CN104341479A - 一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，包括下述步骤:原料处理、高压提取、双水相萃取、脱盐、浓缩干燥，得到羟基积雪草甙。具有含量高，提取率高，工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

Description

一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法。

背景技术

积雪草，为多年生匍匐草本。别名：十八缺、崩大碗、马蹄草、雷公根、蚶壳草、铜钱草、落得打等。生于阴湿荒地、村旁、路边、水沟边。茎伏地，节上生根。叶互生，叶柄长；叶片圆形或肾形，直径2-4厘米。作为中药材使用的积雪草，为双子叶植物伞形科Umbelliferae积雪草Centella asiatica(L.)Urban的干燥全草或带根全草。含多种α-香树脂醇型的三萜成分，其中有积雪草甙(Asiaticoside)、参枯尼甙(Thankuniside)、异参枯尼甙(Isothankuniside)、羟基积雪草甙(Madecas-soside)、玻热模甙(Brahmoside)、破热米甙(Brah-minoside)和破热米酸(Brahmic acid)，以及马达积雪草酸(Madasiatic acid)。积雪草具有很多药理作用：1)中枢作用：其中所含的甙对小鼠、大鼠有镇静、安定作用，此作用主要是对中枢神经系统中的胆碱能系统的影响。2)对皮肤组织的作用：积雪草甙能治疗皮肤溃疡，如顽固性创伤、皮肤结核、麻风等。对小鼠，豚鼠、兔肌肉注射或皮下植入可促进皮肤生长，局部白细胞增多、结缔组织盘管网增生、粘液分泌增加、毛及尾的生长加速等。曾有报告用含积雪草0.25-1％醇提取物(含积雪草酸、积雪草甙)的乳霜剂(其中尚含胚胎的或年幼的牛、猪或羊皮肤、肝、脑的水醇提取物)治疗皮肤病，获良好效果。3)美容作用：积雪草具有清热解毒，利湿消肿、滋补、消炎、镇定的作用。能刺激深层皮肤细胞更替。积雪草可以紧致表皮与真皮连接部分，能使皮肤变柔软，有助于解决皮肤松弛现象，使皮肤光滑有弹性；促进真皮层中胶原蛋白形成，使纤维蛋白再生，重新连接起来，使肌肤达到紧致光滑的效果。还可帮助受损的组织愈合及紧实肌肤。既能促进表皮与真皮之间的密切连接，又能抑制脂肪细胞的增加，防止皮肤水肿、出现肥胖。4)抗菌作用：幼芽的水提取物有抗菌作用。积雪草甙能治疗麻风，认为其作用为溶解细菌的蜡膜，从而被其他药物或机体防御机能所消灭。

目前已有从积雪草中提取分离羟基积雪草甙的研究，例如公开号为CN1377649的发明专利中公开了可以制得羟基积雪草甙的方法，具体是先将积雪草总甙溶于甲醇后，进行硅胶正相色谱层析，以氯仿和甲醇的混合液为洗脱溶剂，收集其中氯仿：甲醇＝2：1比例部分的洗脱液，减压回收洗脱液，得到白色晶体状单一化合物羟基积雪草甙。这种方法制得的羟基积雪草甙的纯度不够理想，而且洗脱溶剂中含有氯仿，不够环保，危害操作人员的健康。又如公开号为CN101210039的发明专利，公开了一种羟基积雪草甙化学对照品的分离制备方法，它是以重量含量30-97％的羟基积雪草甙提取物为原料，以制备型高效液相色谱为分离手段，以甲醇-水溶液为洗脱体系，获得纯度98％以上羟基积雪草甙化学对照品。该方法虽然可获得高纯度的羟基积雪草甙单品，但它是以重量含量30-97％的积雪草甙提取物为原料进行分离提纯的，必须先从积雪草中提取出一定含量的积雪草甙提取物；此外，该方法所用设备制备型高效液相色谱价格较高，导致产品的生产成本偏高。

现有技术对羟基积雪草甙的提取方法，一般都会在提取后采用大孔树脂纯化作为主要的分离步骤，然而采用大孔树脂纯化方法，树脂用前需要处理，纯化需经过吸附和洗脱过程，生产周期长。在用大孔树脂进行纯化洗脱时，由于物理吸附的原因，也容易造成一部分样品死吸附，而导致转移率降低。另外采用大孔树脂纯化洗脱液体积较大，溶剂回收时间长，增加了生产成本，并且溶剂回收产生较多的废液，对环保造成一定的负担。此外由于大孔树脂的使用，增加了引入苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、烷烃类、二乙基苯类等有机残留溶剂的风险，对产品的安全性造成了一定的影响。

