CN104698172B - 检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒及其检测方法和应用,属于体外诊断检测技术领域。该试剂盒包括以下组分:1)磁性微球体系:包括直接连接或间接连接抗HBsAg抗体1的磁性微球;2)第一标记物体系:包括直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2;3)第二标记物体系:包括直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2,或者包括直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体3。采用本发明的试剂盒和检测方法来检测乙肝病毒表面抗原,具有灵敏度高和不会产生HOOK效应的优点。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断检测技术领域,特别是涉及一种检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒及其检测方法和应用。
背景技术
乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的、可导致肝脏炎性病变,并能够引起多器官损害的一种疾病。乙肝广泛流行于世界各国,主要侵犯儿童及青壮年,少数患者可转化为肝硬化或肝癌。因此,它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病,也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种疾病。
乙型肝炎病毒简称乙肝病毒。是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科(hepadnavividae)。乙肝病毒表面抗原(HBsAg)是乙肝病毒的外壳蛋白,其自身并不具有传染性,但它的出现常伴随乙肝病毒的存在,所以它是已感染乙肝病毒的标志。1976年10月,世界卫生组织(WHO)专家会议规定了乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen)统一缩写为HBsAg。它的分子量为2.4×1000000,是由混合的多肽组成,含有脂类、糖类和蛋白质等。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后2~6个月,当丙氨酸氨基转移酶升高前2~8周时,可在血清中测到阳性结果。急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期转阴,慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性。
乙肝病毒的检测通常包括以下方法:
1.肝功能检查:包括胆红素、AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)、A/G(白蛋白/球蛋白)等。
2.血清学检查:包括HBsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc等,即通常所说的“乙肝两对半”。有条件的还可以可检测HBV-DNA,DNA-p,Pre-S1、Pre-S2等,以及采用原位杂交技术检测肝内HBV-DNA。
3.肝脏活检(肝穿刺检查)。
4.血糖、尿糖、尿常规等。
在上述检测方法中,免疫血清学检查具有方便、快捷和准确等优点,已经普遍应用于医疗检测和诊断领域。较常见的免疫血清学检查方法有免疫荧光技术、放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫胶金体技术及化学发光免疫分析等。乙肝血清学检测项目一般包括HBsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc五项等,即所谓的“乙肝两对半”。
其中,HBsAg的检测方法常用的有酶联免疫法、胶体金法、化学发光法等。酶联免疫法价格便宜,灵敏度高,是目前国内应用最多的方法,但酶联免疫法只可以作为定性判断,且手工操作误差较大,难以适应市场发展的需求。胶体金法的优点是及时、快速,适宜于现场检测,其特异性和灵敏度远差于酶联免疫法。化学发光法可用于定量测定,无论从方法学和自动化程度看,都要优于酶联免疫法。
但是,常规技术中的乙肝体外诊断试剂存在对抗原浓度极高样本测不准或灵敏度不高的问题。
发明内容
基于此,本发明的目的在于克服现有技术的缺陷,提供一种检测乙肝病毒 表面抗原的试剂盒及其检测方法,采用该试剂盒和检测方法来检测乙肝病毒表面抗原,既能提高样本检测的灵敏度,又不会测不准抗原浓度极高的样本。
为实现上述目的,本发明采取以下技术方案:
一种检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,包括以下组分:
1)磁性微球体系:包括有直接连接或间接连接抗HBsAg抗体1的磁性微球;
2)第一标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2;
3)第二标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2,或者包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体3;
所述抗HBsAg抗体1、抗HBsAg抗体2和抗HBsAg抗体3的抗体位点互不相同。
上述“直接连接”为直接结合的连接,上述“间接连接”为通过生物素和链霉亲和素,或异硫氰酸荧光素和抗异硫氰酸荧光素抗体等能够相互结合的搭桥物以间接结合的方式连接。上述第一标记物体系和第二标记物体系中,既可以选用相同的标记物体系,也可选用不相同的标记物体系。其中,不相同的标记物体系,既可以是其中标记示踪物的浓度不同,也可以是标记的标记示踪物不同,或者是抗HBsAg抗体的抗体位点不同。所述抗体既可以是单克隆抗体,也可以是多克隆抗体。
