CN105326923B - 一种发酵鼻炎贴膏 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种发酵鼻炎贴膏，其原料药为：将麻黄30重量份、熟附子30重量份、细辛15重量份、白芥子30重量份、辛荑40重量份、苍耳50重量份和冰片20重量份混合后，共碾成粉末，药粉经发酵处理而得。本发明能显著减少患者接触部位发生皮肤红肿、起泡等不良反应的发生，减轻药物副作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种鼻炎贴膏，特别涉及一种发酵鼻炎贴膏。
背景技术
过敏性鼻炎(又称变态反应性鼻炎)是一种常见病,全球10％-25％的人受到它的困扰。我国每年至少有3-4千万人患病(刘桦,王鹤尧,张佳丽.过敏性鼻炎的治疗药物研究进展[J].中国临床药学杂志,2007,16(03):196-198)。由于环境污染，特别是大气污染日益严重，该病的发病率正逐年上升。
目前治疗过敏性鼻炎的常有药物有减充血剂、皮质激素类、肥大细胞稳定剂、抗胆碱药、抗组胺药、白三烯受体拮抗剂等，但这些药物的使用或多或少都有一定的局限性(张琮.过敏性鼻炎的中医外治疗法进展[J].中医外治杂志,2004,13(02):36-37；李云鹏.过敏性鼻炎中医治疗概况[J].甘肃中医学院学报,2007,24(04):49-52)。以“就近处驱邪”、“治内以调外”为特色的中医外治疗法，对该病有显著而持久的疗效，常用外敷贴膏来治疗或减轻症状，但易使患者接触部位发生皮肤红肿、起泡等不良反应。
发明内容
本发明的目的在于提供一种发酵鼻炎贴膏，通过发酵处理从而降低贴膏药物的不良反应。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种发酵鼻炎贴膏，其原料药为：将麻黄30重量份、熟附子30重量份、细辛15重量份、白芥子30重量份、辛荑40重量份、苍耳50重量份和冰片20重量份混合后，共碾成粉末，药粉经发酵处理而得。
首先本发明的中药配方经特定筛选，更适宜发酵处理。本发明采用发酵处理将药物的成分分解、转化，形成新组合型的天然化合物群，特别是蛋白质组的变化。用此法炮制中药，可以比一般的物理或化学的炮制手段更大幅度地改变药性,提高疗效，降低毒副作用，扩大适应症。而且酿酒酵母发酵产生酒精，使药物更多有效成分溶解，易于皮肤吸收，增加药效。作为优选，所述发酵处理为：将药粉与活化的酵母液按照1g：0.3-0.5mL的配比混合后，25℃恒温闭光发酵5d。该处理为直接发酵法。
作为优选，所述发酵处理为：先将药粉置于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30min后取出，冷却，然后将药粉与活化的酵母液按照1g：0.3-0.5mL的配比混合后，25℃恒温闭光发酵5d。该处理为高压灭菌组，经高温处理药物细胞壁、细胞膜破裂。
作为优选，所述发酵处理为：先将药粉与无菌水按照1g：0.1-0.2mL的配比混合后-20℃冷冻过夜后，之后于60℃水浴箱中迅速解冻，然后将解冻后的药粉与活化的酵母液按照1g：0.3-0.5mL的配比混合后，25℃恒温闭光发酵5d。该组为冷冻灭菌处理组，药物经过冷冻灭菌处理，使药物细胞的细胞壁、细胞膜破裂。
作为优选，活化的酵母液制备方法为：将干酵母粉13.5g，加入质量浓度2％的蔗糖水270mL混合均匀，于39.0℃水浴活化1h。
作为优选，所述干酵母为酿酒酵母。
本发明的有益效果是：能显著减少患者接触部位发生皮肤红肿、起泡等不良反应的发生，减轻药物副作用。
附图说明
图1是不同处理的鼻炎膏蛋白含量；CK：对照组；A：直接发酵组；B：高压灭菌发酵组；C：冷冻灭菌发酵组。
图2是不同处理的鼻炎膏白芥子甙含量；CK：对照组；A：直接发酵组；B：高压灭菌发酵组；C：冷冻灭菌发酵组。
具体实施方式
下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例：
1材料与方法
1.1药品
