JP2023504285A - 眼に薬物送達するためのデンドリマー組成物および方法 - Google Patents

Abstract

眼の１つまたは複数の炎症性および／または血管新生疾患および／または障害を処置するための、デンドリマー組成物および方法は、眼の疾患の１つまたは複数の症状を処置するかまたは軽減するために、および／または眼の疾患および／または障害を診断するために、１種または複数種の活性剤と、複合体化されるかまたはコンジュゲートされたヒドロキシル末端デンドリマーを含む。デンドリマーは、１種または複数種のエチレンジアミン－コアポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）ヒドロキシル末端４、５、６、７、８、９、または１０世代デンドリマーを含んでいてもよい。活性剤は、スニチニブまたはその類似体を含むＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であってもよい。好ましくは、組成物は、網膜／脈絡膜における活性化ミクログリア／マクロファージを標的とするため全身経路を介して投与するのに適切である。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１９年１２月４日出願の米国仮出願第６２／９４３，７２４号、２０２０年５月６日出願の米国仮出願第６３／０２１，０２３号、および２０２０年１０月３０日出願の米国仮出願第６３／１０８，２３４号の利益を主張する。

発明の分野
本発明は一般に、薬物送達の分野にあり、特に、眼および周囲組織内の活性化免疫細胞に選択的に薬物を送達する方法である。

発明の背景
網膜内の神経炎症性変化の発症は、緑内障、糖尿病性網膜症、および加齢黄斑変性を含む多数の網膜障害の病因の有意な因子である。網膜内の一次常在自然免疫細胞であるミクログリアの、生理学的変化から生じる異常な免疫応答は、神経変性および病理学的新生血管形成を含む疾患の進行の態様を推進させると考えられる（Karlstetter et al., 2015; Silverman and Wong, 2018）。ミクログリアは、網膜の種々の細胞型と多様な病理学的経路との間の複雑な相互作用に起因して、活性化される。活性化後、ミクログリア細胞はその分岐した突起を失い、増殖しかつ急速に損傷領域に移行し、組織損傷を消散させる。しかしながら、組織ストレスの持続的存在はミクログリアを刺激して、過剰反応性になり、網膜変性変化を好む炎症促進性メディエーターの過剰な生成をもたらす。慢性炎症促進性環境は、視力に影響を及ぼす網膜変性疾患および神経学的障害の顕著な特徴である。網膜ミクログリアの活性化は、緑内障、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症、および分枝静脈閉塞症を含む眼の炎症性疾患で生じるように、虚血／再潅流損傷（Ｉ／Ｒ）のマウスモデルでも生じる。網膜血管閉塞は、それがＩ／Ｒモデルにおける高い眼内圧力によるものであってもまたはＢＶＯにおける血栓によるものであっても、眼内の血流の減少を引き起こし、網膜虚血をもたらす。これはニューロンの死を引き起こし、ミクログリアのさらなる活性化を開始させる。

炎症促進性および血管新生因子の強化された生成は、脈絡膜から網膜下腔への新しい血管の形成および成長を誘発させ、レーザー誘発型ＣＮＶマウスモデルでの滲出性ＡＭＤの特徴を模倣する（Lambert V, et al., Nat. Protoc. 8, 2197-2211(2013)）。虚血、低酸素症、または炎症などのいくつかの状況は、新生血管形成を促進させる可能性がある。病理学的眼内血管新生、特に網膜および脈絡膜におけるものは、著しい視覚障害をもたらす可能性がある。糖尿病性網膜症、新生血管加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、未熟児網膜症、および網膜血管閉塞は、血管新生関連の失明の主な原因である。

滲出性（湿潤型）ＡＭＤは、網膜色素上皮または神経感覚層の漿液または出血性分離によって特徴付けられる。患者は、流体蓄積、出血、および／または脂質滲出として見られる脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を発症し得る。糖尿病性網膜症（ＤＲ）の最も初期の段階は、微小動脈瘤（毛細血管壁からの嚢状突出）、網膜内出血、および綿花状白斑（神経線維層梗塞）を含む網膜血管異常によって特徴付けられる。疾患の進行に伴い、網膜血管が徐々に閉鎖すると、網膜虚血をもたらし、静脈異常（ビーズ、ループ）、網膜内微細血管異常、ならびに網膜出血および滲出の増大を含む徴候が生じる。非増殖性ＤＲは、上記病変の存在および程度に応じて軽度、中度、重度、および非常に重度とグレード分けされる。ＤＲのより進行した段階には、網膜虚血により誘発された新しい血管の形成が関与し、それが乳頭（乳頭の新生血管形成、ＮＶＤ）からまたは網膜内の他の箇所（他の箇所での新生血管形成、ＮＶＥ）から拡がる。硝子体内に延びる新しい血管は、硝子体出血、および随伴する収縮繊維組織に関連した牽引性網膜剥離を引き起こす可能性がある。
今日まで、ＤＲに関して長期にわたる利益をもたらすことが結論的に実証された唯一の処置は、局所レーザー光凝固である。ＡＭＤの患者に対する標準的な処置は、疾患の進行を遅らせるための、眼内への抗ＶＥＧＦの硝子体内注射であり、抗ＶＥＧＦ治療が糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）で有用になり得ることを示したという研究が存在している。しかしながら現時点で、虚血性網膜症またはＡＭＤに利用可能な全身的処置はない。この処置では、ミクログリアでの滞留および全身に送達できる能力に起因して、注射がそれほど頻繁ではなく、現行の抗ＶＥＧＦ治療におけるような頻繁な眼内注射が回避されると考えられる。

Lambert V, et al., Nat. Protoc. 8,2197-2211(2013)

したがって本発明の目的は、眼の１つまたは複数の炎症性および／または血管新生疾患、特にＤＭＥ、ＤＲ、およびＡＭＤの有効治療のための組成物および方法を提供することである。

本発明の別の目的は、増大した効力および低減した副作用の全身投与を介した眼内の罹患組織／細胞への、１種または複数種の活性剤の標的送達のための組成物および方法を提供することである。

さらなる目的は、眼の１つまたは複数の炎症性および／または血管新生疾患に関連した活性化ミクログリアへの１種または複数種の活性剤の、標的送達のための組成物および方法を提供することである。

目的は、眼の１つまたは複数の炎症性および／または血管新生疾患に関連した炎症促進性および／または血管新生因子を阻害しまたは低減するのに有効な組成物および方法を提供することでもある。

発明の要旨
眼の１つまたは複数の疾患および／または障害を処置および／または診断するための、１種もしくは複数種の治療剤、予防剤、および／または診断剤を選択的に送達するための組成物および方法を開発した。組成物は、眼の疾患組織／細胞が処置および／または診断されるようミクログリア細胞を選択的に活性化するために、１種または複数種の治療剤、予防剤、および／または診断剤を送達する。

組成物は、１種または複数種の受容体チロシンキナーゼ阻害剤と、複合体化されるか、共有結合によりコンジュゲートされるか、または分子内分散もしくはカプセル化されたヒドロキシル末端デンドリマーを、それを必要とする対象の網膜および／または脈絡膜内の活性化ミクログリアおよびマクロファージの数または活性を低減させるのに有効な量で含む。一部の実施形態では、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、バンデタニブ、アキシチニブ、セジラニブ、バタラニブ、ダサチニブ、ニンテダニブ、モテサニブ、およびこれらの類似体など、血管内皮成長因子受容体の阻害剤である。好ましくは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブまたはその類似体である。一部の実施形態では、診断剤は、色素、例えば蛍光色素、近赤外線色素、ＳＰＥＣＴ造影剤、ＰＥＴ造影剤、および放射性同位体である。好ましくは、診断剤は、蛍光色素インドシアニングリーン（ＩＣＧ）である。

一部の実施形態では、デンドリマーは、４世代、５世代、６世代、７世代、８世代、９世代、または１０世代のＰＡＭＡＭデンドリマーである。一部の実施形態では、１種または複数種の治療剤、予防剤、および／または診断剤は、デンドリマーに共有結合によりコンジュゲートしている。

一部の実施形態では、１種または複数種の治療剤、予防剤、および／または診断剤は、薬剤のデンドリマーコンジュゲートに対する重量濃度が、約０．０１重量％（ｗ／ｗ）から約３０％ｗ／ｗ、約１％ｗ／ｗから約２５％ｗ／ｗ、約５％ｗ／ｗから約２０％ｗ／ｗ、および約１０％ｗ／ｗから約１５％ｗ／ｗの間にある。

一部の実施形態では、デンドリマーと薬剤との間の１つまたは複数のスペーサーまたはリンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏでデンドリマー剤複合体の放出可能な（または切断可能な）または非放出性（または非切断性）形態を提供するよう添加される。一部の実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にエステル結合を提供する適切なスペーサーを介して存在する。一部の実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にエーテル結合を提供する、適切なスペーサーを介して存在する。一部の実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にアミド結合を提供する適切なスペーサーを介して存在する。好ましい実施形態では、デンドリマーと薬剤との間の１つまたは複数のスペーサー／リンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏで所望の有効な放出動態を実現するように調整される。

組成物は、眼の１つまたは複数の炎症性および／または血管新生疾患、例えば加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜色素変性症、視神経炎、ブドウ膜炎、網膜剥離、側頭動脈炎、網膜虚血、アテローム性網膜症、高血圧性網膜症、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、網膜新生血管形成、および脈絡膜新生血管形成の処置および／または診断をするのに適している。

デンドリマー組成物を作製する方法が提供される。それを必要とする対象に投与するためのデンドリマー組成物の有効量を含む剤形および医薬製剤も提供される。

組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することによって、眼の１つまたは複数の疾患および／または障害を処置および／または診断する方法について説明する。方法は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜色素変性症、視神経炎、ブドウ膜炎、網膜剥離、側頭動脈炎、網膜虚血、アテローム性網膜症、高血圧性網膜症、網膜動脈閉塞、網膜静脈閉塞、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、網膜新生血管形成、および脈絡膜新生血管形成を含む、眼の１つまたは複数の疾患および／または障害を、処置および／または診断するのに有効である。特に、方法は、眼の内部および周囲組織の活性化ミクログリアに関連した眼の１つまたは複数の疾患および／または障害の処置および／または診断に有効である。典型的には、組成物は、活性化ミクログリア、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、および／または脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）病変を標的とするのに、および／または眼の１つまたは複数の疾患および／または障害の１つまたは複数の症状を軽減するのに、有効な量で投与される。

組成物および医薬製剤を投与する方法も、提供される。典型的には、組成物および医薬製剤は、１つまたは複数の全身経路を介して毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、またはそれよりも少ない頻度で投与される。一部の実施形態では、組成物および医薬製剤は、１つまたは複数の全身経路を介して、４週間に一度またはそれよりも少ない頻度で投与される。好ましい実施形態では、組成物および医薬製剤は、静脈内、皮下、または経口経路を介して投与される。

図１Ａおよび１Ｂは、デンドリマー－スニチニブコンジュゲートを合成するための化学反応ステップを示すスキームである。スニチニブは、ヒドロキシメチル結合（図１Ａ）およびアミド結合（図１Ｂ）をそれぞれ介してデンドリマーにコンジュゲートされる。 図１Ａおよび１Ｂは、デンドリマー－スニチニブコンジュゲートを合成するための化学反応ステップを示すスキームである。スニチニブは、ヒドロキシメチル結合（図１Ａ）およびアミド結合（図１Ｂ）をそれぞれ介してデンドリマーにコンジュゲートされる。

図２Ａおよび２Ｂは、イソレクチン（図２Ａ）およびＩＢＡ－１（図２Ｂ）のレベルを示す棒グラフであり、Ｄ－ＩＣＧ投与後４または２４時間においてＩＣＧ撮像による光干渉断層法により分析した、４時間（４ｈ）および２４時間（２４ｈ）のそれぞれに関するレーザー後１、３、７および１４日目のそれぞれのシグナル面積（μｍ^２）を示す。 図２Ｃは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）病変に局所化されたレーザー損傷の２４時間後の単一全身デンドリマー－インドシアニングリーン（Ｄ－ＩＣＧ）投与後２８日間にわたる、補正された全病変蛍光を示す棒グラフである。

図３は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｄ－ＮＳＡ高はｎ＝６であることを除いて、全てに関してｎ＝８／群）の眼内のＢｒｕｃｈ膜のレーザー誘発型破裂から２４時間後に投与された、ビヒクル、アフリベルセプト、切断可能なスニチニブ類似体（Ｄ－ＣＳＡ）の低用量（Ｄ－ＣＳＡ低）または高用量（Ｄ－ＣＳＡ高）、非切断可能スニチニブ類似体（Ｄ－ＮＳＡ）の低用量（Ｄ－ＮＳＡ低）または高用量（Ｄ－ＮＳＡ高）、および遊離スニチニブで処置したマウスの眼内の脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）（ｍｍ^２）の平均面積を示す棒グラフである。Ｐ値は、ビヒクル対照と比較して示される。

図４Ａは、それぞれ処置後７日および１４日目、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝８／群）の眼内のＢｒｕｃｈ膜のレーザー誘発型破裂から２４時間後に投与された遊離スニチニブ、切断可能なスニチニブ類似体（Ｄ－ＣＳＡ）、非切断可能スニチニブ類似体（Ｄ－ＮＳＡ）、およびアフリベルセプトで処置したマウスの眼内の脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の平均面積（ｍｍ^２）を示す、棒グラフである。 図４Ｂは、０～７２時間にわたるデンドリマースニチニブ類似体コンジュゲートの血漿中濃度（μｇ／ｍｌ）を示す、線図である。

図５は、アミド結合を持つＮ，Ｎ－ジデセチルスニチニブアジドの１つの合成戦略を示す反応スキームである。

図６Ａおよび６Ｂは、デンドリマー－ジデセチル－スニチニブアミド－コンジュゲートを合成するステップ（図６Ｂ）の前に、デンドリマー－ヘキシン酸コンジュゲートの最初の合成を介して（図６Ａ）、例示的なデンドリマー－スニチニブコンジュゲートを合成するための化学反応ステップを示すスキームである。Ｇ４ ＰＡＭＡＭデンドリマーは例示的なデンドリマーとして使用する。

図７は、血漿および細胞内状態をそれぞれ模倣する３７℃での、エステラーゼによる１５日間にわたるＤ－ジデセチルスニチニブコンジュゲート（Ｄ－４５１７）ｐＨ７．４およびｐＨ５．５のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出プロファイル（ＡＶＴ－４５１７％ｗ／ｗによるリンカーの損失）を示す、線グラフである。

図８は、５または５０ｍｇ／ｋｇ Ｄ－４５１７をＩＰ注射したメスＣ５７／Ｂｌ６マウスにおける、経時的な、μｇ／ｍＬを単位とする血漿中濃度を示す線グラフである。

図９Ａおよび９Ｂは、それぞれ、１２ｍｇ／ｋｇ Ｄ－４５１７のＩＰ注射を毎日受けた、および１日目（図９Ａ）および１４日目（図９Ｂ）に３０ｍｇ／ｋｇスニチニブ（４０．２１ｍｇ／ｋｇのリンゴ酸スニチニブ）の経口用量を毎日受けたＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットのオスおよびメス群に関して、経時的な（０～２４時間）、μｇ／ｍＬを単位とする血漿中濃度を示す、線グラフである。

図１０は、処置後１４日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの眼のＢｒｕｃｈ膜のレーザー誘発型破裂から２４時間後に投与された、ビヒクル、アフリベルセプト（４０μｇ）、ならびにＤ－ジデセチルスニチニブコンジュゲート（Ｄ－４５１７）の単一皮下用量として２、１０および５０ｍｇ／ｋｇの３つの用量レベルで処置したマウスの眼内の、脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の平均面積（μｍ^２）を示す棒グラフである。

図１１は、ｉｎ ｖｉｖｏ安定性の強化のためにＮ，Ｎ－ジデセチルスニチニブがエーテル結合によりデンドリマーにコンジュゲートされた例示的なデンドリマー－コンジュゲート（Ｄ－４５１７．２）の合成を示すスキームである。

図１２は、化合物Ｄ－４５１７．２の化学構造を示す概略図である。

図１３は、それぞれ４、２４および４８時間のそれぞれに関する時点でのヒト、マウスおよびラットの血漿条件における、Ｄ－ジデセチルスニチニブコンジュゲートＤ－４５１７．２の薬物放出重量パーセンテージ（０．０％～０．５０％）を示す棒グラフである。

図１４は、デンドリマー－Ｎ－アセチル－Ｌ－システインメチルエステルコンジュゲート（デンドリマー－ＮＡＣ－カルボキシメチル化コンジュゲート）に関する合成スキームである。

発明の詳細な説明
Ｉ． 定義
「活性剤」または「生物学的に活性な薬剤」という用語は、予防的、治療的、または診断的であり得る、所望の薬理学的および／または生理学的効果を誘発させる化学的なまたは生物学的な化合物を指すのに同義で使用される治療剤、予防剤、または診断剤である。これらは、核酸、核酸類似体、２ｋＤａ未満の、より典型的には１ｋＤａ未満の分子量を有する小分子、ペプチド模倣体、タンパク質もしくはペプチド、炭水化物もしくは糖、脂質、または界面活性剤、あるいはこれらの組合せであってもよい。用語は、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝産物、および類似体を含むがこれらに限定することのない、活性剤の薬学的に許容される、薬理学的に活性な誘導体も包含する。

「薬学的に許容される塩」という用語は、当技術分野で認識されており、比較的無毒性の、化合物の無機および有機酸付加塩を含む。薬学的に許容される塩の例には、例えば塩酸および硫酸などの鉱酸から誘導されたもの、およびエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ－トルエンスルホン酸などの有機酸から誘導されたものが含まれる。塩を形成するのに適切な無機塩基の例には、アンモニア、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、および亜鉛の水酸化物、炭酸塩、および重炭酸塩が含まれる。塩は、そのような塩を形成するのに十分無毒性であり強力なものを含む適切な有機塩基で形成されてもよい。例示の目的で、そのような有機塩基のクラスは、モノ－、ジ－、およびトリアルキルアミン、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、およびトリエチルアミン；モノ－、ジ－、またはトリヒドロキシアルキルアミン、例えばモノ－、ジ－、およびトリエタノールアミン；アミノ酸、例えばアルギニンおよびリシン；グアニジン；Ｎ－メチルグルコサミン；Ｎ－メチルグルカミン；Ｌ－グルタミン；Ｎ－メチルピペラジン；モルホリン；エチレンジアミン；Ｎ－ベンジルフェネチルアミンを含んでいてもよい。

「治療剤」という用語は、疾患または障害の１つまたは複数の症状を処置するのに投与することができる活性剤を指す。

「診断剤」という用語は、病理学的過程の局在化を明らかにし、正確に示し、画定するのに投与することができる活性剤を指す。診断剤は、標的細胞を標識して、引き続きなされるこれら標識された標的細胞の検出または撮像を可能にすることができる。一部の実施形態では、診断剤は、デンドリマーまたは適切な送達ビヒクルを介して、活性化ミクログリア、活性化マクロファージ、および／またはＲＰＥ細胞を標的とし／結合することができる。

