CN104662033B - 黄病毒科病毒的大环抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式I化合物及其药学上可接受的盐和酯：

Description

黄病毒科病毒的大环抑制剂
相关申请的交叉引用
本申请根据美国法典第35条第119(e)款要求美国临时专利申请第61/657,553号的利益，通过参考将其全部内容合并入本文中。
技术领域
本申请提供了抑制病毒的新的化合物，含有这些化合物的组合物以及包含给药这些化合物的治疗方法。
背景技术
包含黄病毒科的RNA病毒包括至少三个可区别的属，包括瘟疫病毒属(pestiviruses)、黄病毒属(flaviviruses)和丙肝病毒属(hepaciviruses)(Calisher等，J.Gen.Virol.1993，70，37-43)。尽管瘟疫病毒属引起许多经济上重要的动物疾病，如牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、古典猪瘟病毒(CSFV，猪霍乱)和绵羊边界疾病(BDV)，但它们在人类疾病中的重要性很少得到充分的表征(Moennig，V.等，Adv.Vir.Res.1992，48，53-98)。黄病毒属导致重要的人疾病，如登革热和黄热病，而丙肝病毒属引起人的丙肝病毒感染。由黄病毒科引起的其他重要病毒感染包括西尼罗河病毒(WNV)、日本脑炎病毒(JEV)、蜱传脑炎病毒、Junjin病毒、墨累溪谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥姆斯克出血热病毒和兹卡(Zika)病毒。
丙肝病毒(HCV)是全世界的慢性肝病的主要原因(Boyer，N.等，J Hepatol.32:98-112，2000)，因此目前抗病毒研究主要的焦点是针对治疗人慢性HCV感染的改进方法的研发(Di Besceglie,A.M.和Bacon,B.R.,Scientific American(科学美国)，10月:80-85，(1999)；Gordon,C.P.等，J.Med.Chem.2005，48，1-20；Maradpour,D.等，Nat.Rev.Micro.2007，5(6)，453-463)。Dymock等在Antiviral Chemistry&Chemotherapy(抗病毒化学&化疗)，11:2；79-95(2000)中综述了多种HCV治疗。由于在慢性感染病人中每天巨大量的病毒产生和HCV病毒的高自发突变性，患有慢性HCV感染的病人的病毒学治愈是难以实现的(Neumann等，Science 1998，282，103-7；Fukimoto等，Hepatology，1996，24，351-4；Domingo等，Gene，1985，40，1-8；Martell等，J.Virol.1992，66，3225-9)。
目前，主要存在两种抗病毒化合物用于治疗人慢性HCV感染，核苷类似物利巴韦林和干扰素-α(IFN)。单单利巴韦林对降低病毒RNA水平是无效的，且具有明显的毒性，已知能诱发贫血。已经报道IFN和利巴韦林的组合能有效控制慢性丙肝(Scott，L.J.等，Drugs2002，62，507-566)，但不到一半给予这种治疗的病人显示出持久的益处。因此，对研发更有效的抗-HCV治疗存在着需求。
大环sanglifehrin和衍生物是免疫调节剂，并且以独特的方式结合肽酰-脯氨酰顺/反异构酶(PPIase)亲环蛋白(WO 97/02285；WO 98/07743；J.Am.Chem.Soc 2003，125，3849-3859；J.Org.Chem.2000，65，9255-9260；Angew.Chem.Int.Ed.1999，38，2443-2446)。亲环蛋白是在体内调节蛋白折叠并抑制丙肝病毒的肽酰-脯氨酰顺/反异构酶(PPIase)(Lin等，WO2006/138507)。然而，sanglifehrin或其衍生物中没有一种已经能用于人抗病毒治疗。因此，对研发具有抗黄病毒科病毒活性及特别是抗HCV活性的大环sanglifehrin存在着持续的需求。
发明内容
在一个实施方案中，提供了一种如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药：
其中：
A1是(C2-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、(C2-C5)亚炔基、-O-(C2-C4)亚烷基、-O-(C2-C4)亚烯基、亚芳基、芳基(C1-C2)亚烷基、杂环亚烷基或杂环烷基(C1-C2)亚烷基，其中A1的sp3碳原子被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；
A2是亚芳基或杂亚芳基，其中A2被卤素可选取代；
X1是-O-、-NH-或-N((C1-C4)烷基)-；
R1a和R1b独立地是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
R2是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
R3a和R3b独立地是H或(C1-C8)烷基；
R4a和R4b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；
R5是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基，或
R5与X1的-N((C1-C4)烷基)-或A2的亚芳基形成环部分；和
R6是H或(C1-C4)烷基。
在另一个实施方案中，提供了一种药学组合物，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药以及一种或多种药学上可接受的载体或辅料。在该实施方案的一个方面，所述药学组合物还包含一个或多个附加的治疗药物。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗黄病毒科病毒感染的方法，其包含向需要的哺乳动物给予治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。在该实施方案的一个方面，所述治疗可导致患者的病毒载量降低或病毒RNA被清除。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗冠状病毒科(Coronaviridae)病毒感染的方法，其包含向需要的哺乳动物给予治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。在该实施方案的一个方面，所述治疗可导致患者的病毒载量降低或病毒RNA被清除。
具体实施方式
定义
除非另有说明，否则如本文所用的以下术语和短语将具有以下含义：
“链烷酰基”是RC(O)-；“链烷酰基氧基”是RC(O)O-；和“链烷酰基氨基”是RC(O)NR’-；其中R是如本文定义的烷基基团，R’是氢或烷基。
“烯基”是指具有至少一个不饱和位点即碳-碳sp2双键的直链或支链烃基。在一些实施方案中，烯基是C2-C20烯基基团、C2-C10烯基基团或C2-C6烯基基团。烯基基团的实例包括但不限于乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、环戊烯基(-C5H7)和5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH＝CH2)。
“亚烯基”是指不饱和的支链或直链或环状烃基，其含有自母体烯烃的相同碳原子或两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。例如，亚烯基可含有2至20个碳原子、2至10个碳原子，或是2至6个碳原子。典型的亚烯基包括但不限于1,2-亚乙烯基(-CH＝CH-)。
“烷氧基”是RO-，其中R是如本文所定义的烷基。烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基和丙氧基。
“烷基”是指直链或支链烃基。在一个实施方案中，烷基具有1至20个碳原子(即C1-C20烷基)。在一些实施方案中，烷基是C1-C10烷基或C1-C6烷基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。
“亚烷基”是指饱和的支链或直链基团或环烃基团，其含有自母体烷烃的相同碳原子或两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。例如亚烷基可含有1至20个碳原子、1至10个碳原子，或是1至6个碳原子。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、1，3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)和1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)。
“炔基”是指含有带至少一个不饱和位点的正常、仲碳原子或叔碳原子的烃基，即碳-碳sp三键。例如，炔基可含有2至20个碳原子(即C2-C20炔基)、2至12个碳原子(即C2-C12炔烃基)，或2至6个碳原子(即C2-C6炔基)。炔基的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和炔丙基(-CH2C≡CH)。
“烷氨基”是指被一个或多个烷基取代的氨基。“单(烷基)氨基”或“(烷基)氨基”是RNH-，“二(烷基)氨基”或“(烷基)2氨基”是R2N-，其中每个R基团均是如本文定义的烷基，可以相同也可以不同。烷氨基的实例包括但不限于甲胺基、乙胺基、丙胺基、丁胺基、二甲氨基、二乙胺基和甲基乙基氨基。
“氨基”是指–NH2。
“亚炔基”是指不饱和的支链或直链或环状烃基，其含有自母体炔烃的相同碳原子或两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。例如，亚炔基可含有2至20个碳原子、2至10个碳原子，或是2至6个碳原子。典型的亚炔基包括但不限于乙炔基(-C≡C-)、丙炔基(-CH2C≡C-)和4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
“芳基”是指每个环中最多含7个原子的任一单环或双环碳环，其中至少一个环是芳香环，或是5至14个碳原子的芳香环系统，该芳香环系统包括与5或6元环烷基稠和的碳环芳香基团。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基和茚满基。
“芳基烷基”是指被芳基取代的如本文定义的烷基。
“亚芳基”是指如上定义的芳基，其含有自母体芳基的两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。典型的亚芳基包括但不限于亚苯基如和亚萘基如
“芳基亚烷基”是指如上定义的芳基烷基，其含有自该基团的芳基上去除一个氢原子且自烷基上去除另一个氢原子而得到的两个单价基团中心。
“环烷基”是指含有至少饱和或部分不饱和环结构、且通过环碳相连的烃基。环烷基包括单、双、和多环烃基，可以是稠和、桥联或螺环。在多个实施方案中，它是指饱和或部分不饱和的C3-C12环部分(cyclic moiety)，实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。
“环烷基烷基”是指被环烷基取代的烷基部分。环烷基烷基的实例包括环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基乙基和环己基甲基。
“环亚烷基”是指如本文定义的环烷基，其含有自母体环烷基的相同碳原子或两个不同碳原子去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。环亚烷基的实例包括但不限于环亚丙烷基、环亚丁烷基、环亚戊烷基和环亚己烷基。
“二烷氨基烷基”是指被二烷氨基取代的烷基部分，其中二烷氨基如本文所定义。
“酯”是指化合物的任何酯，其中该分子的任意-COOH功能基被–C(O)OR功能基取代，或其中该分子的任意–OH功能基被–OC(O)R功能基取代，其中该酯的R部分是可形成稳定酯部分的任意含碳基团，包括但不限于烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环烷基及其取代衍生物。
“卤素”是指氯(-Cl)、溴(-Br)、氟(-F)或碘(-I)。
“卤代烷氧基”是指如本文定义的被一个或多个卤素基团取代的烷氧基。
“卤代烷氧基烷基”是指如本文定义的被卤代烷氧基取代的烷基部分。
“卤代烷基”是指烷基基团，其中该烷基基团的一个或多个氢原子被一个卤素原子取代。卤代烷基的实例包括但不限于-CF3、-CHF2、-CFH2和-CH2CF3。
“杂环烷基”是指饱和或部分不饱和的单环、双环或三环基团，其含有2至14个环碳原子，并且除环碳原子之外含有1至4个选自P、N、O和S的杂原子。杂环基团可通过碳原子或通过杂原子相连，当取代时，取代基可与碳原子或杂原子结合。杂环基的的实例包括氮杂环丁烷基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并恶唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基(indolazinyl)、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、萘吡啶基、恶二唑基、恶唑基、恶唑啉基、异恶唑啉基、氧杂环丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基(pyridopyridinyl)、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢异喹啉基、四唑基、四唑并吡啶基(tetrazolopyridyl)、噻二唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁烷基、1,4-二氧杂环己基(1,4-dioxanyl)、六氢氮杂基(hexahydroazepinyl)、哌嗪基、哌啶基、吡啶-2-酮基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并恶唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异恶唑基、二氢异噻唑基、二氢恶二唑基、二氢恶唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基二氧基苯甲酰基、四氢呋喃基和四氢噻吩基以及它们的氮氧化物。
“杂环亚烷基”是指如上文定义的杂环烷基，其含有自母体杂环烷基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。
“杂环烷基亚烷基”是指如上文定义的杂环烷基，其含有自该基团的杂环烷基上去除一个氢原子且自烷基上去除另一个氢原子而得到的两个单价基团中心。
“杂芳基”是指每个环上具有最多达7个原子的单环、双环或三环，其中至少一个环是芳香环且该环上含有1至4个选自由N、O和S组成的组的杂原子。杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、噻吩基、呋喃基、嘧啶基、咪唑基、吡喃基、吡唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、恶唑基、异恶唑基、吡咯基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、苯并咪唑基、异吲哚基、苯并三唑基、嘌呤基、硫茚基和吡嗪基。杂芳基的连接可通过一个芳香环来进行，或者，如果杂芳基是双环或三环并且其中环不是芳香环或不含有杂原子，可通过非芳香环或不含杂原子的环来进行连接。“杂芳基”还可被理解为包括任何含氮杂芳基的氮氧化物衍生物。
“杂芳基烷基”是指如本文定义的烷基，其中氢原子被杂芳基取代。
“杂亚芳基”是指如上文定义的杂芳基，其含有自母体杂芳基的相同碳原子或两个不同碳原子上去除两个氢原子而得到的两个单价基团中心。杂亚芳基的非限制性实例是：
“羟基烷氧基”是指如本文定义的被一个羟基(-OH)取代的烷氧基。羟基烷氧基的一个实例是羟基乙氧基。
“羟烷基”是指被至少一个羟基取代的烷基。羟烷基的实例包括但不限于羟甲基、羟乙基、羟丙基和羟丁基。
“前药”是指向生物系统给药时，作为自发化学反应、酶催化化学反应、光解和/或代谢化学反应的结果，可生成原料药即活性成分的任何化合物。因此，前药是具有治疗活性的化合物的共价修饰类似物或潜在形式。前药的非限制性实例包括酯分子、季铵分子、乙二醇分子等等。
术语“可选取代”是指其中所有取代基为氢的部分或其中该部分的一个或多个氢被非氢取代基取代。当化学上可行时还允许在同一原子上进行多重取代(例如，二氧取代以提供-S(O)2-、同碳取代基、螺环烷基或杂环烷基环等等)。在一些实施方案中，“一个或多个”取代基为一至三个取代基。
在本文中，于适用情况下，是可允许的异构体，例如互变异构体、外消旋体、对映体、非对映体、阻转异构体、双键的构型异构体(E-和/或Z-)、环取代模式中的顺式和反式构型以及同位素变体。
“药学上可接受”是指适合在药物制剂中使用的，通常认为是安全的，被国家或州政府的监管机构正式批准使用，或是列在美国药典或其他普遍认可的药典中以用于动物特别是用于人。
“药学上可接受的载体”是指一种药学上可接受的稀释剂、佐剂、辅料或载体或是其他成分，并且本发明的一种化合物与其一起进行给药。
“药学上可接受的盐”是指可以增强预期的药理活性的盐。药学上可接受的盐的实例包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐、金属盐和胺盐。与无机酸形成的酸加成盐的实例包括与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸形成的盐。与有机酸形成的酸加成盐的实例包括与例如乙酸、丙酸、己酸、庚酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、邻-(4-羟基-苯甲酰基)-苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、对-氯苯磺酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基-二环[2.2.2]-2-辛烯-1-羧酸、葡庚糖酸、4,4’-亚甲基双(3-羟基-2-萘酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸和粘康酸形成的盐。金属盐的实例包括与钠、钾、钙、镁、铝、铁和锌离子。胺盐的实例包括与氨和足够强至与羧酸形成盐的有机含氮碱基形成的盐。
给定化学式的化合物(例如式I化合物，其还包括式I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II)将包含本发明的化合物以及这些化合物在药学上可接受的盐、立体异构体、立体异构体或互变异构体的混合物。此外，本发明的化合物还可能具有一个或多个不对称中心，并可作为外消旋混合物或是单独的对映体或非对映体生产得到。给定化学式的任意给定化合物中存在的立体异构体的数量取决于存在的不对称中心的数量(当不对称中心的数量为n时，可能存在2n个立体异构体)。单独的立体异构体可通过在合成的某个适当阶段分离中间体的外消旋或非外消旋混合物来获得，或是通过常规方法拆分化合物来获得。单独的立体异构体(包括单独的对映体和非对映体)以及立体异构体的外消旋和非外消旋混合物均包括在本发明的范围之内，除非另有明确说明，否则它们均将通过本说明书的结构来进行描述。
“异构体”是具有相同分子式的不同化合物。异构体包括立体异构体、对映体和非对映体。
“立体异构体”是仅有原子的空间排列方式不同的异构体。立体异构体包括对映体和非对映体。
“对映体”是一对互为不可重叠的镜像的立体异构体。一对对映体的1:1混合物是“外消旋”混合物。术语“(±)”用于在适当情况下指明外消旋混合物。
“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子但不互为镜像的立体异构体。
根据Cahn Ingold Prelog R S系统详细说明了绝对立体化学。当该化合物为纯对映体时，每个手性碳的立体化学可规定为R或S。绝对构型未知的拆分化合物根据它们在钠D线波长下旋转偏振光平面的方向被命名为(+)或(-)。
某些化合物存在互变异构体或“互变体”。互变异构体彼此间是平衡的。例如，含酰胺化合物可能与酰亚胺酸互变异构体存在平衡。无论给出哪种互变异构体，也无论互变异构体之间的平衡的性质如何，普通本领域技术人员可理解这些化合物同时包括酰胺和酰亚胺酸互变异构体。因此，含酰胺化合物应理解为包括其酰亚胺酸互变异构体。同样，含酰亚胺酸化合物应理解为包括包括其酰胺互变异构体。
本文中提供的任何化学式或结构，包括式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II还将代表这些化合物的未标记形式以及同位素标记形式。“同位素”可具有由本文所给出的化学式描述的结构，但其一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子取代。可掺入至本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如但不限于2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。本发明可掺入的多种同位素标记的化合物包括例如放射性同位素如3H、13C和14C。这些同位素标记的化合物可能在代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术，例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)包括药物或底物组织分布测定或是在放射性治疗病人中发挥作用。
本发明还包括式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II化合物，其中连接在一个碳上的1至n个氢被氘取代，其中n是分子中氢的数量。这些化合物表现出增强的代谢抗性，因此有助于在给药至哺乳动物时增加式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II任意化合物的半衰期。参见例如Foster，“药物代谢的研究中的氘同位素效应(Deuterium Isotope Effects in Studiesof Drug Metabolism)”，Trends Pharmacol.Sci.5(12)：524-527(1984)。这些化合物通过本领域众所周知的方法例如使用一个或多个氢被氘取代的起始原料来合成得到。
本发明的氘标记或取代的治疗性化合物可能具有改善的DMPK(药物代谢和药代动力学)性质，分布、代谢和排泄相关性质(ADME)。较重的同位素例如氘的取代可能提供了某些由更好的代谢稳定性带来的治疗优势，例如体内半衰期的增加、剂量需求的减少和/或治疗指数的改善。18F标记化合物可能有助于PET或SPECT研究。本发明的同位素标记化合物及其前药通常是根据下述的方案或是实施例和制备方法中公开的步骤，通过使用一种易得到的同位素标记试剂代替一种非同位素标记试剂而制备得到的。应当理解本文中的氘应被视为式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II化合物的一个取代基。
这种较重同位素特别是氘的浓度可以通过同位素富集因子来定义。在本发明的化合物中，任何没有被特别指定为某个特定同位素的原子代表了该原子的任何稳定同位素。除非另外指明，否则当一个位置被特别指明为“H”或“氢”时，该位置应理解为具有天然同位素丰度组成的氢。因此，在本发明的化合物中，任何特别指明为氘(D)的原子代表氘。
“治疗有效量”是指当给药于受试者以治疗疾病时足以治疗该疾病的化合物量。“治疗有效量”可根据化合物、疾病及其严重程度、待治疗受试者的年龄、体重等等而不同。
术语“治疗中”及其语法等同词，在治疗疾病的上下文中使用时，是指减缓或停止疾病的发展，或是改善疾病的至少一种症状，更优选改善疾病的多于一种症状。例如，丙型肝炎病毒感染的治疗可包括降低HCV感染人类的HCV病毒载量，和/或降低HCV感染人类中存在的黄疸的严重程度。
化合物
本申请提供了一种如式I所示化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药：
其中：
A1是(C2-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、(C2-C5)亚炔基、-O-(C2-C4)亚烷基、-O-(C2-C4)亚烯基、亚芳基、芳基(C1-C2)亚烷基、杂环亚烷基或杂环烷基(C1-C2)亚烷基，其中A1的sp3碳原子被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；
A2是亚芳基或杂亚芳基，其中A2被卤素可选取代；
X1是-O-、-NH-或-N((C1-C4)烷基)-；
R1a和R1b独立地是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
R2是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
R3a和R3b独立地是H或(C1-C8)烷基；
R4a和R4b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；
R5是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基，或
R5与X1的-N((C1-C4)烷基)-或A2的亚芳基形成环部分；和
R6是H或(C1-C4)烷基。
在某些实施方案中，提供了式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药：
其中：
A1是(C1-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、(C2-C5)亚炔基、-O-(C2-C4)亚烷基、-O-(C2-C4)亚烯基、亚芳基、芳基(C1-C2)亚烷基、杂环亚烷基或杂环烷基(C1-C2)亚烷基，其中A1的sp3碳原子被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；
A2是亚芳基或杂亚芳基，其中A2被卤素可选取代；
X1是-O-、-NH-或-N((C1-C4)烷基)-；
R1a和R1b独立地是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
R2是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基；
R3a和R3b独立地是H或(C1-C8)烷基；
R4a和R4b独立地是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；
R5是H、(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基或(C2-C4)炔基，或
R5与X1的-N((C1-C4)烷基)-或A2的亚芳基形成环部分；和
R6是H或(C1-C4)烷基。
在该实施方案的一个方面，A1是亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、氧化丙烯基、氧化亚丙烯基(oxypropenylene)、亚吡唑基(pyrazolylene)、亚苯基或亚嘧啶基(pyrimidinylene)。
在实施方案的另一个方面，A2是杂亚芳基例如异亚喹啉基、亚苯基或亚卤代苯基(halophenylene)。一方面，A2是
在实施方案的另一个方面，X1是-O-或-NH-；R1a是H；R1b是甲基；R2是异丙基；R5是甲基和R6是H或甲基。
在实施方案的另一个方面，R3a是H或甲基；R3b是H；R4a是H、-OH、甲氧基、三氟乙氧基；和R4b是H。
在实施方案的另一个方面，A2是杂亚芳基；A1是(C2-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基或(C2-C5)亚炔基，其中A1被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；R3a是H或(C1-C8)烷基；和R4a是H、-OH或(C1-C4)烷氧基。在实施方案的另一个方面，A2是杂亚芳基；A1是(C1-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基或(C2-C5)亚炔基，其中A1被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；R3a是H或(C1-C8)烷基；和R4a是H、-OH或(C1-C4)烷氧基。这些化合物的非限制性实例包括以下化合物及其药学上可接受的盐。
化合物编号 X1 A1 R3a R4a
a-1 -NH- -CH2CH2- 甲基 甲氧基
a-2 -NH- -CH＝CH- 甲基 甲氧基
a-3 -O- -CH2CH2- 甲基 甲氧基
a-4 -O- -CH＝CH- 甲基 甲氧基
a-5 -NH- -CH2CH2- 甲基 -H
a-6 -NH- -CH＝CH- 甲基 -H
a-7 -O- -CH2CH2- 甲基 -H
a-8 -O- -CH＝CH- 甲基 -H
a-9 -NH- -CH＝CHCH2- -H -H
a-10 -NH- -CH2CH2CH2- -H -H
a-11 -O- -CH＝CHCH2- -H -H
a-12 -O- -CH2CH2CH2- -H -H
a-13 -NH- -CH＝CHCH2CH2- -H -H
a-14 -NH- -CH2CH2CH2CH2- -H -H
a-15 -O- -CH＝CHCH2CH2- -H -H
a-16 -O- -CH2CH2CH2CH2- -H -H
其中A1连接臂的左键与A2相连。
在实施方案的另一个方面，A2是亚芳基；和A1是(C2-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、(C2-C5)亚炔基、-O-(C2-C5)亚烷基或-O-(C2-C4)亚烯基，其中A1被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；R3a是H或(C1-C4)烷基；和R4a是H、-OH、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基。在实施方案的另一个方面，A2是亚芳基；和A1是(C1-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、(C2-C5)亚炔基、-O-(C2-C5)亚烷基或-O-(C2-C4)亚烯基，其中A1被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；R3a是H或(C1-C4)烷基；和R4a是H、-OH、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基。这些化合物的非限制性实例包括以下化合物及其药学上可接受的盐。
编号 X1 A1 R1b R3a R4a R5
b-1 -NH- -CH＝CHCH2CH2- -H -H -OH 甲基
b-2 -NH- -CH2CH2CH2CH2- -H -H -OH 甲基
b-3 -O- -CH＝CHCH2CH2- -H -H -OH 甲基
b-4 -O- -CH2CH2CH2CH2- -H -H -OH 甲基
b-5 -NH- -CH＝CHCH2CH2- -H -H -OCH2CF3 甲基
b-6 -NH- -CH2CH2CH2CH2- -H -H -OCH2CF3 甲基
b-7 -O- -CH＝CHCH2CH2- -H -H -OCH2CF3 甲基
b-8 -O- -CH2CH2CH2CH2- -H -H -OCH2CF3 甲基
b-9 -NH- -CH＝CHCH2C(CH3)2- -H -H -H 甲基
b-10 -O- -CH＝CHCH2C(CH3)2- -H -H -H 甲基
b-11 -NH- -OCH2CH＝CH- -H 甲基 甲氧基 异丙基
b-12 -O- -OCH2CH＝CH- -H 甲基 甲氧基 异丙基
b-13 -NH- -OCH2CH＝CH- -H 甲基 甲氧基 甲基
b-14 -O- -OCH2CH＝CH- -H 甲基 甲氧基 甲基
b-15 -NH- -CH＝CHCH2CH2- 甲基 -H -OH 甲基
b-16 -NH- -CH2CH2CH2CH2- 甲基 -H -OH 甲基
其中A1连接臂的左键与A2相连。
以下化合物及其药学上可接受的盐业包括在内。
编号 X1 A1 R3a R4a
c-1 -NH- -CH＝CHCH2CH2- 甲基 甲氧基
c-2 -NH- -CH2CH2CH2CH2- 甲基 甲氧基
c-3 -O- -CH＝CHCH2CH2- 甲基 甲氧基
c-4 -O- -CH2CH2CH2CH2- 甲基 甲氧基
c-5 -NH- -CH＝CHCH2CH2- -H -OH
c-6 -NH- -CH2CH2CH2CH2- -H -OH
c-7 -O- -CH＝CHCH2CH2- -H -OH
c-8 -O- -CH2CH2CH2CH2- -H -OH
其中A1连接臂的左键与A2相连。
在实施方案的另一个方面，A2是亚苯基；和A1是亚吡唑基、亚苯基或亚嘧啶基。这些化合物的非限制性实例包括以下化合物及其药学上可接受的盐。
其中A1连接臂的左键与A2相连。
在实施方案的另一个方面，A2是卤代亚苯基；和A1是-O-(C2-C5)亚烷基或-O-(C2-C4)亚烯基。这些化合物的非限制性实例包括以下化合物及其药学上可接受的盐。
化合物编号 X1 A1 R3a R4a
e-1 -NH- -OCH2CH＝CH- 甲基 -H
e-2 -O- -OCH2CH＝CH- 甲基 -H
e-3 -NH- -OCH2CH2CH2- 甲基 -H
e-4 -O- -OCH2CH2CH2- 甲基 -H
e-5 -NH- -OCH2CH＝CH- 甲基 甲氧基
e-6 -O- -OCH2CH＝CH- 甲基 甲氧基
e-7 -NH- -OCH2CH2CH2- 甲基 甲氧基
e-8 -O- -OCH2CH2CH2- 甲基 甲氧基
其中A1连接臂的左键与A2相连。
在实施方案的一个方面，A1是(C2-C5)亚烷基或(C2-C5)亚烯基；R5是甲基，或R5与A2的亚芳基形成了或R5与X1的-N((C1-C4)烷基)-形成了或和R6是H或甲基。在实施方案的另一个方面，A1是(C1-C5)亚烷基或(C2-C5)亚烯基；R5是甲基，或R5与A2的亚芳基形成了或R5与X1的-N((C1-C4)烷基)-形成了和R6是H或甲基。这些化合物的非限制性实例包括以下化合物及其药学上可接受的盐：
在另一个实施方案中，提供了式II化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药：
其中：
A1是亚乙烯基、 其中A1连接臂的左键与A2相连；
A2是
X1是-O-或-NH-；
R3a是H或(C1-C4)烷基；
R4a是H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基或(C1-C8)烷基；和
R5是H或(C1-C4)烷基。
本领域技术人员将认识到应对本文中通用结构式的化合物的取代基和其他部分进行选择，从而提供足以稳定制得药学上有效化合物的化合物，该药学上有效的化合物可被制成具有可接受稳定性的药学组合物。具有这种稳定性的化合物应被视为处于本发明的范围之内。本领域技术人员应当理解上述定义和取代基的任意组合不应获得不可实现的种类或化合物。
大环化合物的制备
本发明的化合物例如式I、I-a、I-b、I-c、I-d、I-e或II化合物可根据下述方案进行制备，但应理解的是还可使用改动的图示工艺或其他工艺。如方案1所示，大环化合物M由本领域技术人员通过适当使用保护基((PG1-PG8)将五个关键组分A-E按顺序结合在一起而合成得到。编号为1-5的虚线，在此分别简称为连接1、连接2等等，是组合组分A-E的五个连接步骤。具体的连接顺序可以不同，取决于保护基的选择以及需要的化学过程。在某些实施方案中，使用连接3、4或5作为最终的大环化步骤。
方案1
PGX＝根据需要的保护基
Y1和Y2是H、烷基、卤化物、三氟甲磺酸化物、硼酸、锡烷等。
具体来说，连接1至连接5可如下所述进行：
连接1、2和3是酰胺键。这些连接使用本领域技术人员已知的标准的肽偶联试剂(EDC/HOBT、DCC、PyBOP、PyBROP、HATU、HBTU、COMO等)在各个酸和胺之间形成。酸和胺偶联伙伴在一种有机溶剂例如DMF、二氯甲烷、乙腈等中，于一种碱例如DIPEA、三乙胺等存在下，在室温或稍高温度下与一个偶联试剂结合。当这三个步骤中的任意一个例如连接3被选择作为最终的大环化步骤时，则优选使用大环内酰胺化条件。适合的大环内酰胺化方法包括但不限于以下参考文献中给出的方法：Davies,J.S.J.Peptide Sci.2003,9,471-501。
连接4通常是碳-碳键或杂原子-碳键，其中杂原子是O、S或N。当连接4是碳-碳键时，则优选通常涉及金属介导交叉偶联反应的标准碳碳键形成方法。优选使用sp2卤化物基团与末端烯烃之间的Heck型偶联、sp2卤化物基团与乙烯基或芳基硼酸化物之间的Suzuki偶联、或是两个烯烃之间的关环复分解反应(RCM)形成碳-碳键。还可进行Journal ofAmerican Chemical Society 2000，122，3830Nicolaou等人中描述的乙烯基锡烷与芳基或乙烯基卤化物之间的Stille反应。在上述各个实施例中，芳基或乙烯基卤化物基团还可以是芳基或乙烯基三氟甲磺酸化物。
例如，当A中的A2-Y2含有末端烯烃例如-CH＝CH2，且B中的A1-Y1含有末端烯烃或是CH3-CH＝CH-时，则进行交叉复分解反应。这两种组分在溶剂例如乙腈、甲苯中混合，且加入一个复分解催化剂例如Grubbs I、Grubbs II或Hoyveda-Grubbs I、Hoyveda-Grubbs II，随后加热。如果此连接是关闭大环的最终步骤，则优选RCM条件(例如更为稀释的条件以避免二聚化)。相关的RCM条件和实例请参见Journal of American Chemical Society2003，125，3849Sedrani等人和Journal of American Chemical Society 2000，122，3830Nicolaou等人。典型的RCM步骤包括在溶剂例如甲苯、1,2-二氯甲烷中于RCM催化剂例如Grubbs I、Grubbs II或Hoyveda-Grubbs I、Hoyveda-Grubbs II等的存在下加热(常规或微波)无环前体。
或者，当连接4是通过Heck偶联反应得到时，在一种极性溶剂例如乙腈或甲苯中，于钯(II)催化剂例如钯(OAc)2、磷化氢配体I类如P(邻甲苯)3、P(叔丁基)3等以及碱例如三乙胺的存在下，将乙烯基或芳基卤化物，或是三氟甲磺酸化物A与烯烃组分B混合在一起。使用常规方法或是在微波反应器中加热反应混合物。
或者，当连接4是通过Suzuki偶联反应得到时，在适合的溶剂例如环戊基甲基醚、甲苯、DMF、DME等中，于钯催化剂(例如钯(II)Cl2(p-NMe2Ph)2和K3PO4或四(三苯基膦)钯(0)和碱例如碳酸钾)存在下，将乙烯基或芳基卤化物，或是三氟甲磺酸化物A与乙烯基或芳基硼酸化物B混合在一起。使用常规方法或是在微波反应器中加热反应混合物。在这种偶联反应中还可以颠倒两个起始原料的反应功能基，也就是A是芳基或乙烯基硼酸化物而B含有乙烯基或芳基卤化物或三氟甲磺酸化物。
或者，连接4可以是碳-氧键，在这种情况下可以使用羟基与烷基卤化物或是芳基(或杂芳基)卤化物之间的典型烷基化或芳香族亲核取代条件。在一种惰性溶剂例如CPME、DMF、THF等中，于碱例如碳酸铯、氢氧化铯、氯化钠、MaHMDS等的存在下，将羟基试剂与烷基或杂芳基卤化物(优选碘化物或溴化物)混合；并加热。
或者，连接4可以是碳-氮键，在这种情况下可以使用胺基与烷基卤化物或杂芳基卤化物之间的典型烷基化、芳香族亲核取代或是Buchwald条件。例如，在一种惰性试剂例如CPME中，于碱例如碳酸铯、氯化钠等的存在下，将胺基与烷基或杂芳基卤化物混合并加热。碳-氮连接的另一种方法是进行胺基与羰基化合物之间的还原胺化反应。通常胺基与醛或酮在一种惰性溶剂例如THF、二氧六环中混合，并在一段时间后用乙酰氧基硼氢化钠或另一种还原试剂进行处理。
连接5通常是酰胺(X1＝-NH或取代的N)或酯(X1＝O)键。当形成该酰胺键时，可以使用如连接1-3所描述的标准偶联方法。在一些实施方案中，这是闭合此大环的最终步骤。因此，偶联方法的大环内酰胺化步骤更为有效。适合的大环内酰胺化方法包括但不限于Davies,J.S.J.Peptide Sci.2003,9,471-501中给出的方法。
当形成酯键时，可以使用标准偶联试剂(例如EDC、DCC、PyBOP、HATU、COMO)，或是当这是大环形成的最终步骤时，优选使用大环内酰胺化方法(例如Shina，Yamaguchi)。大环内酰胺化步骤的示例性方法可参见Journal of American Chemical Society2002，124，4257Paquette等人或Chemical Reviews 2006，106(3)，911-939。一般来说，酸和醇在极性溶剂例如DMF、乙腈等中，于偶联试剂和碱例如DIPEA、DMAP的存在下进行混合。
以下通用方案提供了由常用前体A-E构建大环化合物M的一般实例和顺序。
方案2：使用RCM方法形成连接4
化合物A-E可使用Greene和Wuts，有机合成 的保护基团(Protective Groups inOrganic Synthesis)，John Wiley and Sons,Inc.中描述的条件进行去保护(PG2-PG8)以得到化合物1a-1f。
在许多情况下，最佳保护基及其去保护方法如下。对于化合物E来说，酸的典型保护基PG1是甲酯或三氯乙酯。甲酯和三氯乙酯可通过极性溶剂例如THF水溶液等中的碱例如LiOH来去除。三氯乙酯还可通过使用极性溶剂例如THF中的锌和乙酸铵处理来去除。一般来说，PG2和PG4是酸不稳定基团，例如BOC，可使用HCl的二氧六环溶液或是TMSOTf的二氧六环、二氯甲烷溶液来去保护。一般来说，PG3和PG5是酯基团，可通过使用在THF水溶液或二氧六环中的碱金属氢氧化物处理来去除。一般来说PG6是酸不稳定基团，例如对胺来说是BOC，可如PG2中的描述去除，或对羟基来说为甲硅烷醚，可通过使用在有机溶剂例如二氯甲烷中的TBAF的HF吡啶处理来去除。一般来说PG8是胺保护集团，例如BOC，通过如PG2中的描述来去除，或羟基的甲硅烷醚，可通过如PG6中的描述去除，或乙酸盐保护基，可使用在THF水溶液或二氧六环中的碱金属氢氧化物来去除。
然后使用以上连接1所述的条件将化合物1f与酸1a偶联，以得到化合物1g。然后使用Greene和Wuts中描述的条件对化合物1g去保护，并使用以上连接2所述的条件将其与1c偶联以得到1h。生成1h的另一个顺序的起始是使用如以上连接2所述的条件将胺1b与酸1c偶联，形成1i；使用Greene和Wuts中描述的条件对1i中的保护基PG3进行去保护，最后使用以上连接1所述的条件将其与胺1f偶联从而形成1h。
方案3
使用Greene和Wuts中描述的条件对化合物1h的PG6进行脱保护，然后使用以上连接3所述的条件将此胺与1d偶联以形成1j。然后使用Greene和Wuts中描述的条件去除化合物1j中的保护基PG1，使用以上连接5所述的条件将此酸与1e偶联以形成无环中间体1k。生成1k的另一个顺序是首先将PG1去保护，然后如连接5所述将其与1e偶联；随后跟进Greene和Wuts中的描述对PG6进行去保护，随后使用以上连接3所述的条件将其与1d偶联以形成1k。然后根据以上连接4的描述对无环中间体1k进行RCM以形成大环M。
方案4：大环内酰胺化/大环内酯化连接5
使用上述连接4所用条件将化合物A与化合物B偶联以生成2a。然后如Greene和Wuts中所述对化合物2a的PG7进行去保护以生成酸2b。然后将酸2b与1h的去保护产物(由1h通过按照Greene和Wuts中所述对PG6进行去保护而制备得到)偶联以生成前体2c。使用Greene和Wuts中所述条件进行2c的去保护，然后使用上述用于连接5中大环内酰胺化或大环内酯化的条件对产物进行环化，从而得到化合物M。
方案5：大环内酰胺化/大环内酯化连接5
按照Greene和Wuts中所述以及以上连接5所述对化合物2a的PG8进行去保护以生成酸3a，然后使用上述用于连接5的条件将其与1h的去保护产物(由1h通过按照Greene和Wuts中所述对PG1进行去保护而制备得到)偶联以生成前体3b。使用Greene和Wuts中所述条件进行3b的去保护，然后使用上述用于连接3中大环内酰胺化或大环内酯化的条件进行环化，从而得到化合物M。
方案6：大环化合物M进一步转化为M1-M5
例如，当M含有C＝C作为RCM的结果时，在溶剂例如甲醇、乙醇等中，于钯碳催化剂存在下，在氢气气氛下混合化合物M以获得还原的化合物M1。来自于方案4-6的最终大环M通常在侧链上含有保护基，需要去除这些保护基才能生成最终化合物M。使用Greene和Wuts中描述的条件来去除R4a、R4b、R3a、R3b、A1、A2和/或X1上的保护基，从而生成化合物M2。另一个转化是点击化学，以得到三唑M3。这一转化通过在溶剂(例如DMF)中在CuI存在下酌情使用炔烃或叠氮化物处理M中的炔烃或叠氮化物来进行，以形成M3。
去保护的化合物M2可在去保护后进一步转化为另外的大环M。例如，在碱如碳酸铯的存在下，于适合的试剂例如DMF、乙腈等中，使用一种烷基卤化物处理含有-OH的M2，形成烷基化产物M4。在适合的溶剂(例如DMF、甲醇等等)中使用胺处理含有酮基的M2，随后加入乙酰氧基氢化硼钠以形成胺产物M5。
方案7：酸或酯B的制备
许多含有酸或是与末端烯烃或CH3-CH＝C-或乙烯基/芳基硼酸化物基团形成的酯的B组分可购买得到，或是在文献中有所描述，并可直接用于上述方案。此外，以下方案是可用于生成其他B组分的方法的实例。
方案8：酸或酯B的制备
在方案8的第1部分中，使用强去质子化碱如LDA，在惰性溶剂如THF中，在-78℃和HMPA下处理受保护的酸。然后加入预冷的二氯乙炔溶液(通过使用氢化钾和MeOH(催化剂)的THF溶液处理三氯乙烯来制备得到)以生成氯乙炔产物。然后还原此产物，例如使用在乙酸和THF中的Cu进行处理，以生成炔烃，将其进一步还原成烯烃，例如使用中毒的钯还原试剂(如Lindlar)在氢气存在下处理炔烃的醇溶液。或者，使用在二氯甲烷中的Cp2ZrHCl在频那醇硼烷存在下处理该炔烃以形成乙烯基硼酸化物。
在方案8的第2部分中，带有α取代基的β-酮酸酯被转化为乙烯基三氟甲磺酸化物，例如通过使用碱如LDA在THF中于78℃下处理该β-酮酸酯的THF溶液，随后加入PhN(Tf)2。然后使用吡啶在较高温度下处理该三氟甲磺酸化产物以形成炔烃。然后如以上第1部分所述处理该炔烃，以生成烯烃或乙烯基硼酸化物产物。
在方案8的第3部分中，使用了手性醇醛缩合反应。首先使用上述用于连接1-3的标准酰胺键形成条件将酰基与手性助剂例如Evans，Oppolzer磺内酰胺(参见JACS 1990，112，p2767)连接。使用所选醛、TBDMSOTf和碱，如三乙胺，在无水溶剂如二氯甲烷中处理该Oppolzer助剂产物。使用碱，例如LDA、KHMDS、DIPEA，在无机溶剂如THF中于78℃下，以及所选醛在路易斯酸如TiCl4、SnCl4、BF3OEt2存在下处理该Evans助剂。如Greene和Wuts中所述对自醇醛缩合反应中得到的醇进行保护，或是与烷基卤化物或Meerwein试剂进行烷基化，即在惰性溶剂如二氯甲烷中进行三甲基氧鎓四氟硼酸处理。然后使用标准碱金属氢氧化物去除条件例如LiOH的THF溶液或是LiOH与过氧化氢的THF溶液去除助剂，以得到游离酸产物。
在方案8的第4部分中，如Synlett 2002，12，2039-2040所述使用烯丙基卤化物对Evans助剂进行烯丙基化。然后通过RhCl3的乙醇溶液处理对该产物进行异构化，然后使用碱和过氧化物例如LiOH和H2O2的THF/水溶液去除该助剂。或者，直接使用LiOH和H2O2的THF/水溶液去除该助剂以得到末端烯烃。
在方案8的第5部分中，对醛(含有末端烯烃)进行Horner Wadsworth Emmons反应以生成α-β不饱和酯，然后将其选择性还原为酯。例如，使用碱如氢化钠在THF中于低温下处理膦酸酯，随后加入醛并加热以生成该不饱和酯。通过甲醇中的镁粉处理来还原该产物。
在方案8的第6部分中，α-β不饱和酸被转化为不饱和的Evans助剂(参见OrganicLetters 2007，9，p1635)，并用醛处理以生成相应的烯烃产物。然后使用Greene和Wuts中描述的方法保护羟基基团，然后通过碱和过氧化物例如LiOH和H2O2的THF/水溶液处理来去除该助剂。还可根据上述用于醇醛方案8第3部分的方法对该羟基进行烷基化。
在方案8的第7部分中，根据Angew. Chem. Int. Ed. 2006，45(46)，7736中描述的方法通过硝基烯烃对酮进行转化。然后使用乙烯基溴化镁在惰性溶剂例如THF中在铜(I)盐如CuI和三甲基氯硅烷的存在下对该硝基烯烃进行处理。使用亚硝酸钠和乙酸在惰性极性溶剂如DMSO中对加入乙烯基后的硝基烷基产物进行处理，将其转化为酸。
多种类型的A可自购买得到或是在文献中有所描述，其中X1是O或NH，Y2是卤化物或A2-Y2含有烯烃。下述的方案描述了生成A的其他通用方法。
方案9：A的制备
1.当Y2＝A中的卤素时
方案9(续)：A的制备
2.当Y2＝H且A中的A2-Y2含有一个烯烃时
A3是芳基，杂芳基或二芳基等等
在方案9的第1部分中(A中的Y2是卤素)；起始化合物6a通常是可购买得到的芳香化合物，其含有卤素和可转化为酮6b的基团Z。通常Z基团是例如卤化物、酸或醛。
当Z是酸时，使用偶联试剂例如HATU、EDC在碱如DIPEA以及Weinreb胺(Me-NH-OMe)的存在下处理6a以形成Weinreb酰胺。然后用亲核试剂例如TMS-CF3处理该酰胺以形成CF3取代的酮6b或是使用Grignard试剂例如在溶剂如THF中于-78℃下处理该酰胺以形成甲基酮6b。
当Z是卤素时，则根据需要使用NaI和乙酰氯在惰性溶剂如乙腈中进行处理来实现最初的转化，变为反应性更强的卤素。然后使用乙氧基乙烯基锡烷通过Stille反应将该卤素转化为酮。在惰性溶剂例如甲苯中使用该锡烷和钯(II)催化剂例如PdCl2(PPh3)2对该卤化物进行处理，随后使用2M HCl处理其产物以形成酮6b。在某些情况下，可通过使用nBuLi在-78℃下于THF中进行处理来获得自卤化物基团形成的烷基锂试剂，然后加入N-甲氧基-N-甲基酰胺以形成酮6b(例如N-甲氧基-N-甲基乙酰胺可得到R5是甲基的酮6b)。最后生成酮6b的方法是通过乙烯基进行的。使用乙烯基三氟硼酸化物在钯催化剂如PdCl2(dppf)的存在下处理6a，然后在极性溶剂例如甲醇中于低温下对乙烯基进行臭氧分解以得到醛。然后将该醛与亲核试剂如TSM-CF3或是Grignard试剂如MeMgBr反应，以得到仲醇产物。然后用戴斯马丁高碘烷(Dess Martin Periodinane)氧化该仲醇以得到预期的酮6b或是可将其自身用作A。
手性醇(X1是O)和胺(X1是NH)A是对酮6b使用手性还原方法生成的。手性醇6c是使用文献中可获得的大量手性还原方法中的一种自6b形成的。一般来说，在水中结合二氯(对-异丙基苯)钌(II)二聚体和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯乙烯二胺，在水易混溶溶剂例如四氢呋喃中加入甲酸钠和6b。然后在室温和回流之间的温度下搅拌反应物以生成6c，其中X1是O。或者，可以在惰性溶剂如THF中于低温下进行手性CBS还原反应，也可提供手性醇6c。使用Greene和Wuts中描述的方法进行6c中OH的保护，通常使用TBS醚或乙酰基来形成A(X1是O)。
或者，为了制成手性A(X1是NH)，将酮6b首先转化为手性亚胺(R10是手性基团)，然后使用文献中描述的多种方法进行还原。例如，将手性亚磺酰胺与酮6b反应以生成手性亚磺酰亚胺(sulfinimine)6d，然后使用适合的还原剂，通常是NaBH4或三仲丁基硼氢化锂(selectride)对其进行还原，或是使用二氯(对-异丙基苯)钌(II)二聚体和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯乙烯二胺按照上述用于手性醇的方法进行Noyori型还原。然后通过使用无机酸优选HCl在适合的有机溶剂例如甲醇中进行处理来去除亚磺酰胺助剂，以得到X1是NH的6e。然后根据Greene和Wuts中描述的方法进行NH基团的保护以生成A(X1是NH)。
在方案9的第2部分中，举例说明了化合物A的合成，其中Y2是H且A2-Y2含有-CH＝CH2，即复分解和交叉偶联反应的前体。示例性方法如下。
首先根据Greene和Wuts中描述的方法使用适合的保护基可选保护方案9第1部分中生成的化合物6c或6e的X1，然后通过适合的交叉偶联方法在芳基或sp2卤化物上引入乙烯基。例如，使用适合的钯催化剂如PdCl2(dppf)2或PdCl2(PPh3)2，在适合的有机溶剂如乙腈、二氯甲烷等等中，通过常规加热或微波加热，与乙烯基锡烷或乙烯基四氟硼酸化物进行的过渡金属介导的偶联反应，从而得到烯烃A。
另一种可用于引入乙烯基的典型方法是以Y是OH的酮6b作为起始。首先，通过使用Tf2O在碱如吡啶存在下进行处理来完成该醇的三氟甲磺酰化。然后通过Noyori还原反应，或是如上述方法通过磺酰胺对酮基进行还原，以获得手性醇或胺。然后根据Greene和Wuts中描述的方法对该手性醇或胺进行保护，然后将该三氟甲磺酰化物与乙烯基交叉偶联试剂进行反应以引入烯烃，所用试剂为例如Stille偶联反应使用的乙烯基锡烷，或是上述的乙烯基三氟硼酸化物。使用6b酮生成烯烃的另一个实例是通过引入烯丙基来进行的。因此，在惰性溶剂中，于适合的碱如碱金属碳酸盐优选碳酸钾的存在下，使用烯丙基溴处理Y是OH的6b，以形成6f。然后，化合物6f与酮6b类似，可按照以上第1部分中所述的方法转化为化合物A，其中X1是带有保护基PG8的O或NH。
药物制剂
本发明的化合物可与常规载体和辅料一起配制，这些载体和辅料将符合普通实践选择。片剂中含有辅料、助流剂、填充剂、粘合剂等等。水性制剂将制为无菌形式，当预计用于口服之外的给药方式时，通常为等渗溶液。
尽管活性成分可以单独给药，但可能优选将其制成药物制剂。本发明的制剂，无论是兽用还是人用制剂，均含有至少一种活性成分，以及一种或多种可接受的载体和可选的其他治疗成分。
适合用于口服给药的本发明制剂可以制成独立的单位，例如各自含有预定量活性成分的胶囊剂、扁囊剂或是片剂；粉末或颗粒；在水性或非水性液体中的溶液或混悬液；或水包油乳液或油包水乳液。活性成分还可以大丸剂、药糖剂或糊剂的形式给药。
活性成分的有效剂量至少取决于所治疗疾病的性质、毒性、该化合物是预防性使用(较低的剂量)还是针对活跃病毒感染、给药方法以及药物制剂，并将由临床医生使用常规剂量递增研究来作出决定。有效剂量可预期为每天0.0001mg/kg至大约100mg/kg体重；通常来说，每天大约0.01mg/kg至大约10mg/kg体重；更通常来说，每天大约0.01mg/kg至大约5mg/kg体重；最通常来说，每天大约0.05mg/kg至大约0.5mg/kg体重。例如，一名体重大约为70kg的成年人的候选每日剂量范围是1mg至1000mg，优选在5mg至500mg之间，可以采用单剂量或多剂量的形式。
联合治疗
本发明的化合物可以与一个或多个活性药物联用。适合联用的活性药物的非限制性实例包括一个或多个干扰素、利巴韦林或其类似物、HCV NS3蛋白酶抑制剂、NS5a抑制剂、α-葡萄糖苷酶1抑制剂、保肝药、甲羟戊酸脱羧酶拮抗剂、肾素-血管紧张素系统拮抗剂、其他抗纤维化药物、内皮素拮抗剂、HCV NS5B聚合酶的核苷或核苷酸抑制剂、HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂、HCV NS5A抑制剂、TLR-7激动剂、亲环素抑制剂、HCV IRES抑制剂、药代动力学增强剂和附加的治疗HCV的药物；或是它们的混合物。
更具体来说，联用的一个或多个化合物选自由以下化合物组成的组：
1)干扰素，例如聚乙二醇化的rIFN-α2b(PEG-Intron)、聚乙二醇化的rIFN-α2a(派罗欣(Pegasys))、rIFN-α2b(Intron A)、rIFN-α2a(Roferon-A)、干扰素α(MOR-22、OPC-18、Alfaferone、Alfanative、Multiferon、subalin)、干扰素alfacon-1(干复津(Infergen))、干扰素α-n1(Wellferon)、干扰素α-n3(Alferon)、干扰素-β(Avonex、DL-8234)、干扰素-ω(ωDUROS、Biomed 510)、albinterferonα-2b(Albuferon)、IFNαXL、BLX-883(Locteron)、DA-3021、糖基化干扰素α-2b(AVI-005)、PEG-干复津，聚乙二醇化的干扰素λ(聚乙二醇化的IL-29)和belerofon；
2)利巴韦林及其类似物，例如利巴韦林(Rebetol、Copegus)，和塔利韦林(Virami3)；
3)HCV NS3蛋白酶抑制剂，例如波普瑞韦(SCH-503034、SCH-7)、特拉匹韦(VX-950)、VX-813、TMC-435(TMC435350)、ABT-450、BI-201335、BI-1230、MK-7009、SCH-900518、VBY-376、VX-500、GS-9256、GS-9451、BMS-790052、BMS-605339、PHX-1766、AS-101、YH-5258、YH5530、YH5531和ITMN-191(R-7227)；
4)α-葡萄糖苷酶1抑制剂，例如西戈斯韦(MX-3253)、米格列醇和UT-231B；
5)保肝药，例如emericasan(IDN-6556)、ME-3738、GS-9450(LB-84451)、silibilin和MitoQ；
6)HCV NS5B聚合酶的核苷或核苷酸抑制剂，例如，R1626、R7128(R4048)、IDX184、IDX-102、PSI-7851、BCX-4678、伐洛他滨(valopicitabine)(NM-283)、GS-6620和MK-0608；
7)HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂，例如，filibuvir(PF-868554)、ABT-333、ABT-072、BI-207127、VCH-759、VCH-916、JTK-652、MK-3281、VBY-708、VCH-222、A848837、ANA-598、GL60667、GL59728、A-63890、A-48773、A-48547、BC-2329、VCH-796(nesbuvir)、GSK625433、BILN-1941、XTL-2125、和GS-9190；
8)HCV NS5A抑制剂，例如，AZD-2836(A-831)、AZD-7295(A-689)、和BMS-790052；
9)TLR-7激动剂，例如，咪喹莫特、852A、GS-9524、ANA-773、ANA-975、AZD-8848(DSP-3025)、PF-04878691和SM-360320；
10)亲环素抑制剂，例如，DEBIO-025、SCY-635和NIM811；
11)HCV IRES抑制剂，例如，MCI-067；
