CN104540850B - 胰高血糖素样肽2(glp-2)类似物 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了GLP‑2类似物及其医药用途，与h[Gly2]GLP‑2相比，所述GLP‑2类似物包含一个或更多个取代并且可具有改变的GLP‑1活性性质。所述类似物尤其可用于预防、治疗或减轻糖尿病的胃肠相关副作用。

Description

胰高血糖素样肽2(GLP-2)类似物
技术领域
本发明涉及具有改变的GLP-1活性的胰高血糖素样肽2(GLP-2)类似物及其医药用途，例如预防、治疗或减轻疾病和病症如代谢性内毒素血症、糖尿病、肥胖和代谢综合征。
背景技术
低度炎症(Low-grade inflammation)是与心脏病、中风、糖尿病和死亡独立的风险因素。研究发现表明，涉及在动脉中形成脂肪沉积(斑块)和自由基活性以及感染原的动脉粥样硬化可以比作骨和关节的关节炎，因为这二者都是炎性疾病。炎症在检测到胰岛素抗性之前，因此其可以作为糖尿病的良好预示。
另外，已经证明，肥胖小鼠(ob/ob和db/db)的粘膜屏障功能遭到破坏并且全身性炎症升高(Brun等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 292：G518-G525，2007.5，2006年十月)。这些观察结果进一步扩展至用高脂饮食喂养的C57BL6/J小鼠(Cani等，DIABETES，第57卷，2008年6月，第1470-1481页)和非肥胖糖尿病小鼠(Hadjiyanni等，2009)中。Cani及其同事(gut.bmj.com，2009)报道在肠道菌群改变的ob/ob小鼠中，通过GLP-2驱动的途径降低了肠道通透性和炎症。进一步地，在肥胖和糖尿病患者中观察到的通透性增加目前在疾病进展中可能具有比之前预期的更重要的作用。肠道通透性增加导致穿过肠内腔转运的细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)增加。这种增加的LPS将激活免疫细胞，例如在体内循环和居留于器官的巨噬细胞，导致参与多种疾病的发病机理的低度慢性炎症。这种现象被称为代谢性内毒性血症(endotoxemia，ME)，并且可被看做是慢性病病理学中的新理念。
靶向ME及相关疾病在本发明的范围内。在低度炎症的背景下出现的疾病包括II型糖尿病、动脉粥样硬化、帕金森氏症和癌症转移，所述低度炎症的来源尚未明确定义。有趣的是，数个近期的研究已经证明了疾病发展和血浆内毒素水平之间显著相关(Chang 2011，J Med Sci 2011；31(5)：191-209)。
图1中描述了GLP2-GLP1双激动剂在肥胖型糖尿病中作用所凭借的假设机制。GLP2组件降低炎症和代谢性内毒素血症，而GLP1组件通过经典的GLP1依赖机制提供血糖控制和体重减轻。
人GLP-2是一种33个氨基酸的肽，其来源于肠的肠内分泌细胞L和脑干特定区域中的胰高血糖素原的特定翻译后加工。其与胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide 1，GLP-1)、胃泌酸调节素(oxyntomodulin)和肠高血糖素一起在响应于营养摄取时共分泌。
GLP-2通过刺激隐窝中的干细胞增殖以及抑制绒毛中的细胞凋亡来诱导小肠粘膜上皮的显著生长(Drucker等，Proc Natl Acad Sci U S A93：7911-7916(1996))。GLP-2也对结肠具有生长效应。此外，GLP-2抑制胃排空和胃酸分泌(Wojdemann等，J ClinEndocrinol Metab.84：2513-2517(1999))，提升肠屏障功能(Benjamin等，Gut47：112-9(2000))，通过上调葡萄糖转运蛋白来刺激肠的己糖转运(Cheeseman，Am JPhysiol.R1965-71(1997))以及增加肠血流(Guan等，Gastroenterology125：136147(2003))。
GLP-2与单个G蛋白偶联受体结合，后者属于II类胰高血糖素分泌素家族。GLP-2受体在小肠、结肠和胃中表达，其也是已知对GLP-2响应的部位(Yusta等，Gastroenterology119：744-755(2000))。但是，胃肠道中GLP-2受体刺激的靶细胞种类依然不清楚，并且对与GLP-2受体偶联的下游细胞内中介体的了解也很少。
GLP-2在小肠中已证明的特异和有益的效果已引起了对使用GLP-2治疗肠疾病或损伤的极大兴趣(Sinclair和Drucker，Physiology 2005：357-65)。另外，已经表明GLP-2在多种肠损伤的临床前模型和炎性肠病的遗传模型(Sinclair和Drucker，Physiology 2005：357-65)中阻止或降低粘膜上皮损伤，所述肠损伤包括化学疗法引起的肠炎、缺血再灌注损伤、葡聚糖硫酸酯引起的结肠炎。
另外，GLP-2R mRNA在胃中的表达(Yusta等，2000)以及观察到GLP-2降低胃运动和胃酸分泌(Meier等，GASTROENTEROLOGY2006；130：44-54)提供了胃直接或间接地响应于GLP-2的充分证据。然而，尚未开发出GLP-2或GLP-2的类似物在以胃粘膜(lining)损伤为特征的病症中的用途。
GLP-2以具有以下序列的33个氨基酸的肽分泌：
His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp(SEQ ID NO：1)
其迅速被酶DPP IV在相对N末端的2位的丙氨酸(Ala)处切割，形成无活性的人GLP-2肽(3-33)。除了肾清除外，GLP-2(1-33)的这种迅速的酶降解导致约7分钟的半衰期(Tavares等，Am.J，Physiol.Endocrinol.Metab.278：E134-E139(2000))。
代表性GLP-2类似物描述在例如美国专利No.5,789,379、5,994,500、6,184,201、6,184,208，国际公开No.WO 97/39031、WO 01/41779、WO 02/066511以及DaCambra等(Biochemistry 2000，39，8888-8894)中。本文引用的所有参考文献均明确地通过引用整体并入。
发明内容
宽泛地讲，本发明涉及GLP-2类似物，与野生型GLP-2相比，其包含一个或更多个取代并且可具有改变的性质，优选(例如，在体外效力测定中评估的)提高的GLP-1活性。例如，可通过确定对GLP-1受体的EC50值比天然GLP-2低来测量GLP-1活性。在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物包含在对应于野生型GLP-2序列的2、3、5、7、8、9、10、11、12、14、15、16、19、20、21、24、27和/或28位中的一个更多个位的氨基酸位置处的一个或更多个取代以及17位的Gln、Lys或Glu。在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物包含在对应于野生型GLP-2序列的2、3、5、7、8、9、10、11、12、15、16、20、21、24、27和/或28位中的一个更多个位的氨基酸位置处的一个或更多个取代以及17位的Gln、Lys或Glu。在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物包含在2位的保守或非保守取代和/或对应于野生型GLP-2序列的28至33位氨基酸的一个或更多个氨基酸的取代或缺失。在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物任选地包含与12、14、16、17、19、20、24、27、28和32位中的一个更多个位置缀合的亲脂性取代基。在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物任选地包含与12、16、17、20、24、27、28和32位中的一个更多个位置缀合的亲酯性取代基。
在一些实施方案中，用通式I表示的GLP-2类似物：
R1-His-X2-X3-Gly-X5-Phe-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-Ala-X19-X20-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-R2(I)(SEQ ID NO2)
或者其可药用盐或溶剂合物，其中
R1是氢、C1-4烷基(例如，甲基)、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基；
X2是Gly、Ala或Aib；
X3是Glu、Gln或Asp；
X5是Ser或Thr；
X7是Ser或Thr；
X8是Asp、Glu或Ser；
X9是Glu或Asp；
X10是Met、Val、Leu或Tyr；
X11是Asn、Ser或Ala；
X12是Thr、Ser或Lys；
X13是Ile、Leu、Val、Tyr、Phe或Gln；
X14是Leu或Met；
X15是Asp或Glu；
X16是Asn、Gln、Gly、Ser、Ala、Glu或Lys；
X17是Gln、Lys、Arg、His或Glu；
X19是Ala或Val；
X20是Arg、Lys或His；
X21是Asp、Glu或Leu；
X24是Asn、Ala、Glu或Lys；
X27是Ile、Leu、Val、Glu或Lys；
X28是Gln、Asn、Lys、Ser、Y1或不存在；
X29是Thr、Y1或不存在；
X30是Lys、Y1或不存在；
X31是Ile、Pro或不存在；
X32是Thr、Y1或不存在；
X33是Asp、Asn、Y1或不存在；
Y1是Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser或Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；并且
R2是NH2或OH；
前提是式I的GLP-2类似物不是
HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTKITD；(SEQ ID NO 3)
HGDGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD；(SEQ ID NO 4)或
HGDGSFSDEMNTILDSQAARDFINWLIQTK(SEQ ID NO 5)。
在该式中，X31还可以是Y1。X28还可以是Gly。X29还可以是Ala。
另外，Y1可存在于X33和R2之间。因此，可设想X34位，其中X34是Y1或不存在。
在一些实施方案中，GLP-2类似物是以下根据式I的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物，其中：
R1是氢，
X2是Gly、Ala或Aib；
X3是Glu、Gln或Asp；
X5是Ser或Thr；
X7是Ser或Thr；
X8是Asp、Glu或Ser；
X9是Glu或Asp；
X10是Met、Val、Leu或Tyr；
X11是Asn、Ser或Ala；
X12是Thr或Lys；
X14是Leu或Met
X15是Asp或Glu；
X16是Asn、Gln、Gly、Ser、Ala、Glu或Lys；
X17是Gln或Lys；
X19是Ala或Val；
X20是Arg、Lys或His；
X21是Asp、Glu或Leu；
X24是Asn、Ala、Glu或Lys；
X27是Ile、Leu、Val或Lys；
X28是Gln、Asn、Y1或不存在；
X29是Thr、Y1或不存在；
X30是Lys、Y1或不存在；
X31是Ile、Pro、Y1或不存在；
X32是Thr、Y1或不存在；
X33是Asp、Asn、Y1或不存在；
Y1是-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；并且
R2是NH2或OH；
前提是式I的GLP-2类似物不是
HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTKITD；
HGDGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD；或
HGDGSFSDEMNTILDSQAARDFINWLIQTK。
在该式中，X13可以是Ile、Leu、Val、Tyr、Phe或Gln。
X28还可以是Gly。X29还可以是Ala。Y1可存在于X33和R2之间。在一些实施方案中，式I的X14是Leu。
在一些实施方案中，式I的X14是Met。
在一些实施方案中，式I的X17是Gln。
在一些实施方案中，式I的X17是Lys。
在一些实施方案中，式I的X17是Glu。
在一些实施方案中，式I的X19是Ala。
在一些实施方案中，式I的X19是Val。
在一些实施方案中，式I的X16是Gly并且式I的X17是Gln。
在一些实施方案中，式I的X16是Gly并且式I的X17是Lys。