「予防剤」という用語は、疾患を予防するのにまたはある特定の状態を予防するのに投与することができる活性剤を指す。

「薬学的に許容される」または「生体適合性」という文言は、正しい医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、またはその他の問題もしくは合併症なしに、妥当なベネフィット／リスク比に相応しい、人間および動物の組織と接触させた使用に適した、組成物、ポリマー、およびその他の材料、ならびに／または剤形を指す。「薬学的に許容される担体」という文言は、１つの臓器または身体の部分から別の臓器または身体の部分に、任意の対象組成物を運びまたは移送するのに関わる、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば液体または固体の充填剤、希釈剤、溶媒、またはカプセル化材料を指す。各担体は、対象組成物のその他の成分と適合性がありかつ患者に有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。

「治療有効量」という用語は、デンドリマーの内部におよび／または表面に組み込まれた場合に、任意の医学的処置に適用可能な妥当なベネフィット／リスク比でいくつかの所望の効果を発揮する治療剤の量を指す。有効量は、処置がなされる疾患または状態、投与がなされる特定の標的構造物、対象のサイズ、または疾患もしくは状態の重症度などの因子に応じて様々であってもよい。当業者なら、特定の化合物の有効量を、過度な実験を必要とすることなく経験的に決定し得る。一部の実施形態では、「有効量」という用語は、１種または複数種の炎症促進性サイトカインおよび／眼の罹患組織／細胞に関連した細胞を低減させまたは阻害することにより炎症を低減させるなど、１つまたは複数の眼疾患または障害の症状を低減させまたは減少させる治療剤または予防剤の量を指す。網膜および／または脈絡膜新生血管形成の場合、薬物の有効量は、網膜および／または脈絡膜血管新生の低減；ある程度までの血管内皮細の成長／増殖の阻害；および／またはある程度までの障害に関連した症状の１つまたは複数の緩和において効果を発揮し得る。有効量は、１回または複数の投与で投与することができる。

阻害の文脈における「阻害する」または「低減させる」という用語は、活性および量の低減または減少を意味する。これは活性または量の完全な阻害または低減、あるいは部分的な阻害または低減とすることができる。阻害または低減は、対照とまたは標準レベルと比較することができる。阻害は、５、１０、２５、５０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％とすることができる。例えば、１種または複数種の治療剤を含むデンドリマー組成物は、対象の罹患した網膜および／または脈絡膜における活性化ミクログリアおよびマクロファージの活性および／または量を、デンドリマー組成物（即ち、非共役活性剤）を受けていないまたはそのような組成物で処置していない対象の同等の疾患組織における同じ細胞の活性および／または量から、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または９９％阻害しまたは低減させ得る。一部の実施形態では、阻害および低減は、ｍＲＮＡ、タンパク質、細胞、組織、および臓器レベルで比較される。例えば、罹患した網膜および／または脈絡膜における活性化ミクログリアおよびマクロファージにより分泌された炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ－α、インターロイキン－１β（ＩＬ－β）、またはインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ））の阻害および／または低減である。

疾患、障害、または状態を「処置する」、あるいは疾患、障害、および／または状態に至る傾向があると考えられるがまだその状態にあると診断されていない動物でそのような状態が生じるのを「予防する」という用語は；疾患、障害、または状態を阻害し、例えばその進行を妨げ；疾患、障害、または状態を緩和し、例えば疾患、障害、および／または状態の後退を引き起こす。疾患または状態の処置は、鎮痛剤がたとえ疼痛の原因を処置するものでなくてもそのような鎮痛剤の投与によって対象の疼痛を処置するなど、基礎をなす病態生理学が影響を受けない場合であっても、特定の疾患または状態の少なくとも１つの症状を寛解させることを含む。処置の望ましい効果には、疾患の進行速度の低下、疾患状態の寛解または緩和、および緩解または改善された予後が含まれる。例えば個体は、炎症促進性細胞の増殖の低減、疾患から生じる症状の低下、視野の強化または回復、失明の程度および速度の低下、疾患に罹患している者のクオリティオブライフの増大、疾患の処置に必要とされるその他の医薬品の用量の減少、疾患の進行の遅延、および／または個体の生存の延長を含むがこれらに限定することなく、眼の疾患または障害に関連した１つまたは複数の症状が軽減されまたはなくなった場合に、首尾良く「処置」される。

「生分解性」という用語は、対象によって代謝し、排除し、または排泄されることが可能なより小さい単位または化学種に、生理学的条件下で分解または侵食することになる材料を指す。分解時間は、組成物および形態の関数である。

「デンドリマー」という用語は、限定するものではないが、内部コア、この内部コアに規則的に結合した反復単位の内部層（または「世代」）、および最外世代に結合した末端基の外面を持つ分子アーキテクチャーを含む。

「官能化」という用語は、官能基または部分の結合をもたらす手法で、化合物または分子を修飾することを意味する。例えば分子は、分子を強い求核剤または強い求電子剤にする分子の導入によって官能化されてもよい。

「標的部分」という用語は、特定の場所に局在化するまたは特定の場所から離れる部分を指す。部分は例えば、タンパク質、核酸、核酸類似体、炭水化物、または小分子であってもよい。実体は例えば、小分子などの治療化合物、または検出可能な標識などの診断実体であってもよい。場所は、組織、特定の細胞型もしくは細胞活性化状態、または細胞内区画であってもよい。一部の実施形態では、標的部分は、活性剤の局在化を指示する。

「長期滞留時間」という用語は、薬剤が患者の身体、またはその患者の臓器もしくは組織からなくなるのに必要とされる時間の増大を指す。ある特定の実施形態では、「長期滞留時間」は、デンドリマーなど送達ビヒクルへのコンジュゲートがない同等の薬剤などの比較の標準よりも、１０％、２０％、５０％、または７５％長い半減期で、なくなる薬剤を指す。ある特定の実施形態では、「長期滞留時間」は、腫瘍に関連する特定の細胞型を特異的に標的とするデンドリマーがない同等の薬剤など、比較の標準よりも、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、５０００、または１００００倍長い半減期でなくなる薬剤を指す。

「組み込まれた」および「カプセル化された」という用語は、所望の適用例においてそのような薬剤の持続放出などの放出を可能にする組成物の内部および／または表面に活性剤を組み込み、製剤化し、またはその他の手法で活性剤を含むことを指す。活性剤またはその他の材料はデンドリマーに組み込むことができ、そのようなデンドリマーの１つまたは複数の表面官能基を含むこと（共有、イオン、またはその他の結合相互作用による）、物理的混合、デンドリマー構造内への薬剤の包封、デンドリマー構造内へのカプセル化などが含まれる。
ＩＩ． 組成物

１種または複数種の活性剤、特に眼の１つまたは複数の疾患または障害を予防し、処置し、または診断する１種または複数種の活性剤を送達するのに適したデンドリマー複合体。

デンドリマー複合体の組成物は、約０．０１重量／重量％（ｗ／ｗ）から約３０％ｗ／ｗ、約１％ｗ／ｗから約２５％ｗ／ｗ、約５％ｗ／ｗから約２０％ｗ／ｗ、および約１０％ｗ／ｗから約１５％ｗ／ｗの重量濃度で、デンドリマー複合体内にカプセル化され、関連付けられ、および／またはコンジュゲートされた、１種または複数種の予防剤、治療剤、および／または診断剤を含む。一部の実施形態では、予防剤、治療剤、および／または診断剤が、必要に応じて１つまたは複数のスペーサーを介して、ジスルフィド、エステル、エーテル、チオエステル、カルバメート、カーボネート、ヒドラジン、およびアミドから選択される１つまたは複数の結合を介してデンドリマーに、共有結合によりコンジュゲートされる。好ましくは、ヒドロキシル末端デンドリマーのヒドロキシル基は、必要に応じて１つまたは複数のリンカー／スペーサーを介して、少なくとも１つのエーテル結合を介して１種または複数種の活性剤に共有結合によりコンジュゲートされる。好ましい実施形態では、ヒドロキシル末端デンドリマーの表面基は、１つまたは複数のリンカーおよび活性剤との共役の前にエーテル化反応を介して修飾される。１つまたは複数のリンカーがデンドリマーと活性剤との間に存在する場合、デンドリマーの表面基とリンカーとの間の共有結合は、エーテル結合である。他の実施形態では、デンドリマーの３．５世代で、４世代の二官能性デンドリマーを生成するために、一端にアミンがあり他端にヘキシンがあるポリエチルグリコール（ＰＥＧ）リンカーを使用してアルキン官能基が導入される。例示的な二官能性デンドリマーを、図１１の化合物１として示し、７個のアルキンアームと５７個のヒドロキシル基とが表面にある。

一部の実施形態では、スペーサーは、予防剤、治療剤、および／または診断剤、例えばスニチニブである。例示的な活性剤は、抗血管新生剤、抗炎症薬、および抗感染剤を含む。

追加の薬剤の存在は、ゼータ電位または粒子の表面電荷に影響を及ぼす可能性がある。一実施形態では、デンドリマーのゼータ電位は－１００ｍＶから１００ｍＶ、－５０ｍＶから５０ｍＶの間、－２５ｍＶから２５ｍＶの間、－２０ｍＶから２０ｍＶの間、－１０ｍＶから１０ｍＶの間、－１０ｍＶから５ｍＶの間、－５ｍＶから５ｍＶの間、または－２ｍＶから２ｍＶの間である。好ましい実施形態では、表面電荷が中性またはほぼ中性である。上記範囲は、－１００ｍＶから１００ｍＶの全ての値を包含する。
Ａ． デンドリマー

デンドリマーは、高密度の表面末端基を有する三次元の高分岐、単分散、球状および多価高分子である（Tomalia, D. A., et al., Biochemical Society Transactions, 35, 61(2007);およびSharma, A., et al., ACS Macro Letters, 3, 1079 (2014)）。それら独自の構造および物理的特徴に起因して、デンドリマーは、標的薬物／遺伝子送達、撮像、および診断を含む様々なバイオメディカル適用例でのナノ担体として有用である（Sharma,A., et al., RSC Advances, 4, 19242 (2014); Caminade, A.-M., et al., Journal ofMaterials Chemistry B, 2, 4055 (2014); Esfand, R., et al., Drug DiscoveryToday, 6, 427 (2001);およびKannan, R. M., et al., Journal of Internal Medicine,276, 579 (2014)）。

デンドリマー表面基は、それらの生体内分布に著しい影響を及ぼす（Nance, E.,et al., Biomaterials, 101, 96 (2016)）。いかなる標的リガンドも持たないヒドロキシル末端の４世代ＰＡＭＡＭデンドリマー（約４ｎｍサイズ）は、脳性麻痺（ＣＰ）のウサギモデルでの全身投与で損なわれたＢＢＢを、健康な対照と比較して著しく多く（＞２０倍）横断し、活性化ミクログリアおよびアストロサイトを選択的に標的とする（Lesniak,W. G., et al., Mol Pharm, 10 (2013)）。

「デンドリマー」という用語は、内部コアと、この内部コアに結合しかつそこから延びる反復単位の層（または「世代」）とを持ち、各層が１つまたは複数の分岐点を有し、末端基の外面が最外世代に結合している、分子アーキテクチャーを含む。一部の実施形態では、デンドリマーは、規則的なデンドリマーまたは「スターバースト」分子構造を有する。

一般にデンドリマーは、約１ｎｍから約５０ｎｍまで、より好ましくは約１ｎｍから約２０ｎｍ、約１ｎｍから約１０ｎｍ、または約１ｎｍから約５ｎｍの直径を有する。一部の実施形態では、直径は、約１ｎｍから約２ｎｍの間である。コンジュゲートは一般に、同じサイズ範囲にあるが、抗体などの大きいタンパク質は、サイズを５～１５ｎｍ増大させ得る。一般に薬剤は、より大きい世代のデンドリマーに関し、薬剤のデンドリマーに対する比が１：１から４：１の間でカプセル化される。好ましい実施形態では、デンドリマーは、眼組織に浸透するようかつ長期間にわたり標的細胞内に保持されるよう、有効な直径を有する。

一部の実施形態では、デンドリマーは、約５００ダルトンから約１００，０００ダルトンの間、好ましくは約５００ダルトンから約５０，０００ダルトンの間、最も好ましくは約１，０００ダルトンから約２０，０００ダルトンの間の分子量を有する。

使用することができる適切なデンドリマー足場には、ＰＡＭＡＭまたはＳＴＡＲＢＵＲＳＴ（商標）デンドリマーとしても公知のポリ（アミドアミン）；ポリプロピルアミン（ＰＯＰＡＭ）、ポリエチレンイミン、ポリリシン、ポリエステル、イプチセン、脂肪族ポリ（エーテル）、および／または芳香族ポリエーテルデンドリマーが含まれる。デンドリマーは、カルボン酸、アミン、および／またはヒドロキシル末端を有することができる。好ましい実施形態では、デンドリマーは、ヒドロキシル末端を有する。デンドリマー複合体の各デンドリマーは、同じであってもよく、または他デンドリマーと類似のもしくは異なる化学的性質のものであってもよい（例えば、第１のデンドリマーはＰＡＭＡＭデンドリマーを含んでいてもよく、一方、第２のデンドリマーはＰＯＰＡＭデンドリマーであってもよい）。

「ＰＡＭＡＭデンドリマー」という用語は、アミドアミン構成単位と共に異なるコアを含有していてもよいポリ（アミドアミン）デンドリマーを意味し、１世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、２世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、３世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、４世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、５世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、６世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、７世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、８世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、９世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、または１０世代ＰＡＭＡＭデンドリマーを含むがこれらに限定されない任意の世代のカルボン酸、アミン、およびヒドロキシル末端を有することができる。好ましい実施形態では、デンドリマーは製剤に可溶であり、４、５、または６世代（「Ｇ」）デンドリマーである。好ましい実施形態では、デンドリマーは、それらの官能性表面基に結合した複数のヒドロキシル基を有する。

デンドリマーを作製する方法は、当業者に公知であり、一般に、中心開始剤コア（例えば、エチレンジアミンコア）の周りに樹状β－アラニン単位の同心状のシェル（世代）を生成する２ステップ反復反応順序を含む。各後続成長ステップは、より大きい分子直径を持ち、反応性表面部位の数の２倍であり、先行する世代の分子量の約２倍である、ポリマーの新「世代」を表す。使用に適したデンドリマー足場は、様々な世代として市販されている。好ましくは、デンドリマー化合物は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０世代デンドリマー足場をベースにする。そのような足場は、それぞれ４、８、１６、３２、６４、１２８、２５６、５１２、１０２４、２０４８、および４０９６個の反応性部位を有する。したがって、これらの足場をベースにしたデンドリマー化合物は、標的部分とモジュレーターとを組み合わせたものの対応する数を有する。

一部の実施形態では、デンドリマーは、複数のヒドロキシル基を含む。一部の例示的な高密度ヒドロキシル基含有デンドリマーは、市販のポリエステル樹状ポリマー、例えば多分岐２，２－ビス（ヒドロキシル－メチル）プロピオン酸エステルポリマー（例えば、多分岐ビス－ＭＰＡポリエステル－６４－ヒドロキシル、４世代）、樹状ポリグリセロールを含む。

一部の実施形態では、高密度ヒドロキシル基含有デンドリマーは、オリゴエチレングリコール（ＯＥＧ）様デンドリマーである。例えば、２世代ＯＥＧデンドリマー（Ｄ２－ＯＨ－６０）は、Ｃｕ（Ｉ）で触媒されたアルキン－アジドクリックおよび光触媒されたチオール－エンクリック化学など、高度に効率的で堅牢かつ原子経済的化学反応を使用して合成することができる。最小限に抑えられた反応ステップにおける非常に低い世代での高度に稠密なポリオールデンドリマーは、例えばＷＯ２０１９０９４９５２に記載されるような、オルソゴナルハイパーモノマーおよびハイパーコア戦略を使用することによって、実現することができる。一部の実施形態では、デンドリマー主鎖は、ｉｎ ｖｉｖｏでのデンドリマーの崩壊が回避されるよう、および身体からの単一実体（非生分解性）としてのそのようなデンドリマーの排除が可能になるように、構造全体を通して非切断可能ポリエーテル結合を有する。

一部の実施形態では、デンドリマーは、特定の組織領域および／または細胞型、好ましくは１つまたは複数の眼疾患に関連した活性化ミクログリアおよびマクロファージを、特異的に標的とすることができる。好ましい実施形態では、デンドリマーは、標的部分を付加することなく、特定の組織領域および／または細胞型を、特異的に標的とすることができる。

好ましい実施形態では、デンドリマーは、デンドリマーの表面に複数のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有する。ヒドロキシル（－ＯＨ）基の好ましい表面密度は、少なくとも１ＯＨ基／ｎｍ^２（ヒドロキシル表面基の数／ｎｍ^２を単位とする表面積）である。例えば一部の実施形態では、ヒドロキシル基の表面密度は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０よりも大きく；好ましくは少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、または５０表面基／ｎｍ^２を単位とする表面積よりも大きい。さらなる実施形態では、ヒドロキシル（－ＯＨ）基の表面密度は、約１から約５０の間、好ましくは５～２０ＯＨ基／ｎｍ^２（ヒドロキシル表面基の数／ｎｍ^２を単位とする表面積）であると共に約５００Ｄａから約１０ｋＤａの間の分子量を有する。好ましい実施形態では、デンドリマー上の全表面基（共役および非共役）の中の遊離、即ち非共役ヒドロキシル基のパーセンテージは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％よりも高く、および／または１００％未満である。４世代ＰＡＭＡＭデンドリマーの場合、遊離、即ち非共役ヒドロキシル基の好ましい数は、合計６４個の表面末端／基中、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、または６３個よりも多い。さらなる実施形態では、ヒドロキシル末端デンドリマーは、活性化ミクログリア、活性化ミクロファージ、および／または眼の１つもしくは複数の疾患および／または障害に関連するＲＰＥ細胞を選択的に標的するために有効な遊離ヒドロキシル基の数を有する。

一部の実施形態では、デンドリマーは、デンドリマーの内部コアにおける他の基と共に、外面に露出したヒドロキシル基の一部を有していてもよい。好ましい実施形態では、デンドリマーは、少なくとも１ＯＨ基／ｎｍ^３（ヒドロキシル基の数／ｎｍ^３を単位とする体積）のヒドロキシル（－ＯＨ）基の体積密度を有する。例えば一部の実施形態では、ヒドロキシル基の体積密度は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、および５０ヒドロキシル基／ｎｍ^３体積よりも大きい。一部の実施形態では、ヒドロキシル基の体積密度は、約４から約５０ヒドロキシル基／ｎｍ^３の間、好ましくは約５から約３０ヒドロキシル基／ｎｍ^３の間、より好ましくは約１０から約２０ヒドロキシル基／ｎｍ^３の間である。
Ｂ．カップリング剤およびスペーサー

デンドリマー複合体は、デンドリマー、樹状ポリマー、または多分岐ポリマーにコンジュゲートされたまたは結合した治療上活性な薬剤または化合物で形成することができる。必要に応じて、活性剤は、ジスルフィド、エステル、カーボネート、カルバメート、チオエステル、ヒドラジン、ヒドラジド、およびアミド結合などの種々の結合を介した１つまたは複数のスペーサー／リンカーを介してデンドリマーにコンジュゲートされる。デンドリマーと薬剤との間の１つまたは複数のスペーサー／リンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏでデンドリマー活性複合体の放出可能な（または切断可能な）または非放出可能な（または非切断可能な）形態を提供するように設計することができる。一部の実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にエステル結合を提供する適切なスペーサーを介して生じる。一部の実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にアミド結合を提供する適切なスペーサーを介して生じる。好ましい実施形態では、デンドリマーと薬剤との間の１つまたは複数のスペーサー／リンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏで所望のおよび有効な放出動態を実現するのに添加される。さらなる実施形態では、デンドリマーおよび／またはリンカーの共役は、活性剤の活性に著しい影響を及ぼさない。例えば、ＶＥＧＦＲ ＴＫＲ阻害剤の場合、非共役ＶＥＧＦＲ ＴＫＲ阻害剤と同等のレベルでデンドリマーに共役後のＶＥＧＦＲ ＴＫＲの１つまたは複数に対するその結合親和性を保持する。

