CN104478547A - 一种利用荆条屑培养黄伞的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用荆条屑为主料培养黄伞的方法，创新点在于黄伞的栽培培养基重量组成包括：荆条屑60％、白灵菇菌糠10％、棉籽皮10％、麸皮19％、生石灰1％；制备方法是将荆条粉碎成木屑，白灵菇菌糠晒干粉碎成黄豆大小，配以棉籽皮、麸皮和生石灰，料水比为1∶1.4。作为荆条屑为主料培养黄伞的配套技术还包括：黄伞的液体菌种培养基和谷粒菌种培养基中,荆条屑也作为底物诱导，提前加入。本发明充分利用了林业废弃物荆条，形成循环经济模式，避免了资源浪费、降低了栽培成本，产量高、周期短。具有显著的经济效益和生态效益，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于食用真菌栽培的技术领域，具体涉及一种利用荆条屑培养黄伞的方法，以及专用培养料的制备方法。
背景技术
黄伞(Pholiota adiposa(Fr.)Quél)又名多脂鳞伞，俗名柳蘑、黄柳菇等。黄伞在真菌分类地位中隶属于担子菌亚门，层菌纲，无隔担子菌亚纲，伞菌目，球盖菇科，鳞伞属。黄伞是一种中低温型食用菌，在我国分布于河北、河南、山西、吉林、浙江、广西、甘肃、西藏等多个地区。黄伞子实体色泽鲜艳呈金黄色，滑嫩爽口，味道鲜美，风味独特，是一种珍稀的食药兼用真菌。黄伞不仅含有丰富的蛋白质、多种维生素而且还含有大量的胡萝卜素和人体必需的多种氨基酸、微量元素。此外，黄伞还具有抗菌、抑癌的功效；且其菌丝体多糖具有抗疲劳及增强免疫功能；发酵提取物具有辅助降低甘油三酯的作用。黄伞的商品价值较高，市场前景广阔，是目前大有发展前途的食用菌新品种之一。
棉籽皮因其营养丰富、通气性好，是食用菌高产栽培最常用的栽培料，但由于近年来棉籽皮价格上涨，食用菌种植成本升高，经济效益下降，所以寻找可代替棉籽皮的栽培新原料，成为了目前业内的一大课题，同时，也有利于其它农林废弃物的资源化开发。
荆条(Vitex negundo var ineica)土名荆子、荆梢、条子等，分类属马鞭草科，牡荆属，黄荆的一个变种，落叶灌木或小乔木，分布几遍全国，冀北山地、晋东南山地、太行山、豫西山地丘陵以及晋陕黄土高原等地均有分布，在河北太行山低山丘陵区分布极为广泛，属于优势灌木树种。我们采用普查与重点调查结合的方法进行了调查,荆条为落叶灌木,喜光、抗旱耐贫瘠薄,主要生长在山坡、路旁、林缘土岗等地。荆条适应性极强,对土壤要求不严,各类土壤上均有生长。荆条种子萌芽力强,实生繁殖容易,人为封禁含少量荆条杂草等的荒山,3-5年即可草木丛生。河北太行山荆条资源丰富,分布广泛,据调查多处于野生状态,尚无较大利用,目前主要利用途径为:
(1)荆编:荆条产区群众,采条编织各种筐篮,以自用为主,很少外销。另外,一些小型煤矿用荆条编织小排,用于坑道顶面做棚架用,但用量很少。
(2)薪炭:荆条具有耐平茬、产柴量高的特点,所以当地多作为燃柴使用，但利用量极其有限。
就传统利用方式荆编来说,荆条的总利用量也不足资源量的10％,研究表明荆条中有纤维素、木质素、半纤维这些食药用真菌生长所必须的营养物质，还含有丰富的有机质和农作物生长所需要的营养元素。但是到目前为止，荆条一直被视为农林废弃物并没有得到充分而有效的开发利用，严重地浪费了资源。
在白灵菇(以棉籽皮为主料种植，余同)菌糠的利用方面，作为珍稀菌类，其栽培目前有工厂化生产发展的趋势；无论是自然气候下的栽培，还是工厂化生产的模式，白灵菇对原料的利用率偏低，栽培后的白灵菇菌糠中，不仅还含有大量的未利用碳氮源，而且，菌糠中丰富的菌丝体也是可以利用的资源，因此，菌糠的再利用也是学科内的研究重点。
