CN104459147A - 一种生物标记物的保存液、试剂和方法 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种生物标记物保存液，包括：至少一种蛋白稳定剂、至少一种碱性或中性氨基酸、至少一种多羟基化合物或聚合物和柠檬酸盐。本申请还公开了该保存液配制的荧光标记物试剂、制备方法和该保存液的用途。本申请公开的保存液对荧光标记物试剂中的荧光示踪物-生物标记物缀合物具有很好的保存效果，能保存荧光示踪物、生物标记物以及缀合物的活性和稳定性，使得荧光标记物试剂可以制备成直接使用的液态商品化试剂，方便使用，且该保存液制备的荧光标记物试剂可以耐受短时间的高温运输，有助于降低成本。

Description

一种生物标记物的保存液、试剂和方法
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂领域，尤其是一种生物标记物的保存液、试剂和方法。 
背景技术
蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分子物质，具有生物活性，易受外界条件的影响发生变性，在低浓度时（<0.1mg/mL）极易降解而失活，而且低浓度时易吸附于管壁造成损失。对于很多蛋白质，一般冻存于-20℃或-80℃，重复冷冻/融化循环可使蛋白变性，导致其形成活性降低的聚集物。 
荧光素经激发光照射后，吸收光能进入激发态，并能立即退激发并发出发射光（通常发射光的波长比入射光的波长长，即发生stock shift）。目前多用于细胞染色，以提高识别细胞的能力。常见的荧光素有小分子化合物如FITC、Cy5、Cy7、Alexa Fluor等，还有许多荧光蛋白如PE、APC、PerCP等。荧光素易淬灭，常于固体形态（多为小分子化合物的荧光素）、硫酸铵沉淀形式（如荧光蛋白）或于保存液中以高浓度低温避光保存，一般不可冷冻。 
将荧光素或荧光蛋白作为示踪物与单克隆抗体或多克隆抗体结合，形成荧光标记抗体，对相应抗原表达进行检测已成为一项重要的检测技术。 
荧光标记抗体应用主要有两个方面：一方面是荧光显微镜技术，其将荧光 标记抗体与细胞上的抗原结合后利用荧光显微镜观察抗体结合部位的荧光强弱从而判断结果。另一方面就是流式细胞分析技术，其用不同颜色的荧光素标记不同种类的单克隆抗体，可以在一个细胞上同时分析多种抗原分子，进一步增强了对细胞种类和功能等特性的认识，并且可以对大量细胞的荧光强度进行定量分析，其与计算机技术结合，提高了免疫荧光的检测水平并实现了细胞分析的自动化。不同的荧光标记抗体试剂可检测不同抗原，因此其已成为了流式细胞分析在科研或临床应用中的核心组成部分。 
随着技术的发展，荧光标记抗体也应用在生物芯片技术中。生物芯片（biochip）是指在固相基质上集成各种可以作为受体的生物信息，包括寡核苷酸、蛋白质/酶、抗原/抗体、细胞等，利用受体与连接物间的反应（包括核酸杂交反应、抗原/抗体亲和识别反应等）来进行生物学的检测。根据生物芯片固定的生物分子及材料不同可分为基因芯片、蛋白质芯片、芯片实验室、细胞芯片及组织芯片。蛋白质芯片是一种新型的生物芯片，是由固定于不同种类支持介质上的抗原或抗体微阵列组成，阵列中固定分子的位置及组成是已知的，用标记（荧光物质、酶或化学发光物质等标记）的抗体或抗原与芯片上的探针进行反应，然后通过特定的扫描装置进行检测，结果由计算机分析处理。 
蛋白质的分子光谱荧光分析法，具有灵敏度高、选择性好、动态响应范围宽以及测定条件更接近生命体的生理环境的优点而在蛋白质分析中应用广泛。荧光蛋白探针技术是利用物质的光物理和光化学特性，在分子量级上研究溶液中蛋白质高灵敏度的分析方法。 
随着技术的发展，用于示踪的荧光染料不限于荧光素和荧光蛋白，三价稀土离子及其螯合剂，或半导体纳米微晶粒这些受激发光激发后，发射光的波长 也会较激发光波长长，也具有荧光特性的物质也用作示踪物，标记在蛋白质、多肽、激素、核酸、活细胞等生物材料上。三价稀土离子及其螯合物具有更长的荧光衰变时间，更大的stock shift，用于时间分辨荧光免疫分析法(Time-Resolved Fluorescence Immunoassay，简称TRFIA)。TRFIA技术具有灵敏度高、特异性强、稳定性好，且测定范围更宽，操作简便和非放射性等特点，非常适用于生物学、医学上的超微量分析。半导体纳米微晶粒又称量子点（quantum dots，QDs），是一种直径在1～100nm之间，能够接收激发光产生荧光的半导体纳米颗粒。量子点与生物分子、活细胞等结合，为DNA检测(DNA芯片)、蛋白质检测(蛋白质芯片)和探索蛋白质-蛋白质之间(抗原-抗体、配体-受体、酶-底物)反应原理提供了先进的方法。 
由于原料价格高和生产工艺的复杂性等原因，结合荧光示踪物的生物标记物，特别是荧光标记蛋白试剂普遍成本较高。同时，因其敏感性和特异性高，一般试剂使用量少，且浓度低。该类试剂需要低温保存，对运输和存储的条件要求偏高，从而也增加了试剂成本。这些特点影响了荧光标记蛋白试剂的商业化应用。因此，有效保持荧光标记蛋白试剂中蛋白生物活性、荧光稳定性、荧光示踪物-蛋白缀合物稳定性，方便试剂使用及有效降低试剂成本的保存方法成为体外诊断试剂领域重要课题。 
现有的技术中，用于保持蛋白质稳定性和活性的保存液很多，但均没有提到对荧光稳定性和荧光标记蛋白稳定性的保持。 
中国专利CN10229642A公开了一种蛋白稳定剂及其制备方法，该稳定剂能长时间保持蛋白活性，是一种适用于蛋白保存的保护剂。 
中国专利CN101851267A公开了一种抗体保护剂及其应用，该发明将离子 液体用于抗体保护剂的开发，可使抗体在室温下保存时依然保持较高的活性，抗体保护剂与抗体混合包裹于裸金电极表面制成工作电极，安置于免疫学检测装置中，采用电化学阻抗法检测，明显提高了免疫学检测装置的稳定性和准确性。该保护剂从保存原理和用途看，不适用于荧光标记蛋白试剂的保存。 
中国专利CN101324589A公开了一种由化学合成得到的高效蛋白稳定剂，可替代BSA等常规蛋白稳定剂，用于维持临床诊断试剂如标记抗体的活性。该稳定剂配制的水溶液用于稀释蛋白，在4℃条件下10天能保存蛋白活性80%以上，该活性保持时间仍不理想。 
