CN106248831A - 一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法 - Google Patents

一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106248831A
CN106248831A CN201610784089.4A CN201610784089A CN106248831A CN 106248831 A CN106248831 A CN 106248831A CN 201610784089 A CN201610784089 A CN 201610784089A CN 106248831 A CN106248831 A CN 106248831A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tulathromycin
content
sample
performance liquid
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610784089.4A
Other languages
English (en)
Inventor
张立会
程雪娇
王建
余贵菊
焦晓军
姜淋洁
崔志刚
王猛
杨雪
于小婷
甄盼盼
王宇鹏
杜宁宁
李丽琴
季昆
王勇
朱士江
范庆增
李玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIANJIN ZHONGSHENG TIAOZHAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
TIANJIN ZHONGSHENG TIAOZHAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANJIN ZHONGSHENG TIAOZHAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd filed Critical TIANJIN ZHONGSHENG TIAOZHAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201610784089.4A priority Critical patent/CN106248831A/zh
Publication of CN106248831A publication Critical patent/CN106248831A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明提供了一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，其特征在于：该方法采用岛津LC‑20AT高效液相色谱仪，采用紫外检测器，包括如下步骤：(1)色谱条件：色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱；流动相为乙腈与0.01％的磷酸溶液的混合物、乙腈与水的混合物或甲醇与水的混合物中的一种。进样量：15μl。本发明所述的高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法经过精密度试验、线性关系试验和加样回收试验等对方法进行了验证，结果表明该方法准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确性高。

