CN104587487A - 一种应用于靶向给药系统的新的支链连接体 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种应用于靶向给药系统的新的支链连接体、合成及在靶向给药系统中的应用,其中肽链通过对氨基连接到支链连接体,药物通过苄基醇的部分连接到支链连接体,修饰片段及靶头部分通过炔基连接到支链连接体;本发明使给药后在体内到达病变组织过程中有一定的稳定性,并且靶向到特定组织或细胞后,在特定的条件下,释放出药物,达到治疗效果并减少毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种靶向给药系统的新的支链连接体的设计、合成及在靶向给药系统中的应用。其中所述肽链通过对氨基连接到支链连接体,所述药物通过苄基醇的部分连接到支链连接体,修饰片段及靶头部分通过炔基连接到支链连接体;本发明进一步涉及制备所述多肽药物偶联物的中间体以及通过各种中间体制备所述多肽药物偶联物的方法,涉及这样的多肽药物偶联物的体外释药实验。
背景技术
大部分化疗药物由于不具有选择性,往往在其用于治疗的过程中伴随着严重的毒副作用,这限制了它们的用途和疗效。为了提高药物对病变组织或细胞的特异性,越来越多的研究倾向于将药物设计成靶向前药。靶向前药是指将药物活性化合物通过连接体连接至靶向剂(如单克隆抗体,iRGD,叶酸等)所形成的靶向药物联接体。其中,连接体的作用是将靶向剂与药物连接;靶向剂主要负责将靶向药物联接体特异性的运送至病变组织或细胞;药物提供治疗作用。
相较于腙和二硫化物的连接体在细胞外的生理条件下的不稳定性,肽键连接体在细胞外的生理条件下有一定的稳定性,提高靶向药物联接体(如ADCs)的治疗窗。肽键连接体可以通过组织蛋白酶进行水解断裂。
组织蛋白酶(Cathepsins)是一大类主要存在于溶酶体的半胱氨酸蛋白水解酶,包括组织蛋白酶B,C,F,H,K,L,O,S,V,W和X。组织蛋白酶多以无活性的酶原形式存在,酶活性的调节是通过各种转译后的过程完成,其中,最重要的蛋白酶酶原的激活是通过核内体/溶酶体的酸性环境和来自半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族的内源性抑制剂的高亲和力的表达。由于肿瘤细胞能够酸化其周围环境,其分泌的组织蛋白酶在此环境中被活化,因此,肿瘤组织及细胞中组织蛋白酶的活性远高于远离肿瘤的其他正常组织和细胞的组织蛋白酶活性。
发明内容
本发明的目的是设计一个用于靶向给药系统的支链连接体。
本发明的目的是提供一个制备靶向给药系统的支链连接体的方法。
i)在碱性条件下,化合物III发生亲核取代反应同时伴随着部分水解反应得到混合物,碱为氢氧化钠或氢氧化钾,优选为氢氧化钠,溶剂为二氯甲烷,反应温度为0-20℃,其中,化合物III与碱的摩尔比为1∶5;在酸性条件下,该混合物经过水解反应得到化合物IV,酸为盐酸,溶剂为水;
ii)化合物IV在氯化亚砜的作用下生成酰氯中间体,与甲醇作用得到化合物V,溶剂为甲醇,反应温度为20-80℃,其中,化合物IV与氯化亚砜的摩尔比为1∶6.6;
iii)化合物V经还原得到化合物VI,还原剂为Fe粉和氯化铵或者Zn粉和氯化铵,优选为Fe粉和氯化铵,溶剂为乙醇和水的混合溶剂,反应温度为20-100℃,其中,化合物V、Fe粉以及氯化铵的摩尔比为1∶4∶4,乙醇与水的体积比为2∶1;
iv)化合物VI经过LAH还原得到化合物VII,溶剂为四氢呋喃,反应温度为0-20℃,其中,化合物VI与LAH的摩尔比为1∶2.5。
本发明的另一目的是提供一种将配体(LI)、引发剂(PI)和药物(DR)连接到支链连接体的方法(MI)。
PI选自:组织蛋白酶底物,如氨基酸或二肽;
DR是一种药学上的活性药物;
LI选自:PEG、糖、叶酸、多肽类如RGD、iRGD以及抗体等;
其特征是:通过组织蛋白酶水解肽键,引发药物释放;
(+++)表示用于连接PI的连接部位;
(++++)表示用于连接DR的连接部位;
(+++++)表示用于连接LI的连接部位。
本发明进一步目的是提供制备所述多肽药物偶联物的中间体以及通过各种中间体制备所述多肽药物偶联物的方法,其中,R-PI通过缩合反应与支链连接体(VII)连接,得到式(a)化合物;
PI如说明书中所定义;
