CN114010670B - 一种低共熔溶剂提取刺五加总黄酮与回收方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药有效成分提取纯化技术领域，具体公开了一种低共熔溶剂提取刺五加总黄酮与回收方法。本发明公开了一种以刺五加根茎的粉末为原料，加入一定含水量的低共熔溶剂，在超声波辅助的条件下提取刺五加总黄酮，再用大孔树脂将提取液中的黄酮类化合物富集回收，同时对得到的低共熔回收液蒸发掉水分后可再次提取刺五加总黄酮，至少可重复利用三次。本发明开发了一种新型低共熔溶剂结合大孔树脂从刺五加根茎中提取并富集刺五加总黄酮类化合物的工艺技术，并实现了低共熔溶剂的重复利用，达到了绿色、高效、可重复提取的目的。相较于传统提取方法，该方法具有不使用有机溶剂，操作简便、节约时间，安全及成本低等优势，可实现工业化生产。

Description

一种低共熔溶剂提取刺五加总黄酮与回收方法
技术领域
本发明属于中药有效成分提取纯化技术领域，涉及一种低共熔溶剂提取刺五加总黄酮与回收方法，具体涉及一种新型超声辅助低共熔溶剂结合大孔吸附树脂从刺五加根茎中提取和纯化刺五加总黄酮的方法。
背景技术
刺五加属于五加科五加属灌木，广泛分布于俄罗斯、亚洲地区的韩国、日本及中国东北，本草纲目记载刺五加具有滋补肝肾、强筋健骨、补肾安神等作用。其根、茎、叶、花和果都具有药理活性，常被用作各种功能性制剂。刺五加中含有大量生物活性成分，例如刺五加苷、黄酮、多糖和多酚等，是刺五加药效的物质学基础。现已鉴定出，刺五加黄酮类化合物包括金丝桃苷、槲皮素、槲皮苷和芦丁等多种成分。刺五加黄酮具有抗氧化、抗应激、保护心血管和促进肠道益生菌发育的功效。
提取黄酮类化合物的方法有多种，传统方法如有机溶剂浸提、乙醇回流提取等，常用的有机溶剂包括甲醇、乙醇和乙酸乙酯等。现代技术是采用微波辅助提取、CO2超临界流体萃取和超声辅助提取等方式进行提取。然而，有机溶剂具有易燃、易挥发，易吸入中毒等缺点，大量使用会破坏自然环境甚至威胁人类健康。因此，寻求一种易操作、效率高、耗能少的“绿色溶剂”来提取总黄酮意义重大。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种新型低共熔溶剂结合大孔树脂从刺五加根茎中提取并富集刺五加总黄酮类化合物的工艺技术，并实现了低共熔溶剂的再利用，达到了绿色、高效、可重复提取的目的。相较于传统提取方法，该技术提取部分具有不使用有机溶剂，操作简便、节约时间，安全及成本低等优势，纯化部分具有高效，简单，经济等优点，可实现工业化生产。
下面将从研究技术背景来阐述本专利申请预想保护技术方案相较现有技术存在的非显而易见性，具体内容如下：
Abbott教授于2003年首次合成低共熔溶剂，即使用两种高熔点的化合物，混合后变为低熔点的液体。2011年，提出了“天然低共熔溶剂”的概念，通常是由一些二级代谢产物，例如糖醇，糖，氨基酸和有机酸等作为天然组分形成的低共熔溶剂。天然低共熔溶剂通常是由氢键受体(一些盐类如季铵盐)和氢键供体(如多元醇、尿素和羧酸)形成的液态物质。以低共熔溶剂作为提取溶剂具有效率高，时间短，成本低，无毒可生物降解的优点，并且后期纯化方法简便，用时少等优点，具有广泛应用前景。因此，采用低共熔溶剂提取刺五加中的黄酮，一是减少有机溶剂的使用，而使用天然成分的化合物组成的低共熔溶剂具有安全、环保的优点。其次，使用有机溶剂提取后的黄酮，必须除去有机溶剂才能进行大孔树脂的纯化，费时费力，而使用低共熔溶剂提取的黄酮，可以直接采用抗溶剂(水)法进行大孔树脂纯化，即省时，还高效。第三，低共熔溶剂也可以重复利用，降低成本，即使后期不可利用的低共熔溶剂也可以方便的处理(因为均是天然有机成分)，没有环境和生态污染的忧虑。
本发明提供了一种新型低共熔溶剂结合大孔树脂从刺五加根茎中提取并回收总黄酮的方法，在一定程度上提高了刺五加黄酮提取纯化的工艺技术。
具体地，本发明是以刺五加根茎的粉末为原料，加入一定含水量的低共熔溶剂，在超声波辅助的条件下提取刺五加总黄酮，再用大孔树脂将提取液中的黄酮类化合物富集回收，同时得到的低共熔回收液可再次提取刺五加总黄酮，至少可重复利用三次。
且，本发明的目的通过下述方案实现：
一种新型低共熔体系的制备方法，包括以下步骤：
1)将丙三醇和乙酰丙酸按摩尔比，加热搅拌混合，制备低共熔溶剂；
2)向所述低共熔溶剂中加入适量的水，恒温加热搅拌，制成含水量为25％-35％的低共熔溶剂，作为提取液。
优选的，步骤1)中，所述丙三醇和乙酰丙酸的混合摩尔比为1:(0.5-1.5)，且加热温度为75℃-95℃，搅拌转速为150-200r/min，混合搅拌时间为1-2h。
