CN104698184B - 检测糖类抗原的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测糖类抗原的试剂盒及其检测方法和应用,属于体外诊断检测技术领域。该试剂盒包括以下组分:1)磁性微球体系:包括有直接连接或间接连接糖类抗原的抗体1的磁性微球;2)第一标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2;3)第二标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2;所述糖类抗原的抗体1和糖类抗原的抗体2的抗体位点互不相同。采用本发明的试剂盒和检测方法来检测糖类抗原,具有灵敏度高和不会产生HOOK效应的优点。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断检测技术领域,特别是涉及一种检测糖类抗原的试剂盒及其检测方法和应用。
背景技术
肿瘤已对人类生存构成了严重的威胁,治疗肿瘤的关键在于及时发现,及早治疗以及治疗后复查。糖类抗原是临床上应用广泛的一类肿瘤标志物,它包括糖蛋白与脂糖,常表现为粘蛋白形式。其抗原决定簇可定位在糖链上或者在蛋白核上。根据糖基表位的不同和抗原表位大小的差异,一般可分为CA50、CA125、CA153、CA199、CA242、CA724,人体本来糖类抗原含量是非常微量的,甚至没有,但是当恶性肿瘤发生时可能会诱发机体分泌高浓度的糖类抗原,因此糖类抗原可为肿瘤的前期筛查、临床诊断、疗效监控、癌细胞转移以及术后复查提供数据依据。
目前糖类抗原的测定原理主要是双抗体夹心法,主要包括酶联免疫分析(ELISA)、放射免疫(RIA)、化学发光免疫分析(CLIA)等。但是ELISA与RIA两种方法存在诸多不足,例如:ELISA存在测定灵敏度低,容易交叉污染等缺点;RIA则存在放射性污染,标记物半衰期短,操作时间长等缺点。但随着标记技术的发展,化学发光免疫分析(CLIA)是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术,化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统。其中,化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成 一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子(hM),利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将标记物质直接标记在抗原或抗体上,经过特异性反应后形成抗原—抗体复合物,然后进行相应标记物的检测方法检测。CLIA的主要优点是灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化等。
但是,常规技术中测定糖类抗原的化学发光免疫体外诊断试剂存在对抗原浓度极高样本测不准或灵敏度不高的问题。
发明内容
基于此,本发明的目的在于克服现有技术的缺陷,提供一种检测糖类抗原的试剂盒及其检测方法,采用该试剂盒和检测方法来检测糖类抗原,既能提高样本检测的灵敏度,又不会测不准抗原浓度极高的样本。
为实现上述目的,本发明采取以下技术方案:
一种检测糖类抗原的试剂盒,包括以下组分:
1)磁性微球体系:包括有直接连接或间接连接糖类抗原的抗体1的磁性微球;
2)第一标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2;
3)第二标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2;
所述糖类抗原的抗体1和糖类抗原的抗体2的抗体位点互不相同。
上述“直接连接”为直接结合的连接,上述“间接连接”为通过生物素和链霉亲和素,或异硫氰酸荧光素和抗异硫氰酸荧光素抗体等能够相互结合的搭 桥物以间接结合的方式连接。上述第一标记物体系和第二标记物体系中,既可以选用相同的标记物体系,也可选用不相同的标记物体系。其中,不相同的标记物体系,既可以是其中标记示踪物的浓度不同,也可以是标记的标记示踪物不同。所述抗体既可以是单克隆抗体,也可以是多克隆抗体,但在第一标记物体系和第二标记物体系中的抗体需为抗体位点相同的同株抗体。
本发明人发现,常规技术中的化学发光免疫糖类抗原体外诊断试剂存在测不准抗原浓度极高的样本,是由于采用的是一步法,即在加入包被抗体磁性微球的同时加入标记标记示踪物的抗体,温育反应结束后形成抗体-抗原-抗体的“三明治”复合物。如样本中抗原浓度极高时会出现明显的HOOK效应,即当样本中待测抗原浓度相当高时,过量抗原分别和包被抗体磁性微球及标记上标记示踪物的抗体结合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量而导致出现HOOK效应。而对于灵敏度不高的问题,则是由于采用了两步法,即在第一步加样中,仅加入包被抗体磁性微球,使抗原充分和包被抗体磁性微球反应结合,清洗后再第二步加样,加入标记上标记示踪物的抗体,形成抗体-抗原-抗体的“三明治”复合物,虽然避免了出现HOOK效应的可能,但是,该两步法的第一步加样反应中,只是样本中的抗原和包被抗体磁性微球反应,没有形成抗体-抗原-抗体结合的“三明治”复合物,因此在清洗过程中会损失掉一定的抗原,造成检测灵敏度的降低。
