且当存在时，所述第二试剂通过反应性基团连接至一个或多个所述Xn th。
39.根据权利要求36至38中任一项所述的化合物，其中，所述反应性基团选自由马来酰亚胺、酰肼、叠氮化物、卤代乙酰胺和烷氧基胺组成的组。
40.根据权利要求39所述的化合物，其中，所述反应性基团是叠氮基团。
41.根据权利要求39所述的化合物，其中，所述反应性基团是马来酰亚胺基团。
42.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物，其中，所述树枝状聚合物通过接头连接至所述反应性基团。
43.根据权利要求37或38所述的化合物，其中，所述反应性基团通过接头连接至所述Am或所述Xn th。
44.根据权利要求42或43所述的化合物，其中，所述接头选自由吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头、乙炔和共价键组成的组。
45.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
46.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
47.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
48.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Mal是马来酰亚胺。
49.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
50.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
51.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
52.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
53.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
54.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
55.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
56.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
57.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
58.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
59.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，并且邻近Cys的“SS”代表二硫键，包括所述半胱氨酸的硫原子。
60.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
61.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
62.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
63.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
其中，Cys是半胱氨酸，以及Ahx是叠氮基己酸。
64.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
65.根据权利要求1所述的化合物具有下式：
66.根据权利要求1至65中任一项所述的化合物，其中，所述第一试剂选自由蛋白质、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。
67.根据权利要求1至66中任一项所述的化合物，其中，所述第二试剂选自由蛋白质、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。
68.根据权利要求1至67中任一项所述的化合物，其中，所述第一试剂和所述第二试剂不同。
69.根据权利要求1至67中任一项所述的化合物，其中，所述第一试剂和所述第二试剂相同。
70.根据权利要求1至69中任一项所述的化合物，其中，所述化合物能够进入内皮细胞或进入表达LRP-1受体的细胞。
71.根据权利要求70所述的化合物，其中，表达LRP-1受体的所述细胞选自由肝细胞、肾细胞和脾细胞组成的组。
72.根据权利要求1至71中任一项所述的化合物，其中，所述化合物能够穿过血脑屏障。
73.一种合成权利要求1至72中任一项所述的化合物的方法，包括：
(a)通过接头将至少两个靶向肽连接至树枝状聚合物以形成树枝状聚合物-靶向肽复合物；
(b)通过接头将一个或多个第一试剂连接至所述树枝状聚合物-靶向肽复合物；以及
(c)可选地通过接头将一个或多个第二试剂连接至步骤(b)中形成的所述复合物。
74.一种合成权利要求1至72中任一项所述的化合物的方法，包括：
(a)通过接头将至少一个第一试剂连接至树枝状聚合物以形成树枝状聚合物-第一试剂复合物；
(b)通过接头将至少两个靶向肽连接至所述树枝状聚合物-第一试剂复合物；以及
(c)可选地通过接头将一个或多个第二试剂连接至步骤(b)中形成的所述复合物。
75.根据权利要求73或74中所述的方法，其中，所述靶向肽中的每个连接至所述树枝状聚合物的表面分枝。
76.根据权利要求73至75中任一项所述的方法，其中，所述第一试剂连接至所述树枝状聚合物的核心部分。
77.根据权利要求73至76中任一项所述的方法，其中，所述第二试剂连接至所述靶向肽中的至少一个或连接至所述表面分枝中的至少一个。
78.根据权利要求73至77中任一项所述的方法，其中，所述接头选自由以下组成的组：吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头、乙炔、可断裂的接头和不可断裂的接头。
79.根据权利要求73至77中任一项所述的方法，其中，所述接头是共价键。
80.根据权利要求73至79中任一项所述的方法，其中，在将所述靶向肽连接至所述接头之前，将一个或多个接头连接至所述树枝状聚合物的所述表面分枝。
81.根据权利要求73至80中任一项所述的方法，其中，在将所述第一试剂连接至所述接头之前，将一个或多个接头连接至所述树枝状聚合物的所述核心部分。
82.根据权利要求73至81中任一项所述的方法，其中，在将所述第二试剂连接至所述接头之前，将一个或多个接头连接至所述靶向肽。
83.根据权利要求73至82中任一项所述的方法，其中，在将所述第二试剂连接至所述接头之前，将接头连接至所述分枝表面。
84.根据权利要求73至83中任一项所述的方法，其中，所述靶向肽的所述连接包括使所述树枝状聚合物与3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀酰亚胺基酯反应；随后是使得到的产物与含半胱氨酸残基的靶向肽反应。
85.根据权利要求73至83中任一项所述的方法，其中，所述靶向肽的所述连接包括使所述树枝状聚合物与S-乙酰基硫代乙酸N-琥珀酰亚胺基酯反应；随后是使得到的产物与所述靶向肽的马来酰亚胺衍生物反应。