用語「スペーサー」は、治療上活性な薬剤をデンドリマーに結合するのに使用される部分および組成物を含む。スペーサーは、デンドリマーと活性剤とを架橋するための、単一の化学的実体、または一緒に結合した２つもしくはそれよりも多くの化学的実体であり得る。スペーサーは、スルフヒドリル、チオピリジン、スクシニミジル、マレイミド、ビニルスルホンおよびカーボネート末端を有する、任意の小さい化学的実体、ペプチドまたはポリマーを含み得る。

スペーサーは、スルフヒドリル、チオピリジン、スクシニミジル、マレイミド、ビニルスルホン、およびカーボネート基で終端する化合物のクラスの中から選択することができる。スペーサーは、チオピリジン末端化合物、例えばジチオジピリジン、Ｎ－スクシニミジル３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシニミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオナミド）ヘキサノエートＬＣ－ＳＰＤＰまたはスルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰを含むことができる。スペーサーはペプチドを含むこともでき、このペプチドは、スルフヒドリル基、例えばグルタチオン、ホモシステイン、システインおよびその誘導体、ａｒｇ－ｇｌｙ－ａｓｐ－ｃｙｓ（ＲＧＤＣ）、シクロ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－ｄ－Ｐｈｅ－Ｃｙｓ）（ｃ（ＲＧＤｆＣ））、シクロ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ）、およびシクロ（Ａｒｇ－Ａｌａ－Ａｓｐ－ｄ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ）を本質的に有する直鎖状または環状である。一部の実施形態では、スペーサーは、メルカプト酸誘導体、例えば３メルカプトプロピオン酸、メルカプト酢酸、４メルカプト酪酸、チオラン－２－オン、６メルカプトヘキサン酸、５メルカプト吉草酸、およびその他のメルカプト誘導体、例えば２メルカプトエタノールおよび２メルカプトエチルアミンを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、チオサリチル酸およびその誘導体、（４－スクシニミジルオキシカルボニル－メチル－アルファ－２－ピリジルチオ）トルエン、（３－［２－ピリジルチオ］プロピオニルヒドラジドを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、マレイミド末端を含み、このスペーサーは、ポリマーまたは小さい化学的実体、例えばビス－マレイミドジエチレングリコールおよびビス－マレイミドトリエチレングリコール、ビス－マレイミドエタン、およびビスマレイミドヘキサンを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、ビニルスルホン、例えば１，６－ヘキサン－ビス－ビニルスルホンを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、チオグリコシド、例えばチオグルコースを含む。他の実施形態では、スペーサーは、還元タンパク質、例えばウシ血清アルブミンおよびヒト血清アルブミン、ジスルフィド結合を形成することが可能な任意のチオール末端化合物を含む。特定の実施形態では、スペーサーは、マレイミド、スクシニミジル、およびチオール末端を有するポリエチレングリコールを含む。

治療上活性な薬剤、造影剤、および／または標的部分は、共有結合することができるかまたは分子内分散もしくはカプセル化することができる。デンドリマーは、好ましくは、カルボン酸、ヒドロキシル、またはアミン末端を有する１世代（Ｇ１）、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７、Ｇ８、Ｇ９、またはＧ１０世代のＰＡＭＡＭデンドリマーである。好ましい実施形態では、デンドリマーは、エーテルまたはアミド結合で終わるスペーサーを介して活性剤に連結される。

一部の実施形態では、デンドリマー／活性剤複合体の非放出可能形態は、同じデンドリマー／活性剤複合体の放出可能または切断可能形態と比較して、強化された治療効力をもたらす。したがって、一部の実施形態では、１種または複数種の活性剤が、非放出可能な手法で、例えばエーテルまたはアミド結合によって、デンドリマーに結合するスペーサーを介してデンドリマーにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、１種または複数種の活性剤は、非放出可能な手法で、例えばエーテルまたはアミド結合によって、スペーサーに結合する。したがって一部の実施形態では、１種または複数種の活性剤は、デンドリマーにおよび活性剤に非放出可能な手法で結合したスペーサーを介してデンドリマーに結合する。例示的な実施形態では、１種または複数種の活性剤は、アミドおよび／またはエーテル結合を介してデンドリマーおよび活性剤に結合したスペーサーを介してデンドリマーに結合する。例示的なスペーサーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
１． エーテル結合を介した活性剤へのデンドリマーコンジュゲーション

一部の実施形態では、組成物は、必要に応じて１つまたは複数のリンカー／スペーサーにより、エーテル結合を介して活性剤にコンジュゲートされたヒドロキシル末端デンドリマーを含む。

好ましい実施形態では、デンドリマーの表面基とリンカーとの間、またはデンドリマーと活性剤（いかなる連結部分もなしにコンジュゲートされた場合）との間の共有結合は、ｉｎ ｖｉｖｏ条件下で安定であり、即ち、対象に投与されたときおよび／または身体から無傷で排泄されたときに最小限に切断可能である。例えば好ましい実施形態では、全デンドリマー複合体の１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％未満、または０．１％未満は、ｉｎ ｖｉｖｏ投与後２４時間または４８時間または７２時間以内に切断された活性剤を有する。一実施形態では、共有結合がエーテル結合である。さらなる好ましい実施形態では、デンドリマーの表面基とリンカーとの間、またはデンドリマーと活性剤（いかなる連結部分もなしにコンジュゲートされた場合）との間の共有結合は、加水分解によってまたは酵素によって切断可能な結合、例えばエステル結合ではない。

一部の実施形態では、ヒドロキシル末端デンドリマーの１つまたは複数のヒドロキシル基は、以下の式（Ｉ）に示されるように、１つまたは複数の連結部分および１つまたは複数の活性剤に、１つまたは複数のエーテル結合を介してコンジュゲートされる。

（式中、Ｄは、Ｇ２からＧ１０ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり；Ｌは１つまたは複数の連結部分またはスペーサーであり；Ｘは活性剤またはその類似体であり；ｎは１から１００の整数であり；ｍは１６から４０９６の整数であり；
Ｙは、第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カーボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、およびエーテル（－Ｏ－）から選択されるリンカーであり、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基である。）好ましくはＹは、ｉｎ ｖｉｖｏで最小限に切断可能な結合または連結である。

一部の実施形態では、Ｘは、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）および／またはＴＩＥ２受容体チロシンキナーゼの阻害剤である。

好ましい実施形態では、Ｙは第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）である。

一実施形態では、Ｄは、４世代ＰＡＭＡＭデンドリマーであり；Ｌは１つまたは複数の連結またはスペーサー部分であり；Ｘはスニチニブ、またはその類似体であり；ｎは約５～１５であり；ｍは約４９～５９の整数であり；ｎ＋ｍ＝６４である。

別の実施形態では、Ｄが４世代ＰＡＭＡＭデンドリマーであり；Ｌは１つまたは複数の連結またはスペーサー部分であり；ＸはＮ，Ｎ－ジデセチルスニチニブであり；Ｙは第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）であり；ｎは約５～１５であり；ｍは約４９～５９の整数であり；ｎ＋ｍ＝６４である。

特定の実施形態では、式Ｉは、下記の構造（Ｄ－４５１７．２とも呼ばれる）を有する：
構造Ｉ： Ｄ－４５１７．２の化学構造

Ｃ． 治療剤、予防剤、および診断剤

デンドリマーは、多数の治療剤、予防剤、および／または診断剤を、同じデンドリマーと共に送達することができるという利点を有する。一部の実施形態では、活性剤の１つまたは複数のタイプは、デンドリマーにカプセル化され、複合体化され、またはコンジュゲートされる。別の実施形態では、デンドリマーは、少なくとも１つの検出可能な部分に、対象における１つまたは複数の疾患または損傷細胞／組織を検出するのに有効な量で共有結合する。特定の実施形態では、デンドリマー組成物は、デンドリマーと複合体化しまたはコンジュゲートされた多数の薬剤、例えば、免疫治療剤、抗痙攣剤、腫れを減少させるステロイド、抗生剤、抗血管新生剤、および／または診断剤を有する。一部の実施形態では、デンドリマーは、２種またはそれよりも多くの異なるクラスの活性剤と複合体化されまたはコンジュゲートされ、標的部位で異なるまたは独立した放出動態による同時送達がもたらされる。例えば、スニチニブおよび抗炎症剤は共に、標的細胞／組織への送達のために同じデンドリマー上にコンジュゲートすることができる。さらなる実施形態では、それぞれが異なるクラスの活性剤を運ぶデンドリマー複合体は、併用処置のために同時に投与される。一部の実施形態では、疾患または状態の基礎をなす原因を標的とする１種または複数種の治療剤、および疾患または状態の１つまたは複数の症状を緩和する１種または複数種の治療剤とである。

適切な活性剤には、治療剤、診断剤、および／または予防剤が含まれる。薬剤は、酵素、タンパク質、ポリペプチド、もしくは核酸などの生体分子、または有機、無機、および有機金属剤を含む小分子剤（例えば、２０００ダルトン未満、好ましくは１５００ダルトン未満、より好ましくは３００～７００ダルトンの分子量）を含むことができる。薬剤は、共有結合または非共有結合のいずれかにより、デンドリマー内にカプセル化し、デンドリマー内に分散させ、および／またはデンドリマーの表面に関連付けることができる。例示的な治療剤には、抗炎症薬、抗血管新生剤、抗酸化剤、血管拡張剤、神経活性剤、神経保護剤、および抗感染剤が含まれる。一部の実施形態では、デンドリマーは、ジスルフィド、エステル、エーテル、チオエステル、カルバメート、カーボネート、ヒドラジン、またはアミド結合で終わる、リンカーまたはスペーサーを介して、標的部分、造影剤、および／または治療剤に連結される。

デンドリマーは、１種または複数種の追加の活性剤、特に眼疾患の１つまたは複数の症状を予防するかまたは処置する１種または複数種の活性剤を送達するのに使用することができる。デンドリマーと共に投与される例示的な治療剤には、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤などのチロシンキナーゼ阻害剤が含まれる。好ましい実施形態では、薬剤は、小分子チロシンキナーゼ阻害剤である。

代表的な抗血管新生剤には、限定するものではないが血管内皮成長因子に対する（ＶＥＧＦ）、例えばベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））およびｒｈｕＦＡｂ Ｖ２（ラニビズマブ、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ならびにアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））を含むその他の抗ＶＥＧＦ化合物に対する抗体；ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニムナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマーまたはＥＹＥ００１）（Ｅｙｅｔｅｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）；ＣＯＸ－２阻害剤、例えばセレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））およびロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（登録商標））；インターフェロンアルファ；インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）；サリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標））およびその誘導体、例えばレナリドミド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））；スクアラミン；エンドスタチン；アンギオスタチン；リボザイム阻害剤、例えばＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）（Ｓｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；多官能性抗血管新生剤、例えばＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（登録商標）（ＡＥ－９４１）（Ａｅｔｅｒｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｑｕｅｂｅｃ Ｃｉｔｙ、Ｃａｎａｄａ）；受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤、例えばスニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））；チロシンキナーゼ阻害剤、例えばソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））およびエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；表皮成長因子受容体に対する抗体、例えばパニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））およびセツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、ならびに当技術分野で公知のその他の抗血管新生剤が含まれる。

抗血管新生治療に適したその他の活性剤には、血小板由来成長因子ファミリー、表皮成長因子ファミリー、線維芽細胞成長因子ファミリー、トランスフォーミング成長因子－βスーパーファミリー（ＴＧＦ－β１、アクチビン、フォリスタチン、および骨形成タンパク質）、アンジオポイエチン様ファミリー、ガレクチンファミリー、インテグリンスーパーファミリー、ならびに色素上皮由来因子、肝細胞成長因子、アンギオポイエチン、エンドセリン、低酸素誘導因子、インスリン様成長因子、サイトカイン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、およびそれらの阻害剤、およびグリコシル化タンパク質のメンバーを標的とするものが含まれる。
チロシンキナーゼ阻害剤

一部の実施形態では、デンドリマーは、１種または複数種のチロシンキナーゼ阻害剤と、複合体化されるかまたはコンジュゲートされる。

チロシンキナーゼは、細胞増殖および移行を含む様々な生物学的活性を有する重要な細胞シグナル伝達タンパク質である。血管表皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）などの受容体チロシンキナーゼを含む多数のキナーゼが血管新生に関わる。臨床開発における抗血管新生チロシンキナーゼ阻害剤は主に、ＶＥＧＦＲ－１、－２、－３、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、ＰＤＧＦＲ－β、ＫＩＴ、ｆｍｓ－関連チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、コロニー刺激因子－１受容体（ＣＳＦ－１Ｒ）、Ｒａｆ、およびＲＥＴを標的とする。
ＶＥＧＦＲ阻害剤

一部の実施形態では、デンドリマーは、１種または複数種のＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に複合体化されるかまたはコンジュゲートされる。ＶＥＧＦＲファミリーは、ＶＥＧＦリガンドの血管新生作用を媒介する、ＶＥＧＦＲ－１、－２、および－３として公知の３つの関連ある受容体チロシンキナーゼを含む（Hicklin DJ, Ellis LM. J Clin Oncol. (2005), 23(5):1011-27）。哺乳動物ゲノムでコード化されるＶＥＧＦファミリーは、５つのメンバー：ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、およびプラセンタ成長因子（ＰｌＧＦ）を含む。ＶＥＧＦは、内皮細胞の増殖および移行の重要な刺激因子である。血管新生因子ＶＥＧＦ－Ａの増大した発現は、３つの一般的な加齢に関連した眼の状態－加齢黄斑変性の「湿潤」および「乾燥」形態、ならびに動物モデルでの白内障も促進させる（MarnerosAG, EMBO Molecular Medicine, 2016; 8 (3): 208）。このように、一部の実施形態では、デンドリマーは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、およびプラセンタ成長因子（ＰｌＧＦ）の１つまたは複数の量および／または活性を低減させるのに有効な１種または複数種の活性剤にコンジュゲートされる。

最も顕著な血管新生阻害剤は、血管内皮成長因子シグナル伝達経路、例えばモノクローナル抗体ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、および２種のキナーゼ阻害剤スニチニブ（ＳＵ１１２４８、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）およびソラフェニブ（ＢＡＹ４３－９００６、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ）を標的とする。ベバシズマブは、当初は結直腸がんの処置のために、最近では乳がんおよび肺がんの処置のためにも、臨床上承認された最初の血管形成阻害剤であった。臨床上入手可能な別の抗ＶＥＧＦ剤は、ペガプタニブナトリウム、新生血管ＡＭＤに関するアプタマーである。全てのＶＥＧＦアイソフォームに結合するベバシズマブとは異なって、ペガプタニブは、ＶＥＧＦ１６５、病理学的な眼の新生血管形成の原因となるアイソフォームのみを標的とする。一部の実施形態では、デンドリマーが、ベバシズマブおよびペガプタニブナトリウムを含む１種または複数種のＶＥＧＦ阻害剤にコンジュゲートされる。

小分子チロシンキナーゼ阻害剤スニチニブおよびソラフェニブは、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）、主にＶＥＧＦＲ－２を標的とする。両方の薬物は、腎細胞がんの患者に有益であることが示されている（Motzer RJ, Bukowski RM, J Clin Oncol. (2006); 24(35):5601-8）。スニチニブは、血管新生の強力な阻害剤であり、角膜新生血管形成のウサギモデルは、局所的なスニチニブがベバシズマブのほぼ３倍効果的であることを示唆している（Perez-Santonja JJ et al., Am J Ophthalmol. 2010 Oct;l50(4):519-528）。ソラフェニブは、Ｒａｆセリンキナーゼを阻害する。セジラニブは、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）の経口チロシンキナーゼ阻害剤である。

一部の実施形態では、デンドリマーは、スニチニブ（ＳＵ１１２４８；ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、ソラフェニブ（ＢＡＹ４３９００６；ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、パゾパニブ（ＧＷ７８６０３４；ＶＯＴＲＩＥＮＴ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＤ６４７４；ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標））、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１；ＲＥＣＥＮＴＩＮ（登録商標））、バタラニブ（ＰＴＫ７８７；ＺＫ２２２５８４）、ダサチニブ、ニンテダニブ、およびモテサニブ（ＡＭＧ７０６）を含む１種または複数種のＶＥＧＦ受容体阻害剤にコンジュゲートされる。好ましい実施形態では、ＶＥＧＦ受容体阻害剤は、１つまたは複数のスペーサー／リンカーで、例えばエーテル、エステルまたはアミド結合で、例えばデンドリマーとの共役を容易にするためにおよび／または所望の放出動態のために、官能化することができる。例えばスニチニブは、エステル結合を持つまたはアミド結合を持つスニチニブに修飾することができる（図１Ａおよび１Ｂ）。ＶＥＧＦ受容体阻害剤、例えばスニチニブの、デンドリマーに対する例示的な共役は、図１Ａ（ヒドロキシメチル結合を介して）および図１Ｂ（アミド結合を介して）に示される。好ましい実施形態では、デンドリマーおよび／または１種もしくは複数種のリンカーの共役は、活性剤の活性に著しい影響を及ぼさない。さらなる好ましい実施形態では、ＶＥＧＦ受容体阻害剤は、阻害の低減が最小限に抑えられるように、例えば、１倍、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１、２０分の１、３０分の１、４０分の１、５０分の１、および１００分の１未満になるように、スペーサーによりまたはスペーサーなしでデンドリマーにコンジュゲートされる。例えばスニチニブの場合、コンジュゲートされていないスニチニブと同等のレベルで、デンドリマーへの共役後のＶＥＧＦＲ ＴＫＲの１つまたは複数に対するその結合親和性が保持される。

官能性スペーサー／連結を持つ追加のＶＥＧＦ受容体阻害剤を、以下に示す。
構造ＩＩ ａ～ｂ：ソラフェニブ類似体の化学構造

構造ＩＩＩ ａ～ｄ：ニンテダニブ類似体１の化学構造

構造ＩＶ： オランチニブ類似体の化学構造

オランチニブ－アミド－リンカーアジド

一部の実施形態では、１種または複数種のＶＥＧＦ受容体阻害を含むデンドリマー複合体は、内皮細胞血管新生および／または血管内皮細胞増殖を低減させまたは阻害するのに、網膜および／または脈絡膜血管新生を低減させるのに、および／または眼の疾患もしくは障害に関連した症状の１つまたは複数を緩和するのに有効な量で投与される。
ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト

一部の実施形態では、デンドリマーは、ＴＩＥ ＩＩの１種または複数種の阻害剤と、複合体化されるかまたはコンジュゲートされる。ＣＤ２０２Ｂ（分化抗原群２０２Ｂ）およびＴＩＥ ＩＩとしても公知のアンジオポエチン－１受容体は、ヒトにおいてＴＥＫ遺伝子によりコード化されるタンパク質である。ＴＩＥ２は、アンジオポエチン受容体である。アンジオポエチンは、血管の形成（血管新生）で必要とされるタンパク質成長因子であり、腫瘍成長および発症を支えるものである。したがって一部の実施形態では、デンドリマーは１種または複数種のＴＩＥ ＩＩアンタゴニストにコンジュゲートされる。