在一些实施方案中，式I的X16是Gly并且式I的X17是Glu。
在一些实施方案中，式I的X2是Aib，式I的X16是Gly并且式I的X17是Gln。
在一些实施方案中，式I的X2是Aib，式I的X16是Gly并且式I的X17是Lys。
在一些实施方案中，式I的X2是Aib，式I的X16是Gly并且式I的X17是Glu。
在一些实施方案中，式I的X2是Gly，式I的X16是Gly并且式I的X17是Gln。
在一些实施方案中，式I的X2是Gly，式I的X16是Gly并且式a的X17是Lys。
在一些实施方案中，式I的X2是Gly、式I的X16是Gly并且式I的X17是Glu。
在一些实施方案中，用通式Ia表示的GLP-2类似物：
R1-His-X2-X3-Gly-X5-Phe-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-Leu-X15-X16-X17-Ala-Ala-X20-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-R2(Ia)(SEQ ID NO6)
或者其可药用盐或溶剂合物，其中
R1是氢、C1-4烷基(例如，甲基)、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基；
X2是Gly、Ala或Aib；
X3是Glu、Gln或Asp；
X5是Ser或Thr；
X7是Ser或Thr；
X8是Asp、Glu或Ser；
X9是Glu或Asp；
X10是Met、Val、Leu或Tyr；
X11是Asn或Ser；
X12是Thr、Ser或Lys；
X13是Ile、Leu、Val、Tyr、Phe或Gln；
X15是Asp或Glu：
X16是Asn、Gln、Gly、Ser、Ala、Glu或Lys；
X17是Gln、Lys、Arg、His或Glu；
X20是Arg、Lys或His；
X21是Asp、Glu或Leu；
X24是Asn、Ala、Glu或Lys；
X27是Ile、Leu、Val、Glu或Lys；
X28是Gln、Asn、Lys、Ser、Y1或不存在；
X29是Thr、Y1或不存在；
X30是Lys、Y1或不存在；
X31是Ile、Pro或不存在；
X32是Thr、Y1或不存在；
X33是Asp、Asn、Y1或不存在；
Y1是Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser或Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；；并且
R2是NH2或OH；
前提是式Ia的GLP-2类似物不是
HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTKITD；
HGDGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD；或
HGDGSFSDEMNTILDSQAARDFINWLIQTK。
在该式中，X31还可以是Y1。
另外，Y1可存在于X33和R2之间。因此，可设想X34位，其中X34是Y1或不存在。
X28还可以是Gly。X29还可以是Ala。
在一些实施方案中，GLP-2类似物是根据式Ia的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物，
其中：
R1是氢，
X2是Gly、Ala或Aib；
X3是Glu、Gln或Asp；
X5是Ser或Thr；
X7是Ser或Thr；
X8是Asp、Glu或Ser；
X9是Glu或Asp；
X10是Met、Val、Leu或Tyr；
X11是Asn或Ser；
X12是Thr或Lys；
X15是Asp或Glu；
X16是Asn、Gln、Gly、Ser、Ala、Glu或Lys；
X17是Gln或Lys；
X20是Arg、Lys或His；
X21是Asp、Glu或Leu；
X24是Asn、Ala、Glu或Lys；
X27是Ile、Leu、Val或Lys；
X28是Gln、Asn、Y1或不存在；
X29是Thr、Y1或不存在；
X30是Lys、Y1或不存在；
X31是Ile、Pro、Y1或不存在；
X32是Thr、Y1或不存在；
X33是Asp、Asn、Y1或不存在；
Y1是-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；并且
R2是NH2或OH；
前提是式Ia的类似物不是
HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTKITD；
HGDGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD；或
HGDGSFSDEMNTILDSQAARDFINWLIQTK。
在该式中，X13可以是Ile、Leu、Val、Tyr、Phe或Gln。
X28还可以是Gly。X29还可以是Ala。
Y1可存在于X33和R2之间。
在一些实施方案中，式Ia的X17是Gln。
在一些实施方案中，式Ia的X17是Lys。
在一些实施方案中，式Ia的X17是Glu。
在一些实施方案中，式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Gln。
在一些实施方案中，式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Lys。
在一些实施方案中，式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Glu。
在一些实施方案中，式Ia的X2是Aib、式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Gln。
在一些实施方案中，式Ia的X2是Aib、式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Lys。
在一些实施方案中，式Ia的X2是Aib、式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Glu。
在一些实施方案中，式Ia的X2是Gly、式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Gln。
在一些实施方案中，式Ia的X2是Gly、式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Lys。
在一些实施方案中，式Ia的X2是Gly、式Ia的X16是Gly，并且式Ia的X17是Glu。
在任一上述实施方案中，或独立地，X8-X9-X10-X11可以是Ser-Glu-Leu-Ala。
在上述通式中，X28至X33位可选自某些氨基酸残基，或可以是Y1，或可以不存在。预期GLP-2类似物含有不超过1个Y1部分，并且如果存在的话，Y1形成分子的C末端部分。因此，如果X28至X33的任意位是Y1，则全部下游位置不存在；即，Y1下游X29至X33(或X34)的那些位置不存在。在本上下文中，给定位置“下游”的位置是位于该位置C末端的那些。
另外，如果X28至X33位的任何位不存在，则该位置下游的全部位也都不存在(除了Y1可能存在外)。因此，可能不存在的这些位置的仅有组合是X33、X32-X33、X31-X32-X33、X30-X31-X32-X33、X29-X30-X31-X32-X33和X28-X29-X30-X31-X32-X33。换句话说，如果位置XN存在(这里N是28至33的整数)，则X(N-1)位置也存在。
可用通式II表示的GLP-2类似物：
R1-His-X2-X3-GlyX5-Phe-X7-Ser-Glu-Leu-Ala-X12-X13-X14-X15-X16-X17-Ala-X19-X20-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-R2(II)(SEQ ID NO 7)
或其可药用盐或溶剂合物，其中：
R1是氢、C1-4烷基(例如，甲基)、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基
X2是Gly、Ala或Aib；
X3是Glu、Gln或Asp；
X5是Ser或Thr；
X7是Ser或Thr；
X12是Thr、Ser或Lys；
X13是Ile、Leu、Val、Tyr、Phe或Gln；
X14是Leu或Met；
X15是Asp或Glu；
X16是Gly、Ser、Ala、Glu或Lys；
X17是Gln或Lys；
X19是Ala或Val；
X20是Arg、Lys或His；
X21是Asp、Glu或Leu；
X24是Asn、Ala、Glu或Lys；
X27是Ile、Leu、Val、Glu或Lys；
X28是Gln、Asn、Lys、Ser、Gly、Y1或不存在；
X29是Thr、Ala、Y1或不存在；
X30是Lys、Y1或不存在；
X31是Ile、Pro、Y1或不存在；
X32是Thr、Y1或不存在；
X33是Asp、Asn、Y1或不存在；
X34是Y1或不存在；
Y1是Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser或Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；并且
R2是NH2或OH；其中
GLP-2类似物含有不超过一个Y1；
如果X28至X33中的任何位是Y1，则该Y1下游X29至X34的那些位置不存在；
如果X28至X33中的任何位不存在，则该位置下游X29至X33的那些位置也不存在。
在一些实施方案中，式II的X16是Gly、Ser或Ala。在这样的实施方案中，式II的X17可以是Lys，或者式II的X17可以是Gln。
还附加地或替代地，式II的X2可以是Gly或Ala。
因此，在一些实施方案中，式II的X16是Gly，并且式II的X17是Gln。
在一些实施方案中，式II的X16是Gly，并且式II的X17是Lys。
在一些实施方案中，式II的X2是Gly，式II的X16是Gly，并且式II的X17是Gln.
在一些实施方案中，式II的X2是Gly，式II的X16是Gly，并且式II的X17是Lys。
在一些实施方案中，式II的X2是Aib，式II的X16是Gly，并且式II的X17是Gln。
在一些实施方案中，式II的X2是Aib，式II的X16是Gly，并且式II的X17是Lys。
因此，在式II的一些实施方案中：
R1是氢、C1-4烷基(例如，甲基)、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基；
X2是Gly或Aib；
X3是Glu或Asp；
X5是Ser或Thr；
X7是Ser或Thr；
X12是Thr、Ser或Lys；
X13是Ile、Leu、Val、Tyr、Phe或Gln；
X14是Leu或Met；
X15是Asp或Glu；
X16是Gly、Ser或Ala；
X17是Gln或Lys；
X19是Ala或Val；
X20是Arg、Lys或His；
X21是Asp、Glu或Leu；
X24是Asn、Ala、Glu或Lys；
X27是Ile、Leu、Val、Glu或Lys；
X28是Gln、Asn、Lys、Ser、Gly、Y1或不存在；
X29是Thr、Ala、Y1或不存在；
X30是Lys、Y1或不存在；
X31是Ile、Pro、Y1或不存在；
X32是Thr、Y1或不存在；
X33是Asp、Asn、Y1或不存在；
X34是Y1或不存在；
Y1是Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser或Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；并且
R2是NH2或OH；其中
GLP-2类似物含有不超过一个Y1；
如果X28至X33中的任何位是Y1，则该Y1下游X29至X34的那些位置不存在；
如果X28至X33中的任何位不存在，则该位置下游X29至X33的那些位置也不存在。
在一些实施方案中，X16是Gly并且X17是Gln。
在一些实施方案中，X16是Gly并且X17是Lys。
在一些实施方案中，X2是Gly、X16是Gly，并且X17是Gln。
在一些实施方案中，X2是Gly、X16是Gly，并且X17是Lys。
在一些实施方案中，X2是Aib、X16是Gly，并且X17是Gln。
在一些实施方案中，X2是Aib、X16是Gly，并且X17是Lys。
在一些实施方案中，用通式III表示的GLP-2类似物：
R1-His-Gly-X3-Gly-X5-Phe-X7-Ser-Glu-Leu-Ala-X12-X13-Leu-X15-Gly-X17-Ala-X19-X20-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-R2(III)(SEQ ID NO 21)
或者其可药用盐或溶剂合物，其中：