本发明人发现,常规技术中的乙肝体外诊断试剂存在测不准抗原浓度极高的样本,是由于采用的是一步法,即在加入包被抗体磁性微球的同时加入标记了标记示踪物的抗体,温育反应结束后形成抗体-抗原-抗体的“三明治”复合物。 但是,如样本中抗原浓度极高时会出现明显的HOOK效应,即当样本中待测抗原浓度相当高时,过量抗原分别和包被抗体磁性微球及标记了标记示踪物的抗体结合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量而导致出现HOOK效应。而对于灵敏度不高的问题,则是由于采用了两步法,即在第一步加样中,仅加入包被抗体磁性微球,使抗原充分和包被抗体磁性微球反应结合,清洗后再第二步加样,加入标记了标记示踪物的抗体,形成抗体-抗原-抗体的“三明治”复合物,但是,该两步法的第一步加样反应中,只是样本中的抗原和包被抗体磁性微球反应,没有形成抗体-抗原-抗体结合的“三明治”复合物,因此在清洗过程中会损失掉一定的抗原,造成检测灵敏度的降低。
在上述研究发现的基础上,本发明在常规一步法和两步法的基础上进行了改进,在该试剂盒中设置第一标记物体系和第二标记物体系,使用该试剂盒检测乙肝病毒表面抗原时,首先进行一次加样,将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育反应后清洗,再进行二次加样,再次加入第二标记物体系,彻底形成抗体-抗原-抗体结合的双抗夹心复合物,再进行检测,从而既避免了产生HOOK效应的问题,又避免了清洗过程中会损失一定抗原,造成灵敏度下降的问题。
适用于本发明的磁性微球也称为磁珠或磁球,可以是本领域中常用的磁性微球。优选的是,本发明使用的磁球,是将纳米级的Fe2O3或Fe3O4磁性粒子和有机高分子材料进行复合,形成具有超顺磁性和极大量蛋白吸附容量的微米级的固相微球,具有在外加磁场作用下可迅速被磁化,在撤走磁场后剩磁为零的属性。其中,所述有机高分子材料的种类没有特别限制,可根据需要进行选择。
本发明所使用的磁性微球应能满足直径为0.1-5μm,磁性微球还可以通过表面改性而带有多种活性功能基团,包括但不限于-OH、-COOH、-NH2。
在其中一个实施例中,所述磁性微球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体,并具有0.1-5μm的粒径,并且,所述磁性微球任选地通过表面改性而带有一种或多种活性功能基团。
在上述技术方案中,磁性微球体系中,磁性微球的工作浓度优选0.1mg/ml-2mg/ml,抗HBsAg抗体1的工作浓度优选1-20μg/ml;标记物体系中,第一标记示踪物或第二标记示踪物的工作浓度优选5ng/ml-500ng/ml,抗HBsAg抗体2或抗HBsAg抗体3的工作浓度优选50ng/ml-5000ng/ml。将各试剂成分的浓度设定在此范围内,既能避免由于浓度过低导致光信号低,影响试剂检测的灵敏度;又能避免浓度过高所造成的成本浪费。可根据具体情况调整。
可以理解的,为了达到定量测定的目的,该试剂盒还可以包括HBsAg浓度优选0.05IU/ml-10IU/ml的校准品溶液和浓度优选100IU/ml-1000IU/ml的校准品溶液。
同样可以理解的,该试剂盒中的各组分均含有牛血清白蛋白(BSA)和防腐剂,BSA的浓度为0.01-0.5g/ml,防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠、Proclin系列中的任一种或两种以上混合物。
在其中一个实施例中,所述第一标记物体系和第二标记物体系中所用的标记示踪物相同。即均为第一标记示踪物或均为第二标记示踪物。采用相同的标记示踪物,其发光效率是一致的,能够具有更好的检测准确性。
在其中一个实施例中,所述第一标记物体系中所用的抗HBsAg抗体,和第二标记物体系中所用的抗HBsAg抗体相同。在标记示踪物中采用相同的抗体,能够确保抗原和标记示踪物之间结合的一一对应性,具有更好的检测准确性。
上述标记示踪物包括以下几种:1、化学发光免疫分析使用的能够直接发光的标记物,如鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺或其衍生物、吖啶酯等;2、化学发 光酶免疫分析使用的配合相应底物可以发光的标记物,如碱性磷酸酶或过氧化物酶等。
在其中一个实施例中,所述标记示踪物为发光标记物,选自:金刚烷,鲁米诺及其衍生物,异鲁米诺及其衍生物,吖啶酯。优选N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI),与上述发光标记物配合的氧化系统包括H2O2-微过氧化物酶、H2O2-过氧化氢酶、H2O2-乳过氧化物酶、H2O2-次氯血红素、H2O2-氯化血红素、次氯酸盐-CoCl2、过硫酸盐、过氧化钾、高碘酸钠、H2O2-K3Fe(CN)6、黄嘌呤-次黄嘌呤氧化酶、叔丁醇钾中的至少一种。
上述发光标记物是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物,该化合物能够经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子(hM)。
在其中一个实施例中,所述标记示踪物为化学发光催化剂,选自:碱性磷酸酶,过氧化物酶。使用时,配合相应的化学发光底物即可发光被定量检测,所述化学发光底物包括NaOH和H2O2,还包括金刚烷、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺或其衍生物中的至少一种,优选N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI)。
在其中一个实施例中,所述1)磁性微球体系中,所述间接连接抗HBsAg抗体1的磁性微球由包被链霉亲和素的磁性微球,和标记生物素的抗HBsAg抗体1组成;或所述间接连接抗HBsAg抗体1的磁性微球由包被抗FITC(异硫氰酸荧光素)抗体的磁性微球,和标记FITC(异硫氰酸荧光素)的抗HBsAg抗体1组成;
在其中一个实施例中,所述2)第一标记物体系中:所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记生物素的抗HBsAg抗体2, 和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记FITC的抗HBsAg抗体2,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成。