美国专利5516672公开了一种可有效保持抗体活性的配方，该配方包括一种抗体、一种缓冲液、一种苯衍生物作为稳定剂及一种动物血清、碳水化合物和水溶性大分子物质。 
美国专利6165981公开了一种用于保护蛋白质和蛋白质片段或分析物的液体配方，其包括一种缓冲液、一种还原剂、一种稳定蛋白、一种螯合剂、一种盐和肌钙蛋白或相关片段。 
这些保存液有些是不适合荧光标记蛋白试剂保存，有些保存效果不佳。需要开发一种更好地保持荧光标记蛋白试剂稳定性的保存液。 
发明内容
荧光标记物试剂，特别荧光标记蛋白试剂具有价高、量少、浓度低的特点，现有的保存液对荧光标记蛋白试剂的保存效果不佳，需要提供一种能有效保持荧光标记蛋白试剂中蛋白的生物活性、荧光素的稳定性、荧光示踪物-蛋白缀合物稳定性的保存液。 
为解决上述技术问题，本申请公开了一种生物标记物的保存液，包括：至少一种蛋白稳定剂、至少一种碱性或中性氨基酸、至少一种多羟基化合物或多羟基聚合物和柠檬酸盐。 
本申请还公开了一种荧光标记物试剂，包括上述生物标记物的保存液和荧光示踪物-生物标记物缀合物。 
本申请又公开了一种荧光标记物试剂的制备方法，包括，提供上述生物标记物的保存液和荧光示踪物-生物标记物缀合物；用保存液将荧光示踪物-生物标记物缀合物稀释至工作浓度，获得可以直接使用的荧光标记物试剂溶液。 
本申请再一方面公开了上述保存液在制备荧光标记物试剂中的用途。 
本申请公开的保存液适用于含有荧光示踪物-生物标记物缀合物的荧光标记物试剂，特别适合保存小分子荧光素标记蛋白、荧光蛋白标记蛋白和串联染料标记蛋白试剂；单色或多色荧光标记蛋白试剂；荧光标记蛋白质、多克隆抗体或单克隆抗体试剂。使用时直接稀释荧光标记蛋白试剂至工作浓度，于2℃～8℃密封避光保存，使用方便，能长时间保持蛋白生物活性、荧光稳定性和荧光示踪物-蛋白缀合物稳定性。该保存液还可短期耐受25～40℃高温运输条件，降低荧光标记蛋白试剂成本。 
附图说明
图1为实施例1中HPLC检测IgG-PE荧光标记蛋白试剂于1#～6#保存液中降解曲线； 
图2为实施例2中HPLC检测BSA-PE荧光标记蛋白试剂于7#～13#保存液中降解曲线； 
图3为实施例3中CD4-FITC单色试剂用保存液14#保存与市售保存液保存加速试验比较检测结果； 
图4为实施例3中CD3-PerCP单色试剂用保存液15#保存与市售保存液保存加速试验比较检测结果； 
图5为实施例3中CD8-APC-Cy7单色试剂用保存液16#保存与市售保存液保存加速试验比较检测结果； 
图6是实施例7中CD19-APC单色试剂用保存液19#保存与市售保存液保存加速试验比较检测结果。 
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。 
定义
除另有说明外，本文中使用的术语具有以下含义。 
本文中使用的术语“生物标记物”，是指来自生物体的生物分子或活细胞，生物分子为可与细胞或细胞成分特异性结合的分子，包括但不限于抗体、抗原、受体、配体、酶、底物、辅酶、核酸、激素等。 
本文中使用的术语“荧光示踪物”，是指可以产生荧光信号，并能够和生物材料偶联的化合物，包括但不限于小分子荧光素、荧光蛋白、荧光染料、稀土离子及其螯合剂、半导体纳米微晶粒等。 
本文中使用的术语“荧光示踪物-生物标记物缀合物”，是指荧光示踪物通过共价键与生物标记物连接形成的化合物。 
本文使用的术语“荧光标记蛋白试剂”，是指荧光示踪物通过共价键与蛋白质分子连接形成荧光示踪物-蛋白缀合物，该缀合物配制成的溶液，用于体外诊断。 
本文使用的术语“单色荧光标记蛋白试剂”，是指一种荧光示踪物通过共价键与一种生物标记物连接形成缀合物，该缀合物配制成的溶液。 
本文使用的术语“多色荧光标记蛋白试剂”，是指多种单色荧光标记蛋白试剂的混合物。 
本文使用的术语“抗体”，包括各种动物源的单克隆抗体、多克隆抗体以及抗体片段等，包括不同的抗体种类，例如免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白E、免疫球蛋白M、免疫球蛋白D和免疫球蛋白Y。 
一种生物标记物的保存液
本发明一个实施方式公开了一种生物标记物的保存液，含有至少一种蛋白稳定剂、至少一种碱性或中性氨基酸、至少一种多羟基化合物或多羟基聚合物和柠檬酸盐。 
保存液中的蛋白稳定剂，可保持蛋白生物活性，可降低低浓度蛋白降解与失活，减少低浓度蛋白吸附于管壁造成的损失。我们发现蛋白稳定剂还可减轻一些不利环境因素如加热、表面张力及化学因素引起的蛋白变性。所述的蛋白稳定剂可选明胶和白蛋白(如牛血清白蛋白BSA和人血清白蛋白)等，优选明胶 和BSA，其浓度可为0.05%～0.40%，优选0.08%～0.24%。 
保存液中的碱性或中性氨基酸，可降低蛋白、荧光示踪物-蛋白缀合物的聚集。所述氨基酸可选精氨酸、组氨酸、赖氨酸和甘氨酸等，优选精氨酸和甘氨酸，其浓度范围可为1～20mM，优选4～16mM。 
保存液中的多羟基化合物或多羟基聚合物，可增加荧光标记蛋白试剂的水溶性和稳定性。虽然不希望受理论约束，但是认为多羟基化合物或聚合物具有张力控制作用，可有效保持蛋白的构型和活性，有助于保持荧光示踪物-蛋白缀合物的稳定，也可减少荧光素因分子间和分子内作用造成的荧光淬灭。所述的多羟基化合物可选甘油、糖醇（如甘露醇、木糖醇、山梨醇）和糖类(如海藻糖、甘露糖、木糖)等，优选甘油、甘露醇和海藻糖。所述的多羟基聚合物可选聚乙二醇聚合物，如PEG8000、PEG10000、PEG20000等，优选PEG10000、PEG20000。甘油浓度范围可为1～10%，优选2～6%；甘露醇、海藻糖和PEG浓度范围可为0.1%～1.0%，优选0.2%～0.8%。 
虽然不希望受理论约束，但是认为保存液中的柠檬酸盐可以长时间保持保存液中缓冲液的pH，减少蛋白的聚集，保持蛋白的稳定。所述柠檬酸盐可选可与柠檬酸化合的在水中可溶解的柠檬酸盐，例如柠檬酸钠、柠檬酸钾等，优选柠檬酸钠，其浓度范围可为5～40mM，优选10～30mM。 
