CN104740118B

CN104740118B - 一种石岐外感制剂的制备方法

Info

Publication number: CN104740118B
Application number: CN201510039036.5A
Authority: CN
Inventors: 成金乐; 彭丽华; 黄艺蓉; 张奉学; 王慧玲
Original assignee: ZHONGSHAN ZHONGZHI PHARMACEUTICAL GROUP CO Ltd
Current assignee: ZHONGSHAN HENGSHENG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.
Priority date: 2015-01-26
Filing date: 2015-01-26
Publication date: 2019-01-25
Anticipated expiration: 2035-01-26
Also published as: CN104740118A

Abstract

本发明公开了一种石岐外感制剂的制备方法，原料包括岗梅、铁包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，其特征在于，步骤如下：取以上原料，加50‑80%乙醇或水低温超声提取5‑6次，过滤，滤液合并，低温减压浓缩。并公开了由这种方法制备的石岐外感制剂在制备相关抗流感病毒药物中的应用。本发明制备方法获得的石岐外感制剂具有更好的抗病毒活性。

Description

一种石岐外感制剂的制备方法

技术领域

本发明涉及药物的制备，更具体地，涉及一种石岐外感制剂的制备方法及应用。

背景技术

石岐外感制剂为岭南名方，由岗梅、铁包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕组成，以上五味，加水煎煮二次，每次为2小时，合并滤液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加蔗糖适量，制成颗粒，干燥，制成1000g，既得。可以疏风清热，解暑消食。用于为外感引起的发热头痛，食滞饱胀、喉干舌燥等症。对石岐外感凉茶、袋泡茶和冲剂进行了285例临床研究：对感冒初起的恶寒发热、头身疼痛、鼻塞流涕、口干咽痛、肢倦、食滞饱胀、咳嗽均有显著改善作用，且三者疗效无显著性差异。但目前消费者普遍反映石岐外感颗粒效果不太理想。为解决石岐外感制剂药效等问题，本发明进行了相关研究。

发明内容

本发明的目的在于通过对石岐外感制剂的制备工艺和药理药效的研究，寻找一种新的制备方法，在这种制备方法下，可以提高石岐外感制剂的抗流感病毒效果。

首先提供一种石岐外感制剂，原料包括岗梅、铁包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，其制备方法步骤如下：取以上原料，加50-80％乙醇低温超声提取5-6次，过滤，滤液合并，低温减压浓缩。

公开另外一种石岐外感制剂的制备方法，原料包括岗梅、铁包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，其制备方法步骤如下：

取以上原料，加水低温超声提取5-6次，过滤，滤液合并，低温减压浓缩。

上述方法的超声提取的温度优选为30-70℃，优选温度为30～50℃。

上述方法的减压浓缩的温度优选为30-70℃，优选温度为50～70℃。

上述方法的超声提取溶剂加入量优选为原料的6-8倍。

上述方法的减压浓缩至密度为1.25-1.3g/mL。

上述制备方法制得的石岐外感制剂在制备抗流感病毒药物中的应用。

上述制备方法制得的石岐外感制剂在制备治疗病毒性肺炎药物中的应用。

上述制备方法制得的石岐外感制剂在制备抗合胞病毒或腺病毒药物中的应用。

本发明的优点在于：

1.50-80％EtOH低温提取物、H₂O低温提取物可以降低小鼠的肺指数和改善病毒性肺炎的症状,有较好的体内抗甲1型流感的作用，具有统计学意义。特别是H₂O低温提取物，对小鼠流感病毒性肺炎有显著治疗作用(与模型对照组相比，p<0.01)。

2.石岐外感H₂O低温提取物高剂量、低剂量，石岐外感50-80％EtOH低温提取物高剂量能延长流感病毒感染小鼠平均生存时间，其中以石岐外感50-80％EtOH低温提取物高剂量对流感病毒感染小鼠的保护作用最为显著，能明显延长其生存时间。

综合分析，50-80％EtOH低温提取物和H₂O低温提取物能同时显著降低流感病毒感染小鼠的肺指数和改善病毒性肺炎的症状,明显延长小鼠生存时间(与模型对照组相比，p<0.01)，即石岐外感复方的低温制备提取物具有较好的抗流感病毒的效果。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。

实施例1 60％EtOH低温提取物

一种石岐外感制剂的制备方法，原料包括岗梅、铁包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，具体步骤包括：

首先将石岐外感制剂原料混合，加60％的乙醇，在温度为50℃的条件下，超声提取，过滤，滤渣反复提取6次，滤液合并，然后在旋转蒸发仪中减压浓缩，减压浓缩的温度为60℃，浓缩得到密度为1.25的稠膏，所述的60％的乙醇加入量为原料重量的8倍。