在其中一个实施例中,所述3)第二标记物体系中:所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记生物素的抗HBsAg抗体2,和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记FITC的抗HBsAg抗体2,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;
所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体3由标记生物素的抗HBsAg抗体3,和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体3由标记FITC的抗HBsAg抗体3,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成。
上述FITC抗体既可以为单克隆抗体,也可以为多克隆抗体。
上述方案丰富了检测所使用的磁性微球体系和标记物体系,可根据不同需求灵活选择。例如可以在磁性微球体系中直接将抗HBsAg抗体1连接磁性微球,也可以通过上述的间接搭桥方式连接抗HBsAg抗体1和磁性微球。同样,可以在标记物体系中将标记示踪物直接连接抗HBsAg抗体2或3,也可以通过上述的间接搭桥方式连接标记示踪物和抗HBsAg抗体2或3。并且,上述磁性微球体系和标记物体系中采用何种连接方式(直接连接或间接搭桥连接)并无相互影响或限定,既可在磁性微球体系和标记物体系中同时采用直接连接方式或同时采用间接连接方式,也可磁性微球体系选用直接连接,标记物体系采用间接连接,或者磁性微球体系选用间接连接,标记物体系采用直接连接。
本发明还公开了一种检测乙肝病毒表面抗原的方法,采用上述的试剂盒,包括以下步骤:
1)一次加样:将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育,形成复合物;
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗;
3)二次加样:将第二标记物体系加入上述沉淀中,混合均匀,温育,使上述沉淀与第二标记物体系反应,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,清洗后,加入发光底物,检测发出的相对光强度,计算得到HBsAg的含量。
本发明的检测乙肝病毒表面抗原的方法,在常规一步法和两步法的基础上进行了改进,在该试剂盒中设置第一标记物体系和第二标记物体系,使用该试剂盒检测乙肝病毒表面抗原时,首先进行一次加样,将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育反应后清洗,再进行二次加样,再次加入第二标记物体系,彻底形成抗体-抗原-抗体结合的双抗夹心复合物,再进行检测,从而既避免了产生HOOK效应的问题,又避免了清洗过程中会损失一定抗原,造成灵敏度下降的问题。
本发明还公开了一种的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒在化学发光分析仪中的应用。将该试剂盒应用于化学发光分析仪,具有操作规范,无人为引入误差及全自动化的优点。
上述检测乙肝病毒表面抗原试剂盒可通过如下方法制备:
磁性微球的包被:将缓冲液加入磁性微球中,随后加入缓冲液悬浮磁性微球,再加入包被物,组成反应体系,经反应后再进行纯化,即得;
抗体的标记:将抗体放入透析袋中,置于透析液中进行透析,随后往透析 好的溶液中加入标记反应物,反应后经纯化,即得;
所述抗体为抗HBsAg抗体1、抗HBsAg抗体2、或抗HBsAg抗体3。
经标记的抗体的纯化优选采用G-25凝胶柱进行纯化。上述包被磁性微球的反应体系中,还可加入1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐(CMC)进行包被连接,其浓度可在1mg/mL-30mg/mL范围内,优选10mg/mL。上述透析袋的截留分子量可在10000-20000范围内,优选14000。
在其中一个实施例中,当标记示踪物不直接与抗体连接时,还包括以下步骤:标记示踪物的标记:将链霉亲和素放入透析袋中,置于透析液中进行透析,随后往透析好的溶液中加入标记反应物的活化酯,反应后经纯化,即得。
所述标记反应物的活化酯可以为ABEI-半琥珀酰胺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(ABEI-hemisuccinimide N-Hydroxysuccinimide)等,仅需满足能与抗体结合即可。
在其中一个实施例中,所述包被物为:抗HBsAg抗体1,抗FITC抗体或链霉亲和素;所述标记反应物为:标记反应物的活化酯,异硫氰酸荧光素或生物素。上述方案丰富了检测所使用的标记物体系和磁性微球体系,可根据不同需求灵活选择。
在其中一个实施例中,所述抗体的标记中,所述透析液优选0.1mol/L的pH9.5碳酸缓冲液;磁性微球的包被中,所述缓冲液优选pH3.6醋酸缓冲液。上述透析液和缓冲液能够促使标记和包被反应进行得更好。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,通过设置第一标记物体系和第二标记物体系,使用该试剂盒检测乙肝病毒表面抗原时,首先进行一次加样,将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育反应后清洗,再进行 二次加样,再次加入第二标记物体系,彻底形成抗体-抗原-抗体结合的双抗夹心复合物,再进行检测,从而既能提高样本检测的灵敏度,又不会对抗原浓度极高的样本测不准。
本发明的一种检测乙肝病毒表面抗原的方法,在两步加样中均加入标记物体系,从而在第一步反应中即形成双抗夹心复合物,避免了清洗过程中损失抗原的问题,并且在第二步反应中继续加入标记物体系,如样本中抗原的含量极高,此时磁性微球表面还存在未与标记物体系结合的抗原,则在第二步反应中和新加入的标记物体系充分反应结合,使样本中与磁性微球体系结合的抗原都能形成双抗夹心复合物,避免了产生HOOK效应。该方法具有灵敏度高和不会产生HOOK效应的优点。
附图说明
图1为本发明实施例1中检测乙肝病毒表面抗原的检测方法原理示意图;