随着低碳环保和生物资源循环利用观念的深入，利用荆条栽培食用菌，不仅可以使荆条变废为宝，使其替代传统栽培基质棉籽壳，成为栽培食用菌的新型基质，同时为农民增收创造更多的机遇。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用荆条屑和白灵菇菌糠培养黄伞的方法，解决目前太行山地区野生荆条浪费的问题，
为了实现本发明所述目的，本发明提供了以下技术方案。
这种利用荆条屑培养黄伞的方法，创新点包括黄伞的栽培培养基重量组成包括：荆条屑60％、白灵菇菌糠10％、棉籽皮10％、麸皮19％、生石灰1％；制备方法是将荆条粉碎成木屑状，白灵菇菌糠晒干粉碎成黄豆大小，配以棉籽皮、麸皮和生石灰，料水比为1∶1.4。
所述的利用荆条屑培养黄伞的方法，黄伞的液体菌种培养基中也作为底物诱导物、提前加入荆条屑；其优化液体菌种培养基配方重量比为：马铃薯20％，荆条粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，羧甲基纤维素0.3％，水1000mL，pH自然。
所述的利用荆条屑培养黄伞的方法，黄伞的谷粒菌种培养基中也作为底物诱导物、提前加入荆条屑；其优化的谷粒菌种培养基配方重量比为：麦粒69％，荆条屑30％，生石灰1％。
所述利用荆条屑培养黄伞的方法，包括如下步骤：
A.液体菌种的制备
a.一级液体菌种的制备
无菌条件下，将市售母种接入一级液体培养基中，25℃、160r/min恒温振荡培养7d，即制得一级液体菌种；
所述一级液体菌种培养基包括：以重量百分比计，马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC 0.3％，VB110mg/L；
b.二级液体菌种的制备
无菌条件下，将一级液体菌种以10％的接种量接入二级液体培养基中，25℃、160r/min恒温振荡培养7d，即制得二级液体菌种；
所述二级液体菌种培养基配方为：以重量百分比计，马铃薯20％，荆条屑粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC 0.3％，VB110mg/L。
B.谷粒菌种的制备
将步骤A得到的二级液体菌种接入谷粒菌种培养基，接种量为10％，22-25℃培养至满，得到谷粒菌种；
所述谷粒菌种培养基包括：麦粒69％，荆条屑30％，生石灰1％；
C.荆条、白灵菇菌糠培养料的制备
栽培用荆条、白灵菇菌糠均事先按前述粉碎；
荆条屑培养料组成包括：荆条屑60％、白灵菇菌糠10％、棉籽皮10％、麸皮19％、生石灰1％；
准确称取荆条屑培养基的各组成成分，加水混合均匀后，堆闷30min，装入容器内，灭菌，冷却后备用；
D.接种、培养、采收
无菌条件下，将步骤B制备得到的谷粒菌种接入步骤C制备得到的荆条屑培养料，进行培养、出菇管理、采收。
所述利用荆条屑培养料栽培黄伞的方法，步骤D中谷粒菌种的接种量为5-10％。
所述利用荆条屑培养黄伞的方法，步骤C中盛装荆条屑培养料的容器选用聚乙烯袋、聚丙烯袋或玻璃瓶。
所述利用荆条屑培养黄伞的方法，步骤C中荆条屑培养料的灭菌条件为121℃高压灭菌150min或100℃常压灭菌24h。
所述利用荆条屑培养黄伞的方法，液体培养基中所用荆条屑，事先粉碎并过80目筛。
所述利用荆条屑培养黄伞的方法，谷粒菌种培养基中所用荆条屑，事先粉碎为木屑状。
本发明以荆条屑为主要原料作为栽培黄伞培养基，作用有三：
1、对于食用菌而言，为其提供生长所需碳源；
2、荆条目前尚未得到开发利用，资源丰富，用于食用菌生产成本低，经济效益高；
3、从生态的角度来看，实现了农林废弃物的再利用，为食用菌栽培提供了一种价格低廉的栽培原料，不仅避免了资源浪费，而且大幅降低了栽培成本，具有可观的经济效益，应用前景广阔。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述内容做进一步详细的说明。