R是取代基团,包括但不限于-H,PEG、糖、叶酸、多肽类如RGD、iRGD以及抗体,及保护基叔丁氧羰基、苄氧羰基、笏甲氧羰基等,优选为苄氧羰基;
式(a)中,PI选自单个氨基酸(-AA-),包括但不仅限于-Lys-,-Cit-,-Arg-,-Leu-,-His-,-Asp-,-Glu-,-Ala-,-Val-,-Ile-,-Pro-,-Phe-,-Trp-,-Met-,-Ser-,-Cys-,-Asn-,优选为-Lys-;PI选自二肽(-AA1-AA2-),包括但不仅限于-Phe-Lys-,-Val-Lys-,-Ala-Lys-,-Val-Cit-,-Phe-Cit-,-Leu-Cit-,-Ile-Cit,-Trp-Cit-,-Trp-Cit-,-Phe-Arg-,优选为-Val-Cit-。
R-PI与支链连接体(VII)连接,通过缩合反应进行,其中,缩合剂可以为EEDQ,HATU,EDC/HOBt,PyBOP,优选为EEDQ;溶剂为二氯甲烷、甲醇、或二氯甲烷/甲醇的混合溶剂,优选为二氯甲烷/甲醇的混合溶剂(比例为2∶1);反应温度为0-40℃,优选为20-30℃;
式(a)化合物选自但不限于式(a-1)化合物、式(a-2)化合物、式(a-3)化合物、式(a-4)化合物、式(a-5)化合物、式(a-6)化合物、式(a-7)化合物、式(a-8)化合物及式(a-9)化合物;
其中,DR与支链连接体以式(b)或式(c)化合物的形式连接;
DR如说明书中所定义;
DR选自细胞毒试剂、其他化疗剂和抗转移剂,优选为细胞毒试剂;
X是杂原子,为-N-或-O-;
式(b)化合物是在步骤(MIb)中制备;
步骤(MIb)包括反应(MIb),反应(MIb)是由化合物(VIII)与化合物(VIIII)参与的反应;在碱性条件下,化合物(VIII)与化合物(VIIII)反应得到式(b)化合物;反应溶剂为四氢呋喃,二氯甲烷,DMF,DMSO,优选为DMF;碱可以为N,N-二异丙基乙胺,三乙胺,吡啶,优选为N,N-二异丙基乙胺;反应温度为0-40℃,优选为20-30℃;
式(VIII)化合物是在步骤(MIb_1)中制备;
步骤(MIb_1)包括反应(MIb_1),反应(MIb_1)是由化合物(a)与化合物(X)参与的反应;在碱性条件下,化合物(a)与化合物(X)反应得到式(VIII)化合物;反应溶剂为四氢呋喃,二氯甲烷,DMF,DMSO,优选为DMF;碱可以为N,N-二异丙基乙胺,三乙胺,吡啶,优选为N,N-二异丙基乙胺;反应温度为0-40℃,优选为20-30℃;
式(X)化合物选自4-硝基苯基氯甲酸酯、二(对硝基苯)碳酸酯、光气、双光气、三光气及其混合物,优选为4-硝基苯基氯甲酸酯;
式(VIIII)化合物是在步骤(MIb_2)中制备;
步骤(MIb_2)包括反应(MIb_2),反应(MIb_2)是用三氟醋酸除去化合物(XI)的保护基三苯甲基的反应;在酸性条件下,化合物(XI)发生脱保护基的反应;反应试剂酸优选为三氟醋酸;反应溶剂为四氢呋喃,二氯甲烷,甲醇,优选为二氯甲烷;反应温度为0-40℃,优选为20-30℃;
式(XI)化合物是在步骤(MIb_3)中制备;
步骤(MIb_3)包括反应(MIb_3),反应(MIb_3)是由化合物(DR)、化合物(X)与化合物(XII)参与的反应;碱性条件下,化合物(DR)与化合物(X)反应生成活性酯中间体;反应试剂碱可以为N,N-二异丙基乙胺,三乙胺,吡啶,优选为三乙胺;反应溶剂可以为二氯甲烷、四氢呋喃、DMF、DMSO,优选为DMSO;反应温度为0-40℃,优选为20-30℃;反应2-3小时后,往体系中加入另一反应底物化合物(XII);
式(XII)化合物选自化合物(XII);
式(c)化合物是在步骤(MIb_4)中制备;
步骤(MIb)包括反应(MIb_4),反应(MIb_4)是由化合物(VIII)与化合物(DR)参与的反应。在碱性条件下,化合物(VIII)与化合物(DR)反应得到式(c)化合物;反应溶剂为四氢呋喃,二氯甲烷,DMF,DMSO,优选为DMF;碱可以为N,N-二异丙基乙胺,三乙胺,吡啶,优选为N,N-二异丙基乙胺;反应温度为0-40℃,优选为20-30℃;
式(b)化合物选自但不限于式(b-1)化合物、式(b-2)化合物、式(b-3)化合物;
式(c)化合物选自但不限于式(c-1)化合物、式(c-2)化合物;
其中,LI与新型支链连接体以式(d)或式(e)化合物的形式连接;
LI如说明书中所定义;
