CN104363777A - 用益生菌处理植物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了改变烟草材料中的某些化学化合物的含量的方法,所述方法包括:用至少一种益生菌处理烟草植物组分。例如,所述方法可以改变烟草材料中的天冬酰胺含量,这可以导致当将所述烟草材料暴露于高温时丙烯酰胺产生的改变。根据本发明处理的烟草植物组分的类型可以是烟草种子、烟草幼苗、未成熟的活植物、成熟的活植物、收获的植物或其部分。益生菌的例子包括以下属的益生菌种:双歧杆菌属、乳杆菌属、肠球菌属、proionobacterium、芽孢杆菌属、酵母属、链球菌属、及其混合物。还提供了包含这样的益生菌处理过的烟草材料的吸烟制品和其它烟草产品。
Description
技术领域
本发明涉及植物和对种植、收获和/或处理植物(例如,烟草)的方法的改进。具体地,本发明涉及从烟草制成或衍生出的产品,或者以其它方式包含烟草、且意图用于人消费的产品。
背景技术
流行的吸烟制品,诸如香烟,具有大致圆柱棒形结构,并包括被纸包装材料围绕的可抽吸材料诸如撕碎的烟草(例如,以切割填充物形式)的包、卷或柱,从而形成所谓的“烟丝条”。通常,香烟具有与烟丝条成端到端关系排列的圆柱形过滤元件。通常,过滤元件包括被称为“成型纸(plug wrap)”的纸材料围绕的塑化乙酸纤维素丝束。某些香烟并入的过滤元件具有多段,并且这些段之一可包含活性炭颗粒。通常,过滤元件使用称为“接装纸(tipping paper)”的外围包装材料连接至烟丝条的一端。为了提供环境空气对抽吸的主流烟气的稀释,将接装材料和成型纸打孔也已成为需要。吸烟者通过点燃香烟的一端并燃烧烟丝条而使用香烟。然后,吸烟者通过抽吸香烟的相对端(例如,过滤嘴端)而接收主流烟气进入他/她的口腔。
用于香烟生产的烟草通常以掺合形式使用。例如,某些流行的的烟草掺合物(通常被称为“美国掺合物”)包括烟道烘烤的烟草、白肋烟草和香料烟草的混合物,并在许多情况下,包括某些加工过的烟草,如重构烟草及加工过的烟茎。用于制造特定香烟品牌的烟草掺合物中的每类烟草的精确量随品牌而不同。然而,对于许多烟草掺合物而言,烟道烘烤的烟草占该掺合物的比例相对较大,而香料烟草占该掺合物的比例相对较小。参见,例如,TobaccoEncyclopedia,Voges(编)第44-45页(1984),Browne,The Design of Cigarettes,第3版,第43页(1990)和Tobacco Production,Chemistry and Technology,Davis等人.(编)第346页(1999)。
烟草还可以以所谓“无烟”形式享用。通过一些形式的经过处理的烟草或含烟草制剂插入使用者嘴中,使用特别流行的无烟烟草产品。不同类型的无烟烟草产品是已知的。参见例如,在下述文献中阐述的无烟烟草制剂类型、成分和加工方法:Schwartz的美国专利号1,376,586;Levi的美国专利号3,696,917;Pittman等人的美国专利号4,513,756;Sensabaugh,Jr.等人的美国专利号4,528,993;Story等人的美国专利号4,624,269;Tibbetts的美国专利号4,991,599;Townsend的美国专利号4,987,907;Sprinkle,III等人的美国专利号5,092,352;White等人的美国专利号5,387,416;Williams的美国专利号6,668,839;Williams的美国专利号6,834,654;Atchley等人的美国专利号6,953,040;Atchley等人的美国专利号7,032,601;和Atchley等人的美国专利号7,694,686;Williams的美国专利公开号2004/0020503;Quinter等人的美国专利公开号2005/0115580;Strickland等人的美国专利公开号2006/0191548;Holton,Jr.等人的美国专利公开号2007/0062549;Holton,Jr.等人的美国专利公开号2007/0186941;Strickland等人的美国专利公开号2007/0186942;Dube等人的美国专利公开号2008/0029110;Robinson等人的美国专利公开号2008/0029116;Robinson等人的美国专利公开号2008/0173317;Engstrom等人的美国专利公开号2008/0196730;Neilsen等人的美国专利公开号2008/0209586;Crawford等人的美国专利公开号2008/0305216;Essen等人的美国专利公开号2009/0065013;Kumar等人的美国专利公开号2009/0293889;Gao等人的美国专利公开号2010/0291245;和Mua等人的美国专利公开号2011/0139164;Arnarp等人的PCT WO04/095959.和Atchley的WO 2010/132444;它们中的每一篇通过引用并入本文。
一类无烟烟草产品被称作“鼻烟”。在欧洲、特别是在瑞典已经由或通过诸如下述公司生产代表类型的湿鼻烟产品(通常被称作“snus”):SwedishMatch AB,Fiedler&Lundgren AB,Gustavus AB,SkandinaviskTobakskompagni A/S,和Rocker Production AB。在美国可得到的Snus产品已经由以下公司在以下商业名称下销售:R.J.Reynolds Tobacco Company的Camel Snus Frost、Camel Snus Original和Camel Snus Spice。也参见,例如,Bryzgalov等人,1N1800Life Cycle Assessment,Comparative Life CycleAssessment of General Loose and Portion Snus(2005)。另外,与snus生产有关的某些质量标准已经被组合为所谓的GothiaTek标准。代表性的无烟烟草产品还已经由以下公司在以下商业名称下销售:House of Oliver Twist A/S的Oliver Twist;U.S.Smokeless Tobacco Co.的Copenhagen、Skoal、SkoalDry、Rooster、Red Seal、Husky和Revel;Philip Morris USA的“taboka”;ConwoodCompany,LLC的Levi Garrett、Peachy、Taylor’s Pride、Kodiak、HawkenWintergreen、Grizzly、Dental、Kentucky King和Mammoth Cave;和R.J.Reynolds Tobacco Company的Camel Orbs、Camel Sticks和Camel Strips。
多年以来,已经提出了各种处理方法和添加剂来改变用于烟草产品中的烟草材料的总体特性或性质。例如,已经利用添加剂或处理方法来改变烟草材料的化学或感官特性,或者在可抽吸的烟草材料的情况下,改变通过抽吸包括烟草材料的制品而生成的主流烟气的化学或感官特性。已经将不同类型的细菌和其它微生物加入烟草中用于诸如降低某些化学化合物(例如,亚硝胺,包括烟草特异性的亚硝胺或“TSNA”)、硝酸盐、纤维质组分和烟碱)的含量的目的,例如,如在以下文献中所述:Geiss等人的美国专利号4,140,136;Newton等人的美国专利号4,151,848;Mattina等人的美国专利号4,308,877;Gravely等人的美国专利号4,476,881;Gravely等人的美国专利号4,556,073;Gravely等人的美国专利号4,557,280;Semp等人的美国专利号4,566,469;Roth等人的美国专利号5,372,149;Koga等人的美国专利号7,549,425;Koga等人的美国专利号7,549,426;和Koga等人的美国专利号7,556,046,它们都通过引用并入本文。