在上述研究发现的基础上,本发明在上述一步法和两步法的基础上进行了改进,在该试剂盒中设置第一标记物体系和第二标记物体系,使用该试剂盒检测糖类抗原时,首先进行一次加样,将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育反应后清洗,再进行二次加样,再次加入第二标记物体系,彻底形成抗体-抗原-抗体结合的双抗夹心复合物,再进行检测,从而既避免了产生 HOOK效应的问题,又避免了清洗过程中会损失一定抗原,造成灵敏度下降的问题。
适用于本发明的磁性微球也称为磁珠或磁球,可以是本领域中常用的磁性微球。优选的是,本发明使用的磁球,是将纳米级的Fe2O3或Fe3O4磁性粒子和有机高分子材料进行复合,形成具有超顺磁性和极大量蛋白吸附容量的微米级的固相微球,具有在外加磁场作用下可迅速被磁化,在撤走磁场后剩磁为零的属性。其中,所述有机高分子材料的种类没有特别限制,可根据需要进行选择。
本发明所使用的磁性微球应能满足直径为0.1-5μm,磁性微球还可以通过表面改性而带有多种活性功能基团,包括但不限于-OH、-COOH、-NH2。
在其中一个实施例中,所述磁性微球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体,并具有0.1-5μm的粒径,并且,所述磁性微球任选地通过表面改性而带有一种或多种活性功能基团。
在上述技术方案中,磁性微球体系中,磁性微球的工作浓度优选0.1-0.5mg/ml,糖类抗原的抗体1的工作浓度优选25-300μg/L;标记物体系中,第一标记示踪物或第二标记示踪物的工作浓度优选0.625-5μg/L,糖类抗原的抗体2的工作浓度优选2-100μg/L。将各试剂成分的浓度设定在此范围内,既能避免由于浓度过低导致光信号低,影响试剂检测的灵敏度;又能避免浓度过高所造成的成本浪费。可根据具体情况调整。
可以理解的,为了达到定量测定的目的,该试剂盒还可以包括糖类抗原浓度为5-20U/ml的校准品溶液和浓度为200-7000U/ml的校准品溶液。
同样可以理解的,该试剂盒中的各组分均含有BSA(牛血清白蛋白)和防腐剂,BSA的浓度为0.01-0.5g/ml,防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、叠氮钠、亚硝酸钠、Proclin系列中的任一种或两种以上混合物。
在其中一个实施例中,所述第一标记物体系和第二标记物体系中所用的标记示踪物相同。即均为第一标记示踪物或均为第二标记示踪物。采用相同的标记示踪物,其发光效率是一致的,能够具有更好的检测准确性。
在其中一个实施例中,所述糖类抗原为CA50、CA19-9、CA242、CA724、CA153、或CA125。可根据检测目的进行选择。
上述标记示踪物包括以下几种:1、化学发光免疫分析使用的能够直接发光的标记物,如鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺或其衍生物、吖啶酯等;2、化学发光酶免疫分析使用的配合相应底物可以发光的标记物,如碱性磷酸酶或过氧化物酶等。
在其中一个实施例中,所述标记示踪物为发光标记物,选自:金刚烷、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯。优选N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI),与上述发光标记物配合的氧化系统包括H2O2-微过氧化物酶、H2O2-过氧化氢酶、H2O2-乳过氧化物酶、H2O2-次氯血红素、H2O2-氯化血红素、次氯酸盐-CoCl2、过硫酸盐、过氧化钾、高碘酸钠、H2O2-K3Fe(CN)6、黄嘌呤-次黄嘌呤氧化酶、叔丁醇钾中的至少一种。
上述发光标记物是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物,该化合物能够经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子(hM)。
在其中一个实施例中,所述标记示踪物为化学发光催化剂,选自:碱性磷酸酶,过氧化物酶。使用时,配合相应的化学发光底物即可发光被定量检测,所述化学发光底物包括NaOH和H2O2,还包括金刚烷、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺或其衍生物中的至少一种,优选N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI)。
在其中一个实施例中,所述1)磁性微球体系中,所述间接连接糖类抗原的抗体1的磁性微球由包被链霉亲和素的磁性微球,和标记生物素的糖类抗原的抗体1组成。
在其中一个实施例中,所述1)磁性微球体系中,所述间接连接糖类抗原的抗体1的磁性微球由包被抗FITC(异硫氰酸荧光素)抗体的磁性微球,和标记FITC(异硫氰酸荧光素)的糖类抗原的抗体1组成。
在其中一个实施例中,所述2)第一标记物体系和3)第二标记物体系中:所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2由标记生物素的糖类抗原的抗体2,和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2由标记FITC的糖类抗原的抗体2,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成。
上述异硫氰酸荧光素抗体既可以为单克隆抗体,也可以为多克隆抗体。
