CN104432083A - 一种抗氧化大鲵多肽口服液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有高抗氧化性能的大鲵多肽，该多肽分子量不大于5000 Da。本发明还提供了一种大鲵多肽抗氧化口服液，该口服液的原料，按质量百分数计，包括：大鲵多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0.01-0.03%、β-环状糊精0.5-1%、黄原胶0.05-0.15%，余量为纯净水；该大鲵多肽液中大鲵多肽的分子量不大于5000 Da，按质量体积比，该大鲵多肽液中大鲵多肽的浓度为1%-2.5%。本发明还提供了制备该大鲵多肽抗氧化口服液的方法，该方法通过利用复合酶对大鲵肉进行酶解处理，并控制分子量的分布范围，得到了具有显著抗氧化功能的口服液。本发明工艺简单、适于规模生产。
Description
技术领域
本发明属于口服液领域，具体涉及一种抗氧化大鲵多肽口服液及其制备方法 。
技术背景
大鲵(Giant Salamander)是世界上现存最大的也是最珍贵的两栖动物，被称为“活化石”。近年来，大鲵的人工养殖已越来越受人们重视，随着大鲵人工饲养技术的成熟和推广，大鲵产量显著提高，国家有关部门已经批准人工饲养大鲵二代可以进行加工及销售，但目前市场上大鲵深加工产品基本没有，研究报道也很少见。
近年来，天然抗氧化肽因其安全无毒且具有一定的保健功能而备受人们的亲睐。天然抗氧化肽具有重金属清道夫和过氧化氢分解促进剂的作用，可降低自氧化速率，减少脂肪过氧化氢含量，减少自由基的生成。其不仅具有较强的抗氧化性，而且具有很高的安全性，被广泛应用于食品、医药及化妆品等行业。
然而，在现有技术中，对大鲵是否可以制备抗氧化产品还没有达成共识，这限制了大鲵的利用。
因此，对大鲵进行深入研究，并利用大鲵开发出可抗氧化的产品，成为了迫在眉睫的需求。
发明内容
针对现有技术的缺点，本发明的目的之一是提供一种具有抗氧化性能的大鲵多肽，该多肽的分子量不大于5000 Da。
本发明的目的之二在于提供一种大鲵多肽抗氧化口服液，该口服液的原料，按质量百分数计，包括：大鲵多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0.01-0.03%、β-环状糊精0.5-1%、黄原胶0.05-0.15%，余量为纯净水；所述大鲵多肽液中大鲵多肽的分子量不大于5000 Da，按质量体积比，所述大鲵多肽液中大鲵多肽的浓度为1%-2.5%。
所述大鲵多肽液是以大鲵肉为原料制得，制备方法包括如下步骤：
1）选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入质量为大鲵肉2倍的纯净水进行匀浆处理；
2）按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1）匀浆处理后的大鲵肉，再加入复合酶进行酶解，复合酶用量为沥干大鲵肉质量的0.5%-2%，酶解温度为50-60℃，酶解时间为5-7h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上灭酶10-20min，得大鲵酶解多肽液；
3）微滤：将步骤2）所得大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，取滤液；
4）超滤：将步骤3）所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液。
优选的，所述口服液的原料，按质量百分数计，包括：大鲵多肽液50 %、白砂糖10 %、苹果汁4 %、柠檬酸0.025 %、β-环状糊精1 %、黄原胶0.1 %；所述大鲵多肽液中大鲵多肽的分子量不大于5000 Da，所述大鲵多肽液中大鲵多肽的浓度为1%。
本发明的另一个目的是提供一种抗氧化大鲵多肽口服液的制备方法，该方法包括步骤：
1）选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入质量为大鲵肉2倍的纯净水进行匀浆处理；
2）按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1）匀浆处理后的大鲵肉，再加入复合酶进行酶解，复合酶用量为沥干大鲵肉质量的0.5%-2%，酶解温度为50-60℃，酶解时间为5-7h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上灭酶10-20min，得大鲵酶解多肽液；
3）微滤：将步骤2）所得大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，取滤液；
4）超滤：将步骤3）所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液，备用；
