CN103493969A - 一种生产大鲵多肽粉的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生产大鲵多肽的方法，包括将新鲜大鲵肉经低温干燥、粉碎、去除脂肪、复合酶可控酶解、离心、粗过滤、两次膜过滤、真空浓缩、冷冻干燥、碾碎、得到大鲵多肽粉。

Description

一种生产大鲵多肽粉的方法

技术领域

本发明涉及一种生产大鲵多肽的方法，属于生物医药领域。 

背景技术

作为现存唯一的一种大型两栖动物，大鲵正被人们深入的认知和研究着，目前人们对大鲵的研究主要集中在生态调查，形态解剖，人工繁殖和养殖等方面。随着人工繁养的成功，大鲵在学术上研究的重要意义进一步得到升华，人们对大鲵的食用价值和功效不断的认识不断深入。然而遗憾的是，称得上大鲵的深加工产品寥寥无几。有的市面上所谓大鲵多肽的产品其成分也就是大鲵蛋白质而已。由于肽较生物体的其他物质（含蛋白质和氨基酸），有着更多更强的活性和多样性，有专家称“21世纪将是肽的世纪”。多肽可以通过合成和提取得到，但前者的安全性备受质疑，后者存在生产成本及效率与溶剂残留方面的不足，人们对通过环境友好、绿色安全的生物技术制备多肽情有独钟。于是乎，近年来，国内对各种各样的多肽生物技术制备方法研究相当不少。其中也有关于大鲵蛋白酶水解的研究，为数不多的大鲵多肽的研究其制备限于酶解条件优化，其功能限于缓解体力疲劳等方法；中国专利公开“CN102676622A”公开了“大鲵纳米肽及大鲵酒”的专利申请，从中可以看到，其方法仅仅是通过得到纳米大鲵粉经过简单的酶解得到大鲵“纳米肽”和较多的游离氨基酸，其所得产物值得商榷，其功能也不很明确。 

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种以饲养中国大鲵为原料经可控酶解得到具有保肝功能的多肽粉。

本发明的上述目的是通过如下技术方案实现的：

一种生产大鲵多肽的方法，包括如下步骤：

A.以新鲜大鲵肉为原料，经干燥处理，得大鲵肉干，将其粉碎得大鲵肉粉，去除脂肪，挥干溶剂，得到脱脂大鲵粉；

B.采用复合酶制剂对脱脂大鲵粉进行可控酶解，得到酶解液；

C.将上述酶解液离心，过滤，取滤液，然后经两次超膜过滤，得大鲵多肽液；

D.将大鲵多肽液浓缩，干燥，碾碎过筛，得大鲵多肽粉。

在本发明中，所述大鲵多肽的生产方法的步骤A中，干燥可以采用低温干燥的方式，其温度控制在60-65℃，这样操作可以使其本身所含大鲵蛋白及多肽、氨基酸损失最小；粉碎后，过40-80目筛，得大鲵肉粉；可以采用可使用于食用油浸提的6#溶剂油处理去除脂肪，其中食用油浸提领域所使用的众所周知溶剂，主要成分是正己烷。

进一步的，在步骤B中，采用的复合酶制剂为动物水解蛋白酶和中性蛋白酶 的复合酶，动物水解蛋白酶和中性蛋白酶的质量比优选为2:1，在1：10料水比（质量体积比 m/v）情况下，优选为1:3，加入10万活力单位上述复合酶，加入量为原料（脱脂大鲵粉）的0.1%（质量比）；复合酶粉采用热水预处理，热水用量为复合酶粉质量的10-50倍，温度为50℃，预处理时间为10分钟；预处理后搅匀过滤，加入到酶解体系，酶解条件为于自然pH、45-50℃条件下酶解1-1.5小时。

在本发明中，所述动物水解蛋白酶本身是复合酶，含有内切酶和外切酶、风味酶，研究表明，该酶水解较可，随着水解的进行，体系pH值有所降低，水解减缓，添加中性蛋白酶后，更加合适本可控酶解反应。

进一步的，在步骤C中，所述两次超膜过滤的第一次采用截留2000道尔顿分子量的膜过滤，取截留液进行第二次4000道尔顿分子量截留，取滤过液，得2000-4000道尔顿分子量范围的大鲵多肽液。

进一步的，在步骤D中，将多肽液于旋转蒸发仪上进行真空薄膜浓缩，然后于冷冻干燥机内冻干。

动物试验表明，灌胃饲养中国大鲵多肽粉后,四氯化碳诱导肝损伤小鼠体重明显增加,当其剂量为400mg/kg.BW和800mg/kg.BW时, 小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力显著低于四氯化碳模型对照组,肝组织病理结果为阳性；同时饲养中国大鲵多肽粉可使乙醇诱导肝损伤小鼠血清中还原型谷胱甘肽含量显著高于乙醇模型对照组，丙二醛、甘油三酯含量显著低于乙醇模型对照组，肝组织病理结果为阳性。饲养中国大鲵多肽粉对四氯化碳及乙醇引起的肝损伤有辅助保护作用。

本发明的有益效果在于：本发明采用了许可使用于食用油浸提中的6#溶剂油去除脂肪，采用了复合酶制剂可控酶解的技术，还采用了两次膜过滤分离浓缩方法得到目标多肽。本发明所采用方法较之合成多肽与提取多肽而言，水解条件温和，可定位水解产生特定多肽，水解过程易于控制，所得产物具有易消化、易吸收、抗过敏特性，且安全性高，且生产过程营养素损失少，对环境友好。生产的产品除了具有保肝作用，还具有免疫调节活性、抗氧化活性以及缓解体力疲劳等功效。其工业化前景好，社会效益和经济效益明显。