需要说明的是，上述技术方案相较现有技术具有的优异效果为：
本发明所用试剂丙三醇和乙酰丙酸均为天然有机化合物，通过加热和搅拌混合，就可以形成均一的低共熔溶剂。通过在低共熔溶剂中加入适量的水，可以降低低共熔溶剂的粘度，有利于提取时，提取物有效成分的扩散和溶剂质子的渗透；且该低共熔溶剂极性适中，对黄酮类化合物的溶解性较大，故对刺五加总黄酮的提取率高。
此外，采用步骤1)的有益效果为：和传统的有机溶剂乙醇(易燃，低沸点)比较，使用天然低共熔溶剂更安全。其次，在该摩尔比的条件下制备的低共熔溶剂的黏度和表面张力适中，可促进低共熔溶剂的扩散和传质效果，且此溶剂偏酸性，该环境有利于黄酮类化合物的提取。
以及，采用步骤2)的有益效果为：根据“相似相容”原理，作为强极性溶剂的水会增加DES的偶极/极化率，因此更接近黄酮类化合物的极性，且在此含水量的条件下，可以降低提取溶剂的粘度，有利于刺五加总黄酮的提取。
本发明还请求保护一种提取刺五加总黄酮的方法，所述方法具体包括如下步骤：
(1)将刺五加饮片研磨后过80目筛网，得刺五加粉末，备用；
(2)在所述刺五加粉末中加入如权利要求1制备的低共熔体系，搅拌混合得混合物；
(3)将所述混合物超声提取后离心得到上层刺五加总黄酮的粗提液，再将所述粗提液用0.45μm微孔滤膜过滤，即完成新型低共熔溶剂从刺五加根茎中提取刺五加总黄酮类化合物的工艺。
优选的，步骤(2)中，所述刺五加粉末与低共熔体系的料液比为1:(15-20)，及混合时间为10-30min。
优选的，步骤(3)中，所述超声提取的功率密度为60-80W/cm2，超声波占空比60％，及超声提取温度为50℃～60℃，提取时间为70-80min。
值得说明的是，上述技术方案相较现有技术具有的优异效果如下：
本发明与传统的乙醇回流提取，超声波提取的效率更高，时间更短。与传统的超声波辅助乙醇提取相比，使用超声波辅助低共熔溶剂提取，不仅提取溶剂更安全，而且提取效率还要高。
且，采用步骤(1)的有益效果为：适当的粉碎度，可以增加刺五加与提取液的接触面积，使两者充分混合，提高总黄酮的提取率。
采用步骤(2)的有益效果为：在合理的料液比和适当的浸泡条件下，溶液传质推动力较高，有利于黄酮的溶出。
采用步骤(3)的有益效果为：超声提取可以促进低共熔溶剂的渗透，适当升高温度可以加快分子的运动速度，减少溶剂的粘度，并可在短时间内完全反应达到传质平衡。
另外，本发明还请求保护一种低共熔溶剂和刺五加总黄酮的回收方法，具体包括如下步骤：
A.将如权利要求3得到的所述刺五加总黄酮的粗提液加水稀释，使其浓度为原粗提液的1/7-1/9，作为上样液；
上述技术方案产生的优异效果为：低共熔溶剂本身黏度较大，不利于大孔树脂的吸附，采用抗溶剂法，通过大量水的稀释，破坏低共熔溶剂的体系，然后直接用大孔树脂吸附回收黄酮。和传统的乙醇作为提取溶剂比较，不涉及到乙醇的挥发，节约时间，减少了操作步骤。
B.大孔树脂预处理：用无水乙醇将HPD-600型大孔树脂浸泡24h，用去离子水洗至无醇味，并用5倍体积的5％NaOH浸泡5-6h，待浸泡结束后，再用去离子水洗至中性，最后用5倍体积的5％HCL浸泡4-5h，再次洗至中性；
上述技术方案产生的优异效果为：大孔树脂是目前纯化黄酮最常用，最普遍，最经济的方法，具有操作简单，回收效率高的优点。HPD-600型大孔树脂比表面积和平均孔径均较大，且该树脂和刺五加黄酮的极性相似，可表现出较高的回收能力。
C.刺五加总黄酮的回收：将大孔树脂湿法装柱，随后将上样液以0.5-1.5mL/min的流速上柱，开始动态吸附，流出液每5mL为一个检测单位，测定最终流出液中总黄酮的浓度达到上样液的10-15％时，停止上样；
用去离子水按同样速度洗脱直至洗脱液为无色，再用70-80％乙醇以0.5-1.5mL/min的流速进行洗脱实验，收集含总黄酮的收集液，即完成刺五加总黄酮的回收；
上述技术方案产生的优异效果为：洗脱效率和洗脱液的种类和浓度关系极大。乙醇是黄酮大孔树脂洗脱常用的洗脱液。该浓度范围下的乙醇溶液极性与黄酮类化合物之间氢键相互作用力强，可以更好的洗脱刺五加总黄酮。通过此方法可以最大程度的从吸附粗提液的大孔树脂上洗脱总黄酮。
D.低共熔溶剂的回收：收集上样流出液，将流出液中的水蒸发后，即可重新用于刺五加总黄酮的提取，即完成低共熔溶剂的回收；
具体地，将回收的低共熔溶剂通过减压浓缩，去除多余的水分，按照以上的步骤重新提取刺五加黄酮，直至刺五加黄酮的提取率低于80％，即认为提取效率下降明显，不能重复利用。