本领域中需要提供用于改变可用在吸烟制品或无烟烟草产品中的植物(诸如烟草植物)、以及烟草组合物和制剂的特征和性质的其它方法。
发明内容
本发明提供了一种处理植株或其部分以改变(例如,增加和/或减少)存在于其中的某些化合物的量的方法。可给其施用本发明的方法的植物可以变化,且包括、但不限于任何观花树木或针叶树,包括不同类型的藤本植物、乔木、灌木和其它植物,诸如生产果实的那些、蔬菜和豆类、以及谷物。
在一个方面,本发明包括:获取用于生产商品的植物,特别是用作食品或其它口服产品的来源的植物,和处理所述植物以改变存在于收获的植物的该部分中的某些化合物的量。这样的方法可以导致收获的植物的该部分表现出某些味道变化,诸如更少的苦味。可给其施用所述方法的某些特定植物包括、但不限于:蔬菜植物诸如豆类(例如,利马豆、绿豆、大豆、咖啡豆)、甘蓝、黄秋葵、南瓜、生菜、番茄、胡椒、芦笋、芹菜等;根和鳞茎类蔬菜(例如,萝卜、洋葱、大蒜和胡萝卜);谷物(例如,小麦、大麦、燕麦、玉米、水稻、黑麦、高粱);生产果实的植物(例如,草莓);生产果实的藤本植物(例如,葡萄、甜瓜和酸果蔓);生产果实的灌木(例如,蓝莓)和生产果实的乔木(例如,水果诸如橙子、柠檬、来檬、葡萄柚、樱桃、桃、香蕉、大蕉和苹果);豆类(例如,坚果);茶树;蛇麻草;和草药和香料植物。在某些实施方案中,所述方法涉及烟草。
在本发明的一个方面,提供了一种用于处理植物的的方法,所述方法包括:用一种或多种益生菌处理所述植物。在某些实施方案中,所述方法可以涉及:改变(例如,降低)植物中的氨基酸含量,所述植物可以随后加工成烟草、食品或饮料产品,这包括施用热(例如,通过烘焙、油炸或微波处理)。施用热可以加工成食物产品的示例性植物包括、但不限于:谷类诸如小麦和面粉(例如,用于生产早餐用谷物、饼干、薄脆饼干、薄饼、面包、脆皮面包和饼干)、麦芽和大麦(例如,用于生产啤酒)、马铃薯(例如,用于生产马铃薯片和炸马铃薯片)、咖啡和菊苣(例如,用在烘烤的咖啡饮料中)。例如,可以改变某些植物中的天冬酰胺的水平,这可以导致由其生产的食物产品的丙烯酰胺含量与未经处理的食物产品相比下降。
在本发明的一个方面,提供了一种用于处理烟草植物的方法,所述方法包括:用一种或多种益生菌处理烟草植物。例如,在某些实施方案中,本发明涉及一种改变(诸如降低)烟草材料中的某些氨基酸和烟草特异性的亚硝胺的含量的方法,所述方法包括:使烟草植物组分与一种或多种益生菌接触。所述烟草植物组分可以变化;例如,所述烟草植物组分可以选自:烟草种子、烟草幼苗、未成熟的活植物、成熟的活植物、收获的植物或上述任一种的一部分(例如,活植物的一部分,诸如仅秆或仅叶子,或种子的表面的一部分)。在某些实施方案中,所述烟草植物组分是未收获的植物。
根据本发明可以使用多种益生菌及其混合物。在某些实施方案中,所述一种或多种益生菌选自以下属的益生菌种:双歧杆菌属(bifidobacterium)、乳杆菌属(lactobacillus)、肠球菌属(enterococcus)、proionobacterium、芽孢杆菌属(bacillus)、酵母属(saccharomyces)、链球菌属(streptococcus)、及其混合物。示例性的益生菌包括、但不限于:青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)、动物双歧杆菌(bifidobacterium animalis)、两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve)、婴儿双歧杆菌(bifidobacterium infantis)、乳糖双歧杆菌(bifidobacterium lactis)、长双歧杆菌(bifidobacterium longum)、假链状双歧杆菌(bifidobacteriumpseudocatenulatum)、假长双歧杆菌(bifidobacterium pseudolongum)、双歧杆菌属种(bifidobacterium sp.)、嗜热双歧杆菌(bifidobacteriumthermophilum)、嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)、消化乳杆菌(lactobacillus alimentarius)、食淀粉乳杆菌(lactobacillus amylovorus)、保加利亚乳杆菌(lactobacillus bulgaricus)、两歧乳杆菌(lactobacillus bifidus)、短乳杆菌(lactobacillus brevis)、干酪乳杆菌(lactobacillus casei)、高加索乳杆菌(lactobacillus caucasicus)、卷曲乳杆菌(lactobacillus crispatus)、弯曲乳杆菌(lactobacillus curvatus)、德氏乳杆菌(lactobacillus delbruckii)、发酵乳杆菌(lactobacillus fermentum)、鸡乳杆菌(lactobacillus gallinarum)、加氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)、瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus)、约汉逊氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)、乳酸乳杆菌(lactobacillus lactis)、赖氏乳杆菌(lactobacillus leichmannii)、类干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)、罗伊乳杆菌(lactobacillusreuteri)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、唾液乳杆菌(lactobacillussalivarius)、乳杆菌属种(lactobacillus sp.)、芽孢乳杆菌(lactobacillussporogenes)、乳乳球菌(lactococcus lactis)、乳脂链球菌(streptococcuscermoris)、屎链球菌(streptococcus faceium)、婴儿链球菌(streptococcusinfantis)、嗜热链球菌(streptococcus thermophilus)、屎肠球菌(enterococcusfaceium)、乳酸片球菌(pediococcus acidilactici)、嗜热葡萄球菌(staphylococcus thermophilus)、肉葡萄球菌(staphylococcus carnosus)、木糖葡萄球菌(staphylococcus xylosus)、布拉尔酵母菌(saccharomycesboulardii)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)、布拉尔酵母菌(saccharomyces boulardii)、蜡状芽孢杆菌toyo变种(bacillus cereus vartoyo)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、及其混合物。