图2为实验例中传统一步法的检测原理示意图;
图3为实验例中传统两步法的检测原理示意图。
其中:1.待测样本中的HBsAg;2.待测样本中的其他成分;3.包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球;4.标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2。
具体实施方式
以下结合实施例和附图对本发明做进一步的说明,但并不对本发明造成任何限制。
以下实施例中:
HBsAg抗原,来源:美国Meridian公司。
抗HBsAg单克隆抗体1,来源:美国RA Biosources公司。
抗HBsAg多克隆抗体2,来源:美国RA Biosources公司。
羊抗FITC多克隆抗体,来源:美国Jackson公司。
磁性微球、ABEI:为深圳新产业生物医学股份有限公司生产。
FITC:购自美国Sigma公司。
生物素、链霉亲和素:均购自美国Biosources公司。
实施例1
一种检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,包括以下组分:
1)磁性微球体系:包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液。
其中,磁性微球的工作浓度:0.5mg/ml,抗HBsAg单克隆抗体1的工作浓度:10μg/ml。
2)第一标记物体系:标记N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI)的抗HBsAg多克隆抗体2溶液。
其中,ABEI的工作浓度:200ng/ml,抗HBsAg多克隆抗体2的工作浓度:2000ng/ml。
3)第二标记物体系:连接ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2溶液。
其中,ABEI的工作浓度:100ng/ml,抗HBsAg多克隆抗体2的工作浓度:1000ng/ml。
4)校准品溶液:HBsAg浓度为1.000IU/ml的低点校准品溶液和浓度为316.228IU/ml的高点校准品溶液。
上述各组分均含有牛血清白蛋白(BSA)和防腐剂,BSA浓度为0.1g/ml,防腐剂主要成分为NaN3,浓度为0.2g/ml。
本实施例的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒的制备方法中,除以下试剂外,其余均按照常规方法制备。
一、磁性微球体系的制备(包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液)。
1)配制pH为3.6的醋酸缓冲液:
称取2.55g三水合乙酸钠用4500ml纯化水溶解后再加入14ml乙酸混匀后,定容至5000ml,即得pH为3.6的醋酸缓冲液。
2)磁性微球连接(磁性微球连接CMC法):
往磁性微球中加入5倍于包被体积的上述pH3.6醋酸缓冲液悬浮,其中磁性微球浓度为20mg/mL,再加入浓度为10mg/ml的1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐(CMC),按1mg磁性微球加入12μg纯化的抗CA19-9单克隆抗体1,组成反应体系。
将上述反应体系放入恒温震荡水浴箱中37℃反应24小时。
3)磁性微球的清洗:
磁珠清洗液的配制:在0.05M PBS中溶入0.5%的BSA,即为磁珠清洗液。
清洗:将反应好的反应体系倒入烧杯中,然后置于磁铁上沉淀后,倒掉上清,加入5倍体积的磁珠清洗液搅拌清洗,然后放置在磁铁上,待上清液清亮后倒掉上清液。
4)磁性微球的悬浮:
磁珠悬浮液的配制:在0.05M PBS中溶入BSA和甲基纤维素(MC),使BSA的浓度为0.5g/ml,MC的浓度为0.4g/ml,即为磁珠悬浮液。
清洗完毕后,加入包被体积的磁珠悬浮液,悬浮浓度为20mg/ml,即得到包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液。
二、标记物体系的制备。
1)透析液的配制:在5000ml烧杯中加入Na2CO314.31g,NaHCO326.46g,加水定容至4500ml,即得0.1mol/L的碳酸缓冲液。
2)选用截留量为14000的透析袋,量取合适的尺寸,取1mg抗HBsAg多克隆抗体2用透析液调整到1ml,放入透析液中,室温搅拌透析2小时将透析好的溶液加入300μg ABEI-半琥珀酰胺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(ABEI-hemisuccinimide N-Hydroxysuccinimide),37℃反应2小时。
3)以G-25凝胶柱纯化上述反应得到的标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2。
4)在纯化后的标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2溶液中加入等体积的的5g/ml的BSA保护液,即得。
采用本实施例的试剂盒检测乙肝病毒表面抗原的方法,如图1所示,包括以下步骤:
1)一次加样:将150μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液,同时加入100μl标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2溶液(第一标记物体系),混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的HBsAg(1)和包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球3及标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2(4)反应,形成复合物。
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次,去除待测样本中的其他成分2。