上述技术方案产生的优异效果为：所回收的低共熔溶剂可再次提取刺五加总黄酮，以降低成本，提高资源利用效率，极大的节省提取成本，通常新制备的低共熔溶剂可至少提取3次，第3次的提取效率可达84.23±0.487％。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明提供了一种低共熔溶剂提取刺五加总黄酮与回收方法，具有如下优异效果：
本发明公开了一种以刺五加根茎的粉末为原料，加入一定含水量的低共熔溶剂，在超声波辅助的条件下提取刺五加总黄酮，再用大孔树脂将提取液中的黄酮类化合物富集回收，同时对得到的低共熔回收液蒸发掉水分后可再次提取刺五加总黄酮，至少可重复利用三次；
进一步的，本发明公开了一种新型低共熔溶剂结合大孔树脂从刺五加根茎中提取并富集刺五加总黄酮类化合物的工艺技术，并实现了低共熔溶剂的重复利用，达到了绿色、高效、可重复利用的目的。相较于传统的有机溶剂提取黄酮的方法，该方法提取部分具有不使用有机溶剂，操作简便、节约时间，安全及成本低等优势，纯化部分具有高效，简单，经济等优点，可实现工业化生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为六因素对刺五加总黄酮提取率的影响图(注：数值代表三个独立实验的平均值±SD，与各组最佳条件下的最高提取率相比；**p<0.01和***p<0.0001)。
图2为四种大孔树脂对总黄酮回收率的比较图(注：数值代表三个独立实验的平均值±SD，与各组最佳条件下的最高提取率相比；***p<0.0001)。
图3为低共熔溶剂重复回收利用次数与总黄酮提取率的关系曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明说明书附图及实施例对本发明公开的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种新型低共熔溶剂结合大孔树脂从刺五加根茎中提取并富集刺五加总黄酮类化合物的工艺技术，并实现了低共熔溶剂的回收再利用，达到了绿色、高效、可重复提取的目的。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除有特别说明，本发明中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。
为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。
下面，将结合具体实施例，对本发明的技术方案进行进一步的说明。
实施例1：
(1)一种新型低共熔的制备方法，包括以下步骤：
1)将1mol丙三醇和1mol乙酰丙酸在85℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得低共熔溶剂；
2)取7mL低共熔溶剂于离心管中，加入3mL水，在85℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得含水量为30％的提取液。
(2)一种提取刺五加总黄酮的方法，包括以下步骤：
1)刺五加饮片用粉碎机研磨成粉，过80目筛网，常温储存；
2)按料液比为1:20的比例向提取液10mL中加入0.5g刺五加粉末，搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合时间为10min；
3)将离心管置于超声波仪器中，在超声密度65W/cm2，超声占空比60％(开6s,关4s)，超声温度55℃的条件下，提取75min；
4)将混合溶液离心取得上层刺五加总黄酮粗提液，再将粗提液用0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液。离心转速为8000r/min，离心时间为5min；
5)取1mL滤液采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色体系在510nm波长下测吸光度，并计算总黄酮提取率。
实施例2：
(1)一种新型低共熔的制备方法，包括以下步骤：
1)将1mol丙三醇和1mol乙酰丙酸在90℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得低共熔溶剂；
2)取6.5mL低共熔溶剂于离心管中，加入3.5mL水，在90℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得含水量为35％的提取液。
(2)一种提取刺五加总黄酮的方法，包括以下步骤：
1)刺五加饮片用粉碎机研磨成粉，过80目筛网，常温储存；
