CN104678009A - 一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其包括样品的预处理、液相色谱分析和外标法定量，其中色谱条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，流速0.8~1.2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90%；检测波长237~247nm；本发明的方法的专属性强，精密度好，可以快速准确地测定除虫脲中的对氯苯胺含量。

Description

一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法

技术领域

本发明涉及检测农药中杂质含量的方法，具体涉及一种使用高效液相色谱测定除虫脲中对氯苯胺含量的分析方法。

背景技术

除虫脲又名敌灭灵，灭幼脲1号，属苯甲酸基苯基脲类除虫剂，是20世纪70年代发现的昆虫生长调节剂。杀虫机理是通过抑制昆虫的几丁质合成酶的合成，从而抑制幼虫、卵、蛹表皮几丁质的合成，使昆虫不能正常蜕皮虫体畸形而死亡，对甲壳类和家蚕有较大的毒性，对人畜和环境中其他生物安全，属低毒无公害农药。主要作用方式是胃毒和触杀。

在除虫脲的生产过程中需要使用对氯苯胺，除虫脲产品中往往也含有极微量的对氯苯胺，而对氯苯胺能经无损的皮肤吸收，引发人高铁血红蛋白血症，并对眼有刺激作用。IARC对其致癌性评论为：对人可能致癌。因此，除虫脲产品中含有多少对氯苯胺杂质以及如何在除虫脲中精确检测对氯苯胺的含量越来越受到关注。

除虫脲以及其中的主要杂质由于沸点高，在气相色谱中大部分不出峰，用气相色谱测定，分离的难度比较小，用气相色谱法内标法测定已有报道，但由于除虫脲可能会在气化室部分分解生成对氯苯胺，从而造成对氯苯胺的测定结果偏高。

中国专利CN102323342B公开了一种利用离子液体萃取，液相色谱分离测定水样中的对氯苯胺、1-萘胺和4-氨基联苯，通过萃取富集后，进行液相色谱等度洗脱测定。

液相色谱显然可以克服高温气化时造成的除虫脲分解而影响对氯苯胺的检测。但是对于除虫脲来说，其主要成分除虫脲及合成除虫脲时产生的绝大多数杂质在液相色谱中都会出峰，而且峰面积较对氯苯胺杂质来说要大很多，对对氯苯胺的含量检测来说影响很大。

另外，对氯苯胺与除虫脲及其他杂质的溶解性质相似，不能利用溶剂萃取等技术提取浓缩以减少除虫脲及其他杂质的影响，因此从复杂的基质中测定极微量的对氯苯胺组分，分离是技术瓶颈，其难点在于创建合适的分离方法和液相色谱条件，以实现对氯苯胺与其他组分的分离进而定量测定。

发明内容

本发明的目的在于建立一种使用高效液相色谱测定除虫脲中对氯苯胺含量的分析方法，以便能够准确测定除虫脲中对氯苯胺的含量。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其包括以下步骤：

1）用乙腈溶解对氯苯胺标准品，配制对照品溶液；

2）称取除虫脲原药，加入二甲基甲酰胺，经超声波溶解后，再加入乙腈定容，混合均匀，静置5分钟，取上清液经0.45μm滤膜过滤后得到试样处理液；

3）使用高效液相色谱仪分别测得对照品溶液和试样处理液的色谱峰面积，色谱条件为：色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为水，流动相B为乙腈，流速为0.8~1.2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90%，柱温20~30℃，检测波长237~247nm，进样量5~20μL，检测器为二级管阵列检测器；

4）根据对照品溶液的浓度及其色谱峰面积，试样处理液的色谱峰面积及除虫脲原药质量，用外标法计算除虫脲原药中的对氯苯胺的含量。

进一步的，所述步骤3）中的柱温为25℃。

进一步的，所述步骤3）中的检测波长为242nm。

进一步的，所述步骤3）中的进样量为20μL。

进一步的，所述步骤3）中的流速为1.0mL/min。

本发明有以下优点：

1、采用液相色谱在室温（20~30℃）下测定，避免除虫脲在高温下分解产生对氯苯胺，使得测定结果偏高；

2、试样用二甲基甲酰胺（DMF）完全溶解后，加入乙腈稀释，乙腈对除虫脲的溶解度小，部分除虫脲析出，而其中的杂质留在溶液中，这样可以缓解除虫脲浓度太大对色谱柱的影响；