3)二次加样:将200μl标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2溶液(第二标记物体系)加入上述沉淀中,混合均匀,37℃温浴20min,充分反应,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,并以缓冲液 清洗3次后,加入发光底物(NaOH和H2O2),检测发出的相对光强度,通过校准品修正后的工作曲线可根据样本检测光强度计算得出待测样本中的HBsAg浓度。
实施例2
一种检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同之处在于:
1)磁性微球体系:
包被链霉亲和素(SA)的磁性微球溶液,其中:磁性微球的工作浓度:0.5mg/ml,链霉亲和素的工作浓度:10μg/ml。
标记生物素(Biotin)的抗HBsAg单克隆抗体1溶液,其中:抗HBsAg单克隆抗体1的工作浓度:2000ng/ml,生物素的工作浓度:200ng/ml。
2)第一标记物体系:
标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液,其中:生物素的工作浓度:200ng/ml,抗HBsAg多克隆抗体2的工作浓度:2000ng/ml。
标记ABEI的链霉亲和素溶液,其中:ABEI的工作浓度:200ng/ml,链霉亲和素的工作浓度:2000ng/ml。
3)第二标记物体系:
标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液,其中:生物素的工作浓度:100ng/ml,抗HBsAg多克隆抗体2的工作浓度:1000ng/ml。
标记ABEI的链霉亲和素溶液,其中:ABEI的工作浓度:100ng/ml,链霉亲和素的工作浓度:1000ng/ml。
即上述第一标记物体系和第二标记物体系是标记物类型相同,但浓度不相 同的标记物体系。
本实施例的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒的制备方法,参照实施例1中的制备方法,除以下步骤外,其余均与实施例1中的方法相同。
一、磁性微球体系的制备。
1、包被链霉亲和素(SA)的磁性微球溶液的制备。
2)磁性微球连接(磁性微球连接CMC法):
和上述实施例1中包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液的制备方法相同,仅是将其中的抗HBsAg单克隆抗体1替换为链霉亲和素即可。
2、标记生物素(Biotin)的抗HBsAg单克隆抗体1溶液的制备。
3)取1mg抗HBsAg单克隆抗体1用透析液调整到1ml,放入透析液中透析2小时。将活化的生物素溶于二甲基甲酰胺(DMF)中,按照生物素与抗HBsAg单克隆抗体1的摩尔比为20:1的比例将二者混合,37℃反应2h;再将反应后的液体用0.1mol/L PBS于4℃透析24小时,即制成生物素标记的抗HBsAg单克隆抗体1溶液。
二、标记物体系的制备。
1、标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液的制备。
和上述标记生物素的抗HBsAg单克隆抗体1溶液的制备方法相同,仅是将其中的抗HBsAg单克隆抗体1替换为抗HBsAg多克隆抗体2即可。
2、标记ABEI的链霉亲和素溶液的制备。
和上述标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2溶液的制备方法相同,仅是将其中的抗HBsAg多克隆抗体2替换为链霉亲和素即可。
本实施例的检测乙肝病毒表面抗原的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
1)一次加样:将150μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被链霉亲和素的磁性微球溶液,20μl标记生物素(Biotin)的抗HBsAg单克隆抗体1溶液,并且同时加入50μl标记ABEI的链霉亲和素和50μl标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液(第一标记物体系),混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的HBsAg和标记生物素的抗HBsAg单克隆抗体1、包被链霉亲和素的磁性微球,及标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2和标记ABEI的链霉亲和素反应,形成复合物。
3)二次加样:将100μl标记ABEI的链霉亲和素溶液,100μl标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液(第二标记物体系)加入上述沉淀中,混合均匀,37℃温浴20min,充分反应,形成双抗夹心复合物。
实施例3
一种检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同之处在于:
1)磁性微球体系:
包被羊抗FITC(异硫氰酸荧光素)多克隆抗体的磁性微球溶液,其中:磁性微球的工作浓度:0.5mg/ml,羊抗FITC多克隆抗体的工作浓度:10μg/ml。
标记FITC的抗HBsAg单克隆抗体1溶液,其中:抗HBsAg单克隆抗体1的工作浓度:2000ng/ml,FITC的工作浓度:200ng/ml。
2)第一标记物体系:
标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液,其中:生物素的工作浓度:200ng/ml,抗HBsAg多克隆抗体2的工作浓度:2000ng/ml。
标记ABEI的链霉亲和素溶液,其中:ABEI的工作浓度:200ng/ml,链霉 亲和素的工作浓度:2000ng/ml。
3)第二标记物体系:
标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液,其中:生物素的工作浓度:100ng/ml,抗HBsAg多克隆抗体2的工作浓度:1000ng/ml。
标记ABEI的链霉亲和素溶液,其中:ABEI的工作浓度:100ng/ml,链霉亲和素的工作浓度:1000ng/ml。
即上述第一标记物体系和第二标记物体系是标记示踪物类型相同,但浓度不相同的标记物体系。