在某些实施方案中,所述一种或多种益生菌包含至少一种选自双歧杆菌属的益生菌和至少一种选自乳杆菌属的益生菌。在某些实施方案中,所述一种或多种益生菌包含2种或更多种选自双歧杆菌属的益生菌或2种或更多种选自乳杆菌属的益生菌。
使烟草植物组分与益生菌接触的方法可以变化。例如,在某些实施方案中,所述接触可以包括:以在水中的溶液、混悬液或分散体,施用一种或多种益生菌。在某些实施方案中,所述接触步骤包括:以包含约1×105菌落形成单位(CFU)/mL至约1×1010CFU/mL的一种或多种益生菌的溶液,施用一种或多种益生菌。所述接触步骤可以任选地进一步包括:在相同制剂(例如,溶液、分散体、混悬液或干燥形式)内或在单独的制剂中给烟草植物组分施用一种或多种另外组分。例如,所述接触步骤可以进一步包括:给烟草施用一种或多种表面活性剂。
在某些实施方案中,在使烟草植物组分与一种或多种益生菌接触的步骤以后,烟草材料的天冬酰胺含量是没有与益生菌接触的烟草植物组分的天冬酰胺含量的约50重量%或更低、约40%或更低、约30%或更低或约20%或更低。换而言之,根据本发明的方法处理过的烟草组分可以表现出根据上述任意百分比的天冬酰胺含量的下降。
在某些实施方案中,所述方法可以进一步包括以下步骤:将所述烟草材料掺入无烟烟草产品或吸烟制品中。所述烟草材料可以呈例如切碎填充物的形式和/或烟草掺合物的形式。在某些实施方案中,所述烟草植物组分包括烟道烘烤的烟草、白肋烟草、香料烟草或其混合物。在某些实施方案中,这样的吸烟制品在抽吸以后的特征在于,主流烟气的丙烯酰胺含量与未经处理的对照吸烟制品相比下降。在某些实施方案中,按重量计,主流烟气中的丙烯酰胺下降的量可以是未经处理的对照吸烟制品的至少约20%或未经处理的对照吸烟制品的至少约40%。
在本发明的另一个方面,提供了一种烟草产品,其含有包含益生菌处理过的烟草的烟草组合物,诸如呈香烟形式的吸烟制品或含有根据本发明的方法处理过的烟草的无烟烟草产品。在一个实施方案中,提供了呈香烟形式的吸烟制品,所述香烟包含被包装材料包围的可抽吸材料条和过滤嘴,所述过滤嘴附接至所述条的一端,其中所述可抽吸材料包含用一种或多种益生菌预处理过的烟草材料,所述预处理会改变(例如,降低)天冬酰胺的含量,并从而改变在主流烟气中形成的丙烯酰胺的含量。
附图说明
为了提供对本发明的实施方案的理解,参考了附图,所述附图不一定按比例绘制,且其中附图标记表示本发明的示例性实施方案的组分。附图仅仅是示例性的,不应解释为限制本发明。
图1是具有香烟形式的吸烟制品的分解透视图,其显示了香烟的可抽吸材料、包装材料部件和过滤元件;和
图2是无烟烟草产品实施方案的横截面视图,其沿着产品的宽度做出,显示了填充有本发明的无烟烟草组合物的外部小袋。
具体实施方式
现在将在下文中更充分地描述本发明。但是,本发明可以以许多不同的形式具体化,不应解释为限于本文阐述的实施方案;相反,提供这些实施方案是为了使本公开内容彻底和完整,并向本领域技术人员充分传达本发明的范围。如在本说明书和权利要求中所使用的,单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物,除非上下文另外清楚地指明对“干重百分比”或“基于干重”的提及表示基于干燥成分(即,除了水之外的所有成分)的重量。
本发明提供了具有改变的某些化合物水平的植物材料。在一个示例性的方面,本发明提供了具有改变的某些化合物水平的烟草、包含从这样的烟草衍生出的烟草材料的烟草产品、以及制备具有改变的某些化合物水平的烟草的方法和将从该烟草衍生出的烟草材料掺入烟草产品内的方法。改变某些化合物的水平的方法通常包括:使烟草与一种或多种益生菌接触。应当指出,尽管本文中提供的讨论大部分聚焦于烟草的处理,但是根据本文提供的方法可以处理多种其它植物(包括水果、蔬菜、花和其组分),以提供在其中具有改变的某些化合物水平的植物和/或植物组分。
本文描述的益生菌处理可以对得到的烟草材料具有不同的作用。例如,在某些实施方案中,用一种或多种益生菌处理的烟草会表现出改变的某些化学化合物水平。这些变化可以导致烟草的器官感觉特性的改变,诸如味道或香气的变化(例如,减少的苦味或更光滑的香味)。应当指出,得到的具体结果可能部分地与在处理中使用的益生菌物种有关。据信,不同属、种和/或亚种的益生菌对烟草内的不同化合物的水平具有不同的作用。
在一个具体实施方案中,用益生菌处理烟草以改变(例如,降低)烟草的氨基酸和某些其它组分的浓度。在本发明的某些实施方案中可以改变的某些氨基酸和氨基酸衍生物包括、但不限于:天冬酰胺、色氨酸、氧代脯氨酸和天冬氨酸。可以有利地减少的一种示例性氨基酸是天冬酰胺。天冬酰胺是丙烯酰胺的前体,并且通过降低烟草中的天冬酰胺水平,可以降低来自包含这样的烟草的香烟的烟气中的丙烯酰胺水平。另外,降低在无烟烟草产品中使用的烟草的天冬酰胺含量,可以减小在施加于烟草的任何热处理过程(例如,巴氏消毒)中产生的丙烯酰胺的量。在一个实施方案中,用一种或多种益生菌处理烟草可以导致这样的天冬酰胺含量:其小于未经处理的烟草的量的约50重量%、小于未经处理的烟草的量的约40%、小于未经处理的烟草的量的约30%或小于未经处理的烟草的量的约20%。例如,益生菌处理过的烟草材料可以具有未经处理的烟草材料的天冬酰胺含量的约0%至约70重量%,诸如约5%至约60%,和有利地约10%至约40%。
相应地,在某些实施方案中,益生菌处理过的烟草的应用可以提供这样的吸烟材料:其在由其产生的烟气中表现出降低的丙烯酰胺水平。例如,在某些实施方案中,与包含100%的没有用益生菌处理过的烟草的对照香烟相比,按重量计,在从包含100%益生菌处理过的烟草的烟草产生的烟气中的丙烯酰胺水平表现出约10%或更多、约20%或更多、约30%或更多、约40%或更多、约50%或更多、约60%或更多的丙烯酰胺减少。此外,益生菌处理过的烟草在无烟烟草产品中的应用可以提供具有降低的丙烯酰胺水平的产品。益生菌处理过的烟草在这样的产品中可能是特别有用的:所述产品在加工和/或使用的任何阶段处被热处理。
在一个具体实施方案中,用益生菌处理烟草以改变(例如,降低)烟草中的烟草特异性的亚硝胺(TSNA)的浓度。示例性的TSNA化合物包括N-亚硝基去甲烟碱(NNN)、4-甲基-N-亚硝氨基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)、4-甲基-N-亚硝氨基-1-(3-吡啶基)-1-丁醇(NNAL)和N-亚硝基八角枫碱(NAB)。在一个实施方案中,用一种或多种益生菌处理烟草可以导致这样的NNN含量:其小于未经处理的烟草的约60重量%,或小于未经处理的烟草的量的约50%。在一个实施方案中,用一种或多种益生菌处理烟草可以导致这样的NAT含量:其小于未经处理的烟草的约70重量%,或小于未经处理的烟草的量的约60%。
在某些实施方案中,通过用益生菌处理烟草,可以改变烟草中的其它化合物的水平。在某些实施方案中可以减少的示例性化合物包括、但不限于:丙烯腈、苹果酸、奎尼酸和葡萄糖。这些和其它化合物的减少可以变化,但是一般而言,与存在于未经处理的烟草中的化合物的量相比,经处理的烟草将包含约10%至约90重量%的每种这样的化合物。
