CN104673868A - 一种超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法，属于生物技术领域，其主要步骤是：将鲜活野生河蚌剥壳取肉，河蚌肉绞碎匀浆，添加中性蛋白酶，在底物蛋白浓度为6％，pH值为6.0，超声功率为150W，40℃条件下超声处理30min，然后将反应体系在50℃，pH值为6.0的条件下继续酶解3h，灭酶，离心，酶解液经过超滤进行纯化并通过冷冻干燥制备抗氧化肽。以上述工艺制得的抗氧化肽呈淡黄色、略带腥味，具有较高的抗氧化活性，1mg/mL的反应体系还原力(A700)为0.263，DPPH自由基清除率为80.4％，是优异的抗氧化剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种河蚌抗氧化肽及其制备方法，属于生物技术领域。
背景技术
自Harman提出自由基理论以来，人们对机体氧化产生的自由基与衰老和疾病之间的关系越来越重视。抗氧化剂也随之被广泛应用于食品、保健品、化妆品、医药等行业中，但目前大部分使用的是人工合成的抗氧化剂，这些抗氧化剂在使用时存在很多的安全隐患，甚至于长期服用会在机体内积累毒素并有致癌的危险等。近些年，介于氨基酸和蛋白质间的肽类物质逐渐被研究者们开发，人们发现其具有更好的抗氧化活性，而且无毒性或者低毒性，且肽类物质本身就具有丰富的营养特性，是优异的抗氧化剂。
随着国内外水产生物资源的开发利用，关于水产蛋白制备抗氧化肽的研究也逐渐展开，如白虾头、沙丁鱼、扇贝、合浦珠母贝、黄缘盒龟等，研究表明，水产蛋白制备的抗氧化肽具有良好的抗氧化活性及其他功能特性，是制备抗氧化肽的理想原料。
我国野生河蚌分布广泛，尤其是吉林省松花江流域资源极其丰富，价格低廉，2013～2014年仅为0.5～0.7元/kg。蚌肉因烹煮后肉质粗韧而食用口感不佳，但蚌肉中含丰富蛋白质且蚌肉中氨基酸种类齐全，必需氨基酸占氨基酸总量的44.43％，高于WHO/FAO模式的推荐值，此外，蚌肉还含有丰富的多糖、不饱和脂肪酸及矿质元素，是一种质优、价廉的可用资源。而目前对蚌肉精深加工的研究较少、加工利用率较低，产品形式单一。
超声波辅助酶解法是近些年发展起来的一种新的酶解方式。一般来说，频率超过20kHz的声波都属于超声波，其具有频率大、波长小、穿透力强等特点。当传播介质为液体时，超声波会在液体内产生空化作用，使得液体局部产生可达几万个大气压的作用力，使蛋白质降解或者改变其构象，促使其亲水基团更多地暴露出来，从而提高蛋白质在水中的溶解度，有利于酶和底物蛋白质结合，最终提高酶解效率。与此同时，使用超声波技术无化学残留、安全、简单，适合于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法。以本发明所提供的辅助酶解工艺，可提高酶解过程中生物活性肽的释放量，增强所得河蚌抗氧化肽的抗氧化活性，为野生河蚌资源的开发和工业化应用提供理论基础。
本发明是按以下技术方案实现的，
一种超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法，包括如下步骤：
(1)野生鲜活河蚌，剥壳去内脏，河蚌肉经绞肉机绞碎后过胶体磨得河蚌肉匀浆；
(2)河蚌肉匀浆中加入蒸馏水调节底物蛋白浓度，调节体系pH值，加入中性蛋白酶，超声辅助酶解；
(3)经超声辅助酶解的体系于恒温水浴振荡器中继续酶解并维持pH值稳定，灭酶，冷却到室温，得到酶解液；
(4)将酶解液离心，上清液经超滤，冷冻干燥得到河蚌抗氧化肽。
本发明所述步骤(2)中底物蛋白浓度为6％，调节混合体系pH值所用的溶液为1.0mol/L的盐酸溶液，pH值调节至5.90～6.10，中性蛋白酶的加入量为4141U/g(U为蛋白酶活力单位，g为底物蛋白质量单位)，超声波功率为140～160W，温度为35～45℃，超声时间为25～35min；
本发明所述步骤(3)中水浴温度为48～52℃，酶解时间为2.8～3.2h，维持反应体系pH值稳定所用的溶液为1.0mol/L的氢氧化钠溶液，体系pH值为5.90～6.10，灭酶水浴温度为100℃，时间为10～15min；
本发明所述步骤(4)中酶解液离心转速为10000r/min，时间为10～15min，所得上清液采用正切流动过滤系统超滤，滤膜分子量大小为3000Da，超滤参数为：温度为15～35℃、操作压力为0.12～0.18MPa，将小分子抗氧化肽溶液冷冻干燥，干燥条件为：干燥温度为-80～-90℃，真空度为5～15Pa。
其中，所述步骤(2)中所加中性蛋白酶为本发明经过前期大量的研究所筛选出的酶解效果好且性价比高的食品级工业用酶，本发明所用中性蛋白酶购买于诺维信(中国)生物技术有限公司，测其酶活力为43.8万U/mL。
与现有技术相比，本发明具有以下特点：
(1)野生河蚌资源丰富，产量大，蛋白质含量高，是制备抗氧化活性肽优质的原料来源，且价格十分低廉，来源稳定；
(2)采用超声波辅助酶解法制备河蚌抗氧化肽，能耗小、效率高且无化学残留、安全、简单，既提高了生物活性肽的回收率，又增强了其抗氧化效果，且通过超滤技术，可得到分子量小于3000Da的抗氧化肽，1mg/mL的反应体系还原力(A700)为0.263，DPPH自由基清除率为80.4％；
(3)制备河蚌抗氧化肽实施的过程中所需的酶解、超声波、离心、超滤、冷冻干燥等设备技术成熟度高、可行性强，适合于大规模工业化生产；