安琪酿酒高活性干酵母(湖北安琪酵母股份有限公司)、聚乙二醇20000(国药集团化学试剂有限公司)、无水乙醇(分析纯，浙江杭州双林化工试剂厂)、石油醚(分析纯，中国石化集团)、冰醋酸(分析纯，杭州大方试剂厂)、浓硫酸(分析纯，衢州巨化试剂有限公司)、亚铁氮化钾(分析纯，上海试剂一厂)、浓盐酸(分析纯，衢州巨化试剂有限公司)、氯化钡(化学纯，上海化工专科学校实验工厂)、PBS(0.01mol/L)。
1.2器材
DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱、DK-450B型电热恒温水槽(上海森信实验仪器有限公司)、LRH-250-A生化培养箱(广东省医疗器械厂)、DL-6000B冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)、TCL-16G型台式高速冷冻离心机、pHS-3C PH计、PB203-N电子天平、UV-8500型紫外分光光度计、透析袋(8000-12000D华东医药器材公司)。
1.3实验方法
1.3.1原料药配方：麻黄30重量份、熟附子30重量份、细辛15重量份、白芥子30重量份、辛荑40重量份、苍耳50重量份和冰片20重量份混合后，共碾成粉末。
1.3.2酵母活化
先称取干酵母粉(安琪酿酒高活性干酵母)13.5g，加质量浓度为2％的蔗糖水270mL，于39.0℃水浴活化1h得活化的酵母液。
1.3.3药粉分为4组，每组30g：CK(空白对照组)；A组(直接发酵组)；B组(高压灭菌发酵组)；C组(冷冻灭菌发酵组)。每组按添加酵母量不同各分3组(1g：0.3mL、1g：0.4mL、1g：0.5mL)，如表1所示。
表1药物分组及处理情况
1.3.4鼻炎膏(即发酵后的药粉)中蛋白质的提取及浓度测定
将各样品分别加适量PBS缓冲液(0.01mol/L)和石英砂碾磨15min，加50mL PBS缓冲液于4℃下浸提24h，然后于4℃下3600rpm离心10min，取上清，装入透析袋，透析除盐后以PEG20000脱水，4℃下10000rpm离心5min，取上清，过0.45μm滤膜，滤液加冰乙醇，立即混匀，4℃下11000rpm离心25min，以1mL 100倍稀释PBS缓冲液悬浮沉淀，4℃条件下保存备用。按Lowry法测各处理组蛋白含量(张梅村.蛋白质定量方法[J].食品与药品,2004,(12):11-13)。
1.3.5鼻炎膏中芥子甙提取及含量测定
分别将各处理组鼻炎膏30g置圆底烧瓶中，加10倍量水，回流2h，冷却，离心，倾出上清液(Ⅰ)，向剩余药物中加入8倍量的水，回流1h，冷却，离心，倾出上清液(Ⅱ)，合并上清液(Ⅰ)和上清液(Ⅱ)，浓缩至50mL，过滤，置于100mL容量瓶中，甲醇定容，低温保存备用。
每处理组各取100mL样品液，等分为两份(一份为测定组，一份为对照组)，分别置于锥形瓶，测定组加生白芥子粉0.5g，60℃水浴加热1h，冷却，放置过夜，分别加入15％亚铁氰化钾溶液1.0mL和醋酸锌溶液(醋酸锌：冰醋酸：水＝23：3：40)1.0mL，振荡混匀，过滤，滤液加0.05mol/mL稀盐酸和0.05mol/mL氯化钡液25mL放置30min，并不断振摇，再次过滤，滤液中滴加浓硫酸，钡离子沉淀完全，收集硫酸钡沉淀，称取重量，计算两者重量之差(计算白芥子甙含量)。对照组不加生白芥子粉，其余同测定组(王传金,刘玉全.白芥子中白芥子甙提取工艺的研究[J].中药材,2001,24(06):426-427)。
1.3.6数据处理
所有数据均采用DPS数据处理系统分析。
2结果与讨论
2.1蛋白提取及测定实验结果
经全波长扫描得到该蛋白在757nm波长处有最大吸收峰，故于757nm下测定蛋白质浓度。A1处理蛋白含量最低，为50.1066±0.9175μg/ml；C2处理蛋白含量最高，为155.7736±0.7825μg/ml；(如图1所示)。
经Tukey比较(显著水平)分析表明，各处理组与对照组之间存在极显著性差异，(直接发酵组与对照组比较：F＝15.911，P<0.01；高压灭菌发酵组与对照组比较：F＝10.515，P<0.01；冷冻灭菌发酵组与对照组比较：F＝86.459，P<0.01)。
2.2白芥子甙提取及测定实验结果
