CN104593503B - 一种检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒，所述DNA选自人类21,18,13号染色体，针对21,18,13号染色体，分别设计有300对序列特异性引物，每对序列特异性引物包括正向引物，反向引物和中间引物，引物的基因序列编号为SEQ ID NO：1‑2700。本发明的有益效果为：采用本发明方法对胎儿三倍体进行检测，检测为不威胁胎儿健康的无创检测，诊断检测准确度高，费用低，流程和数据分析简便，PCR反应条件要求不苛刻，具有广泛的适用性，促进了三体综合征无创筛查的普及，有利于提高我国人口素质。

Description

一种检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用母体外周血中血浆游离DNA以检测胎儿三倍体的产品、方法及试剂盒，即利用PCR技术和测序技术，对来自母体外周血的游离DNA进行检测，从而判断胎儿是否为三倍体。
背景技术
胎儿染色体的非整倍性检测是重要的产前检查之一[1,2]。目前产前检查包括筛查和诊断。筛查包括分析血清标志物、胎儿超声检测（如胎儿颈项透明层厚度的超声测量），但敏感性和特异性还有待提高[1]。诊断检测包括有创的绒毛膜取样（chorionic villussampling，CVS）或羊膜穿刺术。目前的筛查方法的准确度还不是令人满意，因此还不能用于普查。诊断检测虽然准确度高，但由于是有创的，有导致健康胎儿流产的风险[3]。
在过去的几十年，研究人员们致力于开发一种母体血液检查技术来提高胎儿染色体非整倍性检测的准确性和安全性。最初是想从孕妇的循环血液中分离出胎儿细胞并对其进行分析，但结果不可靠，因为无法从母体血液中获取足够多的胎儿细胞[4-6]。最近由于提取母体外周血中游离DNA（cell-free DNA，cfDNA）技术的进步，对胎儿染色体数目异常进行检测的技术得到了明显提高。cfDNA中除了来自母体的DNA外，还有来自胎儿的DNA。因此通过分析来自胎儿的DNA可以判断胎儿的染色体状态。一些研究人员已经成功运用大规模平行DNA鸟枪测序法分析母血中游离DNA方法来判断胎儿是否有21-三体综合症、18-三体综合症和13-三体综合症[7-11]。
尽管大规模平行DNA鸟枪测序法的技术性能过硬，但是这项技术花费颇高且流程和数据分析很繁杂，因为运用大规模平行DNA鸟枪测序法分析所有染色体上的随机基因组片段时会产生大量不需要的测序数据。例如，在一项需要测定胎儿是否有21三体综合症的研究中读取每个样本平均会产生10,800,000个测序结果，但是平均只会用到32,000(0.3%)个21染色体的测序结果来确定胎儿染色体的非整倍性[7]。
最近报道了一种选定区域数字分析法(digital analysis of selectedregions，DANSR)，它将选择性分析游离DNA中特定的基因组片段[12]。通过选择性分析游离DNA，选定区域数字分析法能够更有效地判断胎儿染色体是否出现非整倍态。在报道的方法中，研究者采用了384对引物来扩增胎儿DNA。该法能准确判定胎儿是否有三体综合症。但由于引物数量大，导致费用高和对PCR反应的条件要求高。
综上所述，目前虽然有了选定区域数字分析法，但其费用较高，效率较低。开发费用更低的方法能促进三体综合症无创筛查的普及，对提高我国的人口素质有重大意义。
参考文献：
[1]ACOG Practice Bulletin No. 77. Screening for chromosomalaneuploidies. ObstetGynecol 2007; 109: 217-27.
[2]Nicolaides KH. Screening for fetal aneuploidies at 11 to 13 weeks.PrenatDiagn 2011; 31(1): 7-15.
[3]Caughey AB, Hopkins LM, Norton ME. Chorionic villus samplingcompared with amniocentesis and the difference in the rate of pregnancy loss.ObstetGynecol 2006; 108(3 Pt 1): 612-6.
[4]Bianchi DW, Simpson JL, Jackson LG, et al. Fetal gender andaneuploidy detection using fetal cells in maternal blood: analysis of NIFTY Idata. National Institute of Child Health and Development Fetal Cell IsolationStudy. PrenatDiagn 2002; 22(7): 609-15.
[5]Guetta E, Simchen MJ, Mammon-Daviko K, et al. Analysis of fetalblood cells in the maternal circulation: challenges, ongoing efforts, andpotential solutions. Stem Cells Dev 2004; 13(1): 93-9.