实施例：利用荆条屑培养黄伞的方法，黄伞菌种为市场采购
A.液体菌种的制备
一级液体菌种培养基配方：马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，CMC 0.3％，pH自然；
二级液体菌种培养基配方：荆条屑粉5％，马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，CMC 0.3％，pH自然；其中荆条屑粉碎过80目筛得粉状，与马铃薯、麸皮共煮沸30min，过滤去渣得浸提液。
一级液体菌种制备时使用500mL锥形瓶，装液量为200mL，121℃高压灭菌30min后，无菌条件下接入市售的PDA斜面菌种，每瓶接种量为4块0.5cm×0.5cm菌种块。接种后在25℃、160r/min的条件下，恒温振荡培养7d。
二级液体菌种装液量规格、灭菌条件及培养条件同上，接种量为10％。
在二级液体菌种制备阶段，测定优化液体菌种发酵液中漆酶酶活及羧甲基纤维素酶酶活(CMC酶活)，以未添加荆条屑粉末的培养基为对照，以发现荆条粉末在液体菌种中是否有底物诱导作用的优势。酶活测定结果如表1所示。
漆酶酶活力定义：在一定条件下，每分钟使反应液OD值增加0.001的酶量定义为一个漆酶酶活力单位(U)。
羧甲基纤维素酶酶活力(CMC酶活)定义：在一定条件下，每分钟酶解底物产生1μg葡萄糖的酶量定义为一个羧甲基纤维素酶酶活力单位(U)。
表1 黄伞的酶活数据
由表1可知，本发明所述二级液体培养基的漆酶酶活、CMC酶活均比对照组(未添加荆条屑)的高，可见在液体培养基中添加荆条屑对菌丝的漆酶与纤维素酶的分泌起到一定的底物诱导作用，让菌丝提前适应底物(荆条屑)，从而加快菌丝在栽培料上的长速，缩短栽培周期。
B.谷粒菌种的制备
谷粒菌种培养基配方：麦粒69％，荆条屑30％，生石灰1％。
准确称取培养基各组成成分，料水比1:1.4进行拌料，装入17cm×32cm×0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋装干料300g，制备120袋。将优化得到的二级液体菌种以及未添加荆条屑的对照组液体菌种分别接入谷粒菌种培养基，分别接种60袋，测定菌长速，并记录满肩时间、满袋时间。
为了考察本发明所述谷粒菌种培养基的优势，本发明进行了对比试验，操作同上，对照组培养基为麦粒培养基：麦粒99％，生石灰1％；
对比试验结果见表2。
表2 黄伞谷粒菌种的满袋时间
由表2可知，菌丝在“麦粒+荆条屑”谷粒培养基比纯麦粒培养基的长速快，这是因为在液体培养基中加入荆条屑，使菌丝能够更快适应生长底物，从而加快发菌速度，缩短生产周期提高生产效率。
综上，麦粒+荆条屑可以代替棉籽皮成为黄伞种植中原种制作的主料，荆条这一废弃物也得到了资源化利用，对黄伞的高效栽培有重大意义。
C.荆条屑培养料的制备
按质量比，称取荆条屑60％、白灵菇菌糠屑10％、棉籽皮10％、麸皮19％、生石灰1％，料水比为1︰1.4进行拌料，混合均匀后，堆闷30min后装入容器中进行灭菌和接种工作。
将上述培养料装入聚乙烯袋、聚丙烯袋或玻璃瓶内，口径不限，常规扎口，高压灭菌一般以121℃灭菌150min；常压灭菌一般以100℃灭菌，保持24h；冷却后接种。
荆条屑的用量进行了试验分析，具体如下：
按表3所示准确称取各组成成分，将其混匀，加水，料水比为1︰1.4，把配置好的培养料装入试管，每个配方重复5次，121℃高压灭菌150min。将步骤B所述谷粒菌种分别接入含有培养料的试管中，进行试管营养生长试验。
表3 培养基配方(干料，％)
| 配方 | 荆条屑 | 白灵菇菌糠屑 | 棉籽皮 | 麸皮 | 生石灰 |
| P0 | 0 | 70 | 10 | 19 | 1 |
| P1 | 30 | 40 | 10 | 19 | 1 |