进一步的，本发明一个实施方式的保存液还可包含至少一种抗氧化剂。虽然不希望受理论约束，但是认为抗氧化剂可用于减少荧光素的氧化淬灭。常用乙二胺四乙酸钠盐，例如EDTA·2Na，其浓度范围可为2～3mM。 
进一步的，本发明一个具体实施方式的保存液中还可以包含常规防腐剂，以有助于试剂的防腐和长期保存。对于防腐剂的种类没有特殊的要求，常用的 防腐剂有NaN3、Procline等，防腐剂浓度范围一般为0.05%～0.10%。防腐剂的浓度和种类以不影响蛋白质结构和生物活性为宜。 
除上述主要组分外，本发明一个具体实施方式的保存液还可包含缓冲剂，以将保存液的pH维持在6～8，优选6.8～7.2左右，对于缓冲剂的选择以不影响荧光强度、蛋白质结构和生物活性为宜。常见的缓冲体系如磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲溶液等均可用于本发明。缓冲剂的使用量一般为10～50mM，pH为7.0时更佳。 
虽然不希望受理论约束，但是认为将上述的蛋白稳定剂、碱性或中性氨基酸、多羟基化合物或聚合物和柠檬酸盐进行组合，各组分除了上述所述作用外，组分间还有协同作用。该保存液可直接将荧光标记蛋白试剂稀释至工作浓度进行保存，经验证经该保存液稀释的荧光标记蛋白试剂于2℃～8℃密封避光保存超过1年。容易理解，该保存液也可以将蛋白试剂保存为浓缩液，使用前稀释。更进一步，该保存液中的蛋白稳定剂和多羟基化合物或聚合物协同作用，可减轻不利环境因素如加热、表面张力及化学因素引起的蛋白变性，25℃～40℃高温下可保持试剂稳定、不易挥发，经试验证明可短期耐受25～40℃高温运输条件，降低了荧光标记蛋白试剂成本，具有很好的商业价值。 
本发明的保存液，适用荧光标记蛋白试剂种类可为小分子荧光素标记蛋白，小分子荧光素如FITC、Cy5、Cy7、Alexa Fluor等。 
本发明的保存液，适用荧光标记蛋白试剂种类可为荧光蛋白标记蛋白，荧光蛋白如PE、APC、PerCP等。 
本发明的保存液，适用荧光标记蛋白试剂种类可为串联染料标记蛋白，串联染料如PE-Cy7、APC-Cy7、PE-Cy5、PE-Cy5.5等。 
本发明的保存液，适用荧光标记蛋白试剂组分可为单色或多色荧光标记蛋白试剂，单色试剂如CD4-FITC、CD3-PerCP等，多色试剂如CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色试剂和CD3-FITC/CD16+CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色试剂等。CD4-FITC是指荧光素FITC通过共价键与对CD3细胞有特异性的抗体连接形成的缀合物。其他类推。 
荧光标记物试剂
本发明另一个实施方式公开了一种荧光标记物试剂，包括上述的保存液和荧光示踪物-生物标记物缀合物。 
荧光示踪物-生物标记物缀合物中的生物标记物是指来自生物体的生物分子或活细胞，包括但不限于核酸、多肽、蛋白质、激素、活细胞，蛋白质包括抗体、酶等。在本发明的一个优选方式中，生物标记物为单克隆抗体或多克隆抗体。 
荧光示踪物-生物标记物缀合物中的荧光示踪物可以是任何能产生荧光信号并能够和生物材料偶联的化合物，包括但不限于小分子荧光素、荧光蛋白、荧光染料、稀土离子及其螯合剂、半导体纳米微晶粒，优选小分子荧光素、荧光蛋白、串联荧光染料。 
荧光示踪物-生物标记物缀合物可以是上述的组合，通过本领域技术人员熟知的技术得到。优选的，荧光示踪物-生物标记物缀合物是荧光标记蛋白，特别优选的，是荧光标记抗体。将荧光标记物试剂与待测样品混合温育一段时间，使得试剂中的荧光示踪物-生物标记物缀合物与待测样品中的细胞或细胞成分结合，这个过程也可被称为染色。染色完成后，样品在荧光激活的流式分析仪上进行分析。或者，在另一个实施方案中，荧光示踪物-生物标记物缀合物还可 以用于固相免疫测试或生物芯片检测。相关的技术在本领域是公知的，可由标准教科书得到。 
荧光标记物试剂的制备方法
本发明又一个实施方式公开了一种荧光标记物试剂的制备方法，包括： 
提供上述保存液和荧光示踪物-生物标记物缀合物； 
用保存液将荧光示踪物-生物标记物缀合物稀释至工作浓度，获得可以直接使用的荧光标记物试剂溶液。 
优选的，荧光示踪物-生物标记物缀合物是荧光标记蛋白，特别优选的，是荧光标记抗体。 
下面，以荧光标记蛋白为例进行说明。 
将荧光标记蛋白根据需要和其他组分混合，溶解在水中，配制成荧光标记蛋白母液。称取上述保存液的各组分，加水搅拌溶解，用水稀释至一定浓度，具体可根据荧光标记蛋白母液浓度确定。根据需要，将配好的保存液和荧光标记蛋白溶液按比例混合，使得其中荧光标记蛋白的浓度至工作浓度，获得荧光标记蛋白试剂溶液。这里的“工作浓度”是指配制好的荧光标记蛋白试剂溶液可无需稀释，直接与待测样品混合检测。由于本申请的保存液对荧光示踪物-生物标记物缀合物具有很好的保存效果，配制的试剂可以无需冻干，使用时可以无需复溶配制，使用方便。 
其他
另一方面，本发明的再一个具体实施方式公开了上述保存液在制备荧光标记物试剂中的用途。 
上述保存液可以用来制备可长期保存且可直接使用的液态荧光标记物试剂。 
实施例 
以下通过荧光标记蛋白试剂的实施例来更详细的描述本发明，但本发明并非局限于此。 
1、仪器设备： 
岛津20A高效液相色谱仪（HPLC）；BD FACSCanto II流式细胞仪；上海博迅实业有限公司数显电热培养箱；其林贝尔仪器制造厂涡旋仪；梅特勒移液器及配套枪头；上海安亭科学仪器厂低速大容量离心机。 
2、试剂： 
市售SurModics保存液； 
市售多色荧光标记蛋白试剂A：Multitest CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC（CD3-FITC，SK7克隆；CD8-PE，SK1克隆；CD45-PerCP，2D1克隆；CD4-APC，SK3克隆），无需稀释，直接使用； 