[6]Lo YM, Chiu RW. Prenatal diagnosis: progress through plasmanucleic acids. Nat Rev Genet 2007; 8: 71-7.
[7]Chiu RW, Chan KC, Gao Y, et al. Noninvasive prenatal diagnosis offetal chromosomal aneuploidy by massively parallel genomic sequencing of DNAin maternal plasma. ProcNatlAcadSci USA 2008; 105(51): 20458-63.
[8]Fan HC, Blumenfeld YJ, Chitkara U, et al. Noninvasive diagnosis offetal aneuploidy by shotgun sequencing DNA from [9] Ehrich M, Deciu C,Zwiefelhofer T, et al. Noninvasive detection of fetal trisomy 21 bysequencing of DNA in maternal blood: a study in a clinical setting. Am JObstetGynecol 2011; 204(3): 205.e1-205.e11.
[10]Sehnert AJ, Rhees B, Comstock D, et al. Optimal detection offetal chromosomal abnormalities by massively parallel DNA sequencing of cell-free fetal DNA from maternal blood. ClinChem 2011; 57(7): 1042-9.
[11]Chen EZ, Chiu RWK, Sun H, Akolekar R, et al. Noninvasive prenataldiagnosis of fetal trisomy 18 and trisomy 13 by maternal plasma DNAsequencing. PLoS One 2011; 6(7): e21791.
[12]Sparks AB, Wang ET, et al.Selective analysis of cell-free DNA inmaternal blood for evaluation of fetal trisomy. Prenatal Diagnosis, 2012, 32,1-7
[13]Tukey JW. Exploratory Data Analysis. Addison-Wesley: ReadingMassachusetts 1977.
[14]Irizarry RA, Bolstad BM, Collin F, Cope LM, Hobbs B, Speed TP.Summaries of AffymetrixGeneChip Probe Level Data. Nucleic Acids Res 2003; 31(4): e15.
[15]Conover WJ. Practical Nonparametric Statistics. John Wiley &Sons: New York 1971; 295-301.
[16]Royston P. An extension of Shapiro and Wilk's W test fornormality to large samples. ApplStatist 1982; 31: 115-24.
[17]Lun FM, Chiu RW, Allen Chan KC, et al. Microfluidics digital PCRreveals a higher than expected fraction of fetal DNA in maternal plasma.ClinChem 2008; 54(10): 1664-1672.
[18]Chiu RW, Akolekar R, Zheng YWL, et al. Non-invasive prenatalassessment of trisomy 21 by multiplexed maternal plasma DNA sequencing: largescale validity study. BMJ 2011; 342: c7401。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒，以克服目前现有技术存在的上述不足。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现：
一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，所述DNA选自人类21,18,13号染色体，针对所述21,18,13号染色体，分别设计有300对序列特异性引物，每对所述序列特异性引物包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-2700。
进一步的，与序列特异性引物相结合的序列为核心序列，所述核心序列在5′端，所述核心序列包括5-15个碱基的保护序列。
进一步的，所述序列特异性引物组中，在延伸引物5′端增加有作为接头的碱基序列。
进一步的，所述序列特异性引物的每个位点均是以游离DNA的上一段特异性序列为模板而得到的三段连续引物，所述三段引物连接后形成PCR模板。
进一步的，所述序列特异性引物在目标染色体上的序列唯一。
进一步的，所述序列特异性引物的退火温度相同。
进一步的，所述编号为SEQ ID NO：1-2700的序列特异性引物与编号为SEQ ID NO:2701-2702的通用引物序列互补性最低。
进一步的，所述编号为SEQ ID NO：1-2700的序列特异性引物与具有多态性和染色体拷贝数变异的序列不一致。
一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的方法，包括以下步骤：
（1）分离、提取母体外周血血浆中的外周血游离DNA，即cfDNA；