一部の実施形態では、活性剤は、ＴＩＥ ＩＩ受容体チロシンキナーゼの阻害剤である。ＶＥＧＦＲ／ＴＩＥ ＩＩの例示的な阻害剤は、ＣＥＰ－１１９８１およびレバスチニブを含む。ＴＩＥ ＩＩアンタゴニストは、例えばエーテル、エステル、エチル、またはアミド結合で、デンドリマーとの共役を容易にするためにおよび／または所望の放出動態のために官能化することができる。例示的なＴＩＥ ＩＩアンタゴニストの化学構造は、構造ＸＸＩとして以下に示される。遊離ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト（構造Ｖ）のＴＩＥ ＩＩ阻害は、解離定数、Ｋ_ｄ、約８．８ｎｍを有し、デンドリマーコンジュゲートＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト（構造ＸＸＩ）のＴＩＥ ＩＩ阻害は、解離定数、Ｋ_ｄ、約２５ｎｍを有する。このように、好ましい実施形態では、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニストは、スペーサーによりまたはスペーサーなしでデンドリマーに共役して、ＴＩＥ ＩＩ阻害の低減を最小限に、例えば１倍、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１、２０分の１、３０分の１、４０分の１、５０分の１、および１００分の１未満に抑えるようになる。好ましい実施形態では、活性剤は、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）およびＴＩＥ ＩＩ受容体チロシンキナーゼの阻害剤である。
構造Ｖ： ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト１

抗炎症剤

一部の実施形態では、デンドリマーに関連したまたは複合体化された１種または複数種の活性剤は、１種または複数種の抗炎症剤である。抗炎症剤は、炎症を低減させ、ステロイド系および非ステロイド系薬物を含む。適切なステロイド系活性剤は、グルココルチコイド、プロゲスチン、ミネラルコルチコイド、およびコルチコステロイドを含む。一部の実施形態では、１種または複数種の活性剤は、１種または複数種のコルチコステロイドである。

例示的な抗炎症剤には、トリアムシノロンアセトニド、フルオシノロンアセトニド、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、ロテプレンドール、フルオロメトロン、イブプロフェン、アスピリン、およびナプロキセンが含まれる。例示的な免疫調節薬には、シクロスポリン、タクロリムス、およびラパマイシンが含まれる。例示的な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）には、メフェナミン酸、アスピリン、ジフルニサル、サルサレート、イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、デアケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、ロキソプロフェン、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、ジクロフェナク、ナブメトン、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、イソキシカム、メクロフェナミン酸、フルフェナミン酸、トルフェナミン酸、エレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、エトリコキシブ、フィロコキシブ、スルホナニリド、ニメスリド、ニフルミン酸、およびリコフェロンが含まれる。好ましい実施形態では、活性剤は、トリアムシノロンアセトニド、プレドニゾロン、デキサメタゾン、またはこれらの類似体である。トリアムシノロンアセトニド、プレドニゾロン、およびデキサメタゾンの例示的な類似体を、以下に示す。
構造ＶＩ ａ～ｆ：トリアムシノロンアセトニド、プレドニゾロン、デキサメタゾンの類似体の化学構造

一部の実施形態では、活性剤は、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、またはその誘導体もしくは類似体もしくはプロドラッグである。好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインは、ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーに、非切断性結合を介してコンジュゲートされて、ｉｎ ｖｉｖｏ投与後に遊離Ｎ－アセチル－システインの最小限の放出がなされる。デンドリマー／Ｎ－アセチル－システイン複合体の例示的な非放出性（または非切断性）形態の合成経路を、図１４に示す。一実施形態では、デンドリマー複合体は、図１４に示されるデンドリマー－ＮＡＣ－カルボキシメチル化コンジュゲートである。デンドリマー／Ｎ－アセチル－システイン複合体の非放出性形態は、デンドリマー／Ｎ－アセチル－システイン複合体、例えばエステル結合を介してヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーとコンジュゲートされたＮ－アセチル－Ｌ－システインの放出性または切断性形態と比較して、増強された治療効力をもたらす。

一部の実施形態では、１種または複数種の活性剤は、ポリシアル酸（例えば、平均重合度が２０の低分子量ポリシア（ポリシアａｖＤＰ２０））、トランスロケータータンパク質リガンド（例えば、ジアゼパム結合阻害剤（ＤＢＩ））、インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）、およびミノサイクリンである。

ある場合には、１種または複数種の活性剤が抗感染剤である。例示的な抗感染剤は、抗ウイルス剤、抗細菌剤、抗寄生虫剤、および抗真菌剤を含む。例示的な抗生剤には、モキシフロキサシン、シプロフロキサシン、エリスロマイシン、レボフロキサシン、セファゾリン、バンコマイシン、チゲサイクリン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、セフタジジム、オフロキサシン、ガチフロキサシン；抗真菌剤：アムホテリシン、ボリコナゾール、ナタマイシンが含まれる。
診断剤

デンドリマーナノ粒子は、投与された粒子の場所を決定するのに有用な診断剤を含むことができる。これらの薬剤は、予防的に使用することもできる。一部の実施形態では、デンドリマーは、インドシアニングリーン、フルオレセイン（例えば、フルオレセインイソシアネート）、ホウ素－ジピロメテン、ローダミン、およびローズベンガルを含む１種または複数種の診断剤にコンジュゲートされる。好ましい実施形態では、診断剤が、以下に示されるようなインドシアニングリーンである：
構造ＶＩＩ： インドシアニングリーンの化学構造

診断剤の追加の例には、常磁性分子、蛍光化合物、磁性分子、および放射性核種、ｘ線造影剤、および造影媒体が含まれる。その他の適切な造影剤の例には、放射線不透過性の気体または気体放出化合物が含まれる。デンドリマー複合体はさらに、投与された組成物の場所を決定するのに有用な薬剤を含むことができる。この目的に有用な薬剤は、蛍光タグ、放射性核種、および造影剤を含む。

例示的な診断剤は、蛍光色素および近赤外線色素などの色素、ＳＰＥＣＴ造影剤、ＰＥＴ造影剤、および放射性同位体を含む。代表的な色素には、カルボシアニン、インドカルボシアニン、オキサカルボシアニン、チアカルボシアニン（thuicarbocyanine）、およびメロシアニン、ポリメチン、クマリン、ローダミン、キサンテン、フルオレセイン、ホウ素－ジピロメタン、（ＢＯＤＩＰＹ）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＶｉｖｏＴａｇ－６８０、ＶｉｖｏＴａｇ－Ｓ６８０、ＶｉｖｏＴａｇ－Ｓ７５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６６０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７００、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７９０、Ｄｙ６７７、Ｄｙ６７６、Ｄｙ６８２、Ｄｙ７５２、Ｄｙ７８０、ＤｙＬｉｇｈｔ５４７、Ｄｙｌｉｇｈｔ６４７、ＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ ６４７、ＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ ６８０、ＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ ７５０、ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ、ＩＲＤｙｅ ８００ＲＳ、ＩＲＤｙｅ ７００ＤＸ、ＡＤＳ７８０ＷＳ、ＡＤＳ８３０ＷＳ、およびＡＤＳ８３２ＷＳが含まれる。

例示的なＳＰＥＣＴまたはＰＥＴ造影剤には、キレート剤、例えばジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０－テトラ－アザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、ジアミンジチオール、活性化メルカプトアセチル－グリシル－グリシル－グリシン（ＭＡＧ３）、およびヒドラジドニコチンアミド（ＨＹＮＩＣ）が含まれる。

例示的な同位体には、Ｔｃ－９４ｍ、Ｔｃ－９９ｍ、Ｉｎ－１１１、Ｇａ－６７、Ｇａ－６８、Ｇｄ３＋、Ｙ－８６、Ｙ－９０、Ｌｕ－１７７、Ｒｅ－１８６、Ｒｅ－１８８、Ｃｕ－６４、Ｃｕ－６７、Ｃｏ－５５、Ｃｏ－５７、Ｆ－１８、Ｓｃ－４７、Ａｃ－２２５、Ｂｉ－２１３、Ｂｉ－２１２、Ｐｂ－２１２、Ｓｍ－１５３、Ｈｏ－１６６、およびＤｙ－１６６が含まれる。

好ましい実施形態では、デンドリマー複合体は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像に適した１種または複数種の放射線同位体を含む。例示的な陽電子放出法放射性同位体には、炭素－１１（^１１Ｃ）、銅－６４（^６４Ｃｕ）、窒素－１３（^１３Ｎ）、酸素－１５（^１５Ｏ）、ガリウム－６８（^６８Ｇａ）、およびフッ素－１８（^１８Ｆ）、例えば２－デオキシ－２－^１８Ｆ－フルオロ－β－Ｄ－グルコース（^１８Ｆ－ＦＤＧ）が含まれる。

好ましい実施形態では、１種または複数種の診断剤は、１つまたは複数のスペーサー／リンカーで、例えばエーテル、エステル、またはアミド結合で官能化されて、デンドリマーとの共役を容易にすることができる、および／または所望の放出動態を容易にすることができる。

さらなる実施形態では、単一のデンドリマー複合体組成物は、体内の１つまたは複数の場所で疾患または状態を同時に処置する、および／または診断することができる。
ＩＩＩ． 医薬製剤

１種または複数種のデンドリマー複合体を含む医薬組成物は、薬学的に使用することができる調製物への活性化合物の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む、１種または複数種の生理学的に許容される担体を使用する従来の手法で製剤化されてもよい。適正な製剤化は、選択される投与経路に依存する。医薬製剤は、１種または複数種のデンドリマー複合体を、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて含有する。代表的な賦形剤には、溶媒、希釈剤、ｐＨ調節剤、保存剤、抗酸化剤、懸濁化剤、湿潤剤、粘度調節剤、等張剤、安定化剤、およびこれらの組合せが含まれる。適切な薬学的に許容される賦形剤は、好ましくは、一般的に安全と認められている（ＧＲＡＳ）材料から選択され、望ましくない生物学的副作用または不要な相互作用を引き起こすことなく個体に投与され得る。

好ましい実施形態では、組成物は、眼への非経口送達用に製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、皮下または硝子体内注射用に製剤化される。典型的には、組成物は、処置がなされる組織または細胞への注射のために滅菌生理食塩水または緩衝溶液で製剤化されることになる。組成物は、使用直前の再水和のため、単回使用のバイアルに凍結乾燥して保存することができる。再水和および投与するためのその他の手段は、当業者に公知である。
Remington's Pharmaceutical Sciences, 20thed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2000, p. 704は、適切な製剤を提供し、薬学的に許容される塩の形で投与される眼科用薬物の例には、マレイン酸チモロール、酒石酸ブリモニジン、およびナトリウムジクロフェナクが含まれる。

組成物は、好ましくは、投与の容易さおよび投薬量の均一性のため、単位剤形で製剤化される。「単位剤形」という文言は、処置がなされる患者に適切なコンジュゲートの物理的に切り離された単位を指す。しかしながら、組成物の単回投与全体は、正しい医学的判断の範囲内で主治医により決定されることが理解されよう。治療有効用量は、細胞培養アッセイでまたは動物モデル、通常はマウス、ウサギ、イヌ、またはブタで最初に推定することができる。動物モデルは、所望の濃度範囲および投与経路を実現するのにも使用される。次いでそのような情報は、ヒトに有用な用量および投与経路を決定するのに役立てるべきである。コンジュゲートの治療効力および毒性は、細胞培養でまたは実験動物で、標準的な医薬手順によって、例えばＥＤ５０（用量は、集団の５０％で治療上有効である）およびＬＤ５０（用量は、集団の５０％に致命的である）と決定することができる。毒性の治療効果に対する用量比は治療指標であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きい治療指標を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトへの使用のための投薬範囲を製剤化する際に使用することができる。

非経口により投与するための（筋肉内、腹腔内、静脈内、または皮下注射）および経腸投与経路により投与するための製剤化された医薬組成物について説明する。好ましい実施形態では、組成物は、全身投与によって投与される。一実施形態では、組成物は、皮下経路を介して投与される。別の実施形態では、組成物は経口投与される。
Ａ． 非経口投与

「非経口投与」および「非経口的に投与される」という文言は、当技術分野で理解されている用語であり、注射など、経腸および局所投与以外の投与形態を含み、限定するものではないが静脈内、筋肉内、胸腔内、血管内、心膜内、動脈内、脊髄内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内注射および輸液が含まれる。一部の実施形態では、デンドリマーは、非経口的に、例えば硬膜下、静脈内、脊髄内、心室内、動脈内、羊水内、腹腔内、または皮下経路により投与される。好ましい実施形態では、デンドリマー組成物は、皮下注射を介して投与される。

液体製剤の場合、薬学的に許容される担体は、例えば水性または非水性溶液、懸濁液、エマルジョン、または油であってもよい。非経口ビヒクルには、例えば、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンゲルおよび固定油が含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体には、例えば、水、アルコール性／水性溶液、シクロデキストリン、エマルジョン、または懸濁液が含まれ、生理食塩水および緩衝媒体を含む。デンドリマーは、エマルジョンで、例えば油中水で投与することもできる。油の例は、石油、動物、植物、または合成由来のもの、例えばピーナツ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ヒマワリ油、魚肝油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ、ワセリン、およびミネラルである。非経口製剤に使用される適切な脂肪酸には、例えばオレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸が含まれる。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルは、適切な脂肪酸エステルの例である。

非経口投与に適した製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および意図されるレシピエントの血液に対して製剤を等張性にする溶質、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含むことができる水性および非水性滅菌懸濁液を含むことができる。静脈内ビヒクルは、流体および栄養補給剤、電解質補給剤、例えばリンゲルデキストロースをベースにするものを含むことができる。一般に、水、生理食塩水、水性デキストロース、および関連ある糖溶液と、グリコール、例えばポリプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどは、特に注射可能な溶液に好ましい液体担体である。

注射可能な医薬担体は、当業者に周知である（例えば、Pharmaceutics andPharmacy Practice, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, Banker andChalmers, eds., pages 238-250 (1982)、およびASHP Handbook on Injectable Drugs,Trissel, 15th ed., pages 622-630 (2009)参照）。
Ｂ． 経腸投与

一部の実施形態では、組成物は、経腸的に投与されるように製剤化される。担体または希釈剤は、カプセル剤もしくは錠剤などの固体担体、または固体製剤用の希釈剤、液体製剤用の液体担体もしくは希釈剤、あるいはこれらの混合物であってもよい。

液体製剤の場合、薬学的に許容される担体は、例えば、水性または非水性溶液、懸濁液、エマルジョン、または油であってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体には、例えば、水、アルコール／水性溶液、シクロデキストリン、エマルジョン、または懸濁液が含まれ、生理食塩水および緩衝媒体を含む。

油の例は、石油、動物、植物、または合成由来のものであり、例えば、ピーナツ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ヒマワリ油、魚肝油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ、ワセリン、およびミネラルである。非経口製剤で使用される適切な脂肪酸には、例えば、オレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸が含まれる。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルは、適切な脂肪酸エステルの例である。

ビヒクルには、例えば塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンゲルおよび固定油が含まれる。製剤には、例えば、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および意図されるレシピエントの血液に対して製剤を等張性にする溶質を含有することができる、水性および非水性、等張性滅菌注射液、ならびに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含むことができる水性および非水性滅菌懸濁液を含有することができる。ビヒクルは、例えば、流体および栄養補給剤、電解質補給剤、例えばリンゲルデキストロースをベースにしたものなどを含むことができる。一般に、水、生理食塩水、水性デキストロース、および関連ある糖溶液が、好ましい液体担体である。これらは、タンパク質、脂肪、糖、およびその他の乳児用調製乳の成分と共に製剤化することもできる。

好ましい実施形態では、組成物は、経口投与用に製剤化される。経口製剤は、チューイングガム、ゲルストリップ、錠剤、カプセル剤、またはロゼンジ剤の形態をとってもよい。腸溶性コーティング付き経口製剤の調製のためのカプセル化物質は、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシルプロピルメチルセルロースフタレート、およびメタクリル酸エステルコポリマーを含む。カプセル剤または錠剤などの固体経口製剤が好ましい。エリキシル剤およびシロップ剤も周知の経口製剤である。
ＩＶ． 作製方法
Ａ． デンドリマーを作製する方法

デンドリマーは、様々な化学反応ステップを介して調製することができる。デンドリマーは通常、全ての構築段階でその構造の制御を可能にする方法により合成される。樹状構造は、２つの主な異なる手法：発散または収束によって、ほとんどが合成される。

一部の実施形態において、デンドリマーは、一般にＭｉｃｈａｅｌ反応である一連の反応によって外向きに延びる多官能性コアからデンドリマーが組み立てられる、発散方法を使用して調製される。戦略は、コアの周りに段階的な世代の付加をもたらしその後に保護基が除去される、多官能性コア部分を持つ反応性および保護基を保有するモノマー分子のカップリングを含む。例えばＰＡＭＡＭ－ＮＨ_２デンドリマーは、アンモニアコアにＮ－（２－アミノエチル）アクリルアミドモノマーをカップリングすることによって最初に合成される。

他の実施形態では、デンドリマーは収束方法を使用して調製され、この方法ではデンドリマーが、球の表面で終わる小分子から構築され、反応は内向きに構築されるように進行し、最終的にはコアに結合する。

オルソゴナル手法、加速手法、二段階収束法、またはハイパーコア手法、ハイパーモノマー法、または分岐モノマー手法、二重指数法；オルソゴナルカップリング法、または２ステップ手法、２モノマー手法、ＡＢ_２－ＣＤ_２手法などの多くのその他の合成経路が、デンドリマーの調製のために存在する。

一部の実施形態では、デンドリマーのコア、１つもしくは複数の分岐単位、１つもしくは複数のリンカー／スペーサー、および／または１つもしくは複数の表面基を修飾して、さらなる官能基（分岐単位、リンカー／スペーサー、表面基など）、モノマー、および／または活性剤に、クリックケミストリーを介して、１つもしくは複数の銅支援型アジド－アルキン環付加（ＣｕＡＡＣ）、Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ反応、チオール－エンおよびチオール－イン反応、ならびにアジド－アルキン反応を用いて共役させることができる（Arseneault M et al., Molecules. 2015 May 20;20(5):9263-94）。一部の実施形態では、事前に作製されたデンドロンが高密度ヒドロキシルポリマー上にクリックされる。「クリックケミストリー」は、例えば、第１の部分の表面のアルキン部分（またはその均等物）と第２の部分上のアジド部分（例えば、トリアジン組成物上に存在する）（またはその均等物）（または任意の活性末端基、例えば第一級アミン末端基、ヒドロキシル末端基、カルボン酸末端基、チオール末端基など）との間の１，３－双極子環付加反応を介した２つの異なる部分（例えば、コア基および分岐単位；または分岐単位および表面基）のカップリングを含む。

一部の実施形態では、デンドリマー合成は、チオール－エンクリック反応、チオール－インクリック反応、ＣｕＡＡＣ、Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒクリック反応、アジド－アルキンクリック反応、Ｍｉｃｈａｅｌ付加、エポキシ開環、エステル化、シラン化学、およびこれらの組合せから選択される１つまたは複数の反応に依拠する。