市售多色荧光标记蛋白试剂B：Multitest CD3-FITC/CD16+CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC（CD3-FITC，SK7克隆；CD16-PE，B73.1克隆；CD56-PE，NACM16.2克隆；CD45-PerCP，2D1克隆；CD19-APC，SJ25C1克隆），无需稀释，直接使用； 
市售流式溶血剂，BD FACS Lysing Solution（10×浓缩液，使用时需用去离子水按1：10稀释为1×试剂）； 
临床全血样本(EDTA-K3和EDTA-K2抗凝处理)； 
市售Flow Cytometry Control； 
甲醛溶液，分析纯； 
PBS缓冲液，取KCl0.2g，KH2PO40.2g，NaCl8.0g，Na2HPO41.15g，溶于1L去离子水中，pH为7.4±0.2，用0.2μm PALL GHP滤膜过滤。 
3、检测方法： 
（1）HPLC检测荧光示踪物-蛋白缀合物峰面积方法： 
（2）使用单色荧光标记蛋白试剂检测样本方法： 
①加20μL荧光标记蛋白试剂于12×75mm流式管中，之后加入100μL全血样本，低速涡旋混匀，室温（20℃～25℃）孵育15min； 
②加入2mL1×流式溶血剂，低速涡旋混匀，室温避光孵育10min； 
③500g离心5min后倾倒上清； 
④加入2mLPBS，涡旋仪上低速混匀，500g离心5min后倾倒上清； 
⑤加入500μL含1%甲醛的PBS固定液，低速涡旋混匀，上流式细胞仪 检测。 
（3）使用多色荧光标记蛋白试剂检测样本方法： 
①加20μL荧光标记蛋白试剂于12×75mm流式管中，之后加入50μL全血样本，低速涡旋混匀，室温（20℃～25℃）孵育15min； 
②加入450μL1×流式溶血剂，低速涡旋混匀，室温避光孵育15min； 
③低速涡旋混匀，上流式细胞仪检测。 
实施例1
按表1配方分别配制1#～6#保存液，室温下搅拌溶解过滤，备用。按照常规的方法制备自制的荧光蛋白标记多克隆抗体IgG-PE试剂。分别用1～6#保存液将自制的荧光蛋白标记多克隆抗体IgG-PE试剂稀释为12.5μg/mL的溶液。稀释后的荧光标记多克隆抗体试剂溶液各分装为9小份（每一份50μL）于40℃避光放置，每3～4天取一份试剂溶液按前述的方法检测荧光示踪物-蛋白缀合物峰面积，计算随时间增加荧光示踪物-蛋白缀合物降解百分比，绘制时间与降解百分比变化曲线。 
检测结果如图1所示，荧光示踪物-蛋白缀合物降解百分比反映了荧光示踪物-蛋白缀合物的稳定性及荧光素稳定性，其中蛋白稳定剂明胶或BSA浓度为0.08%～0.24%，精氨酸或甘氨酸浓度为4mM～16mM时（即保存液2#、5#），IgG-PE荧光示踪物-蛋白缀合物降解百分比小于保存液1#、3#、4#和6#，保存液效果较佳。也说明本保存液对荧光素-抗体缀合物有良好的保存效果。 
表1 1#～6#保存液组分 
实施例2
按表2配方分别配制7#～13#保存液，室温下搅拌溶解过滤，备用。按照常规的方法制备荧光标记蛋白质BSA-PE试剂。分别用7～13#保存液将自制的荧光标记蛋白质BSA-PE试剂稀释为12.5μg/mL的溶液。稀释后的荧光标记蛋白质试剂溶液各分装为8小份（每一份50μL）于40℃避光放置，每3～7天取一份试剂按上述的方法检测荧光示踪物-蛋白缀合物峰面积，计算随时间增加荧光示踪物-蛋白缀合物降解百分比，绘制时间与降解百分比变化曲线。 
检测结果如图2所示，荧光示踪物-蛋白缀合物降解百分比反映了荧光示踪物-蛋白缀合物的稳定性及荧光素稳定性，其中多羟基化合物甘油浓度为2%～6%，糖醇、糖类和聚乙二醇聚合物浓度为0.2%～0.8%时（即保存液9#、10#、13#），BSA-PE荧光示踪物-蛋白缀合物降解百分比小于保存液7#、8#、11#、12#，保存液效果较佳。也说明本保存液对荧光素-蛋白缀合物有良好的保存效果。 
表2 7#～13#保存液组分 
实施例3
按表3配方分别配制14#～16#保存液，室温下搅拌溶解过滤，备用。按照常规的方法制备CD4-FITC（SK3克隆）、CD3-PerCP（SK7克隆）、CD8-APC-Cy7(SK8克隆)三种单色荧光标记单克隆抗体试剂，分别用上述14#～16#保存液和市售SurModics保存液按表4对这三种单色荧光标记单克隆抗体试剂进行稀释。 
表3 14#～16#保存液组分 
表4CD4-FITC、CD3-PerCP、CD8-APC-Cy7三种单色荧光标记单克隆抗体试剂稀释方法 
稀释后的单色荧光标记单克隆抗体试剂各分装为6小份（每份100μL）于25℃避光放置，每7天各取一份试剂测定同一批市售Flow Cytometry Control质控品，按上述单色试剂检测样本的方法，检测质控品中细胞结合试剂后的荧光强度，各重复操作3次，取三次检测结果均值。以时间和各单色荧光标记单克隆抗体试剂平均荧光强度绘制曲线。 
检测结果如图3、图4、图5所示，时间-荧光强度变化曲线反映了荧光标记单克隆抗体试剂抗体生物活性及荧光稳定性，结果显示保存液14#、15#、16#对抗体生物活性和荧光素或荧光蛋白的稳定性均有保护作用，比市售保存液保存效果更好。 
实施例4
按表5配方分别配制17#、18#保存液，室温下搅拌溶解过滤，备用。 
表5 17#～18#保存液组分 
表6多色试剂组成 
试剂 多色试剂A1 多色试剂B1
CD45-PerCP 5μg／mL 5μg／mL
CD3-FITC 5μg／mL 5μg／mL
CD4-APC 0.5μg／mL /
CD8-PE 1μg／mL /
CD19-APC / 1μg／mL
CD16-PE / 1μg／mL
CD56-PE / 2.5μg／mL
稀释保存液 保存液17# 保存液18#
稀释好的两种自制的多色试剂A1和B1及市售的多色荧光标记蛋白试剂A、多色荧光标记蛋白试剂B分别分装为3小份(每份100μL)，于40℃避光放置13天进行加速试验，分别于0天、8天、13天各取1份加速试验多色试剂A1、B1及多色荧光标记蛋白试剂A、多色荧光标记蛋白试剂B，按上述多色试剂检测样本的方法，检测临床样本中各阳性细胞群结合试剂后的荧光强度，各重复操作3次，取均值。 