3、本发明的检测方法的平均回收率是110.9%，满足当杂质含量小于0.1%时可接受的回收率范围为75%~125%的要求；同一个样品6次平行测定精密度（RSD）是2.72%，满足含量小于0.1%时可接受的RSD为3.3%的要求；

4、本发明的检测方法可对除虫脲基质中极微量的对氯苯胺组分进行测定，其检测限和定量限分别为0.049 mg/L、0.015 mg/L。

附图说明

图1 对氯苯胺光谱图；

图2 实施例2条件下，对氯苯胺标准溶液色谱图；

图3 实施例2条件下，对氯苯胺试样溶液色谱图；

图4 对比例1条件下，对氯苯胺标准溶液色谱图；

图5 对比例1条件下，对氯苯胺试样溶液色谱图；

图6 对比例2条件下，对氯苯胺标准溶液色谱图；

图7 对比例2条件下，对氯苯胺试样溶液色谱图；

图8 对氯苯胺标准曲线。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明。本发明保护范围不限于实施例，本领域技术人员在权利要求限定的范围内做出任何改动也属于本发明保护的范围。

实施例中，所用到的仪器和药品有：

高效液相色谱仪：安捷伦1100系列高效液相色谱仪，配有DAD（二极管阵列）检测器，自动进样器，安捷伦工作站。

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的不锈钢色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。

二甲基甲酰胺（DMF）：分析纯；乙腈：色谱纯；水：娃哈哈纯净水；对氯苯胺：分析纯；除虫脲试样：河北威远生化农药有限公司。

实施例1

以对氯苯胺标准溶液（300mg/L）进行液相色谱检测，使用二极管阵列（DAD）检测器测定光谱图，如图1所示，对氯苯胺在237nm ~247nm处有较强吸收，特别是在242nm有最大吸收，此波长处也无干扰，因此将242nm确定为检测波长。

实施例2

（1）标样溶液的制备：

标准母液：称取对氯苯胺标准品0.03g（精确至0.0002g）于100mL容量瓶中用乙腈溶解并稀释至刻度摇匀。（对氯苯胺浓度300 mg/L）

标准溶液1：准确移取1.0mL上述标准溶液母液于100mL容量瓶中用乙腈稀释至刻度摇匀。（对氯苯胺浓度3 mg/L）

标准溶液2：准确吸取1.0mL标准溶液1于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度摇匀。（对氯苯胺浓度0.3 mg/L）

（2）试样溶液的制备

称取除虫脲原药约0.3g（精确至0.0002g）于10mL容量瓶中，加入少量二甲基甲酰胺，超声溶解后，用乙腈稀释至刻度摇匀，静置5min。取上清液经0.45μm滤膜过滤。

（3）分别取标准溶液1和试样溶液使用高效液相色谱仪分别测得色谱峰面积。

液相色谱分析：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为水，流动相B为乙腈，流速0.8~1.2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90%；柱温20～30℃；检测波长242nm；进样量5~20μL。流动相梯度洗脱程序见表1。

表1

（4）试样中对氯苯胺含量X（mg/kg）按下式计算：

式中：

A ₁—标样溶液中，对氯苯胺峰面积；

A ₂—试样溶液中，对氯苯胺峰面积；

m ₁—标样的质量，g；

m ₂—试样的质量，g；

P—对氯苯胺标准品的含量，%；

1000—标样的稀释倍数；

1000000—系数（对应于mg/kg）。

实施例3

依照实施例2中的检测条件，待仪器稳定后进一针空白溶液，截取一段时间的基线噪音N _d，然后将对氯苯胺标准溶液2（0.3 mg/L）进行色谱分析，记录峰响应信号H，3倍噪音为检测限、10倍噪音为定量限，得到检测限为0.015mg/L、定量限为0.049mg/L。