Description

一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法
技术领域
本发明属于畜牧业领域，尤其是涉及一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法。
背景技术
现在畜牧业规模化已经是普遍现象。在猪、牛的规模化养殖中，呼吸道感染是难控制的疫病之一，并且对畜牧业生产危害严重。泰拉霉素在畜牧业中的应用，能够有效的降低和避免由呼吸道感染导致的经济损失。
泰拉霉素是广谱抗菌药，其具有吸收迅速、生物利用度高、低残留、半衰期长、药效持久、胃肠外单次给药即能提供全程治疗等特点，主要用于放线杆菌、支原体、巴氏杆菌、副嗜血杆菌引起的猪、牛的呼吸系统疾病。泰拉霉素的使用减少了病原传播，便于规模化管理。
泰拉霉素在畜牧业生产中发挥着重要的作用。为了保障畜牧养殖业和社会食品安全，建立简便、准确、可靠的泰拉霉素质量控制方法十分必要。
泰拉霉素，别名土拉霉素，英文名：Tulathromycin，为动物专用的大环内酯类半合成抗生素，属三胺类广谱抗生素，CAS号为217500-96-4，分子式为C41H79N3O12，分子量806，结构式如图1所示。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在提出一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确性高。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，该方法采用岛津LC-20AT高效液相色谱仪，采用紫外检测器，检测波长为210nm，进样量为15μl，包括如下步骤：
(1)色谱条件：色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱；流动相为乙腈与0.01％的磷酸溶液的混合物、乙腈与水的混合物或甲醇与水的混合物中的一种，其中乙腈与0.01％的磷酸溶液的体积比为60-90：10-40，乙腈与水的体积比为60-90：10-40，甲醇与水的体积比为60-90：10-40；流速为0.8-1.2ml/min，柱温为20-40℃；
(2)标准曲线绘制：称量对照品适量，置于容量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，作为泰拉霉素标准溶液储备液，将上述标准溶液储备液逐级稀释制成泰拉霉素含量为50、100、200、500、800、1000μg/ml的溶液，分别按所述的步骤(1)的色谱条件测定，分别计算同一保留时间下的峰面积，以含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标，做出标准曲线方程y＝f(x)，含量为50-1000μg/ml；
(3)样品处理：称取样品适量，用流动相稀释制成适当浓度的样品溶液，摇匀，用0.45μm有机滤头过滤；
(4)检测待测泰拉霉素样品中泰拉霉素的含量：将待测泰拉霉素样品溶液分别按所述的步骤(1)的色谱条件测定，计算同一保留时间下的峰面积，带入所述的步骤(2)所得的标准曲线方程，计算得出待测泰拉霉素样品溶液的浓度，再通过样品的取样量计算出样品中泰拉霉素的含量。
优选的，所述的步骤(1)中流动相为乙腈与0.01％的磷酸溶液的混合物，其中乙腈与0.01％的磷酸溶液的体积比为60-90：40-10；优选的乙腈与0.01％的磷酸溶液的体积比为80：20。流动相中选用的有机溶剂为乙腈，能够很好地与检测波长(检测波长较低)相匹配。0.01％磷酸溶液作为流动相可以很好地改善峰形对称性不好和拖尾的问题。
优选的，所述的步骤(1)中流速为1.0ml/min。
优选的，所述的步骤(1)中柱温为30℃。
所述的保留时间为5.628min。
相对于现有技术，本发明所述的高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法具有以下优势：
本发明所述的高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法经过精密度试验、线性关系试验和加样回收试验等对方法进行了验证，结果表明该方法准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确性高。
附图说明
构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为泰拉霉素的结构式；
图2为本发明实施例所述的泰拉霉素对照品的检测谱图；
图3为本发明实施例所述的泰拉霉素的线性关系图与回归方程。
具体实施方式
除非另外说明，本文中所用的术语均具有本领域技术人员常规理解的含义，为了便于理解本发明，将本文中使用的一些术语进行了下述定义。
下面结合实施例来详细说明本发明。
一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，该方法采用岛津LC-20AT高效液相色谱仪，采用紫外检测器，检测波长为210nm，进样量为15μl，包括如下步骤：
(1)色谱条件：色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱；流动相为乙腈与0.01％的磷酸溶液的混合物，其中乙腈与0.01％的磷酸溶液的体积比为80：20；流速为1.0ml/min，柱温为30℃；
(2)标准曲线绘制：精密称量泰拉霉素对照品100mg，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，作为泰拉霉素标准溶液储备液。将上述储备液逐级稀释制成泰拉霉素含量为50、100、200、500、800、1000μg/ml的溶液，分别按所述的步骤(1)的色谱条件测定，分别计算同一保留时间下的峰面积，以含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标，得到标准曲线方程如下：y＝188001191x+196080480，R2＝0.9998，如图3所示结果表明泰拉霉素在50-1000μg/ml范围内，峰面积和浓度成以上关系。
(3)检测待测泰拉霉素原料药的含量：精密称取原料药，用流动相稀释制成适当浓度的溶液，制成300μg/ml的溶液，摇匀，用0.45μm有机滤头过滤；计算同一保留时间下的峰面积，带入步骤(2)所得的标准曲线方程，计算出上机待测泰拉霉素样品溶液的浓度，再通过样品的取样量计算出泰拉霉素原料药中泰拉霉素的含量，泰拉霉素含量的计算方法如下：
根据上式，计算出泰拉霉素原料药含泰拉霉素98.99％(稀释因子为样品稀释倍数的倒数)；
(4)精密度考察：对同一泰拉霉素原料药样品，连续6次进样，峰面积如表1所示，谱图如图2所述。
表1泰拉霉素6次重复进样的面积
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 3723620 3724790 3723608 3724032 3723519 3724864
峰面积RSD为0.02％，结果表明，本HPLC法检测泰拉霉素含量精密度高，重现性好。
(6)加样回收试验：精密称取已知含量的泰拉霉素样品适量，用流动相稀释，制成供试品的浓度分别为上机浓度300μg/ml的80％、100％、120％，使供试品溶液中的泰拉霉素浓度分别在泰拉霉素标准曲线的低、中、高区域，按本发明项下的操作，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为99.84％，RSD为0.08％，表明该方法加样回收率好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，其特征在于：该方法采用岛津LC-20AT高效液相色谱仪，采用紫外检测器，检测波长为210nm，进样量为15μl，包括如下步骤：
(1)色谱条件：色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱；流动相为乙腈与0.01％的磷酸溶液的混合物、乙腈与水的混合物或甲醇与水的混合物中的一种，其中乙腈与0.01％的磷酸溶液的体积比为60-90：10-40，乙腈与水的体积比为60-90：10-40，甲醇与水的体积比为60-90：10-40；流速为0.8-1.2ml/min，柱温为20-40℃；
(2)标准曲线绘制：称量对照品适量，置于容量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，作为泰拉霉素标准溶液储备液，将上述标准溶液储备液逐级稀释制成泰拉霉素含量为50、100、200、500、800、1000μg/ml的溶液，分别按所述的步骤(1)的色谱条件测定，分别计算同一保留时间下的峰面积，以含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标，做出标准曲线方程y＝f(x)，含量为50-1000μg/ml；
(3)样品处理：称取样品适量，用流动相稀释制成适当浓度的溶液，摇匀，用0.45μm有机滤头过滤；
(4)检测待测泰拉霉素样品中泰拉霉素的含量：将待测泰拉霉素样品溶液分别按所述的步骤(1)的色谱条件测定，计算同一保留时间下的峰面积，带入所述的步骤(2)所得的标准曲线方程，计算得出待测泰拉霉素样品溶液的浓度，再通过样品的取样量计算出样品中泰拉霉素的含量。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，其特征在于：所述的色谱柱选择Agilent C18柱4.6*250mm，5μm、Waters C18柱4.6*250mm，5μm或Shimadzu C18柱4.6*250mm，5μm中的一种；优选的，所述的色谱柱选择Waters C18柱4.6*250mm，5μm。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中流动相为乙腈与0.01％的磷酸溶液的混合物，其中乙腈与0.01％的磷酸溶液的体积比为60-90：40-10；优选的乙腈与0.01％的磷酸溶液的体积比为80：20。
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中流速为1.0ml/min。
5.根据权利要求1所述的高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中柱温为30℃。
CN201610784089.4A 2016-08-31 2016-08-31 一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法 Pending CN106248831A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610784089.4A CN106248831A (zh) 2016-08-31 2016-08-31 一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610784089.4A CN106248831A (zh) 2016-08-31 2016-08-31 一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106248831A true CN106248831A (zh) 2016-12-21