（2）针对人类21，18和13号染色体，分别设计300对序列特异性引物，每对所述引物包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-SEQID NO:2700；
（3）采用生物素对cfDNA末端进行标记，将标记后的cfDNA与磁珠结合，然后进行扩增，扩增产物构成文库，对扩增产物进行测序；和
（4）对正常孕妇的产检数据进行分析并建立正态分布，根据Y. M. Dennis Lo染色体异倍检测方法，对染色体拷贝数进行Z检验。
一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的试剂盒，包括：（1）PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括序列特异性引物、通用PCR引物、DNA聚合酶、DNA连接酶、末端转移酶、dNTPs和反应缓冲液；（2）PCR反应产物的纯化试剂，包括产物纯化磁珠及缓冲液；和（3）阴性质控品和阳性质控品，其中，每对所述序列特异性引物均包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-2700。
本发明提供的一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的试剂盒，包括（1）PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括特异性结合引物，通用PCR引物，DNA聚合酶，DNA连接酶，末端转移酶，dNTPs，反应缓冲液，所述DNA选自人类21,18,13号染色体，分别设计300对序列特异性引物，每对所述引物包括正向引物，反向引物和中间引物，所述引物的基因序列编号为SEQ ID NO：1-2700；（2）PCR反应产物的纯化试剂，包括产物纯化磁珠及缓冲液；（3）阴性质控品和阳性质控品。
本发明的有益效果为：采用本发明方法利用所述引物组对胎儿三倍体进行检测，其为无创检测法，不威胁胎儿健康，并且诊断检测准确度高，费用低，流程和数据分析简便，有效避免了产生大量不必要的测序数据并且PCR反应条件要求不苛刻，具有广泛的适用性，促进了三体综合征无创筛查的普及，对提高我国人口素质有重大意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是根据本发明实施例1所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的方法的Z值数据分析示意图。
图中：
黑色菱形表示阳性标本，灰色菱形表示阴性标本。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的实施例，提供了一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒。
实施例一：
（1）分离、提取cfDNA：
采集孕妇（孕期12-24周）静脉血10ml于真空采血管（EDTA抗凝）中，经1600g离心10分钟，16000g离心10 min，得到约4ml血浆，用游离DNA提取试剂盒分离血浆中游离DNA，得到15ng cfDNA。
（2）引物设计：
针对人类13、18、21号染色体，分别设计300对序列特异性引物。所述序列特异性引物具备如下特点：（1）所述引物的每个位点均是由外周血游离DNA（cfDNA）依赖的两段连续排列的特定位置oligo通过一段中间的寡核苷酸桥形成PCR模板；（2）所述引物在目标染色体上序列唯一；（3）位置特异的寡核苷酸具有相同的退火温度；（4）所述引物与编号为SEQID NO:2701-2702的通用引物序列互补性最低；（5）所述引物与具有多态性和染色体拷贝数变异的已知序列不一致。
（3）扩增、测序
采用生物素对cfDNA末端进行标记，50μL反应体系中含150 pM biotin-16-dUTP，12U TdT和1X TdT缓冲液，在37°C条件下孵育1h，加异丙醇沉淀后用10 mM Tris-HCl缓冲液（pH8.0），0.1 mM EDTA溶解cfDNA，将上述cfDNA与100 μg myOneC1TM磁珠(购自Dynal公司)混合，并加入以下缓冲液混合至体积为50μL，所述缓冲液包括60 mM Tris-HCl缓冲液（pH8.0），6 mM EDTA，300 mM NaCl2，35% 甲酰胺（formamide），0.1% 乳化剂T-80（Tween-80）及4 nM结合引物，所述混合液在70℃条件下反应10min，退火后，在25℃条件下继续反应2h以上，然后将反应管放到磁力架上磁吸，加入50μL洗液(10 mM Tris-HCl缓冲液，pH 8.0,1mMEDTA, 50mM NaCl2)洗涤，磁珠重悬于50μL反应液中，所述反应液包含1U Taq连接酶和1XTaq缓冲液，然后在37℃条件下孵育1h，磁珠用洗液洗涤2次后悬浮于30μL TE缓冲液中，连接产物于95℃洗脱3 min，再经PCR扩增23循环，所述PCR反应体系包括1U Pfusion多聚酶，1X Pfusion缓冲液，200μM dNTPs，200 nM上游通用引物，所述上游通用引物的序列为CCATCTCATCCCTGCGTGTC，200 nM下游通用引物，所述下游通用引物的序列为CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATG，采用AMPure XP (Beckman公司产品)磁珠对所述PCR产物进行纯化，纯化后的文库经Ion PGM™ Template OT2 200 Kit制备成乳液PCR样本，并在Ion Torrent PGMTM（life technology）上测序。
（4）数据分析
对正常孕妇的产检数据进行分析并建立正态分布，根据Y.M.Dennis Lo染色体异倍检测方法，对染色体拷贝数进行Z检验。
首先过滤低质量序列，去掉＜50bp的测序片段，将过滤后的数据比对到13、18、21染色体的选定区域，要求比对长度＞=50bp，最终约为50,0000条（97%）测序片段能够定位到三条染色体上共900个选定区域，然后计算三条染色体分别所占的比例，由于实验环境及过程均等，所以每个染色体比例均处于33.33%左右，统计结果如下：
表1 测序结果