上述方案丰富了检测所使用的磁性微球体系和标记物体系,可根据不同需求灵活选择。例如可以在磁性微球体系中直接将糖类抗原的抗体1连接磁性微球,也可以通过上述的间接搭桥方式连接糖类抗原的抗体1和磁性微球。同样,可以在标记物体系中将标记示踪物直接连接糖类抗原的抗体2,也可以通过上述的间接搭桥方式连接标记示踪物和糖类抗原的抗体2。并且,上述磁性微球体系和标记物体系中采用何种连接方式(直接连接或间接搭桥连接)并无相互影响或限定,既可在磁性微球体系和标记物体系中同时采用直接连接方式或同时采用间接连接方式,也可磁性微球体系选用直接连接,标记物体系采用间接连接,或者磁性微球体系选用间接连接,标记物体系采用直接连接。
本发明还公开了一种检测糖类抗原的方法,采用上述的试剂盒,包括以下 步骤:
1)一次加样:将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育,形成复合物;
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗;
3)二次加样:将第二标记物体系加入上述沉淀中,混合均匀,温育,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,清洗后,加入发光底物,检测发出的相对光强度,计算得到糖类抗原的含量。
本发明的检测糖类抗原的方法,在普通一步法和两步法的基础上进行了改进,在该试剂盒中设置第一标记物体系和第二标记物体系,使用该试剂盒检测糖类抗原时,首先进行一次加样,将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,使抗原抗体先反应形成“三明治”复合物,温育反应后清洗,该第一步反应的特点在于反应不会损失掉抗原,不会造成灵敏度下降的问题,这是因为所有的抗原均会与抗体反应形成“三明治”复合物。再进行二次加样,再次加入第二标记物体系,彻底形成抗体-抗原-抗体结合的双抗夹心复合物,进行检测,这样能保证所有的抗原均能形成“三明治”复合物;第二步反应的特点是当高值样本糖类抗原浓度过高时还能继续反应形成更加多的“三明治”复合物,从而避免了产生HOOK效应的问题。
本发明还公开了一种上述的检测糖类抗原的试剂盒在化学发光分析仪中的应用。将该试剂盒应用于化学发光分析仪,具有操作规范,无人为引入误差及全自动化的优点。
上述检测糖类抗原试剂盒可通过如下方法制备:
磁性微球的包被:将缓冲液加入磁性微球中,随后加入缓冲液悬浮磁性微 球,再加入包被物,组成反应体系,经反应后再进行纯化,即得;
抗体的标记:将抗体放入透析袋中,置于透析液中进行透析,随后往透析好的溶液中加入标记物,反应后经纯化,即得;
所述抗体为糖类抗原的抗体1或糖类抗原的抗体2。
经标记的抗体的纯化优选采用G-25凝胶柱进行纯化。上述包被磁性微球的反应体系中,还可加入1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐(CMC)等进行包被连接,其浓度可在1mg/mL-30mg/mL范围内,优选10mg/mL。上述透析袋的截留分子量可在10000-20000范围内,优选14000。
在其中一个实施例中,当标记物不直接与抗体连接时,还包括以下步骤:标记物的标记:将链霉亲和素放入透析袋中,置于透析液中进行透析,随后往透析好的溶液中加入标记反应物的活化酯,反应后经纯化,即得。
所述化学发光剂的活化酯可以为ABEI-半琥珀酰胺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(ABEI-hemisuccinimide N-Hydroxysuccinimide)等,仅需满足能与抗体结合即可。
在其中一个实施例中,所述包被物为:糖类抗原的抗体1,抗FITC抗体或链霉亲和素;所述标记反应物为:标记物的活化酯,异硫氰酸荧光素或生物素。上述方案丰富了检测所使用的标记物体系和磁性微球体系,可根据不同需求灵活选择。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明的检测糖类抗原的试剂盒,通过设置第一标记物体系和第二标记物体系,使用该试剂盒检测糖类抗原时,首先进行一次加样,将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育反应后清洗,再进行二次加样,再次加入第二标记物体系,彻底形成抗体-抗原-抗体结合的双抗夹心复合物,再进行检 测,从而既能提高样本检测的灵敏度,又不会对抗原浓度极高的样本测不准。
本发明的一种检测糖类抗原的方法,在两步加样中均加入标记物体系,从而在第一步反应中即形成双抗夹心复合物,避免了清洗过程中损失抗原的问题,因为所有的抗原均会与抗体反应形成“三明治”复合物,这样就能保证低值样本的检测灵敏度;并且在第二步反应中继续加入标记物体系,如样本中抗原的含量极高,此时磁性微球表面还存在未与标记物体系结合的抗原,则在第二步反应中和新加入的标记物体系充分反应结合,使样本中与磁性微球体系结合的抗原都能形成双抗夹心复合物,避免了产生HOOK效应。该方法具有灵敏度高和不会产生HOOK效应的优点。
附图说明
图1为本发明实施例1中检测糖类抗原的检测方法原理示意图;
图2为对比例1中检测糖类抗原的检测方法原理示意图;
图3为对比例2中检测糖类抗原的检测方法原理示意图;
其中:1.待测样本中的CA19-9;2.待测样本中的其他成分;3.包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球;4.标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2。
具体实施方式
以下结合实施例和附图,以糖类抗原CA19-9为例,对本发明做进一步的说明,但并不对本发明造成任何限制。