综上所述，研究一种简单可行、对环境污染小的羟基积雪草甙的提取方法具有很好的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，具有工艺简单，适合生产，时间短等优点。

本发明通过以下技术方案实现，具体包括如下步骤：

1)原料处理：将积雪草粉碎或打碎；

2)高压提取：将处理后的原料，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10-15min，恢复常压，过滤，得到提取液；

3)分离：对积雪草进行双水相萃取，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氢氧化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为10-20％，氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为10-20％，余量为水，所述聚乙二醇的重均分子量为1000-8000；

4)后续处理：将步骤3)获得的萃取上相，脱盐、浓缩干燥，得羟基积雪草甙。

本发明所述的积雪草为新鲜和/或干燥后的积雪草。

所述的脱盐优选采用超滤法或透析法，超滤法采用截留分子量为1000-100000的超滤膜脱盐，透析法采用截留分子量为1000-100000的透析袋脱盐。

所述的干燥优选喷雾干燥或冷冻干燥。

本发明得到的羟基积雪草甙，经HPLC检测，含量在98.5％以上。

与现有技术相比，本发明的优点：

1、现有技术在进行羟基积雪草甙的提取时，前处理一般都是以水或乙醇等为溶剂，通过加热提取来将有效成分溶出，而本发明采用高压提取，相比加热提取，经过高压作用，使得积雪草中含有的有机酸、多酚、羟基积雪草甙等成分能充分溶出，利于后续工艺的处理，利于提高活性成分的收率。

2、现有技术得到的羟基积雪草甙含量一般不超过98％，本发明采用高压提取和双水相萃取技术的结合，可以极大的提高生产效率，现有技术柱层析所用的树脂为一般为非极性树脂，经过一次吸附只能得到羟基积雪草甙含量40-50％的提取物；如果采用极性树脂，经过一次吸附也只能得到羟基积雪草甙含量50％左右，要想获得更高含量的羟基积雪草甙必须通过2次或更多次柱层析吸附，从而增加了工艺时间和成本。双水相萃取技术作为一种新型的分离技术，具有条件温和、操作简便、易于放大、分离能力强等一系列优点，而采用本发明的技术结合，出现质的提高，可以增加羟基积雪草甙的含量和提取效率，相比水提或醇提后柱层析，本发明时间短，羟基积雪草甙含量高。

3、本发明避免了无水乙醇、甲醇等大量有机溶剂的使用，更加环保。

具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：将新鲜积雪草打碎；

2)高压提取：将处理后的原料，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10min，恢复常压，过滤，得到提取液；

3)分离：对积雪草进行双水相萃取，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氢氧化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为20％，氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为10％，余量为水，聚乙二醇的重均分子量为1000-8000；

4)后续处理：将步骤3)获得的萃取上相，超滤法采用截留分子量为1000-100000的超滤膜脱盐、浓缩、喷雾干燥，得到羟基积雪草甙。

实施例2：

一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：将干燥积雪草粉碎；

2)高压提取：将处理后的原料，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持15min，恢复常压，过滤，得到提取液；

3)分离：对积雪草进行双水相萃取，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氢氧化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为10％，氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为20％，余量为水，聚乙二醇的重均分子量为1000-8000；

4)后续处理：将步骤3)获得的萃取上相，透析法采用截留分子量为1000-100000的透析袋脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到羟基积雪草甙。

实施例3：

一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：将干燥积雪草粉碎；

2)高压提取：将处理后的原料，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持12min，恢复常压，过滤，得到提取液；

3)分离：对积雪草进行双水相萃取，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氢氧化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为15％，氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为15％，余量为水，聚乙二醇的重均分子量为1000-8000；

4)后续处理：将步骤3)获得的萃取上相，超滤法采用截留分子量为1000-100000的超滤膜脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到羟基积雪草甙。

结果：

Claims (2)

1.一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，其特征在于：

包括如下步骤：

1)原料处理：将积雪草粉碎或打碎；

2)高压提取：将处理后的原料，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10-15min，恢复常压，过滤，得到提取液；

3)分离：对积雪草进行双水相萃取，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氢氧化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为10-20％，氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为10-20％，余量为水，所述聚乙二醇的重均分子量为1000-8000；

4)后续处理：将步骤3)获得的萃取上相，脱盐、浓缩干燥，得羟基积雪草甙。

2.根据权利要求1所述的一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，其特征在于：所述的积雪草为新鲜和/或干燥后的积雪草。