R1是氢、C1-4烷基(例如，甲基)、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基；
X3是Glu或Asp；
X5是Ser或Thr；
X7是Ser或Thr；
X12是Thr、Ser或Lys；
X13是Ile、Tyr或Gln；
X15是Asp或Glu；
X17是Gln或Lys；
X19是Ala或Val；
X20是Arg、Lys或His；
X21是Asp、Glu或Leu；
X24是Asn、Ala、Glu；
X27是Ile、Leu、Glu或Lys；
X28是Gln、Lys、Ser、Gly、Y1或不存在；
X29是Thr、Ala、Y1或不存在；
X30是Lys、Y1或不存在；
X31是Ile、Pro、Y1或不存在；
X32是Thr、Y1或不存在；
X33是Asp、Asn、Y1或不存在；
X34是Y1或不存在；
Y1是Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser或Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；并且
R2是NH2或OH；其中
GLP-2类似物含有不超过一个Y1；
如果X28至X33中的任何位是Y1，则该Y1下游X29至X34的那些位置不存在；
如果X28至X33中的任何位不存在，则该位置下游X29至X33的那些位置也不存在。
在本发明的任意上述实施方案中，可能期望GLP-2类似物的氨基酸序列与氨基酸序列HGDGSFSSELATILDGKAARDFINWLIQTKITD或HGDGSFSSELATILDGQAARDFIAWLIQTKITD相比具有不超过5个氨基酸(amido)的改变，例如不超过4个、不超过3个、不超过2个或不超过1个改变。
在一些实施方案中，用任一以下序列表示本发明的GLP-2类似物：
H-Aib-DGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD；(SEQ ID NO 8)
HGDGSFSDEMNTILDNKAARDFINWLIQTKITD；(SEQ ID NO 9)
HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK；(SEQ ID NO 10)
HGDGSFSSEMNTILDSQAARDFINWLIQTKITD；(SEQ ID NO 11)
HGEGTFTSDLSKQMEGQAVRDFIEWLIQTKITD；(SEQ ID NO 12)
HGEGTFTSDLSKQMESKAARDFIEWLIQTKITD；(SEQ ID NO 13)
HGDGSFSSELATILDGKAARDFINWLIQTKITD；(SEQ ID NO 14)
HGEGTFTSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD；(SEQ ID NO 15)
HGEGSFSSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD；(SEQ ID NO 16)
H-Aib-DGSFSDELNTILDGKAARDFINWLIQTK；(SEQ ID NO 17)
HGDGSFSSELATILDGQAARDFIAWLIQTKITD；(SEQ ID NO 18)
HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK；(SEQ ID NO 19)和
HGEGSFSSDLSTILEGKAARDFIEWLIQTKITD；(SEQ ID NO 20)
或者其可药用盐或溶剂合物。
因此，本发明的GLP-2类似物可以是化合物R1-Z-R2，其中R1和R2如通式中定义，并且Z是选自上文所列那些的肽序列。
在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物包含与天然GLP-2的12、14、16、17、19、20、24、27、28和32位中的一个更多个位置的对应位置处的氨基酸缀合的亲脂性取代基。
在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物包含与天然GLP-2的12、16、17、20、24、27、28和32位中的一个更多个位置的对应位置处的氨基酸缀合的亲脂性取代基。
在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物可用在治疗中。
在一些实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含与载体混合的本发明的GLP-2类似物或者其盐或衍生物。在一些实施方案中，所述药物组合物可包含为可药用酸加成盐的GLP-2类似物。在一些实施方案中，将所述药物组合物配制成适于通过注射或输注施用的液体，或配制成使本发明的GLP-2类似物缓慢释放。
在一些实施方案中，本发明提供了本发明的GLP-2类似物用于制备用于治疗和/或预防低度炎症之药物的用途。
在一些实施方案中，本发明提供了本发明的GLP-2类似物用于制备用于治疗和/或预防糖尿病(其可以是I型或II型糖尿病，但特别是II型糖尿病)相关低度炎症之药物的用途。在一些实施方案中，所述低度炎症是局部低度炎症或全身性低度炎症。在一些实施方案中，所述低度炎症包括代谢综合征、肥胖(例如，腹部肥胖)、糖尿病、心血管疾病、胃肠炎症、抑郁症、阿尔茨海默病、关节炎、高血压、血脂异常和中风，食道上消化道、胃、十二指肠、小肠、结肠和直肠中的胃肠紊乱，包括任何病因的溃疡(例如，消化性溃疡、佐林格-埃利森综合征、药物引起的溃疡、与感染或其他病原体相关的溃疡)、消化疾病、吸收不良综合征、短肠综合征(short-bowel syndrome)、盲管综合征(cul-de-sac syndrome)、炎性肠病(例如，克罗恩病(Crohns disease)和溃疡性结肠炎)、口炎性腹泻(celiac sprue)(例如，由麸质引起的肠下垂(enteropathy)或乳糜泻引起)、热带口炎性腹泻、低丙种球蛋白血症口炎性腹泻，以及化学疗法和/或放射疗法引起的粘膜炎和腹泻(diarrhea)。一些上述疾病、病症和紊乱可以以与低度炎症有关为特征。
在一些实施方案中，本发明提供了一种核酸分子，其包含编码本发明的GLP-2类似物的核酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了一种表达载体，其包含核酸分子，所述核酸分子包含与指导GLP-2类似物表达的控制序列组合的编码本发明GLP-2类似物的核酸序列。在一些实施方案中，本发明提供了用所述表达载体转化的宿主细胞。
在一些实施方案中，本发明提供了产生本发明的GLP-2类似物的方法，所述方法包括在适于表达的条件下培养表达GLP-2类似物的宿主细胞以及纯化由此产生的GLP-2类似物。
在一些实施方案中，本发明的核酸分子、本发明的表达载体或本发明的宿主细胞可用于治疗。
在一些实施方案中，本发明提供了本发明的核酸分子、本发明的表达载体或本发明的宿主细胞在制备用于治疗和/或预防低度炎症之药物中的用途。在一些实施方案中，所述低度炎症是局部或全身性的，并且可包括例如代谢综合征(最广泛的定义)、肥胖(例如，腹部肥胖)、糖尿病、心血管疾病、胃肠炎症、抑郁症、阿尔茨海默病、关节炎、高血压、血脂异常和中风，食道上消化道、胃、十二指肠、小肠、结肠和直肠中的胃肠紊乱，包括任何病因的溃疡(例如，消化性溃疡、佐林格-埃利森综合征、药物引起的溃疡、与感染或其他病原体相关的溃疡)、消化紊乱、吸收不良综合征、短肠综合征、盲管综合征、炎性肠病(例如，克罗恩病和溃疡性结肠炎)、口炎性腹泻(例如，由麸质引起的肠下垂或乳糜泻引起)、热带口炎性腹泻、低丙种球蛋白血症口炎性腹泻，以及化学疗法和/或放射疗法引起的粘膜炎和腹泻。
在一些实施方案中，本发明提供了通过施用有效量的本发明的GLP-2类似物、本发明的核酸分子、本发明的表达载体或本发明的宿主细胞来在有此需要的患者中治疗胃肠相关紊乱(例如，胃或肠)的方法。在一些实施方案中，所述胃肠相关疾病是低度炎症。所述低度炎症可以是局部或全身性的，并且可包括代谢综合征、肥胖(例如，腹部肥胖)、糖尿病、心血管疾病、胃肠炎症、抑郁症、阿尔茨海默病、关节炎、高血压、血脂异常和中风，食道上消化道、胃、十二指肠、小肠、结肠或直肠中的胃肠紊乱，包括任何病因的溃疡(例如，消化性溃疡、佐林格-埃利森综合征、药物引起的溃疡、与感染或其他病原体相关的溃疡)、消化紊乱、吸收不良综合征、短肠综合征、盲管综合征、炎性肠病(例如，克罗恩病和溃疡性结肠炎)、口炎性腹泻(例如，由麸质引起的肠下垂或乳糜泻引起)、热带口炎性腹泻、低丙种球蛋白血症口炎性腹泻，以及化学疗法和/或放射疗法引起的粘膜炎和腹泻。
在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗性药盒，其包含癌症化学疗法药物和本发明的GLP-2类似物、本发明的核酸分子、本发明的表达载体或本发明的宿主细胞，其分别任选地与可药用载体组合。
附图简述
图1示出了GLP-1和GLP-2对生理途径的影响(修改自Cani等，Pharmacology andTherapeutics 130(2011)202-212)。
图2示出了施用化合物12或载剂对口服葡萄糖耐量试验(oral glucosetolerance test，OGTT)的影响。在葡萄糖负荷(challenge)前1小时，取得基线测量值并且施用化合物12/载剂。(A)实验期间的血糖水平，(B)血糖测量值的AUC。
图3示出了施用化合物7或载剂对肠湿重的影响。连续四天每天一次用化合物7或载剂处理动物，并在第5天，取下小肠并称重。
图4示出了施用测试化合物7或施用载剂2周对肠重量的影响。(A)小肠湿重，(B)大肠湿重。
图5示出了施用测试化合物7或施用载剂2周对葡萄糖稳态的影响。将动物禁食过夜，抽血以分析(A)空腹血糖、(B)空腹血浆胰岛素和(C)稳态模型评估胰岛素抗性(HOMA-IR)。
发明详述
除非本文另外定义，否则本申请中使用的科学和技术术语将具有本领域普通技术人员通常理解的含义。通常，本文所述化学、分子生物学、细胞和癌症生物学、免疫学、微生物学、药理学以及蛋白质和核酸化学相关使用的命名和技术是本领域中公知并且经常使用的那些。
本申请引用的所有出版物、专利和公开的专利申请均明确地通过引用并入本文。在矛盾的情况下，以本说明书(包括其特定的定义)为准。
本文描述的本发明每一个实施方案均可单独使用或与本发明的一个或更多个其他实施方案组合使用。
定义
除非另有说明，为在上文书面描述中使用的具体术语提供以下定义。
在整个本说明书中，词语“包括”或变体如“包含”或“含有”应理解为意指包含指定的整体(或组分)或整体(或组分)的组，但不排除任何其他整体(或组分)或整体(或组分)的组。
无量词修饰的名词均包括复数形式，除非上下文明确地另外说明。
术语“包括”用于指“包括但不限于”。“包括”和“包括但不限于”可互换地使用。
术语“患者”、“对象”和“个体”可互换地使用，均指人或非人的动物。这些术语包括哺乳动物，例如人、灵长类、家畜(例如，牛、猪)、宠物(例如，狗、猫)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。
本发明上下文中的术语“溶剂合物”是指溶质(在本文中，为根据本发明的肽缀合物或其可药用盐)和溶剂之间以限定化学计量形成的复合物。在这一点上，溶剂可以是例如水、乙醇或其他可药用的通常为小分子的有机物质，例如但不限于乙酸或乳酸。当讨论的溶剂是水时，这样的溶剂合物通常称为水合物。
本发明上下文中使用的“激动剂”是指激活所讨论的受体类型的物质(配体)。
在整个说明书和权利要求书中，使用天然氨基酸的常规单字母和三字母代码以及其他α-氨基酸的普遍接受的三字母代码，例如肌氨酸(Sar)、正亮氨酸(Nle)和α-氨基异丁酸(Aib)。本发明肽中的所有氨基酸残基优选具有L构型。但是也可存在D构型氨基酸。
本文中公开的序列是在序列的氨基末端(N末端)引入“Hy-”部分并且在序列的羧基末端(C末端)引入“-OH”部分或“-NH2”部分的序列。在这种情况下，除非另外说明，否则所讨论序列的N末端的“Hy-”部分是指氢原子(例如，式I和Ia中的R1＝Hy-，相当于在N末端存在游离伯氨基或仲氨基)，而序列C末端的“-OH”或“-NH2”部分分别指羟基(例如，式I和Ia中的R2＝OH，相当于在C末端存在羧基(COOH))或氨基(例如，式I和Ia中的R2＝NH2，相当于在C末端存在羧基酰胺(CONH2)基团。在本发明的每一种序列中，C末端“-OH”部分可被C末端“-NH2”部分取代，反之亦然。
本文使用的“保守取代”是指属于天然人GLP-2肽序列的某位的氨基酸残基已经被属于下表定义的相同组(I、II、III、IV、V、1、2、3)的氨基酸残基取代：
本文使用的“非保守”取代意指除天然人GLP-2序列的氨基酸残基的保守取代以外的任何取代，例如，用非蛋白质非天然氨基酸(Sar、Nle、Aib)取代或用不属于同一组的氨基酸取代。