X如说明书中所定义;
LK1是连接修饰片段,为PEG、糖、烷基链等,优选为PEG;
式(d)化合物选自但不限于式(d-1)化合物、式(d-2)化合物、式(d-3)化合物、式(d-4)化合物、式(d-5)化合物、式(d-6)化合物;
式(e)化合物选自但不限于式(e-1)化合物、式(e-2)化合物、式(e-3)化合物、式(e-4)化合物;
本发明的另一目的是提供一种将配体、引发剂和药物连接到支链连接体形成靶向药物联接体在组织蛋白酶作用下可能释药机制。
本发明的另一目的是利用组织蛋白酶进行释药实验;组织蛋白酶可以为组织蛋白酶B、F、H、K、L、S、V,优选为组织蛋白酶B、L;
组织蛋白酶B(简称CTB)储备液的准备
将组织蛋白酶B冻干物(2.1mg,为10UN)溶于1ml缓冲液(25mM醋酸钠/1mM EDTA,pH5.0)中即得。取Cathepsin B储备液(0.06ml)加入0.12ml(30mM DTT二硫苏糖醇/15mM EDTA)混合15min活化[浓度为:33.333um/ml];加入1.82ml缓冲液(25mM醋酸钠/1mM EDTA,pH5.0),备用。
高效液相色谱条件
Agilent 1200四元泵(G1311A quat pump),自动进样系统(G1329A,ALS)、恒温箱(G1316A,TCC)、紫外检测器(G1314B,VWD)、(G1321A,FLD),chemstation B工作站;色谱柱:Diamonsil C18(4.6*250mm,5ul);流速:1.2ml/min;柱温:25℃,波长365nm;流动相:乙腈、缓冲液(pH3.0的磷酸盐缓冲溶液)、纯水,梯度洗脱。
本发明的意义是提供一种应用于靶向给药系统的新的支链连接体,通过此连接体将药物、起到靶向作用的配体、及能够改变水溶性或脂溶性等作用的修饰片段组成一个新化学实体,使给药后在体内到达病变组织过程中有一定的稳定性,并且靶向到特定组织或细胞后,在特定的条件下,释放出药物,达到治疗效果并减少毒副作用。
附图说明
图1为体外酶实验对照组(SN-38)在液相条件下的出峰时间图;
图2为体外酶实验实验组(化合物10)在液相条件下的出峰时间图;
图3体外酶实验实验组(化合物10)于CTB作用10小时后在液相条件下的出峰时间图。
具体实施方式
本发明的新型支链连接体的制备方法,LI、PI以及DR连接到支链连接体形成靶向给药联接体的方法,体外组织蛋白酶实验和液相检测方法在如下实例中更详细地叙述,但实施例不构成对本发明的限制。
实施例1
1.1化合物IV的制备
将氢氧化钠(3.81g,95.2mmol)与分子筛(2.00g)加入到二氯甲烷(30ml)中,0℃往混合溶液中滴加丙炔醇(4.85g,86.6mmol),30分钟后,混合液升温至室温,缓慢滴加化合物(III)(5.00g,18.2mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液,室温反应过夜。过滤,滤饼真空干燥。将得到的固体溶于水,冰浴条件下用2N稀盐酸进行酸化至pH达到2.0-3.0。过滤,将滤饼层真空干燥得到化合物(IV)的粗品(2.44g,56%)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.36(d,J=1.6Hz,1H),8.22(dd,J=8.5,2.1Hz,1H),8.09(d,J=8.5Hz,1H),4.95(s,2H),4.37(d,J=2.2Hz,2H),3.54(t,J=2.1Hz,1H)。
1.2化合物V的制备
将化合物IV粗品(2.44g,10.4mmol)溶于甲醇(30ml),往体系中缓慢滴加二甲亚砜(1.7ml,69.0mmol),80℃反应回流过夜。反应液冷却至室温,直接浓缩,得到的粗品利用甲醇重结晶,最后得到淡黄色固体V(2.31g,89%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,J=0.9Hz,1H),8.17(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),8.11(d,J=8.6Hz,1H),5.04(s,2H),4.36(d,J=2.3Hz,2H),3.96(s,3H),2.50(t,J=2.3Hz,1H)。