12)药代动力学增强剂，例如，BAS-100、SPI-452、PF-4194477、TMC-41629、GS-9350、GS-9585和罗红霉素；
13)治疗HCV的其他药物，例如，胸腺素α1(日达仙)、硝唑尼特(Alinea、NTZ)、BIVN-401(virostat)、PYN-17(altirex)、KPE02003002、actilon(CPG-10101)、GS-9525、KRN-7000、civacir、GI-5005、XTL-6865、BIT225、PTX-111、ITX2865、TT-033i、ANA 971、NOc-205、tarvacin、EHC-18、VGX-410C、EMZ-702、AVI4065、BMS-650032、BMS-791325、巴维昔单抗、MDX-1106(ONO-4538)、Oglufanide、FK-788和VX-497(merimepodib)；
14)甲羟戊酸脱羧酶拮抗剂，例如，他汀类药物、HMGCoA合酶抑制剂(例如hymeglusin)、角鲨烯合成抑制剂(例如萨拉哥酸)；
15)血管紧张素II受体拮抗剂，例如，氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、替米沙坦、依普罗沙坦；
16)血管紧张素转换酶抑制剂，例如，卡托普利、佐芬普利、依那普利、雷米普利、喹那普利、培哚普利、赖诺普利、贝那普利、福辛普利；
17)其他抗纤维化药物，例如，阿米洛利；和
18)内皮素拮抗剂，例如波生坦和安贝生坦。
在另一个实施方案中，本申请提供了一种包含本发明组合物和第二种药学组合物的联用疗法，其中该第二种药学组合物包含至少一种选自由以下化合物组成的组的其他治疗药物：HIV蛋白酶抑制剂化合物、HIV非核苷逆转录酶抑制剂、HIV核苷逆转录酶抑制剂、HIV核苷酸逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、gp41抑制剂、CXCR4抑制剂、gp120抑制剂、CCR5抑制剂、干扰素、利巴韦林类似物、NS3蛋白酶抑制剂、NS5a抑制剂、α-葡萄糖苷酶1抑制剂、亲环素抑制剂、保肝药、HCV非核苷抑制剂和其他治疗HCV的药物，以及它们的组合。
更具体来说，本发明的一个或多个化合物可以与一个或多个选自由以下化合物组成的组的化合物联用：1)HIV蛋白酶抑制剂，例如安普那韦、阿扎那韦、福沙那韦、茚地那韦、洛匹那韦、利托那韦、洛匹那韦+利托那韦、奈非那韦、沙奎那韦、替拉那韦、贝卡那韦(brecanavir)、地瑞那韦、TMC-126、TMC-114、莫泽那韦(mozenavir)(DMP-450)、JE-2147(AG1776)、AG1859、DG35、L-756423、RO0334649、KNI-272、DPC-681、DPC-684和GW640385X、DG17、PPL-100，2)HIV非核苷逆转录酶抑制剂，例如，卡拉韦林、乙米韦林、地位韦啶(delaviridine)、依非韦伦、奈韦拉平、(+)胡桐素A、依曲韦林、GW5634、DPC-083、DPC-961、DPC-963、Mb-150和TMC-120、TMC-278(利匹韦林)、依非韦伦、BILR 355BS、VRX 840773、UK-453、061、RDEA806；3)HIV核苷逆转录酶抑制剂，例如，齐多夫定、恩曲他滨、去羟肌苷、司他夫定、扎西他滨、拉米夫定、阿巴卡韦、氨多索韦、艾夫他滨、阿洛夫定、MB-210、racivir(±-FTC)、D-D4FC、恩曲他滨、叠氮磷、福齐夫定替酯、磷夫定酯、阿立他滨(AVX754)、氨多索韦、KP-1461、阿巴卡韦+拉米夫定、阿巴卡韦+拉米夫定+齐多夫定、齐多夫定+拉米夫定，4)HIV逆转录酶核苷酸抑制剂，例如，替诺福韦、富马酸替诺福韦酯+恩曲他滨、富马酸替诺福韦酯+恩曲他滨+依非韦伦、和阿德福韦，5)HIV整合酶抑制剂，例如，姜黄素、姜黄素衍生物、菊苣酸、菊苣酸衍生物、3,5-二咖啡酰奎尼酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸衍生物、金精三羧酸、金精三羧酸衍生物、咖啡酸苯乙酯、咖啡酸苯乙酯衍生物、酪氨酸磷酸化抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂衍生物、槲皮素、槲皮素衍生物、S-1360、zintevir(AR-177)、L-870812和L-870810、MK-0518(雷特格韦)、BMS-707035、MK-2048、BA-011、BMS-538158、GSK364735C，6)gp41抑制剂，例如，恩夫韦地、西夫韦肽、FB006M、TRI-1144、SPC3、DES6、Locus gp41、CovX和REP 9，7)CXCR4抑制剂，例如，AMD-070，8)进入抑制剂，例如，SP01A、TNX-355，9)gp120抑制剂，例如，BMS-488043和BlockAide/CR，10)CCR5抑制剂，例如，aplaviroc、vicriviroc、INCB9471、PRO-140、INCB15050、PF-232798、CCR5mAb004和马拉维若，11)干扰素，例如，聚乙二醇化的rIFN-α2b、聚乙二醇化的rIFN-α2a、rIFN-α2b、rIFN-α2b XL、rIFN-α2a、复合干扰素α、干复津、利比、locteron、AVI-005、PEG-干复津、聚乙二醇化的干扰素-β、口服干扰素α、feron、reaferon、intermaxα、r-IFN-β、干复津+干扰素γ-1b(actimmune)、带DUROS的干扰素-ω和白蛋白干扰素(albuferon)，12)利巴韦林类似物，例如，rebetol、copegus、VX-497和viramidine(塔利韦林)，13)NS5a抑制剂，例如，A-831、A-689和BMS-790052，14)NS5b聚合酶抑制剂，例如，NM-283、伐洛他滨、R1626、PSI-6130(R1656)、IDX184、PSI-7851、HCc-796、BILB 1941、MK-0608、NM-107、R7128、VCH-759、PF-868554、GSK625433和XTL-2125，15)NS3蛋白酶抑制剂，例如，SCH-503034(SCH-7)、VX-950(特拉匹韦)、ITMN-191和BILN-2065，16)α-葡萄糖苷酶1抑制剂，例如，MX-3253(西戈斯韦)和UT-231B，17)保肝药，例如，IDN-6556、ME3738、MitoQ和LB-84451，18)HCV非核苷抑制剂，例如，苯并咪唑衍生物、苯并-1,2,4-噻二嗪衍生物和苯丙氨酸衍生物，19)其他治疗HCV的药物，例如，日达仙、硝唑尼特(alinea)、BIVN-401(virostat)、DEBIO-025、VGX-410C、EMZ-702、AVI 4065、巴维昔单抗、oglufanide、PYN-17、KPE02003002、actilon(CPG-10101)、KRN-7000、civacir、GI-5005、ANA-975、XTL-6865、ANA 971、NOc-205、tarvacin、EHC-18和NIM811，19)药代动力学增强剂，例如，BAS-100、SPI-452、PF-4194477、TMC-41629、GS-9350、GS-9585和罗红霉素，20)RNA酶抑制剂，例如，ODN-93和ODN-112，21)其他抗HIV药物，例如，VGc-1、PA-457(bevirimat)、安普利近、RG214、细胞因子、polymun、VGX-410、KD247、AMZ 0026、CYT 99007、A-221HIV、BAY 50-4798、MDX010(iplimumab)、PBS119、ALG889和PA-1050040。
在此实施方案的一个具体方面中，其他治疗药物选自利巴韦林、特拉匹韦、波普瑞韦和索菲布韦(GS-7977(以前称为PSI-7977))。
本文所述的联用疗法可以通过同时或顺序给药方案进行给药。当顺序给药时，联用的药物可以给药两次或更多次。
本发明的化合物与一个或多个其他活性药物的共同给药通常是指本发明的化合物与一个或多个其他活性药物的同时或顺序给药，从而使得治疗有效量的本发明化合物与一个或多个其他活性药物同时存在于病人体内。
治疗病毒感染的方法
本申请提供了一种治疗黄病毒科病毒感染的方法，包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的本文所述化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。
本申请还提供了一种治疗冠状病毒科病毒感染的方法，包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的本文所述化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药。
在一个实施方案中，抑制或治疗一种疾病的方法包括向动物给予组合物，其中含有有效量的一个或多个本发明化合物或其药学上可接受的盐、同位素、立体异构体、立体异构体混合物、互变异构体、酯或前药以及一个药学上可接受的载体。给药的此组合物还可能含有第二种如上所述的治疗药物。
本申请的方法格外适用于人，但也可用于其他动物，特别是哺乳动物，例如，非人灵长类动物、伴侣动物、农场动物、实验室动物以及野生和动物园动物。
本申请的方法格外适用于治疗黄病毒科病毒直接或间接引起的疾病，因为本发明的化合物对这些病毒具有抑制活性。因此，在一些实施方案中，本发明的方法被用于抑制或治疗丙型肝炎病毒引起的疾病。因此，在一些实施方案中，本发明的方法被用于抑制或治疗乙型肝炎病毒引起的疾病。一方面，这种方法被用于患有病毒感染引起的疾病的病人，例如登革热、黄热病、丙型肝炎、日本脑炎、科萨努尔森林病、墨累谷脑炎、圣刘易斯脑炎、蜱传脑炎或西尼罗脑炎。
在一些实施方案中，持续的病毒学反应在大约12周、大约10周、大约8周、大约6周、或大约4周、或大约4个月、或大约5个月、或大约6个月、或大约1年、或大约2年时达到。
本申请的方法还格外适用于治疗由冠状病毒科病毒直接或间接引起的疾病，因为本发明的化合物对这些病毒具有抑制活性。因此，在一些实施方案中，本发明的方法被用于抑制或治疗SARS冠状病毒引起的疾病。一方面，这种方法被用于患有病毒感染引起的疾病的病人，例如严重急性呼吸道综合征(SARS)、癌症、炎症、肥胖、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)或是肝硬化。
另一方面，本发明公开的化合物可用于治疗癌症。在另一方面，本发明公开的化合物可用于免疫调节。因此，在一些实施方案中，本发明的方法包含例如在免疫增强、免疫抑制或诱导免疫耐受方面将免疫应答调节至预期水平。
在一些实施方案中，化合物给药大约12周。在其他实施方案中，化合物给药大约12周或更短、大约10周或更短、大约8周或更短、大约6周或更短、大约4周或更短。化合物可每日一次、每日两次、隔天一次、一周两次、一周三次、一周四次或是一周五次给药。
另一方面，本发明公开的化合物可用于治疗癌症。另一方面，本发明公开的化合物可用于免疫调节。因此，在一些实施方案中，本发明的方法包含例如在免疫增强、免疫抑制或诱导免疫耐受方面将免疫应答调节至预期水平。
实施例
以下实施例仅作说明，并不以任何方式限制本发明。
缩略语列表
缩写 意义
℃ 摄氏度
Ac 乙酰基
app 明显的
Aq 含水的
Boc 叔丁氧羰基
Br 宽峰
Bu 丁基
cat 催化剂
CBS 科里-巴克什-柴田
CDMT 2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪
cm 厘米
COMU (1-氰基-2-乙氧基-2氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐
CP/Cp 环戊基
CPME 环戊基甲基醚
Cy/cHex 环己基
d 二重峰
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCC N,N'-二环己基碳二亚胺
DCE 二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
dd 双二重峰
ddd 双组二重峰
ddt 双组三重峰
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
dppf 1,1’-双(二苯基膦)二茂铁
dq 双四重峰
dt 双三重峰
dtd 双组三个二重峰
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
Equiv/eq 当量
Et 乙基
g 克
gen. 代
HATU (二甲基氨基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲亚铵(methaniminium)六氟磷酸盐
HBTU 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐
HMDS 六甲基二硅氮烷
HMPA 六甲基磷酰胺
HOBT 羟基苯并三唑
HPLC 高效液相色谱
hrs/h 小时
Hz 赫兹
IC50 半数最大抑制浓度
Im 咪唑
i-Pr/iPr 异丙基
J 耦合常数
Kg 千克
LCMS 液相色谱-质谱
LDA 二异丙基氨基锂
M 摩尔
m 多重峰
m/z 质荷比
M+ 质量峰
Me 甲基
mg 毫克
MHz 兆赫
min 分钟
mL 毫升
mM 毫摩尔
mm 毫米
mmol 毫摩尔
mol 摩尔
Ms 甲磺酰基
MW 微波
N 标准的
nM 纳摩尔
NMM N-甲基吗啉
NMR 核磁共振
nPrOH 正丙醇
o-Tol 邻甲苯基
Ph 苯基
pTSA 对甲苯磺酸
Py/pyr 吡啶
PyAOP 7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐
PyBop 苯并三唑-1-基-氧代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐
q 四重峰
Rf 保留因子
RT/rt/r.t. 室温
s 单峰
sat. 饱和
t 三重峰
TBAF 四正丁基氟化铵
TBDMS/TBS 叔丁基二甲基硅烷
TBDPS 叔丁基二苯基硅烷
t-Bu 叔丁基
td 三个二重峰
TEA 三乙胺
Tf 三氟甲磺酰基
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
TMEDA 四甲基乙二胺
TMS 三甲基硅烷基
Tr/tr 保留时间
Ts 甲苯磺酰基
tt 三个三重峰
UV 紫外
wt. 重量
δ 化学位移
μL 微升
μM 微摩尔
μmol 微摩尔
实施例1：(E)-(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-18-羟基-14-异丙基-2,11,17-三甲基-3,9,12,15,28-五氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八烷-1(26),21,23(27),24-四烯-4,10,13,16-四酮
制备1-((1R,5S)-10,10-二甲基-3,3-二氧代-3λ*6*-硫代-4-氮杂-三环[5.2.1.0*1,5*]癸-4-基)-1-丙酮(3.95g，14.55mmol)的甲苯溶液(50mL)，然后蒸发至干。重复此过程，将所获白色固体溶于午睡二氯甲烷(16mL)中。加入少量氢化钙，随后加入叔丁基二甲基硅烷三氟甲磺酸酯(3.83mL，14.5mmol)和无水三乙胺(2.33mL，16.7mmol)。在室温(“RT”)下于氮气中将反应混合物搅拌15小时(“h”)。蒸发所获溶液以得到粘稠的糊状物，将其重新溶解于无水二氯甲烷(15mL)中，并在-78℃下于氮气气氛下向无水二氯甲烷(20mL)中滴加搅拌的4-戊烯醛溶液(2.69g，32.0mmol)和四氯化钛(1M二氯甲烷溶液，32mL，32mmol)。在-78℃下搅拌反应物30分钟(“min”)，随后用饱和的氯化铵水溶液(100mL)稀释。分离两层，用二氯甲烷(2x50mL)萃取水层。合并的提取物用硫酸钠进行干燥，过滤并蒸发以得到褐色胶状物。使用异己烷/乙酸乙酯4:1通过硅胶色谱法进行纯化，得到为无色胶状物的标题化合物(3.09g，60％)。
将1a(12.0g，0.034mol)的无水二氯甲烷溶液(520mL)冷却至0℃，然后加入吡啶(5.5mL，0.068mol)，随后加入叔丁基二甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(9mL，0.039mol)。在0℃下搅拌反应混合物15分钟，然后将其加热至室温并继续搅拌1.5小时。用饱和的碳酸氢钠(400mL)冲洗反应混合物。用二氯甲烷(200mL)反萃取水洗液。合并有机层，并用稀盐水(200mL)和2M盐酸(200mL)冲洗。该溶液用硫酸钠干燥，过滤并蒸发以得到为白色固体的标题产物(15.29g，96％)。
制备1b(15.29g，0.0325mol)的四氢呋喃溶液(300mL)并加入2M氢氧化锂水溶液(120mL)。将搅拌的混合物加热至60℃，持续15小时。用2M盐酸(250mL)稀释该反应物。分离两层，用乙酸乙酯(2x200mL)萃取水层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发以得到膏状固体(16.7g)。使用3:7乙酸乙酯/异己烷通过硅胶色谱法纯化该固体，得到为无色胶状物的标题产物(7.18g，81％)。
将(S)-2-叔丁氧羰基氨基-丙酸(3.28g，17.32mmol)的乙腈溶液(160mL)冷却至0℃，然后加入N,N-二异丙基乙胺(12mL，69.3mmol)，随后加入2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(6.57g，17.32mmol)。反应混合物在0℃下搅拌20分钟，加入(S)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯三氟乙酸盐(制备方法参见Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1999，38，2443，6.49g，17.3mmol)的乙腈溶液(80mL)。将反应物加热至室温并搅拌15小时。蒸发反应混合物，然后重溶于乙酸乙酯(150mL)。用盐水(150mL)冲洗该溶液。用乙酸乙酯(50mL)反萃取该盐水。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发以得到深色油状物。使用异己烷/乙酸乙酯1:1通过硅胶色谱法纯化该油状物，得到为无色胶状物的标题化合物(6.88g，92％)。
制备1d(6.88g，15.9mmol)的二氯甲烷溶液(200mL)并加入三氟乙酸(50mL)。反应混合物在室温下搅拌2小时。TLC显示反应完全。蒸发该溶液以得到褐色油状物。将其与甲苯(50mL)共沸，在真空下干燥所获油状物，以得到为褐色胶状物的(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯三氟乙酸盐(7.8g)。将((S)-1-氨基甲酰-2-甲基丙基)-氨基甲酸叔丁酯的乙腈溶液(300mL)冷却至0℃，随后加入N,N-二异丙基乙胺(13.8mL，79.7mmol)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(6.33g，16.7mmol)。反应物在0℃下搅拌15分钟，随后加入(S)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯三氟乙酸盐(ca.15.9mmol)的乙腈溶液(85mL)。反应物在0℃下再次搅拌20分钟，然后加热至室温并搅拌15小时。蒸发反应混合物，然后重溶于乙酸乙酯(250mL)。用水(150mL)冲洗该溶液，然后用硫酸钠干燥，过滤并蒸发以得到红色油状物。使用异己烷/乙酸乙酯7:3随后是异己烷/乙酸乙酯1:1通过硅胶色谱法对其进行纯化，得到为淡橘黄色无定形固体的标题化合物(8.2g，92％)。
制备1e(10.0g，18.5mmol)的无水二氯甲烷溶液(200mL)并加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(5mL，27.75mmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时，然后加入N,N-二异丙基乙胺(13.2mL，75.8mmol)，将反应混合物蒸发至干。残留物重溶于乙腈(200mL)并加入(2R,3R)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-甲基-庚-6-烯酸(5.04g，18.5mmol)的乙腈溶液(60mL)，随后加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(5.0g，26.4mmol)和1-羟基苯并三唑(4.4g，26.4mmol)。反应混合物在室温下搅拌15小时。蒸发以得到粘稠的黄色油状物。使用1:1乙酸乙酯/异己烷然后是3:2乙酸乙酯/异己烷通过硅胶色谱法纯化该油状物，得到为白色固体的标题产物(8.75g，69％)。
随后使用三乙胺(720μL，5.112mmol)和二叔丁基二碳酸酯(1.784g，8.179mmol)处理(R)-溴代-α-甲基苄胺(1.023g，5.112mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)。在室温下搅拌过夜，真空下去除挥发成分，使用一个50g Isolute柱并用连续梯度的异己烷/乙醚1:0至4:1洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，以得到为白色固体的标题化合物(1.552g，100％)。
1g(10.26g，0.0342mol.)和三丁基(乙烯基)锡(32.5g，30mL，0.103mol.)的甲苯溶液(175mL)用氮气吹扫30分钟，随后加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(2.38g，0.0034mol.)。将搅拌的混合物加热至60℃，持续16小时，随后冷却至室温。使用硅藻土(hyflo-supercel)过滤反应混合物，随后蒸发以得到深色油状物。使用异己烷/乙酸乙酯19:1通过硅胶色谱法纯化该油状物，得到为黄色油状物的标题化合物(6.95g，82％)。
制备1h(6.95g，28.1mmol.)的1,4-二氧六环溶液(30mL)，并加入氯化氢的1,4二氧六环溶液(4M，60mL)。反应混合物在室温下搅拌2小时，然后蒸发至干。将所获固体重溶于甲苯中并蒸发。用乙醚研磨该固体，随后通过倾析去除乙醚。真空下干燥该固体，得到为灰白色固体的标题化合物(4.96g，96％)。
制备1f(8.75g，12.75mmol)的四氢呋喃溶液(350mL)并加入锌粉末(8.44g，127.5mmol)，随后加入1M乙酸铵水溶液(90mL，90mmol)。剧烈搅拌反应混合物16小时，随后使用硅藻土过滤。在冰浴上冷却该溶液，随后加入氯化铵水溶液(350mL)。再次冷却，随后加入2M盐酸酸化至pH为1。分离两层，用乙酸乙酯(2x250mL)萃取水层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发以得到白色固体。将该固体与甲苯(3x200mL)共沸，随后在真空下干燥以得到白色固体(6.16g)，将其溶解于乙腈(400mL)中，随后加入(R)-1-(3-乙烯基-苯基)-乙胺盐酸盐(2.34g，12.75mmol)，然后加入N,N-二异丙基乙胺(8.9mL，51mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(6.8g，17.85mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时，然后蒸发以得到褐色胶状物。使用乙酸乙酯然后是1:4丙酮/乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化该胶状物，得到为膏状固体的标题化合物(5.51g，76％)。
在冰浴中冷却1j(0.50g，0.88mmol)的无水二氯甲烷溶液(20mL)，随后加入吡啶(92μL，1.14mmol)和叔丁基二甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(242μL，1.05mmol)。反应混合物在0℃下搅拌15分钟，然后加热至室温并搅拌1小时。蒸发反应混合物，使用乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题产物(477mg，80％)。
制备1k(477mg，0.7mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(250mL)并加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(43mg，0.07mmol)。将搅拌的反应混合物加热至80℃，持续1小时。将反应混合物冷却至室温，随后加入硅胶。搅拌混合物10分钟，然后蒸发，使用乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题产物(198mg，43％)。
在冰浴中冷却1l(198mg，0.3mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)，随后加入1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.5mL，1.5mmol)。将反应物加热至室温并搅拌1小时。使用饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)处理反应混合物并用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。使用硫酸钠干燥该提取物，过滤并蒸发。使用1:9丙酮/乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题产物(150mg，92％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ0.83(d，J＝6.5Hz，3H)，0.85(d，J＝6.5Hz，3H)，1.12-1.21(m，4H)，1.28(d，J＝7.1Hz，3H)，1.36(d，J＝6.9Hz，3H)，1.40-1.90(m，7H)，1.92-2.08(m，1H)，2.19-2.34(m，2H)，2.67-2.80(m，1H)，3.56-3.65(m，1H)，3.99-4.12(m，1H)，4.22(br d，J＝12.2Hz，1H)，4.75(d，J＝11.8Hz，1H)，4.87-4.99(m，1H)，5.12-5.24(m，1H)，5.40(d，J＝4.5Hz，1H)，6.14-6.33(m，2H)，7.10-7.35(m，5H)，7.88(d，J＝8.3Hz，1H)，8.55(d，J＝8.3Hz，1H)。LCMS(m/z)542.3[M+H]，Tr＝1.87min。
实施例2：(E)-(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-14-异丙基-2,11,17-三甲基-18-(2,2,2-三氟-乙氧基)-3,9,12,15,28-五氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八烷-1(26),21,23(27),24-四烯-4,10,13,16-四酮
将六甲基二硅氮烷(235μL，1.13mmol)的无水四氢呋喃溶液(4mL)冷却至-10℃，随后加入2.5M正丁基锂溶液(380μL，0.94mmol)。搅拌的混合物加热至0℃，持续10分钟，随后冷却至-78℃。滴加化合物1(102mg，0.188mmol)的无水二甲基甲酰胺(1.5mL)和无水四氢呋喃(1.5mL)溶液超过2分钟，随后加入2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(135μL，0.94mmol)。反应混合物在–78℃下于氮气气氛中搅拌，然后逐渐加热至室温。加入饱和的氯化铵水溶液(15mL)淬灭反应混合物。使用乙酸乙酯(2x15mL)萃取反应物。提取物用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用1:9丙酮/乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到无色胶状物(65mg)。通过反相色谱法进一步纯化该胶状物，使用一个10gC18柱并用2:3乙腈/水洗脱。用乙酸乙酯(2x15mL)萃取部分蒸发的组分。提取物用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到为白色固体的标题产物(17mg，30％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.92(d，J＝6.7Hz，3H)，0.96(d，J＝6.9Hz，3H)，1.32(d，J＝7.1Hz，3H)，1.39(d，J＝7.1Hz，3H)，1.50(d，J＝6.7Hz，3H)，1.74-1.85(m，1H)，1.86-2.08(m，3H)，2.10-2.40(m，3H)，2.57-2.78(m，2H)，3.19-3.31(m，1H)，3.49(app t，J＝6.7Hz，1H)，3.58-3.79(m，4H)，3.81-4.18(m，2H)，4.49(br d，J＝12.3Hz，1H)，5.03-5.17(m，1H)，5.32-5.47(m，1H)，6.14-6.30(m，1H)，6.37-6.72(m，4H)，7.06-7.30(m，4H)。LCMS(m/z)624.3[M+H]，Tr＝2.57min。
实施例3：(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-18-羟基-14-异丙基-2,11,17-三甲基-3,9,12,15,28-五氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八烷-1(26),23(27),24-三烯-4,10,13,16-四酮
制备化合物1(100mg，0.184mmol)的甲醇溶液(5mL)并加入10％钯碳催化剂(5mg)。将搅拌的混合物在氢气气氛下放置1.5小时。使用硅藻土和0.2μm滤器过滤反应混合物，蒸发以得到为白色固体的标题化合物(95mg，95％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.93(d，J＝7.1Hz，3H)，0.96(d，J＝7.1Hz，3H)，1.32(d，J＝6.7Hz，3H)，1.37-2.16(m，12H)，1.54(d，J＝6.9Hz，3H)，2.34-2.46(m，1H)，2.52-2.75(m，3H)，3.16-3.27(m，1H)，3.43-3.62(m，3H)，3.74(d，J＝11.8Hz，1H)，3.98-4.06(m，1H)，4.50(d，J＝13.2Hz，1H)，5.11-5.36(m，2H)，6.39-6.50(m，2H)，7.70(d，J＝8.5Hz，1H)，7.06-7.28(m，4H)。LCMS(m/z)544.3[M+H]，Tr＝1.91min。
实施例4
在0℃于氮气下将氢化钠(60％矿物油溶液，783mg，19.6mmol)的干四氢呋喃混悬液滴加至膦酰基乙酸三乙酯(3.38mL，19.6mmol)中。白色混悬液搅拌1小时，形成溶液，然后缓慢加入2,2-二甲基-4-戊烯醛(2.42mL，17.8mmol)，在0℃下搅拌所获绿色/黄色溶液，将其加热至室温。72小时后向该溶液中加入乙醇(1mL)，随后加入水(100mL)，用乙醚(2x200mL)萃取有机相。用水(200mL)冲洗合并的有机相，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，以得到残留物粗品。使用异己烷(144mL)，然后是异己烷/乙醚50:50(72mL)，然后是乙醚(48mL)通过硅胶色谱法进行纯化，得到为油状物的标题化合物(3.20g，99％)。
在室温于氮气下向干甲醇中的4a(3.20g，17.5mmol)缓慢加入镁粉(1.28g，52.7mmol)，同时监测温度的上升。加完后，在室温下搅拌该混合物过夜。随后，向反应物中再次加入镁粉(852mg，35.1mmol)并搅拌反应混合物2小时。使用2M盐酸将混合物自pH 10中和至pH 7，然后真空浓缩以得到残留物。在乙酸乙酯(300mL)和水(500mL)中混悬该残留物，分离两层。用乙酸乙酯(200mL)重新萃取水相，合并的有机相用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到为无色油状物的标题化合物(1.96g，61％)。
在四氢呋喃(35mL)、甲醇(9mL)和水(9mL)混合物中于室温下向4b(2.02g，11.0mmol)中加入氢氧化锂一水合物(1.38g，32.9mmol)，在室温下搅拌混合物1小时。随后再次加入氢氧化锂一水合物(460mg，11.0mmol)，搅拌反应混合物1小时。随后继续加入氢氧化锂一水合物(460mg，11.0mmol)，搅拌反应混合物30分钟。然后真空浓缩反应混合物，用水(200mL)稀释残留物，用乙醚(3x50mL)萃取有机相。水相用2M盐酸自pH 14酸化至pH 1，有机相用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。然后用硫酸钠干燥合并的乙酸乙酯有机相，过滤并真空浓缩，得到为油状物的预期产物(1.03g，60％)。
将1e(1.06g，2.00mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)在冰水浴中于氮气下冷却。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.591mL，4.00mmol)，将所获溶液搅拌1.5小时。用N,N-二异丙基乙胺(1.4mL，8.00mmol)淬灭反应，真空浓缩反应混合物以得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯，其时白色固体，无需进一步纯化即可使用。向前一步中生成的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯中加入4,4-二甲基-庚-6-烯酸(343mg，2.20mmol)的乙腈溶液(70mL)。向此混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.4mL，8.03mmol)，在冰水浴中冷却反应物，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.07g，2.80mmol)。然后搅拌该黄色溶液，加热至室温过夜。用2M盐酸(40mL)淬灭反应混合物并真空浓缩。向残留物中加入水(200mL)，用乙酸乙酯(3x150mL)萃取有机相。然后用盐水(100mL)和碳酸氢钠(200mL)冲洗合并的有机相。用硫酸镁干燥该有机相，过滤并真空浓缩以得到黄色油状物粗品(2.27g)。通过硅胶色谱法使用异己烷/乙酸乙酯90:10(300mL)随后是异己烷/丙酮50:50(300mL)、异己烷/丙酮0:100对其进行纯化，得到为无色油状物的标题化合物(1.10g，97％)。
制备4d(1.10g，1.94mmol)的四氢呋喃溶液(40mL)，加入锌粉(2.79g，42.6mmol)，随后加入乙酸铵(2.24g，29.0mmol)的水溶液(10mL)。反应混合物在室温下搅拌24小时。加入饱和的硫酸氢钾水溶液(pH 2，30mL)和乙酸乙酯(50mL)，使用硅藻土过滤该混悬液并用乙酸乙酯冲洗。分离两层。用乙酸乙酯(3x100mL)萃取水相。用盐水(250mL)冲洗合并的有机层，硫酸钠干燥，过滤并蒸发以得到无色胶状物。将残留物与甲苯(3x100mL共沸)，得到为白色固体的标题化合物(816mg，96％)。
将4e(439mg，1.00mmol)混悬于乙腈(35mL)中，加入(R)-1-(3-乙烯基-苯基)-乙胺盐酸盐(202mg，1.10mmol)，随后加入N,N-二异丙基乙胺(700μL，5.00mmol)，在冰水浴中冷却混合物，加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(532mg，1.40mmol)。搅拌反应混合物，加热至室温，持续72小时。向反应混合物中加入2M盐酸(20mL)，真空浓缩混合物以得到残留物。用乙酸乙酯(3x100mL)萃取水层，用盐水和碳酸氢钠(100mL)冲洗合并的乙酸乙酯层，硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。通过硅胶色谱法使用异己烷/乙酸乙酯50:50随后是纯乙酸乙酯对该残留物进行纯化，得到标题化合物(402mg，71％)。
在4f(402mg，0.71mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(210mL)中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(45mg，0.07mmol)，将反应混合物在80℃加热1小时。随后将该混合物冷却至室温，真空浓缩。使用乙酸乙酯至乙酸乙酯/丙酮75:25的梯度通过硅胶色谱法对该残留物进行纯化。收集不纯产物(240mg)，使用乙酸乙酯通过硅胶色谱法进一步纯化。再纯化后，收集含有少量杂质的产物(43mg)。通过乙醚研磨去除杂质，得到为白色固体的标题化合物(30mg，8％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.89(d，J＝6.7Hz，3H)，0.92(d，J＝6.7Hz，3H)，0.96(S，3H)，0.97(S，3H)，1.35(d，J＝6.9Hz，3H)，1.50(d，J＝7.1Hz，3H)，1.59-1.83(m，3H)，1.85-2.00(m，3H)，2.09(d，J＝7.1Hz，2H)，2.15-2.25(m，1H)，2.31-2.44(m，1H)，2.78(td，J＝2.7，12.7Hz，1H)，3.40-3.72(m，2H)，4.05-4.17(m，1H)，4.34(br d，J＝13.2Hz，1H)，5.05(q，J＝7.1Hz，1H)，5.35(q，J＝7.1Hz，1H)，6.19-6.32(m，1H)，6.37(d，J＝15.8Hz，1H)，7.15(d，J＝7.6Hz，1H)，7.21-7.29(m，2H)，7.37(d，J＝7.8Hz，1H)。LCMS(m/z)540.3[M+H]，Tr＝2.41min。
实施例5
6-溴-3-氯-异喹啉(8.0g，33mmol)和三丁基-(1-乙氧基乙烯基)-锡(14.88g，14mL，41.2mmol)的甲苯溶液(100mL)用氮气脱气30分钟。加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(1.16g，1.65mmol，5mol％)，在60℃加热反应混合物20小时。将反应混合物冷却至室温，过滤该混合物并蒸发滤液。使用异己烷/乙酸乙酯20:1至10:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色固体的标题化合物(7.1g，92％)。
5a(7.1g，30mmol)的1,4-二氧六环(60mL)和2M盐酸(30mL)溶液在室温下搅拌30分钟。蒸干大部分溶剂，将残留物在乙酸乙酯和水之间分配。合并有机提取物，用水和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。用5％乙醚的异己烷溶液研磨残留物，收集所获固体，干燥，以得到为白色固体的标题化合物(6.0g，97％)。
在氮气下搅拌5b(1.72g，8.3mmol)的四氢呋喃溶液(40mL)。加入钛酸四乙酯(3.8g，3.45mL，16.6mmol，工业级)，随后加入(R)-(+)-2-甲基-丙亚磺酰胺(1.11g，9.2mmol)，反应混合物在60℃下于氮气中搅拌8小时。再次加入(R)-(+)-2-甲基-丙亚磺酰胺(190mg，1.67mmol)，反应混合物在65℃下继续搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，加入乙酸乙酯和盐水。使用硅藻土(Celite)过滤混悬液并用乙酸乙酯冲洗滤板。分离乙酸乙酯层，用盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯7:3至3:7的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色固体的标题化合物(2.2g，86％)。
将(1S,2R)-(-)-顺-1-氨基-2-茚醇(60mg，0.4mmol)、二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(122mg，0.2mmol)和粉状分子筛(2g)的混合物悬于无水2-丙醇(9mL)中并在氮气下搅拌。混悬液在90℃下加热20分钟。将反应混合物冷却至40℃，加入5c(1.23g，4mmol)的2-丙醇溶液(28mL)，随后加入叔丁醇钾(122mg，1.1mmol)的2-丙醇溶液(10mL)。反应混合物在40℃下搅拌2小时，然后冷却。将该混合物直接倒入硅胶柱中并用乙酸乙酯洗脱，蒸发后得到为褐色胶状物的标题化合物(1.19g，96％)。
在一个微波管中加入5d(0.66g，2.11mmol)、三丁基(乙烯基)锡(1.85mL，6.35mmol)和四(三苯基膦)钯(488mg，0.42mmol)的1,4-二氧六环溶液(10.5mL)混合物并封口。在一个微波反应器中于160℃下照射并搅拌反应混合物，持续40分钟。在相同规模和条件下进行第二次反应，合并反应混合物并蒸发。使用1:3至1:0乙酸乙酯/异己烷的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为褐色胶状物的标题化合物(1g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.27(S，9H)，1.62(d，J＝7.7Hz，3H)，3.53(br s，1H)，4.69-4.77(m，1H)，5.51(dd，J＝10.7，1.3Hz，1H)，6.39(dd，J＝17.4，1.3Hz，1H)，6.95(dd，J＝17.2，10.7Hz，1H)，7.55-7.58(m，2H)，7.75(S，1H)，7.95(d，J＝8.3Hz，1H)，9.20(S，1H)。LCMS(m/z)303.0[M+H]，Tr＝1.48min。
将5e悬于4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(17mL，68mmol)中并加入甲醇(34mL)。反应混合物搅拌90分钟，然后蒸发。将残留物通过SCX柱，用甲醇随后是甲醇氨洗脱。收集碱性组分并蒸发，得到为米黄色固体的标题化合物(530mg，2步后为63％)。
制备1-((1R,5S)-10,10-二甲基-3,3-二氧-3λ*6*-硫代-4-氮杂-三环[5.2.1.0*1,5*]癸-4-基)-1-丙酮(6.0g，22.1mmol)的无水二氯甲烷溶液(24mL)，加入叔丁基二甲基硅烷三氟甲磺酸酯(5.0mL，22.1mmol)，随后加入无水三乙胺(3.54mL，25.4mmol)。反应混合物在室温于氮气气氛下搅拌15小时。得到深色溶液，蒸发以得到油状物。将该油状物溶解于无水二氯甲烷(22mL)中，随后在78℃于氮气气氛下将该溶液滴加至丁烯醛(3.66mL，44.2mmol)和四氯化钛(1M二氯甲烷溶液，44.2mL，44.2mmol)的二氯甲烷溶液(22mL)中。反应混合物在-78℃下搅拌1小时，随后加入氯化铵溶液(30mL)。将搅拌的混合物加热至室温，随后分离两层。用二氯甲烷(2x25mL)萃取水层。合并有机层，硫酸钠干燥，过滤并蒸发以得到褐色油状物。使用异己烷/乙酸乙酯4:1通过硅胶色谱法纯化该油状物，得到为无色固体的标题化合物(6.7g，89％)。
制备5g(4.15g，12.1mmol)的无水二氯甲烷溶液(80mL)，加入1,8-双(二甲基氨基)萘(7.78g，36.3mmol)，随后加入三甲基氧鎓四氟硼酸盐(3.6g，24.2mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时。用甲醇(3mL)处理反应混合物并搅拌5分钟，随后加入盐酸(2M，200mL)和乙酸乙酯(250mL)。过滤该混合物以去除不溶性固体，并分离两层。用乙酸乙酯(2x100mL)萃取水层。合并有机层，用盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发，以得到为浅褐色固体的标题化合物(4.80g，100％)。
将氢氧化锂水溶液(2M，50mL，100mmol)加入至搅拌的5h(4.80g，12.1mmol)四氢呋喃溶液(130mL)中。反应混合物加热至60℃，持续15小时。将反应混合物冷却至室温，随后部分蒸干并加入盐酸(2M，150mL)。用乙酸乙酯(3x50mL)萃取混合物。硫酸钠干燥提取物，过滤并蒸发，得到褐色油状物(3.5g)。使用异己烷/乙醚1:1通过硅胶色谱法纯化该油状物，得到为无色油状物的标题化合物(1.132g，59％)。
用三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(1.2mL，6.814mmol)处理(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(2.174g，4.088mmol)的无水二氯甲烷(50mL)冷(0℃)溶液。在0℃下1小时后，用处理N,N-二异丙基乙胺(2.4mL，13.628mmol)反应混合物，真空去除挥发性成分，得到为黄色泡沫的相应胺。向此胺中加入5i(539.0mg，3.407mmol)、N,N-二异丙基乙胺(2.4mL，13.628mmol)和乙腈(50mL)。将反应混合物冷却至0℃，用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.814g，4.770mmol)处理。在室温下搅拌过夜后，用1M盐酸(100mL)淬灭该反应。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱并用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:4的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为淡黄色固体的标题化合物(2.193g，93％)。
随后用锌粉(1.920g，29.365mmol)和乙酸铵(1.543g，20.025mmol)水溶液(5mL)处理5j(763.4mg，1.335mmol)的四氢呋喃溶液(25mL)。过夜搅拌后，使用硅藻土(Celite)过滤反应物，并用2M盐酸淬灭。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。与甲苯共沸去除残留的乙酸，得到为淡橘黄色固体的标题化合物(566.4mg，96％)。
在室温于氮气下搅拌5k(246mg，0.6mmol)、(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙胺二盐酸化物(162mg，0.6mmol)和N,N-二异丙基乙胺(387mg，0.52mL，3mmol)的乙腈溶液(20mL)。加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(320mg，0.84mmol)，在室温下搅拌反应混合物4小时。蒸干溶剂。用乙酸乙酯和饱和的碳酸氢钠溶液稀释残留物。在混悬液中加入少量甲醇(5mL)，以得到两个透明层。分离有机层，用水和盐水冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用甲醇/二氯甲烷1:20通过硅胶色谱法纯化残留物。用乙醚研磨残留物，收集所获固体，用乙醚冲洗并干燥，以得到为浅褐色固体的标题化合物(238mg，64％)。
在室温于氮气下搅拌5l(91mg，0.15mmol)的甲苯溶液(45mL)。加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(10mg，0.015mmol)，在氮气下将反应混合物加热回流2小时。再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(10mg，0.015mmol)，在氮气下将反应混合物加热回流6小时。将反应混合物冷却至室温，加入硅胶，蒸干反应混合物。使用乙酸乙酯/丙酮20:1至5:2的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物。用乙醚研磨残留物，收集所获固体，用乙醚/异己烷(1:1)冲洗并干燥，得到为白色固体的标题化合物(23mg，26％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，1.04(d，J＝6.7Hz，3H)，1.44(d，J＝7.4Hz，3H)，1.53(d，J＝6.9Hz，3H)，1.61(d，J＝6.9Hz，3H)，1.68-2.20(m，5H)，2.62-2.74(m，2H)，3.35-3.43(m，1H)，3.44(S，3H)，3.72(d，J＝12.5Hz，1H)，3.88-3.92(m，2H)，4.23(dd，J＝8.9，6.0Hz，1H)，4.55-4.60(m，1H)，5.30-5.37(m，1H)，5.80-5.90(m，1H)，6.38(d，J＝8.9Hz，1H)，6.43(d，J＝7.6Hz，1H)，6.93(d，J＝16.3Hz，1H)，7.24(dd，J＝16.3，8.7Hz，1H)，7.45(d，J＝8.7Hz，1H)，7.56(d，J＝8.5Hz，1H)，7.69(S，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，9.17(S，1H)。LCMS(m/z)579.3[M+H]，Tr＝1.40min。
实施例6
在室温和压力下对含有10％钯碳催化剂(10mg)的化合物5(11mg，0.019mmol)乙酸乙酯溶液(10mL)进行加氢，持续3小时。通过助滤剂过滤反应混合物并用乙酸乙酯冲洗滤板。蒸干滤液，使用乙酸乙酯/丙酮10:1至2:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物。用乙酸乙酯/乙醚(1:5)研磨残留物，得到为白色固体的标题化合物(2.0mg，18％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.93(d，J＝6.7Hz，3H)，0.98(d，J＝6.7Hz，3H)，1.39(d，J＝6.9Hz，3H)，1.55-2.70(m，8H)，1.95-2.50(m，5H)，2.64-2.73(m，2H)，2.95-3.08(m，2H)，3.35-3.42(m，2H)，3.53(S，3H)，3.61(d，J＝12.1Hz，1H)，4.06-4.11(m，1H)，4.50-4.57(m，1H)，5.25-5.32(m，1H)，5.64-5.70(m，1H)，6.39(d，J＝8.3Hz，1H)，6.47-6.51(m，1H)，7.21-7.28(m，1H)，7.41(d，J＝8.8Hz，1H)，7.62(S，1H)，7.69(S，1H)，7.92(d，J＝8.8Hz，1H)，9.15(S，1H)。LCMS(m/z)581.3[M+H]，Tr＝1.38min。
实施例7
将7-溴-2-氯-喹喔啉(1.46g，6.00mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(2.71g，2.54mL，7.50mmol)甲苯溶液(21mL)的混合物脱气20分钟。加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(427mg，0.60mmol)，在氮气下搅拌反应混合物并在80℃下加热，持续19小时，随后冷却。蒸干挥发性成分，将残留物悬于1,4-二氧六环(15mL)中，加入2M盐酸水溶液(15mL)，搅拌反应混合物45分钟，随后蒸发以去除挥发性成分。用水稀释残留物，并用乙酸乙酯(2x)萃取，用盐水冲洗合并的有机提取物，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。使用掺有10％w/w碳酸钾的硅胶通过色谱法纯化该产物，以异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的梯度进行洗脱，得到为黄色固体的标题化合物(836mg，56％)。
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(12mg，0.019mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(17mg，0.045mmol)悬于脱气的水(7.5mL)中，用氮气将该混合物脱气15分钟。该混合物在70℃于氮气下搅拌90分钟。将所获浑浊橘黄色混合物冷却至室温。加入固体7a(948mg，3.78mmol)、脱气的四氢呋喃(7.5mL)和甲酸钠(1.29g，18.9mmol)，反应混合物用氮气脱气5分钟。在40℃下剧烈搅拌反应混合物3小时，冷却。然后用乙酸乙酯稀释，用水(2x)冲洗该混合物。用乙酸乙酯反萃取水洗液，用盐水冲洗合并的有机相，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。以异己烷/乙酸乙酯2:1洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为紫色固体的标题化合物(814mg，85％)。
在氮气下向7b(490mg，1.94mmol)、N,N-二己基甲胺(416mg，457μL，2.13mmol)和三丁烯酸叔丁酯(648mg，739μL，4.56mmol)的甲苯溶液(19mL)混合物中加入双(三叔丁基膦)钯(0)(41mg，0.080mmol)，搅拌反应混合物，加热回流5小时，冷却。蒸干混合物，然后使用异己烷/乙酸乙酯4:1至3:2的梯度通过硅胶色谱法进行纯化，得到为黄色油状物的标题化合物(367mg，60％)。
制备1e(804mg，1.51mmol)的四氢呋喃溶液(37.7mL)，加入锌粉(2.18g，33.3mmol)，随后加入乙酸铵(1.75g，22.7mmol)水溶液(9.4mL)。在室温下搅拌反应混合物72小时。反应物通过硅藻土(hyflo-supercel)进行过滤并用乙酸乙酯和饱和的硫酸氢钾水溶液冲洗。用1M盐酸(3mL)处理该混合物，分离两层。用乙酸乙酯(2x100mL)萃取水层。合并有机层，用盐水冲洗，过滤并蒸发以得到无色胶状物。将残留物与甲苯(3x200mL)共沸，得到为白色固体的标题化合物(605mg，定量产量)。
在搅拌的7d(456mg，1.14mmol)和(E)-4-[3-((R)-1-羟基-乙基)-喹喔啉-6-基]-3-丁烯酸叔丁酯(358mg，1.14mmol)的二氯甲烷溶液(22mL)中加入含有大约20％水的1-羟基苯并三唑(270mg，1.60mmol)，随后加入4-二甲基氨基吡啶(139mg，1.14mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(306mg，1.60mmol)。反应物搅拌18小时，然后用二氯甲烷稀释，用饱和的氯化铵溶液(2x)冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯3:1至0:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色泡沫的标题化合物(335mg，45％)。
在0℃于氮气下向搅拌的7e(309mg，0.444mmol)二氯甲烷溶液中加入(4.5mL)三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(346mg，359μL，1.56mmol)，将反应混合物加热至室温，持续2.5小时。加入N,N-二异丙基乙胺(164mg，221μL，1.27mmol)，再次搅拌反应混合物10分钟，蒸干，然后悬于乙腈(45mL)中。将搅拌的化合物冷却至0℃，加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(236mg，0.622mmol)和N,N-二异丙基乙胺(229mg，309μL，1.77mmol)。90分钟后，用饱和的氯化铵溶液淬灭反应，蒸干混合物以去除有机挥发性成分。用二氯甲烷稀释该残留物，分离有机层，用饱和的碳酸氢钠(2x)和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。以乙酸乙酯/丙酮1:0to9:1的梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化该残留物。通过反相制备HPLC使用乙腈/水3:7进一步纯化该残留物，得到为白色固体的标题化合物(7.6mg，通过2步获得3％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.00(d，J＝6.7Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.62(d，J＝7.1Hz，3H)，1.66-1.75(m，2H)，1.77(d，J＝6.9Hz，3H)，1.91-2.05(m，3H)，2.72-2.82(m，1H)，2.98-3.08(m，1H)，3.38-3.41(m，1H)，3.78-3.84(m，1H)，4.25(d，J＝10.5Hz，1H)，4.41(br d，J＝11.3Hz，1H)，5.68(q，J＝7.1Hz，1H)，6.09(q，J＝6.9Hz，1H)，6.47(d，J＝16.3Hz，1H)，6.55-6.63(m，1H)，7.68(S，1H)，7.99(S，2H)，8.84(S，1H)。LCMS(m/z)523.2[M+H]，Tr＝1.75min。
实施例8和9
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(3mg，0.005mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(4.4mg，0.012mmol)悬于脱气的水(2mL)中，将混合物用氮气脱气15分钟。混合物在70℃于氮气下搅拌90分钟。将所获黄色溶液冷却至室温。加入1-(3-氯-异喹啉-6-基)-乙酮(206mg，1mmol)、甲酸钠(340mg，5mmol)和脱气的四氢呋喃(1mL)，反应混合物用氮气脱气5分钟。在40℃下剧烈搅拌反应混合物2.5小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用水和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯4:1至2:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(193mg，92％)。