86.根据权利要求85所述的化合物，其中，所述靶向肽的所述马来酰亚胺衍生物包含选自由血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)和反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)组成的组中的氨基酸序列。
87.根据权利要求73至86中任一项所述的方法，其中，所述靶向肽包含选自由SEQ ID NO:1-105和107-117组成的组中的氨基酸序列或其片段。
88.根据权利要求87所述的方法，其中，所述靶向肽包含选自由血管肽素-1(SEQ ID NO:67)、血管肽素-2(An2)(SEQ ID NO:97)和反向的血管肽素-2(SEQ ID NO:117)组成的组中的氨基酸序列。
89.根据权利要求87所述的方法，其中，所述靶向肽包含选自由cys-血管肽素-2(CysAn2)(SEQ ID NO:113)、血管肽素-2-cys(SEQ IDNO:114)组成的组中的氨基酸序列。
90.根据权利要求73至89中任一项所述的方法，其中，多于两个靶向肽连接至所述树枝状聚合物。
91.根据权利要求73至90中任一项所述的方法，其中，所述第一试剂通过反应性基团连接至所述树枝状聚合物的所述核心部分。
92.根据权利要求73至91中任一项所述的方法，其中，一个或多个所述第二试剂通过反应性基团连接至一个或多个所述靶向肽。
93.根据权利要求73至92中任一项所述的方法，其中，一个或多个所述第二试剂通过反应性基团连接至所述树枝状聚合物的一个或多个所述表面分枝。
94.根据权利要求73至93中任一项所述的方法，其中，所述反应性基团选自由马来酰亚胺、酰肼、叠氮化物、卤代乙酰胺和烷氧基胺组成的组。
95.根据权利要求94所述的方法，其中，所述反应性基团是叠氮基团。
96.根据权利要求94所述的方法，其中，所述反应性基团是马来酰亚胺基团。
97.根据权利要求73至92中任一项所述的方法，其中，所述树枝状聚合物通过接头与所述反应性基团分离。
98.根据权利要求93或94所述的方法，其中，所述反应性基团通过接头与所述表面分枝或所述靶向肽分离。
99.根据权利要求91所述的方法，其中，所述反应性基团存在于连接至所述核心部分的接头上。
100.根据权利要求97至99中任一项所述的方法，其中，所述接头选自由以下组成的组：吡啶二硫化物、硫代磺酸酯、乙烯基磺酸酯、异氰酸酯、NHS酯、酰亚胺酯、二嗪、酰肼、硫醇、羧酸、多肽接头、乙炔、可断裂的接头和不可断裂的接头。
101.根据权利要求73至100中任一项所述的方法，其中，所述第一试剂选自由蛋白质、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。
102.根据权利要求73至101中任一项所述的方法，其中，所述第二试剂选自由蛋白质、小分子、核酸、诊断剂、显像剂和治疗剂组成的组。
103.根据权利要求73至102中任一项所述的方法，其中，所述第一试剂和所述第二试剂不同。
104.根据权利要求73至102中任一项所述的方法，其中，所述第一试剂和所述第二试剂相同。
105.根据权利要求73至104中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括合成权利要求1至72中任一项所述的化合物的药学上可接受的盐。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106854231A (zh) * 2015-12-09 2017-06-16 中国科学院大连化学物理研究所 一种硫巯化多肽的富集方法

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006272405B2 (en) 2005-07-15 2013-02-07 Angiochem Inc. Use of aprotinin polypeptides as carriers in pharmaceutical conjugates
BRPI0920209A2 (pt) 2008-10-15 2015-12-22 Angiochem Inc conjugados de agonistas de glp-1 e usos dos mesmos
WO2010063122A1 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Angiochem Inc. Conjugates of neurotensin or neurotensin analogs and uses thereof
CA2881602A1 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Angiochem Inc. Peptide-dendrimer conjugates and uses thereof
WO2016090495A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-16 Angiochem Inc. TARGETED α-L-IDURONIDASE CONJUGATES AND USES THEREOF
LT3650459T (lt) * 2015-02-24 2023-12-27 City Of Hope Chemiškai koduotos erdviniu požiūriu orientuotos bibliotekos atrankos platformos
JP6823055B2 (ja) 2015-06-15 2021-01-27 アンジオケム インコーポレーテッド 軟髄膜癌腫症の治療方法
DK3349802T3 (en) 2015-09-14 2021-10-11 Univ Texas Lipocationic dendrimers and uses thereof
EP3368028A1 (en) * 2015-10-29 2018-09-05 The Johns Hopkins University Denderimer compositions and use in treatment of necrotizing enterocolitis and other gastrointestinal disorders
US11530243B2 (en) * 2016-02-18 2022-12-20 Veiove Animal Health Inc. Non-cleavable substance P conjugates and methods of use thereof
PL417159A1 (pl) * 2016-05-11 2017-11-20 Instytut Biologii Doświadczalnej Im. Marcelego Nenckiego Koniugaty białka prionowego z dendrymerami do zastosowania w leczeniu choroby Alzheimera
CN115919769A (zh) * 2016-05-16 2023-04-07 德克萨斯大学系统董事会 用于作为纳米粒递送tRNA的组合物及其使用方法
CN106279635B (zh) * 2016-08-10 2019-01-25 同济大学 类抗菌肽和囊泡及其制备方法和应用