2)按料液比为1:15的比例向提取液7.5mL中加入0.5g刺五加粉末，搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合时间为20min；
3)将离心管置于超声波仪器中，在超声密度70W/cm2，超声占空比60％(开6s,关4s)，超声温度60℃的条件下，提取80min；
4)将混合溶液离心取得上层刺五加总黄酮粗提液，再将粗提液用0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液。离心转速为8000r/min，离心时间为5min；
5)取1mL滤液采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色体系在510nm波长下测吸光度，并计算总黄酮提取率。
实施例3：
(1)一种新型低共熔的制备方法，包括以下步骤：
1)将1mol丙三醇和1mol乙酰丙酸在80℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得低共熔溶剂；
2)取7.2mL低共熔溶剂于离心管中，加入2.8mL水，在80℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得含水量为28％的提取液。
(2)一种提取刺五加总黄酮的方法，包括以下步骤：
1)刺五加饮片用粉碎机研磨成粉，过80目筛网，常温储存；
2)按料液比为1:18的比例向提取液9mL中加入0.5g刺五加粉末，搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合时间为25min；
3)将离心管置于超声波仪器中，在超声密度80W/cm2，超声占空比60％(开6s,关4s)，超声温度55℃的条件下，提取73min；
4)将混合溶液离心取得上层刺五加总黄酮粗提液，再将粗提液用0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液。离心转速为8000r/min，离心时间为5min；
5)取1mL滤液采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色体系在510nm波长下测吸光度，并计算总黄酮提取率。
实施例4：
(1)一种新型低共熔的制备方法，包括以下步骤：
1)将1mol丙三醇和1mol乙酰丙酸在80℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得低共熔溶剂；
2)取15mL低共熔溶剂于离心管中，加入5mL水，在80℃的恒温加热条件下搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合1.5h，制得含水量为25％的提取液。
(2)一种提取刺五加总黄酮的方法，包括以下步骤：
1)刺五加饮片用粉碎机研磨成粉，过80目筛网，常温储存；
2)按料液比为1:15的比例向提取液15mL中加入1g刺五加粉末，搅拌混合，搅拌转速为200r/min，混合时间为25min；
3)将离心管置于超声波仪器中，在超声密度60W/cm2，超声占空比60％(开6s,关4s)，超声温度50℃的条件下，提取70min；
4)将混合溶液离心取得上层刺五加总黄酮粗提液，再将粗提液用0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液。离心转速为8000r/min，离心时间为5min；
5)取1mL滤液采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色体系在510nm波长下测吸光度，并计算总黄酮提取率。
对比例1：
一种利用超声波辅助乙醇提取刺五加总黄酮的方法，包括以下步骤：
1)刺五加饮片用粉碎机研磨成粉，过80目筛网，常温储存；
2)取0.5g刺五加粉末于离心管中，加入10mL 75％乙醇溶液，在超声密度80W/cm2，超声占空比60％(开6s,关4s)，超声温度55℃的条件下，提取100min；
3)将混合液离心取得上层刺五加总黄酮粗提液，再将粗提液用0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液。离心转速为8000r/min，离心时间为5min；
4)取1mL滤液采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色体系在510nm波长下测吸光度，并计算总黄酮提取率。