以下实施例中:
CA19-9,来源:美国Meridian公司。
抗CA19-9单克隆抗体1,来源:美国Meridian公司。
抗CA19-9单克隆抗体2,来源:美国Meridian公司。
羊抗FITC多克隆抗体,来源:美国Microfarm公司。
磁性微球、ABEI:为深圳新产业生物医学股份有限公司生产。
FITC:购自美国Sigma公司。
生物素、链霉亲和素:均购自美国Biosources公司。
实施例1
一种检测糖类抗原(CA19-9)的试剂盒,包括以下组分:
1)磁性微球体系:包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液。
其中,磁性微球的工作浓度:0.2mg/ml,抗CA19-9单克隆抗体1的工作浓度:50μg/L。
2)第一标记物体系:标记ABEI(N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺)的抗CA19-9单克隆抗体2溶液。
其中,ABEI的工作浓度:1μg/L,抗CA19-9单克隆抗体2的工作浓度:50μg/L。
3)第二标记物体系:标记ABEI(N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺)的抗CA19-9单克隆抗体2溶液。
其中,ABEI的工作浓度:1μg/L,抗CA19-9单克隆抗体2的工作浓度:50μg/L。
4)校准品溶液:CA19-9浓度为8U/ml的低点校准品溶液和浓度为300U/ml的高点校准品溶液。
上述第一标记物体系和第二标记物体系是标记示踪物类型相同,浓度相同的标记物体系。
上述各组分均含有BSA(牛血清白蛋白)和防腐剂,BSA的浓度为0.1g/ml,防腐剂主要成分为NaN3,浓度为0.2g/ml。
本实施例的检测CA19-9的试剂盒的制备方法中,除以下试剂外,其余均按照常规方法制备。
一、磁性微球体系的制备(包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液)。
1)配制缓冲液:
称取2.55g三水合乙酸钠用4500ml纯化水溶解后再加入14ml乙酸混匀后,定容至5000ml,即得pH为3.6的醋酸缓冲液。
2)磁性微球连接(磁性微球连接CMC法):
往磁性微球中加入5倍于包被体积的上述pH3.6醋酸缓冲液悬浮,其中磁性微球浓度为20mg/mL,再加入浓度为10mg/ml的CMC(1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐),按1mg磁性微球加入12μg纯化的抗CA19-9单克隆抗体1,组成反应体系。
将上述反应体系放入恒温震荡水浴箱中37℃反应24小时。
3)磁性微球的清洗:
磁珠清洗液的配制:0.05M PH7.4PBS缓冲液,称量BSA自溶,使BSA浓度为0.5g/ml,即为磁珠清洗液。
清洗:将反应好的反应体系倒入烧杯中,然后置于磁铁上沉淀后,倒掉上清,加入5倍体积的磁珠清洗液搅拌清洗,然后放置在磁铁上,待上清液清亮后倒掉上清液。
4)磁性微球的悬浮:
清洗完毕后,加入包被体积的磁珠悬浮液,悬浮浓度为20mg/ml,即得到包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液。
二、标记物体系的制备。
1)透析液的配制:在5000ml烧杯中加入Na2CO314.31g,NaHCO326.46g,加水定容至4500ml,即得0.1mol/L pH 9.5的碳酸缓冲液。上述配制好的透析液置于磁力搅拌器上备用。
2)选用截留量为14000的透析袋,量取合适的尺寸,
取1mg抗CA19-9单克隆抗体2用透析液调整到1ml,放入透析液中,室温搅拌透析2小时,将透析好的溶液加入300μg ABEI-半琥珀酰胺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(ABEI-hemisuccinimide N-Hydroxysuccinimide),37℃反应2小时。
3)以G-25凝胶柱纯化上述反应得到的标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2。
4)在纯化后的标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液中加入等体积的含5g/ml的BSA保护液,即得。
采用本实施例的试剂盒检测CA19-9的方法,如图1所示,包括以下步骤:
1)一次加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液,同时加入50μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液(第一标记物体系),混匀,37℃温浴5min,使待测样本中的CA19-9(1)和包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球3及标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2(4)反应,形成复合物。
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次,去除待测样本中的其他成分2。