在本发明的一些实施方案中，本发明化合物具有至少一种GLP-2和一种GLP-1生物活性。示例性活性包括降低肠的通透性和改变肠中的炎症。这可以在体内试验中评估，例如实施例中所述，其中在试验动物已用GLP-2类似物处理或暴露于GLP-2类似物后测定肠或其一部分的质量和通透性。
在一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物具有与野生型GLP-2(1-33)相比至少60％的氨基酸序列同一性，所述野生型GLP-2(1-33)具有序列
His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp
例如，本发明的GLP-2类似物可具有约50％至88％的序列同一性，例如约60％至80％，并且在某些实施方案中，至少63％、66％或69％的序列同一性。
相对于GLP-2多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为：在序列对齐并且引入缺口(如果需要的话)以获得最大百分比序列同一性后，并且不考虑作为序列同一性的一部分的任何保守取代，候选序列中与野生型GLP-2序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。本领域技术人员可使用本领域中公知的技术进行序列比对，例如使用公众可获得的软件如BLAST、BLAST2或Align软件。例如，参见Altschul等，Methods inEnzymology 266：460-480(1996)；Pearson等，Genomics-46：24-36，1997以及molbiol.soton.ac.uk/compute/align网站的比对程序。
本文使用以及根据本发明的百分比序列同一性可使用这些程序及其默认设置来确定。更一般地，技术人员可容易地确定用于确定比对的合适参数，包括为了在进行比较的全长序列上取得最大对齐所需的任何算法。
在本发明的一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物在X2、X3、X5、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X19、X20、X21、X24、X27、X28、X29、X30、X31、X32和X33位包括超过一个取代(即，相对于上文给出的野生型GLP-2序列有超过一个取代)。
在本发明的一些实施方案中，本发明的GLP-2类似物在X2、X3、X5、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X15、X16、X17、X20、X21、X24、X27、X28、X29、X30、X31、X32和X33位包括超过一个取代(即，相对于上文给出的野生型GLP-2序列具有超过一个取代)。
在一些实施方案中，X28、X29、X30、X31、X32和X33位的氨基酸残基任选地缺失。
不受理论的约束，我们认为在对应于天然GLP-2肽序列的17位的位置处替代天然GLP-2肽序列中发现的Leu的极性或带电残基(Gln、Lys或Glu)可与GLP-1受体相互作用并激活GLP-1受体。因此，在17位的极性或带电氨基酸可改变GLP-2肽或其类似物的受体选择性，产生既激活GLP-1受体又激活GLP-2受体的双激动剂肽。
不受理论的约束，我们认为在16位处的小氨基酸残基(例如，Gly、Ser或Ala)对于为GLP-2肽类似物引入GLP-1受体活性或增强其GLP-1受体活性可为优选的。然而，也可用其他氨基酸取代来获得增强的GLP-1受体活性，只要17位的氨基酸是极性的或带电的即可。
在本发明的一些实施方案中，上述GLP-2类似物包含与12、14、16、17、19、20、24、27、28和32位中的一个或更多个位缀合的亲脂性取代基。
在本发明的一些实施方案中，上述GLP-2类似物包含与12、16、17、20、24、27、28和32位中的一个或更多个位缀合的亲脂性取代基。
在本发明的一个优选的实施方案中，上述GLP-2类似物包含与16、17、20和24位中的一个或更多个位缀合的亲脂性取代基。
以下描述了本发明的示例性化合物(来源于式I、式Ia或式II)，其中所述化合物可如对于R1和R2所描述的在N末端和C末端处被修饰，并且包括其可药用盐或衍生物：
Hy-H-Aib-DGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD-OH；(化合物1)
Hy-HGDGSFSDEMNTILDNKAARDFINWLIQTKITD-OH；(化合物2)
Hy-HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK-NH2；(化合物3)
Hy-HGDGSFSSEMNTILDSQAARDFINWLIQTKITD-OH；(化合物4)
Hy-HGEGTFTSDLSKQMEGQAVRDFIEWLIQTKITD-OH；(化合物5)
Hy-HGEGTFTSDLSKQMESKAARDFIEWLIQTKITD-OH；(化合物6)
Hy-HGDGSFSSELATILDGKAARDFINWLIQTKITD-OH；(化合物7)
Hy-HGEGTFTSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD-OH；(化合物8)
Hy-HGEGSFSSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD-OH；(化合物9)
Hy-H-Aib-DGSFSDELNTILDGKAARDFINWLIQTK-NH2；(化合物10)
Hy-HGDGSFSSELATILDGQAARDFIAWLIQTKITD-OH；(化合物11)
Hy-HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK-NH2；(化合物12)
Hy-HGEGSFSSDLSTILEGKAARDFIEWLIQTKITD-OH(化合物13)
在一些实施方案中，本发明提供了本发明的GLP-2类似物用于制备用于治疗和/或预防胃肠炎症(例如，糖尿病相关低度胃肠炎症)之药物的用途。
在一些实施方案中，本发明提供了包含编码本文限定的GLP-2类似物的核酸序列的核酸分子。
在另一个方面，本发明提供了包含任选地与指导上述核酸序列表达的序列组合的上述核酸序列的表达载体，以及经所述表达载体转化的宿主细胞。优选所述宿主细胞能够表达和分泌所述GLP-2类似物。在另一个方面，本发明提供了产生GLP-2类似物的方法，所述方法包括在适于表达所述GLP-2类似物的条件下培养所述宿主细胞并纯化由此产生的GLP-2类似物。
本发明还提供了本发明的核酸、本发明的表达载体或本发明的能够表达和分泌GLP-2类似物的宿主细胞，其用于治疗。应理解的是，所述核酸、表达载体和宿主细胞可用于治疗本文描述的任何可用GLP-2类似物本身治疗的紊乱。因此，提到的包含本发明的GLP-2类似物的治疗组合物或施用本发明的GLP-2类似物应解释为涵盖施用本发明的核酸、表达载体或宿主细胞，除非上下文另外要求。
在一些实施方案中，本发明提供了本文限定的核酸分子、表达载体或宿主细胞在制备用于治疗和/或预防胃肠炎症之药物中的用途。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗糖尿病相关低水平胃肠炎症的方法。
在一些实施方案中，本发明提供了在有此需要的患者中治疗或预防糖尿病相关低水平胃肠炎症的方法，所述方法包括施用有效量的本发明的核酸、表达载体或宿主细胞。
如上所述，本发明的GLP-2类似物与天然GLP-2相比具有一个或更多个氨基酸的取代、缺失、倒置或添加。该限定也包括同义术语GLP-2模拟物和/或GLP-2激动剂。另外，本发明的类似物可在其一个或更多个氨基酸侧基、α-碳原子、末端氨基或末端羧基上另外具有化学修饰。化学修饰包括但不限于添加化学部分、产生新键和移除化学部分。氨基酸侧基的修饰包括但不限于赖氨酸ε-氨基的酰化，精氨酸、组氨酸或赖氨酸的N-烷基化，谷氨酸或天冬氨酸羧酸基团的烷基化以及谷氨酰胺或天冬酰胺的脱酰胺作用。N-末端氨基的修饰包括但不限于脱氨基、N-低级烷基、N-二-低级烷基和N-酰基修饰。C-末端羧基的修饰包括但不限于酰胺、低级烷基酰胺、二烷基酰胺和低级烷基酯修饰。优选地，低级烷基是C1-C4烷基。可用本领域技术人员已知的保护基团保护侧链中的一个或更多个官能团或末端基团。在一些实施方案中，氨基酸的α-碳可以单甲基化或二甲基化。
当存在时，氧化稳定的Met取代氨基酸意指选自以下的氨基酸：Met(O)(甲硫氨酸亚砜)、Met(O)2(甲硫氨酸砜)、Val、Ile、Ser，并且优选Ile、Leu、Val、Lys或Ser。
亲脂性取代基
本发明上下文中使用的化合物的一个或更多个氨基酸侧链可与亲脂性取代基Z1缀合。不希望受理论的约束，我们认为亲脂性取代基与血流中的白蛋白结合，从而使本发明上下文中使用的化合物免于酶促降解，这可延长所述化合物的半衰期。亲脂性取代基也可以调节化合物的效力，例如，相对于GLP-2受体和/或GLP-1受体的效力。
在某些实施方案中，仅一个氨基酸侧链与亲脂性取代基缀合。在另一些实施方案中，两个氨基酸侧链各自与亲脂性取代基缀合。在另一些实施方案中，三个或甚至更多个氨基酸侧链各自与亲脂性取代基缀合。当化合物包含两个或更多个亲脂性取代基时，这些亲脂性取代基可以是相同取代基或不同取代基。
亲脂性取代基Z1可以与氨基酸侧链中的原子共价结合，或者替选地，可以通过一个或更多个间隔物Z2与氨基侧侧链缀合。
在此使用术语“缀合”来描述一个可辨别的化学部分与另一个可辨别的化学部分的共价结合，以及这样的部分之间的结构关系。其不应理解为任何具体的合成方法。使用一个或更多个间隔物Z2(当存在时)来提供所述化合物与所述亲脂性部分之间的间隔。
亲脂性取代基可通过酯、磺酰基酯、硫酯、酰胺或磺酰胺与氨基酸侧链或间隔物连接。因此，应理解，亲脂性取代基可包括形成所述酯、磺酰基酯、硫酯、酰胺或磺酰胺的一部分的酰基、磺酰基、N原子、O原子或S原子。优选地，亲脂性取代基中的酰基与氨基酸侧链或间隔物形成酰胺或酯的一部分。亲脂性取代基可包含具有10至24个碳(C)原子的烃链，例如，10至22个C原子，例如10至20个C原子。优选地，其具有至少11个C原子，并且优选地，其具有18个C原子或少于18个C原子。例如，所述烃链可包含12、13、14、15、16、17或18个碳原子。所述烃链可以是直链或支链，并且可以是饱和的或不饱和的。由以上讨论将理解，烃链优选地被以下部分取代，所述部分将形成与氨基酸侧链或间隔物的部分连接，例如酰基、磺酰基、N原子、O原子或S原子。最优选地，烃链被酰基取代，并因此所述烃链可以是烷酰基(alkanoyl group)的一部分，例如十二酰基、2-丁基辛酰基、十四酰基、十六酰基、十七酰基、十八酰基或类二十酰基(eicosanoyl)。
如上所述，亲脂性取代基Z1可通过一个或更多个间隔物Z2与氨基酸侧链缀合。当存在时，间隔物与亲脂性取代基和氨基酸侧链连接。间隔物可独立地通过酯、磺酰基酯、硫酯、酰胺或磺酰胺与亲脂性取代基和氨基酸侧链连接。因此，其可包括两个独立地选自酰基、磺酰基、N原子、O原子或S原子的部分。间隔物可由线性C1-10烃链构成，或更优选线性C1-5烃链。另外，间隔物可被选自C1-6烷基、C1-6烷基胺、C1-6烷基羟基和C1-6烷基羧基的一个或更多个取代基取代。
间隔物可以是例如任意天然或非天然氨基酸的残基。例如，间隔物可以是以下氨基酸的残基：Gly、Pro、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Cys、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Gln、Asn、α-Glu、γ-Glu、ε-Lys、Asp、Ser、Thr、Gaba、Aib、β-Ala(即，3-氨基丙酰基)、4-氨基丁酰基、5-氨基戊酰基、6-氨基己酰基、7-氨基庚酰基、8-氨基辛酰基、9-氨基壬酰基、10-氨基癸酰基或8-氨基-3，6-二氧杂辛酰基。在某些实施方案中，间隔物是以下氨基酸的残基：Glu、γ-Glu、ε-Lys、β-Ala(即，3-氨基丙酰基)、4-氨基丁酰基、8-氨基辛酰基或8-氨基-3，6-二氧杂辛酰基。在本发明中，γ-Glu和异Glu可互换地使用。与亲脂性取代基所缀合的氨基酸侧链可以是Glu、Lys、Ser、Cys、Dbu、Dpr或Orn残基的侧链。例如，其可以是Lys、Glu或Cys残基的侧链。当两个或更多个侧链携带有亲脂性取代基时，其可独立地选自这些残基。因此，氨基酸侧链包括羧基、羟基、巯基、酰胺或胺基，以与间隔物或亲脂性取代基形成酯、磺酰基酯、硫酯、酰胺或磺酰胺。
包含亲脂性部分Z1和间隔物Z2的亲脂性取代基的实例在下式中示出：
其中，Lys残基的侧链通过酰胺键与γ-Glu间隔物(Z2)共价连接。十六酰基(Z1)通过酰胺键与γ-Glu间隔物共价连接。与Lys残基缀合的亲脂性部分和间隔物的这种组合可用简写符号K(十六酰基-γ-Glu)表示，例如当示于具体化合物的式中时。γ-Glu也可称为异Glu，而十六酰基也可称为棕榈酰基。因此，很显然符号(十六酰基-γ-Glu)等同于符号(异Glu(Palm))或(异Glu(棕榈酰基))，如在PCT/GB2008/004121中使用的。