本文中使用的术语“益生菌”或“益生菌微生物”意图包括通过不同来源可以分类为益生菌的所有活微生物。例如,联合国粮食和农业组织(Food andAgriculture Organization of the United Nations,FAO)将益生菌定义为:“活微生物,其在以适当量施用时,会给宿主提供健康益处”。在某些报告中,这样的健康益处可以包括、但不限于:对肠、呼吸道和/或泌尿生殖道的定居,胆固醇代谢,乳糖代谢,钙的吸收,维生素的合成,酵母和阴道感染的减少,消化问题(例如,便秘和腹泻疾病)的减少,天然抗生素、乳酸、酶、过氧化氢的产生,通过抗生素样物质的产生对病原性微生物的抑制;和pH的下降。尽管“益生菌”的传统定义涉及人和动物消化生物,但是该术语已经被应用在其它背景中,诸如在农业领域中。可以添加的某些类型的益生菌和组成成分包括在以下文献中阐述的例子:Harel等人的美国专利号8,097,245;Heim等人的美国专利号8,097,281;Gueniche的美国专利号8,101,167;和Plail等人的美国专利号8,101,170,它们都通过引用并入本文。
优选的是,根据本发明使用的益生菌是“GRAS”(公认为安全的),尽管在某些实施方案中可以使用非-GRAS益生菌。益生菌通常通过它们的属、种和菌株水平来鉴别。某些公认的益生菌属包括:双歧杆菌属、乳杆菌属、肠球菌属、proionobacterium、芽孢杆菌属、酵母属和链球菌属。许多常见的益生菌选自乳杆菌属种、双歧杆菌属种和嗜热链球菌。
示例性的益生菌包括、但不限于:青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、乳糖双歧杆菌、长双歧杆菌、假链状双歧杆菌、假长双歧杆菌、双歧杆菌属种、嗜热双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、消化乳杆菌、食淀粉乳杆菌、保加利亚乳杆菌、两歧乳杆菌、短乳杆菌、干酪乳杆菌、高加索乳杆菌、卷曲乳杆菌、弯曲乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、鸡乳杆菌、加氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约汉逊氏乳杆菌、乳酸乳杆菌、赖氏乳杆菌、类干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、乳杆菌属种、芽孢乳杆菌、乳乳球菌、乳脂链球菌、屎链球菌、婴儿链球菌、嗜热链球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、嗜热葡萄球菌、肉葡萄球菌、木糖葡萄球菌、布拉尔酵母菌、酿酒酵母、布拉尔酵母菌、蜡状芽孢杆菌toyo变种、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。
有利地,根据本发明使用的益生菌组合物是一种或多种益生菌的混合物。根据本发明可以使用的益生菌可以包含一个或多个属、种和/或菌株的掺合物,在某些实施方案中,所述掺合物可以具有与单一菌株和/或种相比改善的功能性。
根据本发明,可以将一种或多种益生菌施用于一种或多种植物。具体地,可以将它们施用于一种或多种植物组分(例如,烟草植物组分)。“烟草”、“烟草植物”或“烟草植物组分”是指处于植物生命周期的不同阶段的烟草。例如,在某些实施方案中,可以将一种或多种益生菌施用于种子、幼苗、未收获的植物(在不同成熟阶段)或收获的植物,它们都被视作在本文中更详细地描述的烟草植物的阶段。术语“植物”和“植物组分”同样表示处于植物生命周期的不同阶段的植物(例如,生产商品的植物)。因而,在某些实施方案中,可以将一种或多种益生菌施用于种子、幼苗、未收获的植物(在不同成熟阶段)、或收获的植物,包括任意类型的植物,诸如本文描述的那些。从该植物产生的商品可以构成所述植物的任意部分(例如,叶、蔬菜、果实、花、种子、秆或整个植株),且因而,由于根据本文提供的方法的益生菌处理,所述植物的不同部分可以表现出改变的某些化合物水平。
本文提供的方法可应用的烟草可以变化。在某些实施方案中,可以采用的烟草包括:烟道烘烤的烟草或弗吉尼亚烟草(例如,K326)、白肋烟草、晒干的烟草(例如,印度Kurnool和香料烟草,包括Katerini、Prelip、Komotini、Xanthi和Yambol烟草)、马里兰烟草、深色烟草、深色烘烤的烟草、深色风干烟草(例如,Passanda、Cubano、Jatin和Bezuki烟草)、浅色风干烟草(例如,North Wisconsin和Galpao烟草)、印度风干烟草、Red Russian烟草和黄花烟草以及各种其它罕见烟草或专门烟草和任意前述烟草的不同掺合物。在Tobacco Production,Chemistry and Technology,Davis等人(编)(1999)(其通过引用并入本文)中,阐述了不同类型的烟草、栽培实践和收获实践的描述。来自烟草属种的各种代表性的其它植物类型参见:Goodspeed,The GenusNicotiana,(Chonica Botanica)(1954);Sensabaugh,Jr.等人的美国专利号4,660,577;White等人的美国专利号5,387,416,和Lawson等人的美国专利号7,025,066;Lawrence,Jr.的美国专利申请公开号2006/0037623,和Marshall等人的美国专利申请公开号2008/0245377;它们每篇通过引用并入本文。示例性的烟草属种包括:红花烟草(N.tabacum)、黄花烟草(N.rustica)、花烟草(N.alata)、N.arentsii、N.excelsior、福尔吉特氏烟草(N.forgetiana)、粉蓝烟草(N.glauca)、粘烟草(N.glutinosa)、哥西氏烟草(N.gossei)、卡瓦卡米氏烟草(N.kawakamii)、奈特氏烟草(N.knightiana)、朗氏烟草(N.langsdorffi)、耳状烟草(N.otophora)、赛特氏烟草(N.setchelli)、林烟草(N.sylvestris)、绒毛烟草(N.tomentosa)、绒毛状烟草(N.tomentosiformis)、波叶烟草(N.undulata)、花烟草(N.x sanderae)、非洲烟草(N.africana)、抱茎烟草(N.amplexicaulis)、贝纳末特氏烟草(N.benavidesii)、博内里烟草(N.bonariensis)、迪勃纳氏烟草(N.debneyi)、长苞烟草(N.longiflora)、海滨烟草(N.maritina)、特大管烟草(N.megalosiphon)、西方烟草(N.occidentalis)、圆锥烟草(N.paniculata)、蓝茉莉叶烟草(N.plumbaginifolia)、雷蒙德氏烟草(N.raimondii)、莲坐叶烟草(N.rosulata)、拟似烟草(N.simulans)、斯托克同氏烟草(N.stocktonii)、香甜烟草(N.suaveolens)、荫生烟草(N.umbratica)、颤毛烟草(N.velutina)、芹叶烟草(N.wigandioides)、无茎烟草(N.acaulis)、渐尖叶烟草(N.acuminata)、渐狭叶烟草(N.attenuata)、本赛姆氏烟草(N.benthamiana)、洞生烟草(N.cavicola)、克里夫兰氏烟草(N.clevelandii)、心叶烟草(N.cordifolia)、伞床烟草(N.corymbosa)、香烟草(N.fragrans)、古特斯比氏烟草(N.goodspeedii)、狭叶烟草(N.linearis)、摩西氏烟草(N.miersii)、裸茎烟草(N.nudicaulis)、欧布特斯烟草(N.obtusifolia)、蓟马烟Hersperis亚种(N.occidentalis subsp.Hersperis)、少花烟草(N.pauciflora)、矮牵牛状烟草(N.petunioides)、夸德瑞伍氏烟草(N.quadrivalvis)、残波烟草(N.repanda)、圆叶烟草(N.rotundifolia)、茄子烟草(N.solanifolia)和斯佩格茨烟草(N.spegazzinii)。