实施例2 H₂O低温提取物

首先提供一种石岐外感制剂的制备方法，将石岐外感制剂原料混合，加纯水，在温度为40℃的条件下，超声提取，过滤，滤渣反复提取6次，滤液合并，然后在旋转蒸发仪中减压浓缩，减压浓缩的温度为60℃，纯水的加入量为原料的6倍，浓缩得到密度为1.27的稠膏。

实施例3 80％EtOH低温提取物

首先将石岐外感制剂原料混合，加80％的乙醇，在温度为30℃的条件下，超声提取，过滤，滤渣反复提取6次，滤液合并，然后在旋转蒸发仪中减压浓缩，减压浓缩的温度为70℃，浓缩得到密度为1.25的稠膏，所述的80％的乙醇加入量为原料重量的8倍。

实施例4 石岐外感试验样品抗流感病毒作用研究

1.受试样品

样品1：石岐外感颗粒；

样品2：石岐外感CO₂-SFE提取物(加入无水乙醇夹带剂，二氧化碳超临界提取，40℃下低温减压浓缩至密度为1.3-1.4的稠膏)；

样品3：石岐外感60％EtOH回流提取物(用60％乙醇回流提取2次，第一次加7倍量，回流提取1小时，过滤，药渣第二次加6倍量，回流提取1小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，合并提取液,滤过,60℃热测，滤液浓缩至密度为1.15-1.20稠膏状)；

样品4：石岐外感60％EtOH低温提取物；(实施例1)

样品5：石岐外感H₂O低温提取物；(实施例2)

阳性药物：利巴韦林，为白色粉末状，产品批号为20102928(广东肇庆星湖医药公司)

2.毒株

甲1型流感病毒FM1株，由中国药品生物检定所提供，于狗肾细胞(MDCK)传代，以细胞病变及鸡红血球血凝法来判断其滴度。

3.动物

NIH小鼠由广东省医学实验动物中心提供,SPF级,实验动物质量合格证号:

SCXK(粤)2013-002，雌雄各半,体重13-15克，小鼠饲料为广州中医药大学实验动物中心提供的富含多种营养成份的配方，饲养环境:室温23士2℃,相对湿度为75士10％。

4.实验器材

YJ-875医用净化工作台(苏州净化设备厂)；压力蒸汽灭菌器(上海南华医疗器械厂)；超纯水器(mi11ipore)；超低温水箱(Sanyo日本)；精密电子分析天平(FA/JA系列，海良平仪器仪表有限公司)；乙醚(天津化学试剂有限公司)；0.9％生理盐水(开开缘生物制药有限公司)，平皿,解剖剪,眼科镊,一次性注射器等实验器材。

5.方法

(1)剂量设计与分组

①剂量设计依据：依据石岐外感颗粒临床推荐使用量及1g石岐外感颗粒相当于2.156g生药推算样品1(石岐外感茶颗粒)给药量。

②石岐外感颗粒临床用量为：(10～20g)/次×3次/天＝(30～60g)/天，按临床最大给药量和成人体重60kg计算，则石岐外感颗粒成人临床给药量(g/kg)＝石岐外感颗粒临床最大用量/体重，即：60g/60kg＝1g/kg；

③1g石岐外感颗粒相当于2.156g生药，则小鼠给药量(g/kg)＝2.156g生药/kg×9.01＝19.426g生药/kg；根据每克浸膏相当于生药的量计算样品1-样品5的临床给药量，以临床推荐量1倍、2倍和4倍剂量作为抗病毒实验的低、中、高剂量，各样品给药剂量见表1.

表1小鼠给药剂量

(2)稀释病毒

试验前,取毒种用流水冲浸融化,以无菌生理盐水稀释成每0.05mL含15个LD₅₀，放入冰水中保存备用；

(3)感染小鼠

将检疫合格的190只NIH小鼠随机分为19组，模型组、蒸馏水溶剂对照组、吐温-80溶剂对照组、阳性对照组、样品1-样品5低、中、高剂量组，每组10只，雌雄各半，各组小鼠在乙醚轻度麻醉下,用已经滴定的病毒液滴鼻感染,用1.0ml注射器按照每鼠4滴(2滴/鼻孔),约0.05mL，正常对照组不感染病毒；

(4)给药

根据《中药新药研究指南》,按照公斤体重,换算成临床等效剂量,按动物体重确定每日给药量，阳性药物病毒唑用蒸馏水稀释成100mg/kg，以上药物均在感染病毒前一天开始给药,共给药5天,每天一次灌胃给药,0.2mL/kg；