1,4-二氧六环(5mL)用氮气脱气，加入8a(208mg，1mmol)、三丁基(乙烯基)锡(951mg，0.9mL，3mmol)和双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(70mg，0.1mmol)，在微波反应器中于150℃下加热反应混合物1小时。再次加入三丁基(乙烯基)锡(0.3mL，1mmol)和双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(70mg，0.1mmol)，在微波反应器中于150℃下加热反应混合物1小时。将反应混合物冷却至室温，用助滤剂过滤混合物，用乙酸乙酯冲洗滤板。蒸干滤液，使用异己烷/乙酸乙酯4:1至2:1的梯度，随后使用异己烷/乙酸乙酯3:1，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(100mg，50％)。
在0℃于氮气下搅拌1e(10.6g，20mmol)的二氯甲烷溶液(300mL)。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(6.66g，5.4mL，30mmol)，在0℃下搅拌反应混合物1小时。加入冷的饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，在0℃下搅拌反应混合物15分钟。分离有机层，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(20mmol)，在下一步中使用其粗品。在0℃于氮气下搅拌(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(20mmol)的乙腈溶液(240mL)。加入(E)-3-戊烯酸(2.20g，2.2mL，22mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(3.82g，20mmol，以不低于20wt.％水湿润)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(5.38g，28mmol)，在0℃下搅拌反应混合物15分钟，然后在室温下搅拌20小时。蒸干溶剂，在乙酸乙酯和水之间分配残留物。合并有机提取物，用水和盐水冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯3:1至纯乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(9.0g，88％)。
在室温于氮气下搅拌8c(9.0g，17.5mmol)的四氢呋喃溶液(300mL)。加入锌粉(25.0g，385mmol)，随后加入乙酸铵(20.2g，263mmol)水溶液(200mL)。在室温于氮气下搅拌反应混合物18小时。通过硅藻土(Celite)过滤反应混合物，用水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)冲洗滤板。分离有机层，蒸发溶剂至大约100mL，用水(100mL)萃取该溶液。合并水层，加入饱和氯化铵溶液(150mL)，用2M盐酸水溶液将该溶液酸化至pH 1。用乙酸乙酯萃取该溶液，合并有机提取物，用盐水冲洗，无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将残留物与甲苯(3x)共蒸发，得到为白色固体的(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-3-戊烯酰胺)-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸(5.7g，85％)，将其用于下一步反应。在室温于氮气下搅拌(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-3-戊烯酰胺)-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸(5.16g，13.5mmol)的二氯甲烷(280mL)和四氢呋喃(20mL)溶液。加入(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(2.69g，13.5mmol)，随后加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(3.63g，18.9mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(1.64g，13.5mmol)，反应混合物在室温下搅拌6小时。加入二氯甲烷(200mL)，用柠檬酸水溶液(pH 2-3)冲洗该溶液。分离有机层，用水和盐水冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。用异己烷/乙酸乙酯3:1至纯乙酸乙酯的梯度，随后使用异己烷/乙酸乙酯1:8，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(3.91g，51％)。
在室温于氮气下搅拌8d(1.13g，2mmol)的甲苯溶液(600mL)15分钟。加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(125mg，0.2mmol)，在氮气下将反应混合物加热回流30分钟。再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(125mg，0.2mmol)，加热回流反应混合物30分钟。将反应混合物冷却至室温。蒸干大部分溶剂，加入硅胶，并蒸干溶剂。使用乙酸乙酯/丙酮9:1至3:2的梯度，随后使用乙酸乙酯/甲醇40:1，通过硅胶色谱法纯化残留物。用乙酸乙酯/乙醚(1:4)研磨残留物，收集所获固体，用乙酸乙酯/乙醚(1:4)冲洗，干燥，得到化合物9和化合物8大约10:1的混合物，为浅褐色固体(245mg)。通过反相制备HPLC纯化该混合物的样品，得到为白色固体的化合物8(4mg)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.01(d，J＝6.5Hz，3H)，1.02(d，J＝6.5Hz，3H)，1.37(d，J＝7.1Hz，3H)，1.65(d，J＝6.5Hz，3H)，1.70-2.15(m，5H)，2.95-3.05(m，1H)，3.70-3.76(m，1H)，4.03-4.10(m，2H)，4.12(d，J＝8.3Hz，1H)，5.64(q，J＝7.1Hz，1H)，6.10-6.20(m，2H)，6.98(d，J＝11.3Hz，1H)，7.65(d，J＝8.5Hz，1H)，7.93(S，1H)，8.05-8.10(m，2H)，9.21(S，1H)。LCMS(m/z)522.3[M+H]，Tr＝1.25min。
化合物9，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.97(d，J＝6.9Hz，3H)，0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，1.53(d，J＝6.9Hz，3H)，1.71(d，J＝6.9Hz，3H)，1.75-2.70(m，6H)，3.20-3.40(m，2H)，3.63-3.77(m，2H)，4.23-4.29(m，1H)，4.53-5.57(m，1H)，5.65-5.76(m，1H)，6.04(q，J＝6.7Hz，1H)，6.38-6.53(m，3H)，6.72(d，J＝16.3Hz，1H)，7.39(d，J＝8.3Hz，1H)，7.55(S，1H)，7.72(S，1H)，7.92(d，J＝8.3Hz，1H)，9.13(S，1H)。LCMS(m/z)522.0[M+H]，Tr＝1.40min。
实施例10
使用3-丁烯酸代替4,4-二甲基-庚-6-烯酸，以与4d相同的方法制备10a，收率为66％。
使用(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯代替(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(4,4-二甲基-6-庚烯酰氧基)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯，以与4e相同的方法制备10b，收率为84％。
使用(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸代替(S)-1-{(S)-2-[(S)-3-甲基-2-((E)-3-戊烯酰胺)丁酰胺]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸，以与8d相同的方法制备10c，收率为84％。
使用(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙酯代替(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-4-己烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙基]-酰胺，以与化合物5相同的方法制备化合物9，收率为9％。
在室温和压力下对含有10％钯碳催化剂(15mg)的化合物9(16mg，0.03mmol)的乙酸乙酯(5mL)和四氢呋喃(2mL)溶液进行加氢，持续3小时。使用助滤剂过滤反应混合物，用乙酸乙酯冲洗滤板。蒸干滤液，用乙醚(2x2mL)研磨残留物，干燥所获固体，得到为灰白色固体的标题化合物(7.6mg，48％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.90(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.5Hz，3H)，1.50(d，J＝7.1Hz，3H)，1.68(d，J＝6.5Hz，3H)，1.60-2.40(m，9H)，2.70-3.10(m，3H)，3.68-3.75(m，1H)，3.90(d，J＝11.8Hz，1H)，4.32-4.37(m，1H)，4.44-4.49(m，1H)，5.83-5.92(m，1H)，6.05-6.11(m，2H)，6.33(d，J＝7.8Hz，1H)，7.34(S，1H)，7.36(d，J＝8.3Hz，1H)，7.80(S，1H)，7.93(d，J＝8.3Hz，1H)，9.17(S，1H)。LCMS(m/z)524.3[M+H]，Tr＝0.59min。
实施例11和12
在0℃于氮气下向搅拌的1e(10.6g，20.0mmol)二氯甲烷溶液(400mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(6.67g，5.43mL，30.0mmol)，在0℃下搅拌反应混合物2小时。加入N,N-二异丙基乙胺(10.3g，13.9mL，80.0mmol)，将混合物加热至室温。蒸干挥发性成分，将残留物悬于乙腈(250mL)中。在氮气覆盖下将搅拌的混合物冷却至0℃，随后加入N,N-二异丙基乙胺(10.3g，13.9mL，80mmol)和3-丁烯酸(1.89g，1.86mL，4.40mmol)，随后分批添加2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(10.6g，28.0mmol)。将反应混合物加热至室温，搅拌18小时，随后蒸干。用乙酸乙酯稀释残留物，随后用饱和的碳酸氢钠溶液、水、2M盐酸、水、盐水按顺序冲洗，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯和(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-2-丁烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯大约1:1的混合物，为橘黄色泡沫(7.23g，72％)。
向搅拌的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯和(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-2-丁烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(～1:1，0.99g，2.00mmol)的四氢呋喃溶液(40mL)混合物中加入锌粉(2.86g，44.0mmol)和乙酸铵(2.31g，30.0mmol)水溶液(25mL)。反应混合物加热至室温并搅拌18小时，然后用乙酸乙酯稀释，过滤该混合物。自滤液中分离水层，用等量饱和氯化铵溶液稀释，然后用2M盐酸将其酸化至pH 1。用乙酸乙酯(2x)萃取水层，用盐水冲洗合并的有机层，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将残留物与甲苯(3x)共沸，得到标题化合物的混合物(～1:1，466mg，63％)，为黄色泡沫。
在室温于氮气下搅拌11a和12b(～1:1，250mg，0.68mmol)的乙腈(20mL)混合物。加入(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙胺二盐酸化物(136mg，0.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(323mg，0.44mL，2.5mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(266mg，0.7mmol)，在室温下搅拌反应混合物18小时。蒸干溶剂。用乙酸乙酯稀释残留物，用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水冲洗该溶液。该有机提取物用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。使用乙酸乙酯至甲醇/乙酸乙酯1:5的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙基]-酰胺和(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-2-丁烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙基]-酰胺大约1:1的混合物，为白色固体(153mg，56％)，不需进一步纯化即可将其用于下一步反应。
在室温于氮气下搅拌(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙基]-酰胺和(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-2-丁烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸[(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙基]-酰胺的混合物(～1:1，150mg，0.27mmol)甲苯溶液(70mL)。加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(17mg，0.027mmol)，反应混合物在氮气下加热回流90分钟。再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(17mg，0.027mmol)，反应混合物在氮气下加热回流90分钟。将反应混合物冷却至室温，加入硅胶，蒸干溶剂。使用乙酸乙酯至乙酸乙酯/丙酮1:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物。使用甲醇/乙酸乙酯1:4通过制备薄层色谱，随后使用二氯甲烷/甲醇20:1通过硅胶色谱法进一步纯化该残留物，得到标题化合物。为白色固体的化合物11(1.3mg，1％)：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，1.61(d，J＝7.1Hz，3H)，1.66(d，J＝7.1Hz，3H)，1.80-2.05(m，5H)，2.71-2.82(m，1H)，2.99-3.05(m，1H)，3.32-3.43(m，1H)，3.64-3.75(m，1H)，4.27(d，J＝10.1Hz，1H)，4.40-4.53(m，2H)，5.12(q，J＝7.1Hz，1H)，5.62(q，J＝7.1Hz，1H)，6.47-6.56(m，1H)，6.62(d，J＝15.8Hz，1H)，7.43(S，1H)，7.61(dd，J＝8.5，1.6Hz 1H)，7.74(S，1H)，8.05(d，J＝8.5Hz，1H)，9.13(S，1H)。LCMS(m/z)521.3[M+H]，Tr＝0.97min。
为白色固体的化合物12(1.7mg，1.2％)：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.98(d，J＝6.7Hz，3H)，1.03(d，J＝6.7Hz，3H)，1.47(d，J＝7.1Hz，3H)，1.60(d，J＝6.9Hz，3H)，1.65-2.16(m，5H)，2.81-2.89(m，1H)，3.61-3.69(m，1H)，4.04(d，J＝6.9Hz，1H)，4.30-4.36(m，1H)，4.75(d，J＝11.6Hz，1H)，5.23(q，J＝7.1Hz，1H)，5.90(q，J＝6.9Hz，1H)，6.36(d，J＝13.1Hz，1H)，6.92(d，J＝13.1Hz，1H)，7.65(d，J＝8.5Hz 1H)，7.88(S，1H)，8.05(d，J＝8.5Hz 1H)，8.46(S，1H)，9.16(S，1H)。LCMS(m/z)507.2[M+H]，Tr＝0.95min。
实施例13
使用冰浴冷却(S)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-2,2,2-三氟-乙胺盐酸盐(AsibaPharmatech，Edison，NJ，USA，397mg，1.16mmol)的二氯甲烷(10mL)混悬液。加入三乙胺(985μL，3.48mmol)，搅拌反应物直至观察到形成均匀溶液。然后加入二碳酸二叔丁酯(380mg，1.74mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，将反应物搅拌过夜。加入二碳酸二叔丁酯(127mg，0.58mmol)，继续搅拌反应物6小时。加入二碳酸二叔丁酯(253mg，1.16mmol)与分子筛，将反应物搅拌过夜。用水和盐水冲洗反应物，用无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。使用1:0至7:3异己烷/乙酸乙酯的逐步梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为橘黄色固体的标题化合物(343mg，73％)。
在装有搅拌子和温度计且含有镁屑(3.02g，0.124mol)的3颈烧瓶中，于氮气气氛下加入无水四氢呋喃(105mL)。向反应物中加入碘单晶，随后加入1-氯-3-甲基-2-丁烯(2mL，17.75mmol)。反应物搅拌20分钟，直至溶液中的所有颜色均消失。加入1-氯-3-甲基-2-丁烯(5.57mL，49.45mmol)。观察到温度逐渐升高，直至反应物出现回流。搅拌反应物1小时，回复至室温。然后将反应物通过套管转移至含有固态二氧化碳(50g)的烧瓶中。搅拌反应物2小时。加入冷却的冰浴，用2M盐酸淬灭反应物。用乙醚萃取反应混合物。然后用无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。使用自1:0至9:1异己烷/乙酸乙酯的渐变梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为淡黄色油状物的标题化合物(2.69g，35％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.35(S，6H)，5.10-5.21(m，2H)，6.07(dd，J＝17.6,10.5Hz，1H)。
将13a(343mg，0.846mmol)和13b(106mg，0.931mmol)置于一个微波容器中，并溶于乙腈(3mL)。加入乙酸钯(II)(19mg，0.0846mmol)、三(邻甲苯基)膦(51mg，0.169mmol)和三乙胺(236μL，1.69mmol)，密封该容器，然后在微波中，使用固定保留时间，在100℃高吸收下照射30分钟。去除溶剂，将残留物溶于水和乙酸乙酯的混合物中。分离两相，用乙酸乙酯萃取水相。然后用无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯自1:0至6:4的渐变梯度通过硅胶色谱法纯化残留物。将分离的物质使用相同条件进行第二次纯化，得到为淡黄色油状物的标题化合物(142mg，38％)。
在氮气气氛下将(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸乙酯(210mg，0.486mmol)和13c(142mg，0.324mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，使用冰浴进行冷却。然后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(203mg，0.535mmol)和N,N-二异丙基乙胺(423μL，2.43mmol)，将反应物缓慢加热至室温并保持搅拌过夜。用水稀释反应物并用乙酸乙酯萃取。合并的有机相使用无水硫酸钠进行干燥，过滤并浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯自1:0至0:1的渐变梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到被残留溶剂污染的产物。加入甲苯并浓缩该溶液，得到为橘黄色固体的标题化合物(79mg，29％)。
将13d(79mg，0.0925mmol)溶于四氢呋喃(2mL)并使用冰浴进行冷却。加入甲醇(1mL)和水(1mL)，随后加入氢氧化锂一水合物(15mg，0.37mmol)。将反应物保持搅拌1小时。加入1M盐酸，直至溶液为pH 2。去除溶剂，按顺序将所获固体与甲醇、乙腈以及甲苯共沸，得到为黄色固体的标题化合物(67mg，100％)。
将13e(66mg，0.0916mmol)溶于4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(2mL)中并保持搅拌30分钟。去除溶剂，用乙醚研磨所获固体并干燥，得到为淡黄色固体的标题化合物(50mg，83％)。
在氮气气氛下将13f(50mg，0.0761mmol)溶于二氯甲烷(76mL)，并使用冰浴进行冷却。加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(58mg，0.152mmol)和N,N-二异丙基乙胺(53μL，0.304mmol)，将反应物缓慢加热至室温，保持搅拌过夜。去除溶剂，使用7:3异己烷/丙酮通过硅胶色谱法纯化残留物。使用异己烷/丙酮自1:0至1:1的渐变梯度通过硅胶色谱法再次纯化残留物。然后使用乙腈/水自1:4至1:0的连续梯度以20mL/min的流速通过配有Phenomenex Gemini 10μ110A，250x21.2mm色谱柱的HPLC系统洗脱残留物，得到为固体的标题化合物(7mg，15％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86-1.08(m，6H)，1.25-1.54(m，8H)，1.57-1.81(m，5H)，1.88-2.00(m，1H)，2.37-2.80(m，1H)，3.32-3.65(m，1H)，3.69-3.97(m，1H)，4.22-4.39(m，1H)，4.50-4.68(m，1H)，5.74-6.05(m，2H)，6.22-6.39(m，1H)，6.44-6.54(m，1H)，6.63-6.76(m，1H)，7.45(app t，J＝8.5Hz，1H)，7.56(app t，J＝7.6Hz，1H)，7.81(d，J＝8.3Hz，1H)，8.19(S，1H)，8.76-9.09(m，1H)。LCMS(m/z)603.1[M+H]，Tr＝2.59min。
实施例14
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(24mg，0.040mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(35mg，0.096mmol)悬于脱气的水(16mL)中，该混合物用氮气脱气15分钟。混合物在70℃于氮气下搅拌90分钟。将所获浑浊橘黄色混合物冷却至室温。加入固体1-(6-溴代-喹啉-3-基)-乙酮(按照WO2011/063233中的描述制备，1.92g，7.68mmol)、脱气的四氢呋喃(16mL)和甲酸钠(2.72g，40mmol)，将反应混合物用氮气脱气5分钟，继续加入脱气的四氢呋喃(5mL)，将混合物继续脱气一分钟。反应混合物在40℃下剧烈搅拌21小时，冷却。然后用乙酸乙酯稀释，用水和盐水冲洗混合物，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯7:3至0:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为褐色固体的标题化合物(1.65g，85％)。
在氮气下向14a(356mg，1.41mmol)、N,N-二己基甲胺(275mg，301μL，1.41mmol)和三丁烯酸叔丁酯(470mg，537μL，3.31mmol)的甲苯溶液(14mL)混合物中加入双(三叔丁基膦)钯(0)(30mg，0.058mmol)，搅拌反应混合物并加热回流90分钟，然后冷却。蒸干该混合物，然后使用异己烷/乙酸乙酯4:1至2:3的梯度通过硅胶色谱法，得到为黄色油状物的标题化合物(144mg，33％)。
向搅拌的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(189mg，0.473mmol)和14b(148mg，0.473mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)中加入含义大约20％水的1-羟基苯并三唑(89mg，0.662mmol)，以及4-二甲基氨基吡啶(58mg，0.473mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(127mg，0.662mmol)。反应物搅拌62小时，然后用二氯甲烷稀释，用饱和氯化铵溶液(2x)和盐水冲洗，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯3:1至2:3的梯度通过硅胶色谱法纯化，得到为白色泡沫的标题化合物(126mg，38％)。
在0℃于氮气下向搅拌的14c(126mg，0.181mmol)二氯甲烷溶液(1.8mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(141mg，147μL，0.635mmol)，反应混合物加热至室温，持续1.75小时。再次加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(20mg，21μL，0.091mmol)，继续搅拌反应混合物15分钟，随后加入N,N-二异丙基乙胺(164mg，221μL，1.27mmol)。继续搅拌10分钟后，蒸干反应混合物，然后将其悬于乙腈(18.1mL)中。搅拌的混合物冷却至0℃，然后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(96mg，0.253mmol)和N,N-二异丙基乙胺(94mg，126μL，0.724mmol)。45分钟后，用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭反应物，蒸发混合物以去除有机挥发性成分。用二氯甲烷稀释残留物，分离水层，并用二氯甲烷萃取。用饱和的碳酸氢钠、水和盐水冲洗有机提取物，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法以乙酸乙酯/丙酮9:1洗脱，随后通过制备反相HPLC使用乙腈/水3:7至1:1的梯度纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(6.5mg，2步收率为7％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.00(d，J＝6.7Hz，3H)，1.03(d，J＝6.7Hz，3H)，1.61(d，J＝7.1Hz，3H)，1.75(d，J＝6.7Hz，3H)，1.91-2.01(m，3H)，2.68-2.79(m，1H)，3.00(dd，J＝14.5，3.6Hz，1H)，3.35-3.42(m，1H)，3.73-3.82(m，1H)，4.29(d，J＝9.6Hz，1H)，4.41(d，J＝12.9Hz，1H)，4.70(d，J＝12.3Hz，1H)，5.47(q，J＝7.3Hz，1H)，6.15(q，J＝6.6Hz，1H)，6.30-6.40(m，1H)，6.63(d，J＝16.1Hz，1H)，7.55(S，1H)，7.82(dd，J＝8.7，1.5Hz，1H)，7.95(d，J＝8.7Hz，1H)，8.21(S，1H)，8.79(d，J＝1.8Hz，1H)。LCMS(m/z)522.2[M+H]，Tr＝1.60min。
实施例15
向搅拌的3-溴-喹啉-6-羧酸(按照WO2011/090935中的描述制备，1.94g，7.70mmol)的四氢呋喃混合物(77mL)中加入2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(2.03g，11.5mmol)和N-甲基吗啉(2.34g，2.54mL，23.1mmol)。反应混合物搅拌90分钟，然后加入一部分N,O-二甲基羟胺盐酸盐(751mg，7.70mmol)。反应混合物继续搅拌17小时，再次加入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(375mg，3.85mmol)，5小时后，继续加入一部分(175mg，1.80mmol)。反应混合物继续搅拌一小时，然后用二氯甲烷稀释，用水和饱和氯化铵溶液冲洗。硫酸钠干燥有机层，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法以异己烷/乙酸乙酯4:1至7:3的梯度洗脱以纯化残留物，得到为灰白色固体的标题化合物(1.43g，66％)。
在氮气下向搅拌的甲基氯化镁(3M四氢呋喃溶液，4.85mL，14.5mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)中加入15a(1.43g，4.85mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)。反应混合物搅拌1小时，然后用饱和氯化铵溶液淬灭。用乙醚和水稀释混合物，分离有机层，继续用水冲洗，用乙醚反萃取合并的水洗液。用硫酸镁干燥合并的有机提取物，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法以异己烷/乙酸乙酯4:1洗脱以纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物，将其直接用于下一步反应。
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(9mg，0.015mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(14mg，0.037mmol)悬于脱气的水(9mL)中，该混合物用氮气脱气15分钟。混合物在70℃于氮气下搅拌90分钟。将所获浑浊橘黄色混合物冷却至室温。加入固体1-(3-溴代-喹啉-6-基)-乙酮(771mg，3.08mmol)和甲酸钠(2.72g，40mmol)，随后加入脱气的四氢呋喃(4.5mL)，用氮气将反应混合物脱气5分钟。反应混合物在40℃下剧烈搅拌3小时，冷却。然后用乙酸乙酯稀释，用水和盐水冲洗混合物，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯3:2至1:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为灰色固体的标题化合物(616mg，79％)。
在氮气下向15c(560mg，2.22mmol)的甲苯(20mL)和1,4-二氧六环(5mL)溶液中加入N,N-二己基甲胺(740μL，3.46mmol)和三丁烯酸叔丁酯(741mg，844μL，5.22mmol)乙基双(三叔丁基膦)钯(0)(68mg，0.13mmol)，搅拌反应混合物并加热回流6小时，然后冷却。蒸干混合物，随后使用异己烷/乙酸乙酯4:1至0:1的梯度通过硅胶色谱法进行纯化，得到黄色胶状物。将该胶状物悬于乙酸乙酯中，用饱和氯化铵溶液(2x)、水和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到为黄色油状物的标题化合物(300mg，43％)。
向搅拌的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(325mg，0.812mmol)、15d(231mg，0.738mmol)和粉状分子筛的二氯甲烷浆液(16mL)中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸(198mg，1.03mmol)、含有大约20％水的1-羟基苯并三唑水合物(174mg，1.03mmol)以及4-二甲基氨基吡啶(90mg，0.738mmol)。在氮气下搅拌反应物16小时，过滤并用二氯甲烷冲洗固体。用饱和氯化铵溶液(2x)和水冲洗滤液，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色泡沫的标题化合物(307mg，60％)。
在0℃于氮气下向搅拌的15e(150mg，0.216mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)中滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(168mg，174μL，0.755mmol)，将反应混合物加热至室温，持续2.25小时。加入N,N-二异丙基乙胺(195mg，263μL，1.51mmol)，继续搅拌反应混合物10分钟，蒸干，然后悬于乙腈(21.6mL)中。将搅拌的混合物冷却至0℃，然后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(115mg，0.320mmol)和N,N-二异丙基乙胺(111mg，150μL，0.864mmol)。1小时后用饱和氯化铵溶液淬灭反应，蒸发混合物以去除有机挥发性成分。用二氯甲烷稀释残留物，分离有机层，并用饱和氯化铵(2x)和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用乙腈/水3:7至11:9的梯度通过制备反相HPLC纯化残留物，得到为灰白色固体的标题化合物(4.6mg，2步的收率为4％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.01(app t，J＝6.7Hz，6H)，1.62(d，J＝7.1Hz，3H)，1.70(d，J＝6.7Hz，3H)，1.75-1.85(m，1H)，1.91-2.05(m，3H)，2.70-2.80(m，1H)，2.98-3.06(m，1H)，3.36-3.45(m，1H)，3.74-3.84(m，1H)，4.26(d，J＝10.5Hz，1H)，4.42(br d，J＝12.3Hz，1H)，4.72-4.78(m，1H)，5.55(q，J＝7.1Hz，1H)，6.09(q，J＝6.5Hz，1H)，6.38-6.41(m，1H)，6.71(d，J＝16.1Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.9，1.9Hz，1H)，7.88-8.01(m，3H)，8.86(d，J＝2.0Hz，1H)。LCMS(m/z)522.3[M+H]，Tr＝1.64min。
实施例16
将7-溴-2-氯-喹啉(1.05g，4.32mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(1.95g，1.83mL，5.40mmol)的甲苯溶液(21mL)混合物脱气20分钟。加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(302mg，0.432mmol)，反应混合物在氮气下搅拌并在80℃加热24小时，随后冷却。蒸干挥发性成分，将残留物悬于1,4-二氧六环(10mL)中，加入2M盐酸水溶液(5mL)，搅拌反应混合物30分钟，蒸发以去除有机相。用乙酸乙酯和水稀释残留物，用盐水冲洗有机层，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。在掺有10％w/w碳酸钾的硅胶上使用异己烷/乙酸乙酯9:1至4:1的梯度进行洗脱，从而洗脱产物，得到为黄色固体的标题化合物(422mg，48％)。
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(8.5mg，0.014mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(12.1mg，0.033mmol)悬于脱气的水(5.5mL)中，该混合物用氮气脱气20分钟。混合物在70℃于氮气下搅拌90分钟。将所获浑浊橘黄色混合物冷却至室温。加入固体16a(571mg，2.78mmol)和甲酸钠(945mg，13.9mmol)，以及脱气的四氢呋喃(5.5mL)，用氮气将反应混合物脱气5分钟。在40℃下剧烈搅拌反应混合物4小时，冷却。然后用乙酸乙酯稀释，用水冲洗混合物，用乙酸乙酯反萃取水层。用盐水冲洗合并的有机提取物，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯4:1至7:3的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为米黄色固体的标题化合物(413mg，72％)。
向16b(360mg，1.73mmol)/乙烯基三氟硼酸钾(279mg，2.08mmol)和[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)，与二氯甲烷(27mg，0.033mmol)的干正丙醇溶液(27mL)混杂的混合物中加入三乙胺(175mg，241μL，1.73mmol)，排空该体系并用氮气(3x)吹扫。将反应混合物搅拌并加热回流，持续3小时，随后冷却。将混合物倒入水中，用乙醚萃取(2x)，用硫酸镁干燥合并的有机提取物，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯7:3至3:2的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(270mg，78％)。
在氮气下向搅拌的16c(100mg，0.500mmol)和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(203mg，0.550mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)混合物中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(134mg，0.700mmol)和4-二甲基氨基吡啶(61mg，0.500mmol)。反应混合物搅拌16小时，用二氯甲烷稀释，按顺序用柠檬酸溶液、水和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯1:1至0:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为褐色固体的标题化合物(103mg，38％)。
将16d(60mg，0.109mmol)和Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(20.5mg，0.0328mmol)悬于1,2-二氯乙烷(6mL)中，在微波反应器中于100℃下加热混合物1小时。使用(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(R)-1-(2-乙烯基-喹啉-7-基)-乙酯(10mg，0.0182)进行相同反应，合并所得混合物。蒸干挥发性成分，使用乙酸乙酯/丙酮1:0至4:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到褐色胶状物。通过制备薄层色谱使用异己烷/乙酸乙酯1:3对其进行进一步纯化，得到为白色固体的标题化合物(1.8mg，3％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84-1.02(m，6H)，1.26(app s，3H)，1.67-1.72(m，3H)，1.83-1.96(m，1H)，2.00-2.08(m，1H)，2.63-2.74(m，1H)，3.24(d，J＝4.5Hz，1H)，3.50(d，J＝7.6Hz，1H)，4.21(app t，J＝10.3Hz，1H)，4.53-4.61(m，1H)，5.55(app t，J＝7.3Hz，1H)，6.04-6.11(m，2H)，6.32(d，J＝7.8Hz，1H)，6.62(d，J＝16.3Hz，1H)，6.72-6.80(m，1H)，7.29-7.33(m，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，1H)，7.72(d，J＝8.3Hz，1H)，7.97-8.02(m，1H)。LCMS(m/z)552.2[M+H]，Tr＝1.86min。
实施例17
在氩气下，于冰水浴中冷却二异丙胺(2.51g，24.8mmol)的四氢呋喃(150mL)溶液。以2分钟时间滴加正丁基锂的己烷溶液(2.5M，9.7mL，24mmol)，继续搅拌所获溶液10分钟。然后在CO2:丙酮浴中将该溶液冷却至-78℃，以30秒时间滴加2,2-二甲基-3-氧代丁酸甲酯(3.2g，22mmol)。继续搅拌该溶液15分钟，通过套管以5分钟时间加入N-苯基-双(三氟甲基磺酰亚胺)(8.4g，23.5mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)，用另一部分四氢呋喃(10mL)冲洗。所获溶液搅拌10分钟，自冷浴中取出。继续搅拌1小时后，真空浓缩反应混合物并用乙醚(150mL)稀释。用1M氢氧化钠水溶液(1x100mL，1x30mL)冲洗有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到为琥珀色液体的标题化合物(6.2g，100％)，无需进一步纯化即可使用。
将17a(6.2g，22mmol)的无水吡啶溶液(11mL，140mmol)加热至70℃。18.5小时后，.将温度升至90℃。搅拌总计72小时后，将反应混合物在乙醚(100mL)和3M盐酸水溶液(100mL)的搅拌混合物之间分配。分离两相，用饱和的碳酸氢钠水溶液(75mL)冲洗有机层，硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到为微褐色液体的标题化合物(2.7g，97％)，无需进一步纯化即可使用。
在氩气下，于冰水浴中冷却双(环戊二烯基)氯氢化锆(290mg，1.1mmol)。通过套管加入17b(1.4g，11.1mmol)和频哪醇硼烷(2.4mL，16.5mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)，用另一部分二氯甲烷(2mL)冲洗。自冷浴中取出所获混合物并在室温下搅拌72小鼠。然后用乙酸乙酯(50mL)稀释反应物，用逐滴加入的水(5mL)进行淬灭，用水(50mL)进一步稀释。分离有机相和水相，用乙酸乙酯(30mL)萃取水相。无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到残留物粗品，将其通过硅胶色谱法(5至15％乙酸乙酯的异己烷溶液)进行纯化，得到为无色油状物的标题化合物(1.6g，57％)，将其在-15℃下静置可变为晶体。
在一个微波反应器中于160℃下将6-溴-3-氯-异喹啉(485mg，2.0mmol)、双联硼酸频哪醇酯(560mg，2.2mmol)、乙酸钾(392mg，4.0mmol)和[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)，与二氯甲烷(82mg，0.1mmol)的1,4-二氧六环溶液(4mL)混杂的混合物加热1小时。通过硅藻土(Celite)过滤反应混合物并用乙酸乙酯冲洗滤板。蒸干滤液，使用二氯甲烷至二氯甲烷/甲醇9:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到标题化合物(545mg，94％)。
在0℃于氮气下搅拌17d(1.74g，6.0mmol)的四氢呋喃溶液(45mL)。滴加氢氧化钠溶液(2M，9mL，18mmol)和过氧化氢(30％，2.5mL，24mmol)。在0℃下搅拌反应混合物30分钟。加入水(30mL)，用2M盐酸将该溶液酸化至pH 1。加入焦亚硫酸钠溶液(1M)，用乙酸乙酯萃取混合物。合并有机提取物，用水和盐水冲洗。使用疏水性玻璃料(hydrophobic frit)过滤有机溶液，蒸干滤液，得到为灰白色固体的标题化合物(662mg，61％)。
向17e(1.25g，7.07mmol)和三丁基-(1-乙氧基-乙烯基)-锡(5.09g，4.77mL，14.1mmol)的1,4-二氧六环溶液(15mL)中加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(992mg，1.41mmol)，反应混合物在微波反应器中于160℃加热30分钟。使用硅藻土(Celite)过滤反应混合物，用乙酸乙酯冲洗滤板。蒸干滤液，使用异己烷/乙酸乙酯9:1至3:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为胶状物的3-(1-乙氧基-乙烯基)-异喹啉-6-醇(670mg)，在下一步反应中使用其粗品。将3-(1-乙氧基-乙烯基)-异喹啉-6-醇(670mg)悬于1,4-二氧六环(4mL)中，加入4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液(8mL)，反应混合物在室温下搅拌30分钟。蒸干溶剂，得到为白色固体的标题化合物(584mg，2步的收率为44％)。
在盐冰浴中搅拌17f(384mg，2.05mmol)和吡啶(0.51mL，6.16mmol)的二氯甲烷溶液(30mL)5分钟。滴加三氟甲磺酸酐(0.415mL，2.46mmol)，将该混合物加热至室温，持续20分钟。再次加入三氟甲磺酸酐(0.1mL，0.6mmol)，反应混合物在室温下搅拌10分钟。加入饱和氯化铵溶液，用二氯甲烷萃取混合物。合并有机提取物，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯19:1通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(300mg，44％)。
在室温下向二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(2mg，0.003mmol)的水溶液(2mL)中加入(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(3mg，0.008mmol)。将该体系脱气15分钟，然后加热至70℃，持续1.5小时。冷却反应物并加入17g(224mg，0.70mmol)的脱气无水四氢呋喃(1mL)溶液，随后加入甲酸钠(237mg，3.50mmol)。将该体系脱气2分钟，然后在40℃下加热1小时。冷却至室温后，加入水，用二氯甲烷(2x)萃取该水。通过疏水性玻璃料干燥合并的有机层，真空浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:1通过硅胶色谱法纯化该产物，得到为褐色油状物的标题化合物(220mg，97％)。
向圆底烧瓶中加入17h(100mg，0.31mmol)、(E)-2,2-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-3-丁烯酸甲酯(91mg，0.36mmol)、双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II)(13mg，0.02mmol)、磷酸三钾(198mg，0.93mmol)和氯化锂(40mg，0.93mmol)。用氮气吹扫该体系，加入环戊基甲基醚(1mL)和水(0.5mL)。将反应物在90℃下加热1小时，然后冷却至室温。加入乙酸乙酯并用水冲洗该溶液。硫酸镁干燥有机层，过滤并真空浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:2通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色油状物的标题化合物(70mg，75％)。
在室温下向17i(140mg，0.47mmol)的四氢呋喃(1mL)、甲醇(0.5mL)和水(0.5mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(39mg，0.93mmol)。反应物搅拌3小时，加入2M盐酸水溶液(0.5mL)淬灭。将反应物真空浓缩，随后与甲醇，其后是甲苯共蒸发。使用所获黄色固体的粗品。
在0℃于氮气气氛下向1e(250mg，0.47mmol)的无水二氯甲烷溶液(5mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(128μL，0.70mmol)。反应混合物在0℃下搅拌2小时，随后加入N,N-二异丙基乙胺(252μL，1.41mmol)，真空浓缩，与甲苯共蒸发，得到为白色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯。在室温于氮气气氛下向17j(134mg，0.47mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(420μL，2.35mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(250mg，0.66mmol)。溶液在室温下搅拌3分钟，随后(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯的无水N,N-二甲基甲酰胺溶液(2mL)。反应物搅拌16小时。用水淬灭该反应物，并用乙酸乙酯(2x)萃取。硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并真空浓缩。使用异己烷/丙酮1:1通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为灰白色固体的标题化合物(220mg，3步的收率为67％)。
在室温下向17k(220mg，0.31mmol)的四氢呋喃(3mL)、甲醇(1.5mL)和水(1.5mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(53mg，1.26mmol)。反应物搅拌1.25小时，加入2M盐酸水溶液(0.64mL)进行淬灭。将反应物真空浓缩，随后与甲醇(2x)，其后是乙腈(6x)共蒸发。将所获残留物溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，在50℃下通过注射泵以2小时时间加入至2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(271mg，0.79mmol)、4-二甲基氨基吡啶(288mg，2.36mmol)和粉状分子筛(3g)的1,2-二氯乙烷混悬液(103mL)中。随后将反应物在50℃下搅拌3小时，冷却至室温，并使用硅藻土(Celite)进行过滤。将滤液浓缩至1/3体积，用二氯甲烷稀释，并用水(2x)冲洗。使用疏水性玻璃料干燥有机层，真空浓缩。使用异己烷/丙酮1:1通过硅胶色谱法纯化残留物，得到灰白色固体。将该固体用乙醚研磨两次，真空干燥16小时，得到为白色粉末的标题化合物(65mg，2步的收率为38％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.93(d，J＝6.7Hz，3H)，0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，1.41(S，3H)，1.51(S，3H)，1.61(d，J＝7.1Hz，3H)，1.76(d，J＝6.7Hz，3H)，1.76(m，1H)，1.78–2.03(m，3H)，2.07–2.17(m，1H)，2.62–2.76(m，1H)，3.62–3.79(m，2H)，4.21–4.31(m，1H)，4.52–4.62(m，1H)，5.82–6.01(m，1H)，6.13(q，J＝6.7Hz，1H)，6.27(d，J＝16.1Hz，1H)，6.30–6.41(m，2H)，6.64(d，J＝16.1Hz，1H)，7.53(d，J＝8.5Hz，1H)，7.71(S，1H)，7.82(S，1H)，7.90(d，J＝8.5Hz，1H)，9.16(S，1H)。LCMS(m/z)549.9[M+H]，Tr＝5.21min。
实施例18
在室温下向化合物17(40mg，0.073mmol)的乙酸乙酯(10mL)溶液中加入10％钯碳催化剂(30mg)。用氢气吹扫该体系，剧烈搅拌16小时。使用硅藻土(Celite)过滤该混悬液，真空浓缩滤液。使用异己烷/丙酮1:1通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的化合物18(8mg，20％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.92(d，J＝6.5Hz，3H)，1.00(d，J＝6.5Hz，3H)，1.27(S，3H)，1.31(S，3H)，1.48(d，J＝7.1Hz，3H)，1.64–1.79(m，1H)，1.75(d，J＝6.7Hz，3H)，1.80–2.12(m，5H)，2.45(td，J＝12.7，3.6Hz，1H)，2.68–2.93(m，2H)，3.62–3.78(m，2H)，3.86(d，J＝12.0Hz，1H)，4.37(app t，J＝8.3Hz，1H)，4.50–4.61(m，1H)，5.87–6.00(m，1H)，6.18(q，J＝6.7Hz，1H)，6.38(d，J＝8.7Hz，1H)，6.58(d，J＝8.3Hz，1H)，7.36(d，J＝8.5Hz，1H)，7.42(S，1H)，7.64(S，1H)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H)，9.14(S，1H)。LCMS(m/z)552.2[M+H]，Tr＝5.11min。
实施例19
在23℃于氩气气氛下向(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(339mg，0.920mmol)和(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(183mg，0.920mmol)的二氯甲烷溶液(4.6mL)中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(211mg，1.10mmol)和4-二甲基氨基吡啶(56.2mg，0.46mmol)。21小时后，直接使用硅胶快速柱色谱纯化反应混合物，得到为浅黄褐色固体的标题化合物(224mg，42％)。
在0℃于氮气气氛下向19a(800mg，1.38mmol)的无水二氯甲烷(12mL)溶液中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(374μL，2.07mmol)。反应混合物在0℃下搅拌2小时，随后加入N,N-二异丙基乙胺(480μL，2.75mmol)，真空浓缩，得到白色固体。向该固体中加入(E)-(R)-2-乙基-3-戊烯酸(188mg，1.65mmol)的无水乙腈溶液(12mL)，随后加入N,N-二异丙基乙胺(240μL，1.38mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(733mg，1.93mmol)。反应物在室温下搅拌3小时，真空浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:2随后是1:5通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为粘稠的黄色油状物的标题化合物(250mg，2步的收率为74％)。
在70℃于氮气气氛下向19b(200mg，0.34mmol)的无水甲苯(113mL)溶液中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(42mg，0.07mmol)。反应物在120℃下加热2小时，随后再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(30mg，0.05mmol)。继续在120℃下2小时后，将反应物冷却至室温，加入异氰基乙酸钾(83mg)的甲醇溶液(2mL)。反应物搅拌1小时，加入二氧化硅，真空浓缩。使用乙酸乙酯/丙酮3:1通过硅胶色谱法纯化残留物，得到棕色固体。通过反相制备HPLC对其进行进一步纯化，得到为白色固体的标题化合物(2.2mg，1％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.97(d，J＝6.5Hz，3H)，1.02(d，J＝6.5Hz，3H)，1.11(t，J＝7.4Hz，3H)，1.64(d，J＝7.1Hz，3H)，1.70(d，J＝6.7Hz，3H)，1.71–2.06(m，7H)，2.66–2.82(m，1H)，3.13–3.22(m，1H)，3.75–3.85(m，1H)，4.30–4.48(m，2H)，5.51–5.67(m，1H)，6.07(q，J＝6.3Hz，1H)，6.48–6.57(m，1H)，6.61(d，J＝16.5Hz，1H)，7.47(S，1H)，7.58(d，J＝8.7Hz，1H)，7.89(S，1H)，8.07(d，J＝8.7Hz，1H)，9.15(S，1H)。LCMS(m/z)550.2[M+H]，Tr＝1.67min。