使用遗传修饰或杂交育种技术,可以衍生出烟草属种(例如,可以对烟草植物进行遗传工程改造或杂交育种,以增加或减少组分、性状或特征的产生)。参见,例如,在下述文献中阐述的植物的遗传修饰的类型:Fitzmaurice等人的美国专利号5,539,093;Wahab等人的美国专利号5,668,295;Fitzmaurice等人的美国专利号5,705,624;Weigl的美国专利号5,844,119;Dominguez等人的美国专利号6,730,832;Liu等人的美国专利号7,173,170;Colliver等人的美国专利号7,208,659,和Benning等人的美国专利号7,230,160;Conkling等人的美国专利申请公开号2006/0236434;和Nielsen等人的PCT WO 2008/103935。也参见,在以下文献中阐述的烟草类型:Sensabaugh,Jr.等人的美国专利号4,660,577;White等人的美国专利号5,387,416;和Dominguez等人的美国专利号6,730,832,它们中的每一篇通过引用并入本文。最优选地,烟草材料是已经适当地烘烤和老化的那些。用于烘烤烟道烘烤烟草的特别优选的技术和条件参见:Nestor等人,BeitrageTabakforsch.Int.,20(2003)467-475和Peele的美国专利号6,895,974,它们通过引用并入本文。用于风干烟草的代表性技术和条件参见Roton等人,Beitrage Tabakforsch.Int.,21(2005)305-320和Staaf等人,BeitrageTabakforsch.Int.,21(2005)321-330,它们通过引用并入本文。可以用太阳晒干某些类型的罕见或稀有烟草。用于改善香料烟草的抽吸质量的方式和方法参见Lawson等人的美国专利号7,025,066,其通过引用并入本文。代表性的香料烟草包括katerini、prelip、komotini、xanthi和yambol烟草。包含深色风干烟草的烟草组合物参见Marshall等人的美国专利申请公开号2008/0245377,其通过引用并入本文。也参见,例如在Beeson等人的美国专利申请公开号2011/0247640(其通过引用并入本文)中阐述的烟草类型。
可以针对其中存在的多种化合物的含量来选择烟草属种。例如,在某些实施方案中,针对它们的叶表面化合物丰度而专门种植烟草属种植物(例如,Galpao commun烟草)。在某些实施方案中,由于它们的相对较低的某些不希望的化合物(例如,天冬酰胺)的水平而特别种植烟草属种的植物。可以在温室、栽培室或室外田野中种植烟草植物,或者可以无土栽培。
将益生菌施用于烟草植物的方式可以变化。用微生物处理植物的某些方法(其可以用在本发明中或经改进用在本发明中)提供在以下文献中:Geiss等人的美国专利号4,140,136;Newton等人的美国专利号4,151,848;Mattina等人的美国专利号4,308,877;Gravely等人的美国专利号4,476,881;Gravely等人的美国专利号4,556,073;Gravely等人的美国专利号4,557,280;Semp等人的美国专利号4,566,469;Roth等人的美国专利号5,372,149;Koga等人的美国专利号7,549,425;Koga等人的美国专利号7,549,426;和Koga等人的美国专利号7,556,046,它们都通过引用并入本文。
本文中公开的益生菌施用方法经常至少部分地取决于烟草植物的阶段。例如,在某些实施方案中,在种植之前,将一种或多种益生菌施用于烟草种子。在这样的实施方案中,可以以种子处理或包衣的形式施用一种或多种益生菌。例如,可以将种子浸入益生菌溶液中,泡在益生菌溶液中,或用益生菌溶液喷雾。在某些实施方案中,将一种或多种益生菌施用于呈幼苗或未收获的(活)植物形式的烟草。在这样的实施方案中,可以使用益生菌的喷雾施用(例如,使用水压悬臂喷雾器、气喷喷雾器、润湿器或航空喷雾器),尽管益生菌施用方法不限于此。
尽管在烟草植物仍然呈活形式时施用一种或多种益生菌可能是有利的,但是在某些实施方案中也可能在收获烟草植物以后施用益生菌。这样的施用可以发生在收获以后的任何时间,包括收获后马上,在收获后加工(例如,植物的干燥、干制和/或物理加工)之前或之后,或在二者之间的任何阶段。益生菌的施用可以在植物生命周期中的一个阶段完成,或者可以在2个或更多个阶段进行。
在某些实施方案中,以液体形式(例如,作为溶液、分散体或混悬液)施用益生菌可以是有利的。与益生菌混合的液体可以变化,但是一般而言,所述液体将包含水。在一些其它的实施方案中,可以以干燥形式(诸如以颗粒或粉尘形式)施用一种或多种益生菌。使用的益生菌的浓度和量可以变化。例如,在某些实施方案中,将益生菌在包含约1×105菌落形成单位(CFU)/mL至约1×1010CFU/mL(例如,约2×106CFU/mL)的溶液中施用于植物(例如,活植物)。CFU提供了益生菌样品中的存活的(活的)细胞的测量。
在某些实施方案中,可以将其它组分与益生菌一起施用于植物。这样的组分可以添加在相同制剂(例如,溶液、分散体、混悬液或干燥形式)内,或可以在单独制剂中施用于烟草。例如,在某些实施方案中,将一种或多种表面活性剂与益生菌一起施用于烟草。所述表面活性剂可以是例如非离子型表面活性剂。可以使用不同的表面活性剂,包括、但不限于,聚山梨酯表面活性剂,诸如聚山梨酯20(吐温-)和聚山梨酯80(吐温-),和基于聚乙二醇的表面活性剂,诸如TritonTMX系列表面活性剂。用于帮助益生菌有效地包被烟草的其它试剂可以包括不同的糖、植物提取物(例如,丝兰提取物、海藻提取物)、及其衍生物。
可以如本文中提供地使用和/或处理整个烟草植株或烟草属种植株的某些部位或部分。例如,可以收获基本上所有的植株(例如,整个植株),并原样使用。可替换地,可以收获或分离植株的多个部位或片段,用于在收获后处理。例如,可以分离花、叶、茎、杆、根、种子和它们的各种组合,用于使用或进一步处理。
植株或其部分的收获后加工可以变化。在收获后,植株或其部分可以生坯形式使用(例如,植株或其部分可在不经过任何干制过程的情况下使用)。例如,植株或其部分可在不经过显著的贮存、处理或加工条件的情况下使用。在某些情况下,有利的是,在收获后几乎立刻使用植株或其部分。可替换地,例如,可以将生坯形式的植株或其部分冷藏或冷冻以供以后使用、冷冻干燥、进行辐照、变黄、干燥、熟化(例如,使用风干技术或采取施加热的技术)、加热或烹制(例如,烤、炒或煮),或以其它方式进行储存或处理以供以后使用。