由于不同时间临床样本差异较大，自制多色试剂浓度与多色荧光标记蛋白试剂A、多色荧光标记蛋白试剂B有差异，数据统计取自制多色试剂A1和B1各平均荧光强度与多色荧光标记蛋白试剂A、多色荧光标记蛋白试剂B平均荧光强 度的比值，加速试验后比值越大，说明保存效果越好。若多色试剂检测过程中各亚群阴性和阳性细胞间不能有效分离，则该多色试剂停止加速试验和不对该次数据进行统计。 
结果如表7、表8所示，结果表明不同荧光标记抗体试剂抗体活性和荧光降解速率不一致，保存液17#、18#保存的多色试剂比值均大于0天比值，即保存液17#、18#对多色试剂抗体生物活性和荧光稳定性均有保护作用。 
表7自制多色试剂A1加速试验各荧光强度与多色荧光标记蛋白试剂A比值 
时间 0天 8天 13天
PerCP 0.86 1.50 3.12
FITC 1.72 1.75 1.83
APC 0.78 0.76 1.43
PE 2.86 4.02 6.89
表8自制多色试剂B1加速试验各荧光强度与多色荧光标记蛋白试剂B比值 
时间 0天 8天 13天
PerCP 0.85 1.50 2.60
FITC 1.35 1.46 /
APC 1.95 2.37 /
PE 2.14 7.02 /
注：/表示未统计，因各亚群阴性和阳性细胞间不能有效分离。 
实施例5
取自制的CD4-FITC（SK3克隆）、CD3-PerCP（SK7克隆）单色荧光标记单克隆抗体试剂，分别用上述保存液14#、保存液17#和市售SurModics 保存液稀释，使其浓度分别为5μg/mL、12μg/mL。稀释好的试剂各分成2份， 一份于4℃避光保存作为对照，一份不放冰袋直接放入纸盒于车后备箱在二级公路上避光运输6天，每天至少运输80km，测试时间为夏季。分别取对照试剂和运输后的试剂，对同一批市售Flow Cytometry Control染色，溶血/洗涤处理后，用流式细胞仪进行流式检测记录平均荧光强度，各重复操作3次，取三次检测结果均值，比较运输后试剂与对照检测结果的差别。 
检测结果见表9、表10，保存液14#、17#可短期耐受高温运输条件，运输后荧光标记蛋白试剂抗体活性和荧光稳定性变化均小于6%，对试剂性能无明显影响。 
表9CD4-FITC单色荧光标记单克隆抗体试剂运输试验结果 
表10CD3-PerCP单色荧光标记单克隆抗体试剂运输试验结果 
实施例6
取自制的CD45-PerCP（2D1克隆）、CD3-FITC（SK7克隆）、CD4-APC（SK3克隆）、CD8-PE（SK8克隆）单色荧光标记单克隆抗体试剂，用保存液17#稀释混匀为CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC荧光标记蛋白多色试剂，多色试 剂组成同表6。稀释好的试剂分成6份（每份500μL），于2～8℃避光、密封保存。分别于0、3、6、9、12、14月取样测定市售Flow Cytometry Control，按上述单色试剂检测样本的方法，检测质控品中细胞结合试剂后的荧光强度，各重复操作3次，取3次检测结果均值，比较随放样时间的增加各荧光强度的变化情况。 
检测结果见表11，随时间增加，各荧光强度放样后均有降低，保存液17#对荧光标记蛋白试剂进行低温、避光密封保存，各荧光强度1年内降低幅度约为10%，符合要求。本保存液可对荧光标记蛋白试剂生物活性及荧光稳定性有保护作用，可维持试剂性能1年。 
表11CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC多色试剂长期稳定性各荧光强度检测结果 
时间 0月 3月 6月 9月 12月 14月
PerCP 2668 2598 2507 2433 2389 2301
FITC 2545 2512 2464 2387 2255 2146
APC 7110 6905 6826 6719 6522 6314
PE 5106 4897 4688 4547 4382 4210
实施例7
按如下配方配制19#保存液，室温下搅拌溶解过滤，备用。 
明胶 0.12%
精氨酸 10mM
PEG20000 0.60%
柠檬酸三钠 16mM
缓冲液 0.1% NaN3，140mM NaCl，10mM磷酸盐缓冲溶液，pH7.0
[0145] 取自制的CD19-APC（SJ25C1克隆）单色荧光标记单克隆抗体试剂，分别用保存液19#和市售SurModics保存液稀释为5μg/mL的溶液。稀释后的单色荧光标记单克隆抗体试剂各分装为6小份（每份100μL）于25℃避光放置，每7天各取一份试剂测定同一批市售Flow Cytometry Control，按上述单色试剂检测样本的方法，检测质控品中细胞结合试剂后的荧光强度，各重复操作3次，取三次检测结果均值。以时间和各单色荧光标记单克隆抗体试剂平均荧光强度绘制曲线。 
检测结果如图6所示，时间和各单色荧光标记单克隆抗体试剂平均荧光强度变化曲线反映了荧光标记单克隆抗体试剂抗体生物活性及荧光稳定性，保存液19#对荧光蛋白-抗体缀合物以及抗体生物活性和荧光稳定性均有保护作用。 
综上，从以上的实施例可见，本发明申请的保存液对于荧光示踪物-生物标记物缀合物具有很好的保存效果，能保存荧光示踪物、生物标记物以及缀合物的活性和稳定性，使得荧光标记物试剂可以制备成直接使用的液态商品化试剂，方便使用，且该保存液制备的荧光标记物试剂可以耐受短时间的高温运输，有助于降低成本，具有很好的商业价值。 
以上通过具体的实施例对本发明进行了说明，但本发明并不限于这些具体的实施例。本领域技术人员应该明白，还可以对本发明做各种修改、等同替换、变化等等，这些变换只要未背离本发明的精神，都应在本发明的保护范围之内。 

Claims (17)

1.一种生物标记物的保存液,包括：
至少一种蛋白稳定剂；
至少一种碱性或中性氨基酸；
至少一种多羟基化合物或多羟基聚合物；和
柠檬酸盐。
2.如权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述蛋白稳定剂选自白蛋白或明胶。
3.如权利要求2所述的保存液，其特征在于，所述蛋白稳定剂的浓度为0.05%～0.40%，优选0.08%～0.24%。