本实施例的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒的制备方法,参照实施例1中的制备方法,除以下步骤外,其余均与实施例1中的方法相同。
一、磁性微球体系的制备。
1、包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球溶液的制备。
2)磁性微球连接(磁性微球连接CMC法):
和上述实施例1中包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液的制备方法相同,仅是将其中的抗HBsAg单克隆抗体1替换为羊抗FITC多克隆抗体即可。
2、标记FITC的抗HBsAg单克隆抗体1溶液的制备。
3)取1mg抗HBsAg单克隆抗体1用透析液调整到1ml,放入透析液中透析2小时,后加入100μg FITC,室温反应2.5小时。
4)纯化:以0.05M PBS缓冲液做为平衡液,以层析柱纯化水冲洗G-25凝胶柱24小时后,连接平衡液与层析柱平衡30分钟。随后加入1ml标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1中间品,再次加入适量平衡液,连通上下管道,下方连接核酸蛋白检测仪,接收峰值时间段的液体,即为所需要的标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液。
本实施例的检测乙肝病毒表面抗原的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
1)一次加样:将150μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球溶液,40μl标记FITC的抗HBsAg单克隆抗体1溶液,并且同时加入50μl标记ABEI的链霉亲和素和50μl标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2溶液(第一标记物体系),混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的HBsAg和标记FITC的抗HBsAg单克隆抗体1、包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球,及标记生物素的抗HBsAg多克隆抗体2和标记ABEI的链霉亲和素反应,形成复合物。
实验例
采用上述实施例中的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒及其检测方法和常规技术中的试剂盒及采用该试剂盒的一步检测法和两步检测法进行实验对比。
上述各试剂盒的最大检测范围均为1000IU/ml,在市售Maglumi 2000测定仪(产家:深圳市新产业生物医学工程股份有限公司)上进行对比考察试验。
各种方法的设计试验方案参照相关试剂生产厂家的说明书及专利,其中一步法参照索灵的试剂使用说明书,传统两步法参照威海威高公司的专利和雅培的试剂使用说明书,具体各试验方案如下:
1、传统一步法(如图2所示)。
1)加样:将150μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液,加入50μl缓冲液后,加入100μl标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2溶液(第一标记物体系),混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的HBsAg1和包被抗HBsAg单克隆抗体 1的磁性微球3及标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2(4)反应,形成双抗夹心复合物。
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次,去除待测样本中的其他成分2。
3)检测:加入发光底物(NaOH和H2O2),检测发出的相对光强度,通过校准品修正后的工作曲线可根据样本检测光强度计算得出待测样本中的HBsAg浓度。
2、传统两步法(如图3所示)。
1)一次加样:将150μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球溶液,同时加入50μl缓冲液,混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的HBsAg 1和包被抗HBsAg单克隆抗体1的磁性微球3反应,形成复合物。
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次,去除待测样本中的其他成分2。
3)二次加样:将200μl标记ABEI的抗HBsAg多克隆抗体2(4)溶液(第一标记物体系)加入上述沉淀中,混合均匀,37℃温浴20min,充分反应,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次后,加入发光底物(NaOH和H2O2),检测发出的相对光强度,通过校准品修正后的工作曲线可根据样本检测光强度计算得出待测样本中的HBsAg浓度。
3、本发明的检测方法。
如实施例中所示的检测乙肝病毒表面抗原的方法。
按照上述设定的实验方案进行实验,测试样本包括:采购自中国药品生物制品检定所的HBsAg定量参考品和定性参考品(批号:300003-201002),以及从深圳某医院收集到的158例乙肝临床标本(经雅培Architect i2000检测)。测定结果如下各表所示。
表1、国家定量参考品测定结果
从上述结果中可以看出,在5.9-100IU/ml浓度范围内,传统一步法、传统两步法和本发明实施例1-3的方法相比,三种方法没有明显差异。
表2、国家定性参考品测定结果(单位:IU/ml)
从上述结果中可以看出,采用传统一步法做国家定性参考品P3,出现明显的HOOK效应,而传统两步法和本发明实施例1-3的方法则不会。
另外,再对照各亚型结果,可以看出,传统两步法灵敏度偏低,表现为检测弱阳性样本浓度值结果明显偏低,与阴性样本区分度偏小。
表3、158例乙肝临床标本检测数据
注:上述符合率指的是与雅培试剂盒测定结果相符合的比例。