| P2 | 40 | 30 | 10 | 19 | 1 |
| P3 | 50 | 20 | 10 | 19 | 1 |
| P4 | 60 | 10 | 10 | 19 | 1 |
| P5 | 70 | 0 | 10 | 19 | 1 |
| P6 | 0 | 0 | 80 | 19 | 1 |
每隔2天观察一次试管中菌丝的长速和长势情况，用游标卡尺(精确度0.02mm)测定菌丝的长速。菌丝长速长势结果见表4。
表4 黄伞的菌丝生长情况
| 配方 | 菌丝长速(mm/d) | 菌丝长势 |
| P6 | 3.55±0.02 | +++ |
| P4 | 3.51±0.01 | +++ |
| P3 | 3.43±0.04 | +++ |
| P5 | 3.36±0.05 | +++ |
| P2 | 3.30±0.03 | ++ |
| P1 | 3.17±0.02 | ++ |
| P0 | 2.98±0.02 | + |
(注：列出长速均为平均值±标准误；+++表示生长致密，++表示生长较致密，+表示生长一般。)
由表4可以看出，在纯白灵菇菌糠屑培养基上，黄伞的菌丝长势较弱；当荆条屑添加量略有增加时，其长势较好，菌丝洁白、较致密，与纯棉籽皮培养基具有可比性，菌丝在配方P6上生长最快，比纯荆条屑P5组、纯白灵菇菌糠屑P0组长速都快。
按表3中的配方称取各成分，混合均匀，料水比1︰1.4进行拌料，装入17cm×32cm×0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋装干料约300g，接种量为“液体菌种→荆条屑+棉籽皮”制种的谷粒菌种一接种勺，观察并记录各个配方的生长情况并计算生物转化率。试验结果如表5所示。
表5 黄伞的生物转化率
| 培养基编号 | 平均产量(g) | 平均生物效率(％) |
| P6 | 347.07 | 115.69 |
| P4 | 344.85 | 114.95 |
| P5 | 326.31 | 108.77 |
| P3 | 323.04 | 107.68 |
| P2 | 307.62 | 102.54 |
| P1 | 297.81 | 99.27 |
| P0 | 295.35 | 98.45 |
从表5可以看出，当以荆条屑为主要碳源达到60％，黄伞株的生物转化率分别达到了114.95％，远远高于纯白灵菇菌糠屑的生物转化率98.45％，尽管未达到栽培料主料纯棉籽皮的生物转化率115.69％，但具有可比性。说明荆条屑可以部分代替棉籽皮栽培黄伞。
本发明最终确定适宜配方为荆条屑60％、白灵菇菌糠屑10％、棉籽皮10％、麸皮19％、生石灰1％，料水比为1︰1.4进行拌料。
D.接种、培养、采收
将灭菌冷却后的出菇袋，无菌操作下按照5-10％的接种量接入步骤B所得谷粒菌种。可将接好种的菌袋置于24℃室温下进行避光培养，使菌种尽快萌发、定植。待菌丝满袋后，敞开袋口进行生殖生长管理阶段。
黄伞进入出菇管理后，出菇棚温度控制在15-18℃为宜，温度低于5℃时，原基难以形成，温度高于20℃以上时，原有子实体菇柄变软，培养基表面组织块萎缩腐烂。空气湿度在80％左右，必须及时通风换气，通过通风拉大棚内的昼夜温差，来促进原基的形成，原基形成后应加大通风，当菌盖由内卷逐渐平展，并开始弹射锈色孢子时应及时采收，一般从原基形成到采收需约10天。
进入出菇期管理后,出菇棚要求既能保持湿度,又能通风,并且有一定散射光。菇棚温度应控制在12-20℃。
综上所述，本发明所述荆条可用于栽培黄伞，因此，将荆条作为可循环利用的生物资源，用于产业化开发，具有重要的创新意义。
Claims (9)
1.一种利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征包括：黄伞的栽培培养基重量组成包括：荆条屑60％、白灵菇菌糠10％、棉籽皮10％、麸皮19％、生石灰1％；制备方法是将荆条粉碎成木屑状，白灵菇菌糠晒干粉碎成黄豆大小，配以棉籽皮、麸皮和生石灰，料水比为1∶1.4。