具体实施方式

下列通过实施例对本发明进行说明。实施例仅限于对本发明作进一步说明，不代表本发明的保护范围，依据本发明做出的非本质的修改和调整均属于本发明的保护范围。

实施例1：

取切分的新鲜大鲵肉1000克，经60℃干燥得大鲵肉干（水分为3-5%），将其粉碎过60目，得大鲵肉粉，经可使用于食用油浸提的6#溶剂油处理去除脂肪。挥干溶剂得到脱脂大鲵粉。取各为 的动物水解蛋白酶和中性蛋白酶（2：1）复合酶0.1克，以5克50℃热水预处理10分钟，搅匀过滤，加入到100克脱脂大鲵粉和纯净水300克的体系中，不采用不够安全的缓冲溶液调节pH值,于自然pH、45℃条件下可控酶解1.5小时。然后将酶解液离心，过滤，取滤液，然后经两次超膜过滤，第一次采用截留2000道尔顿分子量的膜过滤，取截留液进行第二次4000分子量截留，取滤过液，得2000-4000道尔顿分子量范围的饲养中大鲵多肽液。再将经上述处理得到的饲养中国大鲵多肽液真空浓缩，然后冷冻干燥碾碎过筛，得大鲵多肽粉。

实施例2：

取新鲜大鲵肉2000克，经65℃干燥得大鲵肉干（水分为3-5%），将其粉碎过80目，得大鲵肉粉，经可使用于食用油浸提的6#溶剂油处理去除脂肪。挥干溶剂得到脱脂大鲵粉。取各为10万活力单位的动物水解蛋白酶和中性蛋白酶（2：1）复合酶0.2克，以5克50℃热水预处理10分钟，搅匀过滤，加入到200克脱脂大鲵粉和纯净水600克的体系中，不采用不够安全的缓冲溶液调节pH值,于自然pH、50℃条件下可控酶解1小时。然后将酶解液离心，过滤，取滤液，然后经两次超膜过滤，第一次采用截留2000道尔顿分子量的膜过滤，取截留液进行第二次4000道尔顿分子量截留，取滤过液，得2000-4000道尔顿分子量范围的大鲵多肽液。再将经上述处理得到的饲养中国大鲵多肽液真空浓缩，然后冷冻干燥碾碎过筛，得大鲵多肽粉。

实施例3：

取新鲜大鲵肉2000克，经65℃干燥得大鲵肉干（水分为3-5%），将其粉碎过40目，得大鲵肉粉，经可使用于食用油浸提的6#溶剂油处理去除脂肪。挥干溶剂得到脱脂大鲵粉。取各为10万活力单位的动物水解蛋白酶和中性蛋白酶（2：1）复合酶0.2克，以5克50℃热水预处理10分钟，搅匀过滤，加入到200克脱脂大鲵粉和纯净水600克的体系中，不采用不够安全的缓冲溶液调节pH值,于自然pH、48℃条件下可控酶解50分钟。然后将酶解液离心，过滤，取滤液，然后经两次超膜过滤，第一次采用截留2000道尔顿分子量的膜过滤，取截留液进行第二次4000道尔顿分子量截留，取滤过液，得2000-4000道尔顿分子量范围的大鲵多肽液。再将经上述处理得到的饲养中国大鲵多肽液真空浓缩，然后冷冻干燥碾碎过筛，得大鲵多肽粉。

Claims (10)

1. 一种生产大鲵多肽的方法，包括如下步骤：

A.以新鲜大鲵肉为原料，经干燥处理，得大鲵肉干，将其粉碎得大鲵肉粉，去除脂肪，挥干溶剂，得到脱脂大鲵粉；

B.采用复合酶制剂对脱脂大鲵粉进行可控酶解，得到酶解液；

C.将上述酶解液离心，过滤，取滤液，然后经两次超膜过滤，得大鲵多肽液；

D.将大鲵多肽液浓缩，干燥，碾碎过筛，得大鲵多肽粉。

2. 如权利要求1所示的方法，其中步骤A中所述干燥为低温干燥，其温度控制在60-65℃；粉碎后，过40-80目筛，得大鲵肉粉；采用可使用于食用油浸提的6^#溶剂油处理去除脂肪。

3. 如权利要求2所述的方法，其中所述6^#溶剂油主要成分是正己烷。

4. 如权利要求1-3任一项所述的方法，其中步骤B采用的复合酶制剂为动物水解蛋白酶和中性蛋白酶的复合酶，在1：10料水比（质量体积比 m/v）情况下加入，酶解条件为于自然pH、45-50℃条件下酶解1-1.5小时。

5. 如权利要求4所述的方法，其中所述复合酶中动物水解蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为2：1，在1:3的料水比下加入，加入量为原料（脱脂大鲵粉）的0.1%（质量比）。

6. 如权利要求4或5所述的方法，其中所述复合酶粉采用热水预处理，热水用量为复合酶粉质量的10-50倍，温度为50℃，预处理时间为10分钟；预处理后搅匀过滤，加入到酶解体系。

7. 如权利要求1-6任一项所述的方法，其中步骤C所述两次超膜过滤的第一次采用截留2000道尔顿分子量的膜过滤，取截留液进行第二次4000道尔顿分子量截留，取滤过液，得2000-4000道尔顿分子量范围的大鲵多肽液。

8. 如权利要求1-7任一项所述的方法，其中步骤D将多肽液于旋转蒸发仪上进行真空薄膜浓缩，然后于冷冻干燥机内冻干。

9. 如权利要求1-8任一项所述方法制备得到的大鲵多肽粉。

10. 如权利要求9所述的大鲵多肽粉在制备保肝护肝的药品和/或保健品中的应用。