ES2677242B1 (es) * 2017-01-31 2019-03-27 Univ Alcala Henares Nanoconjugados formados por moléculas dendríticas y péptidos como agentes antitumorales frente al cáncer
JP7178108B2 (ja) 2017-04-27 2022-11-25 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 血管造影において使用するためのデンドリマー組成物
CA3082121C (en) 2017-11-10 2023-01-24 The Johns Hopkins University Dendrimer delivery system and methods of use thereof
CA3111484A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
JP2021535226A (ja) 2018-09-04 2021-12-16 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム 核酸を臓器特異的送達するための組成物および方法
CN110170055A (zh) * 2019-06-04 2019-08-27 哈尔滨理工大学 一种新型双重脑缺血靶向纳米载体材料的制备方法
WO2021046307A1 (en) * 2019-09-04 2021-03-11 North Carolina State University Hybridized poly(amidoamine)-amino acid dendrimers
JP2023504285A (ja) 2019-12-04 2023-02-02 アシュバッタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 眼に薬物送達するためのデンドリマー組成物および方法
WO2022152939A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof
WO2024029242A1 (ja) * 2022-08-05 2024-02-08 一丸ファルコス株式会社 新規ｌｒｐ１結合ペプチド

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011041897A1 (en) * 2009-10-06 2011-04-14 Angiochem Inc. Compositions and methods for the transport of therapeutic agents

Family Cites Families (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5258499A (en) 1988-05-16 1993-11-02 Vestar, Inc. Liposome targeting using receptor specific ligands
US5714167A (en) 1992-06-15 1998-02-03 Emisphere Technologies, Inc. Active agent transport systems
EP0599303A3 (en) 1992-11-27 1998-07-29 Takeda Chemical Industries, Ltd. Peptide conjugate
AU5854096A (en) 1995-05-08 1996-11-29 Scios Inc. Kunitz type protease inhibitors
AU5908296A (en) 1995-05-31 1996-12-24 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for targeted delivery of effector m olecules
PL188387B1 (pl) 1996-03-11 2005-01-31 Bayer Ag Białko o aktywności hamującej proteazę serynową, kompozycja farmaceutyczna, wyodrębniona sekwencja,samopowtarzający się wektor, zastosowanie białka o aktywności proteazy serynowej, sposób hamowania aktywności proteazy serynowej ex vivo i sposób wytwarzania białka
AU729643B2 (en) 1996-05-01 2001-02-08 Antivirals Inc. Polypeptide conjugates for transporting substances across cell membranes
CA2283474A1 (en) 1997-03-04 1998-09-11 Bio-Technology General Corp. Isolation of tissue specific peptide ligands and their use for targeting pharmaceuticals to organs
CN1263473A (zh) 1997-05-21 2000-08-16 利兰·斯坦福青年大学托管委员会 增加跨生物膜转运的组合物和方法
US6372250B1 (en) 2000-04-25 2002-04-16 The Regents Of The University Of California Non-invasive gene targeting to the brain
ATE445838T1 (de) 2001-07-25 2009-10-15 Raptor Pharmaceutical Inc Zusammensetzungen und verfahren zur modulation des transports durch die blut-hirn-schranke
AU2002347910A1 (en) 2001-10-16 2003-04-28 Symbiontics Inc. Methods and compositions for targeting proteins across the blood brain barrier
ATE365213T1 (de) 2002-02-07 2007-07-15 Yissum Res Dev Co Aminosäuresequenzen die die fähigkeit besitzen, die durchdringung durch eine biologische barriere erleichtern
US6881829B2 (en) 2002-04-26 2005-04-19 Chimeracom, L.L.C. Chimeric hybrid analgesics
MXPA05007322A (es) * 2003-01-06 2006-02-17 Angiochem Inc Aprotinina y analogos como portadores a traves de la barrera sangre-cerebro.