根据实施例1-4和对比例1所述采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色法来检测刺五加总黄酮的含量，包括以下步骤：
1)NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色法：精密量取实验提取液1mL置于25mL容量瓶中，加入1mL5％NaNO2溶液，摇匀放置6min；再加入1mL10％Al(NO3)3溶液，摇匀放置6min；最后加入9mL4％NaOH溶液，用70％乙醇定容，摇匀放置15min，以芦丁为对照，于510nm下测定吸光度，计算刺五加总黄酮得率；
2)芦丁标准曲线绘制：精密称取芦丁对照品75mg，置于50mL容量瓶中，用低共熔溶液溶解并定容至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液(1.5mg/mL)。以1.5mg/mL的对照品溶液配制0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5mg/mL的标准溶液。以芦丁为对照品，采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色体系在510nm波长下测吸光度，以黄酮浓度x为横坐标，以所测吸光度y为纵坐标，绘制黄酮标准曲线
步骤2)测得得线性回归方程：y＝0.0066x-0.0391，R2＝0.9942。结果表明，芦丁对照品溶液在0-1.5mg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系。
实例1-4和对比例1粗提液中刺五加总黄酮含量结果见表1。结果显示，使用低共熔溶剂作为提取溶剂，黄酮的提取率显著高于使用乙醇作为溶剂的提取率。
表1刺五加总黄酮含量
Figure BDA0003421054000000111
实施例5：
一种刺五加总黄酮的回收方法，包括以下步骤：
1)取10mL总黄酮粗提液加70mL水稀释至原浓度的1/8，作为上样液；
2)刺五加总黄酮的回收：将预处理好的大孔树脂HPD-600湿法装柱(16mm×40cm)，树脂高度为20cm，将上样液以1mL/min的流速上柱，开始动态吸附，流出液每5mL为一个检测单位，测定最终流出液中总黄酮的浓度，达到上样液浓度的10％时停止上样。随后，用去离子水按同样速度洗脱直至大孔树脂洗脱液为无色，再用75％乙醇溶液以1mL/min的流速进行动态洗脱，得到含总黄酮的收集液。测定收集液中的黄酮含量，得到大孔树脂的吸附率、洗脱溶剂的解析率和黄酮的总回收率。
实施例6：
一种刺五加总黄酮的回收方法，包括以下步骤：
1)取10mL总黄酮粗提液加60mL水稀释至原浓度的1/7，作为上样液；
2)刺五加总黄酮的回收：将预处理好的大孔树脂HPD-600湿法装柱(16mm×40cm)，树脂高度为20cm，将上样液以1mL/min的流速上柱，开始动态吸附，流出液每5mL为一个检测单位，测定最终流出液中总黄酮的浓度，达到上样液浓度的10％时停止上样。随后，用去离子水按同样速度洗脱直至大孔树脂洗脱液为无色，再用70％乙醇溶液以1mL/min的流速进行动态洗脱，得到含总黄酮的收集液。计算收集液中的黄酮含量，得到大孔树脂的吸附率、洗脱溶剂的解析率和黄酮的总回收率。
实施例7：
一种刺五加总黄酮的回收方法，包括以下步骤：
1)取10mL总黄酮粗提液加80mL水稀释至原浓度的1/9，作为上样液；
2)刺五加总黄酮的回收：将预处理好的大孔树脂HPD-600湿法装柱(16mm×40cm)，树脂高度为20cm，将上样液以1mL/min的流速上柱，开始动态吸附，流出液每5mL为一个检测单位，测定最终流出液中总黄酮的浓度，达到上样液浓度的10％时停止上样。随后，用去离子水按同样速度洗脱直至大孔树脂洗脱液为无色，再用80％乙醇溶液1mL/min的流速进行动态解吸实验，得到含总黄酮的收集液。计算收集液中的黄酮含量，得到大孔树脂的吸附率、洗脱溶剂的解析率和黄酮的总回收率。
对比例2：
一种刺五加总黄酮的回收方法，包括以下步骤：
1)取10mL总黄酮粗提液加70mL水稀释至原浓度的1/8，作为上样液；
2)大孔树脂预处理：用无水乙醇将AB-8型、D101型和S-8型大孔树脂浸泡24h，用去离子水洗至无醇味，5倍体积的5％NaOH浸泡6h，浸泡结束后，再用去离子水洗至中性，最后用5倍体积的5％HCL浸泡5h，再次洗至中性。无水乙醇浸泡备用，使用大孔树脂之前需再次将其洗至无醇味；