3)二次加样:将100μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液(第二标记物体系)加入上述沉淀中,混合均匀,37℃温浴5min,充分反应,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次后,加入发光底物(NaOH和H2O2),检测发出的相对光强度,通过校准品修正后的工作曲线可根据样本检测光强度计算得出待测样本中的CA19-9浓度。
实施例2
一种检测CA19-9的试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同之处在于:
1)磁性微球体系:
包被链霉亲和素(SA)的磁性微球溶液,其中:磁性微球的工作浓度:0.2mg/ml,链霉亲和素的工作浓度:5μg/L。
标记生物素(Biotin)的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,其中:抗CA19-9单克隆抗体1的工作浓度:50μg/L,生物素的工作浓度:5μg/L。
本实施例的检测CA19-9的试剂盒的制备方法,参照实施例1中的制备方法,除以下步骤外,其余均与实施例1中的方法相同。
一、磁性微球体系的制备。
1、包被链霉亲和素(SA)的磁性微球溶液的制备。
2)磁性微球连接(磁性微球连接CMC法):
和上述实施例1中包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液的制备方法相同,仅是将其中的抗CA19-9单克隆抗体1替换为链霉亲和素即可。
2、标记生物素(Biotin)的抗CA19-9单克隆抗体1溶液的制备。
3)取1mg抗CA19-9单克隆抗体1用透析液调整到1ml,放入透析液中透析2小时。将活化的生物素溶于DMF(二甲基甲酰胺)中,按照生物素与抗CA19-9 单克隆抗体1的摩尔比为20:1的比例将二者混合,37℃反应2h;再将反应后的液体用0.1mol/L PBS于4℃透析24小时,即制成生物素标记的抗CA19-9单克隆抗体1溶液。
本实施例的检测CA19-9的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
1)一次加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被链霉亲和素的磁性微球溶液,50μl标记生物素的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,并且同时加入50μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液(第一标记物体系),混匀,37℃温浴5min,使待测样本中的CA19-9和标记生物素的抗CA19-9单克隆抗体1、包被链霉亲和素的磁性微球,及标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2反应,形成复合物。
实施例3
一种检测CA19-9的试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同之处在于:
1)磁性微球体系:
包被羊抗FITC(异硫氰酸荧光素)多克隆抗体的磁性微球溶液,其中:磁性微球的工作浓度:0.2mg/ml,羊抗FITC多克隆抗体的工作浓度:5μg/L。
标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,其中:抗CA19-9单克隆抗体1的工作浓度:50μg/L,FITC的工作浓度:5μg/L。
本实施例的检测CA19-9的试剂盒的制备方法,参照实施例1中的制备方法,除以下步骤外,其余均与实施例1中的方法相同。
一、磁性微球体系的制备。
1、包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球溶液的制备。
2)磁性微球连接(磁性微球连接CMC法):
和上述实施例1中包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液的制备方法相同,仅是将其中的抗CA19-9单克隆抗体1替换为羊抗FITC多克隆抗体即可。
2、标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液的制备。
3)取1mg抗CA19-9单克隆抗体1用透析液调整到1ml,放入透析液中透析2小时,后加入100μg FITC,室温反应2.5小时。
4)纯化:以0.05M PH7.4PBS缓冲液做为平衡液,以层析柱纯化水冲洗G-25凝胶柱24小时后,连接平衡液与层析柱平衡30分钟。随后加入1ml标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1中间品,再次加入适量平衡液,连通上下管道,下方连接核酸蛋白检测仪,接收峰值时间段的液体,即为所需要的标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液。
本实施例的检测CA19-9的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
1)一次加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球溶液,50μl标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,并且同时加入50μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液(第一标记物体系),混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的CA19-9和标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1、包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球,及标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2,形成复合物。