任意の既存の樹状プラットフォームを使用して、所望の官能基のデンドリマー、即ち表面ヒドロキシル基の高密度を持つデンドリマーを、１－チオ－グリセロールまたはペンタエリスリトールなどの高ヒドロキシル含有部分をコンジュゲートすることによって作製することができる。例示的な樹状プラットフォーム、例えばポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）、ポリ（プロピレンイミン）（ＰＰＩ）、ポリ－Ｌ－リシン、メラミン、ポリ（エーテルヒドロキシルアミン）（ＰＥＨＡＭ）、ポリ（エステルアミン）（ＰＥＡ）、およびポリグリセロールを合成し、調査することができる。

さらになお適切なデンドリマーを、２つまたはそれよりも多くのデンドロンを組み合わせることによって調製することができる。デンドロンは、反応性焦点官能基を持つデンドリマーの楔形セクションである。多くのデンドロン足場が市販されている。それらは第１、２、３、４、５、および６世代になり、それぞれ２、４、８、１６、３２、および６４個の反応性基を持つ。ある特定の例では、活性剤の１つのタイプがデンドロンの１つのタイプに連結され、活性剤の異なるタイプがデンドロンの別のタイプに連結される。次いで２つのデンドロンが接続されてデンドリマーを形成する。２つのデンドロンは、クリックケミストリーを介して、即ちトリアゾールリンカーが形成されるように１つのデンドロン上のアジド部分と別のデンドロン上のアルキン部分との間の１，３－双極子環付加反応を介して連結することができる。

デンドリマーを作製する例示的な方法は、国際特許公開番号ＷＯ２００９／０４６４４６、ＷＯ２０１５１６８３４７、ＷＯ２０１６０２５７４５、ＷＯ２０１６０２５７４１、ＷＯ２０１９０９４９５２、および米国特許第８，８８９，１０１号に詳述されている。
Ｂ． デンドリマー複合体

デンドリマー複合体は、デンドリマー、樹状ポリマー、または多分岐ポリマーにコンジュゲートされたまたは結合した治療上活性な薬剤または化合物で形成することができる。１種または複数種の活性剤をデンドリマーにコンジュゲートするための技法は、当技術分野で公知であり、米国公開出願番号ＵＳ２０１１／００３４４２２、ＵＳ２０１２／０００３１５５、およびＵＳ２０１３／０１３６６９７に詳述されている。

一部の実施形態では、１種または複数種の活性剤は、デンドリマーに共有結合する。一部の実施形態では、活性剤は、ｉｎ ｖｉｖｏで切断されるように設計された連結部分を介してデンドリマーに結合する。連結部分は、ｉｎ ｖｉｖｏで活性剤の持続放出がもたらされるように、加水分解により、酵素により、またはこれらの組合せによって切断されるように設計することができる。連結部分の組成物と、活性剤へのその結合点との両方は、連結部分の切断が活性剤またはその適切なプロドラッグのいずれかを放出するように、選択される。連結部分の組成は、活性剤の所望の放出速度に鑑み、選択することもできる。

一部の実施形態では、結合は、ジスルフィド、エステル、エーテル、チオエステル、カルバメート、カーボネート、ヒドラジン、またはアミド結合の１つまたは複数を介して引き起こされる。好ましい実施形態では、結合は、活性剤の所望の放出動態に応じて、薬剤とデンドリマーとの間にエステル結合またはアミド結合をもたらす適切なスペーサーを介して引き起こされる。ある場合には、エステル結合は、活性剤の切断可能な形態のために導入される。他の場合には、アミド結合は、活性剤の非切断可能形態のために導入される。例示的な合成経路は、活性剤とデンドリマーとの間の非切断可能結合の導入を示すため、実施例４および５に記載される。

連結部分は一般に、１つまたは複数の有機官能基を含む。適切な有機官能基の例には、第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カーボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、エーテル（－Ｏ－）、およびエステル（－ＣＯＯ－、－ＣＨ_２Ｏ_２Ｃ－、ＣＨＲＯ_２Ｃ－）が含まれ、Ｒはアルキル基、アリール基、または複素環基である。一般に、連結部分における１つまたは複数の有機官能基の実体は、活性剤の所望の放出速度に鑑み選択することができる。さらに、１つまたは複数の有機官能基は、活性剤とデンドリマーとの共有結合が容易になるように選択することができる。好ましい実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にジスルフィド架橋をもたらす適切なスペーサーを介して引き起こすことができる。デンドリマー複合体は、体内に見られる還元条件下、チオール交換反応によって、ｉｎ ｖｉｖｏでの薬剤の急速放出が可能である。

ある特定の実施形態では、連結部分は、スペーサー基と組み合わせて、上述の有機官能基の１つまたは複数を含む。スペーサー基は、オリゴマーおよびポリマー鎖を含む、原子の任意のアセンブリから構成することができ；しかしながら、スペーサー基の原子の総数は、好ましくは３から２００個の間の原子、より好ましくは３から１５０個の間の原子、より好ましくは３から１００個の間の原子、最も好ましくは３から５０個の間の原子である。適切なスペーサー基の例には、アルキル基、ヘテロアルキル基、アルキルアリール基、オリゴ－およびポリエチレングリコール鎖、ならびにオリゴ－およびポリ（アミノ酸）鎖が含まれる。スペーサー基のばらつきは、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗炎症剤の放出に関して、追加の制御をもたらす。連結部分がスペーサー基を含む実施形態では、スペーサー基を抗炎症剤およびデンドリマーの両方に接続するのに、１つまたは複数の有機官能基が一般に使用されることになる。

活性剤とデンドリマーとの共有結合に有用な反応および戦略は、当技術分野で公知である。例えば、March, "Advanced Organic Chemistry," 5th Edition, 2001,Wiley-Interscience Publication, New York)およびHermanson, "BioconjugateTechniques," 1996, Elsevier Academic Press, U.S.A.を参照されたい。所与の活性剤を共有結合するための適切な方法は、所望の連結部分、ならびに全体としての活性剤およびデンドリマーの構造に鑑み選択することができるが、それは官能基の適合性、保護基の戦略、および不安定な結合の存在に関係するからである。

最適な薬物負荷は、必然的に、薬物の選択、デンドリマーの構造およびサイズ、ならびに処置される組織を含む多くの因子に依存する。一部の実施形態では、１種または複数種の活性薬は、約０．０１％から約４５％、好ましくは約０．１％から約３０％、約０．１％から約２０％、約０．１％から約１０％、約１％から約１０％、約１％から約５％、約３％から約２０重量％、および約３％から約１０重量％の濃度で、デンドリマーにカプセル化され、関連付けられ、および／またはコンジュゲートされる。しかしながら、任意の所与の薬物、デンドリマー、および標的部位に関する最適な薬物負荷は、記載されるもののような通常の方法によって特定することができる。

一部の実施形態では、活性剤および／またはリンカーの共役は、１つまたは複数の表面および／または内部基を経て生じる。したがって一部の実施形態では、活性剤／リンカーの共役は、共役前のデンドリマーの利用可能な表面官能基、好ましくはヒドロキシル基の全ての約１％、２％、３％、４％、または５％を介して行われる。他の実施形態では、活性剤／リンカーの共役は、共役前のデンドリマーの利用可能な表面官能基全ての５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満で生じる。好ましい実施形態では、デンドリマー複合体は、疾患または障害を処置し、予防し、および／または撮像するための活性剤の有効量にコンジュゲートされながら、特定の細胞型を標的とするための表面官能基の有効量を保持する。
１． エーテル結合を介した活性剤とのデンドリマーの共役

１種または複数種の活性剤を、エーテル結合を介して、必要に応じて１つまたは複数のリンカー／スペーサーを介して、ヒドロキシル末端デンドリマー上に組み込む方法が、開発された。

一部の実施形態では、ヒドロキシル末端デンドリマーの表面または末端基は、１つまたは複数のリンカー／スペーサーおよび１つまたは複数の放射性核種との共役前に、エーテル化反応を介して修飾される。エーテル化は、アルコールを脱水してエーテルを形成する。一部の実施形態では、ヒドロキシル末端デンドリマーの１つまたは複数のヒドロキシル基が、１つまたは複数の連結部分および１種または複数種の活性剤との共役前にエーテル化反応を受ける。

一部の実施形態では、エーテル結合は、ＤＭＳＯ中の２％の水酸化ナトリウム溶液の存在下、臭化プロパルギルと反応させることにより、ヒドロキシルＰＡＭＡＭデンドリマーの表面基で導入される。さらなる実施形態では、ＤＭＦ中の臭化アリル、無水炭酸セシウムおよびヨウ化テトラブチルアンモニウムを使用する、４世代ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーＰＡＭＡＭ－Ｇ４－ＯＨのエーテル化反応である。

他の実施形態では、３．５世代デンドリマーで、アミンが一端にありヘキシンが他端にあるポリエチルグリコール（ＰＥＧ）リンカーを使用してアルキン官能基が導入されて、４世代二官能性デンドリマー、即ちさらなる共役の準備としてヒドロキシル基およびエーテル結合を含むものを生成する。例示的な二官能性デンドリマーは、図１１の化合物１として示され、７個のアルキンアームおよび５７個のヒドロキシル基が表面にある。
Ｖ． 使用方法

デンドリマー複合体組成物は、一般に、眼に関連する１つまたは複数の疾患または障害、特に眼の炎症性および／または血管新生疾患の処置に適している。デンドリマー組成物と、その効力が増大し副作用が低減した全身投与を介する眼内の罹患組織／細胞への１種または複数種の活性剤の標的送達のための方法とについて、好ましくは、活性化ミクロゲルおよび活性化マクロファージ、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、および／または脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）病変を含む罹患細胞／組織を選択的に標的とするものについて、説明する。好ましくは、デンドリマー組成物とその標的送達のための方法は、視神経またはＣＮＳの非損傷領域で最小限のデンドリマーを引き起こす。眼底の障害を治療するための方法についても説明する。一部の実施形態では、デンドリマー複合体が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の滲出型を処置するのに使用される。方法は、典型的には、デンドリマーおよび１種または複数種の活性剤を含む組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。

それを必要とする対象の眼の網膜および／または脈絡膜における活性化ミクログリアおよびマクロファージの数または活性を低減させるおよび／または阻害する方法が、提供される。一部の実施形態では、１種または複数種の治療剤と、複合体化されるか、共有結合によりコンジュゲートされるか、または分子内分散もしくはカプセル化されたヒドロキシル末端デンドリマーを含む組成物の有効量を使用する処置は、それを必要とする眼の網膜および／または脈絡膜の活性化ミクログリアおよびマクロファージの数または活性を低減させるおよび／または阻害するのに投与される。一部の実施形態では、組成物は、網膜内のミクログリアの活性化を阻害するかまたは低減させる投薬量でおよび経路で投与される。他の実施形態では、組成物は、ミクログリアの食細胞活性を阻害するかまたは低減させることができる。他の実施形態では、１種または複数種の受容体チロシンキナーゼ阻害剤を含む組成物は、対象の罹患網膜および／または脈絡膜の活性化ミクログリアおよびマクロファージの活性および／または量を、デンドリマー組成物（例えば、非共役活性剤）を受けていないまたはデンドリマー組成物で処置しない対象の同等の罹患組織での同じ細胞の活性および／または量と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または９９％阻害するかまたは低減させることができる。

罹患網膜および／または脈絡膜の活性化ミクログリア、活性化マクロファージ、および／または網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞におけるＶＥＧＦおよび／またはＶＥＧＦＲの発現および／または活性を低減させるおよび／または阻害する方法についても説明する。一部の実施形態では、組成物は、静脈内注射、皮下注射、または経口投与などの全身経路を介して施用される。好ましい実施形態では、組成物は、直接的な損傷および／または炎症を眼にもたらす可能性がある硝子体内または脈絡膜下に投与されない。罹患網膜および／または脈絡膜で活性化ミクログリアおよびマクロファージにより分泌される１種または複数種の炎症促進性サイトカインを低減させるおよび／または阻害する方法についても説明する。一部の実施形態では、組成物の有効量を使用する処置は、デンドリマー組成物（例えば、非共役活性剤）を受けておらずまたは処置されていない対象の同等の罹患組織におけるものと比較して、罹患網膜および／または脈絡膜の活性化ミクログリアおよびマクロファージにより分泌される１種または複数種の炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ－α、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）、またはインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ））の発現の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または９９％の減少をもたらす。

罹患網膜および／または脈絡膜における活性化ミクログリアおよびマクロファージの１つまたは複数の酸化促進性を低減させるおよび／または阻害する方法についても説明する。一部の実施形態では、組成物の有効量を使用する処置は、例えば一酸化窒素（ＮＯ）の生成または誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）の活性化（例えば、ＮＯＳ２発現）を低減させることによって、罹患網膜および／または脈絡膜における活性化ミクログリアおよびマクロファージの酸化ストレスの減少を、デンドリマー組成物（例えば、非共役活性剤）を受けていないまたは処置されていない対象の同等の罹患組織のものと比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または９９％もたらす。

それを必要とする対象の眼の異常な血管浸透性および漏出ならびに／または新生血管を低減させるおよび／または阻害する方法についても説明する。一部の実施形態では、組成物の有効量を使用する処置は、血管漏出および／または新生血管の減少をもたらす。
Ａ． 処置レジメン
１． 投薬量および有効量

投薬量および投与レジメンは、障害または損傷の重症度および場所、ならびに／または投与方法に依存し、当業者に公知である。１つまたは複数の眼疾患の処置に使用されるデンドリマー組成物の治療有効量は、典型的には、眼に関連した１つまたは複数の症状を処置し、阻害し、または軽減するのに十分である。

一部のｉｎ ｖｉｖｏ手法では、デンドリマー複合体は、眼の血管新生、特に網膜および脈絡膜新生血管形成を低減させるかまたは阻害するための治療有効量で対象に投与される。一部の実施形態では、組成物の有効量は、内皮細胞血管新生および／または血管内皮細胞増殖を低減させるかまたは阻害するのに使用される。

治療有効量のデンドリマー組成物および薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含む医薬組成物について説明する。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤にコンジュゲートされたヒドロキシル末端デンドリマーの有効量を含む。一部の特定の実施形態では、非経口使用に適した投薬量範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇの間（両端を含む）；約０．５ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの間（両端を含む）；約１．０ｍｇ／ｋｇから約４０ｍｇ／ｋｇの間（両端を含む）；および約２．０ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの間（両端を含む）である。より高い用量が、患者に薬物を負荷しかつ罹患組織（例えば、眼）での取込みを最大限にするのに最初に与えられてもよい。負荷用量後、患者は、維持用量を受けてもよい。負荷用量は、１０から１００ｍｇ／ｋｇ体重に及んでもよく、維持用量は、０．１から＜１０ｍｇ／ｋｇ体重に及んでもよい。経腸的に投与した場合、処置に必要とされる用量は、有効な非経口用量よりも最大１０倍多くてもよい。最適な用量は、患者において薬物ごとにそれぞれ試験された用量の安全性および効力結果から選択される。

デンドリマー組成物を含む医薬組成物の剤形も、提供される。「剤形」は、患者への投与が意図されるカプセルまたはバイアルなど、治療化合物の用量の物理形態を指す。本明細書で使用される「投薬単位」という用語は、単一用量で患者に投与される治療化合物の量を指す。一部の実施形態では、使用に適した投薬単位は、（平均的患者の体重が７０ｋｇであると仮定すると）５ｍｇ／投薬単位から約１４，０００ｍｇ／投薬単位の間（両端を含む）；約３５ｍｇ／投薬単位から約７，０００ｍｇ／投薬単位の間（両端を含む）；および約７０ｍｇ／投薬単位から約２，８００ｍｇ／投薬単位の間（両端を含む）および約１４０ｍｇ／投薬単位から約１，４００ｍｇ／投薬単位の間（両端を含む）である。

デンドリマー複合体の実際の有効量は、投与される特定の活性剤、製剤化される特定の組成物、投与形態、および処置がなされる対象の年齢、体重、状態、ならびに投与経路、および疾患または障害を含む要因に応じて様々にすることができる。
好ましくは、１種または複数種の活性剤、例えばスニチニブを含むデンドリマー組成物は、罹患したまたは損傷した組織の内部および周囲の細胞（例えば、ミクログリア）に送達される。例えばデンドリマー複合体組成物は、１種または複数種の活性剤を、炎症部位の、特に目の炎症部位のまたはその付近の細胞に送達するのに有効な量にすることができる。したがって一部の実施形態では、１種または複数種の活性剤を含むデンドリマー複合体組成物は、対象の炎症を改善するのに有効な量である。好ましい実施形態では、デンドリマー複合体組成物の有効量は、未処置の対照対象と比較して、対象の細胞内で著しい細胞毒性を誘発させない。好ましくは、デンドリマー複合体組成物の量は、未処置対照と比較して、対象の疾患または障害の炎症および／または他の関連ある症状を予防するかまたは低減させるのに有効である。

一般に、投与のタイミングおよび頻度は、所与の処置または診断スケジュールの効力と、所与の送達系の副作用とのバランスをとるように調節されることになる。例示的な投薬頻度は、連続輸液、単一および多数の投与、例えば、毎時、毎日、毎週、毎月、または毎年の投薬を含む。

一部の実施形態では、投薬量は、毎日１回、２回、または３回、またはそれよりも少ない頻度で、例えば、１日おき、２日おき、３日おき、４日おき、５日おき、または６日おきにヒトに投与される。一部の実施形態では、投薬量は、毎週、２週ごと、３週ごと、または４週ごとに、約１回または２回のみ投与される。一部の実施形態では、投薬量は、毎月、２カ月ごと、３カ月ごと、４カ月ごと、５カ月ごと、または６カ月ごと、またはそれよりも少ない頻度で、約１回または２回投与される。好ましい実施形態では、投薬量は、４週ごとに１回またはそれよりも少ない頻度で投与される。

投与レジメンは、対象の障害を処置するのに十分な時間の任意の長さとすることができることが、当業者に理解されよう。一部の実施形態では、レジメンは、１回または複数のサイクルの、１ラウンドの治療、その後の休薬日（例えば、薬物なし）を含む。治療のラウンドは、例えば、上記で論じた投与のものとすることができる。同様に休薬日は、１、２、３、４、５、６、または７日；または、１、２、３、４週；または１、２、３、４、５、または６カ月とすることができる。
２． 対照

１種または複数種の活性剤を含むデンドリマー複合体組成物の治療結果は、対照と比較することができる。適切な対照は、当技術分野で公知であり、例えば未処置の細胞または未処置の対象を含む。典型的な対照は、標的剤の投与の前および後の対象の状態または症状の比較である。状態または症状は、生化学的、分子、生理学的、または病理学的な読取りとすることができる。例えば、特定の症状、薬理学的、または生理学的指標に対する組成物の影響は、未処置の対象、または処置前の対象の状態と比較することができる。一部の実施形態では、症状、薬理学的、または生理学的指標は、処置前の対象で測定され、再び処置が開始された後に１回または複数回測定される。一部の実施形態では、対照は、処置がなされる疾患または状態を持たない１または複数の対象（例えば、健康な対象）における症状、薬理学的、または生理学的指標の測定に基づいて決定された参照レベルまたは平均である。一部の実施形態では、処置の効果は、当技術分野で公知の従来の処置と比較される。
Ｂ． 処置がなされる対象

組成物および方法は、眼の１つまたは複数の疾患または障害を処置するのに適している。組成物および方法は、眼の１つまたは複数の疾患または障害に関連した１つまたは複数の症状、例えば不快感、疼痛、乾き、過剰な涙、損傷、感染、火傷、および徐々に失われる視力を軽減するのに適している。