实施例20
在0℃于氮气气氛下向19a(390mg，0.67mmol)的无水二氯甲烷溶液(7mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(182μL，1.01mmol)。反应混合物在0℃下搅拌1小时，随后用饱和的碳酸氢钠水溶液进行淬灭，用乙酸乙酯(2x)萃取。硫酸钠干燥有机层，过滤并真空浓缩，得到白色固体。将该固体溶于无水乙腈(4mL)中，加入2-甲基-3-丁烯酸(81mg，0.81mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(184mg，0.94mmol)和1-羟基苯并三唑一水合物(103mg，0.67mmol)。反应物在室温下搅拌16小时，真空浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:1随后是1:3通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为透明的粘稠油状物的标题化合物(259mg，69％)。
向20a(250mg，0.44mmol)的脱气无水甲苯溶液(148mL)中加入2,6-二氯苯醌(8mg，0.04mmol)。将混合物加热至105℃，通过注射泵以2小时时间加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(83mg，0.13mmol)的无水甲苯溶液(20mL)。再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(28mg)，反应物加热回流1小时。将反应物冷却至室温，加入硅胶，真空浓缩。使用乙酸乙酯/丙酮1:0随后是3:1通过硅胶色谱法纯化残留物，得到油状物。将其用乙醚和乙酸乙酯数滴研磨，得到褐色固体，使用乙酸乙酯/丙酮5/1通过制备TLC进行进一步纯化，得到为灰白色固体的标题化合物(9mg，1％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.97(d，J＝6.7Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.38(d，J＝6.7Hz，3H)，1.62(d，J＝7.1Hz，3H)，1.70(d，J＝6.9Hz，3H)，1.72–1.82(m，2H)，1.91–2.01(m，2H)，2.03–2.12(m，1H)，2.62–2.74(m，1H)，3.35(app t，J＝7.4Hz，1H)，3.59(d，J＝12.5Hz，1H)，3.65–3.77(m，1H)，4.26(app t，J＝8.9Hz，1H)，4.51–4.60(m，1H)，5.68–5.79(m，1H)，6.06(q，J＝6.7Hz，1H)，6.16(d，J＝9.2Hz，1H)，6.27(d，J＝9.2Hz，1H)，6.40(dd，J＝16.0，7.8Hz，1H)，6.71(d，J＝16.0Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.5，1.3Hz，1H)，7.58(S，1H)，7.74(S，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，9.16(S，1H)。LCMS(m/z)536.2[M+H]，Tr＝1.63min。
实施例21
使用(R)-2-甲基-4-戊烯酸(按照Synlett 2002，No12，2039-2040中的描述制备，82mg，0.72mmol)代替2-甲基-3-丁烯酸，以与20a相同的方法制备21a，得到为白色泡沫的标题化合物(280mg，67％)。
在室温于氮气气氛下向21a(250mg，0.43mmol)的无水甲苯溶液(144mL)中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(54mg，0.09mmol)。反应物在120℃下加热2小时，随后再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(25mg，0.04mmol)。继续在120℃下1小时后，将反应物冷却至室温，真空浓缩。使用乙酸乙酯/丙酮1:0随后是3:1通过硅胶色谱法纯化残留物，得到褐色固体。用乙醚/乙酸乙酯3:1对其进行研磨，得到为灰白色固体的标题化合物(50mg，22％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.91(d，J＝6.7Hz，3H)，0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，1.29(d，J＝7.1Hz，3H)，1.59(d，J＝6.7Hz，3H)，1.67(d，J＝6.5Hz，3H)，1.70–1.84(m，1H)，1.92–2.15(m，4H)，2.33–2.48(m，1H)，2.63–2.98(m，3H)，3.53(d，J＝12.2Hz，1H)，3.60–3.72(m，1H)，4.42(dd，J＝6.7，2.2Hz，1H)，4.52–4.61(m，1H)，5.62–5.74(m，1H)，6.11(q，J＝6.7Hz，1H)，6.16(q，J＝8.9Hz，1H)，6.42(d，J＝8.5Hz，1H)，6.53–6.66(m，1H)，6.75(d，J＝16.1Hz，1H)，7.37(dd，J＝8.7，1.0Hz，1H)，7.80–7.96(m，3H)，9.16(S，1H)。LCMS(m/z)550.3[M+H]，Tr＝1.50min。
实施例22
向搅拌的7-溴-2-氯-喹啉(8.10g，33.4mmol)和碘化钠(50.0g，334mmol)的乙腈浆液(27mL)中缓慢加入乙酰氯(3.56mL，50.0mmol)。将烧瓶用塞子塞住并密封，在80℃下加热3小时，随后冷却。按顺序用10％w/w碳酸钾水溶液(80mL)、5％w/w亚硫酸钠水溶液(80mL)和饱和的硫代硫酸钠水溶液(80mL)处理该混合物，用二氯甲烷(2x)萃取混合物。硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤并蒸发以得到7-溴-2-碘-喹啉粗品。向该喹啉中加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(13.6mL，40.1mmol)、1,4-二氧六环(67mL)和双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(2.37g，3.34mmol)，在100℃下加热反应混合物5小时，随后冷却。加入2M盐酸水溶液(67mL)，搅拌反应物1小时。过滤该混合物，用乙酸乙酯冲洗固体，蒸干滤液以去除有机物。用乙酸乙酯(3x)萃取残留物，硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤并蒸发。在掺有10％w/w碳酸钾的硅胶上使用梯度为0至6％的乙酸乙酯异己烷溶液洗脱以纯化该产物，得到为白色固体的标题化合物(5.5g，66％)。
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(61mg，0.100mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(88mg，0.012mmol)悬于脱气的水(40mL)中，该混合物用氮气脱气5分钟。混合物在70℃于氮气下搅拌90分钟。将所获浑浊橘黄色混合物冷却至室温。加入22a(5.00g，20mmol)的脱气四氢呋喃溶液(40mL)，随后加入甲酸钠(6.8g，100mmol)，将反应混合物用氮气脱气5分钟。反应混合物在40℃下剧烈搅拌4小时，冷却。然后用乙酸乙酯和水稀释，分离有机层，用水和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用梯度为0％至30％的乙酸乙酯异己烷溶液通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为灰白色固体的标题化合物(4.96g，98％)。
在0℃下向22b(1.00g，3.97mmol)和三乙胺(1.65mL，11.9mmol)的无水二氯甲烷溶液中加入乙酸酐(0.75mL，7.93mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(24mg，0.197mmol)。搅拌反应混合物并加热至室温。1.5小时后，加入水(100mL)，分离两层。用二氯甲烷(2x100mL)再次萃取水相，合并的有机相用盐水(100mL)冲洗，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。通过硅胶色谱法使用异己烷(66mL)，随后是异己烷/乙酸乙酯95:5(300mL)，随后是异己烷/乙酸乙酯9:1(1066mL)对其进行纯化，得到为无色油状物的标题化合物(1.16g，99％)。
向乙酸22c(1.16g，3.95mmol)的无水乙腈溶液中加入乙酸钯(II)(89mg，0.395mmol)、2,2-二甲基-3-丁烯酸(496mg，4.35mmol)、三(邻甲苯基)膦(241mg，0.790mmol)和三乙胺(1.09mL，7.90mmol)，在微波器中于100℃下加热混合物20分钟。真空浓缩反应混合物，加入水(200mL)，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取有机相。硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩以得到残留物粗品。通过硅胶色谱法使用异己烷/乙酸乙酯95:5(300mL)，然后是异己烷/乙酸乙酯9:1(1066mL)，随后是异己烷/乙酸乙酯3:1(1066mL)对其进行纯化，得到为白色固体的标题化合物(792mg，61％)。
在冰水浴中于氮气下冷却1e(1.29g，2.42mmol)的二氯甲烷溶液(12mL)。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.715mL，4.84mmol)，搅拌所获溶液1小时。用淬灭反应N,N-二异丙基乙胺(1.69mL，9.68mmol)，真空浓缩反应混合物，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯，其为白色固体，不需进一步纯化即可使用。在0℃于氮气下向22d(792mg，2.42mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(2.11mL，12.1mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.01g，2.66mmol)。在室温下搅拌所获混合物15分钟，然后再次冷却至0℃，加入前一步中生成的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯的N,N-二甲基甲酰胺溶液(10.7mL)。将反应混合物在搅拌下加热至室温。1小时后，用乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)稀释混合物。分离两相，用乙酸乙酯(100mL)萃取水相。用盐水(100mL)冲洗合并的有机相，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。通过硅胶色谱法使用异己烷/丙酮95:5(1000mL)，然后是异己烷/丙酮9:1(1L)，随后是异己烷/丙酮85:15(1L)，随后是异己烷/丙酮3:1(1L)，随后是异己烷/丙酮7:3(1L)对其进行纯化，得到为无色固体的标题化合物(1.11g，62％)。
在冰水浴中冷却22e(1.11g，1.50mmol)的四氢呋喃溶液(14.7mL)，随后加入甲醇(7.4mL)、水(7.4mL)和氢氧化锂一水合物(252mg，6.0mmol)。将混合物在冰水浴中搅拌1小时，用1M盐酸水溶液(6mL，6.0mmol)淬灭。真空浓缩所获溶液，自甲醇(4x250mL)、乙腈(4x250mL)和甲苯(5x250mL)中浓缩粗产品。然后将分离得到的固体放置在冷冻干燥器中过夜，得到为白色固体的标题化合物(853mg，定量收率)。
在氮气下，将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(2.59g，7.51mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(1.38g，11.3mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(500mL)中，所获溶液加热至50℃。将前一步得到的开环酸(seco-acid)粗品22f(853mg，1.50mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(19mL)中，并通过注射泵以6个小时时间将其滴加至反应混合物中。加完后，再用润洗注射泵N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，在50℃下搅拌反应混合物40分钟。随后，浓缩混合物以得到残留物。通过硅胶色谱法使用异己烷(66mL)，异己烷/丙酮4:1(726mL)，异己烷/丙酮7:3(726mL)，异己烷/丙酮3:2(726mL)对其进行纯化。第一个色谱柱得到了含有N,N-二甲基甲酰胺的不纯产物(1.10g)。向其中加入盐水(200mL)，用乙酸乙酯(2x100mL)萃取有机相。硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到不含N,N-二甲基甲酰胺的不纯产物(900mg)。通过第二次硅胶色谱法纯化该残留物，使用异己烷/丙酮95:5(6L)，异己烷/丙酮93:7(1.5L)，异己烷/丙酮88:12(3L)，异己烷/丙酮82:16纯化残留物，直至所有产物均自该色谱柱上洗脱。分离纯度分别为87％(批次A)和77％(批次B)的两批预期产物。用100％乙醚研磨批次A两次，得到纯度大约为90-95％的标题化合物(241mg)。通过制备反相HPLC纯化批次B，得到纯度大约>95％的标题化合物(181mg)。合并批次A和B，得到为白色固体的标题化合物(422mg，51％)。1H NMR(500MHz，CD3OD)0.94(app t，J＝6.7Hz，6H)，1.34(S，3H)，1.48(S，3H)，1.58(d，J＝7.3Hz，3H)，1.62-1.75(m，5H)，1.82-1.91(m，1H)，1.92-2.03(m，2H)，2.66-2.78(m，1H)，3.78(appd，J＝8.5Hz，1H)，4.25-4.33(m，1H)，4.34-4.43(m，1H)，5.71(q，J＝7.3Hz，1H)，5.89(q，J＝6.7Hz，1H)，6.24(d，J＝16.0Hz，1H)，6.46(d，J＝16.0Hz，1H)，7.27(br d，J＝9.8Hz，1H)，7.38(d，J＝8.6Hz，1H)，7.60(S，1H)，7.75(ABq，ΔδAB＝0.03，JAB＝8.54Hz，2H)，8.18(d，J＝7.9Hz，1H)。LCMS(m/z)550.1[M+H]，Tr＝2.24min。
实施例23
制备6-溴-3-氯-异喹啉(2.0g，8.25mmol)的正丙醇溶液(90mL)，加入乙烯基三氟硼酸钾(1.11g，8.25mmol)。用氮气吹扫该溶液10分钟，随后加入[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)，以及二氯甲烷(128mg，0.157mmol)和三乙胺(1.15mL，8.25mmol)。再用氮气吹扫反应混合物3分钟，随后加热回流1小时。将反应混合物冷却至室温，加入水。用乙醚(3x150mL)萃取有机相。硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。通过硅胶色谱法使用异己烷/乙醚9:1对其进行纯化，得到为油状物的标题化合物(1.26g，80％)。
将23a(1.24g，6.54mmol)的甲醇(125mL)和二氯甲烷(125mL)混悬液冷却至-78℃。将反应物臭氧化直至持续存在蓝色(在大约15分钟时)，然后氮气通过反应混合物鼓泡15分钟以排出臭氧。用固体碳酸氢钠(549mg，6.54mmol)和二甲基硫醚(1.31mL，1.31mmol)处理反应物。将混合物加热至室温,3小时后真空浓缩反应混合物。向残留物中加入水(200mL)，用二氯甲烷(3x200mL)萃取水层。硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到为油状物的标题化合物(1.02g，81％)。
在0℃下向23b(1.02g，5.32mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)中加入三甲基(三氟甲基)硅烷溶液(3.19mL，2M四氢呋喃溶液，6.38mmol)，随后加入四丁基氟化铵溶液(0.053mL，1M四氢呋喃溶液，0.053mmol)，所获溶液在0℃下搅拌1.5小时。随后将反应混合物加热至室温，加入2M盐酸(10mL)，搅拌混合物10分钟，随后加入水(200mL)。用乙酸乙酯(3x100mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到为固体的标题化合物(1.30g，93％)。
在0℃下向23c(1.30g，4.97mmol)的二氯甲烷溶液(14.7mL)中加入戴斯-马丁高碘烷溶液(14.7mL，15％二氯甲烷溶液，6.96mmol)，搅拌反应混合物，加热至室温。加入1M焦亚硫酸钠水溶液(100mL)，搅拌反应混合物15分钟。向此混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，用二氯甲烷(3x100mL)萃取水层。用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)、盐水(100mL)冲洗合并的有机相，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到为固体的标题化合物(1.0g，78％)。
将23d(686mg，2.64mmol)、(R)-2-甲基-2-丙亚磺酰胺(400mg，3.30mmol)和钛酸四异丙酯(1.95mL，6.60mmol)的四氢呋喃(27.4mL)混合物加热回流16小时，然后冷却至室温。真空浓缩反应混合物，将其重新溶解于乙醚(27.4mL)中，冷却至-78℃。向此混合物中加入溶液(7.93mL、1.0M四氢呋喃溶液，7.93mmol)在-78℃下搅拌反应混合物1小时。加入盐水(30mL)，将混合物加热至室温。加入更多盐水(200mL)和乙酸乙酯(300mL)，分离两层。用二氯甲烷(500mL)重新萃取水相。硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。使用二氯甲烷至二氯甲烷/甲醇99:1的梯度洗脱，通过硅胶色谱法对其进行纯化，得到标题化合物(553mg，57％产量，94％d.e.)。
向23e(553mg，1.52mmol)的甲醇溶液(10mL)中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(1.52mL，6.06mmol)，在室温下搅拌反应混合物30分钟。再次加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(1.52mL，6.06mmol)，在室温下搅拌反应混合物30分钟，真空浓缩，得到标题化合物(507mg，定量产率)。
在0℃下搅拌23f(507mg，1.52mmol)和三乙胺(0.84mL，6.08mmol)的二氯甲烷(20mL)混合物以获得溶液。然后加入二碳酸二叔丁酯(497mg，2.28mmol)的二氯甲烷溶液(4mL)，搅拌反应混合物并加热至室温，持续24小时。加入水(200mL)，用二氯甲烷(3x100mL)萃取水层，硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残留物(816mg)。将此残留物溶于二氯甲烷(20mL)并冷却至0℃，加入三乙胺(0.84mL，6.08mmol)，随后加入二碳酸二叔丁酯(497mg，2.28mmol)的二氯甲烷溶液(4mL)，搅拌反应混合物并加热至室温，持续72小时。再次加入二碳酸二叔丁酯(162mg，0.74mmol)，继续搅拌30分钟，然后加入水(100mL)，用二氯甲烷(2x50mL)萃取水层。硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。使用异己烷/乙酸乙酯9:1至异己烷/乙酸乙酯1:1的梯度洗脱，通过硅胶色谱法对其进行纯化，得到为油状物的标题化合物(140mg，25％)。
向23g(135mg，0.37mmol)的正丙醇溶液(6mL)中加入乙烯基三氟硼酸钾(55mg，0.412mmol)、[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)，以及二氯甲烷(5.8mg，0.007mmol)和三乙胺(0.052mL，0.37mmol)。将混悬液抽真空并用氮气吹扫3次，随后加热至100℃，持续2小时。加入乙烯基三氟硼酸钾(100mg，0.748mmol)，在100℃下继续加热16小时。随后，再次加入[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)，以及二氯甲烷(9mg，0.011mmol)，在微波反应器中于150℃下加热反应混合物30分钟。再次加入混有二氯甲烷(9mg，0.011mmol)的[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)，在微波反应器中于150℃下加热反应混合物10分钟。向反应混合物中加入水(100mL)，用乙醚(2x100mL)萃取水层。硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到标题化合物(132mg，定量收率)。
向23h(132mg，0.37mmol)的甲醇溶液(2mL)中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(0.37mL，0.75mmol)，混合物在室温下搅拌30分钟。再次加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(3.0mL，6.08mmol)，继续搅拌2小时，真空浓缩反应混合物以得到残留物。随后自乙醚(2mL)、乙腈(10mL)中浓缩残留物，重复此过程两次，以得到(S)-2,2,2-三氟-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙胺盐酸盐(108mg，定量收率)。在0℃于氮气下向(S)-2,2,2-三氟-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙胺盐酸盐(108mg，0.374mmol)的乙腈混悬液(2mL)中加入(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(138mg，0.37mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(100mg，0.52mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(63mg，20wt％水溶液，0.37mmol)。所获混悬液在0℃下搅拌15分钟，随后自冰水浴中取出并在室温下搅拌16小时。加入N,N-二异丙基乙胺(0.5mL，2.87mmol)，在室温下搅拌该溶液2.5小时，再次加入(S)-1-[(S)-2-((S)-2-3-丁烯酰胺-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(69mg，0.19mmol)并继续搅拌。1小时后，加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(134mg，0.70mmol)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。随后，真空浓缩该混合物，用乙酸乙酯(60mL)稀释残留物。加入水(50mL)，分离两层。用乙酸乙酯(2x10mL)重新萃取水相，然后用氯化铵(2x50mL)冲洗合并的有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。使用异己烷/乙酸乙酯9:1至异己烷/乙酸乙酯4:1至异己烷/乙酸乙酯1:1，最后为异己烷/乙酸乙酯0:1的梯度洗脱，通过硅胶色谱法对其进行纯化。获得标题化合物(124mg，55％)。
向23i(124mg，0.21mmol)的甲苯溶液(69mL)中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(13mg，0.02mmol)，在115℃下加热反应混合物1.5小时。再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(13mg，0.02mmol)在120℃下继续加热50分钟。再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(13mg，0.02mmol)继续在120℃下加热30分钟。随后将此混合物冷却至室温并真空浓缩。使用乙酸乙酯至乙酸乙酯/丙酮9:1的梯度通过硅胶色谱法纯化残留物。收集不纯产物(28.3mg)，以乙酸乙酯/丙酮95:5洗脱通过制备TLC对其进行进一步纯化，得到为白色固体的标题化合物(4mg，3％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.29-1.39(m，1H)，1.69(d，J＝7.4Hz，3H)，1.74-2.01(m，5H)，2.73(td，J＝12.9，2.9Hz，1H)，2.99-3.11(m，1H)，3.74-3.83(m，1H)，4.26(d，J＝10.0Hz，1H)，4.41(br d，J＝13.2Hz，1H)，5.48(q，J＝7.4Hz，1H)，5.84(q，J＝8.3Hz，1H)，6.58(d，J＝16.3Hz，1H)，6.62-6.71(m，1H)，7.47(S，1H)，7.76(d，J＝8.6Hz，1H)，7.89(S，1H)，8.13(d，J＝8.6Hz，1H)，9.22(S，1H)。LCMS(m/z)575.2[M+H]，Tr＝1.53min。
实施例24
向(R)-1-(7-溴代-喹啉-2-基)-乙醇(295mg，1.17mmol)的无水乙腈溶液(12mL)中加入3-丁烯酸叔丁酯(0.44mL，2.75mmol)、双(三叔丁基膦)钯(0)(25mg，0.049mmol)和N,N-二己基甲胺(0.39mL，1.83mmol)，将该混合物加热回流2小时。真空浓缩反应混合物，得到残留物粗品。使用异己烷/乙酸乙酯95:5通过硅胶色谱法对其进行纯化，得到为白色固体的标题化合物(348mg，95％)。
在24a(363mg，1.16mmol)和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(505mg，1.26mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(311mg，1.62mmol)和4-二甲基氨基吡啶(142mg，1.16mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。在混合物中加入饱和氯化铵水溶液(100mL)，用二氯甲烷(2x50mL)萃取水层。用二氯甲烷(20mL)进一步冲洗水相，用盐水(50mL)冲洗合并的有机相，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。使用异己烷/乙酸乙酯4:1(120mL)、异己烷/乙酸乙酯7:3(855mL)、异己烷/乙酸乙酯3:2(540mL)通过硅胶色谱法对其进行纯化，得到为白色固体的标题化合物(357mg，44％)。
在0℃下向24b(342mg，0.492mmol)的二氯甲烷溶液(2.5mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.18mL，0.96mmol)，将此浅黄色溶液在0℃下搅拌2.75小时。再次加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.073mL，0.45mmol)，继续搅拌1.33小时。加入N,N-二异丙基乙胺(0.6mL，3.44mmol)，搅拌混合物10分钟，然后真空浓缩以得到中间体(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(R)-1-[7-((E)-3-羧基-丙烯基)-喹啉-2-基]-乙酯(266mg，0.45mmol)。在0℃于氮气下向(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(R)-1-[7-((E)-3-羧基-propenyl)-喹啉-2-基]-乙酯(266mg，0.45mmol)的乙腈溶液(50mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(0.343mL，1.971mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(262mg，0.70mmol)。在0℃下搅拌混合物，并将其加热至室温，持续16小时。在反应混合物中加入2M盐酸水溶液(20mL)，真空浓缩该混合物。用二氯甲烷/甲醇9:1(2x100mL)萃取水层。用饱和碳酸氢钠溶液(2x200mL)冲洗合并的有机相，then盐水(1x100mL)，硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物粗品。使用乙酸乙酯/丙酮97:3至乙酸乙酯/丙酮94:6的梯度洗脱，通过硅胶色谱法对其进行纯化。收集45mg不纯产物，用乙醚研磨，得到为淡黄色固体的标题化合物(25.4mg，10％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.99(d，J＝6.48Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.64(d，J＝7.1Hz，3H)，1.66-1.72(m，1H)，1.74(d，J＝6.9Hz，3H)，1.85-2.08(m，4H)，2.75(dd，J＝2.9，12.9Hz，1H)，2.97-3.07(m，1H)，3.35-3.40(m，1H)，3.79-3.88(m，1H)，4.23(d，J＝10.5Hz，1H)，4.43(br d，J＝11.2Hz，1H)，5.72(q，J＝7.1Hz，1H)，5.94(q，J＝6.9Hz，1H)，6.41(d，J＝16.7Hz，1H)，6.55(dt，J＝4.7，16.7Hz，1H)，7.40(d，J＝8.5Hz，1H)，7.65(S，1H)，7.75(dd，J＝1.3，8.7Hz，1H)，7.81(d，J＝8.7Hz，1H)，8.21(d，J＝8.5Hz，1H)。LCMS(m/z)522.2[M+H]，Tr＝1.90min。
实施例25
按顺序用三乙胺(2.7mL，19.639mmol)和甲磺酰氯(760μL，9.820mmol)处理(S)-6-溴代-茚满-1-醇(1.0462g，4.910mmol，按照WO 2009/003719中的描述制备)的无水四氢呋喃冷(-20℃)溶液(20mL)。在-30℃搅拌2.5小时后，加入甲胺溶液(2M四氢呋喃溶液，25mL，50mmol)。在室温下搅拌22.5小时后，过滤反应混合物。用乙醚润洗此白色固体。将滤液蒸发至干得到为白色固体的标题化合物(1.11g，定量收率)。
随后用二碳酸二叔丁酯(1.714g，7.856mmol)和三乙胺(690μL，4.91mmol)处理25a(1.11g，4.910mmol)溶液。搅拌25.5小时后，真空去除挥发性成分，使用一个50gIsolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(1.4224g，89％)，其是旋转异构体混合物。
使用氮气鼓泡30分钟以对25b(1.4224g，4.363mmol)、[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷复合物(71.3mg，0.087mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(701.3mg，5.236mmol)和三乙胺(610μL，4.363mmol)的无水正丁醇(40mL)溶液进行脱气。红色混悬液回流17.5小时。冷却至室温后，用水淬灭反应物，用乙醚(2x)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用一个50g Isolute柱，以异己烷/乙醚1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(977.3mg，82％)，其是旋转异构体混合物。
用三氟乙酸(5mL)处理25c(977.3mg，3.575mmol)的二氯甲烷冷(0℃)溶液(20mL)。在室温下搅拌30分钟后，真空去除挥发性成分，将残留的三氟乙酸与甲苯(3x)共沸以得到为粉色固体的相应铵盐。用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.903g，5.005mmol)处理铵盐粗品的冷(0℃)溶液、(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(3.932mmol)粗品和N,N-二异丙基乙胺(2.5mL，14.300mmol)的乙腈溶液(60mL)。在室温下搅拌20小时后，用盐酸(1M，100mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用100g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到标题化合物的混合物，将其溶于乙酸乙酯，用碳酸钾水溶液冲洗。硫酸钠干燥有机相，过滤并真空去除挥发性成分，得到为白色固体的标题化合物(798.9mg，36％)，其是旋转异构体混合物。
使用25d代替1e，按照与22e相同的方法制备化合物25e，为旋转异构体的复杂混合物，收率是27％。
用Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(48.9mg，0.078mmol)处理25e(238.3mg，0.390mmol)的二氯乙烷溶液(100mL)。搅拌回流1.5小时后，将反应物冷却至室温，真空去除挥发性成分。通过硅胶色谱法纯化残留物，使用10g Isolute柱以乙酸乙酯/甲醇1:0至95:5的连续梯度重力洗脱，随后通过制备TLC以乙酸乙酯/甲醇97:3(2次洗脱)洗脱，得到为白色固体的最终化合物(10.2mg，5％)。1H NMR(300MHz，CD3CN)δ0.85-0.97(m，6H)，1.21-1.35(m，8H)，1.42-1.62(m，3H)，1.64-1.77(m，2H)，1.80-1.89(m，2H)，2.27-2.38(m，2H)，2.52(dd，J＝7.6，3.1Hz，1H)，2.76(S，3H)，2.82-3.06(m，2H)，3.27-3.35(m，1H)，3.47(S，3H)，3.80-3.91(m，1H)，4.06(dd，J＝9.1，8.2Hz，1H)，4.23(d，J＝11.8Hz，1H)，4.41(dd，J＝12.9，3.6Hz，1H)，5.44(app五重峰，J＝8.0Hz，1H)，6.10-6.30(m，2H)，6.43(d，J＝16.0Hz，1H)，6.88(d，J＝8.0Hz，1H)，6.96(d，J＝9.4Hz，1H)，7.04(S，1H)，7.13-7.28(m，2H)。LCMS(m/z)582.3[M+H]，Tr＝2.57min。
实施例26
用氯化铑(III)水合物(31.6mg，0.15mmol)处理(S)-4-苄基-3-((R)-2-甲基-4-戊烯酰)-恶唑烷-2-酮(1.65g，6.04mmol，按照Synlett 2002，12，2039-2040中的描述制备)的乙醇/水溶液(22mL，10:1)。在85℃搅拌24小时后，将反应混合物冷却至室温，真空去除挥发性成分。使用一个50g Isolute柱以异己烷/乙醚1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(892.7mg，54％)。
随后用过氧化氢(1.7mL，16.33mmol，30％水溶液)和氢氧化锂水合物(274mg，6.53mmol)处理26a(893mg，3.27mmol)的四氢呋喃/水冷(0℃)溶液(30mL，2:1)。在0℃下搅拌1.5小时后，用焦亚硫酸钠(6.2g，32.66mmol)淬灭反应。在室温下搅拌40分钟后，用盐酸(2M)酸化该混合物，用二氯甲烷(2x)萃取水层。合并有机相，通过分相器过滤，真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(307.1mg，82％)。
使用(R)-1-(7-溴代-喹啉-2-基)-乙醇代替((R)-6-溴-茚满-1-基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯，按照与甲基-((R)-6-乙烯基-茚满-1-基)-氨基甲酸叔丁酯相同的方法制备化合物26c，获得定量收率。
用N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(166.9mg，0.870mmol)处理(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(261.2mg，0.653mmol)、26c(108.4mg，0.544mmol)和4-二甲基氨基吡啶(79.7mg，0.653mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。在室温下搅拌17小时后，真空去除挥发性成分，使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:4至0:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(139.6mg，44％)。
用三甲基硅烷基甲磺酸酯(90μL，0.480mmol)处理26d(139.6mg，0.240mmol)的无水二氯甲烷冷(0℃)溶液(10mL)。在0℃下搅拌1.5小时后，用饱和的碳酸氢钠淬灭反应。用二氯甲烷萃取水层。合并有机相，通过分相器过滤，真空去除挥发性成分，得到中间体胺。用N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(64.4mg，0.336mmol)处理此胺、(E)-(R)-2-甲基-3-戊烯酸(32.9mg，0.288mmol)和1-羟基苯并三唑(38.9mg，0.288mmol)的乙腈溶液(10mL)。在室温下搅拌17.5小时后，真空去除挥发性成分，使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(69.8mg，50％)。
使用26e代替(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-6-庚烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸甲基-((R)-6-乙烯基-茚满-1-基)-酰胺，以与化合物25相同的方法制备化合物26，收率为4％。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.94-1.00(m，6H)，1.47(d，J＝7.6Hz，3H)，1.63(d，J＝7.1Hz，3H)，1.67-1.80(m，5H)，1.85-2.07(m，3H)，2.76(td，J＝12.1，3.3Hz，1H)，3.79-3.86(m，1H)，4.28(d，J＝10.5Hz，1H)，4.36-4.46(m，1H)，5.73(q，J＝7.1Hz，1H)，5.93(q，J＝6.9Hz，1H)，6.32-6.51(m，2H)，7.41(d，J＝8.5Hz，1H)，7.65(S，1H)，7.77-7.85(m，2H)，8.21(d，J＝8.5Hz，1H)。LCMS(m/z)536.1[M+H]，Tr＝1.80min。
实施例27
用双(三甲基硅烷基)氨基钾(19.3mL，19.3mmol，1M四氢呋喃溶液)处理(R)-4-苄基-3-丙酰基-恶唑烷-2-酮(3.00g，12.9mmol)的无水四氢呋喃冷(-78℃)溶液(40mL)。在-78℃下搅拌0.45小时后，用烯丙基溴(5.6mL，64.3mmol)处理混合物。在-40℃下搅拌2小时后，用2M盐酸淬灭反应。用乙酸乙酯(2x50mL)萃取水相。合并有机相，真空去除挥发性成分。使用50g Biotage柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(2.73g，78％)。
用氯化铑(III)水合物(52mg，0.25mmol)处理27a(2.73g，9.97mmol)的乙醇/水溶液(22mL，10:1)。在85℃下搅拌3小时后，将反应混合物冷却至室温，真空去除挥发性成分。使用50g Biotage柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(1.76g，65％)。
随后用过氧化氢(3.3mL，32.2mmol，30％水溶液)和氢氧化锂水合物(534mg，12.9mmol)处理27b(1.76g，6.44mmol)的四氢呋喃/水冷(0℃)溶液(60mL，2:1)。在0℃下搅拌2小时后，用焦亚硫酸钠(12.2g，64.4mmol)淬灭反应。在室温下搅拌1小时后，用2M盐酸酸化混合物并用二氯甲烷(2x100mL)萃取水层。合并有机相，过滤并真空去除挥发性成分。使用50g Biotage柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(463mg，63％)。
用三甲基硅烷基甲磺酸酯(237μL，1.31mmol)处理(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(R)-1-(7-乙烯基-喹啉-2-基)-乙酯(380mg，0.65mmol)的无水二氯甲烷冷(0℃)溶液(10mL)。在0℃下搅拌1小时后，用饱和的碳酸氢钠淬灭反应。用二氯甲烷萃取水层。分离有机相并合并，真空去除挥发性成分，得到中间体胺(305mg)。用N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(170mg，0.89mmol)处理此胺、27c(90mg，0.76mmol)和1-羟基苯并三唑(103mg，0.76mmol)的乙腈溶液(20mL)。在室温下搅拌16小时后，真空去除挥发性成分，使用25gBiotage柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(236mg，65％)。
使用27d代替(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-庚-6-烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸甲基-((R)-6-乙烯基-茚满-1-基)-酰胺以与化合物25相同的方法制备化合物27，收率为5％。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.85-1.00(m，6H)，1.30(d，J＝6.9Hz，3H)，1.58(d，J＝7.1Hz，3H)，1.62-1.80(m，6H)，1.83-2.07(m，3H)，2.70-2.82(m，1H)，3.38-3.48(m，1H)，3.76-3.84(m，1H)，4.20-4.28(m，1H)，4.36-4.47(m，1H)，5.62-5.74(m，1H)，5.93(q，J＝6.9Hz，1H)，6.30-6.51(m，2H)，7.39(d，J＝8.5Hz，1H)，7.63(S，1H)，7.70-7.80(m，2H)，8.13-8.22(m，1H)。LCMS(m/z)536.2[M+H]，Tr＝2.15min。
实施例28
将碳酸钾(647mg，4.68mmol)和二碳酸二叔丁酯(716mg，3.28mmol)加入至2-(3-溴代-苯基)-哌啶(750mg，3.12mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)中。在室温下过夜搅拌后，在溶液中加入水(20mL)。将所获两相溶液分为有机相和水相。用二氯甲烷(20mL)反萃取水相。无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并浓缩，得到为淡黄色油状物的标题化合物(1.03g，97％)。
在氮气气氛下向28a(1.03g，3.03mmol)和乙烯基三氟硼酸钾(488mg，3.64mmol)的正丙醇溶液(30mL)中加入1,1'双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)、二氯甲烷加合物(49mg，0.06mmol)和三乙胺(306mg，422μL，3.03mmol)。将反应物加热回流并搅拌3小时，随后冷却至室温。将反应混合物倒入水中，用乙醚(3x30mL)萃取所获溶液。无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的渐变梯度对所获残留物进行纯化，得到为浅黄色油状物的标题化合物(652mg，75％)。
制备(2R,3R)-1-((1R,5S)-10,10-二甲基-3,3-二氧-3λ*6*-硫代-4-氮杂-三环[5.2.1.0*1,5*]癸-4-基)-3-羟基-2-甲基-庚-6-烯-1-酮(250mg，0.703mmol)的无水二氯甲烷溶液(7mL)，加入三甲基氧鎓四氟硼酸盐(208mg，1.406mmol)。反应混合物在室温下搅拌15小时。用甲醇(1mL)、2M盐酸(20mL)和饱和盐水(20mL)处理反应混合物。用乙酸乙酯(3x15mL)萃取混合物，硫酸钠干燥提取物，过滤并蒸发以得到黄色胶状物。使用异己烷/乙酸乙酯4:1通过硅胶色谱法纯化该胶状物，得到为无色胶状物的标题化合物(223mg，86％)。
将2M氢氧化锂的水溶液(5mL，10mmol)中加入至搅拌的28c(223mg，0.60mmol)的四氢呋喃溶液(15mL)中。将搅拌的混合物加热至60℃，持续1.5小时。反应混合物部分蒸干，随后加入2M盐酸(20mL)。用乙酸乙酯(3x15mL)萃取该溶液。硫酸钠干燥提取物，过滤并蒸发以得到黄色胶状物(209mg)。使用异己烷/乙酸乙酯3:1通过硅胶色谱法纯化该胶状物，得到为黄色胶状物的标题化合物(68mg，66％)。
在氮气气氛下将(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基丁酰胺)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(316mg，0.59mmol)的无水二氯甲烷溶液(10mL)冷却至0℃，随后加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(160μL，0.885mmol)。反应混合物在0℃下搅拌2小时，随后加入N,N-二异丙基乙胺(413μl，2.36mmol)，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯。蒸干混合物，将残留物溶解于(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-庚-6-烯酸(162mg，0.94mmol.)的乙腈溶液(13mL)中，加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(250mg，1.32mmol)和1-羟基苯并三唑(220mg，1.32mmol)。在室温下搅拌反应物15小时，然后蒸干以得到黄色油状物。使用乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化该油状物，得到为白色固体的标题化合物(425mg，77％)。
制备28e(425mg，0.725mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)并加入锌粉(0.48g，7.25mmol)，随后加入乙酸铵水溶液(1M，5mL，5mmol)。反应混合物在室温下搅拌15小时。通过硅藻土(hyflo-supercel)过滤该反应物并用乙酸乙酯冲洗。用盐酸(2M，30mL)处理混合物，分离两层。用乙酸乙酯(25mL)萃取水层。合并有机层，用盐水冲洗，过滤并蒸发以得到无色胶状物(299mg)，无需进一步纯化即可直接使用。
将2-(3-乙烯基-苯基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(650mg，2.26mmol)的二氯甲烷溶液(15mL)冷却至0℃，随后加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(569μL，3.39mmol)。反应混合物在0℃下搅拌1小时，随后加入N,N-二异丙基乙胺(1.6mL，5.24mmol)，得到为黄色固体的2-(3-乙烯基-苯基)-哌啶。将该固体与28f(900mg，1.98mmol)一起重新溶解于乙腈(20mL)中。将溶液冷却至0℃，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.05g，2.77mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.4mL，7.92mmol)。将搅拌的反应混合物缓慢加热至室温。2小时后，蒸干溶剂，将其余残留物溶解于乙酸乙酯(30mL)中，用水(3x30mL)冲洗。无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法纯化所获残留物，得到为黄色固体的标题化合物(1.25g，100％)。
向搅拌的28g(1.05mg，1.68mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(550mL)中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(105mg，0.168mmol)。将该溶液加热至84℃并搅拌2.5小时。蒸干溶剂，使用异己烷/乙酸乙酯/丙酮1:0:0至0:9:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法纯化所获残留物。然后使用相同梯度对此物质进行第二轮硅胶色谱分析，得到黄色固体。使用纯乙酸乙酯进行最后一轮硅胶色谱分析，完全通过重力洗脱，得到为白色固体的标题化合物(175mg，18％)，它是非对映异构体的6:4混合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84(d，J＝6.9Hz，3H)，0.91-1.01(m，6H)，1.24-1.37(m，6H)，1.47-2.03(m，14H)，2.06(S，2H)，2.14-2.25(m，1H)，2.43-2.77(m，4H)，3.48(S，1H)，3.56(S，2H)，3.63-3.86(m，1H)，4.00(app t，J＝14.7Hz，1H)，4.12-4.17(m，1H)，4.53-4.65(m，1H)，5.45(q，J＝7.2Hz，1H)，6.27-6.50(m，2H)，6.99-7.10(m，2H)，7.14-7.22(m，1H)，7.32-7.38(m，1H)。LCMS(m/z)596.4[M+H]，Tr＝2.51min。
实施例29和30
将化合物28(155mg，0.26mmol)溶于乙腈/水1:1混合物中，浓度为7.8mg/mL。然后通过一个配有Phenomenex Gemini 10μ110A，250x21.2mm色谱柱的反相HPLC系统，使用等度2:3乙腈/水，20mL/min流速洗脱此溶液。将混合物拆分为2个单独的非对映异构体。浓缩后获得2个单独的非对映异构体，为白色固体。第一个洗脱的异构体是化合物29(15mg，10％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.89-1.05(m，8H)，1.20-1.44(m，10H)，1.51-1.79(m，3H)，1.83-1.99(m，4H)，2.03-2.27(m，3H)，2.33-2.67(m，3H)，2.76(app t，J＝12.3Hz，1H)，3.09(appt，J＝12.3Hz，1H)，3.22-3.38(m，1H)，3.47(S，3H)，3.54-3.62(m，1H)，4.17(d，J＝11.7Hz，1H)，4.59(d，J＝10.5Hz，1H)，5.39-5.53(m，1H)，6.01(S，1H)，6.09-6.23(m，1H)，6.30-6.55(m，2H)，6.99-7.23(m，4H)。LCMS(m/z)596.4[M+H]，Tr＝2.53min。
第二个洗脱的异构体是化合物30(22mg，14％)。1H NMR(300MHz，CD3CN)δ0.98-1.04(m，6H)，1.26-1.38(m，7H)，1.62-1.80(m，5H)，1.83-2.00(m，4H)，2.03-2.14(m，1H)，2.16-2.25(m，2H)，2.36-2.51(m，2H)，2.54-2.66(m，1H)，2.68-2.82(m，1H)，3.03-3.16(m，1H)，3.26-3.34(m，1H)，3.48(S，3H)，3.64-3.73(m，1H)，3.76-3.86(m，1H)，4.00(app t，J＝9.0Hz，1H)，4.16(d，J＝12.0Hz，1H)，4.55-4.66(m，1H)，5.41-5.53(m，1H)，5.97-6.06(m，1H)，6.10-6.22(m，1H)，6.35(S，1H)，6.38-6.49(m，1H)，7.00-7.11(m，2H)，7.14-7.23(m，3H)。LCMS(m/z)596.3[M+H]，Tr＝2.49min。
实施例31
用叔丁基二甲基氯硅烷(158.2mg，1.049mmol)处理(R)-4-苄基-3-[(R)-2-((S)-1-羟基-乙基)-3-丁烯酰]-恶唑烷-2-酮(233.6mg，0.807mmol，按照Org.Lett.2007，9，1635-1638中描述的方法制备)和咪唑(241.7mg，3.551mmol)的N,N-二甲基甲酰胺冷(0℃)溶液(2mL)。在室温下搅拌24小时后，用饱和氯化铵淬灭反应。用乙醚(2x20mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(294.6mg，90％)。
用N,N-双环己基甲胺(250μL，1.168mmol)处理31a(294.6mg，0.730mmol)、(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙醇(184.0mg，0.730mmol)、乙酸钯(II)(32.8mg，0.146mmol)、三(邻甲苯基)膦(44.4mg，0.146mmol)的无水1,4-二氧六环溶液(10mL)。在100℃下搅拌5小时后，将反应物冷却至室温，用二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠稀释。用二氯甲烷萃取水层。合并有机相，通过分相器过滤，真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至7:3的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(230.8mg，55％)。
随后用过氧化氢(30％水溶液，210μL，2.005mmol)和氢氧化锂水合物(33.7mg，0.803mmol)处理31b(230.8mg，0.401mmol)的四氢呋喃/水冷(0℃)溶液(15mL，2:1)。在0℃下搅拌2小时后，用焦亚硫酸钠(765mg，4.1mmol)淬灭反应。在室温下搅拌3.5小时后，真空去除挥发性成分。用水稀释该混合物，并用碳酸钾调整pH。用二氯甲烷(2x20mL)冲洗水层，并用2M盐酸进行酸化(pH～1)，随后用二氯甲烷(3x30mL)萃取。合并所有有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(69.8mg，42％)。
使用31c代替(E)-4-[2-((R)-1-乙酰氧基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-3-丁烯酸，以与22e相同的方法制备化合物31d，收率为46％。
使用31d代替(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-羟基-乙基)-喹啉-7-基]-2,2-二甲基-3-丁烯酰胺}-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯，以化合物22与相同的方法制备化合物31，收率为10％。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.00(d，J＝6.7Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.22-1.44(m，4H)，1.64(d，J＝7.1Hz，3H)，1.68-1.77(m，4H)，1.89-2.08(m，3H)，2.71-2.84(m，1H)，3.78-3.86(m，1H)，4.11(dd，J＝8.2，6.2Hz，1H)，4.17-4.25(m，2H)，4.38-4.47(m，1H)，5.68(q，J＝7.1Hz，1H)，5.94(q，J＝6.9Hz，1H)，6.47(d，J＝16.5Hz，1H)，6.69(dd，J＝16.5，5.3Hz，1H)，7.40(d，J＝8.5Hz，1H)，7.68(S，1H)，7.76(dd，J＝8.7，1.3Hz，1H)，7.81(d，J＝8.7Hz，1H)，8.21(d，J＝8.5Hz，1H)。LCMS(m/z)566.1[M+H]，Tr＝1.65min。
实施例32
向丙炔酸乙酯(2mL，19.735mmol)的二氯甲烷冷(0℃)溶液(50mL)中滴加吗啉(1.7mL，19.435mmol)。在室温下搅拌1.5小时后，真空去除挥发性成分，使用50gIsolute柱，以二氯甲烷/甲醇20:1洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(3.5034g，97％)。