对比例1
一种检测CA19-9的试剂盒,包括以下组分:
1)磁性微球体系:包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液。
其中,磁性微球的工作浓度:0.2mg/ml,抗CA19-9单克隆抗体1的工作浓度:50μg/L。
2)标记物体系:标记ABEI(N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺)的抗CA19-9单克隆抗体2溶液。
其中,ABEI的工作浓度:1μg/L,抗CA19-9单克隆抗体2的工作浓度:50μg/L。
3)校准品溶液:CA19-9浓度为8U/ml的低点校准品溶液和浓度为300U/ml的高点校准品溶液。
采用本对比例的试剂盒检测CA19-9的方法,如图2所示,包括以下步骤:
1)加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液,同时加入150μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液,混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的CA19-9(1)和包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球3及标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2(4)反应,形成双抗夹心复合物。
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次,去除待测样本中的其他成分2。
3)检测:加入发光底物(NaOH和H2O2),检测发出的相对光强度,通过校准品修正后的工作曲线可根据样本检测光强度计算得出待测样本中的糖类抗原浓度。
对比例2
一种检测CA19-9的试剂盒,与对比例1中的试剂盒组分相同。
采用本对比例的试剂盒检测CA19-9的方法,如图3所示,包括以下步骤:
1)一次加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球溶液,混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的CA19-9(1)和包被抗CA19-9单克隆抗体1的磁性微球3反应,形成复合物。
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次,去除待测样本中的其他成分2。
3)二次加样:将150μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2(4)溶液加入上述沉淀中,混合均匀,37℃温浴5min,充分反应,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗3次后,加入发光底物(NaOH和H2O2),检测发出的相对光强度,通过校准品修正后的工作曲线可根据样本检测光强度计算得出待测样本中的糖类抗原浓度。
对比例3
一种检测CA19-9的试剂盒,与对比例1的检测试剂盒基本相同,不同之处在于:
1)磁性微球体系:
包被链霉亲和素(SA)的磁性微球溶液,其中:磁性微球的工作浓度:0.2mg/ml,链霉亲和素的工作浓度:5μg/L。
标记生物素(Biotin)的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,其中:抗CA19-9单克隆抗体1的工作浓度:50μg/L,生物素的工作浓度:5μg/L。
采用本对比例的试剂盒检测CA19-9的方法,参照对比例1中的方法,除以 下步骤外,其余均与对比例1中的方法相同。
1)加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被链霉亲和素的磁性微球溶液,50μl标记生物素的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,并且同时加入150μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液,混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的CA19-9和标记生物素的抗CA19-9单克隆抗体1、包被链霉亲和素的磁性微球,及标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2反应,形成双抗夹心复合物。
对比例4
一种检测CA19-9的试剂盒,与对比例3中的试剂盒组分相同。
采用本对比例的试剂盒检测CA19-9的方法,参照对比例2中的方法,除以下步骤外,其余均与对比例2中的方法相同。
1)一次加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被链霉亲和素的磁性微球溶液,50μl标记生物素的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,混匀,37℃温浴5min,使待测样本中的CA19-9和包被链霉亲和素的磁性微球、标记生物素的抗CA19-9单克隆抗体1反应,形成复合物。
