CN109568200A - 一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法 - Google Patents

一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种乙醇‑硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法。本发明包括：步骤1:积雪草晒干粉碎；步骤2：将积雪草粉末投入圆底烧瓶中，用70％乙醇溶剂，60℃水浴加热回流提取2h，提取后过滤得到积雪草提取液；步骤3：将积雪草提取液进行真空浓缩，得到积雪草浓缩液；步骤4：利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷；步骤5：按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇，震荡，混匀，离心，取出离心液上层；步骤6：将上层减压浓缩，真空干燥，最终得到积雪草总苷。本发明制得产品安全性高，提高了提取物纯度，改善了其品质，有效降低其生产成本。

Description

一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法
技术领域
本发明涉及植物提取的制备方法，特别是涉及一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法。
背景技术
积雪草为伞形科植物积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)的干燥全草，广泛分布于长江流域以南各地，全草入药，常年可采，资源丰富，在许多国家的医药领域中应用己有几千年历史，其始载于《神农本草经》，列为中品，性寒，味苦，辛，具有清热利湿、解毒消肿之功效，主要用于湿热黄疽、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤等。积雪草中的化学成分包括三萜皂苷、三萜酸、多炔烯类和挥发油等。现代研究证明，积雪草提取物可有效促进皮肤损伤、局部胶原合成代谢，并在皮肤损伤后的组织修复方面有中药作用。近年来研究还发现，积雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增生等作用。
积雪草苷等活性成分具有美白功效，其作为化妆品的功效成分而被广泛使用。目前富集积雪草总苷的方法主要采用大孔树脂方法纯化，例如专利一种积雪草总苷的制备方法(201210071147.0)：以水提取，大活性炭脱色，大孔树脂吸附-洗脱富集积雪草总苷，工艺流程复杂耗时，洗脱时产生大量溶剂导致浓缩时能耗较大。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，本方法工序少，成本低，耗时短，适合工业化大规模生产的需求。
本发明是通过以下技术方案来实现：
步骤1:积雪草晒干，粉碎至一定粒度制得积雪草粉末。
步骤2：将积雪草粉末投入圆底烧瓶中，用70％乙醇溶剂，60℃水浴加热回流提取2h，提取后过滤，得到积雪草提取液。
步骤3：将积雪草提取液进行真空浓缩，得到积雪草浓缩液。
步骤4：利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷：将步骤3中的积雪草浓缩液配置成密度为1.00～1.5g/ml的积雪草水溶液。取一定体积的积雪草水溶液加入到双水相体系中，震荡摇匀后静置，离心，分离上下相即含有积雪草总苷的上层及含有蛋白质、多糖等杂质的下层，取出含有积雪草总苷的样品层。
所述的双水相体系由乙醇、硫酸铵和蒸馏水组成；
所述双水相体系中，乙醇的体积分数为15～85％，硫酸铵的质量分数为5～45％。
步骤5：按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇，震荡，混匀，离心，取出离心液上层。
步骤6：将上层减压浓缩，真空干燥，得到最终产品。
作为优选，所述步骤1具体为，积雪草粉碎至20～50目
作为优选，所述步骤2具体为，积雪草粉末与70％乙醇溶剂的料液比为1：5，提取次数为2次。
作为优选，所述步骤3具体为，浓缩温度为65℃。
作为优选，所述步骤4具体为，离心转速为4000r/min，离心10min。
作为优选，所述步骤4具体为，双水相体系的配置过程：将硫酸铵用蒸馏水溶解后，加入无水乙醇，充分搅拌混匀。
作为优选，所述步骤5具体为，积雪草总苷样品层与无水乙醇体积比为1:3～6，离心具体为4000r/min，15min。
作为优选，所述步骤6具体为，减压浓缩温度为45～65℃，真空干燥温度为45～60℃。
本发明以纯天然的积雪草植物为原料，用水、乙醇进行提取，然后双水相萃取技术富集积雪草总苷。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
操作过程绿色环保，未使用任何有毒有害试剂，保护环境。
使用的原料试剂，简单易得，且易于运输，储存，适合工业化生产。
工艺流程稳定可靠，重复性高，稳定性强。
本发明未采用大孔树脂纯化工艺，避免了大孔树脂残留导致的安全风险。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对发明的解释而不是限定。
实施例1：
取350g干燥积雪草粉末(过50目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1750ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为535ml，密度为1.06g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入11.5g硫酸铵，加入23.5ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入10ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入12.5ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层15ml置于烧杯中，加入60ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，45℃浓缩至膏状，转入60℃真空干燥箱干燥，得到1.3g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为66.7％。
实施例2：
取350g干燥积雪草粉末(过50目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1750ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为535ml，密度为1.06g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入7.5g硫酸铵，加入13ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入37ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入12.5ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层21ml置于烧杯中，加入84ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，65℃浓缩至膏状，转入45℃真空干燥箱干燥，得到1.1g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为69.3％。
实施例3：
取200g干燥积雪草粉末(过20目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1000ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为220ml，密度为1.47g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入4g硫酸铵，加入25ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入25ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入10ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层17ml置于烧杯中，加入68ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，65℃浓缩至膏状，转入45℃真空干燥箱干燥，得到1.4g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为67.3％。
实施例4：
取100g干燥积雪草粉末(过40目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1000ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为120ml，密度为1.24g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入7.5g硫酸铵，加入15ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入15ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入8ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层12ml置于烧杯中，加入48ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，65℃浓缩至膏状，转入45℃真空干燥箱干燥，得到0.9g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为69.9％。

Claims (8)

1.一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤1:积雪草晒干，粉碎至一定粒度制得积雪草粉末；
步骤2：将积雪草粉末投入圆底烧瓶中，用70％乙醇溶剂，60℃水浴加热回流提取2h，提取后过滤，得到积雪草提取液；
步骤3：将积雪草提取液进行真空浓缩，得到积雪草浓缩液；
步骤4：利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷：将步骤3中的积雪草浓缩液配置成密度为1.00～1.5g/ml的积雪草水溶液；取一定体积的积雪草水溶液加入到双水相体系中，震荡摇匀后静置，离心，分离上下相即含有积雪草总苷的上层及含有蛋白质、多糖杂质的下层，取出含有积雪草总苷的样品层；
所述的双水相体系由乙醇、硫酸铵和蒸馏水组成；
所述双水相体系中，乙醇的体积分数为15～85％，硫酸铵的质量分数为5～45％；
步骤5：按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇，震荡，混匀，离心，取出离心液上层；
步骤6：将上层减压浓缩，真空干燥，最终得到积雪草总苷。
2.根据权利要求1所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于积雪草粉碎至20～50目。
3.根据权利要求2所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于所述步骤2具体为：积雪草粉末与70％乙醇溶剂的料液比为1：5，提取次数为2次。
4.根据权利要求3所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于所述步骤3具体为：浓缩温度为65℃。
5.根据权利要求4所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于所述步骤4具体为：离心转速为4000r/min，离心10min。
6.根据权利要求5所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于双水相体系的配置过程：将硫酸铵用蒸馏水溶解后，加入无水乙醇，采用玻璃棒充分搅拌混匀，搅拌次数3次，每次1min。
7.根据权利要求6所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于所述步骤5具体为：积雪草总苷样品层与无水乙醇体积比为1:3～1：6，离心具体为4000r/min，15min。
8.根据权利要求7所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于所述步骤6具体为：减压浓缩温度为45～65℃，真空干燥温度为45～60℃。
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