可以对收获的植株或其部分进行物理加工。可以将植株或其部分分离成单个部分或片段(例如,可以从茎取下叶子,和/或可以从秆取下茎和叶)。可以将收获的植株或单个部分或片段进一步细分成部分或片段(例如,可以将叶子切丝、切碎、破碎、粉碎、研磨或磨碎成可表征为填充剂型碎片、丸粒、颗粒或细粉的碎片或部分)。烟草材料可以具有以下形式:经加工的烟草部分或片段、基本上天然的片和/或茎形式的烘烤的和老化的烟草、烟草提取物、提取的烟草浆(例如,使用水作为溶剂)或前述物质的混合物(例如,将提取的烟草浆与造粒的烘烤的和老化的天然烟草片组合的混合物)。用于烟草产品的烟草最优选地包括烟草片、或烟草片和茎混合物。在烟草产品内的烟草的部分可以具有经加工的形式,诸如经加工的烟草茎(例如,碾压后切割的茎、膨胀后碾压后切割的茎或蓬松后切割的茎)、或体积膨胀的烟草(例如,经蓬松处理的烟草,诸如用干冰膨胀处理的烟草(DIET))。参见,例如,在以下文献中阐述的烟草膨胀方法:de la Burde等人的美国专利号4,340,073;Guy等人的美国专利号5,259,403;和Poindexter,等人的美国专利号5,908,032;和Poindexter,等人的美国专利号7,556,047,它们都通过引用并入。另外,所述烟草产品任选地可以包含已经发酵的烟草。也参见,在Atchley等人的PCTWO 05/063060(其通过引用并入本文)中阐述的烟草加工技术的类型。
以这样的形式提供烟草的方式可以变化。可以对植株或其部分施加外力或压力(例如,压制或进行辊压处理)。当实施这样的加工条件时,植株或其部分的含水量可以接近其天然含水量(例如,其在收获后不久的含水量)、通过对植株或其部分增湿实现的含水量、或从干燥植株或其部分得到的含水量。例如,植株或其部分的粉状、破碎的、研磨的或磨碎的碎片可以具有小于约25重量%、经常小于约20重量%和经常小于约15重量%的含水量。使用用于碾磨、研磨等的设备和技术,可以将烟草部分或片段粉碎、研磨或粉末化成粉末类型的形式。最优选地,使用设备诸如锤式研磨机、刀盘、气控研磨机等,烟草在碾磨或研磨过程中是相对干燥的形式。例如,当烟草部分或片段的含水量是小于约15重量%至小于约5重量%时,可以将其碾磨或研磨。
意图以可抽吸形式或无烟形式使用的烟草组合物可以包含单一类型的烟草(例如,以所谓的“直级”形式)。例如,在烟草组合物内的烟草可以仅由烟道烘烤的烟草组成(例如,所有烟草可以由烟道烘烤的烟草片或烟道烘烤的烟草片和烟道烘烤的烟草茎的混合物组成,或者衍生自烟道烘烤的烟草片或烟道烘烤的烟草片和烟道烘烤的烟草茎的混合物。在烟草组合物内的烟草还可以具有所谓的“掺合的”形式。例如,本发明的烟草组合物内的烟草可以包括烟道烘烤的白肋烟草(例如,马拉维白肋烟草)和香料烟草(例如,作为由烟草片、或烟草片和烟草茎的混合物组成的烟草,或者衍生自烟草片、或烟草片和烟草茎的混合物的烟草)的部分或片段的混合物。例如,基于干重,一种代表性的掺合物可以包含约30至约70份白肋烟草(例如,片、或片和茎)和约30至约70份烟道烘烤的烟草(例如,茎、片、或片和茎)。其它示例性的烟草掺合物包含:约75份烟道烘烤的烟草、约15份白肋烟草、至约10份香料烟草;或约65份烟道烘烤的烟草、约25份白肋烟草、至约10份香料烟草;或约65份烟道烘烤的烟草、约10份白肋烟草、至约25份香料烟草;基于干重。其它示例性的烟草掺合物包含约20至约30份香料烟草和约70至约80份烟道烘烤的烟草。
在某些实施方案中,可以随后提取已经根据本公开内容处理过的烟草。可以使用不同的提取技术。参见,例如,在Beeson等人的美国专利申请公开号2011/0247640(其通过引用并入本文)中描述的提取过程。用于提取烟草组分的其它示例性技术描述在下述文献中:Fiore的美国专利号4,144,895;Osborne,Jr.等人的美国专利号4,150,677;Reid的美国专利号4,267,847;Wildman等人的美国专利号4,289,147;Brummer等人的美国专利号4,351,346;Brummer等人的美国专利号4,359,059;Muller的美国专利号4,506,682;Keritsis的美国专利号4,589,428;Soga等人的美国专利号4,605,016;Poulose等人的美国专利号4,716,911;Niven,Jr.等人的美国专利号4,727,889;Bernasek等人的美国专利号4,887,618;Clapp等人的美国专利号4,941,484;Fagg等人的美国专利号4,967,771;Roberts等人的美国专利号4,986,286;Fagg等人的美国专利号5,005,593;Grubbs等人的美国专利号5,018,540;White等人的美国专利号5,060,669;Fagg的美国专利号5,065,775;White等人的美国专利号5,074,319;White等人的美国专利号5,099,862;White等人的美国专利号5,121,757;Fagg的美国专利号5,131,414;Munoz等人的美国专利号5,131,415;Fagg的美国专利号5,148,819;Kramer的美国专利号5,197,494;Smith等人的美国专利号5,230,354;Fagg的美国专利号5,234,008;Smith的美国专利号5,243,999;Raymond等人的美国专利号5,301,694;Gonzalez-Parra等人的美国专利号5,318,050;Teague的美国专利号5,343,879;Newton的美国专利号5,360,022;Clapp等人的美国专利号5,435,325;Brinkley等人的美国专利号5,445,169;Lauterbach的美国专利号6,131,584;Kierulff等人的美国专利号6,298,859;Mua等人的美国专利号6,772,767;和Thompson的美国专利号7,337,782,它们都通过引用并入本文。
在本文描述的益生菌处理之前、之后或过程中,可以以其它方式进一步处理和/或加工在本发明中讨论的烟草材料。例如,如果需要的话,可以对烟草材料进行照射、巴氏消毒或者用其它方式进行受控的热处理。这样的处理方法详述在例如Mua等人的美国专利公开号2009/0025738中,其通过引用并入本文。在某些实施方案中,可以用水和添加剂处理烟草材料,所述添加剂能够抑制在加热烟草材料后天冬酰胺形成丙烯酰胺的反应(例如,选自以下的添加剂:赖氨酸,甘氨酸,组氨酸,丙氨酸,甲硫氨酸,谷氨酸,天冬氨酸,脯氨酸,苯丙氨酸,缬氨酸,精氨酸,包含二价和三价阳离子、天门冬酰胺酶、某些非还原糖、某些还原剂、酚类化合物、某些具有至少一个游离硫醇基团或官能团的化合物、氧化剂、氧化催化剂、天然植物提取物(例如,迷迭香提取物)和它们的组合的组合物)和它们的组合。参见,例如,在以下文献中描述的处理方法的类型:Chen等人的美国专利公开号2010/0300463和2011/0048434,和2011年9月9日提交的美国专利申请号13/228,912,它们都通过引用并入本文。在某些实施方案中,在前面描述的提取和/或蒸馏过程中对原始烟草材料进行加热的情况下,这类处理是有用的。尽管这类处理可以与本发明的益生菌处理联合使用,但是应当指出,可能不需要这类处理,因为在某些实施方案中,益生菌处理自身可以将丙烯酰胺水平降低至足够低的水平。