一部の実施形態では、処置がなされる眼の障害は、眼底疾患、例えば糖尿病性眼疾患、症候性硝子体接着／硝子体牽引（ｓＶＭＡ／ＶＭＴ）、およびウェット型（新生血管）またはドライ型ＡＭＤ（加齢黄斑変性）である。一部の実施形態では、処置がなされる眼障害は、１つまたは複数の網膜および脈絡膜血管疾患（例えば、ＡＭＤ、未熟児網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、化学療法の毒性に関連した網膜症、例えばＭＥＫ網膜症）である。好ましい実施形態では、処置がなされる眼障害は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）である。加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、黄斑の神経変性、神経炎症疾患であり、中心視力損失の原因である。加齢黄斑変性の病因は、脈絡膜（網膜下の血管層）、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、神経感覚網膜下の細胞層、Ｂｒｕｃｈ膜、および神経感覚網膜それ自体の慢性神経炎症を含む。

他の実施形態では、処置がなされる眼障害は、眼の炎症性疾患、即ち、眼の組織の炎症に関連する眼の疾患であり、例えば、ＡＭＤ、網膜色素変性症、視神経炎、サルコイド、網膜剥離、側頭動脈炎、網膜虚血、アテローム性動脈症、高血圧性動脈症、網膜動脈閉塞、網膜静脈閉塞、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ疾患（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ黄斑ジストロフィーまたは若年性黄斑変性症としても公知である）、地図上萎縮、視神経脊髄炎が含まれ、例えば網膜新生血管形成および脈絡膜新生血管形成を含む血管新生疾患も含まれる。他の状態は、炎症および／または血管新生を眼に、例えば感染症、鎌状赤血球症、低血圧症などをもたらす可能性がある。

処置され得る眼障害のさらなる例には、アメーバ角膜炎、真菌性角膜炎、細菌性角膜炎、ウイルス性角膜炎、オンコセルカル角膜炎、細菌性角結膜炎、ウイルス性角結膜炎、角膜ジストロフィー疾患、Ｆｕｃｈ内皮ジストロフィー、マイボーム腺機能不全、前部および後部眼瞼炎、結膜充血、結膜壊死、瘢痕性の瘢痕および線維症、点状上皮性角膜症、糸状角膜炎、角膜びらん、薄膜化、潰瘍および穿孔、シェーグレン症候群、Ｓｔｅｖｅｎｓ・Ｊｏｈｎｓｏｎ症候群、自己免疫性ドライアイ疾患、環境性ドライアイ疾患、角膜新生血管形成疾患、角膜移植後拒絶の予防および処置、自己免疫性ブドウ膜炎、感染性ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎（トキソプラズマ症を含む）、全ブドウ膜炎、硝子体または網膜の炎症性疾患、眼内炎の予防および処置、黄斑浮腫、黄斑変性、加齢黄斑変性、増殖性および非増殖性糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、網膜の自己免疫疾患、原発性および転移性眼内メラノーマ、その他の眼内転移性腫瘍、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、色素性緑内障、およびこれらの組合せが含まれる。他の障害には、角膜の損傷、火傷、または摩耗、白内障、およびそれらに関連する眼または視野の加齢変性が含まれる。

デンドリマー複合体は、上記で論じた状態または疾患を処置することが可能であることが公知の１種または複数種の追加の治療上活性な薬剤を組み合わせて投与することができる。

本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することによってさらに理解されよう。

（実施例１）
撮像により実証される単回全身投与後の脈絡膜新生血管病変への標的持続細胞内送達
方法
ヒドロキシルデンドリマー（約１４０００Ｄａ）を、非切断性結合を介してデンドリマー当たり２～３個のインドシアニングリーン（ＩＣＧ）分子（Ｄ－ＩＣＧ）に共有結合によりコンジュゲートさせた。ヒドロキシルデンドリマー（約１４０００Ｄａ）を、非切断性結合を介してデンドリマー当たり２～３個のテトラメチルローダミン（ＴＲＩＴＣ）分子（Ｄ－ＴＲＩＴＣ）に共有結合によりコンジュゲートさせた。

２つの研究を、１００μＬのＤ－ＩＣＧまたはビヒクル対照が静脈内投与されたＣ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）で実行した。第１の研究では、マウスにＤ－ＩＣＧまたはビヒクル対照を、レーザー後１、３、７、または１４日目に投与し、眼を、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）により、投与後４または２４時間でＩＣＧ撮像して分析した。強膜脈絡膜／網膜色素上皮（ＲＰＥ）複合体のフラットマウントを、蛍光標識されたイソレクチンおよびＩＢＡ－１により染色した。

第２の研究は、ＣＮＶ病変におけるデンドリマーコンジュゲートの局在化および永続性について評価した。第２の研究では、マウスに１００μＬのＤ－ＩＣＧおよび１００μＬのＤ－ＴＲＩＴＣ（Ｄ－ＩＣＧの１時間後）を、またはビヒクル対照を、レーザー後２４時間で静脈内投与した。投与後４、７、１４、２１および２８日目にマウスを分析し殺処置した（ｎ＝５／群）。対照群では、遊離ＩＣＧ（１．２３ｍｇ／ｍＬ）、１００μＬを、レーザー後２４時間でＩＶ投与し、投与後２、４、７および１４日目にマウスを分析し殺処置した（ｎ＝５／群）。眼を、ＩＣＧ撮像で光干渉断層撮影（ＯＣＴ）により分析した。強膜－脈絡膜／網膜色素上皮（ＲＰＥ）複合体のフラットマウントを、蛍光標識されたＩＢＡ－１のみで染色した。
結果

ＩＣＧまたはＴＲＩＴＣの著しい放出は、３７℃、ｐＨ７．４のＰＢＳ中またはｐＨ５．５のクエン酸緩衝液中、エステラーゼで評価した場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出下のデンドリマーから観察されなかった。
インドシアニングリーン（ＩＣＧ）で標識されたヒドロキシルデンドリマーの能力は、レーザー誘発型ＣＮＶのマウスモデルでの全身投与後に、脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）病変、さらにマクロファージおよび網膜色素上皮内を標的とすることに関して評価した。

全身投与されたＤ－ＩＣＧは、投与後２４時間以内にＣＮＶ病変内の細胞によって選択的に取り込まれ、それに対して遊離ＩＣＧは、非特異的に分布され、典型的には数時間以内に消失した。反応性マクロファージおよびミクログリアは、レーザー後２４時間でデンドリマーコンジュゲートを飲食運動し、病変は、ＣＮＶの早期中のさらなる取込みを示し、これは効力研究（レーザー後２４時間）に一致していた。デンドリマーコンジュゲートは、ＩＢＡ－１ポジティブ細胞による同時局在化により示されるように（データは示さず）、ＣＮＶ病変のマクロファージ内に局在化した。遊離ＩＣＧ対照群は、レーザー後７～１４日の間で遊離ＩＣＧが病変内にもはや存在しないことを示した。ＩＢＡ－１シグナルは、レーザー損傷後２４～４８時間まで増大し、イソレクチンは、レーザー後４８時間で僅かに増大した（図１Ａおよび２Ｂ）。レーザー損傷後２４時間で与えられた単回全身Ｄ－ＩＣＧ用量はＣＮＶ病変に局在化し、著しいＤ－ＩＣＧが最後の時点で、即ち２８日で依然として存在した（図２Ｃ）。

ヒドロキシルデンドリマーは、脈絡膜内の反応性マクロファージ、網膜内のミクログリア／マクロファージ、および炎症／新生血管形成の部位でのＲＰＥ細胞と、同時局在化した。Ｄ－ＩＣＧおよびＤ－ＴＲＩＴＣは、細胞内にあるように見え、ＩＢＡ－１シグナルの領域で集束し、これは反応性ミクログリア、マクロファージ、およびＲＰＥ細胞でのヒドロキシルデンドリマーの取込みを実証する以前の研究と一致した。
ヒドロキシルデンドリマー（Ｄ－ＩＣＧ）は、全身投与後にＣＮＶ病変を選択的に標的とし、ヒドロキシルデンドリマーは４８時間以内に全身から消失するにも関わらず、投与後少なくとも２８日間永続する。このように、ヒドロキシルデンドリマーは、持続および標的治療、例えば全身曝露が最小限に抑えられた網膜疾患に関する１カ月当たり１回の全身（皮下または経口）処置に適切な、ＣＮＶ病変での長期局在化をもたらした。
（実施例２）
標的抗ＶＥＧＦ治療の全身投与後のネズミ脈絡膜新生血管形成の抑制
方法

炎症を選択的に標的とするヒドロキシルデンドリマー（約１４０００Ｄａ）を、ＦＤＡに認可された強力なＶＦＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤であるスニチニブの類似体と共有結合によりコンジュゲートさせた。コンジュゲートを、切断可能なスニチニブ類似体（Ｄ－ＣＳＡ、図１Ａの化合物６）または非切断性スニチニブ類似体（Ｄ－ＮＳＡ、図１Ｂの化合物３）と共に作製し、薬物放出を、ｐＨ７．４のＰＢＳ中またはｐＨ５．５のクエン酸緩衝液中、３７℃で、エステラーゼにより評価した。Ｂｒｕｃｈ膜のレーザー誘発型破裂を、用量投与の２４時間前に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝８／群）の両眼で行った。マウスに、ビヒクル、Ｄ－ＣＳＡ（５．２５（低）または２６．２５（高）ｍｇ／ｋｇスニチニブ当量）、Ｄ－ＮＳＡ（６．３（低）または１５．７５（高）ｍｇ／ｋｇスニチニブ当量）、または遊離スニチンブ（３２．５ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与（ＩＶ、１００μＬ）した。陽性対照群として、マウスのコホートにアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））を硝子体内投与（ＩＶＴ；１μＬ、４０μｇ）した。ＣＮＶ面積を、イソレクチンＩＢ４で染色された強膜－脈絡膜／ＲＰＥ複合体のフルオレセイン血管造影およびフラットマウントの両方により、レーザー処置の７日後に測定した。
結果

スニチニブの類似体に共有結合によりコンジュゲートしたヒドロキシルデンドリマーの効力を、レーザー誘発型脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）のマウスモデルで評価した。

Ｄ－ＣＳＡを、デンドリマー当たり５種のスニチニブ類似体（１０．５％ｗ／ｗ）で調製し、Ｄ－ＮＳＡを、デンドリマー当たり７種のスニチニブ類似体（１２．６％ｗ／ｗ）で調製した。ｉｎ ｖｉｔｒｏで６日間にわたり、Ｄ－ＣＳＡは、エステラーゼによりｐＨ５．５（細胞内条件）でスニチニブを約６５％放出し、スニチニブの約１５％の放出は、ｐＨ７．４（血漿条件）で２４時間にわたり生じた。Ｄ－ＮＳＡコンジュゲートからのスニチニブ類似体の放出は、最小限であった。

ＣＮＶ面積の統計的に有意な低減が、ＩＶＴアフリベルセプトならびにＤ－ＣＳＡおよび遊離スニチニブのないＤ－ＮＳＡ（低用量Ｄ－ＣＳＡと比較してさらに５倍高い用量）両方のＩＶ用量レベルで、ビヒクル対照と比較して観察された（図３）。

ＶＥＧＦＲ２に対する結合親和性（Ｋｄ）を、遊離マレイン酸スニチニブ（０．１３ｎＭ）、非切断性ＰＥＧリンカーを介して結合したスニチニブ類似体（１ｎＭ）、およびＤ－ＮＳＡ（２７ｎＭ）で評価した。結合親和性データは、高い結合親和性がＤ－ＮＳＡで保持されることを示した。このように、スニチニブ類似体とヒドロキシルデンドリマーとの共役は、ＶＥＧＦ ＲＴＫに関してナノモルの力価を維持することが実証された。

レーザー誘発型ＣＮＶマウスモデルに投与されたＤ－ＣＳＡ／Ｄ－ＮＳＡの単回用量は、硝子体内投与されたアフリベルセプトと同等の効力を実証した。ＣＮＶ面積低減における非切断性スニチニブ類似体の効力は、デンドリマーからのスニチニブ放出が必要とされなくてもよいことを示唆する。以前の研究は、ヒドロキシルデンドリマーおよびデンドリマー薬コンジュゲートがＣＮＶ病変で＞２８日間保持され、検出可能な肝臓またはその他のオフターゲット毒性なしに、マウスおよびヒトにおいて２４時間以内に全身から無傷のまま消失することを示している。
（実施例３）
効力の持続および薬物全身クリアランス
方法

コンジュゲートを、切断性スニチニブ類似体（Ｄ－ＣＳＡ、図１Ａ中の化合物６）または非切断性スニチニブ類似体（Ｄ－ＮＳＡ、図１Ｂ中の化合物３）で作製した。Ｂｒｕｃｈ膜のレーザー誘発型破裂を、用量投与の２４時間前に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝８／群）の両眼で行った。マウスに、ビヒクル、Ｄ－ＣＳＡ（５．２５ｍｇ／ｋｇスニチニブ当量）、Ｄ－ＮＳＡ（６．３ｍｇ／ｋｇスニチニブ当量）、または遊離スニチニブ（６．５ｍｇ／ｋｇ）を単回腹腔内注射（ＩＰ、１００μＬ）した。陽性対照群として、マウスのコホートにアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））を硝子体内投与（ＩＶＴ；１μＬ、４０μｇ）した。ＣＮＶ面積を、イソレクチンＩＢ４で染色された強膜－脈絡膜／ＲＰＥ複合体のフルオレセイン血管造影およびフラットマウントの両方により、レーザー処置の７日および１４日後に測定した。血漿薬物動態研究では、単回ＩＰ注射を介して投与されたＣｙ５で標識された同じデンドリマーを、ＩＰ投与から最長７２時間後の血漿収集によりモニターした。
結果

治療持続時間、およびスニチニブの類似体と共有結合によりコンジュゲートしたヒドロキシルデンドリマーのクリアランスを、レーザー誘発型脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）のマウスモデルで評価した。

デンドリマー共役スニチニブ類似体、Ｄ－ＣＳＡ、およびＤ－ＮＳＡは、処置後７日でのＣＮＶ面積の低減と、処置後１４日でのＣＮＶ面積のさらなる低減とを伴った、単回ＩＰ用量からの永続的な応答を実証した。ＣＮＶ面積の著しい低減は、処置後７日でのＩＶＴアフリベルセプトに関して観察されたが、その低減は、処置後１４日目には持続しなかった（図４Ａ）。

血清中、Ｄ－ＣＳＡおよびＤ－ＮＳＡは共に、処置後２日以内に消失した（図４Ｂ）。したがってデンドリマー共役スニチニブ類似体Ｄ－ＣＳＡおよびＤ－ＮＳＡは、ＣＮＶ病変に対して長期局所効力を発揮し、処置後１４日目に病変サイズは減少し続けた。
（実施例４）
Ｎ，Ｎ－ジデセチルスニチニブアミドアジドの合成およびキャラクタリゼーション

デンドリマー－ジデセチルスニチニブコンジュゲートの設計および合成について、実施例４および５に記載する。血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の過発現は、血管新生に関連するいくつかの疾患で示唆されてきた。スニチニブは、ＶＥＧＦ受容体を遮断しかつ優れた抗血管新生活性を有する受容体チロシンキナーゼ阻害剤であり、種々のタイプのがんで使用するためにＦＤＡにより認可されている。ジセチルスニチニブは、スニチニブの活性代謝産物である。スニチニブおよびその類似体の優れた治療上の値にも関わらず、それらの臨床上の開発は、関連ある毒性によって妨げられる。デンドリマージデセチルスニチニブコンジュゲートは、それをヒドロキシル末端デンドリマーに結合することによってスニチニブの用量関連の毒性を克服することを目標とする。合成スキームを図５に概説し、４世代ＰＡＭＡＭを例示的なヒドロキシル末端デンドリマーとして使用する。

ステップ１： ５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－２－オン（化合物２）の合成
ｎ－ブタノール（１０Ｖ）中の５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－２，３－ジオン（６．０ｇｍ、１．０当量）の撹拌溶液に、トリエチルアミン（６．１２ｍＬ、１．２当量）を添加し、その後、ヒドラジン水和物（３．５６ｍＬ、２．０当量）を室温で添加した。得られた溶液を、１００℃で１６時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ（ヘキサン中５０％酢酸エチル）によりモニターした。反応が終了したと判断されたら、反応産物それ自体を４５℃の真空下で蒸発乾固して、暗褐色固体を得た。得られた固体を水（２０Ｖ）でクエンチ処理し、酢酸エチル（３０Ｖ）で抽出し、有機層を水洗して得た。有機層を、ロータリーエバポレーター上で濃縮乾固した。粗生成物を、酢酸エチルを再結晶することにより精製して、灰色の綿毛状固体を得た（４．０ｇ、収率７２％）。図５に示される化合物２を、^１Ｈ ＮＭＲ、液体クロマトグラフィー、および質量分光法により確認した。

ステップ２： ５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボン酸（化合物４）の合成
エタノール（１０Ｖ）中の５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－２－オン（化合物２）（４．０ｇｍ、１．０当量）および５－ホルミル－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボン酸（化合物３）（４．４１ｇｍ、１．０当量）の撹拌溶液に、ピロリジン（４．４２ｍＬ、２．０当量）を室温で添加した。得られた溶液を、８０℃で３時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ（ＤＣＭ中１０％メタノール）によりモニターした。反応が終了したと判断されたら、反応産物を室温に冷却し、２Ｍ ＨＣｌ溶液を添加してｐＨ＝３にした。茶褐色の沈殿物が形成され、濾過した。得られた固体をエタノール（２０Ｖ）で洗浄し、その後、ヘキサン（３０Ｖ）で洗浄し、濾過して、赤味がかったオレンジ色の固体を得た（６．６ｇ、収率８２％）。図５に示される化合物４を、^１Ｈ ＮＭＲにより確認した。

ステップ３： ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛２－［（５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）ホルムアミド］エチル｝カルバメート（化合物６）の合成
ＤＭＦ中の５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボン酸（化合物４）（６．５ｇ、１．０当量）の溶液に、トリエチルアミン（６．０８ｍＬ、２．０当量）ＥＤＣ．ＨＣｌ（（８．６８ｇ、２．１当量）、ＨＯＢＴ（３．９４ｇ、１．３５当量）、およびｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－アミノエチル）カルバメート（４．１６ｇ、１．２当量）を０℃で添加した。反応物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、水（２０．０Ｖ）で希釈し、１０分間撹拌して沈殿させ、濾過して、褐色固体を得た。得られた固体を酢酸エチル（１５．０Ｖ）で洗浄し、その後、ヘキサン（１５．０Ｖ）で洗浄し、濾過し、乾燥して、茶色がかったオレンジ色の固体をｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛２－［（５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）ホルムアミド］エチル｝カルバメート（化合物６）（７．５ｇ、収率７８％）として得た。図５に示される化合物６を、^１Ｈ ＮＭＲにより確認した。

ステップ４： Ｎ－（２－アミノエチル）－５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物７）の合成：
ＤＣＭ（１０．０Ｖ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛２－［（５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）ホルムアミド］エチル｝カルバメート（化合物６）（９．０ｇ、１．０当量）の溶液に、トリフルオロ酢酸（３．０Ｖ）を０～５℃で添加した。反応物を室温で１２時間撹拌した。反応産物それ自体を、４５℃の真空下で蒸発乾固して、暗褐色固体を得た。得られた固体をジエチルエーテル（１５．０Ｖ）で洗浄し、濾過し、乾燥して、オレンジ－黄色固体（６．０ｇ粗製）を得た。図５に示される化合物７を、^１Ｈ ＮＭＲ、液体クロマトグラフィー、および質量分光法により確認した。