Family

ID=58080698

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610784089.4A Pending CN106248831A (zh) 2016-08-31 2016-08-31 一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106248831A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109456372A (zh) * 2018-12-19 2019-03-12 江苏威凌生化科技有限公司 一种泰拉霉素有关物质的分离方法
CN111965285A (zh) * 2020-08-21 2020-11-20 天津市中升挑战生物科技有限公司 一种泰拉霉素含量的检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HUANG XIAN-HUI等: "Development of High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Method for the Detection of Tulathromycin in Swine Plasma", 《JOURNAL OF INTEGRATIVE AGRICULTURE》 *
刘勇军等: "高效液相色谱串联质谱测定猪肉中新型兽药泰拉霉素", 《宁波农业科技》 *
刘晨晨等: "高效液相色谱法测定泰拉菌素含量的方法研究", 《现代化工》 *
范炜达等: "HPLC-ELSD测定注射液中泰拉霉素的含量", 《中国畜牧兽医》 *
赵永达等: "泰拉霉素注射液在猪体内的药物动力学及生物利用度研究", 《中国农业科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109456372A (zh) * 2018-12-19 2019-03-12 江苏威凌生化科技有限公司 一种泰拉霉素有关物质的分离方法
CN111965285A (zh) * 2020-08-21 2020-11-20 天津市中升挑战生物科技有限公司 一种泰拉霉素含量的检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105136951A (zh) 一种茶叶多糖单糖组成的快速定量方法
CN101620207A (zh) 一种参麦注射液中5-羟甲基糠醛的定量测定方法
CN105510482B (zh) 一种替格瑞洛原料中异构体杂质含量的检测方法
CN103926332B (zh) 一种同时测定半夏提取物中尿苷、鸟苷和腺苷含量的超高效液相色谱方法
CN102798678A (zh) 注射用泮托拉唑钠中依地酸钙钠的检测及含量测定方法
CN106248831A (zh) 一种高效液相色谱测定泰拉霉素含量的方法
CN104777243A (zh) 一种同时测定半夏中有机酸、核苷和麻黄碱的hplc方法
CN104535693B (zh) 一种加米霉素含量检测方法
CN104280473B (zh) 一种利奈唑胺注射液中5-羟甲基糠醛的分析方法
CN103235051B (zh) 一种测定干性食品包装纸中着色剂溶剂绿7的方法
CN103185750A (zh) 一种氯吡格雷拆分试剂的质量控制方法
CN105424834B (zh) 同时检测聚维酮k30中2-吡咯烷酮和甲酸方法
CN102901784A (zh) 醋氯芬酸原料药中甲酸的顶空气相色谱检测方法
CN108872406B (zh) 一种门冬氨酸原料药中有关物质的hplc分析检测方法
CN102636582B (zh) 测定三氮脒颗粒中三氮脒和安替比林含量的方法
CN107525875A (zh) 一种加米霉素有关物质的检测方法
CN104198418A (zh) 金霉素效价的高通量测定方法
CN104678009B (zh) 一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法
CN113092600A (zh) 一种高效液相色谱串联质谱法测定白坚木皮醇的方法
CN103149314A (zh) 单硝酸异山梨酯注射液中1,2-丙二醇的鉴别和含量测定方法
CN103995062B (zh) 一种高效液相色谱法测定艾塞那肽及其杂质的方法
CN106290683A (zh) 一种检测金霉素发酵液中单质糖浓度的方法
CN104807934A (zh) 异吲哚二酮类化合物的正相高效液相色谱检测方法
Karthikeyan et al. Determination of residual epichlorohydrin in sevelamer hydrochloride by static headspace gas chromatography with flame ionization detection
CN102692472B (zh) 一种羟基红花黄色素a的含量测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20161221