本领域技术人员将熟知制备本发明上下文中使用的化合物的合适的技术。例如，合适的化学过程参见WO98/08871、WO00/55184、WO00/55119、Madsen等，J.Med.Chem.50：6126-32(2007)和Knudsen等，J.Med Chem.43：1664-1669(2000)，其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本发明的GLP2类似物具有与对应于天然GLP-2的12、14、16、17、19、20、24、27、28和32位的一个或更多个位置处的氨基酸缀合的上述亲脂性取代基。
在一些实施方案中，本发明的GLP2类似物具有与对应于天然GLP-2的12、16、17、20、24、27、28和32位的一个或更多个位置处的氨基酸缀合的上述亲脂性取代基。
应理解，本发明的肽也可以以盐或其他衍生物的形式提供。盐包括可药用盐，例如酸加成盐和碱式盐。酸加成盐的实例包括盐酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、苹果酸盐和乙酸盐。碱式盐的实例包括其中阳离子选自以下的盐：碱金属，例如钠和钾，碱土金属，例如钙，以及铵离子+N(R3)3(R4)，其中，R3和R4独立地指代任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。可药用盐的另一些实例描述在以下文献中：“Remington′sPharmaceutical Sciences”，第17版，编辑Alfonso R.Gennaro(Ed.)，Mark PublishingCompany，Easton，PA，U.S.A.，1985和更新版本，以及Encyclopaedia of PharmaceuticalTechnology中。
本发明的GLP-2类似物的其他衍生物包括：具有金属离子如Mn2+和Zn2+的配合物、酯例如体内可水解酯、游离酸或碱、水合物、前药或脂质。可使用本领域中公知的技术在所述化合物中存在的羟基或羧酸基团与合适的羧酸或醇反应伙伴之间形成酯。作为化合物之前药的衍生物在体内或体外可转变成母体化合物之一。通常，化合物的至少一种生物活性将在化合物的前药形式中降低，并且可通过转变前药被激活以释放化合物或其代谢物。前药的实例包括使用可原位移除以释放活性化合物或用于抑制体内的药物清除的保护基团。
具有1nM或更低、并且优选低于1nM的EC50值的GLP-2类似物定义为GLP-2激动剂。
本发明包括在以下实验中进一步描述的以下肽。
GLP-2类似物的合成
优选通过固相或液相肽合成来合成本发明的类似物。在这种情况下，本领域技术人员可参见PCT公开WO 98/11125和Synthetic Peptides(第二版)中的Fields，GB等，2002，″Principles and practice of solid-phase peptide synthesis″(通过引用并入本文)以及本文的实施例。
因此，可以用多种方式合成GLP-2类似物，包括例如包括以下步骤的方法：
(a)通过固相或液相肽合成来合成肽并且回收由此获得的合成肽；
(b)当肽由天然氨基酸构成时，在宿主细胞中表达编码所述肽的核酸构建体并且从宿主细胞培养物中回收表达产物；
(c)当肽由天然氨基酸构成时，对编码所述肽的核酸构建体实行无细胞体外表达并且回收表达产物；或
组合方法(a)、(b)和(c)以获得肽片段，随后连接(join)(例如，结合(ligate))所述片段以获得肽并且回收所述肽。
因此，对于一些本发明的类似物，可有利地进行基因工程技术。可以在例如肽足够大(或作为融合构建体产生)时以及在肽仅包含可翻译自活生物体中的RNA的天然氨基酸时如此进行。
为了进行重组基因技术，编码本发明肽的核酸片段是重要的化学产物。因此，本发明的另一个方面提供了包含编码本发明GLP-2类似物之核酸序列的核酸分子，其中所述肽优选地由天然氨基酸构成。本发明的核酸片段可以是DNA片段或RNA片段。
可以将本发明的核酸片段常规地插入到合适的载体中以形成携带本发明的核酸片段的克隆或表达载体。这些新载体也是本发明的一部分。关于构建本发明这些载体的细节将在下文的转化细胞和微生物中描述。根据目的和应用类型，载体可以是质粒、噬菌体、粘粒、小染色体或病毒的形式，但是仅在某些细胞中瞬时表达的裸露DNA也是重要的载体。本发明的优选的克隆和表达载体(质粒载体)能够自我复制，从而能够将高拷贝数用于高水平表达或高水平复制用于随后克隆的目的。
本发明的载体总体上包括5′至3′方向上并且以有效连接的以下特征：用于驱动本发明的核酸片段表达的启动子，任选地编码使得能够分泌前导肽(分泌到细胞外相中或适用时分泌到周质(periplasma)中)或用于多种用途(例如，组合分泌、纯化标签和酶促修剪(trim)以校正肽或将多肽片段整合到膜中)的前导肽的核酸序列，编码本发明肽的核酸片段和任选地编码终止子的核酸序列。当对生产菌株或细胞系中的表达载体进行操作时，为了使经转化的细胞遗传稳定，优选地在引入到宿主细胞中时载体被整合到宿主基因组中。
本发明的载体可用于转化宿主细胞以产生本发明的GLP-2类似物。这种经转化细胞(其也为本发明的一部分)可以是用于对本发明的核酸片段和载体进行增殖或用于重组产生本发明肽的经培养细胞或细胞系。
本发明的优选的经转化细胞是微生物，例如细菌，包括例如来自以下属的细菌：埃希氏菌属(例如，E.coli)、芽孢杆菌属(Bacillus)(例如，枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis))、沙门氏菌属(Salmonella)或分支杆菌属(Mycobacterium)(优选非病原的，例如M.bovis BCG))、酵母(例如，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))和原生动物。或者，转化细胞可来源于多细胞生物体，例如真菌细胞、昆虫细胞、植物细胞或哺乳动物细胞(例如，来源于人的细胞)。为了克隆和/或优化表达，优选地，转化细胞能够复制本发明的核酸片段。表达本发明的核酸片段的细胞优选地可用于本发明的实施方案。其可用于小规模或大规模制备本发明的肽。
当通过转化细胞产生本发明的肽时，方便但并非必需的是，细胞将表达产物输出到培养基中或将表达产物携带在转化细胞的表面上。
当已经鉴定了有效的生产细胞时，在其基础上优选的是，建立携带本发明的载体并表达编码所述肽的核酸片段的稳定细胞系。优选地，这种稳定的细胞系分泌或携带本发明的肽，从而有助于对其进行纯化。
通常，与宿主一起使用包含源于与所述宿主细胞相容之物种的复制子和控制序列的质粒载体。载体通常携带复制位点和标记序列，其能够提供在转化细胞中的表型选择。例如，通常可以使用pBR322(但是存在许多其它可用的质粒)来转化大肠杆菌，这是一种来自大肠杆菌物种的质粒(参见，例如，Bolivar等，1977)。pBR322质粒包含氨苄青霉素和四环素抗性基因，因此提供了用于识别转化细胞的简单手段。pBR质粒或其他微生物质粒或噬菌体还必须包含或被修饰以包含能够用于原核微生物表达的启动子。
在原核生物重组DNA构建体中最常用的那些启动子包括β-内酰胺酶(青霉素酶)和乳糖启动子系统(Chang等，1978；Itakura等，1977；Goeddel等，1979)和色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel等，1979；EP 0 036 776 A)。尽管这些是最常用的，但是也已经发现并使用了其他微生物启动子，关于其核苷酸序列的详细情况已经公开，本领域技术人员能够将其与质粒载体功能性连接(Siebwenlist等，1980)。
除原核生物之外，也可以使用真核微生物，例如酵母培养物。在这些实施方案中，启动子也必须能够驱动表达。酿酒酵母或普通面包酵母是最常用的真核微生物，但是若干其他菌株也是通常可以使用的。例如，也可以使用Pichia stiptis和粟酒裂殖酵母。为了在酵母中表达，通常使用质粒例如YRp7(Stinchcomb等，1979；Kingsman等，1979；Tschemper等，1980)。这种质粒已经包含trp1基因，其提供针对不能在色氨酸上生长的突变酵母菌株(例如ATCC No.44076或PEP4-1)的选择标记(Jones，1977)。酵母宿主细胞基因组特有的trp1损伤的存在则提供了用于通过在不含色氨酸的情况下生长来检测转化的有效环境。
酵母载体中合适的启动序列的启动子包括3-磷酸甘油酸激酶(Hitzman等，1980)或其他糖酵解酶(Hess等，1968；Holland等，1978)的启动子，例如烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、丙糖磷酸异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶。在合适的表达质粒的构建中，与这些基因有关的终止序列也连接在表达载体期望被表达之序列的3′中以提供mRNA的多腺苷酸化和终止。
另外一些具有通过生长条件来控制的转录的额外优点的启动子是醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、与氮代谢相关的降解酶和上述甘油醛-3-磷酸脱氢酶以及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子区。任何包含酵母相容启动子、复制起点和终止序列的质粒载体都是合适的。
除微生物之外，也可以使用来自多细胞生物体的细胞培养物作为宿主。原则上，无论是来自脊椎动物或无脊椎动物培养物，任何这样的细胞培养物都是可行的。但是，最感兴趣的是脊椎动物细胞，近年来在培养物中繁殖脊椎动物细胞(组织培养)已经成为常规程序(Tissue Culture，1973)。这种可用的宿主细胞系的实例是VERO和海拉细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系和W138、BHK、COS-7293、草地贪夜蛾(SF)细胞(可由Protein Sciences，1000Research Parkway，Meriden，CT 06450，U.S.A.以及Invitrogen市购的完整的表达系统)、可由Invitrogen，PO Box2312，9704 CH Groningen，The Netherlands市购的黑腹果蝇(D.melanogaster)细胞系S2，以及MDCK细胞系。
这些细胞的表达载体通常包含(如果必要的话)复制起点、位于待表达基因之前的启动子以及任何必需的核糖体结合位点、RNA剪接位点、多腺苷酸化位点和转录终止序列。
对于哺乳动物细胞中的使用，通常由病毒物质提供对于表达载体的控制功能。例如，通常使用来源于多瘤病毒、腺病毒2和最常用的猿肾病毒40(SV40)的启动子。SV40病毒的早期和晚期启动子特别有用，因为其二者均可作为还包含有SV40病毒复制起点的片段容易地获自病毒(Fiers等，1978)。还可使用较小或较大的SV40片段，只要包含位于病毒复制起点中由HindIII位点向BgII位点延伸的约250bp序列即可。另外，还可以(或通常期望)使用通常与期望的基因序列关联的启动子或控制序列，只要这些控制序列与宿主细胞系统相容即可。
可通过构建包含外源起点(例如，可来源于SV40或其他病毒(例如，多瘤病毒、腺病毒、VSV和BPV))的载体或通过宿主细胞染色体复制机制来提供复制起点。如果将载体整合到宿主细胞染色体中，则后者通常是足够的。
为了在重组体产生过程中取得满意的产量，可有利地将类似物制备为融合蛋白，其可通过将肽与可充当亲和标签(为了易于纯化)的融合伴侣融合和/或具有多个重复的肽来实现。这些方法需要存在适合肽酶的切割位点。技术人员将知道如何定制潜在的基因构建体。
在重组体制备之后，可通过本领域中普遍已知的方法对本发明的肽进行纯化，所述方法包括多步色谱(例如，离子交换色谱、尺寸排阻色谱以及亲和色谱技术)。
或者，可在无细胞系统中体外制备由天然氨基酸构成的肽。这在肽可能对推定宿主细胞有毒的情况下尤其有利。因此，本发明还构想使用无细胞体外翻译/表达以制备本发明的肽。在这种情况下，可参考例如来自Ambion Inc.，2130 Woodward，Austin，TX 78744-1832，USA的市售体外翻译试剂盒、材料和技术文件。
最后，当然可以将可用的方法组合以制备例如半合成类似物。在这种安排中，使用至少两个独立的步骤或方法来制备肽片段，然后连接(结合)所述片段以获得最终的肽产物。
生物活性
通常，本发明的GLP-2类似物具有对GLP-1受体和GLP-2受体二者的活性。
可使用EC50值作为对于给定受体的激动剂效力的数值量度。EC50值是在特定测定中获得一半化合物最大活性所需的化合物浓度的量度。对特定受体的EC50比同一测定中参考化合物的EC50低的化合物可被认为对所述受体比参考化合物具有更高效力。