3)二次加样:将150μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液加入上述沉淀中,混合均匀,37℃温浴5min,充分反应,形成双抗夹心复合物。
对比例5
一种检测CA19-9的试剂盒,与对比例1的检测试剂盒基本相同,不同之处在于:
1)磁性微球体系:
包被羊抗FITC(异硫氰酸荧光素)多克隆抗体的磁性微球溶液,其中:磁性微球的工作浓度:0.2mg/ml,羊抗FITC多克隆抗体的工作浓度:5μg/L。
标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,其中:抗CA19-9单克隆抗体1的工作浓度:50μg/L,FITC的工作浓度:5μg/L。
采用本对比例的试剂盒检测CA19-9的方法,参照对比例1中的方法,除以下步骤外,其余均与对比例1中的方法相同。
1)加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球溶液,50μl标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,并且同时加入150μl标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2溶液,混匀,37℃温浴10min,使待测样本中的CA19-9和标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1、包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球,及标记ABEI的抗CA19-9单克隆抗体2反应,形成双抗夹心复合物。
对比例6
一种检测CA19-9的试剂盒,与对比例5中的试剂盒组分相同。
采用本对比例的试剂盒检测CA19-9的方法,参照对比例2中的方法,除以下步骤外,其余均与对比例2中的方法相同。
1)一次加样:将40μl待测样本、高、低浓度校准品分别加入到反应杯中,然后再加入20μl包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球溶液,50μl标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1溶液,混匀,37℃温浴5min,使待测样本中的CA19-9和包被羊抗FITC多克隆抗体的磁性微球、标记FITC的抗CA19-9单克隆抗体1反应,形成复合物。
3)二次加样:将150μl标记ABEI的抗CA19-9克隆抗体2溶液加入上述沉淀中,混合均匀,37℃温浴5min,充分反应,形成双抗夹心复合物。
实验例
采用上述实施例和对比例中的检测糖类抗原的试剂盒及其检测方法进行实验对比。
功能灵敏度又称临床灵敏度(clinical sensitivity),是基于低浓度的基础上用于区分从有到无的分析能力,该值的确定是通过标准品作梯度稀释,采用同一台仪器,同一批号试剂,同一标准曲线,每天1次,每次3遍进行测定,共测3周以上时间的数据,根据批间变异系数(CV)≤20%时的最大稀释管浓度作为功能灵敏度。
1、试验方法:
(1)标准样品的配制:配制浓度值分别为1U/ml、2U/ml、3U/ml、5U/ml、10U/ml、15U/ml、20U/ml、30U/ml的CA19-9标准品做功能灵敏度实验,分别编号为1—8号。
配制浓度值分别为4000U/ml、20000U/ml、60000U/ml、100000U/ml、200000U/ml、500000U/ml、1000000U/ml、2000000U/ml的CA19-9标准品做高浓度抗原样本实验,分别编号为A-H。
(1)检测方法:在深圳市新产业生物医学工程股份有限公司全自动化学发光分析仪Maglumi 2000(仪器编号:20000000003)上,分别采用实施例1-3、对比例1-6的试剂盒及其检测方法测定这些标准样品,测定结果如下表所示。
表1.测定结果一(单位:U/ml)
表2.测定结果二(单位:U/ml)
表3.测定结果三(单位:U/ml)
从上述结果中可以看出,对比例1,对比例3和对比例5的功能灵敏度高于对比例2,对比例4和对比例6,但是当CA19-9抗原浓度达到500000U/ml时,对比例1,对比例3和对比例5(简称为一步法)的检测结果<1000U/ml,对比例2,对比例4和对比例6(简称为两步法)的检测结果>1000U/ml。随着CA19-9抗原的浓度继续升高,两步法的检测结果仍然>1000U/ml,而一步法的检测结果越来越低,说明一步法的检测结果存在HOOK效应。而本发明实施例1-3中的试剂盒和检测方法中并不存在HOOK效应,即使抗原浓度高达2000000U/ml,也能给出>1000U/ml的检测结果。
并且,通过表1、2、3的结果表明,本发明实施例1-3中的试剂盒和检测方法的检测结果不会因为是两步法加样而出现功能灵敏度比一步法低的情况,反而会略高,这是因为实施例1-3检测方法中的两步反应过程都会形成“三明治”复合物的结果,使其形成更加多的“三明治”复合物结构,这样就会保证检测具有较高的功能灵敏度。