随后用浓盐酸(3.5mL)和亚硝酸钠(1.3g，18.840mmol)处理4-溴苯胺(2.7g，15.7mmol)的冷(0℃)水溶液(30mL)。在0℃下20分钟后，加入浓盐酸(5.3mL)和四氟硼酸钠(6.9g，62.847mmol)。在0℃下40分钟后，过滤中间体重氮化合物，用水、甲醇和乙醚(2.1021g)冲洗，无需进一步纯化即可使用。用32a(1.6614g，8.970mmol)处理该重氮化合物(7.762mmol)的乙腈溶液(50mL)。在室温下1小时后，加入硅胶。在室温下搅拌16小时后，真空去除挥发性成分，使用100g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为高度着色的固体的标题化合物(1.9811g，85％)，是互变异构体混合物。
32b(1.9811g，6.623mmol)的浓硫酸溶液(25mL)在100℃下加热3小时。冷却至0℃后，用水(150mL)稀释该混合物，过滤除去褐色固体。用乙醚(2x50mL)、二氯甲烷(2x50mL)和乙酸乙酯(50mL)萃取滤液。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分，得到为橘黄色固体的标题化合物(1.5094g，90％)，静置后该固体颜色变深。
用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(3.175g，8.350mmol)处理32c(1.5094g，5.964mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(755.9mg，7.753mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.2mL，23.856mmol)的乙腈冷(0℃)溶液(50mL)。在室温下搅拌6小时后，将该混合物冷却至0℃并用1M盐酸(60mL)淬灭。用乙酸乙酯(3x50mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用100g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为亮黄色固体的标题化合物(1.4229g，81％)。
用甲基氯化镁(3.2mL，9.610mmol，3M乙醚溶液)处理32d(1.4229g，4.805mmol)的四氢呋喃冷(-78℃)溶液(50mL)。在-78℃下1小时且0℃下3小时后，用饱和氯化铵(30mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(3x50mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用100g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色固体的标题化合物(751.5mg，62％)。
用(S)-(-)-2-甲基-CBS-恶唑硼烷(3.6mL，3.592mmol，1M甲苯溶液)处理32e(751.5mg，2.993mmol)的四氢呋喃溶液(30mL)。在室温下10分钟后，将该混合物冷却至-60℃并用硼烷四氢呋喃络合物(6mL，5.986mmol，1M四氢呋喃溶液)处理。在-55℃至-30℃下1.5小时后，用甲醇(20mL)淬灭反应。在室温下搅拌16小时后，真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至3:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色固体的标题化合物(345.0mg，45％)。
在100℃下将32f(345.0mg，1.363mmol)、乙酸钯II(61.2mg，0.273mmol)、三(邻甲苯基)膦(83.1mg，0.273mmol)、3-丁烯酸叔丁酯(560μL，3.407mmol)和N,N-二己基甲胺(470μL，2.181mmol)的无水1,4-二氧六环溶液(20mL)加热1.7小时。冷却至室温后，真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至2:3的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色固体的标题化合物(244.1mg，57％)。
用氢氧化锂水合物(67.0mg，1.587mmol)处理1e(422.0mg，0.793mmol)的四氢呋喃/水冷(0℃)溶液(25mL，4:1)。在0℃下搅拌1.5小时后，用1M盐酸(20mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(2x30mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分，将残留的三氯乙醇与甲苯(3x)共沸去除，得到为白色固体的中间体酸，将其与32g(244.1mg，0.793mmol)、4-二甲基氨基吡啶(97.0mg，0.793mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(243.3mg，1.269mmol)和二氯甲烷(20mL)合并。在室温下搅拌16小时后，用稀盐酸淬灭反应。用二氯甲烷(30mL)萃取水层。合并有机相，通过分相器过滤，真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色玻璃状的标题化合物(164.4mg，2步的收率为30％)。
用三甲基硅烷基甲磺酸酯(170μL，0.944mmol)处理32h(164.4mg，0.236mmol)的无水二氯甲烷冷(0℃)溶液(20mL)。在0℃下搅拌1小时后，用N,N-二异丙基乙胺(330μL，1.888mmol)淬灭反应，真空去除挥发性成分。随后用N,N-二异丙基乙胺(330μL，1.888mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(125.6mg，0.330mmol)处理该氨基酸粗品的乙腈冷(0℃)溶液(80mL)。在室温下搅拌2.5小时后，真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为混合物的最终化合物(170.7mg)。通过反相制备HPLC并用水/乙腈95:5至0:100梯度洗脱得到为白色固体的标题化合物(30.6mg，25％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.00(d，J＝6.7Hz，3H)，1.03(d，J＝6.7Hz，3H)，1.61(d，J＝7.3Hz，3H)，1.66-2.07(m，8H)，2.68-2.81(m，1H)，2.97-3.07(m，1H)，3.35-3.47(m，1H)，3.76-3.89(m，1H)，4.28(d，J＝9.4Hz，1H)，4.37-4.47(m，1H)，4.53-4.67(m，1H)，5.52(q，J＝7.1Hz，1H)，6.36-6.51(m，2H)，6.72(d，J＝16.0Hz，1H)，7.61(S，1H)，7.97(dd，J＝8.9，1.6Hz，1H)，8.06(S，1H)，8.38(d，J＝8.9Hz，1H)。LCMS(m/z)523.1[M+H]，Tr＝1.65min。
实施例33和34
用四丁基氟化铵(23.9mL，23.950mmol，1M四氢呋喃溶液)处理(S)-四氢-哒嗪-1,2,3-三羧酸1,2-二叔丁酯3-(2,2,2-三氯-乙基)酯(5.5297g，11.975mmol)的四氢呋喃/甲醇冷(0℃)溶液(50mL，1:1)。在室温下搅拌24小时后，真空去除挥发性成分。将残留物溶于乙醚和饱和的碳酸氢钠中。用乙醚(50mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。通过硅胶色谱法纯化残留物，使用100g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法进一步纯化混合组分，使用50gIsolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，得到为无色油状物的标题化合物(3.9765g，96％)，其是旋转异构体混合物。
用双(三甲基硅基)氨基锂(6.2mL，6.146mmol，1M四氢呋喃溶液)处理33a(1.4112g，4.097mmol)的无水四氢呋喃冷(-78℃)溶液(10mL)。在-78℃下搅拌1.25小时后，用碘甲烷处理该混合物(640μL，10.242mmol)。在-78℃下搅拌1小时，在0℃下搅拌1小时且在室温下搅拌1小时后，用淬灭反应pH 7的缓冲液在0℃下淬灭反应。用二氯甲烷(2x50mL)萃取水相。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(760.7mg，52％)，其是旋转异构体混合物。
用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(7.403g，19.471mmol)处理(S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酸(3.020g，13.908mmol)、(S)-2-氨基-丙酸甲酯盐酸盐(1.9413g，13.908mmol)和N,N-二异丙基乙胺(17.1mL，55.632mmol)的乙腈冷(0℃)溶液(50mL)。在室温下搅拌6小时后，用盐酸(1M，100mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(2x100mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用100gIsolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至3:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(4.0996g，97％)。
用氢氧化锂水合物(88.0mg，2.096mmol)处理33c(317.0mg，1.048mmol)的四氢呋喃/水冷(0℃)溶液(12mL，5:1)。在0℃下搅拌2.5小时后，用盐酸(1M，30mL)淬灭反应。用二氯甲烷(2x30mL)萃取水层。合并有机相，通过分相器过滤，真空去除挥发性成分，得到为白色固体的酸粗品。
用三氟乙酸(5mL)处理33b(376.0mg，1.049mmol)的无水二氯甲烷冷(0℃)溶液(15mL)。在0℃下搅拌30分钟且在室温下搅拌2小时后，加入三氟乙酸(4mL)。1小时后，真空去除挥发性成分，并将残余三氟乙酸与甲苯(3x)共沸去除，得到为灰白色固体的双三氟乙酸铵盐。随后用N-甲基吗啉(580μL，5.240mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(596.2mg，1.572mmol)处理如前一步中制备的双三氟乙酸铵盐和(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酸粗品的无水二氯甲烷冷(0℃)溶液(15mL)。在室温下搅拌19小时后，用盐酸(1M，30mL)淬灭反应。用二氯甲烷(2x30mL)萃取水相。合并有机相，用饱和碳酸氢钠水溶液冲洗，并通过分相器过滤。真空去除挥发性成分，使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色泡沫的标题化合物(373.1mg，2步的收率为83％)，其是非对映异构体混合物。
用三甲基硅烷基甲磺酸酯(310μL，1.741mmol)处理33e(373.1mg，0.871mmol)的无水二氯甲烷冷(0℃)溶液(10mL)。在0℃下搅拌1小时后，用N,N-二异丙基乙胺(610μL，3.484mmol)淬灭反应，真空去除挥发性成分。随后用N,N-二异丙基乙胺(610μL，3.484mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(463.7mg，1.219mmol)处理胺粗品和(E)-(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-4-己烯酸(137.8mg，0.871mmol)的无水乙腈冷(0℃)溶液(15mL)。在室温下搅拌18小时后，用盐酸(1M，30mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(2x30mL)萃取水层。合并有机相，用饱和的碳酸氢钠(20mL)冲洗，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:2至1:4的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色固体的标题化合物(332.2mg，81％)，其是非对映异构体混合物。
使用33f和(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇代替1e和(E)-4-[3-((R)-1-羟基-乙基)-噌啉-6-基]-3-丁烯酸叔丁酯，按照与(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(R)-1-[6-((E)-3-叔丁氧羰基-丙烯基)-噌啉-3-基]-乙酯相同的方法制备化合物33g，2步的收率为30％。
通过N2鼓泡20分钟对33g(136.2mg，0.214mmol)的甲苯溶液(70mL)进行脱气。加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(27mg，0.043mmol)并将该混合物回流2.5小时。再次加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(20mg)，搅拌回流1小时后，将该混合物冷却至室温，真空去除挥发性成分，使用25g Isolute柱，以乙酸乙酯/丙酮1:0至10:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，在各个混合物中得到两种非对映异构体。使用10gIsolute柱，以乙酸乙酯/丙酮1:0至10:1的连续梯度重力洗脱，通过硅胶色谱法对两个混合物进行纯化，得到为白色固体的极性较大的非对映异构体(19.7mg，15％)。通过以乙酸乙酯(4次洗脱)洗脱的制备TLC以及以异己烷/丙酮7:3(2次洗脱)洗脱的制备TLC对极性较小的非对映异构体进行进一步纯化，得到为白色固体的标题化合物(7.6mg，6％)。没有进行相对立体化学的归属。
极性较大的非对映异构体即化合物33：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.83-1.07(m，7H)，1.41(d，J＝7.1Hz，3H)，1.47(d，J＝6.9Hz，3H)，1.50(S，3H)，1.70(d，J＝6.7Hz，3H)，1.75-1.90(m，2H)，1.96-2.15(m，3H)，2.64(dd，J＝7.6，3.1Hz，1H)，2.70-2.84(m，1H)，3.42(S，3H)，3.90(dd，J＝8.7，3.1Hz，1H)，4.00(app t，J＝8.0Hz，1H)，4.10(S，1H)，4.58-4.69(m，1H)，6.00(dd，J＝9.4，7.1Hz，1H)，6.22(q，J＝6.2Hz，1H)，6.51(d，J＝9.8Hz，1H)，6.93(S，1H)，7.13-7.23(m，1H)，7.34-7.43(m，1H)，7.90-7.97(m，2H)，8.47(S，1H)。LCMS(m/z)594.3[M+H]，Tr＝1.87min。
极性较小的非对映异构体即化合物34：1H NMR(300MHz，CD3CN)δ–0.51-–0.39(m，5H)，–0.30(d，J＝6.9Hz，3H)，0.06(d，J＝7.1Hz，3H)，0.15(d，J＝6.9Hz，3H)，0.19(S，3H)，0.25-0.34(m，4H)，0.38-0.45(m，1H)，0.81-1.02(m，2H)，1.14-1.42(m，2H)，2.69(dd，J＝8.7，2.9Hz，1H)，3.00-3.10(m，2H)，3.45(S，3H)，4.32(app五重峰，J＝7.1Hz，1H)，4.76(q，J＝6.7Hz，1H)，5.53(d，J＝16.3Hz，1H)，5.85(dd，J＝16.1，8.9Hz，1H)，6.20(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)，6.41(d，J＝8.9Hz，1H)，6.65-6.75(m，2H)，6.91(S，1H)，7.11(d，J＝7.3Hz，1H)，7.79(S，1H)。LCMS(m/z)594.3[M+H]，Tr＝1.83min。
实施例35
用O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(3.663g，9.658mmol)处理2-氟-5-羟基-苯甲酸(1.0051g，6.438mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(1.2560g，12.856mmol)和三乙胺(3.6mL，25.752mmol)的二氯甲烷冷(0℃)溶液(35mL)。在室温下搅拌20小时后，在0℃用盐酸(2M，30mL)淬灭反应。通过硅藻土(Celite)过滤该乳状液，用二氯甲烷(50mL)萃取水层。合并有机相，通过分相器过滤，真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以甲苯/乙醚1:0至1:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(260.5mg，20％)。
随后用碳酸钾(903.8mg，6.539mmol)和烯丙基溴(340μL，3.924mmol)处理35a(260.5mg，1.308mmol)的丙酮(20mL)溶液。在室温下搅拌24小时后，用水(20mL)淬灭反应。用二氯甲烷(2x30mL)萃取水层。合并有机相，通过分相器过滤，真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至3:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(289.7mg，92％)。
用甲基氯化镁(810μL，2.422mmol，3M乙醚溶液)处理35b(289.7mg，1.210mmol)的四氢呋喃冷(-78℃)溶液(10mL)。在-78℃下1.25小时，0℃下2小时和室温下16小时后，加入甲基氯化镁(810μL，2.422mmol，3M乙醚溶液)。在-78℃下2.5小时和室温下1.2小时后，用硅胶淬灭反应，真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至9:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(196.7mg，84％)。
用(S)-(-)-2-甲基-CBS-恶唑硼烷(1.2mL，1.215mmol，1M甲苯溶液)处理35c(196.7mg，1.013mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液。在室温下10分钟后，将该混合物冷却至-50℃并用处理硼烷四氢呋喃络合物(2.1mL，2.026mmol，1M四氢呋喃溶液)。在-50℃至-40℃下1.5小时后，用甲醇(6mL)淬灭反应。在室温下搅拌22小时后，真空去除挥发性成分。使用25gIsolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(179.4mg，90％)。
用三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(1.4mL，7.510mmol)处理1e(1.9973g，3.755mmol)的无水二氯甲烷冷(0℃)溶液(40mL)。在0℃下30分钟后，用N,N-二异丙基乙胺(2.6mL，15.020mmol)处理反应混合物，真空去除挥发性成分，得到相应胺。用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.999g，5.257mmol)处理此胺、(E)-(2R，3R)-2-甲基-6-己烯酸(428.6mg，3.755mmol，按照Synlett 2002，12，第2039-2040页中描述的方法制备)和N，N-二异丙基乙胺(2.6mL，15.020mmol)的乙腈冷(0℃)溶液(50mL)。在室温下搅拌20小时后，用盐酸(1M，100mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(2x50mL)萃取水层。合并有机相，用饱和的碳酸氢钠冲洗，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:4的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为褐色泡沫的标题化合物(1.6735g，84％)。
随后用锌粉(1.457g，22.286mmol)和乙酸铵(1.171g，15.195mmol)水溶液(5mL)处理35e(534.7mg，1.013mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)。在室温下搅拌24小时后，通过硅藻土(Celite)过滤该混合物。用饱和硫酸氢钾和乙酸乙酯润洗固体。用2M盐酸调整滤液的pH，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。将残余乙酸与甲苯(3x)共沸去除，得到为白色固体的相应酸。用N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(310.8mg，1.621mmol)处理该酸粗品、(R)-1-(5-烯丙氧基-2-氟-苯基)-乙醇(179.4mg，0.914mmol)和4-二甲基氨基吡啶(123.7mg，1.013mmol)的二氯甲烷溶液(15mL)。在室温下搅拌20小时后，在0℃下用盐酸(2M，15mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:3的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(310.5mg，2步的收率为59％)。
用Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(67.7mg，0.108mmol)处理35f(310.5mg，0.540mmol)的二氯乙烷溶液(180mL)。回流搅拌2小时后，将反应物冷却至室温，真空去除挥发性成分。通过硅胶色谱法纯化残留物，使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，然后使用25g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度重力洗脱，得到为混合物的标题化合物(109.9mg)。使用以异己烷/丙酮3:1(3次洗脱)洗脱的制备TLC对其进行纯化，通过硅胶色谱法使用25g Isolute柱，以异己烷/丙酮1:0至3:2的连续梯度洗脱，得到为白色固体的标题化合物(58.7mg，20％)。1H NMR(300MHz，CD3CN)δ0.85-0.97(m，6H)，1.17-1.22(m，3H)，1.28-1.39(m，4H)，1.44-1.63(m，6H)，1.70-1.82(m，1H)，1.83-1.92(m，1H)，2.30-2.45(m，3H)，3.62-3.73(m，2H)，3.89(app t，J＝8.5Hz，1H)，4.28(d，J＝8.0Hz，1H)，4.40-4.60(m，2H)，5.32(app五重峰，J＝6.9Hz，1H)，5.62-5.74(m，1H)，5.77-5.89(m，1H)，6.02(q，J＝6.7Hz，1H)，6.40(d，J＝7.8Hz，1H)，6.76-6.85(m，2H)，7.01(app t，J＝9.4Hz，1H)，7.19(br s，1H)。LCMS(m/z)547.2[M+H]，Tr＝2.39min。
实施例36
向化合物35(44.0mg，0.080mmol)的乙酸乙酯溶液(5mL)中加入钯碳催化剂(10％，5mg)。排空环境中的氧气。在氢气气氛下于室温搅拌2.5小时后，真空去除挥发性成分，使用20g Isolute柱，以异己烷/丙酮1:0至3:2的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，随后使用以异己烷/丙酮3:2洗脱的制备TLC，得到为白色固体的最终化合物(19.0mg，43％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85-0.99(m，8H)，1.14-1.22(m，4H)，1.26-1.42(m，4H)，1.48(d，J＝6.7Hz，1H)，1.52-1.84(m，8H)，2.28-2.42(m，1H)，3.61-3.72(m，1H)，3.75-4.10(m，4H)，4.25(d，J＝9.4Hz，1H)，5.26(app五重峰，J＝7.1Hz，1H)，6.02(q，J＝6.7Hz，1H)，6.34(d，J＝8.5Hz，1H)，6.75-6.86(m，2H)，6.95-7.12(m，2H)。LCMS(m/z)549.3[M+H]，Tr＝2.54min。
实施例37：(E)-(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-2,14-二异丙基-18-甲氧基-11,17-二甲基-22-氧杂-3,9,12,15,28-五氮杂-三环[21.3.1.1*5,9*]二十八烷-1(27),19,23,25-四烯-4,10,13,16-四酮
使用3-羟基苯甲醛代替2-氟-5-羟基-N-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺，以与35b相同的方法制备37a，收率为78％。
用D-缬氨醇(870.0mg，8.434mmol)处理37a(1.36g，8.434mmol)和硫酸镁(5g)的二氯甲烷冷(0℃)混悬液(40mL)。在0℃至室温下搅拌23小时后，过滤该混合物并真空去除挥发性成分。将残留物溶于无水二氯甲烷(40mL)，随后用三乙胺(1.3mL，9.277mmol)和溶液三甲基氯硅烷(9.3mL，9.277mmol，1M二氯甲烷溶液)处理。在室温下搅拌24小时后，真空去除挥发性成分，用乙醚/异己烷(100mL，1:1)研磨残留物。过滤去除白色固体，将滤液蒸发至干以得到中间体胺。在冷却(-40℃)的3颈圆底烧瓶中，装有氮气管路，并通过另一个漏斗加入无水乙醚(25mL)和异丙基锂溶液(29mL，20.242mmol，0.7M戊烷溶液)。向此混合物中以15分钟时间滴加该胺的无水乙醚溶液(25mL)。在-40℃下搅拌2.5小时后，用盐酸(2M，50mL)淬灭反应并将混合物加热至室温。在0℃用NaOH颗粒碱化酸水层并用乙醚(2x)提取。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(470.1mg，3步的收率为19％)。
用高碘酸(1.213g，5.323mmol)处理37b(470.1mg，1.613mmol)的甲醇(10mL)和甲胺水溶液(3mL，40wt％水溶液)。在室温下搅拌24小时后，加入更多甲胺水溶液(4mL，40wt％水溶液)和高碘酸(1.213g，5.323mmol)。在室温小搅拌17小时后，使用硅藻土(Celite)过滤该混合物，用甲醇润洗所获固体。真空去除挥发性成分，将残留物在水和乙醚之间分配。用乙醚萃取水层，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用25g Isolute柱，以乙酸乙酯洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为淡黄色油状物的标题化合物(191.8mg，58％)。
用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(431.2mg，1.134mmol)处理(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸(324.4mg，0.810mmol)、37c(166.3mg，0.810mmol)和N,N-二异丙基乙胺(560μL，3.240mmol)的乙腈冷(0℃)溶液(15mL)。在室温下搅拌20小时后，在0℃用盐酸(2M，25mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(2x)萃取水层。合并有机相，硫酸钠干燥，过滤并真空去除挥发性成分。使用50g Isolute柱，以异己烷/乙酸乙酯1:0至0:1的连续梯度洗脱，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为固体的标题化合物(230.5mg，48％)。
使用37d代替1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-3-甲基-六氢哒嗪-3-羧酸甲酯，以与1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-hex-4-烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-3-甲基-六氢哒嗪-3-羧酸甲酯相同的方法制备化合物37e，2步的收率为30％。
使用37e代替(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-庚-6-烯酰胺)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸甲基-((R)-6-乙烯基-茚满-1-基)-酰胺，以与25相同的方法制备化合物37，收率为43％。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ0.74-0.91(m，12H)，1.15(d，J＝7.1Hz，3H)，1.28(d，J＝7.3Hz，3H)，1.40-1.64(m，3H)，1.71-1.88(m，3H)，1.98(app六重峰，J＝6.7Hz，1H)，2.66-2.75(m，2H)，3.38-3.53(m，1H)，3.89(dd，J＝6.7，2.9Hz，1H)，4.10(app t，J＝8.9Hz，1H)，4.14-4.22(m，1H)，4.42(qd，J＝10.0，4.2Hz，1H)，4.57(app t，J＝8.2Hz，1H)，4.76(d，J＝11.8Hz，1H)，5.23(app t，J＝7.3Hz，1H)，5.69-5.90(m，2H)，6.77-6.90(m，3H)，7.05(d，J＝9.4Hz，1H)，7.16-7.24(m，1H)，8.01(d，J＝8.5Hz，1H)，8.14(d，J＝8.5Hz，1H)。LCMS(m/z)586.3[M+H]，Tr＝2.34min。
实施例38
向(R)-1-(3-溴代-苯基)-乙醇(201mg，1.00mmol)、4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)苯硼酸(Acros Organics，224mg，1.00mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(4mL)混合物中加入碳酸钾(276mg，2.00mmol)和水(1mL)。在室温下搅拌该混合物，并加入四(三苯基膦)钯(0)(58mg，0.05mmol)，随后在微波反应器中于100℃下加热反应混合物30分钟。用乙酸乙酯和水稀释该反应混合物。分离两层，用水和盐水冲洗有机相，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯9:1至7:3的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为油状物的标题化合物(230mg，76％)。
在氮气下于5℃搅拌38a(230mg，0.77mmol)的四氢呋喃溶液(4mL)，加入氢氧化锂一水合物溶液(92mg，1.54mmol)，在5℃下搅拌反应混合物2小时，然后再室温下搅拌过夜。用2M盐酸酸化该溶液并用乙酸乙酯(2x)萃取。合并有机提取物，用水和盐水冲洗，硫酸镁干燥并蒸干，得到为白色固体的标题化合物(175mg，84％)。
在氮气下于冰水浴中冷却1e(372mg，0.70mmol)的二氯甲烷溶液(15mL)。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.18mL，1.05mmol)，将所获溶液搅拌1小时。加入冷饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)，在0℃下搅拌该混合物15分钟。分离有机层，用盐水冲洗，硫酸镁干燥并蒸干，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(0.70mmol)，无需进一步纯化即可使用。在氮气下于0℃搅拌(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(0.70mmol)的乙腈溶液(15mL)。加入38b(175mg，0.64mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(123mg，0.64mmol，用不低于20wt.％水润湿)，随后加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(173mg，0.90mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。蒸干溶剂。将残留物溶于乙酸乙酯，用水(3x)、盐水冲洗该溶液，硫酸镁干燥并蒸干。使用异己烷/乙酸乙酯1:2至0:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物。用乙醚研磨产物并干燥，得到为白色固体的标题化合物(367mg，83％)。
在室温于氮气下搅拌38c(343mg，0.50mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)。加入锌粉(715mg，11mmol)，随后加入乙酸铵(578mg，7.50mmol)水溶液(5mL)。在室温于氮气下搅拌反应混合物70小时。使用硅藻土(Celite)过滤反应混合物并用乙酸乙酯和2M盐酸水溶液冲洗滤板。用2M盐酸水溶液将滤液酸化至pH 2，加入固体氯化钠以饱和水层，用乙酸乙酯萃取混合物。合并乙酸乙酯提取物，用盐水冲洗，硫酸镁干燥并蒸干。将残留物与甲苯(3x)共蒸发，得到为白色粉末的标题化合物(237mg，86％)。
在室温于氮气下搅拌38d(100mg，0.18mmol)的二氯甲烷溶液(180mL)。加入4-二甲基氨基吡啶(33mg，0.27mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(104mg，0.54mmol)，将反应混合物在室温下搅拌18小时。蒸干溶剂。使用异己烷/乙酸乙酯1:2至0:1的梯度，随后使用乙酸乙酯至乙酸乙酯/丙酮4:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物。将残留物与二氯甲烷共蒸发，随后用乙醚研磨，得到固体。用乙醚冲洗该固体并干燥，得到为白色固体的标题化合物(8mg，9％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.95(d，J＝6.2Hz，3H)，0.96(d，J＝6.5Hz，3H)，1.39(d，J＝7.1Hz，3H)，1.54-1.80(m，5H)，1.82-2.10(m，3H)，2.52-2.63(m，1H)，3.29-3.62(m，2H)，4.07(app t，J＝9.6Hz，1H)，4.45(br d，J＝13.6Hz，1H)，4.67(ABq，ΔδAB＝0.12，JAB＝16.0Hz，2H)，4.88-5.01(m，1H)，5.93-6.00(m，2H)，6.57(d，J＝10.3Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，2H)，7.15-7.53(m，6H)。LCMS(m/z)537.2[M+H]，Tr＝2.34min。
实施例39
在四氢呋喃(40mL)中制备4-碘苯酚(2.2g，10.0mmol)、(R)-2-羟基-丙酸甲酯(0.95mL，10.0mmol)和三苯基膦(2.62g，10.0mmol)的溶液。滴加偶氮二甲酸二异丙酯(2.0mL，10mmol)，将反应物在-5℃下搅拌1小时，然后在室温下搅拌2小时。蒸干四氢呋喃，加入乙醚/异己烷(1:10，50mL)。在室温下搅拌该混合物10分钟，形成沉淀。倾析滤液并蒸干。使用异己烷/乙酸乙酯20:1至10:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为油状物的标题化合物(2.02g，66％)。
将(R)-1-(3-溴苯基)-乙醇(1.0g，4.97mmol)、双联硼酸频哪醇酯(1.39g，5.47mmol)、1,1'双(二苯基膦)二茂铁二氯钯(II)、二氯甲烷加合物(203mg，0.249mmol)和乙酸钾(976mg，9.94mmol)溶解于1,4-二氧六环(10mL)中，反应物加热回流并搅拌3天。将反应物冷却至室温，随后通过Hyflo板过滤。然后用乙酸乙酯冲洗该板，浓缩合并的有机相，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法对其进行纯化，得到为淡黄色油状物的标题化合物(936mg，76％)。
在室温于氮气下搅拌39b(496mg，2.00mmol)和39a(612mg，2.00mmol)的1,2-二甲氧基乙烷溶液(4mL)。向该溶液中加入2M碳酸钠水溶液(4mL)，随后加入四(三苯基膦)钯(0)(116mg，0.1mmol)，反应混合物在80℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，加入水，用乙酸乙酯萃取混合物。合并乙酸乙酯提取物，用盐水冲洗，用硫酸钠干燥并蒸干。使用异己烷/乙酸乙酯17:3至1:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为胶状物的标题化合物(253mg，42％)。
在5℃于氮气下搅拌39c(250mg，0.83mmol)的四氢呋喃溶液(4mL)。加入氢氧化锂一水合物(42mg，1.00mmol)的水溶液(1mL)，在5℃下搅拌反应混合物1小时。用2M盐酸水溶液将反应混合物酸化至pH 3，用乙酸乙酯萃取该混合物。分离有机提取物，用水和盐水冲洗，硫酸镁干燥并蒸干，得到为白色泡沫的标题化合物(224mg，94％)。
在氮气下于冰水浴中冷却1e(478mg，0.9mmol)的二氯甲烷溶液(15mL)。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.25mL，1.35mmol)，将所获溶液搅拌1小时。加入冷饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)，混合物在0℃下搅拌15分钟。分离有机层，用盐水冲洗，硫酸镁干燥并蒸干，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(0.9mmol)，无需进一步纯化即可使用。在0℃于氮气下搅拌(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(0.9mmol)的乙腈溶液(15mL)。加入39d(224mg，0.78mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(184mg，0.96mmol，用不低于20wt.％水润湿)，随后加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(225mg，1.17mmol)，将反应混合物在室温下搅拌2小时。蒸干溶剂。将残留物溶于乙酸乙酯，用水(3x)、盐水冲洗该溶液，硫酸镁干燥并蒸干。使用异己烷/乙酸乙酯1:2至0:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为胶状物的标题化合物(490mg，90％)。
在室温于氮气下搅拌39e(490mg，0.70mmol)的四氢呋喃溶液(15mL)。加入锌粉(1.00g，15.40mmol)和乙酸铵(810mg，10.50mmol)水溶液(8mL)。反应混合物在室温于氮气下搅拌24小时。使用硅藻土(Celite)过滤反应混合物，用乙酸乙酯和2M盐酸水溶液冲洗滤板。用2M盐酸水溶液将滤液酸化至pH 2-3。加入固体氯化钠以饱和水层，用乙酸乙酯萃取混合物。合并乙酸乙酯提取物，用盐水冲洗。使用疏水性玻璃料过滤有机提取物，蒸干滤液。将残留物与乙酸乙酯(3x)以及甲苯(3x)共蒸发，得到为白色固体的标题化合物(394mg，98％)。
在室温于氮气下搅拌39f(100mg，0.18mmol)的二氯甲烷溶液(180mL)。加入4-二甲基氨基吡啶(44mg，0.36mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(138mg，0.72mmol)，反应混合物在室温下搅拌4小时。蒸干溶剂。在残留物中加入乙酸乙酯，用柠檬酸水溶液(pH 4)和盐水冲洗该混合物。硫酸镁干燥有机层，蒸干溶剂。使用异己烷/乙酸乙酯3:7至0:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物。用乙醚/异己烷1:1研磨残留物，得到为白色固体的标题化合物(10mg，10％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.94(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.9Hz，3H)，1.51(d，J＝7.1Hz，3H)，1.61(d，J＝6.5Hz，3H)，1.67(d，J＝6.9Hz，3H)，1.72-2.00(m，5H)，2.60-2.69(m，1H)，3.54-3.63(m，1H)，4.13(d，J＝10.5Hz，1H)，4.32(br d，J＝12.9Hz，1H)，4.57-4.66(m，2H)，4.78(q，J＝7.1Hz，1H)，5.92(q，J＝6.5Hz，1H)，6.91(d，J＝8.9Hz，2H)，7.22(d，J＝7.6Hz，1H)，7.34-7.61(m，5H)。LCMS(m/z)551.2[M+H]，Tr＝2.51min。
实施例40
使用(S)-2-羟基-丙酸乙酯代替(R)-2-羟基-丙酸甲酯，按照与(S)-2-(4-碘-苯氧基)-丙酸甲酯相同的方法制备40a，收率为28％。
使用40a代替(S)-2-(4-碘-苯氧基)-丙酸甲酯，按照与(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸甲酯相同的方法制备40b，收率为54％。
使用40b代替(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸甲酯，按照与(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸相同的方法制备40c，收率为71％。
使用40c代替(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸，按照与(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯相同的方法制备40d，收率为71％。
使用40d代替(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯，按照与((S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸相同的方法制备40e，收率为83％。
在室温于氮气下搅拌40e(102mg，0.18mmol)的二氯甲烷溶液(180mL)。加入4-二甲基氨基吡啶(44mg，0.36mmol)和(7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸酯(114mg，0.22mmol)，在室温下搅拌反应混合物4小时。蒸干溶剂。在残留物中加入乙酸乙酯，用柠檬酸水溶液(pH 4)和盐水冲洗该混合物。分离有机层，硫酸镁干燥并蒸干。使用异己烷/乙酸乙酯3:7至0:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物。通过制备反相HPLC纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(2.8mg，3％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)1.03(d，J＝6.9Hz，3H)，1.05(d，J＝6.9Hz，3H)，1.25(d，J＝7.1Hz，3H)，1.56(d，J＝6.5Hz，3H)，1.57(d，J＝6.3Hz，3H)，1.64-2.10(m，5H)，2.75-2.83(m，1H)，3.60-3.66(m，1H)，4.08(d，J＝10.0Hz，1H)，4.32(brd，J＝12.9Hz，1H)，4.74(q，J＝6.5Hz，1H)，5.22(q，J＝7.3Hz，1H)，5.98(q，J＝6.5Hz，1H)，6.86(d，J＝8.5Hz，2H)，7.20-7.25(m，1H)，7.39-7.51(m，5H)。LCMS(m/z)551.2[M+H]，Tr＝2.27min。
实施例41
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(31mg，0.05mmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(44mg，0.12mmol)悬于脱气的水(20mL)中，用氮气脱气混合物10分钟。在70℃于氮气下搅拌该混合物90分钟。将所获黄色溶液冷却至室温。加入1-(6-溴代-吡啶-2-基)-乙酮(2.0mg，10mmol)的脱气四氢呋喃溶液(10mL)和甲酸钠(3.4g，50mmol)，反应混合物用氮气脱气5分钟。在40℃下剧烈搅拌反应混合物30分钟。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯萃取。合并有机提取物，用水和盐水冲洗，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用异己烷/乙酸乙酯3:1至0:1的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为褐色油状物的标题化合物(1.78g，89％)。
在41a(101mg，0.50mmol)、4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)苯硼酸(112mg，0.50mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(4mL)混合物中加入碳酸钾(138mg，1.00mmol)水溶液(1mL)。加入四(三苯基膦)钯(0)(29mg，0.025mmol)，在微波反应器中于100℃加热反应混合物30分钟。然后用乙酸乙酯和水稀释反应混合物。加入2M盐酸以将反应混合物的pH调整为pH 3，蒸干挥发性成分。在残留物中加入甲醇，使用疏水性玻璃料过滤该混合物。蒸干滤液，真空干燥该残留物，得到为白色固体的标题化合物(143mg，93％)。
在氮气下于冰水浴中冷却1e(240mg，0.45mmol)的二氯甲烷溶液(15mL)。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.12mL，0.68mmol)，将所获溶液搅拌1小时。加入冷饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)，在0℃搅拌该混合物15分钟。分离有机层，用盐水冲洗，硫酸镁干燥并蒸干，得到(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(0.45mmol)，无需进一步纯化即可使用。在室温于氮气下搅拌(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(0.45mmol)、41b(143mg，0.45mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.16mL，0.9mmol)的乙腈(15mL)混合物。加入1-羟基苯并三唑水合物(108mg，0.56mmol，用不低于20wt.％的水润湿)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(130mg，0.675mmol)，在室温下搅拌反应混合物4小时。加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，在室温下搅拌反应混合物22小时。再次加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(87mg，0.45mmol)，在室温下搅拌反应混合物6小时。蒸干溶剂。将残留物悬于乙酸乙酯和柠檬酸水溶液(pH 3)的混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物。合并有机提取物，用水以及盐水冲洗。使用疏水性玻璃料过滤有机层，蒸干滤液。使用乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(71mg，23％)。
在0℃于氮气下搅拌41c(69mg，0.10mmol)的四氢呋喃溶液(2mL)，加入氢氧化锂一水合物(5mg，0.12mmol)的水溶液(0.5mL)，在0℃下搅拌反应混合物1小时。用2M盐酸将溶液酸化至pH 3，蒸干溶剂。残留物与甲苯(3x)共蒸发，以得到为白色固体的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-吡啶-2-基]-苯氧基}-乙酰氨基)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸(58mg，0.1mmol)，在下一步反应中使用其粗品。在室温于氮气下搅拌(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-吡啶-2-基]-苯氧基}-乙酰氨基)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸(56mg，0.1mmol)的二氯甲烷溶液(100mL)。加入4-二甲基氨基吡啶(49mg，0.4mmol)，搅拌反应混合物5分钟。以5分钟时间滴加(7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸酯(78mg，0.15mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)中加入，在室温下搅拌反应混合物2小时。蒸干溶剂，使用乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物。通过制备反相HPLC纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(14mg，26％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.94(d，J＝6.7Hz，3H)，0.98(d，J＝6.5Hz，3H)，1.36(d，J＝7.1Hz，3H)，1.68(d，J＝6.5Hz，3H)，1.72-2.05(m，5H)，2.65-2.74(m，1H)，3.53-3.60(m，1H)，4.14(d，J＝10.7Hz，1H)，4.30-4.38(m，1H)，4.66(ABq，ΔδAB＝0.13，JAB＝15.8Hz，2H)，5.07(q，J＝7.1Hz，1H)，5.87(q，J＝6.5Hz，1H)，6.89(d，J＝8.9Hz，2H)，7.26(br d，J＝7.1Hz，1H)，7.71-7.78(m，2H)，8.06(d，J＝8.9Hz，2H)。LCMS(m/z)538.2[M+H]，Tr＝2.07min。
实施例42
使用3-(4-溴代-吡唑-1-基)-丙酸甲酯代替(S)-2-(4-碘-苯氧基)-丙酸甲酯，按照与(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸甲酯相同的方法制备42a，收率为28％。
使用42a代替(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸甲酯，按照与(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸相同的方法制备42b，收率为96％。
使用42b代替(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酸，以与化合物(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(S)-2-[3'-((R)-1-羟基-乙基)-联苯-4-基氧基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯相同的方法制备42c，收率为49％。
使用42c代替(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-{4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-吡啶-2-基]-苯氧基}-乙酰氨基)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基}-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯，以与化合物41相同的方法制备化合物42，收率为8％。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.94(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.5Hz，3H)，1.37(d，J＝7.1Hz，3H)，1.62(d，J＝6.5Hz，3H)，1.65-2.05(m，5H)，2.61-2.69(m，1H)，2.88-3.10(m，2H)，3.58-3.63(m，1H)，3.90-4.00(m，1H)，4.01(d，J＝8.5Hz，1H)，4.38-4.44(m，1H)，4.58-4.67(m，1H)，5.31(q，J＝7.1Hz，1H)，5.91(q，J＝6.5Hz，1H)，7.18(d，J＝7.6Hz，1H)，7.31(app t，J＝7.6Hz，1H)，7.47(d，J＝7.6Hz，1H)，7.58(S，1H)，7.77(S，1H)，7.95(S，1H)。LCMS(m/z)525.2[M+H]，Tr＝4.51min。
实施例43
在5mL微波管中向(R)-1-(3-溴苯基)-乙醇(483mg，2.40mmol)和4-(2-甲氧羰基乙基)苯硼酸(500mg，2.40mmol)的1,2-二甲氧基乙烷溶液(5mL)中加入碳酸钾(663mg，4.80mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(139mg，0.12mmol)。密封该管，然后在微波中使用固定保留时间，在100℃高吸收下加热20分钟。使用Hyflo板过滤反应混合物，用乙酸乙酯冲洗该板。浓缩合并的有机相，使用异己烷/乙酸乙酯1:0至3:2的渐变梯度，通过硅胶色谱法对所获褐色油状物进行纯化，得到为黄色油状物的标题化合物(416mg，61％)。
将43a(416mg，1.46mmol)溶于四氢呋喃(8mL)和水(2mL)的混合物中，使用冰浴冷却该溶液。加入氢氧化锂一水合物(175mg，2.92mmol)，将该溶液缓慢加热至室温过夜。使用2M盐酸酸化该溶液，用二氯甲烷(2x20mL)萃取。合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到为白色固体的标题化合物(250mg，89％)。
将(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(669mg，1.55mmol)和43b(350mg，1.29mmol)溶解于无水乙腈(10mL)中，并使用冰浴进行冷却。然后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(688mg，1.81mmol)和N,N-二异丙基乙胺(899μL，5.16mmol)，将反应物缓慢加热至室温，搅拌过夜。随后去除溶剂并将残留物溶于乙酸乙酯。用水(3x20mL)和盐水(20mL)冲洗该溶液，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，使用异己烷/乙酸乙酯1:4至0:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法对所获褐色油状物进行纯化，得到为白色固体的标题化合物(314mg，36％)。
将43c(314mg，0.459mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中。加入锌粉(300mg，4.59mmol)，随后加入乙酸铵(1M水溶液，3.21mL，3.21mmol)。将反应物搅拌过夜。随后使用Hyflo板过滤反应混合物。用硫酸氢钾溶液和乙酸乙酯冲洗该板。使用2M盐酸酸化此两相混合物，直至溶液为大约pH 1。分离两相，用乙酸乙酯萃取水相。无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并浓缩，得到为黄色固体的标题化合物(212mg，84％)。
在氮气气氛下将43d(100mg，0.181mmol)溶于二氯甲烷(181mL)中。加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(142mg，0.724mmol)和4-二甲基氨基吡啶(44mg，0.362mmol)，搅拌反应物过夜。去除溶剂，使用100％乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(52mg，54％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.92(d，J＝6.7Hz，6H)，1.24-1.29(m，3H)，1.60-1.68(m，5H)，1.85-1.98(m，2H)，2.37-2.49(m，1H)，2.58-2.78(m，1H)，2.83-2.93(m，1H)，3.16-3.28(m，1H)，3.45(m，3H)，4.03-4.11(m，1H)，4.45-4.54(m，1H)，5.06-5.16(m，1H)，5.92-6.00(m，1H)，6.25(d，J＝8.5Hz，1H)，7.19(S，1H)，7.22(S，2H)，7.39(app t，J＝7.6Hz，1H)，7.48-7.56(m，3H)，7.62(br s，1H)。LCMS(m/z)535.3[M+H]，Tr＝2.43min。