本发明的GLP-2类似物通常比野生型人GLP-2(hGLP-2)具有更高的对GLP-1受体(例如人GLP-1受体)的活性。因此，在对于GLP-1活性的任何给定测定中，GLP-2类似物将具有比野生型人GLP-2或[Gly2]-hGLP-2(即，在第2位具有甘氨酸的人GLP-2，也程为替度鲁肽(teduglutide))低的EC50。因此，当在相同的GLP-1活性测定中进行评估时，GLP-2类似物的EC50与hGLP-2或[Gly2]-hGLP-2的EC50的比值通常小于1。其可以是例如小于0.5或小于0.1，或小于0.01。
例如，当使用实施例1中所述GLP-1受体效力测定进行评估时，对GLP-1受体的EC50可小于100nM、小于50nM、小于10nM，或更优选地小于1.0nM、小于0.9nM、小于0.8nM、小于0.7nM、小于0.6nM、小于0.5nM、小于0.4nM、小于0.3nM、小于0.2nM、小于0.1nM、小于0.09nM、小于0.08nM、小于0.07nM、小于0.06nM、小于0.05nM、小于0.04nM、小于0.03nM、小于0.02n、小于0.01nM、小于0.009nM、小于0.008nM、小于0.007nM、小于0.006nM或小于0.005nM。
本发明的GLP-2类似物保持GLP-2活性，但是其对GLP-2受体的效力无需与hGLP-2或[Gly2]-hGLP-2的效力相同。其可具有较低效力，只要保持足够水平的GLP-2活性即可。在对于GLP-2活性的任何给定测定中，GLP-2类似物可具有比野生人GLP-2或[Gly2]-hGLP-2更低或更高的EC50。当在相同的GLP-2活性测定中进行评估时，GLP-2类似物的EC50与相同测定中hGLP-2或[Gly2]-hGLP-2的EC50的比值可以例如为小于200、小于100、小于10、小于5、小于1、小于0.1、小于0.5或小于0.1。
还可能期望将本发明的类似物对GLP-2和GLP-1受体的EC50值的比值与hGLP-2或[Gly2]-hGLP-2的进行比较。优选地，对于任何给定的一对GLP-2和GLP-1测定，本发明类似物的EC50[GLP-2]/EC50[GLP-1]大于同一测定中hGLP-2或[Gly2]-hGLP-2的等同比值，例如本发明类似物的该比值可以比hGLP-2或[Gly2]-hGLP-2的比值大至少2倍、至少5倍或至少10倍。
药物组合物和施用
可将本发明的GLP-2类似物或者其盐或衍生物配制成准备用于储存或施用的药物组合物，并且其在可药用载体中包含治疗有效量的本发明的GLP-2肽或者其盐或衍生物。
本发明化合物的治疗有效量将取决于施用途径、被治疗的哺乳动物类型和所考虑的特定哺乳动物的身体特性。决定该量的这些因素及其相互关系是医学领域技术人员公知的。可对该量和施用方法进行调节以获得最佳效力以便将肽递送到大肠，但是其取决于因素如体重、饮食、并用药物和医学领域技术人员公知的其他因素。
本发明范围内还提供了药物组合物，其中本发明的GLP-2类似物或其盐以有效治疗或预防胃和肠相关紊乱的量存在。
可使用有机碱和无机碱形成具有酸性部分的本发明化合物的可药用盐。合适与碱形成的盐包括金属盐、例如碱金属或碱土金属盐，如钠盐、钾盐或镁盐；铵盐和有机胺盐，例如与吗啉、硫代吗啉、哌啶、吡咯烷，单、二或三低级烷基胺(例如，乙基-叔丁基、二乙基、二异丙基、三乙基、三丁基-或二甲基丙基胺)或者单、二或三羟基低级烷基胺(例如，单、二或三乙醇胺胺)形成的那些。也可以形成内部盐。类似地，当本发明化合物包含碱性部分时，可使用有机酸和无机酸来形成盐。例如，可由以下酸形成盐：乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、邻苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸和樟脑磺酸以及其他已知的可药用酸。也可与氨基酸如赖氨酸、甘氨酸和苯丙氨酸来形成氨基酸加成盐。
对本领域技术人员来说很明显的是，本发明的肽或药物组合物的“治疗有效量”将根据年龄、体重和被治疗的哺乳动物的物种、所使用的具体化合物、具体施用方式和预期效果以及治疗的适应症而变化。由于决定该量的这些因素及其相互关系是公知的，所以决定治疗有效剂量的水平，即决定获得预防和/或治疗本文所述肠和胃相关疾病以及本文公开的其他医学适应症的期望结果所需的量将在本领域技术人员的能力范围之内。
如本文使用的，“治疗有效量”是降低给定病症或病理的症状，并且优选地使具有病症或病理的个体中的生理响应正常化的量。症状的降低或生理应答的正常化可使用本领域中的常规方法确定，并且可随着给定的病症或病理而改变。在一个方面，一种或更多种本发明的GLP-2类似物或包含一种或更多种本发明的GLP-2类似物的药物组合物的治疗有效量是使可测量的生理参数恢复到与无病症或病理的个体中的参数基本相同的量(优选在该值的30％以内，更优选20％以内，更优选10％以内)。
在本发明的一个实施方案中，以低剂量水平开始施用本发明的化合物或治疗组合物，并提高剂量水平直到获得预防/治疗相关医学适应症如肠和胃相关疾病的预期效果为止。这可定义为治疗有效量。对于本发明的肽，其单独或作为治疗组合物的一部分时，这种剂量可以为约0.01mg/kg至100mg/kg体重，例如约0.01mg/kg至10mg/kg体重，例如10-100微克/kg体重。
对于治疗应用，可将本发明的GLP-2类似物与可药用并且适于通过所选施用途径递送肽的载体一起配制。为了本发明的目的，外周非肠道途径包括静脉内、肌内、皮下和腹膜内施用途径。本发明中使用的某些化合物还可适于通过经口、直肠内、鼻或下呼吸道施用。这些被称为非肠道途径。本发明的药物组合物包含本发明的GLP-2类似物或者其盐或衍生物以及可药用载体。合适的可药用载体是常规与基于肽药物一起使用的那些，例如稀释剂、赋形剂等。用于治疗应用的可药用载体是制药领域中公知的，描述在例如Remington’sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro编辑.1985)中。例如，可使用无菌盐水和微酸性或生理pH的磷酸盐缓冲盐水。合适的pH缓冲剂可以是磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、三/羟甲基)氨基甲烷(TRIS)、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、碳酸氢铵、二乙醇胺、组氨酸(其为优选缓冲剂)、精氨酸、赖氨酸或乙酸盐，或其混合物。在某些实施方案中，优选的缓冲范围是pH 4-8、pH 6.5-8、更优选pH 7-7.5。可在药物组合物中提供防腐剂，例如对-、邻-和间-甲酚，对羟基苯甲酸甲酯(methylparaben)、对羟基苯甲酸丙酯(propylparaben)、苯酚、苯甲醇、苯甲酸钠、苯甲酸、苄基-苯甲酸盐、山梨酸、丙酸、对羟基苯甲酸的酯。可在药物组合物中提供防止氧化、脱酰胺基、异构化、外消旋、环化、肽水解的稳定剂，例如抗坏血酸、蛋氨酸、色氨酸、EDTA、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和甘氨酸。还可在药物组合物中提供防止聚集、纤维化和沉淀的稳定剂，例如十二烷基硫酸钠、聚乙二醇、羧甲基纤维素、环状糊精。可在药物组合物中提供用于增溶或防止聚集的有机改性剂，例如乙醇、乙酸或乙酸盐及其盐。可在药物组合物中提供等张标志物，例如盐，如氯化钠或最优选的糖类，例如葡萄糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、蔗糖或其混合物。
可在本发明的药物组合物中提供洗涤剂，例如Tween 20、Tween 80、SDS、泊洛沙姆，如pluronic F-68、pluronic F-127。还可在药物组合物中提供染料和调味剂。在另一个实施方案中，提供了本发明的GLP-2类似物的可药用酸加成盐。还可使用助悬剂。
可在药物制剂中提供有机改性剂用于冻干产品的冻干，例如提供乙醇、叔丁醇、2-丙醇、乙醇、甘油和聚乙二醇。可在用于冻干的药物组合物中提供填充剂和等张标志物如盐，例如氯化钠、糖类，例如葡萄糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、蔗糖或其混合物、氨基酸(例如甘氨酸和谷氨酸)，或者赋形剂如半胱氨酸、卵磷脂或人血清白蛋白或其混合物。
可将本发明的药物组合物配制成以下剂型并使用：用于经口施用的片剂、胶囊剂或酏剂；用于经直肠施用的栓剂；用于注射施用的优选的无菌溶液剂或无菌散剂或混悬剂等。可调节剂量和施用方法以获得最佳效力，但其取决于因素如体重、饮食、并用药物，这些因素是技术人员能够认识到的。
当肠胃外施用时，例如当静脉内和皮下施用时，可将可注射药物组合物制备成常规形式，例如水性溶液剂或混悬剂；适于在临使用前重构的冻干固体形式或在注射之前液体中的混悬剂，或乳剂。
用于冻干产品重构的稀释剂可以例如选自上文所列缓冲剂或选自水、盐水、葡萄糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、蔗糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、半胱氨酸盐酸盐或注射用水，其添加有洗涤剂例如Tween 20、Tween80、泊洛沙姆(例如，Pluronic F-68或Pluronic F-127)、聚乙二醇，和/或添加有防腐剂例如对甲酚、邻甲酚和间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯酚、苯甲醇、苯甲酸钠、苯甲酸、苄基-苯甲酸盐、山梨酸、丙酸、对羟基苯甲酸的酯和/或添加有有机改性剂如乙醇、乙酸、柠檬素、乳酸或其盐。
另外，若需要，可注射药物组合物可包含少量无毒的辅助物质，例如湿润剂或pH缓冲剂。也可使用吸收增强制备物(例如，脂质体、洗涤剂和有机酸)。
在本发明的一个实施方案中，将所述化合物配制成用于通过输注施用，例如，当用作液体营养增补剂用于进行总胃肠外营养治疗的患者(例如，新生儿或患有恶病体质或厌食症的患者)，或通过注射施用，例如皮下、腹膜内或静脉内，因此用作无菌和无热原形式的水性溶液，任选地缓冲至生理可耐受pH，例如微酸性或生理pH。用于肌内施用的制剂可为基于植物油如菜籽油、玉米油或大豆油的溶液或混悬液。可通过抗氧化剂如BHA(叔丁基羟基茴香醚)和BHT(二叔丁基对甲酚)来使这些油基制剂稳定。
因此，本发明的GLP-2类似物可在载剂(例如蒸馏水)或盐水、磷酸盐缓冲盐水、5％葡萄糖溶液或油中施用。若需要，可通过引入溶解增强剂如洗涤剂和/或乳化剂来增强本发明的GLP-2类似物的溶解度。
可向注射用水性载体或载剂中补充一定量的凝胶来将GLP-2类似物储存在注射部位或其附近，从而在期望作用部位提供缓慢释放。或者还可以将凝胶剂(如透明质酸)用作储存剂(depot agent)。
本发明的肽化合物可单独使用，或与具有抗炎作用的化合物组合。不受理论的约束，这种组合疗法可加强本发明的肽类似物的有益治疗效果。
当然，最适合患者治疗的治疗剂量和方案将根据待治疗疾病或病症以及根据患者的体重和其他参数而变化。不希望受任何特定理论的限制，预期微克/kg或mg/kg范围的剂量以及较短或较长的治疗持续时间或治疗频率可产生有用的治疗结果，例如特别是小肠质量方面统计学上显著的增加。在一些情况下，治疗方案可包括施用适于预防在停止初始治疗后发生的组织衰退的维持剂量。可由通过本发明获得的结果来指导最适合人使用的剂量大小和给药方案，并且可在适当设计的临床试验中验证。
可通过常规方法确定有效剂量和治疗方案，在实验室动物中以低剂量开始，然后在剂量增加的同时监测效果，并且同样系统地改变给药方案。当确定用于给定对象的最优剂量时，临床医师可能考虑若干因素。这些考虑事项是技术人员已知的。
在一个实施方案中，根据本发明的GLP-2肽的人用剂量可以为约10微克/kg体重/天至约10mg/kg/天，优选约50微克/kg/天至约5mg/kg/天，最优选约100微克/kg/天至1mg/kg/天。
医学病症
本发明的GLP-2类似物可用作药物制剂来预防或治疗患有低度炎症(如局部或全身性低度炎症)的患者。低度炎症可包括但不限于：代谢综合征、肥胖(例如，腹部肥胖)、糖尿病、心血管疾病、胃肠炎症、抑郁症、阿尔茨海默病、关节炎、高血压、血脂异常和中风。胃肠紊乱包括食管的上胃肠道紊乱，可通过施用有效量的本发明的GLP-2类似物或本文所述它们的盐来治疗。胃肠相关紊乱包括任何病因的溃疡(例如消化性溃疡、佐林格-埃利森综合征、药物引起的溃疡、与感染或其他病原体相关的溃疡)、消化紊乱、吸收不良综合征、短肠综合征、盲管综合征、炎性肠病(例如，克罗恩病和溃疡性结肠炎)、口炎性腹泻(例如，由麸质引起的肠下垂或乳糜泻引起)、热带口炎性腹泻、低丙种球蛋白血症口炎性腹泻，以及化学疗法和/或放射疗法引起的粘膜炎和腹泻。
对于患有胃肠粘膜瘤或处于胃肠粘膜瘤的高风险之下的患者，可能希望选择化合物以便使降低的副作用如刺激或加剧胃肠粘膜瘤的风险降低或消除。
可用本发明的GLP-2类似物治疗的具体病症包括各种形式的口炎性腹泻，包括由对来自小麦的α-麦醇溶蛋白的毒性反应引起，并且可能是麸质引起的肠下垂或乳糜泻引起的口炎性腹泻，特点是小肠的绒毛(villae)显著损失；热带口炎性腹泻，其由感染引起，特点是绒毛局部变平；低丙种球蛋白血症口炎性腹泻，其通常在患有常见的易变性免疫缺陷或低丙种球蛋白血症的患者中观察到，特点是绒毛高度显著降低。可通过检查绒毛形态的肠组织活检、营养吸收的生化评估、非侵入式确定肠通透性、患者体重增加或通过与这些病症有关的症状的减轻来监控GLP-2类似物治疗的治疗效果。