可以将益生菌处理过的烟草掺入根据本发明的不同类型的烟草产品内。例如,在某些实施方案中,本发明提供了吸烟制品(诸如香烟),其包含益生菌处理过的烟草材料。参考图1,显示了香烟形式的吸烟制品10,其具有本发明的吸烟制品的某些代表性的组分。香烟10包括被包含在外围包装材料16中的一团或一卷可抽吸填充材料(例如,约0.3至约1.0g可抽吸的填充材料,诸如益生菌处理过的烟草材料)的通常圆柱形条12。条12通常被称为“烟丝条”。烟丝条12的端部是开放的,以暴露可抽吸填充材料。香烟10显示为具有附着在所述包装材料16上的一个任选带22(例如,印制覆层,包括成膜剂,如淀粉、乙基纤维素或海藻酸钠),且该带在与香烟的纵向轴线横切的方向上包围香烟条。也就是说,带22提供了相对于香烟的纵向轴线的横过区域。带22可以印制在包装材料的内表面上(即,面对可抽吸填充材料),或者次优选地,印制在所述包装材料的外表面上。尽管所述香烟可以拥有具有一个任选带的包装材料,所述香烟也可以拥有具有其它任选间隔带(编号为2、3或更大)的包装材料。
在烟丝条12的一端是点燃端18,在嘴端20处设置有过滤元件26。所述过滤元件26位于烟丝条12的一端附近,使得所述过滤元件和烟丝条以端对端关系呈轴向排列,优选彼此相邻。过滤元件26可以具有通常圆柱形形状,且其直径可以基本上等于烟丝条的直径。过滤元件26的两端允许空气和烟气在其中通过。
可以给通气的或空气稀释的吸烟制品提供任选的空气稀释装置,诸如一系列洞孔30,其中的每个洞孔穿过成型纸28延伸。通过本领域普通技术人员已知的各种技术,诸如激光穿孔技术,可以制成任选的洞孔30。可替换地,可以使用所谓的离线空气稀释技术(例如,通过使用多孔成型纸和预穿孔的接装纸)。过滤元件26沿其外周或纵向周围被一层外围成型纸28包裹。使用时,吸烟者用火柴或香烟打火机点燃香烟10的点燃端28。如此,可抽吸材料12开始燃烧。将香烟10的嘴端20置于吸烟者的嘴唇中。通过燃烧可抽吸材料12产生的热分解产物(例如,烟草烟气的组分)被抽吸穿过香烟10,穿过过滤元件26,并进入吸烟者的口腔。
在某些实施方案中,根据本发明,吸烟制品包含已经用益生菌处理过的烟草。在某些实施方案中,在吸烟制品内的烟草可以仅包含这样的益生菌处理过的烟草,或可以含有与其它烟草材料组合的不同量的益生菌处理过的烟草。例如,基于吸烟制品中的所有烟草材料的重量,益生菌处理过的烟草可以以约25%或更多、约50%或更多、约75%或更多、约80%或更多、约85%或更多、约90%或更多、约95%或更多或约100%的量存在。
参考图2,显示了包含本发明的益生菌处理过的烟草的代表性的snus型烟草产品。具体地,图2解释了具有水可透过的外部小袋42的无烟烟草产品40,所述外部小袋42含有无烟烟草组合物44,其中所述烟草组合物包括已经用一种或多种益生菌处理过的碎片或微粒烟草材料。其它添加剂可以与根据本发明的无烟烟草组合物混合,或以其它方式掺入其中。所述添加剂可以是人工添加剂,或可以从草药或生物源得到或衍生出。示例性的添加剂类型包括:盐(例如,氯化钠、氯化钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾、醋酸钠、乙酸钾等)、天然的甜味剂(例如,果糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、香草醛、乙基香草醛葡萄糖苷、甘露糖、半乳糖、乳糖等)、人工甜味剂(例如,三氯蔗糖、糖精、阿斯巴甜、安赛蜜、纽甜等)、有机和无机填充剂(例如,细粒、已加工细粒、疏松细粒、麦芽糊精、右旋糖、碳酸钙、磷酸钙、玉米淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇、精细粉碎的纤维素等)、粘合剂(例如,聚维酮、羧甲基纤维素钠和其它改性纤维素类粘合剂、藻酸钠、黄原胶、淀粉基粘合剂、阿拉伯树胶、卵磷脂等)、pH调节剂或缓冲剂(例如,金属氢氧化物,优选碱金属氢氧化物,如氢氧化钠和氢氧化钾,和其它碱金属缓冲剂如金属碳酸盐,优选碳酸钾或碳酸钠,或金属碳酸氢盐如碳酸氢钠等)、着色剂(例如,染料和颜料、包括焦糖色和二氧化钛等)、保湿剂(例如,甘油、丙二醇等)、口腔护理添加剂(例如,百里香油、桉叶油和锌)、防腐剂(例如,山梨酸钾等)、糖浆(例如,蜂蜜、高果糖玉米糖浆等)、崩解助剂(例如,微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、淀粉羟乙酸钠、预胶凝化玉米淀粉等)、调味剂和调味混合物、抗氧化剂、及其混合物。如果需要的话,可以将所述添加剂包囊化,如在Dube等人的美国专利申请公开号2008/0029110中所述,其通过引用并入本文。另外,示例性的包囊化的添加剂参见,例如,Atchley的WO 2010/132444A2,其已经在前面通过引用并入本文。
提供下述实施例来进一步例证本发明,但是不应解释为限制其范围。除非另外指出,所有份数和百分数按重量计。
实验性的
下述实施例更充分地例证了本发明,阐述下述实施例来例证本发明,不应解释为限制本发明。在下述实施例中,g是指克,L是指升,mL是指毫升,Da是指道尔顿。除非另外指出,否则基于干重来表达所有重量百分比,这意味着不包括水分含量。
实施例1
用益生菌细菌处理以后白肋烟草的评价
在收获之前,将白肋烟草用含有益生菌细菌的溶液处理,所述溶液可作为消化支持产品在柜台上面得到。将10株白肋烟草植株用1加仑的含有60×109个活细菌细胞/加仑的溶液(得自的“Senior Probiotic”,其包含两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、乳乳球菌和嗜热链球菌)处理。将另外10株活白肋烟草植株用1加仑的含有60×109个活细菌细胞/加仑的溶液(得自Walgreens的“Super Probiotic”,其包含嗜酸乳杆菌和乳糖双歧杆菌)处理。
将经处理的白肋烟草收获并在标准条件下进行干制。将烟草去秆并风干,在干制结束时,将上叶、中叶和下叶分组并分离。将约15g得自植株的尖部、中部和下部的叶磨碎并分析。
关于63种不同化合物的比较水平、以及氨基酸水平和多酚,分析经处理的、干制的和分离的烟草。结果显示了益生菌处理以后某些化合物(包括氨基酸和烟草特异性的酸)的水平的下降。例如,观察到天冬酰胺、色氨酸、氧代脯氨酸、天冬氨酸、苹果酸、奎尼酸和葡萄糖的显著下降。具体地,对比了得自未处理的和经处理的白肋烟草样品的中间段样品的天冬酰胺含量;与未处理的样品的相比,用得自的“Senior Probiotic”处理过的样品具有35.27%天冬酰胺含量;且与未处理的样品的相比,用得自Walgreens的“Super Probiotic”处理过的样品具有12.9%天冬酰胺含量。某些化合物(即,木糖醇、果糖、半乳糖二酸、肌-肌醇和蜜二糖)的水平增加。这些化合物中的每一种作为非活性成分存在于购买时的益生菌混合物中。
对于经处理的和未处理的取自植株的尖部和取自柄的白肋烟草样品,观察到类似的结果。
实施例2
用益生菌细菌处理以后白肋烟草中的TSNA的评价
将白肋烟草植株用2种不同的益生菌溶液处理,收获,并如在实施例1中所述干制。将约15g得自植物中部的叶磨碎,并分析烟草特异性的亚硝胺(TSNA)。与对照相比,用得自Walgreens的“Super Probiotic”处理过的烟草含有95%NAT和70%NNN。与对照(未处理的)烟草相比,用得自的Senior Probiotic处理过的烟草含有57%NAT和43%NNN。
实施例3
用益生菌细菌处理以后由白肋烟草产生的主流烟气中的丙烯酰胺含量
的评价