4.如权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述碱性或中性氨基酸选自精氨酸、组氨酸、赖氨酸和甘氨酸，优选精氨酸或甘氨酸。
5.如权利要求4所述的保存液，其特征在于，所述碱性或中性氨基酸的浓度为1～20mmol/L，优选4～16mmol/L。
6.如权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述多羟基化合物或多羟基聚合物选自甘油、多糖、糖醇和聚乙二醇聚合物。
7.如权利要求6所述的保存液，其特征在于，所述多糖选自海藻糖，或者所述糖醇选自甘露醇，或者所述聚乙二醇聚合物选自PEG8000、PEG10000或PEG20000。
8.如权利要求7所述的保存液，其特征在于，所述甘油的浓度为1～10%，优选2-6%；或者所述甘露醇、海藻糖和聚乙二醇聚合物的浓度为0.1%～1.0%，优选0.2%～0.8%。
9.如权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述保存液还含有至少一种抗氧化剂。
10.如权利要求9所述的保存液，其特征在于，所述抗氧化剂选自乙二胺四乙酸钠盐。
11.如权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述保存液还含有防腐剂。
12.如权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述保存液还含有缓冲剂，维持pH在6～8。
13.一种荧光标记物试剂，其特征在于，所述试剂包括荧光示踪物-生物标记物缀合物和权利要求1-12任一项所述的保存液。
14.如权利要求13所述的试剂，其特征在于，所述荧光示踪物-生物标记物缀合物中的生物标记物为蛋白质，优选抗体或多肽。
15.如权利要求13所述的试剂，其特征在于，所述荧光示踪物-生物标记物缀合物中的荧光示踪物选自小分子荧光素、荧光蛋白或串联荧光染料。
16.一种荧光标记物试剂的制备方法，包括，
提供荧光示踪物-生物标记物缀合物和权利要求1-12任一项所述的生物标记物保存液；
用所述保存液将所述荧光示踪物-生物标记物缀合物稀释至工作浓度，获得可以直接使用的荧光标记物试剂溶液。
17.权利要求1-12任一项所述的保存液在制备荧光标记物试剂中的用途。
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Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105203772A (zh) * 2015-09-16 2015-12-30 宁波瑞源生物科技有限公司 甘氨酸在减弱荧光素fitc标记d-二聚体抗体时猝灭现象中的应用
CN105628914A (zh) * 2016-02-04 2016-06-01 广州科方生物技术有限公司 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法
CN105974121A (zh) * 2016-04-18 2016-09-28 武汉云克隆科技股份有限公司 一种含鱼明胶的生物制品稳定剂
CN106370869A (zh) * 2016-08-31 2017-02-01 中山市创艺生化工程有限公司 一种抗体‑荧光微球偶联物的储存液及其应用
CN106405078A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 中山市创艺生化工程有限公司 一种d‑二聚体免疫荧光定量试纸条及其制备方法
CN106596920A (zh) * 2016-11-24 2017-04-26 上海透景诊断科技有限公司 链霉亲和素藻红蛋白冷冻稳定剂及其制备方法和应用
CN107219356A (zh) * 2016-03-22 2017-09-29 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 掺杂荧光标记生物高聚物及其制备方法和应用
CN107290545A (zh) * 2017-06-19 2017-10-24 威海威仕泰医疗科技有限公司 一种稳定的β2微球蛋白溶液、其制备方法及应用
CN108593909A (zh) * 2018-05-23 2018-09-28 苏州立禾生物医学工程有限公司 一种定点标记免疫试剂的方法、标记免疫试剂及应用
CN106370840B (zh) * 2016-08-31 2018-10-30 中山市创艺生化工程有限公司 一种降钙素原免疫荧光定量试纸条及其制备方法
WO2018233328A1 (en) * 2017-06-22 2018-12-27 Wwhs Biotech, Inc PROTEIN DISSOCIATION BUFFER AND USE THEREOF IN PREPARING A PROTEIN CHIP
CN109725148A (zh) * 2018-12-30 2019-05-07 广东环凯微生物科技有限公司 一种免疫磁珠保存液
WO2019169798A1 (zh) * 2018-03-07 2019-09-12 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及糖尿病抗体谱检测试剂盒及其制备方法
CN111551725A (zh) * 2020-04-10 2020-08-18 浙江正熙生物医药有限公司 一种提高抗体荧光染料标记信号的方法
CN111647089A (zh) * 2020-06-30 2020-09-11 安徽九川生物科技有限公司 一种重组类人弹性蛋白及其组合物
CN112501024A (zh) * 2020-12-03 2021-03-16 英科新创（苏州）生物科技有限公司 一种体外诊断试剂盒通用型质控品保存液
CN113049806A (zh) * 2019-12-28 2021-06-29 深圳市帝迈生物技术有限公司 生物标记物的保存液、荧光示踪物试剂以及免疫检测方法