WO2004108071A2 (en) 2003-06-05 2004-12-16 Salk Institute For Biological Studies Targeting polypeptides to the central nervous system
EP1638605B1 (en) 2003-06-20 2014-01-08 Raptor Pharmaceutical, Inc. Delivery of therapeutic compounds to the brain and other tissues
US20050026823A1 (en) 2003-06-20 2005-02-03 Biomarin Pharmaceutical Inc. Use of the chaperone receptor-associated protein (RAP) for the delivery of therapeutic compounds to the brain and other tissues
EP1652855A4 (en) 2003-08-08 2008-11-19 Tissue Targeting Japan Inc POLYPEPTIDES ACTING ON PREDISPOSITIONS TO BRAIN PATHOLOGIES AND THE USE OF SAID POLYPEPTIDES
US20050058702A1 (en) 2003-09-17 2005-03-17 Ben-Sasson Shmuel A. Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier
EP1796537A4 (en) * 2004-08-25 2012-03-07 Univ Michigan DENDRIMER COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
US20060078535A1 (en) * 2004-10-13 2006-04-13 The Regents Of The University Of Michigan Anticancer compounds and methods
SI1859041T2 (sl) 2005-02-18 2015-04-30 Angiochem Inc. Polipeptidi aprotinina za prenos spojine prek krvno-moĹľganske pregrade
US20090016959A1 (en) 2005-02-18 2009-01-15 Richard Beliveau Delivery of antibodies to the central nervous system
AU2006272405B2 (en) 2005-07-15 2013-02-07 Angiochem Inc. Use of aprotinin polypeptides as carriers in pharmaceutical conjugates
JP2009502135A (ja) 2005-07-19 2009-01-29 ザ・ボード・オブ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・イリノイ 血液脳関門を越えるための、および脳癌細胞内への輸送因子、並びにその使用方法
US8053569B2 (en) 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
CA2666841A1 (en) 2006-10-19 2008-04-24 Angiochem, Inc. Compounds for stimulating p-glycoprotein function and uses thereof
PL2164866T3 (pl) 2007-05-29 2014-10-31 Angiochem Inc Polipeptydy podobne do aprotyniny do dostarczania skoniugowanych z nimi środków do tkanek
US9365634B2 (en) 2007-05-29 2016-06-14 Angiochem Inc. Aprotinin-like polypeptides for delivering agents conjugated thereto to tissues
RU2010129761A (ru) 2007-12-20 2012-01-27 Ангиочем Инк. (Ca) Конъюгаты полипептидов с нуклеиновыми кислотами и их применение
AU2009238187B2 (en) 2008-04-18 2014-03-06 Angiochem Inc. Pharmaceutical compositions of paclitaxel, paclitaxel analogs or paclitaxel conjugates and related methods of preparation and use
MX2011004019A (es) 2008-10-15 2011-06-24 Angiochem Inc Conjugados de etoposido y doxorubicina para entrega de farmacos.
