CN104371931A

CN104371931A - 一种牛樟菌的培养基及培养方法

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Publication number: CN104371931A
Application number: CN201410555707.9A
Authority: CN
Inventors: 刘巴宁; 郑安乔
Original assignee: ZHONGSHAN ANQIAO BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: ZHONGSHAN ANQIAO BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-10-20
Filing date: 2014-10-20
Publication date: 2015-02-25

Abstract

本发明涉及一种牛樟菌的培养基。所述的培养基包含以下重量份的组分：牛樟木萃取的营养液5%-10%，葡萄糖0.1-30%，蛋白胨1-5%，酵母粉2-5%，无机盐12-25%，玉米浆2.5-5.8%，大米粉 18-32%，水余量。采用所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，包括以下步骤：先用接种针挑取少量在试管斜面培养基上保藏的菌丝体接种到PDA平板培养基上，进行菌株活化，在将活化的菌株接种于培养基中，在光照下培养，得樟芝菌菌丝体原基。采用本发明进行牛樟菌培养，培养得到的樟菌菌丝体可产生种类最多的物质，且产生的物质明显优于黑暗条件下培养的菌丝体，且培养成本低，利于大规模化工业生产。

Description

一种牛樟菌的培养基及培养方法

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种牛樟菌的培养基及培养方法。

背景技术

牛樟芝(Taiwanofungus camphorates)属樟科樟属植物，为一种木材腐朽真菌，又名黑樟，牛樟菇或樟芝，味道较苦，原产于我国台湾。牛樟木树干通直，树体高耸，具有良好的观赏价值，其具有特殊的香味，也不易腐朽，且纹理交错、材质细致，为高价值家具最佳素材。

从牛樟芝的菌丝体或子实体抽出物中，发现了多糖体、腺苷及三萜类化合物等多种生理活性物质，具有安神、行气活血、消积解毒、消肿等功效，可谓一种上等的食或药用类真菌。台湾研究人员进行了多项樟芝毒理试验，结果显示，LDS(下标50)为2000mg/kg，显示为无毒性物质，且原子光谱分析显示，其中不含有汞、砷及铬等重金属。台北荣民总医院研究显示，樟芝菌粉无毒副作用，樟芝无致突变及致畸作用。目前由于牛樟天然林过度开发及人为盗伐，使得牛樟芝仅分布在高海拨地区，且多为高龄老树，结实量少，母树甚为分散，给授粉带来较大困难，给种子的采集也带来较大困难，而且因树体高大不易攀爬，即使能采摘种子，发芽或发芽率较低，导致牛樟芝资源严重短缺，价格昂贵，因此，极有必要进行牛樟芝的人工栽培。

野生与人工培育的牛樟芝功效神奇，目前已实现牛樟芝人工培养规模化。现有技术的牛樟芝培养方法包括固态培养法、液态发酵法及椴木栽培法，然而，上述培养方法各有缺点。固态培养法可获得牛樟芝的菌丝体或子实体，且不易产生杂菌，但三萜类化合物含量却极低。现有技术的液态发酵法可提高牛樟芝内所含有的生理活性物质，而制备成本高，且易发生杂菌污染。为此，本发明提供一种改进的牛樟芝的培养方法，以克服现有技术的缺陷。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种能获得樟芝菌丝体原基的培养基及培养方法。

本发明的技术方案如下：

一种牛樟菌的培养基，其特征在于，所述的培养基包含以下重量份的组分：

牛樟木萃取的营养液 5%-10%，

葡萄糖 0.1-30%，

蛋白胨 1-5%，

酵母粉 2-5%，

无机盐 12-25%，

玉米浆 2.5-5.8%，

大米粉 18-32%，

水余量。

优选的，所述的无机盐选自柠檬酸铵、磷酸二氢钠或磷酸一氢钠中的一种或多种。

优选的，所述的玉米淀粉：水的体积比为（3-4）：（5-7）。

优选的，所述的培养基为在121℃、0.10-0.15Kpa下灭菌15-30min的培养基。

优选的，所述的水为二次蒸馏水。

采用如上所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，包括以下步骤：

（1）菌株活化：用接种针挑取少量在试管斜面培养基上保藏的菌丝体接种到PDA平板培养基上，培养得活化的樟菌菌株；

（2）取1-2cm2步骤（1）中培养得到的活化樟菌菌落接种于培养基中，在光照下培养，得樟芝菌菌丝体原基。

优选的，步骤（1）中所述的培养温度为25-28℃，所述的培养时间为20-25d。

优选的，步骤（2）中所述的培养温度为26-30℃，培养时间为55-56d。

本发明与现有技术相比，有益效果体现在以下几点：

1. HPLC结果显示，培养55d或以上，培养55天或以上菌丝体产生的物质种类最多。在菌丝体生长初期，菌丝体只合成本身生长所需要的初级代谢产物，在后期才合成具有生物活性的次级代谢产物，但是在培养60天时，菌丝体的物质种类少于培养55天的樟芝菌丝体，说明在培养60天后，菌丝体的物质可能被菌丝体利用。因此，本发明中将樟菌的培养时间限定为55-56d，