2.根据权利要求1所述的利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征包括：黄伞的液体菌种培养基中也作为底物诱导物、提前加入荆条屑；其优化液体菌种培养基配方重量比为：马铃薯20％，荆条粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，羧甲基纤维素0.3％，水1000mL，pH自然。
3.根据权利要求1所述的利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征包括：黄伞的谷粒菌种培养基中也作为底物诱导物、提前加入荆条屑；其优化的谷粒菌种培养基配方重量比为：麦粒69％，荆条屑30％，生石灰1％。
4.根据权利要求1所述利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征包括如下步骤：
A.液体菌种的制备
a.一级液体菌种的制备
无菌条件下，将市售母种接入一级液体培养基中，25℃、160r/min恒温振荡培养7d，即制得一级液体菌种；
所述一级液体菌种培养基包括：以重量百分比计，马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC 0.3％，VB110mg/L；
b.二级液体菌种的制备
无菌条件下，将一级液体菌种以10％的接种量接入二级液体培养基中，25℃、160r/min恒温振荡培养7d，即制得二级液体菌种；
所述二级液体菌种培养基配方为：以重量百分比计，马铃薯20％，荆条屑粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC 0.3％，VB110mg/L。
B.谷粒菌种的制备
将步骤A得到的二级液体菌种接入谷粒菌种培养基，接种量为10％，22-25℃培养至满，得到谷粒菌种；
所述谷粒菌种培养基包括：麦粒69％，荆条屑30％，生石灰1％；
C.荆条、白灵菇菌糠培养料的制备
栽培用荆条、白灵菇菌糠均事先按前述粉碎；
荆条屑培养料组成包括：荆条屑60％、白灵菇菌糠10％、棉籽皮10％、麸皮19％、生石灰1％；
准确称取荆条屑培养基的各组成成分，加水混合均匀后，堆闷30min，装入容器内，灭菌，冷却后备用；
D.接种、培养、采收
无菌条件下，将步骤B制备得到的谷粒菌种接入步骤C制备得到的荆条屑培养料，进行培养、出菇管理、采收。
5.根据权利要求1所述利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征在于，步骤D中谷粒菌种的接种量为5-10％。
6.根据权利要求1所述利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征在于，步骤C中盛装荆条屑培养料的容器选用聚乙烯袋、聚丙烯袋或玻璃瓶。
7.根据权利要求1所述利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征在于，步骤C中荆条屑培养料的灭菌条件为121℃高压灭菌150min或100℃常压灭菌24h。
8.根据权利要求2所述利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征在于，液体培养基中所用荆条屑，事先粉碎并过80目筛。
9.根据权利要求3所述利用荆条屑培养黄伞的方法，其特征在于，谷粒菌种培养基中所用荆条屑，事先粉碎为木屑状。
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