5）先将大鲵多肽液、白砂糖、苹果汁、柠檬酸、β-环状糊精和水混合均匀，再加入黄原胶，并混合均匀，按质量百分数计，各组分的比例为：大鲵多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0.01-0.03%、β-环状糊精0.5-1%、黄原胶0.05-0.15%，余量为纯净水；
6）将步骤5）所得物采用500目滤布过滤，然后进行灌装；
7）将步骤6）所得物进行高温高压杀菌，杀菌方式为：升温10min，110-115℃、0.07MPa杀菌15-40min，分级冷却10min，冷却至中心温度小于40℃，即得大鲵多肽抗氧化口服液成品；
所述复合酶，按质量比计，由以下酶组成：中性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=2:1:1
复合酶中包含内切酶、外切酶，可以控制分子量，提高低分子量肽的得率；采用优化得到的酶解工艺条件，可提高水解度和原料利用率；
通过复合酶的配置和酶解工艺的调整，本发明能获得高的多肽得率，更重要的是，能获得较高的分子量低于5000Da多肽的得率，为有效利用大鲵制取抗氧化多肽奠定了基础。
采用微滤处理，是为了除去水解液中的大分子物质和杂质，防止堵塞超滤膜，提高超滤分离效率。经试验表明分子量低于5000的大鲵肽抗氧化性（清除DPPH自由基和羟基自由基）比分子量高于5000分别高37.6%和26.3%左右；
口服液中添加白糖、柠檬酸、苹果汁和β-环状糊精是为了调节口服液口味，掩蔽异味。添加黄原胶是为了保持口服液稳定，防止口服液在储藏期间出现沉淀。
本发明的有益效果：
1、本发明采用人工饲养大鲵肉为原料，通过控制酶解工艺和超滤，控制分子量分布，得到大量的抗氧化肽，具有较强的抗氧化活性，再辅以白砂糖、苹果汁、柠檬酸、β-环状糊精和黄原胶，制成营养丰富、酸甜适中、风味独特，并具有显著抗氧化功能的大鲵多肽抗氧化口服液；
2、多肽得率高，特别是可以获得较高的分子量小于5000Da的多肽的得率；
3、本发明用于制备大鲵多肽抗氧化口服液的方法工艺简单、操作性强，适合于规模化生产。
具体实施方式
实施例1
一种大鲵多肽抗氧化功能口服液的制备经过下列步骤：
a、大鲵多肽液的制备
a.1、原料的处理 选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入其质量2倍的纯净水进行匀浆处理；
a.2、酶解 将步骤a.1匀浆处理后的大鲵肉再加入其质量2倍的水进行稀释，加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的复合酶进行酶解，其酶用量为原料质量的1%（w/w），复合酶其组成质量比为：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶=2:1:1。酶解温度为55℃，酶解时间为5h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上保持灭酶15min，得大鲵酶解多肽液；
a.3、微滤 将步骤a.2得到的大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，即得透明的大鲵多肽液，其中，按质量体积比，大鲵多肽液中大鲵多肽的浓度为1%；
a.4、超滤 将步骤a.3得到的大鲵多肽液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液，备用；
b、调配 称取步骤a.4得到的大鲵多肽液50%，称量白砂糖10%、苹果汁5%、柠檬酸0.03%、β-环状糊精1%和纯净水，混合后搅拌至全部溶解，最后按黄原胶0.15%称量黄原胶溶液，搅拌混合均匀，所有组分的百分比加起来为100%，。
c、过滤、灌装 将步骤b调配好的混合液采用500目滤布过滤，然后进行灌装；
d、杀菌、冷却 将步骤c灌装好的口服液进行高温高压杀菌，杀菌方式：升温10min， 115℃、0.07MPa杀菌30min，分级冷却10min，冷却至中心温度小于40℃，即得成品。
实施例2
一种大鲵多肽抗氧化功能口服液的制备经过下列步骤：
a、大鲵多肽液的制备
a.1、原料的处理 选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入其质量2倍的纯净水进行匀浆处理；
a.2、酶解 将步骤a.1匀浆处理后的大鲵肉再加入其质量2倍的水进行稀释，加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的复合酶进行酶解，其酶用量为原料质量的2 %（w/w），复合酶其组成质量比为：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶=2:1:1。酶解温度为50℃，酶解时间为6h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上保持灭酶20min，得大鲵酶解多肽液；