ステップ５： Ｎ－｛２－［（５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）ホルムアミド］エチル｝－３－［２－（２－プロポキシエトキシ）エトキシ］プロパンアミド（化合物９）の合成：
ＤＭＦ（１０．０Ｖ）の３－［２－（２－プロポキシエトキシ）エトキシ］プロパン酸（８）（５．９５ｇ、１．０当量）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（８．４０ｍＬ、２．０当量）、ＥＤＣ．ＨＣｌ（６．９０ｇ、１．５当量）、ＨＯＢＴ（０．６５ｇ、０．２当量）、Ｎ－（２－アミノエチル）－５－｛［（３Ｚ）－５－フルオロ－２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドール－３－イリデン］メチル｝－２，４－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物７）（１１．０ｇ、１．０当量）およびＤＭＡＰ（０．２９４ｇ、０．１当量）を０～５℃で添加した。反応物を室温で３時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）によりモニターした。反応混合物を水（２０．０Ｖ）で希釈し、１０分間撹拌して、褐色沈殿物を形成し、濾過した。得られた固体を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ，Ｎ－ジデセチルスニチニブアミドアジドをオレンジ色の固体として得た（５．２ｇ、収率３７％）。化合物９を、^１Ｈ ＮＭＲ、液体クロマトグラフィー、および質量分光法により確認した。

（実施例５）
デンドリマー－ジデセチルスニチニブコンジュゲート（Ｄ－４５１７）の合成およびキャラクタリゼーション
方法
中間体およびデンドリマーコンジュゲートの合成およびキャラクタリゼーション：
デンドリマーヘキシン（図６Ａの化合物２）の合成：
乾燥した丸底フラスコ（２５０ｍＬ）を取り、その自重を記録した。所望量の、Ｇ４－ＯＨのメタノール溶液を、丸底フラスコに注ぎ、６０℃で２時間蒸発させた。フラスコを高真空アセンブリ上に１時間移した。フラスコ内のＧ４－ＯＨの量を記録した。Ｇ４－ＯＨの重量を記録したら、５０～６０ｍＬの無水ＤＭＦをフラスコに添加し、減圧下で蒸発させて、Ｓｔｅｇｌｉｃｈエステル化の効率に影響を及ぼす可能性のあるデンドリマー中に存在する微量のメタノールを全て除去した。ＤＭＦの蒸発後、フラスコを窒素環境下に置いた。無水ＤＭＦ（１０ｍＬ／グラム）をフラスコに添加し、溶液を超音波浴に移し、反応混合物を、澄明な溶液が実現されるまで超音波処理した。５－ヘキシン酸を２ｍｌのＤＭＦに溶解し、撹拌溶液に添加した。１０分後、ＥＤＣ．ＨＣｌおよびＤＭＡＰを撹拌溶液に添加し、溶液を室温で４８時間撹拌したままにした。終了後、ＤＭＦ透析を、１ｋＤａ分子量カットオフ透析バッグで開始した。ＤＭＦ透析を８時間行い、ＤＭＦを１回交換した。８時間後、脱イオン水３０ｍＬをバッグ内の溶液に添加し、一晩、水に対して透析した。反応混合物をＨＰＬＣ水で希釈し、最終体積を３００～３５０ｍＬにした。ＴＦＦを脱イオン水中で、３ｋＤａ ＴＦＦカートリッジを使用して行った。ＴＦＦサイクルを６～７回行い、最終残余物体積は１００ｍＬ程度であり、これを凍結乾燥して粘性固体を得た。生成物の収率は５．５ｇ（７４％）程度であった。^１Ｈ ＮＭＲを、重水素化ＤＭＳＯ中、５００ＭＨｚ機器で記録し、この場合、約１０ｍｇの化合物が試料調製に使用された。ヘキシン酸の負荷を、プロトン積分法により計算した。δ８．１１～７．７０ｐｐｍの間のデンドリマーの内部アミドピークは、参照ピークであった。δ４．０ｐｐｍのピークはエステル結合プロトンに相当し、δ１．６ｐｐｍのピークはヘキシン酸からのＣＨ_２である。プロトン積分法は、デンドリマー当たりのヘキシン酸の９～１０個の分子の結合を示唆した。ＨＰＬＣ純度は＞９９％であった。

デンドリマー－ジデセチルスニチニブコンジュゲート（図６Ｂの化合物３）の合成：
デンドリマーヘキシン（図６Ａの化合物２）を２５０ｍＬの丸底フラスコに入れた。化合物を、４０ｍＬの無水ＤＭＦに、超音波処理により溶解した。スニチニブ－アジド溶液を、２０ｍＬのＤＭＦに溶解することによって反応混合物に添加し、溶液を撹拌した。その後、１０ｍＬの水を反応混合物に添加して、反応混合物中の銅塩の沈殿を停止させた。１０分間の撹拌後、硫酸銅五水和物（水３ｍＬに溶解）を反応フラスコに滴下添加した。撹拌溶液の色が青になった。５分後、アスコルビン酸ナトリウム（水３ｍＬに溶解）を反応混合物に滴下添加し、反応バイアルを、４０℃に設定した油浴上に移した。反応混合物を撹拌し、２４時間加熱した。終了後、ＤＭＦを蒸発させ、反応混合物を、水中１０％ＤＭＡｃの３００ｍＬで希釈した。この溶液に、ＥＤＴＡ（５００マイクロリットル、０．５Ｍ）溶液を添加し、キレート化により銅塩を除去した。ＴＦＦを、３ｋＤａのＴＦＦカートリッジを使用して水中の反応混合物で行った。８～１０透析ろ過容量を、水中１０％ＤＭＡｃで行い、その後、緩衝液として水中で５～６サイクル行って、溶媒の微量を除去した。最終残余物の体積は１５０ｍＬ程度であり、これを凍結乾燥して、淡黄色固体を得た。生成物の収量は５．５ｇであった。^１Ｈ ＮＭＲを、重水素化ＤＭＳＯおよび重水素化水中、５００ＭＨｚの機器で記録し、１０ｍｇ程度の化合物を試料調製に使用した。１００回のスキャンを^１Ｈ ＮＭＲで行った。^１Ｈ ＮＭＲは、生成物の形成を示し、スニチニブ分子の６～７アームが結合していた（図４）。薬物負荷を、プロトン積分法により計算し、この場合、ピークはデンドリマーに対応し、薬物を比較した。１．８ｐｐｍのＣＨ_２ピークはヘキシン酸に該当し、４．０ｐｐｍのエステル結合したＣＨ_２は、デンドリマー側からの参照ピークとしてロックされる。トリアゾール形成後、δ４．４ｐｐｍでのトリアゾール環の隣のＣＨ_２ピークのプロトンに該当する^１Ｈ ＮＭＲでの新しいピーク、６．９２～６．８０ｐｐｍの間のスニチニブからの２個の芳香族プロトン、ならびに１０．９および１３．６ｐｐｍでの２個のＮＨプロトンを使用して、薬物分子の負荷を計算した。クリック反応後、１～４トリアゾールの形成があり、トリアゾールに対応するシグネチャプロトンピークは、δ７．５～８．０ｐｐｍの間にあるようであり、これは内部アミドプロトンの存在によって抑制される。スニチニブ結合の確認のため、^１Ｈ ＮＭＲをＤ_２Ｏで記録し、内部アミドピークの消失およびδ７．７ｐｐｍでのトリアゾールピークの存在が観察された。ＨＰＬＣ純度は＞９９％であった。

ｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ結合アッセイに関するプロトコール
キナーゼ標識Ｔ７ファージ株を、ＢＬ２１株由来のＥ．ｃｏｌｉ宿主で調製した。Ｅ．ｃｏｌｉを対数期に成長させ、Ｔ７ファージを感染させ、溶解するまで３２℃で振盪させながらインキュベートした。溶解物を遠心分離し、濾過して、細胞砕片を除去した。残りのキナーゼをＨＥＫ－２９３細胞内で生成し、その後、ｑＰＣＲ検出のためにＤＮＡで標識した。ストレプトアビジンでコーティングした磁気ビーズを、ビオチニル化小分子リガンドで３０分間、室温で処理して、キナーゼアッセイ用の親和性樹脂を生成した。リガンド化ビーズを過剰なビオチンで遮断し、遮断緩衝液（ＳＥＡＢＬＯＣＫ（登録商標）（Ｐｉｅｒｃｅ）、１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０、１ｍＭ ＤＴＴ）で洗浄して、未結合リガンドを除去し、それによって非特異的結合を低減させた。結合反応は、キナーゼ、リガンド化親和性ビーズ、および試験化合物を、１×結合緩衝液（２０％ＳＥＡＢＬＯＣＫ（登録商標）、０．１７×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０、６ｍＭ ＤＴＴ）中で合わせることによって、組み立てた。試験化合物は、１００％ＤＭＳＯ中１１１Ｘストックとして調製した。Ｋｄを、３つのＤＭＳＯ対照点を持つ１１点３倍化合物希釈系列を使用して決定した。Ｋｄ測定用の全ての化合物を、１００％ＤＭＳＯ中で音響伝達により分布させた（非接触分配）。次いで化合物を、アッセイに直接希釈して、ＤＭＳＯの最終濃度が０．９％になるようにした。全ての反応は、ポリプロピレン３８４ウェルプレートで行った。それぞれ、最終体積が０．０２ｍｌであった。アッセイプレートを室温で、１時間振盪させながらインキュベートし、親和性ビーズを洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０）で洗浄した。次いでビーズを溶出緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０、０．５μＭ非ビオチニル化親和性リガンド）中に再懸濁し、室温で、３０分間振盪させながらインキュベートした。溶出液中のキナーゼ濃度を、ｑＰＣＲにより測定した。

試料調製：
マレイン酸スニチニブ、スニチニブエステルアミドリンカー、およびＤ４－スニチニブコンジュゲートを、水性ＤＭＳＯに溶解して、遊離薬物（スニチニブ）濃度が１０ｍＭの溶液を形成した。各試料溶液をそれぞれ、さらに、ＤＭＳＯ中１０μＭ、３．３３μＭ、１．１１μＭ、０．３７μＭ、０．１２３μＭ、４１．２ｎＭ、１３．７ｎＭ、４．５７ｎＭ、１．５２ｎＭ、０．５０８ｎＭ、および０．１６９ｎＭに希釈した。

結果
合成およびキャラクタリゼーション：
デンドリマー－ジデセチルスニチニブ類似体の合成を、銅（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリック反応を介して３ステップで実現した（図６Ａおよび６Ｂ）。第１のステップでは、デンドリマー表面ヒドロキシル基の部分修飾を、アルキン表面基にするエステル化によって数個のヘキシン酸リンカーアームを結合することにより行う。第２のステップは、アジド末端を持つジデセチルスニチニブ上へのリンカーアームの導入である。第３のステップは、両方の部分のクリック反応を含む。デンドリマーヘキシン酸の合成のため、受け取ったままのエチレンジアミンコアヒドロキシルポリアミドアミンデンドリマー（Ｇ４－ＯＨ、Ｐｈａｒｍａ ｇｒａｄｅ＞９５％ＨＰＬＣ純度）を使用した。ＯＨ末端デンドリマー（化合物１）の部分エステル化を、５－ヘキシン酸で、無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルミアミド中のＥＤＣ．ＨＣｌおよびＤＭＡＰを使用して最初に行って（図６Ａ）、化合物２を得た。^１Ｈ ＮＭＲを使用して、化合物の確認を行った。ヘキシンリンカーの負荷を、δ８．１１～７．７０ｐｐｍの間のデンドリマーの内部アミドプロトンに対してリンカープロトンを比較することによる、プロトン積分法によって計算した。エステル結合プロトンに該当するδ４．０ｐｐｍでのピークと、δ１．６ｐｐｍでのピークとは、ヘキシン酸からのＣＨ_２を指す。プロトン積分法は、デンドリマー当たり、アルキンリンカーの８～１０個の分子の結合を示唆した。構成体の純度を、ＨＰＬＣを使用して評価し、それが＞９９％であることがわかった。リンカー３－［２－（２－プロポキシエトキシ）エトキシ］プロパン酸を、無水ＤＭＦ中のＥＤＣ．ＨＣｌ、ＤＭＡＰ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔを使用してジデセチルスニチニブに結合して、アジドをクリック反応で沈殿させた。薬物は、リンカーを通してアミド結合に接続する。デンドリマーヘキシン（２）およびジデセチルスニチニブＰＥＧアジドを使用して、クリック反応を行った。銅で触媒されたクリック反応は、薬物発見の分野に革命をもたらした最も効率的な化学変換の１つであり、小分子または大分子と高分子、ポリマー、および抗体との共役のための優れたツールである。その容易な実行により、より穏やかな反応条件、異なる官能基との適合性、位置選択的、増強反応速度は、より清浄な生成物を大きな収率でもたらすことがわかっている。硫酸銅（ＩＩ）五水和物およびアスコルビン酸ナトリウムを、ＤＭＦ：Ｈ_２Ｏ（１：１）の存在下でクリック反応に使用した。反応を、室温で一晩実施し、その後、タンジェンシャルフロー濾過によって精製した。生成物（３）の形成を、^１Ｈ ＮＭＲにより確認した。コンジュゲートの^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、デンドリマー、およびそこに結合する薬物およびリンカーに該当するピークを明らかに示し、薬物負荷を、プロトン積分法の助けを借りてこれらのピークを比較することにより計算した。デンドリマーからの初期アミドプロトンは、スペクトルが重水素化ＤＭＳＯに記録されるとき、δ８．５～７．５ｐｐｍの間に存在する。これらのアミドのピークは、ピークの残りに関する参照標準である。薬物からの－ＮＨピークは、δ１３．６および１０．８ｐｐｍで出現する。薬物からの４個のプロトンがあり、１個のトリアゾールプロトンは、内部アミドピークと統合されたクリック反応後に形成され、δ８．５～７．５ｐｐｍの間になる。さらに、フッ素基の隣にあるスニチニブからの２個の芳香族プロトンは、δ６．９５～６．８５ｐｐｍの間に出現する。クリック変換のシグネチャピークであるδ７．７ｐｐｍでの鋭いトリアゾールピークは、ＮＭＲ溶媒が重水素化ＤＭＳＯからＣＤ_３ＯＤに切り換わったときに観察される。クリック後、アジドの隣に存在するＣＨ_２はダウンシールドされ、δ４．４ｐｐｍで観察することができる。薬物リンカー、デンドリマー中間体、および最終コンジュゲートのプロトンＮＭＲスペクトルの比較を、^１Ｈ ＮＭＲにより確認した。デンドリマー薬物コンジュゲート、中間体、および薬物リンカーの純度を、ＨＰＬＣを使用して評価した。最終コンジュゲートは、ＨＰＬＣにより＞９９％純度である。デンドリマーＧ４－ＯＨおよびデンドリマーヘキシン中間体は、２１０ｎｍチャネルで目に見え、ジデセチルスニチニブは、ＨＰＬＣにおいて４３０ｎｍで目に見える。化合物２の滞留時間は１６．９分程度であるが、疎水性薬物分子がデンドリマーに結合すると、最終コンジュゲートのピークは右に向かってシフトし、２７分付近で、疎水性薬物とデンドリマー構成体との結合が確認される。薬物がデンドリマーに結合しると、２１０ｎｍ（デンドリマー吸収波長）および４３０ｎｍ（薬物吸収波長）チャネルの両方のピークでそれに該当するピークが観察され、生成物の形成がさらに確認される。デンドリマーコンジュゲートの薬物負荷は、１２．６％ｗｔ／ｗｔ程度であり、デンドリマー分子当たり、結合する薬物の７分子に相当する。

結合親和性：
Ｄ－ジデセチル－スニチニブコンジュゲート（化合物Ｄ－４５１７）、遊離マレイン酸スニチニブ、およびスニチニブリンカー（ＡＶＴ－４５１７）のキナーゼ比較結合親和性を評価し、結果を表３に提示する。遊離スニチニブの結合親和性は、０．１３ｎＭである。ＰＥＧリンカーの結合後、結合親和性は８分の１程度に減少して１．０ｎＭになった。コンジュゲートは、２７ｎＭの結合親和性を示した。結果は、デンドリマー表面での薬物の共役が、ナノモル範囲で、ＲＴＫドメインへの薬物の結合親和性を保持することを実証する。このことは、コンジュゲート自体が活性であり、薬物の放出なしに受容体に結合できることを示す。小分子阻害剤（３００～４００Ｄａ）と大デンドリマー（１４０００Ｄａ）との共役は、小分子阻害剤のナノモル結合を依然として保持できることが初めて示された。

ヒトおよびラット血漿における安定性研究：
ヒトおよびラット血漿におけるＤ－ジデセチルスニチニブ（Ｄ－４５１７）のｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性を、生理学的条件でさらに評価した。表４に提示される結果は、コンジュゲートＤ４５１７が非常に安定であり、４８時間後、ヒト血漿中で２％（重量パーセンテージ）の放出およびラット血漿中で４％（重量パーセンテージ）の放出があることを示唆する。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ薬物放出研究：
ｉｎ ｖｉｔｒｏ薬物放出研究は、血漿および細胞内条件をそれぞれ模倣する３７℃のエステラーゼによりｐＨ７．４およびｐＨ５．５で実施した。放出研究は、二回繰返しで実施した。結果を図７に提示する。細胞内条件で、２重量％未満の薬物アームが１５日で放出されている。血漿条件で、約２％が２４時間で放出され、約４％程度が１５日で放出されている。デンドリマーとリンカーとの間のエステル結合は、Ｄ－４５１７において、経時的にＡＶＴ－４５１７とのリンカーの損失をもたらした。両方の条件で、コンジュゲートは良好な安定性を実証した。

（実施例６）
デンドリマー－ジデセチルスニチニブコンジュゲート（Ｄ－４５１７）のｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態
Ｄ－４５１７薬物動態を、マウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏ評価した。メスＣ５７／Ｂｌ６マウスに、５または５０ｍｇ／ｋｇのＤ－４５１７をＩ．Ｐ．注射し、血液試料を収集して、血漿中Ｄ－４５１７濃度を決定した。ピーク血漿中濃度は、試料収集された第１の時点、０．５時間で観察された。ＣｍａｘおよびＡＵＣに基づく曝露は、用量関連であり、ほぼ用量に比例した。
終末消失Ｔ_１／２は、両方の用量レベルから約１時間後であった。ノンコンパートメント法により推定されたＰＫパラメーターを、以下の表５に示し、平均血漿中濃度対時間を図８に示す。

毒物動態データを、ラットで収集した。Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットに毎日、１２ｍｇ／ｋｇのＩ．Ｐ．注射、または１６８ｍｇ／ｋｇ Ｄ－４５１７の単回用量、または３０ｍｇ／ｋｇスニチニブ（４０．２１ｍｇ／ｋｇのマレイン酸スニチニブ）の経口日用量を与えた。血液試料を収集し、血漿集薬物濃度を決定した。ノンコンパートメント毒物動態パラメーターを推定した。