从上述结果中可以看出,本发明实施例方案中,除90号标本均未能与雅培阴阳性对上,其他和雅培比对,结果比较理想。
从对照数据看,可以明显的看出传统一步法存在的缺陷:易产生hook效应(23、24、104、119号标本均应该是超过检测限的高浓度HBsAg标本,但实际 检测结果却远低于检测限);传统两步法存在的缺陷:灵敏度偏低,阴性和弱阳性标本区分度没有一步法高(如25、33、37、38、57、58、66、68、70、76、79、95、98、103、127、129、133、157号标本,其中25和33号阴阳性与雅培没对上)。而本发明实施例1-3的改进的两步法则较好的解决了这些缺陷。
并且,本发明实施例1-3中的试剂盒及检测方法之间并无明显差异,说明在抗体和磁性微球或者抗体和标记示踪物之间的连接中,无论是直接联系方式或是间接搭桥方式,均不影响测定的灵敏度和准确性。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (6)
1.一种检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,其特征在于,包括以下组分:
1)磁性微球体系:包括有直接连接或间接连接抗HBsAg抗体1的磁性微球;
2)第一标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2;
3)第二标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2,或者包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体3;
所述标记示踪物为发光标记物,选自:鲁米诺及其衍生物,异鲁米诺及其衍生物;
所述抗HBsAg抗体1、抗HBsAg抗体2和抗HBsAg抗体3的抗体位点互不相同;
所述抗HBsAg抗体1为单克隆抗体,所述抗HBsAg抗体2为多克隆抗体;
所述第一标记物体系和第二标记物体系中所用的标记示踪物相同。
2.根据权利要求1所述的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,其特征在于,所述第一标记物体系中所用的抗HBsAg抗体,和第二标记物体系中所用的抗HBsAg抗体相同。
3.根据权利要求1所述的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,其特征在于,所述1)磁性微球体系中,所述间接连接抗HBsAg抗体1的磁性微球由包被链霉亲和素的磁性微球,和标记生物素的抗HBsAg抗体1组成;或所述间接连接抗HBsAg抗体1的磁性微球由包被抗FITC抗体的磁性微球,和标记FITC的抗HBsAg抗体1组成。
4.根据权利要求1所述的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,其特征在于,所述2)第一标记物体系中:所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记生物素的抗HBsAg抗体2,和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记FITC的抗HBsAg抗体2,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成。
5.根据权利要求1所述的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,其特征在于,所述3)第二标记物体系中:所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记生物素的抗HBsAg抗体2,和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体2由标记FITC的抗HBsAg抗体2,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;
所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体3由标记生物素的抗HBsAg抗体3,和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的抗HBsAg抗体3由标记FITC的抗HBsAg抗体3,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成。
6.根据权利要求1所述的检测乙肝病毒表面抗原的试剂盒,其特征在于,按照以下步骤使用:
1)一次加样:将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育,形成复合物;
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗;
3)二次加样:将第二标记物体系加入上述沉淀中,混合均匀,温育,使上述沉淀与第二标记物体系反应,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,清洗后,加入发光底物,检测发出的相对光强度,计算得到HBsAg的含量。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113358878A (zh) * | 2021-06-04 | 2021-09-07 | 深圳市辰纳生物科技有限公司 | 一种用于乙肝病毒抗体体外诊断的试剂及方法 |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105842447B (zh) * | 2016-03-18 | 2017-12-15 | 南昌大学 | 一种针对乙肝表面抗原的检测方法 |
CN106257283A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-12-28 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | HBsAg PreS化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 |