(5)测定肺指数

感染后四天,杀剖小鼠,杀剖前小鼠禁食禁水4小时以上，称鼠体重,脱颈椎处死后取出鼠肺,观察病变情况,将肺放在盛有0.9％生理盐水的平碟中洗涤二次,用吸水纸吸干表面水分,称出肺重，按以下公式计算出肺指数与肺指数抑制率:

肺指数＝(小鼠肺重/鼠体重)*100

肺指数抑制率＝[(模型对照组平均肺指数-实验组平均肺指数)/模型对照组平均肺指数]*1O0％

(6)统计学处理

对所得实验数据以SPSS16.0进行t检验,求统计学的显著性,凡P值小于0.05,定为此药物有效。

6.结果与数据分析

肉眼观察，正常对照组肺组织呈均匀淡粉色，各肺叶表面光滑润泽，颜色均匀，质地柔软，无异常改变，其余各组肺组织均出现不同程度的肺炎病理改变，轻者可见一叶或多叶充血呈暗红色，严重者全肺严重充血而呈褐色。

模型组与正常对照组相比，肺指数明显升高，差异有统计学显著性意义，说明模型是成立的。阳性药病毒唑组与模型组相比，肺指数明显降低，p<0.01，两者差别显著。样品2中剂量、样品3低剂量、样品4中剂量组与模型对照组相比，p<0.05，两者有显著性差异，样品5高剂量和中剂量组与模型对照组相比，p<0.01，两者有显著性差异，显示对小鼠流感病毒性肺炎有显著治疗作用，详细见表10。

由表2可见，样品2中剂量、样品3低剂量、样品4中剂量、样品5高剂量、中剂量组可以明显降低小鼠的肺指数和改善病毒性肺炎的症状,有较好的体内抗甲1型流感的作用。

表2石岐外感茶不同工艺提取物对小鼠流感病毒性肺炎的影响()

注：各组与模型组相比,*P<0.05,**P<0.01。

实施例5石岐外感试验样品对甲1型流感病毒FM1株感染小鼠的防治保护作用研究

1.材料

(1)药物

石岐外感颗粒及其提取物5个样品(同实施例3和4)，均由中山市中智药业集团有限公司提供。阳性对照药物：病毒唑，广东肇庆星湖医药公司，批号： 20102928。

(2)动物

NIH小鼠，雌雄各半，体重13-15g，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供，动物质量合格证号：SCXK(粤)2013-0002。实验动物质量合格证号：44007200007596。饲养环境：室温为23±2℃，相对湿度为75±10％，用标准鼠料及水饲养。

(3)毒种

甲₁型流感病毒FM₁鼠肺适应株，由中国药品生物制品检定所提供，经鸡胚尿囊腔传代1次增强毒力后，测定其半数致死量(LD₅₀＝10^5.5)。

2.方法

(1)稀释病毒试验前，取毒种用流水冲浸融化，以无菌生理盐水稀释成每0.05毫升含2个LD₅₀，放冰水中保存。

(2)剂量设计与分组

1)剂量设计

③1g石岐外感颗粒相当于2.156g生药，则小鼠给药量(g/kg)＝2.156g生药/kg×9.01＝19.426g生药/kg；根据每克浸膏相当于生药的量计算样品1-样品5的临床给药量，以临床推荐量1倍、2倍和4倍剂量作为抗病毒实验的低、中、高剂量，各样品给药剂量见表3.

表3小鼠给药剂量

2)分组

将检疫合格的190只NIH小鼠随机分为19组，蒸馏水溶剂对照组、吐温-80溶剂对照组、样品1-样品5低、中、高剂量组、阳性药对照组(病毒唑100mg/kg)、病毒对照组，每组10只。

(3)样品配制

①2.5％吐温的配制：精密量取吐温-801.25mL置于干净烧杯中，加蒸馏水5mL用玻璃棒搅拌使之混合均匀，混合均匀后将混合液转移至量筒中，用蒸馏水定容至50mL；

②供试品的配制

高剂量组：石岐外感颗粒和样品3-样品5的配制：分别精密称取石岐外感颗粒(27.03g)、样品3(9.42g)、样品4(14.04g)、样品5(17.58g)，加少量蒸馏水慢慢研磨，研磨充分后用蒸馏水定容至15mL得各样品的高浓度溶液；