2. 研究显示，HPLC结果显示，樟菌丝体在有光的条件下产生的物质明显优于黑暗条件下培养的菌丝体。因此，本发明对樟菌在光照下培养。

3. 本发明选择来源广泛、价格低廉的大米粉及玉米粉作为樟芝菌培养的发酵基质，将二者以一定比例组合，更加利于樟芝菌的生长。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

一种牛樟菌的培养基，所述的培养基包含以下重量份的组分：

牛樟木萃取的营养液 5%，

葡萄糖 0.1%，

蛋白胨 1%，

酵母粉 2%，

柠檬酸铵 12%，

玉米浆 2.5%，

大米粉 18%，

水余量。

所述的培养基为在121℃、0.10Kpa下灭菌15min的培养基。

所述的水为二次蒸馏水。

（1）菌株活化：用接种针挑取少量在试管斜面培养基上保藏的樟芝菌丝体接种到PDA平板培养基上，培养温度为25℃，培养时间为20d，培养得活化的樟菌菌株；

（2）取1cm2步骤（1）中培养得到的活化樟菌菌落接种于培养基中，在光照下培养，培养温度为26℃，培养时间为55d，得樟芝菌菌丝体原基。

实施例1

牛樟木萃取的营养液 10%，

葡萄糖 30%，

蛋白胨 5%，

酵母粉 5%，

磷酸二氢钠 25%，

玉米浆 5.8%，

大米粉 32%，

水余量。

所述的培养基为在121℃、0.15Kpa下灭菌30min的培养基。

所述的水为二次蒸馏水。

（1）菌株活化：用接种针挑取少量在试管斜面培养基上保藏的樟芝菌丝体接种到PDA平板培养基上，培养温度为28℃，培养时间为25d培养得活化的樟菌菌株；

（2）取1-2cm2步骤（1）中培养得到的活化樟菌菌落接种于培养基中，在光照下培养，培养温度为30℃，培养时间为56d，得樟芝菌菌丝体原基。

实施例1

牛樟木萃取的营养液 8%，

葡萄糖 10%，

蛋白胨 3%，

酵母粉 3%，

磷酸一氢钠 18%，

玉米浆 3.5%，

大米粉 28%，

水。

所述的玉米淀粉：水的体积比为3：5。

所述的培养基为在121℃、0.12Kpa下灭菌20min的培养基。

所述的水为二次蒸馏水。

（1）菌株活化：用接种针挑取少量在试管斜面培养基上保藏的樟芝菌丝体接种到PDA平板培养基上，培养温度为26℃，培养时间为23d培养得活化的樟菌菌株；

（2）取1-2cm2步骤（1）中培养得到的活化樟菌菌落接种于培养基中，在光照下培养，培养温度为28℃，培养时间为55d，得樟芝菌菌丝体原基。

上述实施例仅为本发明的优选实施方式，并不应理解为对本发明的限定，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种牛樟菌的培养基，其特征在于，所述的培养基包含以下重量份的组分：

牛樟木萃取的营养液 5%-10%，

葡萄糖 0.1-30%，

蛋白胨 1-5%，

酵母粉 2-5%，

无机盐 12-25%，

玉米浆 2.5-5.8%，

大米粉 18-32%，

水余量。

2.根据权利要求1所述的一种牛樟菌的培养基，其特征在于，所述的无机盐选自柠檬酸铵、磷酸二氢钠或磷酸一氢钠中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种牛樟菌的培养基，其特征在于，所述的玉米淀粉：水的体积比为（3-4）：（5-7）。

4.根据权利要求1所述的一种牛樟菌的培养基，其特征在于，所述的培养基为在121℃、0.10-0.15Kpa下灭菌15-30min的培养基。

5.根据权利要求1所述的一种牛樟菌的培养基，其特征在于，所述的水为二次蒸馏水。

6.采用如权利要求1-6任一所述的培养基进行牛樟菌培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.根据权利要求1所述的一种牛樟菌的培养基，其特征在于，步骤（1）中所述的培养温度为25-28℃，所述的培养时间为20-25d。

8.根据权利要求1所述的一种牛樟菌的培养基，其特征在于，步骤（2）中所述的培养温度为26-30℃，培养时间为55-56d。