实施例44
将溴乙酸苄酯(2.07mL，13.1mmol)和三苯基膦(3.63g，13.8mmol)溶解于甲苯(60mL)中，搅拌3天。过滤收集白色固体，用乙醚冲洗。由此得到为白色固体的标题化合物(5.86g，93％)。
将5-溴-2-吡啶甲醛(125mg，0.666mmol)和44a(655mg，1.33mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中。加入1,1,3,3-四甲基胍(251μL，2mmol)，将反应物搅拌3.5小时。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，分离两相。用盐水冲洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色固体的标题化合物(186mg，88％)。
将44b(186mg，0.585mmol)、(R)-1-[3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-苯基]-乙醇(145mg，0.585mmol)，碳酸铯(476mg，1.46mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(66mg，0.0585mmol)置于一个微波管中。加入1,2-二甲氧基乙烷(2mL)和水(0.5mL)，密封该管。使用固定保留时间，在150℃高吸收下于微波中加热反应物30分钟。将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取所获混合物。无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的渐变梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为橘黄色胶状物的标题化合物(150mg，77％)。
将44c(150mg，0.417mmol)溶于乙醇(5mL)中。随后加入氢氧化钯(II)(20％碳，潮湿，40mg)以及甲酸铵(132mg，2.09mmol)。反应物加热回流并搅拌30分钟。将反应物冷却至室温，使用Hyflo板过滤。用乙醇冲洗该板，浓缩合并的有机相，得到为橘黄色胶状物的标题化合物(105mg，93％)。
将44d(105mg，0.387mmol)和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(200mg，0.464mmol)溶解于乙腈(5mL)中，使用冰浴进行冷却。加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(206mg，0.542mmol)和N,N-二异丙基乙胺(270μL，1.55mmol)，将反应物缓慢加热至室温并搅拌过夜。去除溶剂并将残留物溶于乙酸乙酯。用水(3x20mL)和盐水(20mL)冲洗该溶液，无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，使用异己烷/乙酸乙酯/丙酮3:1:0至0:7:3的渐变梯度通过硅胶色谱法纯化残留物，得到褐色固体(110mg)。使用乙酸乙酯/丙酮1:0至4:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法对其进行进一步纯化，得到为黄色固体的标题化合物(100mg，38％)。
将44e(100mg，0.146mmol)溶于四氢呋喃(3mL)和水(1mL)的混合物中，并使用冰浴进行冷却。加入氢氧化锂一水合物(6mg，0.153mmol)，搅拌反应物30分钟。使用2M盐酸将该溶液酸化至pH 1，蒸发至干。使用乙腈/水0:1至1:4的渐变梯度通过C18色谱对残留物进行纯化，得到为白色固体的标题化合物(25mg，31％)。
将44f(25mg，0.045mmol)溶于二氯甲烷(45mL)中。加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(35mg，0.148mmol)和4-二甲基氨基吡啶(11mg，0.009mmol)，将反应物搅拌4小时。去除溶剂，使用乙酸乙酯/丙酮1:0至3:2的渐变梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到白色固体(6mg)。使用等度2:3乙腈/水以20mL/min流速洗脱配有PhenomenexGemini 10μ110A，250x21.2mm色谱柱的反相HPLC系统进行纯化，得到为白色固体的标题化合物(1.3mg，7％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84-1.00(m，7H)，1.10(d，J＝6.9Hz，3H)，1.62-1.72(m，4H)，1.86-2.08(m，3H)，2.54-2.71(m，2H)，2.90-3.14(m，2H)，3.28-3.54(m，3H)，3.98(app t，J＝9.2Hz，1H)，4.43-4.52(m，1H)，5.07(app t，J＝8.0Hz，1H)，5.92-6.00(m，1H)，6.10(d，J＝8.0Hz，1H)，6.37(d，J＝9.1Hz，1H)，7.20(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26-7.31(m，1H)，7.41-7.59(m，3H)，7.75(dd，J＝8.0，2.2Hz，1H)，8.78(d，J＝2.4Hz，1H)。LCMS(m/z)536.0[M+H]，Tr＝1.47min。
实施例45
将6-溴-3-吡啶甲醛(500mg，2.69mmol)和苄氧羰基甲基-三苯基溴化膦(2.64g，5.38mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)中。加入1,1,3,3-四甲基胍(1.01mL，8.03mmol)，将反应物搅拌3.5小时。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，分离两相。用盐水冲洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:0至4:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(492mg，57％)。
将45a(382mg，1.54mmol)、(R)-1-[3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-苯基]-乙醇(490mg，1.54mmol)、碳酸铯(1.06g，3.85mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(178mg，0.154mmol)置于微波管中。加入1,2-二甲氧基乙烷(4mL)和水(1mL)，密封该管。使用固定保留时间，在150℃高吸收下于微波中加热反应物50分钟。将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取所获混合物。无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯1:0至1:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到不纯的产物。使用相同条件，对其进行第二轮纯化，得到为黄色固体的标题化合物(195mg，35％)。
将45b(195mg，0.543mmol)溶于乙醇(5mL)中。随后加入氢氧化钯(II)(20％碳，潮湿，40mg)以及甲酸铵(172mg，2.72mmol)。将反应物加热回流并搅拌30分钟。冷却反应物至室温，并使用Hyflo板进行过滤。用乙醇冲洗该板，浓缩合并的有机相，得到为淡黄色固体的标题化合物(150mg，100％)。
将45c(150mg，0.553mmol)和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(287mg，0.664mmol)溶解于乙腈(5mL)中，使用冰浴进行冷却。加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(294mg，0.774mmol)和N,N-二异丙基乙胺(385μL，2.21mmol)，将反应物缓慢加热至室温并搅拌过夜。随后将乙酸乙酯倒入反应混合物中。用水(3x20mL)和盐水(20mL)冲洗所获溶液，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，使用异己烷/乙酸乙酯/丙酮3:1:0至0:7:3的渐变梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到固体(334mg)。使用乙酸乙酯/丙酮1:0至4:1的渐变梯度，通过硅胶色谱法对其进行进一步纯化，得到为固体的标题化合物(167mg，44％)。
将45d(160mg，0.234mmol)溶于四氢呋喃(4mL)和水(1mL)的混合物中，使用冰浴进行冷却。加入氢氧化锂一水合物(6mg，0.153mmol)，搅拌反应物30分钟。使用2M盐酸中和该溶液，蒸发至干。使用乙腈/水0:1至1:4的渐变梯度，通过C18色谱纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(21mg，16％)。
将45e(21mg，0.0379mmol)溶于二氯甲烷(38mL)中。加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(29mg，0.152mmol)和4-二甲基氨基吡啶(9mg，0.0758mmol)，搅拌反应物4小时。去除溶剂，使用100％乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物。使用等度3:7乙腈/水以20mL/min流速洗脱配有Phenomenex Gemini 10μ110A，250x21.2mm色谱柱的反相HPLC系统纯化所获物质，得到标题化合物(1mg，5％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.91(d，J＝6.5Hz，6H)，1.48(d，J＝7.1Hz，3H)，1.63-1.72(m，7H)，1.81-1.93(m，2H)，2.00-2.10(m，1H)，2.25-2.38(m，1H)，2.54-2.67(m，1H)，3.15-3.28(m，1H)，3.39-3.59(m，2H)，4.03(appt，J＝9.6Hz，1H)，4.43-4.54(m，1H)，5.04-5.16(m，1H)，5.80(d，J＝9.8Hz，1H)，5.94(q，J＝6.7Hz，1H)，7.22-7.27(m，1H)，7.43(app t，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.57(m，1H)，7.69(d，J＝8.0Hz，1H)，7.92(d，J＝8.3Hz，1H)，8.19(br s，1H)，8.48(d，J＝2.2Hz，1H)。LCMS(m/z)536.2[M+H]，Tr＝1.61min。
实施例46
在室温下向化合物21(25mg，0.05mmol)的乙酸乙酯(5mL)溶液中加入10％钯碳催化剂(20mg)。用氢气吹扫该体系并搅拌2小时。使用硅藻土(Celite)过滤反应物并真空浓缩。使用乙酸乙酯/丙酮5/1通过制备TLC纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(2.2mg，9％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.96(d，J＝6.7Hz，3H)，0.98(d，J＝6.7Hz，3H)，1.24(d，J＝7.1Hz，3H)，1.52(d，J＝6.9Hz，3H)，1.67(d，J＝6.7Hz，3H)，1.55-2.14(m，10H)，2.53–2.80(m，2H)，2.92–3.01(m，2H)，3.45–3.67(m，1H)，4.14–4.23(m，1H)，4.49–4.60(m，1H)，5.39–5.51(m，1H)，5.96(d，J＝9.4Hz，1H)，6.06(q，J＝6.7Hz，1H)，6.43(d，J＝8.5Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.5，1.1Hz，1H)，7.56(S，1H)，7.75(S，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，9.16(S，1H)。LCMS(m/z)＝552.3[M+H]，Tr＝1.25min。
实施例47
向(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(320mg，0.74mmol)的二氯甲烷溶液(8mL)中加入三氟乙酸(2mL)。在室温下搅拌反应物105分钟并真空浓缩。将所获粗产品溶于乙酸乙酯(75mL)并用饱和碳酸氢钠水溶液冲洗。用乙酸乙酯(2x40mL)萃取水相，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩，得到残留物粗品，无需进一步纯化即可使用。将前一步得到的残留物、1-羟基苯并三唑(152mg，1.12mmol)和(S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-羟基-丙酸(154mg，0.75mmol)溶解于二氯甲烷(6mL)。加入N,N-二异丙基乙胺(190mg，1.5mmol)，将所获溶液在冰水浴中冷却。以15秒时间滴加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺(149mg，0.96mmol)。将反应物搅拌18小时，冰浴缓慢消失。用乙酸乙酯(50mL)稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水冲洗。无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩，得到残留物粗品，通过硅胶色谱法(75至100％的乙酸乙酯异己烷溶液)对其进行纯化，得到为油状物的标题产物(211mg，55％)。
向47a(64mg，0.12mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)中加入2,4,6-三甲基吡啶(98mg，1.28mmol)。以20秒时间滴加叔丁基二甲基硅烷三氟甲磺酸酯(98mg，0.37mmol)。将反应混合物搅拌15小时，用饱和碳酸氢钠水溶液(1mL)淬灭。用乙酸乙酯、水和0.1N盐酸水溶液进一步稀释该混合物，得到酸性水层。分离两相，硫酸钠干燥有机相，过滤，真空浓缩，得到残留物粗品，无需进一步纯化即可使用。将粗产物溶于四氢呋喃(3mL)中。一次性加入乙酸(115mg，1.9mmol)，搅拌所获溶液3.25小时。用乙酸乙酯(25mL)稀释反应物，用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)冲洗。分离两相，用乙酸乙酯(25mL)萃取水相。用盐水(25mL)冲洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥。过滤该混合物，真空浓缩滤液，得到胺粗品，无需进一步纯化即可使用。将该胺粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。加入2,4,6-三甲基吡啶(31mg，0.26mmol)和反式-3-戊烯酸(15.3mg，0.152mmol)，在冰水浴中冷却所获溶液。一次性加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉-碳鎓六氟磷酸酯(72.4mg，0.169mmol)，将反应物搅拌30分钟。随后自冷浴中取出反应物并加热至室温。15小时后，用乙酸乙酯(35mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和盐水(5mL)稀释反应物。分离两相，用0.1N盐酸水溶液(25mL)以及盐水(5mL)冲洗有机层。用乙酸乙酯(25mL)萃取酸性水层，合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法(50至80％的乙酸乙酯异己烷溶液)纯化所获残留物粗品，得到为白色泡沫的标题化合物(46.9mg，3步的收率为62％)。
向47b(46.9mg，0.0761mmol)的四氢呋喃溶液(1.5mL)中加入水(0.30mL)、乙酸铵(96mg，1.2mmol)和锌粉(109mg，1.7mmol)。在室温下剧烈搅拌反应混合物17.5小时，此时将温度升高至35℃。25.5小时后，再次加入锌粉(60mg，0.92mmol)，并将反应物温度升高至45℃。39.5小时后，使用硅藻土(Celite)板过滤反应混合物，用水和乙酸乙酯冲洗。用2M盐酸水溶液(15mL)酸化水相，分离两相。用乙酸乙酯(2x20mL)萃取水相，硫酸钠干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到白色固体(34.9mg，95％)，无需进一步纯化即可使用。将酸粗品(0.072mmol)与(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(17.4mg，0.087mmol)一起溶解于二氯甲烷(1.0mL)中。加入4-二甲基氨基吡啶(13.3mg，0.109mmol)以及N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(17mg，0.085mmol)。搅拌反应物16.5小时，将其直接上样至硅胶色谱柱上。用60至100％的乙酸乙酯异己烷溶液洗脱，得到为无定形残留物的标题化合物(20mg，43％)。
在搅拌下用氩气将47c(19.6mg，0.0294mmol)的甲苯溶液(9.4mL)鼓泡10分钟。加入为脱气甲苯溶液(0.45mL)形式的Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(2.8mg，0.0045mmol)，将所获溶液加热至105℃。25分钟后，再次加入一部分Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(1.4mg，0.0022mmol)。10分钟后，将反应物冷却至室温，并真空浓缩至大约4.5mL。将该溶液直接上样至硅胶色谱柱上，用80至100％的乙酸乙酯异己烷溶液洗脱，得到为无定形固体的标题化合物(6.9mg，38％)。
在一个聚丙烯小管中，在氩气下将47d(4.7mg，0.0075mmol)溶于四氢呋喃(0.90mL)中，在冰水浴中冷却所获溶液。滴加氟化氢吡啶(0.10mL)。10分钟后，加入搅拌的乙酸乙酯(15mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)混合物以淬灭反应。分离两相，用乙酸乙酯(3x30mL)萃取水相。硫酸钠干燥合并的有机相，过滤并浓缩，得到残留物粗品。在氩气下于一个聚丙烯小管中，将上述残留物溶于四氢呋喃(0.90mL)中，冰水浴中冷却所获溶液。滴加氟化氢吡啶(0.10mL)，自冷浴中取出该反应混合物。45分钟后，如前所述处理反应物，得到残留物粗品。通过反相HPLC(5至100％的乙腈水溶液，+0.1％三氟乙酸)进行纯化，得到为无定形白色固体的标题化合物(1.6mg，34％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)9.54(S，1H)，8.38(d，J＝8.7Hz，1H)，8.29(S，1H)，8.17(S，1H)，7.87(d，J＝8.5Hz，1H)，6.90–6.75(m，2H)，6.18(q，J＝6.9Hz，1H)，5.84–5.74(m，1H)，4.71–4.64(m，1H)，4.50–4.42(m，1H)，3.88–3.81(m，2H)，3.78(dd，J＝11.3，6.4Hz，1H)，3.52(dd，J＝12.9，6.2Hz，1H)，3.52(dd，J＝12.9，6.2Hz，1H)，2.81–2.70(m，1H)，2.11–2.04(m，1H)，1.99–1.91(m，1H)，1.85–1.69(m，2H)，1.73(d，J＝6.7Hz，3H)，1.60(d，J＝7.1Hz，3H)。LCMS(m/z)510.2[M+H]，Tr＝2.19min。
实施例48
向(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(320mg，0.74mmol)的二氯甲烷溶液(8.8mL)中加入三氟乙酸(2.2mL)。在室温下搅拌反应物45分钟并真空浓缩。所获粗产品在无水甲苯(10mL)中溶解两次并浓缩。所获残留物粗品不需进一步纯化即可使用。将残留物粗品(ca.0.74mmol)、1-羟基苯并三唑(153.8mg，1.1mmol)和(2S,3R)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-羟基-丁酸(161.2mg，0.735mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)中。加入N,N-二异丙基乙胺(192mg，1.5mmol)，在冰水浴中冷却所获溶液。以15秒时间滴加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺(132mg，0.85mmol)。自冷浴中取出该反应物并搅拌21.5小时。用乙酸乙酯(50mL)稀释反应混合物，用半饱和的碳酸氢钠水溶液(30mL)冲洗。用盐水冲洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，通过硅胶色谱法以65至90％的乙酸乙酯异己烷溶液洗脱，得到残留物粗品。将不纯的组分通过硅胶色谱法再次纯化，并与第一次的产物一起收集，得到标题化合物(230mg，58％)。
向48a(62.3mg，0.12mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)中加入2,4,6-三甲基吡啶(146mg，1.21mmol)。以20秒时间滴加叔丁基二甲基硅烷三氟甲磺酸酯(94mg，0.36mmol)。搅拌反应混合物15小时，用饱和碳酸氢钠水溶液(1mL)淬灭。用乙酸乙酯(2mL)和盐水(1mL)进一步稀释该混合物。分离两相，用乙酸乙酯(4x1.5mL)萃取水相。硫酸钠干燥合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到残留物粗品，无需进一步纯化即可使用。将粗产物溶于四氢呋喃(3mL)中。一次性加入乙酸(104mg，1.6mmol)，将所获溶液搅拌3.5小时。用乙酸乙酯(30mL)、饱和碳酸氢钠(20mL)水溶液和盐水(10mL)稀释反应物。分离两相，用乙酸乙酯(20mL)萃取水相。无水硫酸钠干燥合并的有机相。过滤该混合物，真空浓缩滤液，得到中间体胺的粗品，无需进一步纯化即可使用。将胺粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。加入2,4,6-三甲基吡啶(28mg，0.23mmol)和反式-3-戊烯酸(14.3mg，0.143mmol)，在冰水浴中冷却所获溶液。一次性加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉-碳鎓六氟磷酸酯(69mg，0.16mmol)，搅拌反应物30分钟。自冷浴中取出反应物并加热至室温。15小时后，用乙酸乙酯(25mL)、0.1N盐酸(30mL)水溶液和盐水(5mL)稀释反应物。分离两相，用乙酸乙酯(25mL)萃取酸性水层。用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)和盐水(5mL)冲洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法(50至75％的乙酸乙酯异己烷溶液)纯化所获残留物粗品，得到为白色泡沫的标题化合物(74mg，3步为定量收率)。
向48b(74mg，0.117mmol)的四氢呋喃溶液(2.3mL)中加入水(0.47mL)/乙酸铵(138mg，1.8mmol)和锌粉(164mg，2.5mmol)。在室温下剧烈搅拌反应混合物17.5小时，此时将温度升高至35℃。25.5小时后，再次加入锌粉(85mg，1.3mmol)，将反应物温度升高至45℃。总计39.5小时后，使用硅藻土(Celite)板过滤反应混合物，用水和乙酸乙酯冲洗。用2N盐酸水溶液(15mL)酸化水相，分离两相。用乙酸乙酯(2x20mL)萃取水相，无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到无定形白色固体(50mg，86％)，不需进一步纯化即可使用。将此粗产品(0.10mmol)与(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(23.9mg，0.12mmol)一起溶解于二氯甲烷(1.0mL)中。加入4-二甲基氨基吡啶(15mg，0.12mmol)以及N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(17mg，0.019mmol)。搅拌反应物16小时，将其直接上样至硅胶色谱柱上。以50至85随后至100％的乙酸乙酯异己烷溶液洗脱，得到为固体的标题化合物(40mg，58％)。
在搅拌下用氩气将48c(26mg，0.037mmol)的甲苯溶液(12mL)鼓泡数分钟。随后加入为脱气甲苯溶液(0.40mL)形式的Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(3.4mg，0.0054mmol)，将所获溶液加热至105℃。20分钟后，再次加入一部分为甲苯溶液(0.20mL)形式的Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(1.7mg，0.0027mmol)。40分钟后，将反应物冷却至室温，真空浓缩至大约3mL。将该溶液直接上样至硅胶色谱柱上，以70至100％的乙酸乙酯异己烷溶液洗脱，得到为无定形固体的标题化合物(10mg，42％)。
在一个聚丙烯小管中于氩气气氛下，将48d(10mg，0.016mmol)溶于四氢呋喃(900μL)中。通过注射器滴加氟化氢吡啶(～70％as HF，100μL)，将所获溶液搅拌130分钟。再次通过注射器加入一份氟化氢吡啶(100μL)，继续搅拌所获溶液80分钟。小心加入搅拌的乙酸乙酯(50mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)混合物以淬灭反应混合物。分离两相，用乙酸乙酯(2x30mL)萃取水相。无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到残留物粗品，通过反相HPLC(C18，15至100％乙腈/水，0.1％三氟乙酸)对其进行纯化。以相同方法对得到的不纯组分进行再次纯化，得到为三氟乙酸盐的标题化合物(5.0mg，49％)，冻干后为无定形白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.55(S，1H)，8.38(d，J＝8.6Hz，1H)，8.22(S，1H)，8.15(S，1H)，7.87(dd，J＝8.7，1.4Hz，1H)，6.86–6.75(m，2H)，6.15(q，J＝6.6Hz，1H)，5.80–5.70(m，1H)，4.47(d，J＝5.6Hz，1H)，4.454.38(m，1H)，4.09–4.01(m，1H)，3.83–3.78(m，1H)，3.55(dd，J＝13.5，5.6Hz，1H)，3.11(dd，J＝13.2，4.7Hz，1H)，2.78–2.67(m，1H)，2.09–1.99(m，1H)，1.96–1.89(m，1H)，1.82–1.64(m，5H)，1.60–1.54(m，3H)，1.25(d，J＝6.3Hz，3H)。LCMS(m/z)524.6[M+H]，Tr＝2.15min。
实施例49
在冰水浴中冷却(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(865mg，2mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)。在0℃于氩气下滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(667mg，3mmol)，在室温下搅拌所获溶液30分钟。将反应混合物蒸发至干，在氩气下将所获残留物粗品溶于无水乙腈(25mL)中。在0℃下搅拌反应混合物，加入(S)-4-叠氮基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁酸二环己基胺盐(936mg，2.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1034mg，8mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1065mg，2.8mmol)。在室温下搅拌反应混合物48小时。蒸干溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(100mL)并用20％柠檬酸水溶液(2x100mL)、水(100mL)和盐水(100mL)冲洗该溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(783mg，70％)。Rf＝0.40，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
在氩气下将(R)-1-(3-氯-异喹啉-6-基)-乙醇(880mg，4.23mmol)、(E)-2,2-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-3-丁烯酸甲酯(1.24g，4.88mmol)、PdCl2(PCy2(p-NMe2Ph))2(双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II))(173mg，0.21mmol)和磷酸三钾(2.64g，12.4mmol)溶于环戊基甲基醚(11.9mL)和水(5.1mL)中。在90℃下剧烈搅拌所获双相混合物3.5小时，将反应物冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)和水(40mL)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取水相。无水硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到残留物粗品，通过硅胶色谱法(25至60％的乙酸乙酯异己烷溶液)对其进行纯化，得到为黄色油状物的标题化合物(1.07g，85％)。
向49b(600mg，2mmol)的四氢呋喃溶液(8mL)中加入甲醇(4mL)、水(4mL)和氢氧化锂(96mg，4mmol)。在室温下搅拌所获混合物10小时，并用1M盐酸(4.2mL，4.2mmol)淬灭。将所获溶液浓缩为残留物粗品，将其与四氢呋喃(20mL)共蒸馏两次，与无水乙腈(20mL)共蒸馏两次，且与无水甲苯(20mL)共蒸馏两次。在高真空下将所获白色固体干燥过夜，不需进一步纯化即可使用(735mg，定量收率)。
在冰水浴中冷却49a(169mg，0.302mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。在0℃于氩气下滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(101mg，0.455mmol)，在室温下搅拌所获溶液30分钟。将反应混合物蒸发至干，在氩气下将所获残留物粗品溶于无水乙腈(20mL)中。在0℃下搅拌反应混合物，加入(E)-4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-2,2-二甲基-3-丁烯酸(123mg，0.333mmol)和N,N-二异丙基乙胺(151mg，1.220mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(161mg，0.423mmol)。反应混合物在室温下搅拌2天。蒸干溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(50mL)中，用20％柠檬酸水溶液(2x50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)冲洗该溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇混合物(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(198mg，90％)。Rf＝0.18，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
向49d(170mg，0.23mmol)的四氢呋喃溶液(2mL)中加入甲醇(1mL)、水(1mL)和氢氧化锂水合物(7mg，0.28mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，并用1M盐酸水溶液(0.30mL，0.30mmol)淬灭。将所获溶液浓缩至残留物粗品，将其与四氢呋喃(5mL)共蒸发两次，与无水乙腈(5mL)共蒸发两次，且与无水甲苯(5mL)共蒸发两次。在高真空下将所获白色固体干燥过夜，不需进一步纯化即可使用(151mg，定量收率)。将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(317mg，0.92mmol)、4-二甲基氨基吡啶(337mg，2.76mmol)和无水1,2-二氯乙烷(300mL)置于烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中。在50℃下加热所获溶液，通过注射器以12小时时间滴加为干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液形式的断酸粗品。继续使用一部分干燥N,N-二甲基甲酰胺(2x1ml)完成定量转移。在50℃下继续搅拌2小时后，将反应混合物转移至一个分液漏斗中，用水(200mL，加入10mL盐水以支持分离)冲洗。用二氯甲烷(100mL)萃取水相。用盐水(100mL)冲洗合并的有机提取物，硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将所获残留物溶于乙酸乙酯(250mL)中，用水(300mL，加入10mL盐水以支持分离)冲洗。用萃取水相乙酸乙酯(150mL)。用水(200mL，加入10mL盐水以支持分离)冲洗合并的有机提取物。用乙酸乙酯(150mL)萃取所获水相。用盐水(150mL)冲洗合并的有机提取物，硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇混合物(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(76mg，57％)。Rf＝0.51，10％甲醇的二氯甲烷溶液。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.03(S，1H)，7.95(d，J＝8.5Hz，1H)，7.81(S，1H)，7.49(S，1H)，7.46(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)，6.49(d，J＝16.1Hz，1H)，6.40(d，J＝16.1Hz，1H)，5.95(q，J＝6.6Hz，1H)，5.51(q，J＝7.2Hz，1H)，4.67(dd，J＝8.6，6.3Hz，1H)，4.29(m，1H)，3.68(dd，J＝11.2，2.7Hz，1H)，3.28(td，J＝6.8，3.7Hz，2H)，2.67–2.56(m，1H)，1.88(m，2H)，1.85–1.60(m，4H)，1.57(d，J＝6.7Hz，3H)，1.54(d，J＝7.3Hz，3H)，1.42(S，3H)，1.27(S，3H)。LCMS(m/z)557.3([M+H]，Tr＝3.15min。
实施例50
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入化合物49(20mg，0.034mmol)、碘化铜(I)(1mg，0.005mmol)和丙炔酸(5mg，0.070mmol)。用隔垫密封该烧瓶并用氩气再次吹扫三次。加入无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，用氩气再次吹扫反应混合物三次。在70℃下加热此反应混合物2天。减压蒸干溶剂后，将残留物粗品溶于乙酸乙酯(10mL)，并使用硅藻土(Celite)，用乙酸乙酯(10mL)冲洗滤板。减压浓缩后，通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇混合物(4/1)的异己烷溶液)，得到为白色固体的标题化合物(7mg，34％)。Rf＝0.36，5％甲醇的二氯甲烷溶液。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.05(S，1H)，8.11(br s，1H)，8.00(br s，1H)，7.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.82(S，1H)，7.66(S，1H)，7.48(d，J＝10.0Hz，1H)，6.50(d，J＝16.2Hz，1H)，6.42(d，J＝16.2Hz，1H)，5.97(m，1H)，5.56(m，1H)，4.60(m，1H)，4.29(m，1H)，3.66(m，1H)，3.21(m，2H)，2.69–2.47(m，1H)，1.89(m，2H)，1.87–1.55(m，4H)，1.53(d，J＝6.7Hz，3H)，1.50(d，J＝7.1Hz，3H)，1.40(S，3H)，1.28(S，3H)。LCMS(m/z)603.1[M+H]，Tr＝2.62min。
实施例51
在冰水浴中冷却(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(865mg，2mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)。在0℃于氩气下滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(667mg，3mmol)，在室温下搅拌所获溶液30分钟。将反应混合物蒸发至干，在氩气下将所获残留物粗品溶于无水乙腈(25mL)中。在0℃下搅拌反应混合物，加入(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-戊炔酸(469mg，2.2mmol，来源：Matrix Scientific，产品目录号041479)和N,N-二异丙基乙胺(1034mg，8mmol，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1065mg，2.8mmol)。在室温下搅拌反应混合物48小时。蒸干溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(100mL)并用20％柠檬酸水溶液(2x100mL)、水(100mL)和盐水(100mL)冲洗此溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(738mg，70％)。Rf＝0.30，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
在冰水浴中冷却51a(145mg，0.275mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。在0℃于氩气下滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(92mg，0.414mmol)，在室温下搅拌所获溶液30分钟。将反应混合物蒸发至干，在氩气下将所获残留物粗品溶于无水乙腈(20mL)中。在0℃下搅拌反应混合物，加入(E)-4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-2,2-二甲基-3-丁烯酸(112mg，0.303mmol)和N,N-二异丙基乙胺(137mg，1.101mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(147mg，0.385mmol)。在室温下搅拌反应混合物2天。蒸干溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(50mL)，用20％柠檬酸水溶液(2x50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)冲洗该溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(163mg，85％)。Rf＝0.29，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
向51b(125mg，0.18mmol)的四氢呋喃溶液(2mL)中加入甲醇(1mL)、水(1mL)和氢氧化锂水合物(5.2mg，0.22mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，用1M盐酸水溶液(0.25mL，0.25mmol)淬灭。所获溶液蒸发为残留物粗品，将其与四氢呋喃(5mL)共蒸发两次，与无水乙腈(5mL)共蒸发两次，与无水甲苯(5mL)共蒸发两次。在高真空下将所获白色固体干燥过夜不需进一步纯化即可使用(113mg，定量收率)。在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(248mg，0.72mmol)、4-二甲基氨基吡啶(264mg，2.16mmol)和无水1,2-二氯乙烷(200mL)。在50℃下加热所获溶液，通过注射器以12小时时间滴加为无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液形式的断酸粗品。继续使用一部分无水N,N-二甲基甲酰胺(2x1ml)以完成定量转移。在50℃下继续搅拌2小时后，将反应混合物转移至分液漏斗中，用水(200mL，加入10mL盐水以支持分离)冲洗。用二氯甲烷(100mL)萃取水相。用盐水(100mL)冲洗合并的有机提取物，硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将所获残留物溶于乙酸乙酯(250mL)，用水(300mL，加入10mL盐水以支持分离)冲洗。用乙酸乙酯(150mL)萃取水相。用水(200mL，加入10mL盐水以支持分离)冲洗合并的有机提取物。用乙酸乙酯(150mL)萃取所获水相。用盐水(150mL)冲洗合并的有机提取物，硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(56mg，57％)。Rf＝0.53，10％甲醇的二氯甲烷溶液。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.03(S，1H)，7.94(d，J＝8.5Hz，1H)，7.79(S，1H)，7.54(S，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，1H)，6.52(d，J＝16.1Hz，1H)，6.40(d，J＝16.1Hz，1H)，5.95(q，J＝6.6Hz，1H)，5.52(q，J＝7.2Hz，1H)，4.70(dd，J＝7.7，6.7Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.00(q，J＝7.2Hz，1H)，3.72–3.64(m，1H)，2.63(m，1H)，2.55–2.40(m，2H)，1.91(S，1H)，1.88(m，1H)，1.80(m，1H)，1.64(m，1H)，1.57(d，J＝6.7Hz，3H)，1.53(d，J＝7.2Hz，3H)，1.42(S，3H)，1.27(S，3H)。LCMS(m/z)546.2[M+H]，Tr＝3.04min。
实施例52
在室温和氢气压力下对化合物51(10mg，0.018mmol)在乙酸乙酯(4mL)和四氢呋喃(4mL)混合物中的溶液进行氢化反应，持续3个小时，该混合物中含有5％铅中毒的碳酸钙钯–Lindlar催化剂(10mg)。使用硅藻土(Celite)过滤反应混合物，用四氢呋喃(10mL)冲洗滤板。蒸干滤液，得到为白色固体的标题化合物(10mg，定量收率)。Rf＝0.19，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.04(S，1H)，7.95(d，J＝8.4Hz，1H)，7.82(S，1H)，7.54(S，1H)，7.46(d，J＝8.3Hz，1H)，6.50(d，J＝16.1Hz，1H)，6.39(d，J＝16.1Hz，1H)，5.95(q，J＝6.4Hz，1H)，5.76–5.62(m，1H)，5.57(q，J＝7.0Hz，1H)，5.02(d，J＝17.0Hz，1H)，4.96(d，J＝10.1Hz，1H)，4.61–4.54(m，1H)，4.29(m，1H)，3.68n(m，1H)，2.61(m，1H)，2.42–2.34(m，1H)，2.30–2.20(m，1H)，1.90(m，1H)，1.81(m，1H)，1.68–1.60(m，2H)，1.57(d，J＝6.6Hz，3H)，1.53(d，J＝7.2Hz，3H)，1.39(S，3H)，1.26(S，3H)。LCMS(m/z)548.3[M+H]，Tr＝2.85min。
实施例53
在0℃于氩气气氛下向(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(300mg，0.69mmol)的二氯甲烷溶液(1.84mL)中缓慢加入三氟乙酸(460μL，6.00mmol)。3小时后，减压浓缩反应混合物。将残留物粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.45mL)中，在23℃于氩气气氛下按顺序加入(S)-叔丁氧基碳基氨基-环己基-乙酸(195mg，0.760mmol)、2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(289mg，0.760mmol)和N,N-二异丙基乙胺(180μL，1.04mmol)。18小时后，用乙酸乙酯(300mL)稀释反应混合物，用盐水(4×100mL)冲洗所获混合物，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶色谱法(12g Combiflash HP Gold色谱柱，0-100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(380mg，96％)。
在0℃于氩气气氛下向53a(220mg，0.385mmol)的二氯甲烷溶液(1.92mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(128mg，0.587mmol)。1.5小时后，减压浓缩反应混合物。用乙腈(1.92mL)稀释所获残留物，在23℃于氩气气氛下按顺序加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(146mg，0.385mmol)、N,N-二异丙基乙胺(267μL，1.54mmol)和(E)-3-戊烯酸(39.4μL，0.385mmol)。20小时后，用二氯甲烷(40mL)稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)以及盐水(2×40mL)冲洗所获混合物。分离有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(12gCombiflash HP Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(180mg，84％)。Rf＝0.75(乙酸乙酯)I2/二氧化硅染色剂。
在23℃于氩气气氛下，向53b(180mg，0.320mmol)的四氢呋喃溶液(5.3mL)中加入锌粉(418mg，6.40mmol)，随后加入乙酸铵(370mg，4.80mmol)水溶液(3.5mL)。15小时后，将反应混合物加热至45℃。2小时后，将反应混合物冷却至室温，用硅藻土(Celite)板过滤，以水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)冲洗。分离滤液层，用盐水(80mL)稀释水层，用12N盐酸水溶液酸化至pH 1。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水层，无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，减压浓缩。通过加入甲苯(5mL)共沸随后减压浓缩(3×)来去除残余乙酸，得到为白色固体的标题化合物(74.5mg，55％)。
在23℃于氩气气氛下，向53c(74.5mg，0.176mmol)和(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(42.1mg，0.212mmol)的二氯甲烷溶液(3.5mL)中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(47.2mg，0.246mmol)和4-二甲基氨基吡啶(11mg，88μmol)。18小时后，通过硅胶色谱法(12g Combiflash HP Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)直接纯化反应混合物，得到为白色固体的标题化合物(67.6mg，64％)。
在23℃于氩气气氛下向53d(25mg，41μmol)的甲苯溶液(8.2mL)中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(2.5mg，4.1μmol)，将所获混合物加热至110℃。2小时后，用乙烯基乙醚(300μL)淬灭反应混合物，将所获混合物冷却至23℃。减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(12g Combiflash HP Gold色谱柱，0-100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化该残留物粗品。合并含有预期产物的组分，通过制备HPLC再次对其进行纯化，得到为白色粉末的三氟乙酸盐形式的标题化合物(1.7mg，7％)。Rf＝0.40(乙酸乙酯)UV。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.13(S，1H)，8.53(br s，1H)，8.07(d，J＝7.6Hz，1H)，8.05(d，J＝8.5Hz，1H)，7.83(S，1H)，7.55(d，J＝8.3Hz，1H)，7.44(S，1H)，6.62(d，J＝16.3Hz，1H)，6.55–6.45(m，1H)，6.04(q，J＝6.5Hz，1H)，5.50(q，J＝6.9Hz，1H)，4.40(d，J＝14.1Hz，1H)，4.33(d，J＝9.7Hz，1H)，3.78(d，J＝11.0Hz，1H)，3.36(app dd，J＝14.7，6.7Hz，1H)，2.99(dd，J＝14.5，4.9Hz，1H)，2.90–2.66(m，4H)，2.02–1.83(m，4H)，1.82–1.70(m，3H)，1.68(d，J＝6.7Hz，3H)，1.65(d，J＝7.3Hz，3H)，1.33–1.16(m，4H)，1.16–0.94(m，2H)。HPLC Tr＝tR(min)，3.091(Synergi 4uhydro-RP，50×4.60mm 4微米色谱柱，7min，2ml/min，5–100％乙腈/水，0.05％三氟乙酸改性剂梯度)。LCMS(m/z)562.3[M+H]，Tr＝2.17min。
实施例54
在0℃于氩气气氛下向，(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(300mg，0.69mmol)的二氯甲烷溶液(1.84mL)中缓慢加入三氟乙酸(460μL，6.00mmol)。2小时后，减压浓缩反应混合物。将残留物粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.45mL)中，在23℃于氩气气氛下按顺序加入(S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-苯基-丙酸(201mg，0.760mmol)、2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(289mg，0.760mmol)和N,N-二异丙基乙胺(180μL，1.04mmol)。22小时后，用乙酸乙酯(300mL)稀释反应混合物，用盐水(3×200mL)冲洗所获混合物，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶色谱法(24g Combiflash HP Gold色谱柱，0-100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(319mg，96％)。Rf＝0.75(乙酸乙酯)I2/二氧化硅染色剂。
在0℃于氩气气氛下向54a(414mg，0.716mmol)的二氯甲烷溶液(3.58mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(238.7mg，1.07mmol)。1小时后，减压浓缩反应混合物。用乙腈(3.58mL)稀释所获残留物，在23℃于氩气气氛下按顺序加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(272mg，0.716mmol)、N,N-二异丙基乙胺(498μL，2.86mmol)和(E)-3-戊烯酸(73.3μL，0.716mmol)。17小时后，用二氯甲烷(50mL)稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)冲洗所获混合物。分离有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物粗品，得到为白色固体的标题化合物(386mg，96％)。
在23℃于氩气气氛下，向54b(443mg，0.789mmol)的四氢呋喃溶液(13.2mL)中加入锌粉(1.03g，15.8mmol)，随后加入乙酸铵(912mg，11.8mmol)水溶液(8.77mL)。17小时后，将反应混合物加热至45℃。2小时后，将反应混合物冷却至室温，用硅藻土(Celite)过滤，以水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)冲洗。分离滤液层，用盐水(20mL)稀释水层，并用12N盐酸水溶液酸化至pH 2。用二氯甲烷(3×100mL)萃取水层，无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，减压浓缩。通过加入甲苯(5mL)共沸随后减压浓缩(3×)来去除残余乙酸，得到为白色固体的标题化合物(276.2mg，81％)。
在23℃于氩气气氛下，向54c(275mg，0.640mmol)和(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(153mg，0.770mmol)的二氯甲烷溶液(3.2mL)中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(172mg，0.90mmol)和4-二甲基氨基吡啶(39mg，32μmol)。23小时后，通过硅胶色谱法(24g Combiflash HP Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)直接纯化反应混合物，得到为白色固体的标题化合物(203mg，52％)。
在23℃于氩气气氛下向54d(170mg，278μmol)的氯苯溶液(56mL)中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(8.7mg，14.0μmol)，将所获混合物加热至110℃。3小时后，用乙烯基乙醚(300μL)淬灭反应混合物，将所获混合物冷却至23℃。减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(12g Combiflash HP Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为黄褐色固体的标题化合物(18.9mg，12％)。Rf＝0.25(乙酸乙酯)UV。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.12(S，1H)，8.05(d，J＝8.7Hz，1H)，7.84(S，1H)，7.56(d，J＝8.5Hz，1H)，7.53(S，1H)，7.32–7.12(m，5H)，6.66(d，J＝16.5Hz，1H)，6.48(dt，J＝12.8，5.6Hz，1H)，6.05(q，J＝6.4Hz，1H)，5.53(q，J＝6.7Hz，1H)，4.73(d，J＝12.2Hz，1H)，4.43(d，J＝11.9Hz，1H)，3.80(app t，J＝10.2Hz，1H)，3.30–3.22(m，1H)，3.09(dd，J＝14.5，4.9Hz，1H)，2.96–2.69(m，3H)，2.04–1.87(m，2H)，1.82–1.56(m，2H)，1.68(d，J＝6.5Hz，3H)，1.64(d，J＝6.9Hz，3H)。HPLC Tr＝3.060min。LCMS(m/z)570.5[M+H]，Tr＝2.14min。
实施例55