实施例4~9

取不同批次的除虫脲试样，依据实施例2所述方法进行检测，测定结果如表2所示。

表2

实施例10

取实施例9的除虫脲试样，制备6份试样溶液，依据实施例2所述方法进行检测，计算对氯苯胺含量，计算结果的精密度（RSD），结果如表3所示。

表3

按照SANCO/3030/99 rev.4 Technical Material and Preparations:Guidance for generating and reporting methods of analysis in support of Pre- and post-registration data requirments for Annex Ⅱ(Part A,Section 4)and AnnexⅢ(Part A,Section 5) of Directive 91/414中的.Appendix 2之规定，当含量小于0.1%，可接受的RSD为3.3%。

实施例11

向实施例9已测定对氯苯胺含量的除虫脲试样（批号20130302009）中添加对氯苯胺标准品，依照实施例2所述方法进行测定，计算回收率，结果见表4。

表4

按照SANCO/3030/99 rev.4 Technical Material and Preparations:Guidance for generating and reporting methods of analysis in support of Pre- and post-registration data requirments for Annex Ⅱ(Part A,Section 4)and AnnexⅢ(Part A,Section 5) of Directive 91/414中的.Appendix 2之规定，当杂质含量小于0.1%时，平均回收率应在75%~125%。

实施例12

对实施例5（批号20130402003）和实施例7（批号20130404008）除虫脲试样依照实施例2中的步骤（2）制得溶液的稳定性进行测定，分别测定初始、室温20℃～30℃放置16h和35℃～40℃放置16h后对对氯苯胺含量进行测定，结果如表5。

表5

经测定发现本发明方法制备的待测溶液在室温放置16h后样品溶液依旧稳定，满足测定需求。而在35℃～40℃放置16h的样品溶液测定结果明显增高，从另一角度说明温度高确实会造成除虫脲分解出对氯苯胺。

实施例13

为确定本发明方法测定的线性范围，制备不同浓度的对氯苯胺标准品溶液，进行液相色谱测定。结果见表6。

表6

根据峰面积y由线性回归方程计算以mg/L计的对氯苯胺浓度x，如图8所示，在0.06194 mg/L ~2.47744 mg/L范围内，线性回归方程为y＝76.48605x－0.53512，R=0.9997。

综上所述，本方法的专属性强，灵敏度高，精密度好，准确度高，在0.06194 mg/L ~2.47744 mg/L范围内线性良好，符合微量杂质测定的要求，能快速准确测定出除虫脲中对氯苯胺的含量。

对比例

通过调整不同时间流动相的比例和有机相的品种与本发明方法进行比较，其余条件参见实施例2。具体方案见表7，时间-梯度洗脱程序见表8。

表7

表8

使用对比例1所述色谱条件，由图4所示，对氯苯胺标样溶液的洗脱时间为7.200min，而图5中，杂质峰出现在6.958min和7.418min，其分离效果不好，对氯苯胺标样峰与其他杂质峰分不开；同样的，由图6和图7所示，使用对比例2所述色谱条件，其分离效果也不好，对氯苯胺峰与其他杂质峰依旧无法分开；相比之下，本发明的实施例2所得到的图2和图3表明，在对氯苯胺的洗脱时间附近无杂质峰，其分离效果好，对氯苯胺峰与其他杂质峰可完全分开。

根据上述的实施例对本发明作了详细描述。需说明的是，以上的实施例仅仅为了举例说明发明而已。在不偏离本发明的精神和实质的前提下，本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于其包括以下步骤：

1）用乙腈溶解对氯苯胺标准品，配制对照品溶液；

2）称取除虫脲原药，加入二甲基甲酰胺，经超声波溶解后，再加入乙腈定容，混合均匀，静置5分钟，取上清液经0.45μm滤膜过滤后得到试样处理液；

3）使用高效液相色谱仪分别测得对照品溶液和试样处理液的色谱峰面积，色谱条件为：色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为水，流动相B为乙腈，流速为0.8~1.2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90%，柱温20~30℃，检测波长237~247nm，进样量5~20μL，检测器为二级管阵列检测器；

4）根据对照品溶液的浓度及其色谱峰面积，试样处理液的色谱峰面积及除虫脲原药质量，用外标法计算除虫脲原药中的对氯苯胺的含量。

2.根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步骤3）中的柱温为25℃。

3.根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步骤3）中的检测波长为242nm。

4.根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步骤3）中的进样量为20μL。

5.根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步骤3）中的流速为1.0mL/min。