CN113238039A (zh) * 2018-03-07 2021-08-10 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种检测试剂盒
CN114324882A (zh) * 2020-10-12 2022-04-12 广东菲鹏生物有限公司 蛋白稳定剂及其应用
CN114397460A (zh) * 2021-12-09 2022-04-26 华南理工大学 生物标记物的保存液以及生物标记物试剂

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112654850A (zh) * 2018-08-24 2021-04-13 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血样分析仪及血样混匀方法
CN113219183B (zh) * 2021-06-16 2024-04-19 尚建华 一种液态胶血型检测卡、制备方法及血型检测系统
CN114354304A (zh) * 2021-12-07 2022-04-15 安徽惠邦生物工程有限公司 易降解蛋白保存基质液及其应用
CN115575627B (zh) * 2022-11-15 2023-03-14 北京博奥森生物技术有限公司 超支化聚缩水甘油醚的应用、蛋白质标记物保存液和比浊法检测试剂盒

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003064683A1 (fr) * 2002-01-31 2003-08-07 Arkray, Inc. Methode de quantification de proteine glycosylee au moyen d'une reaction d'oxydoreduction, et kit de quantification associe
WO2006040107A1 (en) * 2004-10-12 2006-04-20 Schott Ag Multiplexed protein adsorption assay
CN101059521A (zh) * 2007-05-30 2007-10-24 保定天岳生物工程有限公司 一种无需稀释血浆样本测定纤维蛋白原含量的试剂及其测定方法
CN101498732A (zh) * 2008-02-03 2009-08-05 北京九强生物技术有限公司 一种改良的前白蛋白检测试剂盒
CN102115737A (zh) * 2009-12-31 2011-07-06 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 稳定碱性磷酸酶或其标记物的试剂和方法
CN102116770A (zh) * 2009-12-31 2011-07-06 北京热景生物技术有限公司 一种免疫层析快速试剂盒及其生产制备
CN102375056A (zh) * 2010-08-27 2012-03-14 烟台赛尔斯生物技术有限公司 固定生物大分子的稳定剂及其制备方法和应用
CN102680702A (zh) * 2012-04-28 2012-09-19 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 一种快速定量检测c-反应蛋白的免疫荧光试纸条组件、及其制成的检测卡组件和制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007108505A1 (ja) * 2006-03-22 2007-09-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha エリスロポエチン溶液製剤
CN102331491A (zh) * 2011-06-20 2012-01-25 洪伟 封闭板稳定剂
CN102565389A (zh) * 2011-10-09 2012-07-11 温州医学院 一种用于沙门菌快速检测的Nano/ALISA方法和试剂盒

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003064683A1 (fr) * 2002-01-31 2003-08-07 Arkray, Inc. Methode de quantification de proteine glycosylee au moyen d'une reaction d'oxydoreduction, et kit de quantification associe
WO2006040107A1 (en) * 2004-10-12 2006-04-20 Schott Ag Multiplexed protein adsorption assay
CN101059521A (zh) * 2007-05-30 2007-10-24 保定天岳生物工程有限公司 一种无需稀释血浆样本测定纤维蛋白原含量的试剂及其测定方法
CN101498732A (zh) * 2008-02-03 2009-08-05 北京九强生物技术有限公司 一种改良的前白蛋白检测试剂盒
CN102115737A (zh) * 2009-12-31 2011-07-06 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 稳定碱性磷酸酶或其标记物的试剂和方法
CN102116770A (zh) * 2009-12-31 2011-07-06 北京热景生物技术有限公司 一种免疫层析快速试剂盒及其生产制备
CN102375056A (zh) * 2010-08-27 2012-03-14 烟台赛尔斯生物技术有限公司 固定生物大分子的稳定剂及其制备方法和应用
CN102680702A (zh) * 2012-04-28 2012-09-19 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 一种快速定量检测c-反应蛋白的免疫荧光试纸条组件、及其制成的检测卡组件和制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