(4)本发明以野生河蚌肉为原料，制备河蚌抗氧化肽。为河蚌肉活性肽作为功能性食品、药品及化妆品辅料和功能因子提供理论基础，对拓宽河蚌精深加工途径、实现野生河蚌肉高值化利用，具有重要的现实意义和良好的经济效益。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
一种超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法，制备流程如下：野生河蚌→预处理→超声波辅助酶解处理→灭酶→离心→超滤→冷冻干燥→抗氧化肽。
以下为具体实施步骤：
(1)原料预处理：取鲜活野生河蚌，剥壳，去除内脏及其他杂物，用绞肉机将河蚌肉绞碎，通过胶体磨两次，将碎肉磨成匀浆；
(2)超声处理：取一定量的蚌肉匀浆，通过添加蒸馏水调节底物蛋白浓度为6％，用1.0mol/L的盐酸溶液调节pH值为6.0，按4141U/g的添加量向体系中添加中性蛋白酶，混匀，将混合物置于超声功率为150W、超声温度为40℃的超声波仪器中超声辅助酶解处理30min。
(3)酶解：将经超声波处理的混合物移至50℃的水浴振荡器中继续酶解3h，并通过添加1.0mol/L的氢氧化钠溶液维持反应体系pH值稳定，体系pH值为6.0；
(4)灭酶：酶解反应结束后，将混合物移至100℃沸水浴中灭酶10min，冰水浴冷却，得酶解液；
(5)离心：将酶解液在10000r/min的条件下离心10min，取上清液；
(6)超滤：将上清液通过截留分子量为3000Da的正切流动过滤系统进行超滤处理，处理温度为25℃，操作压力为0.15MPa，收集分子量小于3000Da的部分。
(7)冷冻干燥：将超滤得到的超滤液在-18℃条件下预冻后，在温度为-80～-90℃、真空度为5～15Pa的条件下冷冻干燥12h。
(8)抗氧化肽：经冷冻干燥后即得河蚌肉抗氧化肽，产品呈淡黄色且略带腥味，1mg/mL时，还原力(A700)为0.263，DPPH自由基清除率为80.4％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，对发明而言仅仅是说明性的，并非对本发明的构思和范围进行限定。本领域中专业技术人员理解，在不脱离本发明思想的前提下可对其技术方案作出各种改变和修改，但都属于本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法，其特征在于：步骤如下
(1)野生鲜活河蚌，剥壳、去内脏，河蚌肉经绞肉机绞碎后过胶体磨得河蚌肉匀浆；
(2)河蚌肉匀浆中加入蒸馏水调节底物蛋白浓度，调节体系pH值，加入中性蛋白酶，超声辅助酶解；
(3)经超声辅助酶解的体系于恒温水浴振荡器中继续酶解并调节pH值稳定，灭酶，冷却到室温，得到酶解液；
(4)将酶解液离心，上清液超滤，冷冻干燥得到河蚌抗氧化肽。
2.根据权利要求1所述的超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的底物蛋白浓度为6％，调节反应体系pH值所用的溶液为1.0mol/L的盐酸溶液，反应体系pH值调节至5.90～6.10，中性蛋白酶的加入量为4141U/g(U为蛋白酶活力单位，g为底物蛋白质量单位)，超声波功率为140～160W，温度为35～45℃，超声时间为25～35min。
3.根据权利要求1所述的超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的水浴温度为48～52℃，时间为2.8～3.2h，调节体系pH值稳定所用的溶液为1.0mol/L的氢氧化钠溶液，反应体系pH值为5.90～6.10，灭酶时所用水浴温度为100℃，时间为10～15min。
4.根据权利要求1所述的超声辅助酶法制备野生河蚌肉蛋白源抗氧化肽的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的酶解液离心采用的转速为10000r/min，时间为10～15min，离心所得上清液超滤所采用的超滤膜孔径为3000Da，超滤温度为15～35℃、操作压力为0.12～0.18MPa，收集小于3000Da的抗氧化肽溶液冷冻干燥，干燥条件为：干燥温度为-80～-90℃，真空度为5～15Pa。
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104673868A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105779545A (zh) * | 2016-04-30 | 2016-07-20 | 浙江树人大学 | 微波辅助酶法制备甲鱼蛋白源抗氧化肽的方法 |
| CN106351000A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-01-25 | 雷春生 | 一种长效导电涤纶纤维的制备方法 |
| CN106913853A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 无限极（中国）有限公司 | 文蛤多肽在制备具有延缓衰老作用的保健食品中的应用 |
| CN107099573A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-08-29 | 江苏省农业科学院 | 优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法 |
| CN108294163A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-07-20 | 吉林大学 | 超声波-微波辅助酶解河蚌蛋白工艺 |