在0℃于氩气气氛下向(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(500mg，0.1.16mmol)的二氯甲烷溶液(5.8mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(386mg，1.74mmol)。1小时后，减压浓缩反应混合物。用乙腈(5.8mL)稀释所获残留物，在23℃于氩气气氛下按顺序加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(485mg，1.28mmol)、N,N-二异丙基乙胺(302μL，1.74mmol)和N-叔丁氧羰基-3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸(337mg，1.27mmol)。20小时后，减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(40g Combiflash HP Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为淡黄色油状物的标题化合物(570mg，85％)。
在0℃于氩气气氛下向55a(570mg，0.984mmol)的二氯甲烷溶液(5.8mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(386mg，1.74mmol)。1小时后，减压浓缩反应混合物，得到为淡黄色油状物的标题化合物(478mg)，无需进一步纯化即可使用。
在23℃于氩气气氛下，向55b(120mg，0.250mmol)的乙腈溶液(1.25mL)中按顺序加入(E)-4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-2,2-二甲基-3-丁烯酸(75mg，0.25mmol)、2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(95mg，0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(173μL，1.00mmol)。随后加入N,N-二甲基甲酰胺(100μL)以促进这些试剂的溶解性。23小时后，用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)和盐水(25mL)稀释反应混合物，用二氯甲烷(2×25mL)萃取所获混合物。无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物粗品，得到为无色固体的标题化合物(76mg，41％)。
在23℃于氩气气氛下，向55c(76mg，0.10mmol)的四氢呋喃(0.3mL)和水(0.2mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(2.4mg，0.10mmol)。2小时后，减压浓缩反应混合物，得到为白色固体的羧酸锂盐形式的标题化合物(61mg，99％)。
在23℃于氩气气氛下，向55d(61mg，0.10mmol)的二氯甲烷溶液(50mL)中加入苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸酯(208mg，400μmol)和4-二甲基氨基吡啶(366mg，3.00mmol)。17小时后，减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(4gCombiflash HP Gold色谱柱，0–20％甲醇/二氯甲烷梯度)纯化残留物粗品，得出为无色固体的标题化合物(1.2mg，2％)。Rf＝0.40(10％甲醇的二氯甲烷溶液)UV。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.03(S，1H)，8.31(d，J＝1.6Hz，1H)，8.27(dd，J＝4.9，1.5Hz，1H)，7.95(d，J＝8.5Hz，1H)，7.82(S，1H)，7.64(d，J＝8.0Hz，1H)，7.53(S，1H)，7.46(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)，7.24(dd，J＝7.9，4.9Hz，1H)，6.49(d，J＝16.1Hz，1H)，6.37(d，J＝16.1Hz，1H)，5.95(q，J＝6.5Hz，1H)，5.57(q，J＝7.3Hz，1H)，4.65(d，J＝12.0Hz，1H)，4.32(br d，J＝12.1Hz，1H)，3.83(d，J＝11.8Hz，1H)，3.73–3.65(m，1H)，3.00(dd，J＝14.2，5.0Hz，1H)，2.83(dd，J＝13.9，9.7Hz，1H)，2.64(brt，J＝11.2Hz，1H)，1.95–1.73(m，2H)，1.69–1.59(m，1H)，1.57(d，J＝6.7Hz，3H)，1.54(d，J＝7.2Hz，3H)，1.33(S，3H)，1.16(S，3H)。HPLC Tr＝4.491min
实施例56
在0℃于氩气气氛下，向(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(791mg，1.82mmol)的二氯甲烷溶液(10.0mL)中缓慢加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(483μL，2.73mmol)。45分钟后，减压浓缩反应混合物。用二氯甲烷(10.0mL)稀释所获残留物，在23℃于氩气气氛下按顺序加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(761mg，2.00mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.26mL，7.28mmol)和(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酸(Fluka，560mg，2.00mmol)。18小时后，减压浓缩反应混合物。使用二氧化硅预吸收残留物，并通过硅胶色谱法(40g Isco Rf Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)进行纯化，得到为无色油状物的标题化合物(799mg，74％)。
在0℃于氩气气氛下向56a(799mg，1.34mmol)的二氯甲烷溶液(10.0mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(356μL，2.01mmol)。30分钟后，减压浓缩反应混合物。用乙腈(6.0mL)稀释所获残留物，在23℃于氩气气氛下按顺序加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(560mg，1.47mmol)、N,N-二异丙基乙胺(932μL，5.36mmol)和(E)-3-戊烯酸(150μL，1.47mmol)。19小时后，减压浓缩反应混合物。使用二氧化硅预吸收残留物，并通过硅胶色谱法进行纯化，得到为无色油状物的标题化合物(598mg，78％)。
在23℃下向56b(167mg，0.29mmol)的四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(7.6mg，0.32mmol)。15分钟后，将反应混合物减压浓缩至干。将残留物溶于水(25mL)，用乙酸乙酯冲洗。用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)萃取有机层。用1M盐酸水溶液将合并的水层酸化至pH～2，并用乙酸乙酯(3×25mL)萃取，无水硫酸镁干燥合并的有机提取物，减压浓缩得到为白色固体的标题化合物(129mg，100％)。
在23℃于氩气气氛下，向56c(129mg，0.29mmol)和(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(64mg，0.31mmol)的二氯甲烷溶液(3.0mL)中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(89mg，0.46mmol)和4-二甲基氨基吡啶(18mg，0.14mmol)。16小时后，通过硅胶色谱法直接纯化反应混合物，得到为白色固体的标题化合物(87mg，48％)。
在23℃于氩气气氛下向56d(84mg，0.13mmol)的氯苯溶液(27mL)中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(8mg，13μmol)，将所获混合物加热至110℃。2小时后，在110℃于氩气下加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(7.3mg，11μmol)。然后以30分钟间隔在反应结束时加入三次Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(5mg，8μmol)。用乙烯基乙醚(1.0μL)淬灭反应混合物，将所获混合物冷却至23℃。减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(24g Isco Rf Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度10分钟，然后是100％乙酸乙酯，持续25分钟)纯化残留物粗品，得到为浅褐色固体的标题化合物(9.1mg，12％)。Rf＝0.20(乙酸乙酯)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.00(S，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，7.71(S，1H)，7.45(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)，7.36(S，1H)，7.20–7.08(m，4H)，7.08–7.00(m，1H)，6.55(d，J＝15.9Hz，1H)，6.40(ddd，J＝15.9，7.0，5.1Hz，1H)，5.95(q，J＝6.5Hz，1H)，5.40(q，J＝7.2Hz，1H)，4.60(d，J＝12.1Hz，1H)，4.53(dd，J＝8.2，6.9Hz，1H)，4.30(d，J＝12.5Hz，1H)，3.70–3.63(m，1H)，3.31–3.23(m，1H)，2.93(ddd，J＝14.0，5.1，1.6Hz，1H)，2.69–2.52(m，3H)，2.01–1.73(m，4H)，1.71–1.54(m，2H)，1.59(d，J＝6.7Hz，3H)，1.46(d，J＝7.3Hz，3H)。HPLC Tr＝5.108min。LCMS(m/z)584.3[M+H]，Tr＝2.12min。
实施例57
在氩气下于冰水浴中冷却(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基丁酰胺)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(1.61g，3.03mmol)的二氯甲烷溶液(31mL)。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(1.23g，5.5mmol)，搅拌所获溶液2小时。用N,N-二异丙基乙胺(1.2g，9.2mmol)和甲醇(8.5mL)淬灭反应。真空浓缩该混合物，并将其重新溶解于甲苯(2x25mL)中且浓缩。所获残留物粗品含有(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(1.05g)，不需进一步纯化即可使用。
向(E)-4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-2,2-二甲基-but-3-烯酸甲酯(1.05g，3.51mmol)的四氢呋喃溶液(8mL)中加入甲醇(4mL)、水(4mL)和氢氧化锂水合物(297mg，7.08mmol)。所获混合物搅拌6小时，用1M盐酸水溶液(7.2mL，7.2mmol)淬灭。将所获溶液浓缩为残留物粗品，将其重新溶解于无水甲醇(50mL)中并浓缩，随后溶解于甲苯(50mL)中并浓缩。所获黄色固体(1.3g，100％)为(E)-4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-2,2-二甲基-3-丁烯酸，不需进一步纯化即可使用。在氩气下将部分粗品(E)-4-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-2,2-二甲基-3-丁烯酸(1.05g，2.84mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中。加入N,N-二异丙基乙胺(1.85g，14.3mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.42g，3.73mmol)。所获混合物搅拌3分钟，加入为N,N-二甲基甲酰胺溶液(8.5mL)形式的粗品57a，继续用N,N-二甲基甲酰胺(2x 5mL)冲洗。反应物搅拌40分钟，然后用乙酸乙酯(200mL)和水(300mL)冲洗。分离两相，用乙酸乙酯(200mL)萃取水相。用水(150mL)冲洗合并的有机相，用乙酸乙酯(100mL)萃取第二个水相。无水硫酸钠干燥合并的有机相，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法(35％至60％的丙酮异己烷溶液，连续梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(1.51g，2步的收率为71％)。RF 0.5(50％丙酮异己烷溶液)。
向57b(1.50g，2.15mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)中加入甲醇(10mL)、水(10mL)和氢氧化锂水合物(365mg，8.7mmol)。在室温下搅拌混合物75分钟，然后用1M盐酸水溶液(8.8mL，8.8mmol)淬灭。真空浓缩所获溶液，将粗产品在甲醇(40mL)中溶解并浓缩两次，在乙腈(6x30mL)中混悬并浓缩，得到1.71g无色固体，不需进一步纯化即可使用。在氩气下，将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(1.85g，5.37mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1.97g，16.1mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(700mL)中。将所获溶液加热至50℃，通过注射器以6小时时间滴加为N,N-二甲基甲酰胺溶液(22mL)形式的断酸粗品。随后以相同方法于15分钟时间再次加入N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)洗液。继续搅拌1.25小时后，将反应混合物真空浓缩至终体积200mL。用水(250mL)冲洗此溶液，用二氯甲烷(150mL)萃取水相。无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。将所获残留物溶于乙酸乙酯(200mL)，用水(150mL)冲洗。用乙酸乙酯(150mL)萃取水相。用水(100mL)冲洗合并的有机相，用乙酸乙酯(100mL)萃取第二个水相。无水硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(35％至65％丙酮异己烷溶液，连续梯度)纯化残留物粗品，得到445mg为无定形白色固体的纯标题化合物与389mg不纯产物。通过丙酮:异己烷重结晶对不纯的组分进行纯化，得到另外173.5mg纯标题化合物(总计：618.5mg，52％)。RF0.5(50％丙酮异己烷溶液)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.13(S，1H)，8.04(d，J＝8.5Hz，1H)，7.89(S，1H)，7.55(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)，7.53(S，1H)，6.73–6.34(m，2H)，6.03(q，J＝6.6Hz，1H)，5.63(q，J＝7.2Hz，1H)，4.67(d，J＝12.2Hz，1H)，4.47–4.21(m，2H)，3.81-3.73(m，1H)，2.76-2.64(m，1H)，2.08–1.81(m，3H)，1.80–1.58(m，8H)，1.51(S，3H)，1.35(S，3H)，0.98(d，J＝6.7Hz，3H)，0.93(d，J＝6.7Hz，3H)。LCMS(m/z)550.2[M+H]，Tr＝2.74min。
实施例58
在氩气下于冰水浴中冷却N,N-二异丙胺(2.51g，24.8mmol)的四氢呋喃溶液(150mL)。以2分钟时间滴加正丁基锂的己烷溶液(2.5M，9.7mL，24mmol)，将所获溶液继续搅拌15分钟。然后通过CO2(s):丙酮浴将该溶液冷却至-78℃，以2分钟时间滴加1-乙酰基环丙烷羧酸乙酯(3.47g，22.2mmol)。继续搅拌该溶液20分钟，通过套管以5分钟时间加入为四氢呋喃溶液(24mL)形式的N-苯基-双(三氟甲基磺酰亚胺)(8.4g，23.5mmol)，继续用四氢呋喃(2x5mL)冲洗。自冷浴中取出所获溶液。继续30分钟后，真空浓缩反应混合物，用乙醚(200mL)稀释。用1M氢氧化钠水溶液(1x100mL，1x30mL)冲洗有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到6.6g油状物粗品，不需进一步纯化即可使用。将前一步得到的粗品的无水吡啶溶液(11mL)加热至90℃。16.5小时后，用乙醚(200mL)和3M盐酸(100mL)稀释反应混合物，分离两相。用3M盐酸(50mL)和1M氢氧化钠(50mL)冲洗有机相，硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到2.2g液体粗品，不需进一步纯化即可使用。向一个含有二氯化锆(410mg，1.6mmol)的氩气吹扫小管中加入前一步得到的粗产品(2.2g，ca.16mmol)和频哪醇硼烷(3.1g，24mmol)的二氯甲烷溶液(8mL)。116小时后，用乙酸乙酯(50mL)稀释搅拌的反应混合物，通过滴加水进行淬灭。用水(50mL)进一步稀释混合物，分离两相。用乙酸乙酯(2x50mL)萃取水相。硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，浓缩，通过硅胶色谱法(5至20％乙酸乙酯异己烷溶液，连续梯度)纯化残留物粗品，得到为油状物的标题化合物(1.26g，3步的收率为21％)，其在-15℃下静置时结晶。
向圆底烧瓶中加入(R)-1-(3-氯异喹啉-6-基)乙醇(204mg，0.982mmol)、58a(314mg，1.18mmol)、PdCl2(PCy2(p-NMe2Ph))2(双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II))(40mg，0.049mmol)和磷酸三钾(680mg，3.2mmol)。用隔垫盖密封该烧瓶并用氩气吹扫。加入环戊基甲基醚(2.8mL)和水(1.2mL)，在预热至90℃的油浴中剧烈搅拌所获两相混合物。6.75小时后，将反应物冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)和水(40mL)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相。硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到残留物粗品，通过硅胶色谱法(35至60％乙酸乙酯异己烷溶液)对其进行纯化，得到标题化合物(266mg，85％)。
向58b(266mg，0.854mmol)的四氢呋喃溶液(2mL)中加入甲醇(1mL)、水(1mL)和氢氧化锂水合物(70.8mg，1.69mmol)。所获混合物搅拌3小时，随后用1M盐酸水溶液(1.8mL，1.8mmol)淬灭。真空去除挥发性成分，将所获固体悬于甲苯中。真空去除挥发性成分，所获黄色固体1-{(E)-2-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-乙烯基}-环丙烷羧酸不需进一步纯化即可使用。在氩气下于冰水浴中冷却(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基丁酰胺)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(486mg，0.914mmol)的二氯甲烷溶液(9.4mL)。滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(370mg，1.7mmol)，将所获溶液搅拌4小时。用N,N-二异丙基乙胺(360mg，2.7mmol)和甲醇(2.5mL)淬灭反应。真空浓缩混合物，将所获残留物重新溶解于甲苯(2x15mL)中并浓缩。所获胺粗品不需进一步纯化即可使用。在氩气下向粗品1-{(E)-2-[6-((R)-1-羟基-乙基)-异喹啉-3-基]-乙烯基}-环丙烷羧酸(ca.0.854mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(3.5mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(560mg，4.3mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(427mg，1.12mmol)。所获混合物搅拌2分钟，加入为N,N-二甲基甲酰胺溶液(2.5mL)形式的前一步得到的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯粗品，再用两部分N,N-二甲基甲酰胺(各为1.5mL)冲洗。反应物搅拌45分钟，用乙酸乙酯(100mL)和水(150mL)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(100mL)萃取水相。用水(75mL)冲洗合并的有机相，用乙酸乙酯(75mL)萃取第二个水层。无水硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法(35至60％丙酮异己烷溶液，连续梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(467mg，2步的收率为78％)。
向58c(467mg，0.67mmol)的四氢呋喃溶液(6mL)中加入甲醇(3mL)、水(3mL)和氢氧化锂水合物(113mg，2.69mmol)。在室温下搅拌混合物1.75小时，用1M盐酸水溶液(2.8mL，2.8mmol)淬灭。真空浓缩所获溶液，将粗产品混悬于乙腈(5x20mL)中并浓缩以得到530mg淡黄色固体，不需进一步纯化即可使用。在氩气下，将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(283mg，0.82mmol)和4-二甲基氨基吡啶(307mg，2.51mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(100mL)中。将所获溶液加热至50℃，通过注射器以6小时时间滴加为N,N-二甲基甲酰胺(3.5mL)和1,2-二氯乙烷(10mL)溶液形式的一部分断酸粗品(260mg，ca。0.33mmol)。然后以相同方法再次加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)洗液。继续搅拌1.25小时后，将反应混合物真空浓缩至大约35mL。用乙酸乙酯(100mL)稀释该溶液，用水(100mL)冲洗。用乙酸乙酯(75mL)萃取水相，用水(50mL)冲洗合并的有机相。用乙酸乙酯(50mL)萃取第二个水相，硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(35至60随后至100％的丙酮异己烷溶液)纯化残留物粗品，得到101mg含有标题化合物的不纯产物。通过硅胶色谱法(0至5％的甲醇乙酸乙酯溶液)，随后通过反相HPLC(5至100％乙腈/水+0.1％三氟乙酸)纯化该物质，得到为其三氟乙酸盐形式的化合物(37mg，2步的收率为17％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.55(S，1H)，8.37(d，J＝8.6Hz，1H)，8.06(S，1H)，7.89(S，1H)，7.85(d，J＝8.6Hz，1H)，6.69(d，J＝16.4Hz，1H)，6.54(d，J＝16.4Hz，1H)，6.11(q，J＝6.7Hz，1H)，5.75–5.67(m，1H)，4.46–4.36(m，1H)，4.36–4.28(m，1H)，3.90–3.78(m，1H)，2.80–2.68(m，1H)，2.05–1.86(m，3H)，1.80–1.68(m，5H)，1.66–1.57(m，5H)，1.40–1.30(m，1H)，1.30–1.21(m，1H)，1.03–0.93(m，4H)，0.90(d，J＝6.7Hz，3H)。LCMS(m/z)548.4[M+H]，Tr＝2.79min。
实施例59
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入无油氢化钾(来自于1740mg的ca.30％矿物油分散液，ca.13mmol)、无水四氢呋喃(10mL)和己烷(1mL)。用氩气再次吹扫该烧瓶，加入三氯乙烯(900μL，1.32g，10mmol)，随后加入干燥甲醇(10μL，7.9mg，0.25mmol)。将此混合物在室温下搅拌2小时。随后，加入己烷(10mL)，将所获溶液立即用于下一步。
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入四氢呋喃(50mL)，在冰浴中冷却该溶液。加入1.8M二异丙基氨基锂(7.2mL，13mmol)的四氢呋喃/庚烷/乙苯溶液。将所获溶液冷却至-78℃，滴加四氢-2H-吡喃-4-羧酸甲酯(1.20mL，1.30g，9mmol)以及六甲基磷酸酰胺(1.56mL，1.61g，9mmol)进行处理。将所获溶液加热至0℃，搅拌20分钟，冷却至-78℃，滴加预冷的(0℃)1,2-二氯代乙炔(ca.10mmol)溶液进行处理。反应混合物在-78℃下搅拌30分钟，随后加热至室温。在室温下4小时后，将反应混合物倒入至碎冰中，用乙醚(200mL)(加入5mL盐水以帮助分离)萃取。分离有机相并用水(200mL)冲洗。用乙醚(100mL)萃取此水相。用盐水(100mL)冲洗合并的有机组分，硫酸镁干燥，使用2cm硅胶层过滤(用50mL乙酸乙酯冲洗硅胶层)，减压浓缩。对此粗产品进行硅胶色谱分析(梯度为0-15％的乙酸乙酯异己烷溶液)，得到为无色油状物的标题化合物(1.22g，67％)。Rf＝0.48，30％乙酸乙酯异己烷溶液，磷钼酸的乙醇溶液。
将59b(1.01g，5mmol)和铜粉(1.6g，25mmol)悬于四氢呋喃(100mL)中。加入乙酸(15mL)，将反应混合物加热至60℃，持续3小时。随后，将反应混合物到至水中(使用滤纸滤去铜粉)，用乙醚(3x50mL)萃取。用饱和氯化铵溶液(3x50mL)、饱和碳酸氢钠溶液(2x50mL)和水(50mL)冲洗合并的有机提取物。用乙醚(50mL)萃取此水相。用盐水(50mL)冲洗合并的有机提取物，硫酸镁干燥，使用2cm硅胶层过滤(用50mL乙酸乙酯冲洗硅胶层)，减压浓缩。高真空下干燥一天后，分离得到为无色油状物的标题化合物(0.84g，定量收率)。Rf＝0.37，30％乙酸乙酯异己烷溶液，磷钼酸的乙醇溶液。
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入59c(0.84g，5mmol)和二氯甲烷(2mL)。将混合物冷却至0℃。通过注射器滴加频哪醇硼烷(0.96g，7.5mmol)。搅拌混合物1分钟后，使用注射器将其转移至另一烘箱干燥、氩气吹扫、浸入冰浴中且避光的烧瓶中，该烧瓶中含有二氯化锆(0.13g，0.5mmol)。再使用一部分二氯甲烷(2mL)以完成定量转移。随后将混合物加热至室温，在暗处搅拌72小时以完成完全转化。用乙酸乙酯(50mL)稀释反应混合物，小心地用水(1ml)淬灭。加入水(50mL)，分离有机相和水相。用乙酸乙酯(3x40mL)萃取水相。硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并蒸发得到残留物粗品，将其溶解于异己烷(50mL)，用5-10％甲醇水溶液(3x50mL)和盐水(50mL)萃取。硫酸镁干燥己烷相。分离得到蒸发后为白色结晶的标题化合物(1.42g，93％)。Rf＝0.38，30％乙酸乙酯异己烷溶液，碘蒸汽。
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入(R)-1-(3-氯-异喹啉-6-基)-乙醇(0.83g，4mmol)、59d(1.40g，4.7mmol)、PdCl2(PCy2(p-NMe2Ph))2(双[(二环己基)(4-二甲基氨基苯基)膦]氯化钯(II))(173mg，0.21mmol)和磷酸三钾(2.64g，12.4mmol)。用隔垫盖密封该烧瓶并用氩气吹扫。加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，在预热至80℃的油浴中剧烈搅拌所获反应混合物。2小时后，将反应物冷却至室温，用乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)稀释。分离两相，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取水相。硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，浓缩，得到残留物粗品，通过硅胶色谱法(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)对其进行纯化，得到蒸发后为无色油状物的标题化合物(1.06g，78％)。Rf＝0.48，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
向59e(1.02g，3mmol)的四氢呋喃溶液(8mL)中加入甲醇(4mL)、水(4mL)和氢氧化锂水合物(0.15g，6.3mmol)。所获混合物在室温下搅拌10小时，用1M盐酸(6.5mL，6.5mmol)淬灭。将所获溶液浓缩为残留物粗品，将其与四氢呋喃(20mL)共蒸发两次，与无水乙腈(20mL)共蒸发两次，并与无水甲苯(20mL)共蒸发两次。在高真空下将所获白色固体干燥过夜，不需进一步纯化即可使用(1.24g，定量收率)。
在冰水浴中冷却1e(0.53g，1mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。在0℃于氩气下滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(0.69g，1.80mmol)，在室温下搅拌所获溶液30分钟。将反应混合物蒸发至干，在氩气下将所获残留物粗品溶于无水乙腈(12mL)中。在0℃搅拌反应混合物，加入59f(371mg，0.9mmol)和N,N-二异丙基乙胺(517mg，4mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(570mg，1.5mmol)。在室温下搅拌反应混合物48小时。蒸干溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(50mL)中，用20％柠檬酸水溶液(2x50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)冲洗此溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(560mg，84％)。Rf＝0.13，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
向59g(371mg，0.5mmol)的四氢呋喃溶液(8mL)中加入甲醇(4mL)、水(4mL)和氢氧化锂水合物(36mg，1.5mmol)。在室温下搅拌此混合物2小时T，用1M盐酸水溶液(1.6mL，1.6mmol)淬灭。将所获溶液浓缩为残留物粗品，将其与四氢呋喃(20mL)共蒸发两次，与无水乙腈(20mL)共蒸发两次且与无水甲苯(20mL)共蒸发两次。在高真空下将所获白色固体干燥过夜，不需进一步纯化即可使用(365mg，定量收率)。在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(258mg，0.75mmol)、4-二甲基氨基吡啶(275mg，2.25mmol)和无水1,2-二氯乙烷(150mL)。所获溶液在50℃下加热，通过注射器以12小时时间滴加为干燥N,N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)形式的断酸粗品。继续使用一部分干燥N,N-二甲基甲酰胺(2x5mL)以完成定量转移。在50℃继续搅拌2小时后，将反应混合物转移至一个分液漏斗中，用水(100mL，加入5mL盐水以帮助分离)冲洗。用二氯甲烷(50mL)萃取水相。用盐水(50mL)冲洗合并的有机提取物。硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将所获残留物溶于乙酸乙酯(100mL)中并用水(100mL，加入5mL盐水以帮助分离)冲洗。用乙酸乙酯(50mL)萃取水相。用水(100mL，加入5mL盐水以帮助分离)冲洗合并的有机提取物。用乙酸乙酯(50mL)萃取所获水相。用盐水(50mL)冲洗合并的有机提取物，硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(72mg，24％)。Rf＝0.42，10％甲醇二氯甲烷溶液。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.04(S，1H)，7.95(d，J＝8.5Hz，1H)，7.76(S，1H)，7.47(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)，7.31(S，1H)，6.43(m，2H)，5.93(q，J＝6.6Hz，1H)，5.44–5.36(m，1H)，4.33–4.23(m，2H)，3.84(dt，J＝11.6，4.1Hz，1H)，3.76–3.69(m，1H)，3.68–3.61(m，2H)，3.48(m，1H)，2.65–2.56(m，1H)，2.16–2.07(m，2H)，2.03–1.93(m，1H)，1.91–1.82(m，2H)，1.79e(m，1H)，1.67–1.62(m，3H)，1.59(d，J＝6.6Hz，3H)，1.51(d，J＝7.2Hz，3H)，0.90(d，J＝6.7Hz，3H)，0.85(d，J＝6.7Hz，3H)。LCMS(m/z)592.3[M+H]，Tr＝3.12min。
实施例60
在室温于大气压氢气下对含有10％钯碳催化剂(10mg)的化合物59(10mg，0.017mmol)的乙酸乙酯(4mL)和四氢呋喃(4mL)混合物溶液进行加氢反应，持续3小时。使用硅藻土(Celite)过滤反应混合物，用四氢呋喃(10mL)冲洗滤板。蒸干滤液，得到为白色固体的标题化合物(10mg，定量收率)。Rf＝0.47，10％甲醇二氯甲烷溶液。1HNMR(400MHz，CD3OD)：δ9.02(S，1H)，7.94(d，J＝8.5Hz，1H)，7.81(S，1H)，7.44(d，J＝8.5Hz，1H)，7.20(S，1H)，6.02(q，J＝6.5Hz，1H)，5.78–5.71(m，1H)，5.24(m，1H)，4.33–4.23(m，2H)，3.83–3.61(m，6H)，3.52(m，1H)，2.71–2.66(m，1H)，2.43–2.36(m，2H)，2.14–2.05(m，2H)，2.08–1.91(m，1H)，1.90–1.82(m，2H)，1.76(m，1H)，1.67–1.62(m，2H)，1.57(d，J＝6.6Hz，3H)，1.54(d，J＝7.2Hz，3H)，0.96(d，J＝6.7Hz，3H)，0.88(d，J＝6.7Hz，3H)。LCMS(m/z)594.3[M+H]，Tr＝2.72min。
实施例61
在冰水浴中冷却1e(1064mg，2mmol)的二氯甲烷溶液(30mL)。在0℃于氩气下滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(666mg，3mmol)在室温下搅拌所获溶液30分钟。将反应混合物蒸发至干，在氩气下将所获残留物粗品溶于无水乙腈(25mL)。在0℃下搅拌反应混合物，加入5-己烯酸(251mg，2.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1034mg，8mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1065mg，2.8mmol)。反应混合物在室温下搅拌48小时。蒸干溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(200mL)，用20％柠檬酸水溶液(2x150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)冲洗该溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(864mg，82％)。Rf＝0.35,异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
向61a(830mg，1.57mmol)的四氢呋喃溶液(40mL)中加入水(10mL)和氢氧化锂水合物(57mg，2.38mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，使用5cm层的H+循环(首先用水冲洗树脂)DOWEX D50x8树脂进行过滤。继续用水(50mL)冲洗树脂。收集滤液，减压浓缩，并与甲苯(10mL)共蒸发两次。在高真空下干燥一天后，分离得到为白色固体的标题化合物(590mg，95％)。Rf＝0.4，30％甲醇二氯甲烷溶液。
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入61b(238mg，0.60mmol)和(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(120mg，0.6mmol)。密封该烧瓶，用氩气重新吹扫反应混合物两次。加入无水二氯甲烷(10mL)，用氩气重新吹扫反应混合物两次。加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(148mg，0.77mmol)，随后加入4-二甲基氨基吡啶(67mg，0.55mmol)。用氩气快速重新吹扫反应混合物两次，并在室温下搅拌12小时。用二氯甲烷(100mL)稀释此反应混合物，用20％柠檬酸水溶液(2x150mL)，水(150mL)和盐水(150mL)冲洗该溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(307mg，89％)。Rf＝0.29，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
在室温于氩气下搅拌61c(209mg，0.362mmol)的甲苯溶液(150mL)。加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(23mg，0.036mmol)，将反应混合物在氩气下加热回流30分钟。将反应混合物冷却至室温，加入乙酸乙酯(50mL)。用三(羟甲基)膦水溶液(372mg，3mmol于100mL水中)、水(2x50mL)和盐水(50mL)冲洗该溶液两次。硫酸镁干燥有机相，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(125mg，63％)。Rf＝0.25，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.00(S，1H)，7.91(d，J＝8.4Hz，1H)，7.77(S，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，1H)，7.23(S，1H)，6.64(m，1H)，6.29(d，J＝15.4Hz，1H)，5.97(q，J＝5.9Hz，1H)，5.53(q，J＝7.0Hz，1H)，4.37–4.18(m，2H)，3.65(d，J＝9.8Hz，1H)，2.65(t，J＝12.3Hz，1H)，2.36–2.18(m，4H)，1.98(m，1H)，1.94–1.73(m，3H)，1.71–1.57(m，3H)，1.55(d，J＝5.6Hz，6H)，0.83(d，J＝6.6Hz，3H)，0.78(d，J＝6.6Hz，3H)。LCMS(m/z)550.2[M+H]，Tr＝2.55min。
实施例62
在室温于大气压氢气下对含有10％钯碳催化剂(10mg)的化合物61(10mg，0.018mmol)的乙酸乙酯(4mL)和四氢呋喃(4mL)混合物溶液进行加氢反应，持续3小时。使用硅藻土(Celite)过滤反应混合物，用四氢呋喃(10mL)冲洗滤板。蒸干滤液，得到为白色固体的标题化合物(9mg，89％)。Rf＝0.16，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.02(S，1H)，7.93(d，J＝8.7Hz，1H)，7.62(S，1H)，7.47(S，1H)，7.44(d，J＝8.7Hz，1H)，6.02–5.93(m，1H)，5.39(m，1H)，4.03(m，1H)，3.69(m，1H)，2.84(m，2H)，2.27(S，1H)，2.10(m，1H)，1.97(m，1H)，1.85(m，2H)，1.76(m，2H)，1.62(m，4H)，1.54(d，J＝5.1Hz，3H)，1.39(d，J＝6.6Hz，3H)，1.19(m，4H)，0.78(d，J＝5.0Hz，3H)，0.73(d，J＝5.8Hz，3H)。LCMS(m/z)552.3[M+H]，Tr＝2.10min。
实施例63
在冰水浴中冷却1e(1064mg，2mmol)的二氯甲烷溶液(30mL)。在0℃于氩气下滴加三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(666mg，3mmol)，在室温下搅拌所获溶液30分钟。将反应混合物蒸发至干，在氩气下将所获残留物粗品溶于无水乙腈(25mL)。在0℃下搅拌反应混合物，加入6-庚烯酸(281mg，2.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1034mg，8mmol)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1065mg，2.8mmol)。反应混合物在室温下搅拌48小时。蒸干溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯(200mL)，用20％柠檬酸水溶液(2x150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)冲洗该溶液两次，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯+甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(817mg，75％)。Rf＝0.37，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
向63a(790mg，1.46mmol)的四氢呋喃溶液(40mL)中加入水(10mL)和氢氧化锂水合物(52mg，2.19mmol)。该混合物在室温下搅拌2小时，使用5cm层的H+循环(首先用水冲洗树脂)DOWEX D50x8树脂进行过滤。继续用水(50mL)冲洗树脂。收集滤液，减压浓缩，并与甲苯(10mL)共蒸发两次。在高真空下干燥一天后，分离得到为白色固体的标题化合物(583mg，97％)。Rf＝0.4，30％甲醇二氯甲烷溶液。
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中中加入63b(276mg，0.67mmol)和(R)-1-(3-乙烯基-异喹啉-6-基)-乙醇(134mg，0.67mmol)。T密封该烧瓶，用氩气重新吹扫反应混合物两次。加入无水二氯甲烷(10mL)，用氩气重新吹扫反应混合物两次。加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(168mg，0.87mmol)，随后加入4-二甲基氨基吡啶(75mg，0.62mmol)。用氩气快速重新吹扫反应混合物两次，并在室温下搅拌12小时。用二氯甲烷(100mL)稀释此反应混合物，用20％柠檬酸水溶液(2x150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)冲洗该溶液，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留物(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(316mg，79％)。Rf＝0.30，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。
在室温于氩气下搅拌63c(255mg，0.431mmol)的甲苯溶液(200mL)。加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(27mg，0.043mmol)，反应混合物在氩气下加热回流30分钟。将反应混合物冷却至室温，加入乙酸乙酯(50mL)。用三(羟甲基)膦水溶液(372mg，3mmol于100mL水中)冲洗该溶液两次，用水(50mL)冲洗两次且用盐水(50mL)冲洗两次。硫酸镁干燥有机相，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)纯化残留物，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(76mg，31％)。Rf＝0.20，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.01(S，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，7.69(S，1H)，7.57(S，1H)，7.43(d，J＝8.5Hz，1H)，6.55(m，1H)，5.95(m，1H)，5.43(m，1H)，5.23(m，3H)，4.32(m，1H)，4.20(m，1H)，3.67(m，1H)，2.69(m，1H)，2.30(m，2H)，2.13(m，2H)，1.96(m，3H)，1.83(m，1H)，1.64(m，3H)，1.56(d，J＝6.7Hz，3H)，1.44(d，J＝7.4Hz，3H)，0.92–0.72(m，6H)。LCMS(m/z)564.4[M+H]，Tr＝2.60min。
实施例64
在室温于大气压氢气下对含有10％钯碳催化剂(10mg)的化合物63(15mg，0.027mmol)的乙酸乙酯(4mL)和四氢呋喃(4mL)混合物溶液进行加氢反应，持续3小时。使用硅藻土(Celite)过滤反应混合物，用四氢呋喃(10mL)冲洗滤板。蒸干滤液，得到为白色固体的标题化合物(13mg，87％)。Rf＝0.11，异己烷/乙酸乙酯/甲醇(6/4/1)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.02(S，1H)，7.95(d，J＝8.7Hz，1H)，7.68(S，1H)，7.50(S，1H)，7.45(d，J＝8.7Hz，1H)，5.93(q，J＝6.3Hz，1H)，5.20(m，1H)，4.21(m，1H)，4.07(d，J＝8.0Hz，1H)，3.66(m，1H)，2.83(m，4H)，2.25(m，1H)，2.07(m，1H)，1.94(m，2H)，1.80e(m，1H)，1.63(m，3H)，1.55(d，J＝6.6Hz，3H)，1.51–1.42(m，2H)，1.37(d，J＝7.0Hz，3H)，1.25(m，4H)，0.83(d，J＝6.7Hz，6H)。LCMS(m/z)566.3[M+H]，Tr＝2.27min。
实施例65
向在氩气气氛下预热至90℃的(R)-1-(3-氯-异喹啉-6-基)-乙醇(250mg，1.21mmol)和磷酸三钾(770mg，3.63mmol)的环戊基甲基醚(4.5mL)和水(1.5mL)溶液中加入3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯基硼酸、频哪醇酯(Combi-Blocks，387mg，1.33mmol)and(A-caPhos)2PdCl2(49mg，60μmol)。17小时后，将反应物冷却至23℃，并在二氯甲烷(50mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)之间分配。分离两相，用二氯甲烷(50mL)萃取水层。无水硫酸钠干燥合并的有机层，减压浓缩。通过硅胶色谱法(24g Combiflash HP Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为淡黄色油状物的标题化合物(321mg，83％)。
在23℃于氩气气氛下向65a(320mg，1.00mmol)的四氢呋喃(3mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(26mg，1.1mmol)。3小时后，减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法(24gCombiflash HP Gold色谱柱，0–20％甲醇/二氯甲烷梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(64.2mg，21％)。Rf＝0.5(20％甲醇二氯甲烷溶液)I2/二氧化硅染色剂。
在0℃于氩气气氛下向1e(104mg，0.21mmol)的二氯甲烷溶液(1.05mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(70mg，1.07mmol)。1小时后，减压浓缩反应混合物。用乙腈(1.05mL)稀释所获残留物，在23℃于氩气气氛下按顺序加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(79.8mg，0.210mmol)、N,N-二异丙基乙胺(140μL，0.840mmol)和65b(64mg，0.21mmol)。18小时后，减压浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法纯化残留物粗品，得到为淡黄色油状物的标题化合物(140mg，93％)。
在23℃于氩气气氛下向65c(140mg，0.195mmol)的四氢呋喃(0.9mL)和水(0.3mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(4.6mg，0.195mmol)。3小时后，减压浓缩反应混合物，得到为白色固体的羧酸锂盐形式的标题化合物(131mg，99％)。
在23℃于氩气气氛下向苯并三唑1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸酯(35.3mg，68μmol)和4-二甲基氨基吡啶(62.3mg，510μmol)的二氯甲烷溶液(5.7mL)中加入65d(10mg，17μmol)。16小时后，减压浓缩反应混合物，通过制备HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，5–100％乙腈/水，0.1％三氟乙酸改性剂)纯化残留物粗品，得到为白色固体的三氟乙酸盐形式的标题化合物(6.0mg，52％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.70(S，1H)，8.58(S，1H)，8.48(d，J＝8.6Hz，1H)，8.32(S，1H)，7.97–7.87(m，2H)，7.79(d，J＝7.9Hz，1H)，7.62(app t，J＝7.7Hz，1H)，7.53(d，J＝7.8Hz，1H)，6.21(q，J＝6.6Hz，1H)，5.84–5.71(m，1H)，4.45–4.29(m，2H)，3.96(d，J＝15.5Hz，1H)，3.75(dd，J＝11.1，2.7Hz，1H)，3.64(d，J＝15.5Hz，1H)，2.74(td，J＝12.8，3.1Hz，1H)，2.13–1.96(m，2H)，1.91(br d，J＝13.0Hz，1H)，1.81–1.65(m，2H)，1.67(d，J＝6.6Hz，3H)，1.62(d，J＝7.1Hz，3H)，1.01(d，J＝6.8Hz，3H)，0.94(d，J＝6.8Hz，3H)。HPLC Tr＝3.040min。LCMS(m/z)572.3[M+H]，Tr＝2.07min。
实施例66
在23℃于氩气气氛下向6-氯吡啶-3-胺(5.00g，38.8mmol)的二氧六环溶液(194mL)中加入二碳酸二叔丁酯(10.2g，46.7mmol)，将所获混合物加热至100℃。17小时后，将反应混合物冷却至23℃，并用水(500mL)稀释。用乙酸乙酯(2×500mL)萃取所获混合物，无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，减压浓缩。通过硅胶色谱法(120g Combiflash HPGold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(7.69g，87％)。
在-78℃于氩气气氛下向66a(2.00g，8.80mmol)和四甲基乙二胺(2.70mL，18.0mmol)的乙醚溶液(44mL)中加入正丁基锂(2.5M己烷溶液，7.2mL，18.0mmol)。10分钟后，以50分钟时间将所获混合物加热至-15℃。将反应混合物冷却至-78℃，通过注射器加入N,N-二甲基甲酰胺(1.9g，26mmol)。30分钟后，用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭反应混合物，并加热至23℃。用乙酸乙酯(2×20mL)萃取所获混合物，无水硫酸钠干燥合并的有机层，减压浓缩。通过硅胶色谱法(120g Combiflash HP Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物粗品，得到为无色油状物的标题化合物(849mg，38％)。
在23℃于氩气气氛下向66b(258mg，1.00mmol)和(E)-4-(二甲基氨基)-3-丁烯-2-酮(452mg，4.00mmol)的1,4-二氧六环溶液(10mL)中加入对甲苯磺酸一水合物(761mg，4mmol)，将所获混合物加热至80℃。2小时后，将反应混合物冷却至23℃，并在饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)之间分配。分离两层，用乙酸乙酯(200mL)萃取水层。无水硫酸钠干燥合并的有机层，减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物粗品，得到为灰白色固体的标题化合物(107mg，51％)。
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(5mg，8μmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(7mg，19μmol)悬于脱气的水(6mL)中，用氩气对该混合物脱气15分钟。在70℃于氩气下搅拌该混合物90分钟。将所获黄色溶液冷却至室温。加入66c(329mg，1.56mmol)、甲酸钠(543mg，7.98mmol)和脱气的四氢呋喃(1mL)，将反应混合物脱气10分钟。在40℃下剧烈搅拌反应混合物2.5小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL萃取)。分离有机层，用水(20mL)、盐水(20mL)冲洗，无水硫酸镁干燥，减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为固体的标题化合物(180mg，54％)。
向磷酸三钾(550mg，2.59mmol)的环戊基甲基醚(4.5mL)和水(3mL)混悬液中加入66d(180mg，0.89mmol)并加热至90℃。在此温度下，加入(A-caPhos)2PdCl2(35mg，43μmol)并搅拌2分钟。滴加(E)-2,2-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-3-丁烯酸甲酯(286mg，1.12mmol)的环戊基甲基醚溶液(4.5mL)并在90℃下搅拌19小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(40mL)和水(20mL)稀释。分离两层，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取水层。无水硫酸镁干燥合并的有机层，浓缩，通过硅胶色谱法(24g SiO2Isco Rf Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化所获残留物粗品，得到为浅褐色固体的标题化合物(95mg，37％)。
在23℃下向66e(95mg，0.32mmol)的四氢呋喃(1.8mL)、甲醇(0.6mL)和水(0.6mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(15mg，0.63mmol)。16小时后，减压浓缩所获混合物，通过加入甲苯(5mL)共沸随后减压浓缩(2×)去除残余溶剂，得到标题化合物。不需进一步纯化即可将其用于接下来的酰胺耦合反应。