1.3化合物VI/VII的制备
将化合物VI(2.07g,10.0mmol),铁粉(2.24g,40.0mmol)和氯化铵固体(2.14g,40.0mmol)加入到乙醇(30ml)和水(15ml)的混合溶剂中,反应液在60℃下反应1小时后冷却至室温,通过硅藻土过滤,滤液用乙酸乙酯萃取,有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤后浓缩。将得到的粗品(VI)真空干燥后溶于无水四氢呋喃(30ml),于0℃下缓慢滴加入氢化锂铝(950mg,25.0mmol)的四氢呋喃(50ml)浑浊液中,反应液在室温反应24小时后再次冷却至0℃,依次缓慢往体系中加入水(0.95ml),氢氧化钠溶液(15%,0.95ml),30分钟后,往体系中加入水(3ml),体系自然升温至室温,然后往其中加入无水硫酸镁,过滤,滤液浓缩后得到淡黄色固体(VII)(1.60g,84%)
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.15(d,J=8.0Hz,1H),6.69(d,J=1.9Hz,1H),6.61(dd,J=8.0,2.1Hz,1H),4.63(s,2H),4.56(s,2H),4.19(d,J=2.0Hz,2H),3.70(br s,2H),2.54-2.48(m,1H)。
实施例2
2.1化合物1/2的制备
将SN-38(1.25g,3.19mmol)、氯甲酸对硝基苯酯(771mg,3.82mmol)和DIPEA(1.25ml,7.50mmol)于0℃溶于DMF(20ml),反应液于室温反应1小时,然后,往体系中加入N-三苯基-N,N′-二甲基乙二胺(2.65mg,7.98mmol),混合溶液于室温反应16小时。反应液用二氯甲烷和水进行萃取,有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。粗品通过柱层析(PE∶DCM=1∶1——DCM∶MeOH=30∶1)纯化,得到黄色泡沫状固体1(1.16g)。
2.2化合物3的制备
三氟醋酸(2ml)滴加到化合物2(1.16g,1.55mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中,室温反应20分钟后往体系中加入乙醚(60ml),过滤,滤饼层干燥得到黄色固体3(840mg,以SN-38为起始原料的三步总收率:43%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(br s,1H),8.57(br s,1H),8.21(d,J=9.2Hz,1H),8.03(d,J=5.7Hz,1H),7.86-7.69(m,1H),7.33(s,1H),6.54(br s,1H),5.44(s,2H),5.35(s,2H),3.86-3.77(m,1H),3.68-3.61(m,1H),3.31-3.25(m,1H),3.24-3.12(m,5H),3.00(s,1H),2.76-2.61(m,3H),2.02-1.76(m,2H),1.31(t,J=7.4Hz,3H),0.89(t,J=7.3Hz,3H)。
实施例3
3.1化合物7的制备
将化合物VII(1.36g,3.33mmol)和化合物SM1(700mg,3.66mmol)溶于二氯甲烷(40ml)和甲醇(20ml)的混合溶剂中,室温搅拌,往体系中加入EEDQ(1.65g,6.67mmol)。反应体系室温反应16小时后直接浓缩,浓缩物通过乙醚打浆,过滤,得到黄色固体7(860mg,45%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.97(s,1H),8.05(d,J=7.5Hz,1H),7.59-7.53(m,2H),7.42-7.26(m,7H),5.95(s,1H),5.38(s,2H),5.04(s,2H),5.00(t,J=5.4Hz,1H),4.55(s,2H),4.48(d,J=5.2Hz,2H),4.45-4.35(m,1H),4.20(d,J=2.0Hz,2H),3.93(t,J=7.6Hz,1H),3.48(s,1H),3.07-2.90(m,2H),2.05-1.91(m,1H),1.76-1.64(m,1H),1.64-1.52(m,1H),1.50-1.30(m,2H),0.94-0.78(m,6H)。