| CN111533784A (zh) * | 2020-05-26 | 2020-08-14 | 吉林大学 | 一种鸡骨抗氧化肽及其制备方法 |
| CN118252233A (zh) * | 2024-04-30 | 2024-06-28 | 南京黄教授食品科技有限公司 | 一种超声协同成熟富集鸭肉中抗氧化肽的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1768765A (zh) * | 2005-10-28 | 2006-05-10 | 大连水产学院 | 牡蛎抗氧化肽保健品的制备方法 |
| CN101248866A (zh) * | 2007-09-18 | 2008-08-27 | 湖南文理学院 | 从河蚌中同时提取蚌肉提取物、蛋白粉和多肽粉的方法 |
| CN101892280A (zh) * | 2010-06-29 | 2010-11-24 | 中国水产科学研究院南海水产研究所 | 一种合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备方法 |
| CN101906456A (zh) * | 2010-07-22 | 2010-12-08 | 浙江工商大学 | 源自厚壳贻贝的抗氧化肽的制备方法和用途 |
-
2015
- 2015-03-18 CN CN201510119313.3A patent/CN104673868A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1768765A (zh) * | 2005-10-28 | 2006-05-10 | 大连水产学院 | 牡蛎抗氧化肽保健品的制备方法 |
| CN101248866A (zh) * | 2007-09-18 | 2008-08-27 | 湖南文理学院 | 从河蚌中同时提取蚌肉提取物、蛋白粉和多肽粉的方法 |
| CN101892280A (zh) * | 2010-06-29 | 2010-11-24 | 中国水产科学研究院南海水产研究所 | 一种合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备方法 |
| CN101906456A (zh) * | 2010-07-22 | 2010-12-08 | 浙江工商大学 | 源自厚壳贻贝的抗氧化肽的制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 孔美兰 等: "超声波辅助酶法水解寻氏肌蛤蛋白", 《食品研究与开发》 * |
| 涂宗才 等: "多指标优化珠蚌抗氧化肽制备工艺", 《食品工业科技》 * |
| 罗晓慧: "珠蚌抗氧化肽的加工工艺研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》 * |
| 高本刚 等: "《药用动物养殖与产品加工大全》", 31 March 2013, 中国农业出版社 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106913853A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 无限极（中国）有限公司 | 文蛤多肽在制备具有延缓衰老作用的保健食品中的应用 |
| CN105779545A (zh) * | 2016-04-30 | 2016-07-20 | 浙江树人大学 | 微波辅助酶法制备甲鱼蛋白源抗氧化肽的方法 |
| CN106351000A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-01-25 | 雷春生 | 一种长效导电涤纶纤维的制备方法 |
| CN106351000B (zh) * | 2016-08-30 | 2019-05-07 | 上海名冠净化材料股份有限公司 | 一种长效导电涤纶纤维的制备方法 |
| CN107099573A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-08-29 | 江苏省农业科学院 | 优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法 |
| CN107099573B (zh) * | 2017-06-13 | 2020-12-15 | 江苏省农业科学院 | 优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法 |
| CN108294163A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-07-20 | 吉林大学 | 超声波-微波辅助酶解河蚌蛋白工艺 |
| CN111533784A (zh) * | 2020-05-26 | 2020-08-14 | 吉林大学 | 一种鸡骨抗氧化肽及其制备方法 |
| CN118252233A (zh) * | 2024-04-30 | 2024-06-28 | 南京黄教授食品科技有限公司 | 一种超声协同成熟富集鸭肉中抗氧化肽的方法 |
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