CN108344864A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-07-31 | 南京天纵易康生物科技股份有限公司 | 一种基于树枝状高分子双重放大标记的化学发光免疫探针的制备及应用 |
CN108267574A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-07-10 | 南京天纵易康生物科技股份有限公司 | 一种基于树枝状高分子双重放大标记小分子竞争探针的制备及应用 |
CN108344869B (zh) * | 2018-02-05 | 2020-07-03 | 苏州长光华医生物医学工程有限公司 | 一种乙肝表面抗原化学发光免疫检测试剂盒及其应用 |
CN110579597A (zh) * | 2018-05-23 | 2019-12-17 | 科美诊断技术股份有限公司 | 检测14-3-3 eta蛋白的非均相化学发光免疫检测试剂盒及其应用 |
CN110456073B (zh) * | 2019-08-21 | 2023-09-22 | 广东菲鹏生物有限公司 | 双抗原夹心检测抗体的方法及试剂盒 |
CN111089965B (zh) * | 2019-11-18 | 2023-09-22 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种抗原检测试剂盒及其制备方法以及一种抗原检测方法 |
CN112285353A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-01-29 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种提高链霉亲和素-生物素反应体系的化学发光试剂盒抗生物素干扰能力和灵敏度的方法 |
CN112526136B (zh) * | 2020-11-03 | 2023-04-25 | 广州市达瑞生物技术股份有限公司 | 一种联合检测乙型肝炎病毒核心相关抗原的样本预处理液及试剂盒 |
CN113683684B (zh) * | 2021-06-21 | 2023-07-18 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 抗乙肝病毒表面抗原抗体、抗体对、含有其的检测试剂及试剂盒 |
CN113588939A (zh) * | 2021-07-29 | 2021-11-02 | 深圳市爱康试剂有限公司 | 一种肝素结合蛋白测定试剂盒、制备方法及使用方法 |
WO2023057823A1 (en) * | 2021-10-10 | 2023-04-13 | Alipour Elias | Detecting an antigen of a virus using electrochemical analysis |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3162438B2 (ja) * | 1991-09-12 | 2001-04-25 | 住友製薬株式会社 | 高感度特異的抗体測定法 |
CN1888901A (zh) * | 2006-04-21 | 2007-01-03 | 深圳市新产业生物医学工程有限公司 | 磁分离直接化学发光试剂及用该试剂的测试方法 |
CN103630531A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-03-12 | 苏州长光华医生物医学工程有限公司 | 乙型肝炎表面抗原测定试剂盒以及检测方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101968483A (zh) * | 2009-07-27 | 2011-02-09 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 一步半双抗原夹心免疫检测法 |
CN101975859A (zh) * | 2010-09-13 | 2011-02-16 | 北京倍爱康生物技术有限公司 | 一种乙型肝炎病毒表面抗原的磁微粒分离化学发光免疫分析检测方法 |
CN102721802B (zh) * | 2012-07-06 | 2014-11-26 | 深圳市易瑞生物技术有限公司 | 一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法 |
CN104090106A (zh) * | 2014-07-21 | 2014-10-08 | 威海威高生物科技有限公司 | 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定试剂盒及其制备方法 |
-
2015
- 2015-02-10 CN CN201510069151.7A patent/CN104698172B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3162438B2 (ja) * | 1991-09-12 | 2001-04-25 | 住友製薬株式会社 | 高感度特異的抗体測定法 |
CN1888901A (zh) * | 2006-04-21 | 2007-01-03 | 深圳市新产业生物医学工程有限公司 | 磁分离直接化学发光试剂及用该试剂的测试方法 |
CN103630531A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-03-12 | 苏州长光华医生物医学工程有限公司 | 乙型肝炎表面抗原测定试剂盒以及检测方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113358878A (zh) * | 2021-06-04 | 2021-09-07 | 深圳市辰纳生物科技有限公司 | 一种用于乙肝病毒抗体体外诊断的试剂及方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104698172A (zh) | 2015-06-10 |
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