3.2化合物8的制备
往化合物7(426mg,0.733mmol)和DIPEA(284mg,2.20mmol)的DMF(5ml)混合溶液中分批加入氯甲酸对硝基苯酯(296mg,1.47mmol),反应体系室温搅拌16小时,混合液用水和乙酸乙酯进行萃取,合并得到的有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。浓缩物通过二氯甲烷/乙醚(1/20)体系进行打浆,过滤,得到黄色固体8(400mg,73%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.39-8.22(m,2H),7.75-7.60(m,2H),7.48-7.40(m,3H),7.39-7.24(m,5H),5.38(s,2H),5.10(s,2H),4.70(s,2H),4.60-4.45(m,2H),4.19(d,J=2.4Hz,2H),3.98(d,J=6.8Hz,1H),3.25-3.03(m,2H),2.93-2.87(m,1H),2.16-1.99(m,1H),2.00-1.85(m,1H),1.83-1.69(m,1H),1.681.46(m,2H),1.04-0.91(m,6H)。
3.3化合物9的制备
往化合物8(50mg,0.067mmol)和化合物3(46.0mg,0.074mmol)的DMF(1ml)混合溶液中滴加DIPEA(26.0mg,0.201mmol),反应体系室温反应1小时,混合液用水和二氯甲烷萃取,合并得到的有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。浓缩物通过柱层析纯化得到白色固体9(50.0mg,67%)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.15-7.93(m,1H),7.92-7.72(m,1H),7.69-6.99(m,10H),5.64-5.51(m,1H),5.42-5.31(m,1H),5.30-4.92(m,6H),4.71-4.34(m,3H),4.19-4.01(m,2H),4.00-3.90(m,1H),3.85-3.46(m,4H),3.25-2.74(m,10H),2.15-1.40(m,7H),1.39-1.14(m,4H),1.05-0.83(m,9H)。
3.4化合物10的制备
将化合物9(177mg,0.158mmol),mPEG2000-N3(384mg,0.190mmol),CuSO4·5H2O(8.00mg,0.032mmol)和维生素C钠盐(6.30mg,0.032mmol)溶于叔丁醇和水的混合溶剂中,氮气保护下升温至60℃反应2小时后,反应混合液直接浓缩,浓缩物通过柱层析纯化得到白色固体10(380mg,76%)。
MALDI-TOF:C149H250N12O59Na(M+Na+):3174.5
体外酶实验
化合物10在组织蛋白酶B中的释放实验
化合物10的样品溶液配制
将化合物10配成DMSO溶液(10μM/ml);取10μl加入至组织蛋白酶B储备液中,混匀后,置37℃条件下孵育。
图1表明对照组(SN-38)在上述液相条件下的出峰时间;图2表明实验组(化合物10)在上述液相条件下的出峰时间;图3表明实验组(化合物10)于CTB作用10小时后在上述液相条件下的出峰时间。图例表明:化合物10在CTB作用10小时后,大部分能够转化为目标化合物SN-38。
可以得出:本发明制备了一种应用于靶向给药系统的新的支链连接体,以此连接体给出了一系列靶向给药化合物,提供了可能释药机制,并通过体外组织蛋白酶释药实验验证了本发明中支链连接体在靶向给药系统中应用的可行性。
Claims (10)
1.一种应用于靶向给药系统的新的支链连接体,其特征在于该支链连接体具有下式结构:
2.一种权利要求1所述支链连接体(VII)的制备方法,其特征在于该方法包括以下具体步骤:
式中,由原料I经过酯化、溴代、取代、水解、酯化及还原反应得到支链连接体(VII);其中,
i)在碱性条件下,化合物III发生亲核取代反应同时伴随着部分水解反应得到混合物,碱为氢氧化钠或氢氧化钾,溶剂为二氯甲烷,反应温度为0-20℃,其中,化合物III与碱的摩尔比为1∶5;在酸性条件下,该混合物经过水解反应得到化合物IV,酸为盐酸,溶剂为水;