中剂量组：分别取6mL高剂量组的样品液，加蒸馏水至12mL得各样品的中剂量溶液；

低剂量组：分别取4mL中剂量组的样品液，加蒸馏水至8mL得各样品的低浓度溶液；

样品2的配制：精密称取样品20.63g加375μL吐温-80慢慢研磨，研磨充分后加5mL蒸馏水继续研磨使其混合均匀，最后用蒸馏水定容至15mL得高剂量的样品2溶液；取6mL样品2溶液，加2.5吐温-80至12mL得中剂量的样品2溶液；取4mL样品2溶液，加2.5吐温-80至8mL得低剂量的样品2溶液。

(2)观察

逐日观察动物发病情况和死亡数，共观察15天。15天内未死亡动物以15天计。

(3)统计学处理

对所得实验数据进行统计学处理，凡p值小于0.05，定为此药物有效。

死亡保护率与生命延长率计算公式：

死亡保护率＝(对照组死亡率-给药组死亡率)×100％

3.结果与数据分析

小鼠感染流感病毒甲1型，模型组发病均在4天以后，没有发现明显的差别，感染小鼠出现耸毛，卷缩，毛无光泽，活动减少，食量减少，体重减轻，逐渐衰竭死亡。病毒对照组大多于第6-8天大面积死亡。与之相比，用药各组多数症状较重，最后死亡。各试验组小鼠存活率比较结果详见表12，各组动物生存时间比较结果详见表13.

由表4和5可见，病毒对照组死亡率为100％，且平均存活时间为3.36天，此模型组成功。阳性药物组与模型组相比，P＜0.01(卡方检验)，具有显著性差异，平均存活时间为8.8天，说明此模型是可靠的。样品1高剂量、样品2中剂量、样品3高剂量、样品5高剂量、样品5低剂量、样品4高剂量的生存时间与病毒对照组相比，差异有统计学意义(p＜0.05),其中样品4高剂量与病毒对照组相比差异极显著。(p＜0.01)。说明石岐外感药物样品1高剂量、样品2中剂量、样品3高剂量、样品5高剂量、样品5低剂量、样品4高剂量能延长流感病毒感染小鼠平均生存时间，其中以样品4高剂量对流感病毒感染小鼠的保护作用最为显著，虽然不能降低感染小鼠的死亡率，但能明显延长其生存时间。但石岐外感药物样品各组存活率与病毒对照组相比，差异无统计学意义(p>0.05)。

表4各组小鼠存活率比较

表5各组动物生存时间比较

*与病毒对照组相比，p<0.05。与病毒对照组相比，**：p<0.01。

结合实施例4和5可以发现：

(1)石岐外感60％EtOH低温提取物、H2O低温提取物可以降低小鼠的肺指数和改善病毒性肺炎的症状,有较好的体内抗甲1型流感的作用，具有统计学意义。特别是H2O低温提取物，对小鼠流感病毒性肺炎有显著治疗作用(与模型对照组相比，p<0.01)。

(3)石岐外感H2O低温提取物高剂量、低剂量，石岐外感60％EtOH低温提取物高剂量能延长流感病毒感染小鼠平均生存时间，其中以60％EtOH低温提取物高剂量对流感病毒感染小鼠的保护作用最为显著，能明显延长其生存时间(与病毒对照组相比，**：p<0.01)。

综合分析，能同时显著降低流感病毒感染小鼠的肺指数和改善病毒性肺炎。

Claims

1.一种石岐外感制剂的制备方法，原料包括岗梅、铁包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，其特征在于，步骤如下：

取以上原料，加60%乙醇50℃低温超声提取5-6次，过滤，滤液合并，低温减压浓缩。

2.一种石岐外感制剂的制备方法，原料包括岗梅、铁包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，其特征在于，步骤如下：

取以上原料，加水40℃低温超声提取5-6次，过滤，滤液合并，低温减压浓缩。

3.如权利要求1或2所述的石岐外感制剂的制备方法，其特征在于，减压浓缩的温度为30-70℃。

4.如权利要求1或2所述的石岐外感制剂的制备方法，其特征在于，超声提取溶剂加入量为原料的6-8倍。

5.如权利要求1或2所述的石岐外感制剂的制备方法，其特征在于，所述的减压浓缩至密度为1.25-1.3g/mL。

6.如权利要求1或2所述的制备方法制得的石岐外感制剂在制备抗流感病毒药物中的应用。

7.如权利要求1或2所述的制备方法制得的石岐外感制剂在制备治疗病毒性肺炎药物中的应用。

8.如权利要求1或2所述的制备方法制得的石岐外感制剂在制备抗甲1型流感病毒药物中的应用。