通过表1、2、3的结果,我们还可以知道,在磁性微球体系中,无论是磁性微球直接包被抗CA19-9单克隆抗体1,还是通过链霉素亲和素和生物素、以及FITC和羊抗FITC多克隆抗体之间的搭桥连接,其结果并无明显差异,说明连接方式不会影响测定的灵敏度和准确性,因此磁性微球体系和标记物体系中具体的连接方式是可根据实际情况进行调整的。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域 的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (6)
1.一种检测糖类抗原的试剂盒,其特征在于,包括以下组分:
1)磁性微球体系:包括有直接连接或间接连接糖类抗原的抗体1的磁性微球;
2)第一标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2;
3)第二标记物体系:包括有直接连接或间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2;
所述标记示踪物为发光标记物,选自:鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯;
所述糖类抗原的抗体1和糖类抗原的抗体2的抗体位点互不相同;
所述第一标记物体系和第二标记物体系中所用的标记示踪物相同。
2.根据权利要求1所述的检测糖类抗原的试剂盒,其特征在于,所述糖类抗原为CA50、CA19-9、CA242、CA72-4、CA15-3、或CA125。
3.根据权利要求1所述的检测糖类抗原的试剂盒,其特征在于,所述1)磁性微球体系中,所述间接连接糖类抗原的抗体1的磁性微球由包被链霉亲和素的磁性微球,和标记生物素的糖类抗原的抗体1组成。
4.根据权利要求1所述的检测糖类抗原的试剂盒,其特征在于,所述1)磁性微球体系中,所述间接连接糖类抗原的抗体1的磁性微球由包被抗FITC抗体的磁性微球,和标记FITC的糖类抗原的抗体1组成。
5.根据权利要求1所述的检测糖类抗原的试剂盒,其特征在于,所述2)第一标记物体系和3)第二标记物体系中:所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2由标记生物素的糖类抗原的抗体2,和标记链霉亲和素的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成;或所述间接连接第一标记示踪物或第二标记示踪物的糖类抗原的抗体2由标记FITC的糖类抗原的抗体2,和标记抗FITC抗体的第一标记示踪物或第二标记示踪物组成。
6.根据权利要求1所述的检测糖类抗原的试剂盒,其特征在于,按照以下步骤使用:
1)一次加样:将待测样本与第一标记物体系和磁性微球体系混合,温育,形成复合物;
2)清洗:外加磁场将上述反应产物沉淀,去除上清液,并以缓冲液清洗;
3)二次加样:将第二标记物体系加入上述沉淀中,混合均匀,温育,形成双抗夹心复合物;
4)检测:外加磁场将上述双抗夹心复合物沉淀,去除上清液,清洗后,加入发光底物,检测发出的相对光强度,计算得到糖类抗原的含量。
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CN108959839A (zh) * | 2017-05-26 | 2018-12-07 | 长沙金域医学检验所有限公司 | 一种生化发光功能灵敏度评估方法 |
CN109541207A (zh) * | 2017-09-21 | 2019-03-29 | 苏州新波生物技术有限公司 | 一种检测ca72-4的诊断试剂盒及其制备方法 |
CN109541208A (zh) * | 2017-09-21 | 2019-03-29 | 苏州新波生物技术有限公司 | 一种检测ca24-2的诊断试剂盒及其制备方法 |
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3162438B2 (ja) * | 1991-09-12 | 2001-04-25 | 住友製薬株式会社 | 高感度特異的抗体測定法 |
CN1888901A (zh) * | 2006-04-21 | 2007-01-03 | 深圳市新产业生物医学工程有限公司 | 磁分离直接化学发光试剂及用该试剂的测试方法 |
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Family Cites Families (2)
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---|---|---|---|---|
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Patent Citations (3)
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---|---|---|---|---|
JP3162438B2 (ja) * | 1991-09-12 | 2001-04-25 | 住友製薬株式会社 | 高感度特異的抗体測定法 |
CN1888901A (zh) * | 2006-04-21 | 2007-01-03 | 深圳市新产业生物医学工程有限公司 | 磁分离直接化学发光试剂及用该试剂的测试方法 |
CN101324579A (zh) * | 2007-06-13 | 2008-12-17 | 清华大学 | 一种检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒及其使用方法 |
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