ii)化合物IV在氯化亚砜的作用下生成酰氯中间体,与甲醇作用得到化合物V,溶剂为甲醇,反应温度为20-80℃,其中,化合物IV与氯化亚砜的摩尔比为1∶6.6;
iii)化合物V经还原得到化合物VI,还原剂为Fe粉和氯化铵或者Zn粉和氯化铵,溶剂为乙醇和水的混合溶剂,反应温度为20-100℃,其中,化合物V、Fe粉或Zn粉以及氯化铵的摩尔比为1∶4∶4,乙醇与水的体积比为2∶1;
iv)化合物VI经过LAH还原得到化合物VII,溶剂为四氢呋喃,反应温度为0-20℃,其中,化合物VI与LAH的摩尔比为1∶2.5。
3.一种权利要求1所述支链连接体用于连接配体LI、引发剂R-PI以及药物DR的方法,
R-PI中PI选自:组织蛋白酶底物;R是取代基团,为-H、PEG、糖、叶酸、多肽类、抗体或保护基;
DR是一种药学上的活性药物;
LI选自:PEG、糖、叶酸、多肽类或抗体;
其特征在于:通过组织蛋白酶水解肽键,引发药物释放;
(+++)表示用于连接R-PI的连接部位;
(++++)表示用于连接DR的连接部位;
(+++++)表示用于连接LI的连接部位。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述组织蛋白酶底物为单个氨基酸或二肽;所述多肽类为RGD或iRGD;所述保护基为叔丁氧羰基、苄氧羰基或笏甲氧羰基。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述R-PI通过缩合反应与支链连接体(VII)连接,得到式(a)化合物;
式(a)中,PI选自单个氨基酸(-AA-),为-Lys-,-Cit-,-Arg-,-Leu-,-His-,-Asp-,-Glu-,-Ala-,-Val-,-Ile-,-Pro-,-Phe-,-Trp-,-Met-,-Ser-,-Cys-或-Asn-;PI选自二肽(-AA1-AA2-),为-Phe-Lys-,-Val-Lys-,-Ala-Lys-,-Val-Cit-,-Phe-Cit-,-Leu-Cit-,-Ile-Cit,-Trp-Cit-,-Trp-Cit-或-Phe-Arg-。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述DR与支链连接体以式(b)或式(c)化合物的形式连接;
DR如权利要求3中所定义;
X是杂原子,为-N-或-O-;
式(b)化合物是在步骤(MIb)中制备;
步骤(MIb)包括反应(MIb),反应(MIb)是由化合物(VIII)与化合物(VIIII)参与的反应;
式(VIII)化合物是在步骤(MIb_1)中制备;
步骤(MIb_1)包括反应(MIb_1),反应(MIb_1)是由化合物(a)与化合物(X)参与的反应;
式(X)化合物选自4-硝基苯基氯甲酸酯、二(对硝基苯)碳酸酯、光气、双光气、三光气及其混合物;
式(VIIII)化合物是在步骤(MIb_2)中制备;
步骤(MIb_2)包括反应(MIb_2),反应(MIb_2)是用三氟醋酸除去化合物(XI)的保护基三苯甲基的反应;
式(XI)化合物是在步骤(MIb_3)中制备;
步骤(MIb_3)包括反应(MIb_3),反应(MIb_3)是由化合物(DR)、化合物(X)与化合物(XII)参与的反应;
式(XII)化合物:
式(c)化合物是在步骤(MIb_4)中制备;
步骤(MIb)包括反应(MIb_4),反应(MIb_4)是由化合物(VIII)与化合物(DR)参与的反应。
7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述LI与支链连接体以式(d)或式(e)化合物的形式连接;
LI如权利要求3中所定义;
X如权利要求6中所定义;
LK1是连接修饰片段,为PEG、糖或烷基链。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述式(a)化合物选自:
9.根据权利要求6所述的方法,其特征在于所述式(b)和式(c)化合物选自:
10.根据权利要求7所述的方法,其特征在于所述式(d)和式(e)化合物选自:
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