本发明的GLP-2类似物可用作药物制剂来预防或治疗胃相关紊乱，包括任何病因的溃疡(例如，消化性溃疡、佐林格-埃利森综合征、药物引起的溃疡、与感染或其他病原体相关的溃疡)。
可利用本发明的GLP-2类似物治疗或可利用GLP-2类似物预防的其他病症除了上述疾病外还包括辐射肠炎、感染性或感染后肠炎以及癌症化学疗法或毒性制剂引起的小肠损伤。
GLP-2类似物还可用于治疗营养失调，例如恶病体质和厌食症。
本发明的一个具体实施方案涉及使用本发明的肽预防和/或治疗肠损伤和功能障碍。由于其快的增殖速率，小肠粘膜的干细胞对化学疗法的细胞毒性作用特别敏感(Keefe等，Gut 2000；47：632-7)。施用本发明的GLP-2肽激动剂可增强肠隐窝中的营养效果并快速提供新细胞来代替在化学疗法和/或辐射疗法之后受损的肠上皮细胞。施用本发明的GLP-2类似物所要取得的一个目的是降低进行化学疗法的患者胃肠损伤相关的发病率，同时提高对更具侵入性的化学疗法、放射疗法以及化学疗法和放射疗法的组合的耐受性。根据本发明，可向正在进行放射疗法或将要进行放射疗法的患者提供伴随的预防性或治疗性治疗。
抗癌化学疗法之后的胃肠粘膜炎是一个日益突出的问题，其一旦发生后就基本无法医治，只能由其逐渐恢复。利用常用抑制细胞生长的癌症药物5-FU和伊立替康进行的研究表明使用这些药物的有效化学疗法主要影响小肠的结构完整性和功能，而结肠较不敏感并且主要响应于增加的粘液形成(Gibson等，J Gastroenterol Hepatol.18(9)：1095-1100，2003；Tamaki等，J Int Med Res.31(1)：6-16，2003)。
在另一个实施方案中，本发明描述了治疗DPP-IV(二肽基肽酶-IV)介导的病症的方法，其通过向有此需要的患者施用有效量的GLP-2类似物或其盐来进行。这些疾病包括其中DPP-IV酶过表达的病症。
在一个实施方案中，可配制药物组合物以使得缓慢释放所述GLP-2类似物或者上述其盐或衍生物。
设想了通过施用有效量的本发明的GLP-2类似物或其盐可将本发明的肽用在治疗新生儿的方法中。通过使用本发明的肽激动剂，可克服因肠发育不足而喂养的新生儿的并发症。
在一些实施方案中，本发明描述了治疗DPP-IV(二肽基肽酶-IV)介导的病症的方法，其通过向有此需要的患者施用有效量的本发明的GLP-2类似物或其盐来进行。这些疾病包括其中DPP-IV酶过表达的病症。
实施例
提供了以下实施例来解释说明本发明的优选方面，这些实施例未意图限制本发明的范围。
一般肽合成
设备和合成策略
使用9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)作为N-α-氨基保护基团和用于侧链官能团(functionality)的合适的常见保护基团在装配有用于过滤的聚丙烯过滤器的聚乙烯容器中分批合成肽。
使用标准Fmoc化学在CEM Liberty Peptide Synthesizer上进行固相肽合成。将TentaGel S Ram树脂(1g；0.25 mmol/g)在使用前在NMP(10ml)中膨胀并且使用DCM和NMP在管和反应器之间转移。
偶联
将NMP/DMF/DCM(1∶1∶1；0.2M；5ml)中的Fmoc-氨基酸与HATU/NMP(0.5M；2ml)和DIPEA/NMP(2.0M；1ml)一起添加到CEM Discover微波单元中的树脂中。在使氮气鼓泡通过混合物的同时将偶联混合物加热到75℃并保持5分钟。然后用NMP洗涤(4×10ml)树脂。
或者，将DMF/DCM(2∶1；0.2M；5ml)中的Fmoc-氨基酸与COMU/DMF(0.5M；2ml)和DIPEA/DMF(2.0M；1ml)一起添加到CEM Discover微波单元中的树脂中。在使氮气鼓泡通过混合物的同时将偶联混合物加热到75℃下并保持5分钟。然后用NMP洗涤(4×10ml)树脂。
去保护
将哌啶/NMP(20％；10ml)添加到树脂中用于初始去保护并且将混合物通过微波加热(30秒；40℃)。排空反应容器，添加第二部分哌啶/NMP(20％；10ml)并且再次加热(75℃；3分钟)。然后用NMP洗涤(6×10ml)树脂。
或者，将哌啶/DMF(20％；10ml)添加到树脂中用于初始去保护并且将混合物通过微波加热(30秒；40℃)。排空反应容器，添加第二部分哌啶/DMF(20％；10ml)并且再次加热(75℃；3分钟)。然后用DMF洗涤(6×10ml)树脂。
侧链酰化(任选)
在酰化位引入Fmoc-Lys(ivDde)-OH或替选地另一种具有正交侧链保护基团的氨基酸。然后使用Boc20对肽骨架的N末端进行Boc保护，或者替选地在最后的偶联中使用Boc-保护的氨基酸。在肽依然与树脂连接的时候，使用新制备的NMP中的水合肼(2-4％)对正交侧链保护基团进行选择性切割2×15分钟。未被保护的赖氨酸侧链首先与Fmoc-Glu-OtBu或其他间隔物氨基酸偶接，其用哌啶去保护并且使用上述肽偶接方法用亲脂性部分酰化。使用的缩写如下：
ivDde：1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)3-甲基-丁基
Dde：1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)-乙基
DCM：二氯甲烷
DMF：N，N-二甲基甲酰胺
DIPEA：二异丙基乙胺
EtOH：乙醇
Et20：乙醚
HATU：N-[(二甲氨基)-1H-1，2，3-三唑[4，5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵(methanaminium)六氟磷酸盐/酯N-氧化物
MeCN：乙腈
NMP：N-甲基吡咯烷酮
TFA：三氟乙酸
TIS：三异丙基硅烷
切割
将树脂用EtOH(3×10ml)和Et20(3×10ml)洗涤，并在室温(r.t.)下干燥至恒重。通过用TFA/TIS/水(95/2.5/2.5；40ml，2小时；r.t)或TFA/-DODT(95/5；40ml，2小时；r.t)处理来从树脂上切下粗制肽。在减压下除去大部分TFA，使粗制肽沉淀并用乙醚洗涤三次，在室温下干燥至恒重。
粗制肽的HPLC纯化
使用配备有C-18柱(5cm；10μm)和级分收集器的PerSeptive Biosystems VISIONWorkstation来通过制备型反相HPLC将粗制肽纯化到接近或大于90％，所述反相HPLC用缓冲液A(0.1％TFA，水性)和缓冲液B(0.1％TFA、90％MeCN，水性)的梯度以35ml/分钟运行。通过分析型HPLC和MS对级分进行分析，将相关级分合并后冻干。通过HPLC和MS表征终产物。
Fmoc保护的氨基酸以适合的侧链保护形式购自AdvancedChemTech(ACT)。
偶联剂
偶联剂二异丙基碳二亚胺(DIC)购自RiedelGermany。
固体支持物
在TentaGel S树脂0.22-0.31mmol/g上合成肽。在优选C末端酰胺化的肽的情况下，使用TentaGel S-Ram，TentaGel S RAM-Lys(Boc)Fmoc(Rapp polymere，Germany)，而在优选C末端游离羧酸的情况下使用TentaGel S PHB，例如TentaGel S PHB Asp(Boc)Fmoc。
在其接下来的位置(例如，16位)中的氨基酸为Gly时，使用30％哌啶/NMP中的0.1甲酸对Asp(例如，15位)去保护，并且在合成或去保护的过程中不加热。
催化剂和其他试剂
二异丙基乙胺(DlEA)购自Aldrich，Germany，哌啶和吡啶购自Riedel-deFrankfurt，Germany。乙二硫醇购自Riedel-deFrankfurt，Germany。3，4-二氢-3-羟基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪(Dhbt-OH)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(HOAt)获自Fluka，Switzerland。偶联方法
将氨基酸原位偶联产生HObt或HOAt酯，其通过DMF中DIC使合适的N-α-保护的氨基酸和HObt或HOAt反应制得。通过在80℃下进行的茚三酮测试来核查酰化，以防止在测试过程中Fmoc去保护(Larseu，B，D.和Holm.A.，Int.J.Peptide Protein Res.43，1994，1-9)。
N-α-氨基保护基(Fmoc)的去保护
粗制肽的HPLC纯化
在PerSeptive Biosystems VISION Workstation上对粗制肽产物进行纯化。使用VISION 3.0软件进行仪器控制和数据获取。使用以下柱和HPLC缓冲系统：
柱：Kromasil KR10mm C-8，250×50.8mm。
缓冲系统：缓冲液：A：MQV中的0.1％TFA；B：0.085％TFA，10％MQV，90％MeCN。
梯度：0-37分钟，0-40％B
流量：35ml/分钟，UV检测：I＝215nm和280nm。
质谱
将肽在超梯度甲醇(Labscan，Dublin，Ireland)、超纯水(Millipore，Bedford，MA)和甲酸(Merck，Damstadt，Germany)(50∶50∶0.1v/v/v)中溶解至1至10mg/ml的给定浓度。使用LCT质谱仪(Micromass，Manchester，UK)通过ESI-TOF-MS在正极模式下对肽溶液(20ml)进行分析，精确度为+/-0.1m/z。
在如上所述使用制备型HPLC纯化后，收集肽产物并通过ES-MS确认肽的性质。还使用该方法合成以下示例的所有肽。
合成的化合物
使用上述技术合成表1中的化合物。
表1：合成的化合物
化合物 序列
1 Hy-H-Aib-DGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD-OH
2 Hy-HGDGSFSDEMNTILDNKAARDFINWLIQTKITD-OH
3 Hy-HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK-NH2
4 Hy-HGDGSFSSEMNTILDSQAARDFINWLIQTKITD-OH
5 Hy-HGEGTFTSDLSKQMEGQAVRDFIEWLIQTKITD-OH
6 Hy-HGEGTFTSDLSKQMESKAARDFIEWLIQTKITD-OH
7 Hy-HGDGSFSSELATILDGKAARDFINWLIQTKITD-OH
8 Hy-HGEGTFTSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD-OH
9 Hy-HGEGSFSSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD-OH
10 Hy-H-Aib-DGSFSDELNTILDGKAARDFINWLIQTK-NH2
11 Hy-HGDGSFSSELATILDGQAARDFIAWLIQTKITD-OH
12 Hy-HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK-NH2
13 Hy-HGEGSFSSDLSTILEGKAARDFIEWLIQTKITD-OH
实施例1.化合物12的合成
使用标准Fmoc化学在CEM Liberty Peptide Synthesizer上进行固相肽合成。将TentaGel S Ram S树脂(1.33g；0.25mmol/g)在使用前在DMF(10ml)中膨胀并且使用DCM和DMP在管和反应器之间转移。
偶联
将DMF/DCM(2∶1；0.2M；5ml)中的Fmoc-氨基酸与COMU/DMF(0.5M；2ml)和DIPEA/DMF(2.0M；1ml)一起添加到CEM Discover微波单元中的树脂中。在使氮气鼓泡通过混合物的同时将偶联混合物加热到75℃并保持5分钟。然后用DMF洗涤(4×10ml)树脂。在氨基酸编号6和7处使用Fmoc-Phe-Ser(Psi Me，Me，Pro)-OH假脯氨酸。
去保护
将哌啶/DMF(20％；10ml)添加到树脂中用于初始去保护并且将混合物通过微波加热(30秒；40℃)。排空反应容器，添加第二部分哌啶/DMF(20％；10ml)并且再次加热(75℃；3分钟)。然后用DMF洗涤(6×10ml)树脂。
将树脂用EtOH(3×10ml)和Et2O(3×10ml)洗涤，并在室温(r.t.)下干燥至恒重。通过用TFA/DODT(95/5；60ml，2小时；r.t)处理来从树脂上切下粗制肽。在减压下除去大部分TFA，使粗制肽沉淀并用乙醚(diethylether)洗涤三次，在室温下干燥至恒重。
粗制肽的HPLC纯化