表2 序列分析结果
其中，以21号染色体为例，对于样本i，计算21号染色体所占的比例Pi，应采用以下方法：首先建立阴性样本的Z值，采用完全相同的操作方法对正常胎儿的孕妇外周血样本染色体进行检测，并通过Z检验分析染色体异倍性与阴性数据集进行比较，标准分数公式：，其中P0为阴性数据集21号染色体比例的期望值，SD为阴性数据集21号染色体比例的标准差，通常Z值>3判定为三倍体。
（5）结果分析
在完成的99个样本的回顾性分析中，其中已知97个为阴性样本，2个为21三倍体阳性样本。使用上述方法进行检测，结果显示2个阳性样本均为Z＞3，而其他97个阴性样本均为Z＜2。结果如图1所示，证明上述方法的敏感性、特异性均达到100%。
本发明实施例所述的一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒，采用上述方法利用所述引物组对胎儿三倍体进行检测，所述检测为不威胁胎儿健康的无创检测，并且诊断检测准确度高，费用低，流程和数据分析简便，有效避免了产生大量不必要的测序数据并且PCR反应条件要求不苛刻，具有广泛的适用性，促进了三体综合征无创筛查的普及，对提高我国人口素质有重大意义。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述DNA选自人类21,18,13号染色体，针对所述21,18,13号染色体，分别设计有300对序列特异性引物，每对所述序列特异性引物包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-2700。
2.根据权利要求1所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，与序列特异性引物相结合的序列为核心序列，所述核心序列在5′端，所述核心序列包括5-15个碱基的保护序列。
3.根据权利要求2所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物组中，在延伸引物5′端增加有作为接头的碱基序列。
4.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物的每个位点均是以游离DNA的上一段特异性序列为模板而得到的三段连续引物，所述三段引物连接后形成PCR模板。
5.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物在目标染色体上的序列唯一。
6.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物的退火温度相同。
7.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述编号为SEQ ID NO：1-2700的序列特异性引物与编号为SEQ ID NO:2701-2702的通用引物序列互补性最低。
8.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述编号为SEQ ID NO：1-2700的序列特异性引物与具有多态性和染色体拷贝数变异的序列不一致。
9.一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的试剂盒，包括：（1）PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括序列特异性引物、通用PCR引物、DNA聚合酶、DNA连接酶、末端转移酶、dNTPs和反应缓冲液；（2）PCR反应产物的纯化试剂，包括产物纯化磁珠及缓冲液；和（3）阴性质控品和阳性质控品，其特征在于，所述DNA选自人类21,18,13号染色体，针对所述21,18,13号染色体，分别设计有300对序列特异性引物，每对所述序列特异性引物均包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-2700。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105177161B (zh) * 2015-10-19 2019-04-05 北京嘉宝仁和医疗科技有限公司 Y染色体azf区微缺失检测试剂盒
CN105176992B (zh) * 2015-10-19 2018-07-31 北京中仪康卫医疗器械有限公司 Y染色体azf区微缺失检测引物
CN108342455B (zh) * 2017-06-25 2021-11-30 北京新羿生物科技有限公司 一种从母体外周血检测胎儿非整倍体染色体的方法及其试剂盒
CN109321641B (zh) * 2018-11-06 2019-09-13 苏州首度基因科技有限责任公司 一种基于dna片段富集及测序技术的产前无创胎儿染色体检测系统
CN111172248B (zh) * 2020-02-26 2021-12-03 上海晶准生物医药有限公司 一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒
CN112899358A (zh) * 2021-01-06 2021-06-04 南京普济生物有限公司 一种无创产前胎儿染色体非整倍体的检测方法及其试剂盒
CN113684268B (zh) * 2021-08-17 2023-08-29 北京嘉宝仁和医疗科技股份有限公司 Y染色体azf区域微缺失检测的方法、引物组合物及试剂盒

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2768978T3 (en) * 2011-10-18 2017-12-18 Multiplicom Nv Fetal CHROMOSOMAL ANEUPLOIDID DIAGNOSIS
CN103923987A (zh) * 2014-04-01 2014-07-16 中山大学达安基因股份有限公司 一种基于高通量测序检测13、18、21三体综合征的方法
CN104156631B (zh) * 2014-07-14 2017-07-18 天津华大基因科技有限公司 染色体三倍体检验方法

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