所有实验组中空白对照组白芥子甙最多，为4.6388mg/g药物。A3组(直接发酵组)白芥子甙的含量最低，为0.3467mg/g药物。A组随着酵母液用量的增加白芥子甙量递减；B组(高压灭菌发酵组)白芥子甙随着酵母液用量的增加而增加。C组(冷冻灭菌发酵组)白芥子甙含量在处理后趋于平缓。如图2所示。
各处理组与对照组之间的显著性差异比较(A组：F＝38.63，P＜0.01，具极显著意义；B组：F＝18.35，P＜0.01，具极显著意义；C组：F＝147.37，P＜0.01，具极显著意义；D组：F＝164.75，P＜0.01，具极显著意义)
2.3讨论
酵母的酶难以破坏植物药坚硬的细胞壁，与药物蛋白直接接触发生生化反应，经灭菌处理后以及冷冻后再迅速水浴升温至60℃都使细胞壁破裂，酵母细胞与药物蛋白直接接触发生生化反应，改变药物中原蛋白的结构或产生了新的代谢产物，所以高压灭菌发酵组(B组)和冷冻灭菌发酵组(C组)的可溶性蛋白总量较对照组多。综合蛋白差异、白芥子甙含量分析得C组对降低副作用效果最明显。
发酵处理后各组的白芥子甙含量都有所降低，不难得出发酵是影响白芥子甙含量的主要因素。因为白芥子甙被分解成异硫氰酸丙烯酯及异硫氰酸对羟基苄酯的量就减少或者说能达到缓慢释放的效果，使白芥子既能达到治疗目的又能减少其对皮肤的刺激。各组的白芥子甙含量差异说明药物的灭菌、冷冻等处理方式对其影响较大。
综合蛋白质与白芥子甙含量改变的趋势可在一定程度上说明鼻炎膏中的白芥子甙是引起副作用的因素之一。本发明采用微生物生长代谢和生命活动来将药物的成分分解、转化，形成新组合型的天然化合物群，特别是蛋白质组的变化。用此法炮制中药,可以比一般的物理或化学的炮制手段更大幅度地改变药性,提高疗效，降低毒副作用，扩大适应症。而且酿酒酵母发酵产生酒精，使药物更多有效成分溶解，易于皮肤吸收，增加药效。
本发明的原料药(发酵处理后的药粉)制成产品时：将原料药(发酵处理后的药粉)与占原料药重量5％的芝麻油混匀后成水成膏状，以手握无水珠滴下为准。将药膏揉成直径约1cm、高度约0.5cm的圆饼。将圆饼置于4层10cm2无菌纱布正中，贴于穴位上再外橡皮膏贴牢，24h后换药。治疗案例：
患者杨某，女，66岁，患鼻炎约2年，常规鼻炎贴膏经常出现红肿，采用本发明的贴膏，持续使用2月，未出现红肿现象。
患者戴某，男，64岁，患鼻炎约1年，常规鼻炎贴膏经常出现红肿，采用本发明的贴膏，持续使用1月，未出现红肿现象。
患者林某，男，20岁，学生，过敏性鼻炎约2年，常规鼻炎贴膏经常出现红肿，采用本发明的贴膏，持续使用1月，未出现红肿现象，但略有发痒现象。
患者王某，男，5岁，鼻炎5个月，采用本发明的贴膏，持续使用1月，未出现红肿现象。
患者孔某，女，38岁，鼻炎约3年，采用本发明的贴膏，持续使用1月，未出现红肿现象。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (4)
1.一种发酵鼻炎贴膏，其特征在于：其原料药为：将麻黄30重量份、熟附子30重量份、细辛15重量份、白芥子30重量份、辛荑40重量份、苍耳50重量份和冰片20重量份混合后，共碾成粉末，药粉经活化的酵母液发酵处理而得；其中：
活化的酵母液制备方法为：将干酵母粉13.5g，加入质量浓度2％的蔗糖水270mL混合均匀，于39.0℃水浴活化1h；
所述发酵处理为：将药粉与活化的酵母液按照1g:0.3～0.5mL的配比混合后，25℃恒温闭光发酵5d。
2.根据权利要求1所述的一种发酵鼻炎贴膏，其特征在于：所述发酵处理为：先将药粉置于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30min后取出，冷却，然后将药粉与活化的酵母液按照1g:0.3～0.5mL的配比混合后，25℃恒温闭光发酵5d。
3.根据权利要求1所述的一种发酵鼻炎贴膏，其特征在于：所述发酵处理为：先将药粉与无菌水按照1g:0.1～0.2mL的配比混合后-20℃冷冻过夜后，之后于60℃水浴箱中迅速解冻，然后将解冻后的药粉与活化的酵母液按照1g:0.3～0.5mL的配比混合后，25℃恒温闭光发酵5d。
4.根据权利要求1所述的一种发酵鼻炎贴膏，其特征在于：所述干酵母为酿酒酵母。
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