図９Ａおよび９Ｂは、１２ｍｇ／ｋｇ Ｄ－４５１７およびスニチニブ群に関する１日目および１４日目の血漿中濃度対時間のプロファイルを示す。Ｄ－４５１７血漿中濃度に明らかな性差は見られなかったが、スニチニブに関しては、１日目の２４時間の時点を除き、オスがメスよりも高い濃度を有していた。Ｄ－４５１７血漿中濃度は、スニチニブよりも速い低下を示した。終末半減期は、終末期において十分な時点がないので、信頼性をもって推定することができなかった。スニチニブは、投薬から２４時間後に測定可能であったが、Ｄ－４５１７は、投薬後８時間を超えて測定可能ではなかった。その結果、ＡＵＣの推定値は、Ｄ－４５１７と比較してスニチニブでより高かった。単回用量１６８ｍｇ／ｋｇ Ｄ４５１７の後、血漿中濃度は投薬後１時間で高かったが、サンプリングされた次の時点、２４時間で、ただ１種の動物が測定可能な濃度を有していた。

薬物動態結果は、Ｄ－４５１７の用量が、スニチニブと比較して、より低い全曝露で同等の最大濃度をもたらしたことを示す。別のラットに、マレイン酸スニチニブを経口的に１４日間、４０．２１ｍｇ／ｋｇの用量で与えた。Ｄ－４５１７は、死亡に関係せず、臨床観察、体重、食物消費、または臨床病理学的パラメーター（血液学、臨床化学、および尿検査）にも影響を及ぼさなかった。Ｄ－４５１７関連肉眼検査の知見は、１２ｍｇ／ｋｇおよび／または１６８ｍｇ／ｋｇでオスおよびメスの脂肪組織および腸間膜の黄色の変色に限定され、これは試験物品の腹腔内投与に関連した亜急性／慢性炎症と相関した。臓器重量変化は、１６８ｍｇ／ｋｇでのオスの脾臓重量で統計的に有意な減少を含んでいたが、この観察には、微視的相関はなかった。不利ではない微視的知見には、１２ｍｇ／ｋｇおよび１６８ｍｇ／ｋｇでのオスおよびメスにおける、眼の脈絡膜における最小限の限局性色素と、腹部脂肪／腸間膜での亜急性／慢性炎症とを含んでいた。炎症は、試験物品の腹腔内注射に続発するようであり、胃、肝臓、および脾臓の漿膜表面に沿って二次的に観察された。

全体として、Ｄ－４５７１は、続く単回または繰り返されるＩＰ投薬に十分耐えた。これらの観察は、メスのラットの死亡に加えて様々な臨床および病理学的変化に関連するマレイン酸スニチニブとは対照的であった。

（実施例７）
デンドリマー－ジデセチルスニチニブコンジュゲート（Ｄ－４５１７）の単回皮下投薬研究
ヒトにおける好ましい投薬経路を評価するために、Ｄ－４５１７の単回皮下投薬研究を、レーザー誘発型ＣＮＶマウスモデルで実行した。対照マウス（ｎ＝８／群）に、ビヒクルまたはアフリベルセプト（４０μｇ）のいずれかを、レーザー処置から１日後に硝子体内注射した。Ｄ－４５１７の３つの用量レベル（２、１０、および５０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８／群）を、単回皮下用量として、レーザー処置から１日後に投与した。１４日後、マウスを殺処置し、強膜－脈絡膜／ＲＰＥ複合体のフラットマウントを、ＤＡＰＩおよびイソレクチンＩＢ４で染色した。ＣＮＶ面積を、蛍光顕微鏡法および撮像ソフトウェアで測定した。図１０に示されるように、単回皮下用量として与えられたＤ－４５１７の３つ全ての用量は、ＣＮＶ病変面積を著しく低減させた。Ｄ－４５１７で処置した動物での応答は、アフリベルセプトで処置した動物で観察されたものよりも一貫していた。この研究は、著しい効力が、ＣＮＶモデルで皮下投与されたＤ－４５１７から観察されたことを実証する。

（実施例８）
デンドリマー上での非切断性エーテル結合を介したジデセチルスニチニブの共役
方法
デンドリマー上での非切断性エーテル結合を介したデンドリマーコンジュゲートの合成

合成は、二官能性デンドリマーの構築によって開始した。デンドリマーの３．５世代で、７個のアルキン官能基が、一端がアミンであり他端がヘキシンであるポリエチルグリコール（ＰＥＧ）リンカーを使用して導入されて、７個のアルキンアームおよび５７個のヒドロキシル基が表面にある４世代二官能性デンドリマー（図１１の化合物１）を生成した。デンドリマーの構造を、１Ｈ ＮＭＲ分光法により確認した。
ジデセチルスニチニブ、３個のエチレングリコール（ＰＥＧ３）スペーサー、および末端アジドを含む、クリック可能なジデセチルスニチニブ類似体（図１１の化合物２、別名、ＡＶＴ－４５１７）を合成して、デンドリマーの表面のアルキン基とのクリック反応に関与させた。活性剤、化合物２は、図５に示される５ステップ合成を使用して製造する。

ＶＴ－４５１７（図１１の化合物２）を、最後に、銅（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリック化学によってヘキシン基を持つ二官能性デンドリマー（図１１の化合物１）と反応させて、図１２に示される完全構造を持つＤ－４５１７．２（図１１の化合物３）を得た。この類似体とデンドリマーとの共役後、Ｄ－４５１７．２をタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により精製して、不純物を全て除去し、最終製剤へと精製させた。
Ｄ－４５１７．２コンジュゲートの^１Ｈ－ＮＭＲ分析

生成物Ｄ－４５１７．２の形成を、１Ｈ ＮＭＲにより確認した。コンジュゲートの１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、明らかに、デンドリマー、薬物、およびそこに結合するリンカーに該当するピークを示し、薬物負荷を、プロトン積分法の助けを借りてこれらのピークを比較することによって計算した。デンドリマーからの内部アミドプロトンは、スペクトルが重水素化ＤＭＳＯで記録されたとき、δ８．５～７．５ｐｐｍの間に存在する。これらのアミドピークは、ピークの残りに関する参照標準である。薬物からの－ＮＨピークは、δ１３．６および１０．８ｐｐｍで出現する。薬物からの４個のプロトンがあり、クリック反応後に形成された１個のトリアゾールプロトンを、内部アミドピークと統合し、δ８．５～７．５ｐｐｍの間になった。さらに、フッ素基の隣にあるスニチニブからの２個の芳香族プロトンは、δ６．９５～６．８５ｐｐｍに出現する。クリック変換に関するシグネチャーピークであるδ７．７ｐｐｍでの鋭いトリアゾールピークは、ＮＭＲ溶媒が重水素化ＤＭＳＯからＣＤ_３ＯＤに切り換わったときに観察される。クリック後、アジドの隣に存在するＣＨ_２はダウンシールドされ、δ４．４ｐｐｍで観察することができる。ＮＭＲは、ヒドロキシルデンドリマーにコンジュゲートされた薬物分子の数を定量するのにも使用される。薬物負荷を、デンドリマー内部アミドプロトンのプロトンと薬物プロトンとを比較することによって、プロトン積分法により計算した。
Ｄ－４５１７．２の純度を評価するためのＨＰＬＣ分析

デンドリマー薬物コンジュゲート、中間体、および薬物リンカーの純度を、ＨＰＬＣを使用して評価した。最終コンジュゲートは、ＨＰＬＣにより＞９９％の純度である。デンドリマーＧ４－ＯＨおよびデンドリマーヘキシン中間体は、２１０ｎｍチャネルで目に見え、ジデセチルスニチニブは、ＨＰＬＣで４３０ｎｍで目に見える。化合物２の滞留時間は１６．９分程度であるが、疎水性薬物分子がデンドリマーに結合すると、最終コンジュゲートのピークは右に向かってシフトし、２７分程度に至って疎水性薬物がデンドリマー構成体に結合したことを確認する。薬物がデンドリマーに結合すると、それに該当するピークを、２１０ｎｍ（デンドリマー吸収波長）および４３０ｎｍ（薬物吸収波長）チャネルの両方で観察することができ、これはさらに、生成物の形成を確認する。デンドリマーコンジュゲートの薬物負荷は１２．６％ｗｔ／ｗｔ程度であり、デンドリマー分子当たり、結合する薬物の７分子に相当する。

サイズおよびゼータ電位
Ｄ－４５１７．２のサイズおよびゼータ電位分布を、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ機器を使用して決定する。サイズ測定では、試料を、デンドリマーを脱イオン水（１８．２Ω）に溶解して、最終濃度が０．５ｍｇ／ｍＬの溶液を作製することによって調製した。次いで溶液を、０．２μｍシリンジフィルター（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、０．２μｍ ＨＴ Ｔｕｆｆｒｙｎ膜）に通して直接、セル（ＵＶ透過性の使い捨て可能なキュベット、寸法：１２．５×１２．５×４５ｍｍ）に濾過した。ゼータ電位測定では、試料を、上述の手順を使用して、１０ｍＭ ＮａＣｌ中、０．２ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏｓｅｒｉｅｓの使い捨て可能な折り畳まれた毛管セルを、測定に使用した。Ｄ－４５１７のサイズが５．５±０．５ｎｍであり、ゼータ電位が僅かに正であった（＋５．４±０．４ｍＶ）。

サイズ排除クロマトグラフィーマルチアングルレーザー散乱（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）
Ｄ－４５１７．２のモル質量は、サイズ排除クロマトグラフィーマルチアングルレーザー散乱（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）により決定されることになる。

結果
Ｄ－４５１７は、ＶＥＧＦＲ２に関してナノモル親和性を有し、活性薬、ＡＶＴ－４５１７の放出を必要としない。Ｄ－４５１７緩衝液および血漿安定性研究で観察されるように、生理学的条件下でコンジュゲートの安定性をさらに増大させ、かつコンジュゲートからの薬物の放出をさらに低減させるため、デンドリマー表面での切断可能なエステル結合を、Ｄ－４５１７．２の構造で実証されたように（図１２）、非切断性結合と置き換えた。Ｄ－４５１７．２の構造には切断可能な結合がない。

Ｄ－４５１７．２は、４世代のヒロドキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーの共有コンジュゲートであり、エチレンジアミン（ＥＤＡ）コア、アミドアミン反復単位［ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ]）、および６４ヒドロキシル末端基（化学式：Ｃ_６２２Ｈ_１１８４Ｎ_１８６Ｏ_１８８）を含有し、ここでは高度に効率的なクリック化学手法によってジデセチルスニチニブ類似体（ＡＶＴ－４５１７）がデンドリマーにコンジュゲートされている。ヒドロキシル、４世代、ＰＡＭＡＭデンドリマーは、単分散であり、高い組成純度（＞９５％）で生成される。Ｄ－４５１７．２の調製では、デンドリマー上の６４個のヒドロキシル基のうち７個が修飾されて、ＡＶＴ－４５１７に結合する（全質量の約１２．６％）。

ヒト、マウス、およびラット血漿における安定性研究
ヒト、マウス、およびラット血漿におけるデンドリマージデセチルスニチニブコンジュゲート、Ｄ－４５１７およびＤ４５１７．２のｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性を、生理学的条件で評価した。結果を図１３に提示した。Ｄ４５１７（２％（重量パーセンテージ）がヒト血漿中で放出され、４％（重量パーセンテージ）がラット血漿中で放出される）と比較すると、Ｄ４５１７．２の血漿安定性は、著しく改善される。４８時間で、３種全ての血漿中、０．５％未満の薬物（重量による）が、デンドリマー薬物コンジュゲートから放出された。

結合親和性
Ｄ－４５１７およびＤ－４５１７．２のキナーゼ比較結合親和性を評価し、結果を表６に提示する。

Ｄ－４５１７．２のＩＣ５０の結果は、試験された全てのアッセイに関してＤ－４５１７よりも低く、Ｄ４５１７．２とチロシンキナーゼ受容体との間のより強力な結合を示す。

他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、開示される本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に引用される刊行物およびそれらが引用される文献は、参照により具体的に組み込まれる。

当業者であれば、単なる通常の実験を使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態の、多くの均等物を認識するであろうしまたは確認することができる。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲により包含されることが意図されている。

Claims (33)

1. １種または複数種の受容体チロシンキナーゼ阻害剤と、複合体化されるか、共有結合によりコンジュゲートされるか、または分子内分散もしくはカプセル化された、ヒドロキシル末端デンドリマーを含む組成物と、
   全身投与に適した１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤と
   を含む医薬製剤であって
   前記組成物が、眼の１つまたは複数の疾患および／または障害に関連する１つまたは複数の症状を処置するかまたは軽減するのに有効な量である、
   医薬製剤。
2. 前記デンドリマーが、１種または複数種の追加の治療剤、予防剤および／または診断剤と、複合体化されるか、共有結合によりコンジュゲートされるか、または分子内分散もしくはカプセル化されている、請求項１に記載の製剤。
3. 前記受容体チロシンキナーゼ阻害剤が、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の受容体チロシンキナーゼ阻害剤である、請求項１または２に記載の製剤。
4. 前記ＶＥＧＦＲ阻害剤が、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、バンデタニブ、アキシチニブ、セジラニブ、バタラニブ、ダサチニブ、ニンテダニブ、モテサニブ、およびこれらの類似体からなる群から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。
5. 前記ＶＥＧＦＲ阻害剤が、スニチニブまたはその類似体である、請求項１から４のいずれか一項に記載の製剤。
6. 前記診断剤が、色素、蛍光色素、近赤外色素、ＳＰＥＣＴ造影剤、ＰＥＴ造影剤、および放射性同位体からなる群から選択される、請求項２から５のいずれか一項に記載の製剤。
7. 前記蛍光色素が、インドシアニングリーン、フルオレセインイソイオシネート、ホウ素－ジピロメテン、ローダミン、ローズベンガル、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項６に記載の製剤。
8. 前記診断剤が、インドシアニングリーンである、請求項７に記載の製剤。
9. 前記デンドリマーが、４世代、５世代、６世代、７世代、８世代、９世代、または１０世代のポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）ヒドロキシル末端デンドリマーである、請求項１から８のいずれか一項に記載の製剤。
10. 前記１種または複数種の受容体チロシンキナーゼ阻害剤が、前記デンドリマーに共有結合によりコンジュゲートされている、請求項１から９のいずれか一項に記載の製剤。
11. 前記１種または複数種の受容体チロシンキナーゼ阻害剤が、前記デンドリマーコンジュゲートの、約０．０１％ｗ／ｗから約３０％ｗ／ｗの間、約１％ｗ／ｗから約２５％ｗ／ｗの間、約５％ｗ／ｗから約２０％ｗ／ｗの間、および約１０％ｗ／ｗから約１５％ｗ／ｗの間の重量濃度にある、請求項１から１０のいずれか一項に記載の製剤。
12. 眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害が、眼の炎症性および／または血管新生疾患である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の製剤。
13. 眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜色素変性症、視神経炎、ブドウ膜炎、網膜剥離、側頭動脈炎、網膜虚血、アテローム性網膜症、高血圧性網膜症、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、網膜新生血管形成、および脈絡膜新生血管形成からなる群から選択される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の製剤。
14. 眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害を処置するおよび／または診断する方法であって、請求項１から１３のいずれか一項に記載の製剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
15. 眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害が、眼の炎症性および／または血管新生疾患である、請求項１４に記載の方法。
16. 眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜色素変性症、視神経炎、ブドウ膜炎、網膜剥離、側頭動脈炎、網膜虚血、アテローム性網膜症、高血圧性網膜症、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、網膜新生血管形成、および脈絡膜新生血管形成からなる群から選択される、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
17. 眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害が、眼の活性化ミクログリア、活性化マクロファージ、および／または網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞に関連する疾患および／または障害である、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記組成物が、眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害における前記活性化ミクログリア、活性化マクロファージ、および／またはＲＰＥ細胞を標的とするのに有効な量である、請求項１４から１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記組成物が、眼の前記活性化ミクログリアおよび／または活性化マクロファージの数および／または活性を低減させるのに有効な量である、請求項１４から１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記組成物が、眼の前記１つまたは複数の疾患および／または障害の１つまたは複数の症状を軽減させるのに有効な量である、請求項１４から１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記組成物が、全身投与を介して投与される、請求項１４から２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記組成物が、静脈内、皮下、または経口的に投与される、請求項１４から２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記組成物が、毎日、毎週、隔週、毎月、および隔月からなる群から選択される期間で前記対象に投与される、請求項１４から２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 式（Ｉ）：
    

    

    （式中、Ｄは、２世代、３世代、４世代、５世代、６世代、７世代、８世代、９世代、および１０世代から選択されるポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり、
    Ｌは、１つまたは複数の連結部分またはスペーサーであり、
    Ｘは、活性剤、またはその誘導体、類似体、もしくはプロドラッグであり、
    ｎは、１から１００の整数であり、
    ｍは、１６から４０９６の整数であり、および
    Ｙは、第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カーボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、およびエーテル（－Ｏ－）から選択されるリンカーであり、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環基である）
    のデンドリマー。
25. Ｄが、４世代、５世代、６世代、７世代、および８世代から選択されるポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり、
    Ｌが、１つまたは複数の連結またはスペーサー部分であり、
    Ｘが、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の阻害剤またはＴＩＥ２受容体チロシンキナーゼの阻害剤であり、
    ｎが、１から１００の整数であり、
    ｍが、１６から４０９６の整数であり、
    Ｙが、ｉｎ ｖｉｖｏで最小限に切断可能な結合または連結である、
    請求項２４に記載のデンドリマー。
26. Ｄが、Ｇ４ ＰＡＭＡＭデンドリマーであり、
    Ｌが、１つまたは複数の連結またはスペーサー部分であり、
    Ｘが、スニチニブ、またはその誘導体、類似体、もしくはプロドラッグであり、
    Ｙが、第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）であり、
    ｎが、５から１５の整数であり、
    ｍが、４９から５９の整数であり、
    ｎ＋ｍ＝６４である、
    請求項２４に記載のデンドリマー。
27. Ｄが、Ｇ４ ＰＡＭＡＭデンドリマーであり、
    Ｌが、トリアゾールリンカーを持つポリエチレングリコールであり、
    Ｘが、Ｎ，Ｎ－ジデセチルスニチニブ、またはその誘導体、類似体、もしくはプロドラッグであり、
    Ｙが、第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）であり、
    ｎが、５から１５の整数であり、
    ｍが、４９から５９の整数であり、
    ｎ＋ｍ＝６４である、
    請求項２４に記載のデンドリマー。
28. 式Ｉが、下記の構造：
    

    

    を有する、請求項２４に記載のデンドリマー。
29. 式Ｉが、下記の構造：
    

    

    を有する、請求項２８に記載のデンドリマー。
30. 前記デンドリマーが、約１ｎｍから約２０ｎｍの直径を有する、請求項２４から２９のいずれかに記載のデンドリマー。
31. 前記デンドリマーが、約２ｎｍから約１０ｎｍの直径を有する、請求項２４から３０のいずれかに記載のデンドリマー。
32. 前記デンドリマーが、－２０ｍＶから２０ｍＶの間、－１０ｍＶから１０ｍＶの間、－１０ｍＶから５ｍＶの間、－５ｍＶから５ｍＶの間、または－２ｍＶから２ｍＶの間（両端を含む）の表面電荷を有する、請求項２４から３１のいずれかに記載のデンドリマー。
33. 前記デンドリマーの全表面基の約０．１％から約４０％が、活性剤またはその類似体に共有結合している、請求項２４から３２のいずれかに記載のデンドリマー。

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