使用配备有Gemini NX 5μC-18110A，10×250mm柱和级分收集器的PerSeptiveBiosystems VISION Workstation来通过制备型反相HPLC将粗制肽先纯化到45％，所述反相HPLC用缓冲液A(0.1％TFA，水性)和缓冲液B(0.1％TFA，90％MeCN，水性)的梯度以35ml/分钟运行。通过分析型HPLC和MS对级分进行分析，并将相关级分合并后冻干。使用C4Jupiter 2，12×25cm柱进行对产物(143mg)第二次纯化，如通过HPLC和MS表征的，产量为27mg，纯度为89％。计算的单一同位素MW＝3377.61，实测值为3377.57。
实施例2.GLP-2受体效力测定
使用Perkin Elmer的cAMP测定来量化对GLP-2类似物的cAMP应答。在本测定中，替度鲁肽(Teduglutide)是参考化合物，其具有约0.01nM的EC50。在本测定中对受试化合物诱导cAMP细胞内水平的提高进行检测，并且将响应相对于阳性对照和阴性对照归一化以由浓度响应曲线计算EC50和最大响应。结果列出在表2中。
表达人GLP-1受体的细胞系的产生
编码人胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)(原始登录号P43220)的cDNA克隆自cDNABC112126(MGC：138331/IMAGE：8327594)。使用编码用于亚克隆的末端限制性位点的引物通过PCR对编码GLP-1-R的DNA进行扩增。5′端引物额外编码邻近的科扎克共有序列以确保有效翻译。通过DNA测序来确认编码GLP-1-R的DNA的保真度。将编码GLP-1-R的PCR产物亚克隆到含有新霉素(G418)抗性标志的哺乳动物表达载体中。通过标准磷酸钙转染法将编码GLP-1-R的哺乳动物表达载体转染到HEK293细胞中。转染48小时后，对细胞进行接种以有限稀释亚克隆，并且在具有1mg/ml G418的培养基中进行选择。三周后，将12个存活的GLP-1-R表达细胞的克隆挑出、繁殖并在下述GLP-1受体效力测定中进行测试。选择一个GLP-1-R表达克隆进行化合物表征。
表达人GLP-2受体的细胞系的产生
hGLP2-R购自MRC-geneservice，Babraham，Cambridge作为Image克隆：5363415(11924-I17)。为了亚克隆至哺乳动物表达载体中，用于亚克隆的引物获自DNA-Technology，Risskov，Denmark。用于PCR反应的5′引物和3′引物包含用于克隆的末端限制位点，并且将5′引物的背景修饰成科扎克共有序列而不改变ORF编码的产物的序列。使用Image克隆5363415(11924-I17)作为模板并且用上述引物和Polymerase Herculase IIFusion在50μl的总体积中进行标准PCR反应。使用GFX PCR和Gelband纯化试剂盒对所产生的PCR产物进行纯化，用限制酶进行消化并且使用快速DNA连接试剂盒克隆到哺乳动物表达载体中。将连接反应转化到XL10 Gold Ultracompetent细胞中并且挑选克隆用于使用Endofree Plasmid maxi试剂盒生产DNA。随后通过MWG Eurofins，Germany进行序列分析。克隆被确认为hGLP-2受体，剪接变体rs17681684。
使用Lipofectamine PLUS转染法对HEK293细胞进行转染。在转染前一天，将HEK293细胞接种到两个T75瓶中，密度为2×106细胞/T75瓶，细胞培养基中不添加抗生素。转染当天，用1×DPBS洗涤细胞并且将培养基替换成体积为5mL/T75瓶的Optimem，然后轻轻地滴加额外的Lipofectamine-质粒复合物到T75瓶中的细胞中，3小时后替换成生长培养基，并且在24小时后再次替换成补充有500μg/mL G418的生长培养基。在G418中选择4周后，挑出克隆并且进行功能测定测定。选择一个克隆进行化合物表征。
GLP-1受体效力测定
使用Perkin Elmer的cAMP测定分别量化对GLP1和GLP2受体激活的cAMP响应。使用艾塞那肽(Exendin)-4(ZP24)作为用于GLP1受体激活的参考化合物，使用替度鲁肽(ZP1559)作为用于GLP2受体激活的参考化合物。将来自引发cAMP细胞内水平升高之受试化合物的数据相对于阳性对照和阴性对照(载剂)归一化以由浓度响应曲线计算EC50和最大响应。结果列在表2中。
表2：GLP-1R和GLP-2R EC50测量值
实施例3：对正常小鼠中葡萄糖耐量的影响
使用标准饮食喂养的C57BL/6J雄性小鼠。将小鼠保持在标准居住条件(光、温度和湿度受控的房间(12：12小时的光-暗周期，光照为06.00-18.00时；24℃；50％相对湿度))下，并且每一个给药组包含10只动物。
在口服葡萄耐量试验(OGTT)之前，对动物禁食5小时。在葡萄糖负荷前一小时(时间t＝-60分钟)，测量基线血糖。在采集血样之后，立即向动物皮下施用一次指定量的化合物或PBS(载剂)。1小时后，t＝0分钟，向动物填喂2g/kg的葡萄糖(水中0.4g/ml，由葡萄糖SAD 0.456g/l稀释得到；剂量体积为5ml/kg)。在施用葡萄糖之后，在t＝15、30、60、120分钟从尾静脉抽取血液用于葡萄糖测量。
结果
载剂处理的小鼠表现出对葡萄糖负荷的典型响应，血糖水平在最初30分钟升高，随后在120分钟后返回基线水平。受试化合物显著降低了血糖响应(图2)。
实施例4.对正常大鼠中肠重量的影响
使用标准饮食喂养的Wistar雄性大鼠。将大鼠保持在标准居住条件(光、温度和湿度受控的房间(12：12小时的光-暗周期，光照为06.00-18.00时；24℃；50％相对湿度))下，并且每一个给药组包含6只动物。每天通过皮下途径用指定量的化合物或PBS(载剂)向大鼠给药一次，持续4天。在第5天，处死大鼠并测量小肠湿重。
结果
受试化合物以剂量依赖的方式增加肠重量(图3)。
实施例5：化合物7在饮食引起的肥胖小鼠中的影响。
通过用高脂饮食(Research Diet 60％脂肪(D12492)Research Diet Inc.，NewBrunswick，USA)喂养C57BL/6J雄性小鼠来产生饮食引起的肥胖。将小鼠保持在标准居住条件(光、温度和湿度受控的房间(12：12小时的光-暗周期，光照为06.00-18.00时；24℃；50％相对湿度))下。
载剂处理的给药组包含8只动物，化合物7处理组包含12只动物/组。对所有动物模拟处理7天(每天一次，SC、100μl载剂)以使动物适应处理和注射，然后处理(载剂或化合物7)14天(每天两次，SC、5ml/kg)。将动物禁食过夜(第11至12天)并且抽血用于测定葡萄糖和胰岛素。在第14天，处死动物，切下小肠和大肠、洗涤并且称重。
结果
与载剂处理对照相比，在持续14天每天两次给药后化合物7显著增加了小肠和大肠的质量(图4)。
化合物7在连续14天每天两次给药后使空腹血糖和血浆胰岛素水平降低，并得到了比载剂处理对照低的HOMA-IR指数(图5)。
尽管已经结合上述示例性实施方案描述了本发明，但是在给出本公开内容的情况下许多等同修改和变化对于本领域技术人员将是明显的。因此，认为本发明给出的示例性实施方案是说明性的而非限制性的。可对所述实施方案进行多种改变而不脱离本发明的精神和范围。本文引用的所有文献均通过引用明确地并入。

Claims (16)

1.具有式R1-Z-R2的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物，其中：R1是氢、C1-4烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基；
R2是NH2或OH；
并且Z选自：
H-Aib-DGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD；
HGDGSFSDEMNTILDNKAARDFINWLIQTKITD；
HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK；
HGDGSFSSEMNTILDSQAARDFINWLIQTKITD；
HGEGTFTSDLSKQMEGQAVRDFIEWLIQTKITD；
HGEGTFTSDLSKQMESKAARDFIEWLIQTKITD；
HGEGTFTSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD；
HGEGSFSSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD；
H-Aib-DGSFSDELNTILDGKAARDFINWLIQTK；
HGEGSFSSDLSTILEGKAARDFIEWLIQTKITD；
HGDGSFSSELATILDGKAARDFINWLIQTKITD；以及
HGDGSFSSELATILDGQAARDFIAWLIQTKITD。
2.根据权利要求1所述的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物，其中所述GLP-2类似物选自：
Hy-H-Aib-DGSFSDEMNTILDNQAARDFINWLIQTKITD-OH；
Hy-HGDGSFSDEMNTILDNKAARDFINWLIQTKITD-OH；
Hy-HGDGSFSDEMNTILDGQAARDFINWLIQTK-NH2；
Hy-HGDGSFSSEMNTILDSQAARDFINWLIQTKITD-OH；
Hy-HGEGTFTSDLSKQMEGQAVRDFIEWLIQTKITD-OH；
Hy-HGEGTFTSDLSKQMESKAARDFIEWLIQTKITD-OH；
Hy-HGDGSFSSELATILDGKAARDFINWLIQTKITD-OH；
Hy-HGEGTFTSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD-OH；
Hy-HGEGSFSSDLSTILENKAARDFIEWLIQTKITD-OH；
Hy-H-Aib-DGSFSDELNTILDGKAARDFINWLIQTK-NH2；
Hy-HGDGSFSSELATILDGQAARDFIAWLIQTKITD-OH；以及
Hy-HGEGSFSSDLSTILEGKAARDFIEWLIQTKITD-OH。
3.权利要求1或2所述的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物，其用于治疗。
4.一种药物组合物，其包含与载体混合的权利要求1或2的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物。
5.权利要求4所述的药物组合物，其中所述GLP-2类似物是可药用酸加成盐。
6.权利要求4或权利要求5所述的药物组合物，其被配制成适于通过注射或输注施用的液体，或其被配制成使所述GLP-2类似物缓慢释放。
7.权利要求1或2的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物用于制备用于治疗和/或预防糖尿病相关低度炎症之药物的用途。
8.一种核酸分子，其包含编码权利要求1或2的GLP-2类似物的核酸序列。
9.一种表达载体，其包含与指导其表达之控制序列组合的权利要求8所述的核酸序列。
10.一种宿主细胞，其经权利要求9所述的表达载体转化。
11.一种产生权利要求1或2所述的GLP-2类似物的方法，所述方法包括在适于表达所述GLP-2类似物的条件下培养权利要求10所述的宿主细胞和纯化由此产生的GLP-2类似物。
12.根据权利要求8的核酸分子、根据权利要求9的表达载体或根据权利要求10的宿主细胞，其用于治疗。
13.根据权利要求8的核酸分子、根据权利要求9的表达载体或根据权利要求10的宿主细胞在制备用于治疗和/或预防与以下疾病有关之低度炎症的药物中的用途：代谢综合征、肥胖、糖尿病、胃肠炎症，食道上消化道、胃、十二指肠、小肠、结肠和直肠中的胃肠紊乱，包括任何病因的溃疡、消化紊乱、吸收不良综合征、短肠综合征、盲管综合征、炎性肠病、口炎性腹泻、热带口炎性腹泻、低丙种球蛋白血症口炎性腹泻，以及化学疗法和/或放射疗法引起的粘膜炎和腹泻。
14.权利要求1或2的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物、根据权利要求8的核酸分子、根据权利要求9的表达载体或根据权利要求10的宿主细胞在制备用于治疗胃或肠相关紊乱的药物中的用途。
15.权利要求14所述的用途，其中所述胃或肠相关紊乱是与以下疾病有关的低度炎症：代谢综合征、肥胖、糖尿病、胃肠炎症；食道上消化道、胃、十二指肠、小肠、结肠和直肠中的胃肠紊乱，包括任何病因的溃疡、消化紊乱、吸收不良综合征、短肠综合征、盲管综合征、炎性肠病、口炎性腹泻、热带口炎性腹泻、低丙种球蛋白血症口炎性腹泻，以及化学疗法和/或放射疗法引起的粘膜炎和腹泻。
16.一种治疗性药盒，其包含癌症化学治疗药物和根据权利要求1或2的GLP-2类似物或者其可药用盐或溶剂合物、根据权利要求8的核酸分子、根据权利要求9的表达载体或根据权利要求10的宿主细胞，其分别任选地与可药用载体组合。
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