文立群等: "氨基酸对CdTe量子点荧光性质的影响", 《物理化学学报》 *

Cited By (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105203772A (zh) * 2015-09-16 2015-12-30 宁波瑞源生物科技有限公司 甘氨酸在减弱荧光素fitc标记d-二聚体抗体时猝灭现象中的应用
CN105203772B (zh) * 2015-09-16 2017-05-24 宁波瑞源生物科技有限公司 甘氨酸在减弱荧光素fitc标记d‑二聚体抗体时猝灭现象中的应用
CN105628914A (zh) * 2016-02-04 2016-06-01 广州科方生物技术有限公司 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法
CN105628914B (zh) * 2016-02-04 2019-01-08 广州科方生物技术股份有限公司 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法
CN107219356A (zh) * 2016-03-22 2017-09-29 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 掺杂荧光标记生物高聚物及其制备方法和应用
CN105974121A (zh) * 2016-04-18 2016-09-28 武汉云克隆科技股份有限公司 一种含鱼明胶的生物制品稳定剂
CN105974121B (zh) * 2016-04-18 2018-02-06 武汉云克隆科技股份有限公司 一种含鱼明胶的生物制品稳定剂
CN106370869B (zh) * 2016-08-31 2019-01-11 中山市创艺生化工程有限公司 一种抗体-荧光微球偶联物的储存液及其应用
CN106370869A (zh) * 2016-08-31 2017-02-01 中山市创艺生化工程有限公司 一种抗体‑荧光微球偶联物的储存液及其应用
CN106405078A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 中山市创艺生化工程有限公司 一种d‑二聚体免疫荧光定量试纸条及其制备方法
CN106370840B (zh) * 2016-08-31 2018-10-30 中山市创艺生化工程有限公司 一种降钙素原免疫荧光定量试纸条及其制备方法
CN106596920A (zh) * 2016-11-24 2017-04-26 上海透景诊断科技有限公司 链霉亲和素藻红蛋白冷冻稳定剂及其制备方法和应用
CN107290545B (zh) * 2017-06-19 2019-01-18 威海威仕泰医疗科技有限公司 一种稳定的β2微球蛋白溶液、其制备方法及应用
CN107290545A (zh) * 2017-06-19 2017-10-24 威海威仕泰医疗科技有限公司 一种稳定的β2微球蛋白溶液、其制备方法及应用
WO2018233328A1 (en) * 2017-06-22 2018-12-27 Wwhs Biotech, Inc PROTEIN DISSOCIATION BUFFER AND USE THEREOF IN PREPARING A PROTEIN CHIP
CN113238039A (zh) * 2018-03-07 2021-08-10 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种检测试剂盒
WO2019169798A1 (zh) * 2018-03-07 2019-09-12 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及糖尿病抗体谱检测试剂盒及其制备方法
CN113238039B (zh) * 2018-03-07 2023-03-31 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种检测试剂盒
CN108593909A (zh) * 2018-05-23 2018-09-28 苏州立禾生物医学工程有限公司 一种定点标记免疫试剂的方法、标记免疫试剂及应用
CN109725148A (zh) * 2018-12-30 2019-05-07 广东环凯微生物科技有限公司 一种免疫磁珠保存液
CN109725148B (zh) * 2018-12-30 2022-05-03 广东环凯微生物科技有限公司 一种免疫磁珠保存液
CN113049806A (zh) * 2019-12-28 2021-06-29 深圳市帝迈生物技术有限公司 生物标记物的保存液、荧光示踪物试剂以及免疫检测方法
CN111551725A (zh) * 2020-04-10 2020-08-18 浙江正熙生物医药有限公司 一种提高抗体荧光染料标记信号的方法
CN111647089A (zh) * 2020-06-30 2020-09-11 安徽九川生物科技有限公司 一种重组类人弹性蛋白及其组合物
CN114324882A (zh) * 2020-10-12 2022-04-12 广东菲鹏生物有限公司 蛋白稳定剂及其应用
CN112501024A (zh) * 2020-12-03 2021-03-16 英科新创（苏州）生物科技有限公司 一种体外诊断试剂盒通用型质控品保存液
CN114397460A (zh) * 2021-12-09 2022-04-26 华南理工大学 生物标记物的保存液以及生物标记物试剂
CN114397460B (zh) * 2021-12-09 2022-11-11 华南理工大学 生物标记物的保存液以及生物标记物试剂

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