a.3、微滤 将步骤a.2得到的大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，即得透明的大鲵多肽液；
a.4、超滤 将步骤a.3得到的大鲵多肽液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液，备用；
b、调配 称取步骤a.4得到的大鲵多肽液40%，称量白砂糖8%、苹果汁4%、柠檬酸0.015%、β-环状糊精0.8%和纯净水，混合后搅拌至全部溶解，最后按黄原胶0.1%称量黄原胶溶液，搅拌混合均匀。
c、过滤、灌装 将步骤b调配好的混合液采用500目滤布过滤，然后进行灌装；
d、杀菌、冷却 将步骤c灌装好的口服液进行高温高压杀菌，杀菌方式：升温10min， 115℃、0.07MPa杀菌20min，分级冷却10min，冷却至中心温度小于40℃，即得成品。
实施例3
一种大鲵多肽抗氧化功能口服液的制备经过下列步骤：
a、大鲵多肽液的制备
a.1、原料的处理 选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入其质量2倍的纯净水进行匀浆处理；
a.2、酶解 将步骤a.1匀浆处理后的大鲵肉再加入其质量2倍的水进行稀释，加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的复合酶进行酶解，其酶用量为原料质量的0.5%（w/w），复合酶其组成质量比为：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶=2:1:1。酶解温度为60℃，酶解时间为7h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上保持灭酶20min，得大鲵酶解多肽液；
a.3、微滤 将步骤a.2得到的大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，即得透明的大鲵多肽液；
a.4、超滤 将步骤a.3得到的大鲵多肽液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液，备用；
b、调配 称取步骤a.4得到的大鲵多肽液20%，称量白砂糖12%、苹果汁3%、柠檬酸0.01%、β-环状糊精0.5%和纯净水，混合后搅拌至全部溶解，最后按黄原胶0.05%称量黄原胶溶液，搅拌混合均匀。
c、过滤、灌装 将步骤b调配好的混合液采用500目滤布过滤，然后进行灌装；
d、杀菌、冷却 将步骤c灌装好的口服液进行高温高压杀菌，杀菌方式：升温10min， 115℃、0.07MPa杀菌20min，分级冷却10min，冷却至中心温度小于40℃，即得成品。
试验例1
1、大鲵多肽清除DPPH自由基的能力测定
取2mL不同浓度（1mg/mL, 2mg/mL, 3mg/mL, 4mg/mL, 5mg/mL, 6mg/mL, 7mg/mL）的样液，加入2mL 0.1mmol/L DPPH溶液（DPPH溶于无水乙醇中），混合均匀后在室温下避光反应20min，在波长517nm处测吸光值Ai。空白组为2mL无水乙醇代替DPPH溶液，加入2mL样液，混合均匀后反应20min，在波长517nm处测定吸光值Aj。对照组为2mL DPPH溶液加入2 mL无水乙醇，在波长517nm处测定吸光值Ao。
计算公式：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ao]*100%
2大鲵多肽清除OH·能力的测定
取1mL 1.865 mmol/L邻二氮菲溶液（称取0.0369g邻二氮菲溶解于10mL无水乙醇中中，并定容于100mL容量瓶中）和2mL不同浓度梯度（0.5g/L, 1g/L, 2g/L, 4g/L, 8g/L）的样品液，充分混合均匀后加入1mL 1.865mmol/L的FeSO4（取0.0129g FeSO4.7H2O溶解于蒸馏水中，并与25mL容量瓶中定容），混合均匀后加入1mL 0.03%（V/V）H2O2,混合溶液在37℃水浴 60 min后，536 nm下测其吸光值为 A样。以去离子水代替样品液来重复以上操作，在536 nm测得吸光度A损；以去离子水代替样品液和H2O2溶液重复上述操作，在536 nm测其吸光值为A未损。
清除率（%）= (A样–A损)/( A未损–A损) ×100%。式中：A样为样品组的吸光值；A损为损伤管的吸光值；A未损为未损伤管的吸光值。
试验结果见表1。
其中，50%自由基被清除时，所需的多肽浓度（即IC50）分别为：DPPH：IC50=3.343mg/ml；OH·：IC50=0.8mg/ml。
肽得率=肽质量/原料蛋白质质量*100%，实施例1-3中大鲵多肽得率结果见表2。
对比试验例1
对比试验测定方法与试验例1一致，在进行清除DPPH自由基的能力测定时，以分子量超过5000Da的大鲵多肽作为对照组，对照组中大鲵多肽的浓度为5mg/ml；在进行清除OH·能力的测定时，以分子量超过5000Da的大鲵多肽作为对照组，对照组中大鲵多肽的浓度为4mg/ml。试验结果为：对照组对DPPH自由基的清除率为48.11%，对OH·的清除率为44.93%。