在0℃于氩气气氛下向1e(212mg，0.40mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)中缓慢加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(106μL，0.60mmol)。1小时后，减压浓缩所获混合物，不需进一步纯化即可将其用于接下来的酰胺耦合反应。在23℃下按顺序向66f(90.5mg，0.32mmol)的乙腈溶液(3mL)中加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(180mg，0.47mmol)、N,N-二异丙基乙胺(330μL，1.90mmol)和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(232mg，0.4mmol)的乙腈溶液(2mL)。16小时后，减压浓缩所获混合物，通过硅胶色谱法直接纯化残留物，得到为固体的标题化合物(201mg，91％)。
在23℃下向66g(201mg，0.29mmol)的四氢呋喃(2mL)、甲醇(0.4mL)和水(0.4mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(14mg，0.57mmol)。40分钟后，在23℃下加入氢氧化锂水合物(14mg，0.57mmol)。1小时后，减压浓缩所获混合物，通过加入甲苯(2mL)共沸随后减压浓缩(3×)去除残余溶剂，得到标题化合物。不需进一步纯化即可将其用于接下来的大环内酯化反应。
在氮气气氛下向2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(43mg，0.12mmol)和4-二甲基氨基吡啶(48mh，0.39mmol)中加入1,2-二氯乙烷(20mL)并加热至50℃。在此温度下，通过注射泵以6小时时间加入66h(28mg，0.049mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)。通过相同方法以15分钟时间继续加入N,N-二甲基甲酰胺洗液(0.5mL)。继续搅拌1.25小时后，将反应混合物冷却至室温。用乙酸乙酯(20mL)稀释并用水(2x10mL)冲洗。无水硫酸镁干燥有机层，过滤。减压去除溶剂，通过制备HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，5–100％乙腈/水，0.1％三氟乙酸改性剂)纯化残留物，得到为白色粉末的三氟乙酸盐形式的标题化合物。用饱和碳酸氢钠溶液冲洗以去除由2-甲基-6-硝基苯甲酸酐形成的酸杂质，得到为白色固体的标题化合物(1.5mg，5％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.19(S，1H)，8.86(d，J＝2.1Hz，1H)，8.67(d，J＝7.5Hz，1H)，8.21(S，1H)，7.59(S，1H)，6.89(d，J＝9.5Hz，1H)，6.58(d，J＝16.1Hz，1H)，6.46(d，J＝16.1Hz，1H)，6.04(q，J＝6.4Hz，1H)，5.52–5.41(m，1H)，4.26(d，J＝14.4Hz，1H)，4.18(app t，J＝9.1Hz，1H)，3.65(dd，J＝11.4，2.8Hz，1H)，2.58(td，J＝12.9，3.2Hz，1H)，1.91–1.75(m，3H)，1.68–1.53(m，2H)，1.63(d，J＝6.7Hz，3H)，1.51(d，J＝7.3Hz，3H)，1.43(S，3H)，1.26(S，3H)，0.87(d，J＝6.7Hz，3H)，0.82(d，J＝6.7Hz，3H).LCMS(m/z)551.2[M+H]，Tr＝2.19min。
实施例67
Dioxane：二氧六环
将2-(3-溴苯基)-2-甲基丙酸甲酯(Pharmabridge，Doylestown，PA，USA)(190mg，0.74mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧硼戊环)(206mg，0.81mmol)、[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)，以及二氯甲烷(27mg，0.04mmol)和乙酸钾(217mg，2.22mmol)置于螺旋盖小管中，用真空和氩气循环吹扫三次。在氩气下加入无水1,4-二氧六环(4mL)，将所获混合物加热至80℃，持续19小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)稀释。加入硅藻土(Celite)(～1g)，用硅藻土(Celite)垫过滤。减压去除溶剂，得到可直接用于接下来的反应的标题化合物。
向磷酸三钾(445mg，2.10mmol)的环戊基甲基醚(2.5mL)和水(1.5mL)混悬液中加入(R)-1-(3-氯-异喹啉-6-基)-乙醇(180mg，0.89mmol)，将反应混合物加热至90℃。在此温度下,加入(A-caPhos)2PdCl2(28mg，35μmol)，搅拌反应混合物2分钟。滴加67a(225mg，0.74mmol)的环戊基甲基醚溶液(2.5mL)并在90℃下搅拌19小时。将反应混合物冷却至室温，应用乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)稀释。分离两层，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取水层。无水硫酸镁干燥合并的有机层，浓缩，通过硅胶柱色谱纯化所获残留物粗品，得到为浅褐色固体的标题化合物(267mg，定量)。
在23℃下向67b(244mg，0.7mmol)的四氢呋喃(10mL)和水(2.5mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(18.5mg，0.77mmol)。48小时后，向反应混合物中加入氢氧化锂水合物(17mg，0.70mmol)。24小时后，减压浓缩反应混合物，通过加入甲苯(5mL)共沸随后减压浓缩(2×)去除残余溶剂，得到标题化合物。不需进一步纯化即可将其用于接下来的酰胺耦合反应。
在0℃于氩气气氛下向1e(397mg，0.75mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)中缓慢加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(199μL，1.12mmol)。1小时后，减压浓缩所获混合物，得到为三氟甲磺酸盐的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯。不需进一步纯化即可将其用于接下来的酰胺耦合反应。在23℃下按顺序向67c(234mg，0.7mmol)的乙腈溶液(7mL)中加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(532mg，1.4mmol)、N,N-二异丙基乙胺(730μL，4.2mmol)和(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(435mg，0.75mmol)的乙腈溶液(3mL)。16小时后，减压浓缩所获混合物，通过硅胶色谱法(40g SiO2Isco Rf Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)直接纯化残留物，得到为固体的标题化合物(230mg，44％)。
在23℃下向67d(94mg，0.13mmol)的四氢呋喃(3mL)和水(1mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(3.1mg，0.13mmol)。48小时后，向反应混合物中加入氢氧化锂水合物(17mg，0.70mmol)。1小时后，减压浓缩反应混合物，通过加入甲苯(5mL)共沸随后减压浓缩(2×)去除残余溶剂，得到标题化合物。不需进一步纯化即可将其用于接下来的大环内酯化反应。
在23℃下向67e(78mg，0.13mmol)的二氯甲烷混悬液(42mL)中加入苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸酯(520mg，0.50mmol)和4-二甲基氨基吡啶(462mg，4.0mmol)。24小时后，减压去除溶剂，通过制备HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，5–100％乙腈/水，0.1％三氟乙酸改性剂)纯化残留物，得到为白色粉末的三氟乙酸盐形式的标题化合物(3.2mg，4％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.65(S，1H)，8.69(S，1H)，8.49(d，J＝8.7Hz，1H)，8.44(d，J＝8.6Hz，1H)，8.34(S，1H)，7.90(dd，J＝8.7，1.5Hz，1H)，7.83(d，J＝7.7Hz，1H)，7.78(d，J＝7.9Hz，1H)，7.74(S，1H)，7.69(app t，J＝7.8Hz，1H)，6.82(d，J＝8.6Hz，1H)，6.21(q，J＝6.5Hz，1H)，5.92–5.84(m，1H)，4.41–4.30(m，2H)，3.75(dd，J＝14.4，6.0Hz，1H)，2.71(td，J＝13.0，3.0Hz，1H)，2.06–1.99(m，1H)，1.96(dd，J＝14.2，7.1Hz，1H)，1.93–1.86(m，1H)，1.75(S，3H)，1.73–1.59(m，2H)，1.68(d，J＝6.6Hz，3H)，1.63(d，J＝7.1Hz，3H)，1.47(S，3H)，0.96(d，J＝6.8Hz，3H)，0.84(d，J＝6.7Hz，3H)。HPLC Tr＝5.319min。LCMS(m/z)600.5[M+H]，Tr＝2.71min。
实施例68和69
在23℃下向6-溴代-3-氯异喹啉(Frontier Scientific，1.594g，6.57mmol)和2,2-二甲基丙烷-1,3-二醇(684mg，6.57mmol)的环戊基甲基醚溶液(20mL)中加入碳酸铯(2.354g，7.23mmol)。将反应混合物加热至120℃，持续18小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(30mL)、盐水(30mL)冲洗，无水硫酸镁干燥所获有机层，减压浓缩。通过硅胶色谱法(80g Isco Rf Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(461mg，23％)。
在23℃下向68a(461mg，1.49mmol)的乙腈(10mL)和水(2.5mL)溶液中加入高碘酸(1.698g，7.45mmol)。将反应混合物冷却至0℃，一次性加入三氧化铬(30mg，0.298mmol)。2.5小时后，用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释反应混合物，分离两层。用乙酸乙酯(30mL)萃取水层，用盐水冲洗合并的有机层，无水硫酸镁干燥，减压浓缩，得到不需纯化即可使用的标题化合物(481mg)。
在23℃下按顺序向68b(481mg，1.49mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(1.133g，2.98mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.55mL，8.94mmol)和(S)-2-氨基-3-甲基丁酸甲酯盐酸盐(749mg，4.47mmol)。16小时后，减压浓缩所获混合物，通过硅胶色谱法(24g Isco Rf Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)直接纯化残留物，得到为褐色油状物的标题化合物(412mg，2步的收率为63％)。
在23℃于氩气下向68c(412mg，0.95mmol)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)的甲苯混悬液(5mL)中加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(962μL，2.85mmol)。将反应混合物加热至50℃。18小时后，在50℃下加入水(1mL)。2小时后，将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(15mL)稀释，加入1M氟化钾溶液(5mL)。在23℃下剧烈搅拌所获混合物。2小时后，用硅藻土(Celite and)短板过滤该混合物，用乙酸乙酯(10mL)冲洗。用水(15mL)、盐水(15mL)冲洗滤液，无水硫酸镁干燥并浓缩。将此残留物溶于1,4-二氧六环(8mL)并在23℃下加入1M盐酸水溶液(1mL)。5分钟后，用饱和碳酸氢钠溶液(2mL)淬灭反应混合物，浓缩至干。将残留物溶于乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分离两层。用乙酸乙酯(2×10mL)萃取水层，用盐水(20mL)冲洗合并的有机层，无水硫酸镁干燥并浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为褐色胶状物的标题化合物(236mg，62％)。
将二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(2mg，3μmol)和(1R,2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(2.6mg，7μmol)悬于脱气的水(2.5mL)中，用氩气将此混合物脱气15分钟。在70℃于氮气下搅拌混合物90分钟。将所获黄色溶液冷却至室温。加入68d(236mg，0.59mmol)、甲酸钠(200mg，2.95mmol)和脱气的四氢呋喃(1.25mL)，将反应混合物脱气10分钟。在40℃剧烈搅拌反应混合物3.5小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(15mL)萃取。分离有机层，用水(20mL)、盐水(20mL)冲洗，无水硫酸镁干燥，减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为浅褐色固体的标题化合物(196mg，83％)。
在23℃下向68e(196mg，0.487mmol)的四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(23mg，0.97mmol)。16小时后，减压浓缩反应混合物。将残留物溶于乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)中，并用1M盐酸水溶液酸化至pH～2。分离所获两层。用乙酸乙酯(2×10mL)萃取水层，用盐水冲洗合并的有机层，无水硫酸镁干燥，减压浓缩，得到不需纯化即可使用的标题化合物。
在0℃于氩气气氛下向(S)-1-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(270mg，0.62mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)中缓慢加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(165μL，0.93mmol)。1小时后，减压浓缩反应混合物得到为黄色油状物的(S/R)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯的三氟甲磺酸盐，其不需纯化即可使用。在23℃下按顺序向68f(189mg，0.49mmol)的乙腈溶液(7mL)中加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(278mg，0.73mmol)、N,N-二异丙基乙胺(730μL，4.2mmol)和(S/R)-1-((S)-2-氨基-丙酰基)-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(435mg，0.62mmol)的乙腈溶液(3mL)。16小时后，减压浓缩所获混合物，通过硅胶色谱法(40g SiO2Isco Rf Gold色谱柱，0–100％乙酸乙酯/异己烷梯度)直接纯化残留物，得到为无色残留物的标题化合物(43mg，13％)，它是无法分离的非对映体混合物。
在23℃下向68g和68h(43mg，61μmol)的四氢呋喃(4mL)和水(2mL)溶液混合物中加入氢氧化锂水合物(3.2mg，0.13mmol)。1小时后，减压浓缩反应混合物，通过加入甲苯(5mL)共沸随后减压浓缩(2×)去除残余溶剂，得到为混合物的标题化合物。不需进一步纯化即可将其用于接下来的大环内酯化反应。LCMS(m/z)572.2[M+H]，Tr＝2.21min。
在23℃下向68i和68j(34.8mg，61μmol)的二氯甲烷混悬液(20mL)中加入苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸酯(127mg，0.24mmol)和4-二甲基氨基吡啶(224mg，1.83mmol)。24小时后，减压去除溶剂，通过制备HPLC(Gemini 5u C18色谱柱，5–100％乙腈/水，0.1％三氟乙酸改性剂)纯化残留物，得到为非对映体比例混合物的两个化合物(12mg，35％)。使用手性制备HPLC分离非对映体，得到首先洗脱(Tr＝3.73min)的化合物68(2.17mg，6％)和其次洗脱的(Tr＝5.713min)化合物69(1.85mg，5％)。化合物68：1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.89(S，1H)，7.94(d，J＝8.6Hz，1H)，7.86(S，1H)，7.37(dd，J＝8.6，1.5Hz，1H)，7.28(d，J＝9.2Hz，1H)，6.93(S，1H)，6.09(q，J＝6.5Hz，1H)，5.54(q，J＝7.2Hz，1H)，4.36–4.26(m，3H)，4.21(d，J＝9.7Hz，1H)，3.69(dd，J＝11.2，2.6Hz，1H)，2.77(td，J＝12.9，3.0Hz，1H)，2.00–1.84(m，2H)，1.83–1.77(m，1H)，1.76–1.62(m，2H)，1.67(d，J＝6.7Hz，3H)，1.47(d，J＝7.3Hz，3H)，1.38(S，3H)，1.27(S，3H)，0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H)。HPLC Tr＝5.866min。LCMS(m/z)554.2[M+H]，Tr＝2.44min。
化合物69：1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.78(S，1H)，7.83(d，J＝8.6Hz，1H)，7.74(S，1H)，7.24(dd，J＝8.6，1.6Hz，1H)，7.03(S，1H)，5.93(q，J＝6.7Hz，1H)，5.35(q，J＝6.8Hz，1H)，4.31(d，J＝9.8Hz，1H)，4.18(d，J＝13.3Hz，1H)，4.02–3.97(m，2H)，(d，J＝10.0Hz，1H)，3.65(dd，J＝10.8，2.8Hz，1H)，2.71(td，J＝12.7，2.8Hz，1H)，1.98–1.89(m，1H)，1.87–1.77(m，2H)，1.73–1.64(m，1H)，1.57(d，J＝6.7Hz，3H)，1.49(d，J＝7.0Hz，3H)，1.40(S，3H)，1.13(S，3H)，0.89(d，J＝6.7Hz，3H)，0.85(d，J＝6.5Hz，3H)HPLC Tr＝5.951min。LCMS(m/z)555.2[M+H]，Tr＝2.49min。
实施例70
在-78℃于氮气气氛下向2,7-二溴萘(1g，3.50mmol)的无水四氢呋喃溶液(18mL)中滴加正丁基锂溶液(2.5M己烷溶液，1.5mL，3.67mmol)。在-78℃下将反应物搅拌20分钟，随后加入N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(409μL，3.85mmol)。15分钟后，将反应物加热至室温并搅拌30分钟。用2M盐酸淬灭反应，用二氯甲烷萃取两次。使用疏水性玻璃料干燥合并的有机层，真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(异己烷/乙酸乙酯，7/1)纯化产物，得到为无色固体的标题化合物(650mg，75％)。
在室温下向二氯(对异丙基甲苯)钌(II)二聚体(8mg，0.013mmol)的水溶液(5mL)中加入(1R，2R)-(-)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺(11.5mg，0.031mmol)。将体系脱气15分钟，然后加热至70℃，持续1.5小时。冷却反应物，加入70a(650mg，2.61mmol)的脱气无水四氢呋喃溶液(2mL)，随后加入甲酸钠(874mg，13.1mmol)。将反应物在40℃下加热3小时，冷却至室温，用二氯甲烷萃取两次。使用疏水性玻璃料干燥合并的有机层，真空浓缩。通过硅胶色谱法(异己烷/乙酸乙酯，4/1)纯化产物，得到为无色固体的标题化合物(450mg，69％)。
在微波管中将70b(42mg，0.17mmol)溶于乙腈(2mL)，向该混合物中加入3-丁烯酸(35mg，0.41mmol)、乙酸钯(II)(4mg，0.017mmol)、三(邻甲苯基)膦(10mg，0.034mmol)和三乙胺(0.12mL)。在微波反应器中于120℃下加热该小管15分钟。随后过滤反应混合物，蒸干溶剂，通过组合式快速(combi-flash)柱色谱(洗脱液甲醇/二氯甲烷1:3)进行纯化，得到为黄色固体的标题化合物(35mg，81％)。
将70c(40mg，0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向该溶液加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(36mg，0.1mmol)，在室温下搅拌反应混合物10分钟。随后向上述反应混合物中加入(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯(0.18mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)，随后加入三乙胺(32mg，0.32mmol)。反应混合物在室温下搅拌1小时，用乙酸乙酯(20mL)稀释，并用盐水冲洗。用乙酸乙酯反萃取水层，蒸干合并的有机溶剂，通过组合式快速柱色谱(洗脱液甲醇/二氯甲烷1:10)进行纯化，得到为黄色固体的标题化合物(68mg，65％)。
将70d(55mg，0.08mmol)溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)的混合物中。向此溶液中加入氢氧化锂水合物(4mg，0.16mmol)。反应混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中加入二氯甲烷(10mL)和水(10mL)。在水层中加入1N盐酸，直至pH达到2，用二氯甲烷(2x10mL)萃取酸性水层。然后蒸干有机溶剂，得到为白色固体的标题化合物(37mg，84％)。
将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(19mg，0.056mmol)和4-二甲基氨基吡啶(23mg，0.185mmol)溶于1,2-二氯乙烷(18mL)中，在50℃下加热此溶液。通过注射泵以10小时时间向上述溶液中加入70e(20mg，0.037mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)。加完后在50℃下搅拌反应混合物2小时。蒸干溶剂，通过反相制备HPLC(0-100％乙腈/水)纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(4mg，22％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.79-7.72(m，3H)，7.52(dd，J＝1.6，8.8Hz，1H)，7.41(S，1H)，7.33(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H)，6.48(d，J＝16.4Hz，1H)，6.31-6.24(m，1H)，6.02(q，J＝7.6Hz，1H)，4.64(d，J＝12.4Hz，1H)，4.40(d，J＝12.8Hz，1H)，4.30(d，J＝10.4Hz，1H)，3.78-3.72(m，1H)，3.36-3.32(m，2H)，2.99-2.93(m，1H)，2.77-2.71(m，1H)，1.99-1.69(m，5H)，1.66(d，J＝6.8Hz，3H)，1.58(d，J＝7.2Hz，3H)，0.99(d，J＝6.8Hz，6H)。LCMS(m/z)521.1[M-H]，Tr＝3.18min。
实施例71
在氩气下将化合物70(5mg，0.01mmol)溶于乙醇(5mL)，向此溶液中加入Pd(10％钯碳，3mg)。吹扫此反应瓶，然后用气球充入H2。使用硅藻土(Celite)过滤反应物，2小时后，减压蒸干滤液，通过反相制备HPLC(0-100％乙腈/水)进行纯化，得到为白色粉末的标题化合物(3.2mg，64％)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.47(d，J＝6.0Hz，1H)，7.97(d，J＝8.8Hz，1H)，7.69-7.62(m，3H)，7.31(S，1H)，7.24-7.19(m，2H)，5.97(dd，J＝12.8，6.0Hz，1H)，5.62(五重峰，J＝7.2Hz，1H)，4.76-4.16(m，1H)，4.10(app t，J＝12.8Hz，1H)，4.05-3.69(m，1H)，2.85(br s，1H)，2.73-2.41(m，2H)，2.40-2.37(m，1H)，2.10-1.93(m，1H)，1.92-1.70(m，6H)，1.53(d，J＝6.8Hz，3H)，1.49(d，J＝7.6Hz，3H)，0.99(d，J＝6.8Hz，6H)。LCMS(m/z)523.140[M+H]，Tr＝3.16min。
实施例72
在烘箱干燥、氩气吹扫的烧瓶中加入化合物49(10mg，0.017mmol)、碘化铜(I)(1mg，0.005mmol)和2-丙炔-1-醇(4mg，0.07mmol)。密封该烧瓶，用氩气重新吹扫三次。加入无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，用氩气重新吹扫反应混合物三次。反应混合物在室温下搅拌12小时。减压蒸干溶剂后，将残留物粗品溶于乙酸乙酯(10mL)，用助滤剂过滤，用乙酸乙酯(10mL)冲洗滤板。减压浓缩后，通过硅胶色谱法(梯度为0-40％乙酸乙酯和甲醇(4/1)的异己烷溶液)纯化残留物，得到蒸发后为白色固体的标题化合物(10mg，93％)。Rf＝0.33，10％甲醇二氯甲烷溶液。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.05(S，1H)，7.95(d，J＝8.6Hz，1H)，7.94(S，1H)，7.82(S，1H)，7.50(S，1H)，7.46(d，J＝8.6Hz，1H)，6.49(d，J＝16.0Hz，1H)，6.40(d，J＝16.0Hz，1H)，5.95(m，1H)，5.50(m，1H)，4.59–4.53(m，3H)，4.36(m，2H)，4.30(m，1H)，3.68(m，1H)，2.80(m，1H)，2.60(m，1H)，2.23(m，1H)，2.14(m，1H)，1.90–1.58(m，4H)，1.57(d，J＝6.6Hz，3H)，1.55(d，J＝7.6Hz，3H)，1.41(S，3H)，1.27(S，3H)。LCMS(m/z)633.4[M+H]，Tr＝2.66min。
实施例73
在室温于氮气气氛下向3-硝基亚甲基-氧杂环丁烷(Angew.Chem.Int.Ed.2006，45(46)，7736，2.5g，21.7mmol)的无水四氢呋喃溶液(40mL)中加入碘化铜(I)(413mg，2.17mmol)和三甲基氯硅烷(3.0mL，23.9mmol)。将所获黄色溶液搅拌5分钟，并使用甲醇冰浴冷却至-15℃和-11℃之间。通过注射泵以3小时时间缓慢加入乙烯基溴化镁(43.5mL，43.5mmol，1.0M四氢呋喃溶液)。加完后，用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，过滤并用乙醚(3x)萃取。使用疏水性玻璃料干燥合并的有机相，真空浓缩。使用乙醚通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色油状物的标题化合物(2.0g，64％)。
向73a(600mg，4.2mmol)的无水二甲亚砜溶液(13mL)中加入乙酸(2.4mL，42mmol)和亚硝酸钠(869mg，12.6mmol)，将该混合物加热至35℃，持续16小时。将反应物冷却至室温，用水稀释。用10％盐酸水溶液将pH调整为pH 3-4，用乙醚(3x)和乙醚/乙酸乙酯(1:1)萃取该产物。使用疏水性玻璃料干燥合并的有机相，真空浓缩。使用异己烷/乙酸乙酯(2/1，随后是1/1)，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到不纯的酸。将其溶于乙醚并用饱和碳酸钠溶液萃取。用浓盐酸将水相酸化至pH 2，用乙酸乙酯(3x)萃取。使用疏水性玻璃料干燥有机相，真空浓缩，得到为黄色油状物的标题化合物(228mg，43％)。
向73b(150mg，1.18mmol)的无水二氧六环溶液(1mL)中加入(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙酸乙酯(347mg，1.18mmol)，随后加入二己基甲胺(0.76mL，3.54mmol)、乙酸钯(II)(53mg，0.24mmol)和三(邻甲苯基)膦(72mg，0.24mmol)。在100℃下加热混合物1小时。再次加入乙酸钯(II)(26mg，0.12mmol)和三(邻甲苯基)膦(36mg，0.12mmol)，在100℃继续加热45分钟。将反应物冷却至室温，加入2M HCl直至达到pH 3-4。用乙酸乙酯(3x)和乙酸乙酯/10％甲醇(2x)萃取该产物。用疏水性玻璃料干燥合并的有机相，真空浓缩，得到为褐色油状物的标题化合物。
在0℃下搅拌1e(3.01g，5.66mmol)的四氢呋喃:甲醇溶液(1:1，60mL)。加入四正丁基氟化铵(1M四氢呋喃溶液，11.3mL，11.3mmol)，反应混合物在室温下搅拌22小时。蒸干溶剂，使用异己烷至异己烷/乙酸乙酯1:1，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为白色泡沫的标题化合物(2.14g，91％)。
在0℃于氮气气氛下向73d(365mg，0.88mmol)的无水二氯甲烷溶液(15mL)中加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(239μL，1.32mmol)。反应混合物在0℃下搅拌1小时，随后加入N,N-二异丙基乙胺(613μL，3.52mmol)，然后真空浓缩，与甲苯共蒸发，得到为白色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯。在0℃于氮气气氛下向73c(300mg，0.88mmol)的无水乙腈溶液(9mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(766μL，4.4mmol)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(401mg，1.06mmol)。在0℃下搅拌该溶液3分钟，随后加入(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸2,2,2-三氯乙酯的无水乙腈溶液(2mL)。将反应物加热至室温，搅拌2小时。用1M HCl淬灭反应，用乙酸乙酯(3x)萃取。使用疏水性玻璃料干燥合并的有机层，真空浓缩。使用乙酸乙酯通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为粘稠黄色油状物的标题化合物(160mg，22％，2步)。
在0℃下向73e(160mg，0.25mmol)的四氢呋喃(10mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(53mg，1.25mmol)。将反应物在0℃下搅拌2小时，加入2M盐酸水溶液(0.63mL)进行淬灭。真空浓缩该反应物，随后与甲苯/甲醇(3x)和甲苯(3x)共蒸发，并在高真空下干燥15分钟。将所获残留物溶于无水四氢呋喃(83mL)并在室温下加入N,N-二异丙基乙胺(223μL，1.25mmol)、2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(114mg，1.3mmol)和4-二甲基氨基吡啶(3mg，0.03mmol)。将反应物搅拌24小时，用乙酸乙酯稀释，用1M HCl(1x)和盐水(1x)冲洗。使用疏水性玻璃料干燥有机层，真空浓缩。使用乙酸乙酯/甲醇1:0随后是20/1，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到粘稠的黄色油状物(52mg)。通过制备薄层色谱(乙酸乙酯)对其进行进一步纯化，用乙醚研磨，过滤并真空干燥，得到为白色固体的标题化合物(22mg，16％，2步)。1H NMR(300MHz，CDCl3)0.96(d，J＝6.5Hz，3H)，1.00(d，J＝6.5Hz，3H)，1.50(d，J＝7.1Hz，3H)，1.69(d，J＝6.9Hz，3H)，1.81–2.16(m，4H)，2.63–2.74(m，1H)，3.26–3.38(m 1H)，3.70–3.83(m，1H)，3.98(d，J＝12.3Hz，1H)，4.28(t，J＝9.8Hz，1H)，4.33–4.43(m，1H)，4.57(d，J＝5.8Hz，1H)，4.86(q，J＝6.7Hz，2H)，5.13(d，J＝5.8Hz，1H)，5.73(t，J＝6.9Hz，1H)，5.96(q，J＝6.7Hz，1H)，6.24(d，J＝16.3Hz，1H)，6.61–6.73(m，1H)，7.00(d，J＝16.3Hz，1H)，7.09–7.20(m，1H)，7.40(d，J＝8.5Hz，1H)，7.58(S，1H)，7.81–7.93(m，2H)，8.22(d，J＝8.7Hz，1H)。LCMS(m/z)＝564.2[M+H]，Tr＝1.96min。
实施例74
将化合物57(20mg，0.036mmol溶于甲醇(5mL)，加入催化量的10％钯碳。在氢气气氛下搅拌反应混合物2小时。过滤除去催化剂，减压浓缩洗脱液。通过反相制备HPLC进行纯化，得到为白色粉末的标题化合物(8.4mg，42％收率)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ9.61(S，1H)，8.42(d，J＝9.0Hz，1H)，7.99(S，1H)，7.89(d，J＝9.0Hz，1H)，7.83(br s，1H)，7.29(d，J＝8.7Hz，1H)，6.27-6.21(m，1H)，5.92-5.82(m，1H)，3.96-3.5(m，4H)，3.28-3.19(m，1H)，3.08-2.98(m，1H)，2.30-2.20(m，1H)，2.10-1.90(m，4H)，1.78-1.72(m，5H)，1.56-1.51(m，6H)，1.21(S，3H)，0.89(d，J＝7.2Hz，6H)。LCMS(m/z)：552.3[M+H]，Tr＝1.74min。
实施例75
在室温下搅拌乙酰乙酸乙酯(20g，19.4mL，0.154mol)的二氧六环(120mL)和甲醛水溶液(37％水溶液，57.7mL，0.77mol)混合物。加入三乙胺(1.0M四氢呋喃溶液，7.7mL，7.7mmol)，该反应混合物在60℃下加热20小时，然后在100℃下加热4小时。将反应混合物冷却至室温，并倒入水(1500mL)中。用甲苯冲洗水溶液。将水层浓缩至大约50％初始体积，用乙酸乙酯萃取。合并有机提取物并蒸干。使用异己烷至异己烷/乙酸乙酯1:1的梯度，随后使用异己烷至异己烷/乙酸乙酯3:2的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色油状物的标题化合物(2.33g，8％)。
将75a(2.10g，11mmol)、2,2-二甲氧基丙烷(13.5mL，110mmol)和4-甲苯磺酸水合物(209mg，1.1mmol)的丙酮溶液(8mL)在室温下搅拌18小时。加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取混合物。合并有机提取物，用水和盐水冲洗。用疏水性玻璃料过滤有机层，蒸干滤液。使用异己烷/乙酸乙酯1:5至3:7的梯度，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(1.88g，74％)。
在-78℃于氮气下搅拌N,N-二异丙基乙胺(0.55mL，3.9mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)。滴加正丁基锂(1.6M in hexane，2.25mL，3.6mmol)，将反应混合物加热至0℃。在0℃下搅拌反应混合物5分钟，然后将其冷却至-78℃。滴加75b(690mg，3.0mmol)的四氢呋喃溶液(3mL)，在-78℃下搅拌反应混合物15分钟。以5分钟时间滴加N-苯基-(三氟甲磺酰胺)(1.18g，3.3mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)，在-78℃下搅拌反应混合物15分钟。去除冷浴，将反应混合物加热至室温，并在室温下搅拌90分钟。蒸干溶剂，加入乙醚(30mL)。将该溶液冷却至5℃，用1M氢氧化钠冷溶液(3x30mL)冲洗。分离有机层，用盐水冲洗，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干溶剂，得到为黄色油状物的标题化合物(960mg，88％)，其可直接用于下一步反应。
在室温于氮气下搅拌75c(470mg，1.3mmol)和三正丁胺(721mg，0.93mL，3.9mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(3mL)。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(45mg，0.065mmol)和甲酸(120mg，0.1mL，2.6mmol)，在60℃下加热反应混合物90分钟。将反应混合物冷却至室温，加热乙酸乙酯和水。分离有机提取物，用水(x5)和盐水冲洗。使用疏水性玻璃料过滤有机溶液，蒸干滤液。使用异己烷/乙酸乙酯1:9通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为无色油状物的标题化合物(1.88g，74％)。
在5℃于氮气下搅拌75d(150mg，0.7mmol)的四氢呋喃溶液(3mL)。加入氢氧化锂一水合物(59mg，1.4mmol)的水溶液(1mL)，在5℃下搅拌反应混合物30分钟，然后在室温下搅拌5小时。加入甲醇(0.5mL)以得到透明溶液，将反应混合物在室温下搅拌22小时。蒸干溶剂。在残留物中加入水(2mL)，用2M盐酸将该溶液酸化至pH 2。加入盐水，用乙酸乙酯萃取混合物。合并有机提取物，用盐水冲洗。分离有机提取物，用水(x5)和盐水冲洗。使用疏水性玻璃料过滤有机溶液，蒸干滤液，得到为无色油状物的标题化合物(117mg，90％)。
在室温下搅拌75e(96mg，0.5mmol)和(R)-1-(7-溴-喹啉-2-基)-乙酸乙酯(147mg，0.5mmol)的乙腈溶液(4mL)混合物。加入三(邻甲苯基)膦(46mg，0.15mmol)、乙酸钯(II)(17mg，0.075mmol)和三乙胺(101mg，0.14mL，1.0mmol)，在微波反应器中于100℃加热反应混合物20分钟。蒸干溶剂。加入水和乙酸乙酯，用2M盐酸将该混合物酸化至pH 3-4。用乙酸乙酯萃取混合物，合并有机提取物，用盐水冲洗。使用疏水性玻璃料过滤有机溶液，蒸干滤液。使用异己烷/乙酸乙酯1:1至乙酸乙酯至乙酸乙酯/甲醇5:1，通过硅胶色谱法纯化残留物。将残留物与乙酸乙酯随后是二氯甲烷共蒸发，干燥，得到为黄色胶状物的标题化合物(134mg，67％)。
在0℃于氮气下搅拌(S)-1-[(S)-2-((S)-2-叔丁氧基碳基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸甲酯(150mg，0.36mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)。加入三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(160mg，0.13mL，0.72mmol)，在0℃下搅拌反应混合物1小时。加入N,N-二异丙基乙胺(186mg，0.25mL，1.44mmol)，蒸干溶剂，得到为白色固体的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸甲酯(0.36mmol)，无需进一步纯化即可使用。在0℃于氮气下搅拌75f(134mg，0.33mmol)的乙腈溶液。加入(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基]-六氢哒嗪-3-羧酸甲酯(0.36mmol)和N,N-二异丙基乙胺(129mg，0.17mL，1.0mmol)的乙腈溶液(5mL)，随后加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(175mg，0.46mmol)，在0℃下搅拌反应混合物10分钟，随后在室温下搅拌1小时。蒸干溶剂，将残留物在乙酸乙酯和水之间分配。合并有机提取物，用盐水冲洗。使用疏水性玻璃料过滤有机溶液，蒸干滤液。使用异己烷/乙酸乙酯1:5至乙酸乙酯，通过硅胶色谱法纯化残留物，得到为黄色固体的标题化合物(165mg，72％)。
在5℃于氮气下搅拌75g(35mg，0.05mmol)的四氢呋喃溶液(0.5mL)。加入氢氧化锂一水合物(8.4mg，0.2mmol)的水溶液(0.5mL)，随后加入甲醇(0.5mL)，在5℃下搅拌反应混合物1小时。加入1M盐酸(0.2mL)，蒸干溶剂。将残留物与甲醇/甲苯(1:1，x2)共蒸发，随后与甲苯(x2)共蒸发。用乙醚(x3)研磨残留物并干燥，得到为淡黄色固体的标题化合物(0.05mmol)，将其粗品用于下一步反应。
在室温于氮气下搅拌2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(86mg，0.25mmol)和4-二甲基氨基吡啶(46mg，0.38mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(16mL)。加入分子筛(400mg)，在50℃下加热该混悬液。以4小时时间滴加75h粗品(0.05mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液，在50℃下继续搅拌反应混合物1小时。将反应混合物冷却至室温，使用硅藻土(celite)过滤该混合物。用乙酸乙酯冲洗滤板，蒸干滤液。用乙酸乙酯稀释残留物，用盐水(x 3)冲洗该溶液。分离有机层并蒸干。使用疏水性玻璃料过滤有机溶液，蒸干滤液。通过制备HPLC纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(4.2mg，13％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)1.00(d，J＝6.7Hz，3H)，1.01(d，J＝6.6Hz，3H)，1.37(S，3H)，1.47(S，3H)，1.63(d，J＝7.1Hz，3H)，1.64-1.70(m，2H)，1.73(d，J＝6.9Hz，3H)，1.85-2.10(m，3H)，2.70-2.80(m，1H)，3.78-3.87(m，1H)，3.87(d，J＝11.1Hz，1H)，4.03-4.07(m，1H)，4.26-4.46(m，5H)，5.72(q，J＝7.1Hz，1H)，5.93(q，J＝6.8Hz，1H)，6.38(S，2H)，7.42(d，J＝8.5Hz，1H)，7.61(brs，1H)，7.78-7.86(m，2H)，8.22(d，J＝8.5Hz，1H)。LCMS(m/z)622.2[M+H]，Tr＝2.24min。
实施例76
在室温于氮气下搅拌75h粗品(200mg，0.25mmol)的四氢呋喃混悬液(100mL)。加入N,N-二异丙基乙胺(161mg，0.22mL，1.25mmol)和4-二甲基氨基吡啶(15mg，0.125mmol)，搅拌该混悬液5分钟。加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(133mg，0.35mmol)，在室温下搅拌反应混合物2小时。再次加入2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯甲亚铵(57mg，0.15mmol)，在室温下搅拌反应混合物1小时。蒸干溶剂，用乙酸乙酯和2M盐酸稀释残留物。分离有机溶液，用水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水冲洗。使用疏水性玻璃料过滤有机溶液，蒸干滤液。使用异己烷/乙酸乙酯7:3至乙酸乙酯至乙酸乙酯/甲醇9:1，通过硅胶色谱法纯化残留物。通过制备HPLC纯化残留物，得到为白色固体的标题化合物(20mg，14％)。1H NMR(500MHz，CD3OD)1.00(d，J＝6.5Hz，3H)，1.01(d，J＝6.5Hz，3H)，1.68(d，J＝7.1Hz，3H)，1.73(d，J＝6.7Hz，3H)，1.74-2.05(m，5H)，2.72-2.80(m，1H)，3.70(d，J＝11.1Hz，1H)，3.81-4.07(m，4H)，4.35-4.47(m，3H)，5.77(q，J＝7.1Hz，1H)，5.92(q，J＝6.8Hz，1H)，6.43(S，2H)，7.40(d，J＝8.5Hz，1H)，7.63(S，1H)，7.82(S，2H)，8.21(d，J＝8.5Hz，1H)。LCMS(m/z)582.2[M+H]，Tr＝1.66min。
生物实施例：肽基脯氨酰异构酶(PPIase)活性的抑制
根据Janowski等人报道的方法(Anal.Biochem.1997，252，299)进行PPIase检测。在装有顶部搅拌器的石英杯中将检测缓冲液(1980L溶液，含有35mM HEPES pH 7.8、50MDTT和0.01％NP40)预平衡至10℃。在此溶液中加入10L化合物的DMSO溶液(终浓度：0.5％DMSO)，随后加入5L的2M亲环蛋白A储备液(终浓度：5nM)。加入5L溶解于0.5M LiCl三氟乙醇溶液的40mM四肽Succ-AAPF-pNA(100M终浓度)开始反应。反应开始时，使用BeckmanCoulter DU800分光光度计在330nm下监测5分钟肽底物的吸光度。使用单指数衰减模型拟合发展曲线以计算速率。使用GraphPad Prism软件按照四参数对数拟合计算IC50值。
亲环蛋白A的TR-FRET竞争性结合检测分析
使用竞争性结合检测分析与时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)读数测量抑制剂的效力。在由35mM HEPES pH 7.8、100mM NaCl、0.01％NP-40(Pierce)、1mM DTT和1％DMSO组成的组的反应缓冲液中加入以下物质：5nM亲环蛋白A，其N端修饰带有8×组氨酸亲和标签(CypA)；150nM环孢菌素A，其上带有连接Cy5荧光基团的连接臂(CsA-Cy5)；1nM Eu标记的抗(6×His)抗体(Perkin-Elmer)；以及各种浓度之一的测试化合物。检测溶液的总体积是100L。孵育两小时后，使用Perkin Elmer Envision酶标仪检测TR-FRET(340nm激发，590nm和665nm发射)。信号计算为665nm发射与590nm发射的比值。使用四参数对数拟合计算IC50值。
在检测时，发现本发明的某些化合物可抑制亲环蛋白的结合，如下表1所示。以范围显示IC50，其中A为≤100nM，B为101至1000nM，C为1001至10,000nM。
抗病毒活性
可使用标准筛选方案来检测化合物的抗病毒活性：例如，在美国专利公开号US/20130022573中描述的基于细胞的黄病毒属免疫检测分析以及基于细胞的黄病毒属细胞病变效应检测，在此通过引用将其全部并入本文中。
本发明一方面涉及抑制病毒感染的方法，包括使用本发明的组合物治疗疑似需要这种抑制的样本或受试者的步骤。本发明化合物的抗病毒活性可使用已知的标准筛选方案进行测量。
本发明化合物的抗HCV活性在含有HCV复制子的人肝癌细胞Huh-7细胞系中进行检测。该检测方法包含以下步骤：
第1步(化合物制备和系列稀释)：在384孔板中以100％DMSO进行系列稀释。用100％DMSO制备含有浓度为开始时最终系列稀释浓度225倍的化合物的溶液，在聚丙烯384孔板第3列或第13列的预定孔中加入15μL。在384孔板的其他孔中加入10μL 100％DMSO，但第23列和第24列例外，在其中加入10μL的500μM HCV蛋白酶抑制剂(ITMN-191)的100％DMSO溶液。使用HCV蛋白酶抑制剂作为HCV复制100％抑制的对照。然后将平板放入Biomek FX工作站以开始系列稀释。自第3列至第12列或是自第13列至第22列进行十轮3倍稀释。
第2步(细胞培养板制备和化合物加入)：使用Biotek uFlow工作站在黑色聚丙烯384孔板的每个孔中加入90μL细胞培养液，其中含有1600个混悬的Huh-7HCV复制子细胞。使用Biomek FX工作站将0.4μL化合物溶液自系列稀释板转移至细胞培养板。最终检测条件下的DMSO浓度是0.44％。这些平板在37℃以及5％CO2和85％湿度下孵育3天。
第3步(细胞毒性检测和病毒复制抑制)：a)细胞毒性评价：使用Biotek EL405洗板机吸取384孔细胞培养板中的培养基。使用Biotek uFlow工作站在平板的各孔中加入50μL溶液，其中含有400mM钙黄绿素AM的100％PBS溶液。在室温下孵育平板30分钟，随后使用Perkin Elmer Envision酶标仪检测荧光信号(发射490nm，激发520nm)。
b)病毒复制抑制的评价：用Biotek EL405洗板机吸取384孔细胞培养板中的钙黄绿素-PBS溶液。使用Biotek uFlow工作站在平板的各孔中加入20μL Dual-Glo荧光素酶缓冲液(Promega，Dual-Glo荧光素酶检测试剂，产品目录号#E298B)。在室温下孵育平板10分钟。然后使用Biotek uFlow工作站在平板的各孔中加入20μL溶液，其中含有Dual-Glo终止液和Glo底物(Promega，Dual-Glo荧光素酶检测试剂，产品目录号#E313B)以及Dual-Glo终止液和Glo缓冲液(Promega，Dual-Glo荧光素酶检测试剂，产品目录号#E314B)的1:100混合物。在室温下孵育平板10分钟，随后使用Perkin Elmer Envision酶标仪检测化学发光信号。
第4步(计算)：通过钙黄绿素AM转化的荧光产物测定细胞毒性百分比。将DMSO对照孔的平均荧光信号规定为100％无毒。用测试化合物处理孔的荧光信号除以DMSO对照孔的平均荧光信号，然后乘以100％以得到存活百分比。通过比较测试孔与DMSO对照孔的化学发光信号来测定抗HCV复制活性的百分比。根据HCV蛋白酶抑制剂处理孔确定背景信号，用测试孔以及DMSO对照孔的信号减去此背景值。3倍系列稀释后，通过将每个浓度的％抑制拟合为以下方程来计算EC50和CC50值：
％抑制＝100％/[(EC50/[I])b+1]
其中b是Hill系数。参见Hill，A.V.，The Possible Effects of the Aggregationof the Molecules of Hamoglobin on its Dissociation Curves，J.Physiol.40：iv-vii.(1910)，仅供参考。可根据上式导出某个具体浓度例如2μM的％抑制值。
在检测时，发现本发明某些化合物可抑制病毒复制，如表1所示。EC50显示为％抑制。
表1
观察到的具体药理和生化反应可根据并依赖于所选特定活性化合物或是其中是否存在药学载体以及制剂类型和所用给药方式而不同，结果中的这些预计差异和不同符合本发明实践的预期。
尽管本文解释并描述了本发明的具体实施方案，但本发明并不限制此。以上提供的详细描述是本发明的示例，不应认为它们对本发明具有任何限制。

Claims (26)

1.一种式I化合物，或其药学上可接受的盐：
其中：
A1是(C2-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、-O-(C2-C4)亚烷基、-O-(C2-C4)亚烯基、亚苯基、亚吡唑基或亚吡啶基，其中A1的sp3碳原子被一个或多个(C1-C4)烷基可选取代；
A2是亚苯基或亚异喹啉基，其中A2被卤素可选取代；
X1是-O-、-NH-或-N((C1-C4)烷基)-；
R1a和R1b中的一个是H而另一个是甲基；
R2是(C1-C4)烷基；
R3a和R3b中的一个是H而另一个是H或(C1-C4)烷基；
R4a和R4b中的一个是H而另一个是H、-OH、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基；
R5是H或(C1-C4)烷基，或
R5与A2的亚苯基形成或R5与X1的-N((C1-C4)烷基)-形成和
R6是H或(C1-C4)烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中A1是亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、氧亚丙基、氧亚丙烯基、亚吡唑基、亚苯基或亚吡啶基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中A2是亚异喹啉基、亚苯基或亚卤代苯基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中X1是-O-或-NH-；R2是异丙基；R5是甲基和R6是H或甲基。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R3a是甲基；R3b是H；R4a是-OH、甲氧基、三氟乙氧基；和R4b是H。
6.根据权利要求1所述的化合物，其是式II化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
A1是亚乙烯基、
A2是
X1是-O-或-NH-；
R3a是H或(C1-C4)烷基；
R4a是H、-OH、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基；和
R5是H或(C1-C4)烷基。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中A2是亚异喹啉基；A1是(C2-C5)亚烷基或(C2-C5)亚烯基；R3a是H或(C1-C4)烷基；和R4a是H、-OH或(C1-C4)烷氧基。
8.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是
或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中A2是亚苯基；A1是(C2-C5)亚烷基、(C2-C5)亚烯基、-O-(C2-C4)亚烷基或-O-(C2-C4)亚烯基；R3a是H或(C1-C4)烷基；和R4a是H、-OH、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基。
10.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是
或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中A2是亚苯基；和A1是亚吡唑基、亚苯基或亚吡啶基。
12.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是
或其药学上可接受的盐。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中A2是亚异喹啉基；和A1是-O-(C2-C4)亚烷基或-O-(C2-C4)亚烯基。
14.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是
或其药学上可接受的盐。
15.根据权利要求1所述的化合物，其中A1是(C2-C5)亚烷基或(C2-C5)亚烯基；R5是甲基，或R5与A2的亚苯基形成了或R5与X1的-N((C1-C4)烷基)-形成了和R6是H或甲基。
16.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是
或其药学上可接受的盐。
17.一种药学组合物，其包含治疗有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的辅料。
18.根据权利要求17所述的药学组合物，其还包含至少一种附加的治疗药物，所述附加的治疗药物选自由干扰素、利巴韦林、HCV NS3蛋白酶抑制剂、HCV NS5a抑制剂、HCV NS5B聚合酶的核苷或核苷酸抑制剂、HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂以及TLR-7激动剂组成的组；或其混合物。
19.根据权利要求18所述的药学组合物，其中所述的至少一种附加的治疗药物是利巴韦林、特拉匹韦、波普瑞韦或索非布韦。
20.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗黄病毒属病毒感染的药物中的用途。
21.根据权利要求20所述的用途，其中所述病毒感染是由丙型肝炎病毒引起的。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述病毒感染引起了疾病，所述疾病选自由登革热、黄热病、丙型肝炎、日本脑炎、科萨努尔森林病、墨累谷脑炎、圣刘易斯脑炎、蜱传脑炎、或西尼罗脑炎组成的组。
23.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗冠状病毒属病毒感染的药物中的用途。
24.根据权利要求23所述的用途，其中所述病毒感染是由SARS冠状病毒引起的。
25.根据权利要求24所述的用途，其中所述病毒感染引起了疾病，所述疾病选自由严重急性呼吸系统综合征(SARS)、癌症、炎症、肥胖、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)或肝硬化组成的组。
26.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备提供免疫调节的药物中的用途。
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