将白肋烟草植株用2种不同的益生菌溶液处理,收获,并如在实施例1中所述干制。将经处理的烟草植株的中间秆叶的一部分切割并制成香烟。使用Ceruean SM 450抽烟机(Cerulean,Linford Wood East,MK146LY,英国)在ISO条件(35mL抽吸体积、2秒抽吸和60秒抽吸间隔)下试验所述香烟。在每次运行中将烟气收集在44mm Cambridge烟气垫上。为了分析从每支香烟产生的烟气中的丙烯酰胺含量,将烟气垫泡在甲醇中;加入水,并加入2H3-丙烯酰胺(CDN Isotopes,Ponte-Claire,Quebec H9R1H1,加拿大)的内部标准品溶液。将得到的提取物过滤,并穿过SFE筒(Bond Elute C18),Varian,WalnutCreek,CA 9,进行样品净化。
使用LC/MS/MS技术,分析清洁的样品溶液。在2个串联的具有保护筒C18TWIN(Phenomex,Torrance,CA)的Gemini-NX 5u C18150×2mm柱上进行HPLC分离,采用等度模式,使用5%甲醇和0.1%甲酸水溶液的溶剂系统。HPLC是1200HPLC系统(Agilent,Wilmington,DE),具有0.3mL/min的流速,并在室温运行。对于2H3-丙烯酰胺,观察到的保留时间是3.65分钟,对于丙烯酰胺,观察到的保留时间是3.68min。
使用API LC/MS/MS系统(AB Sciex,MA),使用处于阳离子模式MRM(多重反应监测)的大气压电离电喷射,测量丙烯酰胺。条件包括:碰撞腔气体8L/h,帘气体20L/h,离子源气体150L/h,离子源气体250L/h,离子喷射电压5500V,温度400℃,去聚集电势30V,入口透镜电势6V,碰撞腔电压21V,碰撞腔出口电压6V。对于丙烯酰胺,母离子是m/z=72,且子离子是m/z=55。对于2H3-丙烯酰胺,母离子是m/z=75,且子离子是m/z=58。
与包含对照(未处理)的香烟相比,包含用得自Walgreens的“SuperProbiotic”处理过的烟草的香烟表现出由其产生的烟气中丙烯酰胺含量的29%下降。与包含对照(未处理)的香烟相比,包含用得自的“Super Probiotic”处理过的烟草的香烟表现出由其产生的烟气中丙烯酰胺含量的65%下降。
具有在前述描述中提供的教导益处的本发明所属领域的技术人员将想到本发明的许多修改和其它实施方案。因此,应当理解,本发明不限于公开的具体实施方案,并且修改和其它实施方案意图被包括在所附权利要求的范围内。尽管本文采用了特定的术语,但是它们仅以一般性的和描述性的含义使用,而不用于限制的目的。
Claims (24)
1.一种改变烟草材料中的氨基酸和烟草特异性的亚硝胺含量的方法,所述方法包括:使烟草植物组分与一种或多种益生菌接触。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述烟草植物组分选自:烟草种子、烟草幼苗、未成熟的活植物、成熟的活植物、收获的植物或其部分。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述烟草植物组分是未收获的植物。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述一种或多种益生菌选自以下属的益生菌种:双歧杆菌属、乳杆菌属、肠球菌属、proionobacterium、芽孢杆菌属、酵母属、链球菌属、及其混合物。
5.根据权利要求1所述的方法,其中所述一种或多种益生菌选自:青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、乳糖双歧杆菌、长双歧杆菌、假链状双歧杆菌、假长双歧杆菌、双歧杆菌属种、嗜热双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、消化乳杆菌、食淀粉乳杆菌、保加利亚乳杆菌、两歧乳杆菌、短乳杆菌、干酪乳杆菌、高加索乳杆菌、卷曲乳杆菌、弯曲乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、鸡乳杆菌、加氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约汉逊氏乳杆菌、乳酸乳杆菌、赖氏乳杆菌、类干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、乳杆菌属种、芽孢乳杆菌、乳乳球菌、乳脂链球菌、屎链球菌、婴儿链球菌、嗜热链球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、嗜热葡萄球菌、肉葡萄球菌、木糖葡萄球菌、布拉尔酵母菌、酿酒酵母、布拉尔酵母菌、蜡状芽孢杆菌toyo变种、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、及其混合物。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述一种或多种益生菌包含至少一种选自双歧杆菌属的益生菌和至少一种选自乳杆菌属的益生菌。
7.根据权利要求1所述的方法,其中所述一种或多种益生菌包含2种或更多种选自双歧杆菌属的益生菌或2种或更多种选自乳杆菌属的益生菌。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述接触步骤包括:以在水中的溶液、混悬液或分散体,施用所述一种或多种益生菌。
9.根据权利要求1所述的方法,其中所述接触步骤包括:以包含约1×105菌落形成单位/mL至约1×1010CFU/mL的所述一种或多种益生菌的溶液,施用所述一种或多种益生菌。
10.根据权利要求1所述的方法,其中所述接触步骤进一步包括:向所述烟草施用一种或多种表面活性剂。
11.根据权利要求1所述的方法,其中在所述接触步骤以后,所述烟草材料的天冬酰胺含量下降至少约50重量%。
12.根据权利要求1所述的方法,其中所述烟草植物组分包含烟道烘烤的烟草、白肋烟草、香料烟草或其混合物。
13.根据权利要求1-12中的任一项所述的方法,所述方法还包括:将所述烟草材料掺入无烟烟草产品或吸烟制品中。
14.根据权利要求13所述的方法,其中所述烟草材料是呈切碎填充物的形式。
15.根据权利要求13所述的方法,其中所述烟草材料是呈烟草掺合物的形式。
16.根据权利要求13所述的方法,其中所述吸烟制品在抽吸以后的特征在于,与未经处理的对照吸烟制品相比降低的主流烟气的丙烯酰胺含量。
17.根据权利要求16所述的方法,其中按重量计,主流烟气中的丙烯酰胺减少量是未经处理的对照吸烟制品的至少约20%。
18.根据权利要求16所述的方法,其中按重量计,主流烟气中的丙烯酰胺减少量是未经处理的对照吸烟制品的至少约40%。
19.一种烟草产品,其呈根据权利要求13所述的方法制备的香烟或无烟烟草产品的形式。
20.一种呈吸烟制品或无烟烟草产品形式的烟草产品,所述烟草产品包含烟草组合物,其中所述烟草组合物包含益生菌处理过的烟草材料。
21.根据权利要求20所述的烟草产品,其呈香烟的形式,所述香烟包含被包装材料包围的可抽吸材料条和过滤嘴,所述过滤嘴附接至所述条的一端,其中所述可抽吸材料包含用一种或多种益生菌预处理过以降低天冬酰胺含量的烟草材料。
22.根据权利要求20或21所述的烟草产品,其中所述吸烟制品在抽吸以后的特征在于,与未经处理的对照吸烟制品相比降低的主流烟气的丙烯酰胺含量。
23.根据权利要求22所述的烟草产品,其中按重量计,主流烟气中的丙烯酰胺减少量是未经处理的对照吸烟制品的至少约20%。
24.根据权利要求22所述的烟草产品,其中按重量计,主流烟气中的丙烯酰胺减少量是未经处理的对照吸烟制品的至少约40%。
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