Claims (7)
1.一种具有高抗氧化性能的大鲵多肽，其特征在于，所述大鲵多肽的分子量不大于5000 Da。
2.一种大鲵多肽抗氧化口服液，其特征在于：所述口服液的原料，按质量百分数计，包括：大鲵多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0.01-0.03%、β-环状糊精0.5-1%、黄原胶0.05-0.15%，余量为纯净水；所述大鲵多肽液中大鲵多肽的分子量不大于5000 Da，按质量体积比，所述大鲵多肽液中大鲵多肽的浓度为1%-2.5%。
3.根据权利要求2所述的口服液，其特征在于，所述大鲵多肽液是以大鲵肉为原料制得，制备方法包括如下步骤：
1）选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入质量为大鲵肉2倍的纯净水进行匀浆处理；
2）按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1）匀浆处理后的大鲵肉，再加入复合酶进行酶解，复合酶用量为沥干大鲵肉质量的0.5%-2%，酶解温度为50-60℃，酶解时间为5-7h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上灭酶10-20min，得大鲵酶解多肽液；
3）微滤：将步骤2）所得大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，取滤液； 4）超滤：将步骤3）所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液。
4.根据权利要求2所述的口服液，其特征在于，所述口服液的原料，按质量百分数计，包括：大鲵多肽液50 %、白砂糖10 %、苹果汁4 %、柠檬酸0.025 %、β-环状糊精1 %、黄原胶0.1 %；所述大鲵多肽液中大鲵多肽的分子量不大于5000 Da，按质量体积比，所述大鲵多肽液中大鲵多肽的浓度为1 %。
5.一种大鲵多肽抗氧化口服液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1）选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入质量为大鲵肉2倍的纯净水进行匀浆处理；
2）按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1）匀浆处理后的大鲵肉，再加入复合酶进行酶解，复合酶用量为沥干大鲵肉质量的0.5%-2%，酶解温度为50-60℃，酶解时间为5-7h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上灭酶10-20min，得大鲵酶解多肽液；
3）微滤：将步骤2）所得大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，取滤液；
4）超滤：将步骤3）所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液，备用；
5）先将大鲵多肽液、白砂糖、苹果汁、柠檬酸、β-环状糊精和水混合均匀，再加入黄原胶溶液，并混合均匀，按质量百分数计，各组分的比例为：大鲵多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0.01-0.03%、β-环状糊精0.5-1%、黄原胶0.05-0.15%，余量为纯净水；
6）将步骤5）所得物采用500目滤布过滤，然后进行灌装；
7）将步骤6）所得物进行高温高压杀菌，杀菌方式为：升温10min，于110-115℃、0.07MPa杀菌15-40min，分级冷却10min，冷却至中心温度小于40℃，即得大鲵多肽抗氧化口服液成品；
所述复合酶，按质量比计，由以下酶组成：中性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=2:1:1。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中，复合酶用量为沥干大鲵肉质量的2 %，酶解温度为55℃，酶解时间为6 h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上灭酶15 min。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤5)中，按质量百分数计，所述各组分的比例为：大鲵多肽液50 %、白砂糖10 %、苹果汁4 %、柠檬酸0.025 %、β-环状糊精1 %、黄原胶0.1 %，余量为纯净水。
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