BRPI0920209A2 (pt) 2008-10-15 2015-12-22 Angiochem Inc conjugados de agonistas de glp-1 e usos dos mesmos
WO2010063122A1 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Angiochem Inc. Conjugates of neurotensin or neurotensin analogs and uses thereof
US20110288009A1 (en) 2008-12-05 2011-11-24 Angiochem Inc. Leptin and leptin analog conjugates and uses thereof
CA2745499A1 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Angiochem Inc. Peptide therapeutic conjugates and uses thereof
EP2373789A4 (en) 2008-12-17 2012-08-29 Angiochem Inc MEMBRANTYP-1 MATRIX METALLOPROTEINASE INHIBITORS AND THEIR USE
US20110318322A1 (en) 2009-01-12 2011-12-29 Nektar Therapeutics Conjugates of a Lysosomal Enzyme Moiety and a Water Soluble Polymer
RU2011146654A (ru) 2009-04-20 2013-05-27 Ангиокем Инк. Способы лечения рака яичников с применением конъюгированного средства
US20100284921A1 (en) 2009-05-08 2010-11-11 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Targeted nanoparticles for intracellular cancer therapy
JP2012529272A (ja) 2009-06-11 2012-11-22 アンジオケム インコーポレーテッド Ｇｄｎｆおよびｂｄｎｆを中枢神経系へ送達するための融合タンパク質
CN102596993A (zh) 2009-07-02 2012-07-18 安吉奥开米公司 多聚体肽结合物以及其应用
HUE026708T2 (en) 2009-07-14 2016-07-28 Mayo Foundation Peptide-mediated, non-covalent delivery of active substances in blood glucose
US8530429B2 (en) 2009-11-24 2013-09-10 Arch Cancer Therapeutics, Inc. Brain tumor targeting peptides and methods
US9095541B2 (en) 2009-11-24 2015-08-04 Arch Cancer Therapeutics, Inc. Brain tumor targeting peptides and methods
EP2333074A1 (en) 2009-12-14 2011-06-15 Robert Steinfeld Substances and methods for the treatment of lysosmal storage diseases
WO2011153642A1 (en) 2010-06-10 2011-12-15 Angiochem Inc. Leptin and leptin analog conjugates and fusion proteins and uses thereof
BR112012033295A2 (pt) 2010-07-02 2016-10-11 Angiochem Inc polipeptídeos curtos e contendo d-aminoácido para conjugados terapêuticos e seu uso
CN102406949B (zh) 2010-09-21 2013-05-29 复旦大学 一种靶向示踪的多模式诊断纳米影像药物
WO2012037687A1 (en) * 2010-09-23 2012-03-29 Angiochem Inc. Therapeutic polypeptides and uses thereof
CN102552928A (zh) 2010-12-19 2012-07-11 复旦大学 一种治疗脑部肿瘤的双级靶向递药系统及其制备方法
CN102614105A (zh) 2011-01-28 2012-08-01 复旦大学 一种脑靶向载两性霉素b聚合物胶束给药系统
WO2013056096A1 (en) 2011-10-13 2013-04-18 Angiochem Inc. Polypeptide-opioid conjugates and uses thereof
CN104136606A (zh) 2011-12-01 2014-11-05 安吉奥开米公司 靶向的艾杜糖-2-硫酸酯酶化合物
WO2013078564A2 (en) 2011-12-01 2013-06-06 Angiochem Inc. Targeted lysosomal enzyme compounds
AU2013273894A1 (en) 2012-06-15 2015-02-05 Angiochem Inc. Targeted iduronidase compounds
CA2881602A1 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Angiochem Inc. Peptide-dendrimer conjugates and uses thereof
JP2015526435A (ja) 2012-08-14 2015-09-10 アンジオケム インコーポレーテッド 抗体成分と血液脳関門を通過するポリペプチドと細胞毒とを含むコンジュゲート
US20160213760A1 (en) 2012-11-12 2016-07-28 Angiochem Inc. Aprotinin-derived polypeptide-antibody conjugates
GB201220474D0 (en) 2012-11-14 2012-12-26 Sagetis Biotech Sl Polypeptides
WO2014082184A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Angiochem Inc. Targeted iduronate-2-sulfatase compounds
WO2014194428A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Angiochem Inc. Targeted heparan sulfatase compounds
WO2014194429A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Angiochem Inc. Targeted enzyme compounds and uses thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011041897A1 (en) * 2009-10-06 2011-04-14 Angiochem Inc. Compositions and methods for the transport of therapeutic agents

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KRIS C. WOOD ET AL: "A Family of Hierarchically Self-Assembling Linear-Dendritic Hybrid Polymers for Highly", 《ANGEW. CHEM. INT. ED.》 *
SHIXIAN HUANG ET AL: "Dual targeting effect of Angiopep-2-modified, DNA-loaded nanoparticles for glioma", 《BIOMATERIALS》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106854231A (zh) * 2015-12-09 2017-06-16 中国科学院大连化学物理研究所 一种硫巯化多肽的富集方法
CN106854231B (zh) * 2015-12-09 2020-08-11 中国科学院大连化学物理研究所 一种硫巯化多肽的富集方法

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