3)刺五加总黄酮的回收：将大孔树脂湿法装柱(16mm×40cm)，树脂高度为20cm，将上样液以1mL/min的流速上柱，开始动态吸附，流出液每5mL为一个检测单位，测定最终流出液中总黄酮的浓度，达到上样液浓度的10％时停止上样。随后，用去离子水按同样速度洗脱直至大孔树脂洗脱液为无色，再用75％乙醇溶液1mL/min的流速进行动态洗脱，得到含总黄酮的收集液。计算收集液中的黄酮含量，得到大孔树脂的吸附率、洗脱溶剂的解析率和黄酮的总回收率。
根据实施例5-7和对比例2所述检测收集液中的黄酮含量与上述采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色法检测刺五加总黄酮的含量的步骤一致。
实施例5和对比例2的检测结果见表2，表明本发明中选用的HPD-600型大孔树脂对刺五加总黄酮的吸附容量更大，回收效果最好。
表2 4种不同类型大孔树脂对刺五加总黄酮回收能力的比较
Figure BDA0003421054000000131
Figure BDA0003421054000000141
且实施例5-7的检测结果见表3，在提取液稀释1/7-1/9的范围内，使用70％-80％的乙醇作为洗脱溶剂，能够有效的回收刺五加黄酮。
表33种不同浓度的乙醇溶液对刺五加总黄酮解析效果的比较
Figure BDA0003421054000000142
实施例8：
一种回收低共熔溶剂并再利用的方法，包括以下步骤：
1)收集实施例5中的上样流出液，将流出液中的水减压蒸发后，重复利用提取刺五加黄酮；
2)含水量为28％的回收的低共熔溶剂按上述实施例3提取步骤和提取条件再次提取刺五加总黄酮，得到粗提液；
3)粗提液按上述实施例5回收步骤再次分别回收低共熔溶剂和刺五加总黄酮；
4)重复操作5次。
实施例8所述检测收集液中的黄酮含量与上述采用NaNO2－Al(NO3)3－NaOH显色法检测刺五加总黄酮的含量的步骤一致。
实施例8的检测结果见表4，本发明制备的低共熔体系经回收后在第3次提取刺五加总黄酮时，提取效率为原来的84.23±0.487％，仍具有良好的提取效果。也同时表明被HPD-600型大孔树脂吸附的低共熔溶剂具有良好的溶剂完整性，可被循环利用至少3次，从而更大程度的节省成本。
表4低共熔溶剂再利用5次的提取效果
再利用次数 提取量(mg/g) 提取效率(％)
重复第1次 30.666±0.420 89.74±0.382
重复第2次 25.527±0.316 86.70±0.210
重复第3次 20.012±0.243 84.23±0.487
重复第4次 10.201±0.346 78.23±0.189
重复第5次 4.276±0.520 45.04±0.421
注：提取效率(％)＝提取量(mg/g)/33.928mg/g
此外，图1为六因素对刺五加总黄酮提取率的影响图。并如图1所示，在超声功率密度为60-80W/cm2环境下该低共熔溶剂表现出较好的提取效率。在此条件下又对其它方面进行进一步工艺优化，并确定了料液比为1：(15-20)、提取温度为50～60℃和提取时间为70-80min等范围。在这些提取范围下，该低共熔溶剂表现出较好的提取效果。
图2为四种大孔树脂对总黄酮回收率的比较图，由图2结果显示，在条件相同的情况下，HPD-600型大孔树脂回收效果最好，因此被确定为刺五加黄酮的回收树脂。
图3为低共熔溶剂重复回收利用次数与总黄酮提取率的关系曲线。并由图3可知，在重复利用三次时仍能达到较好的提取效果，刺五加黄酮的提取率可达84％，因此该新型低共熔溶剂具有高效、经济的优点。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (4)

1.一种提取刺五加总黄酮的方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：
（1）将刺五加饮片研磨后过80目筛网，得刺五加粉末，备用；
（2）在所述刺五加粉末中加入低共熔体系，搅拌混合得混合物；
所述低共熔体系的制备方法，包括以下步骤：
1）将丙三醇和乙酰丙酸按摩尔比，加热搅拌混合，制备低共熔溶剂；
2）向所述低共熔溶剂中加入适量的水，恒温加热搅拌，制成含水量为25%-35%的低共熔溶剂，作为提取液；
所述丙三醇和乙酰丙酸的混合摩尔比为1:1，且加热温度为75℃-95 ℃，搅拌转速为150-200 r/min，混合搅拌时间为1-2 h；
（3）将所述混合物超声提取后离心得到上层刺五加总黄酮的粗提液，再将所述粗提液用0.45μm微孔滤膜过滤，即完成低共熔溶剂从刺五加根茎中提取刺五加总黄酮类化合物的工艺。
2.根据权利要求1所述的一种提取刺五加总黄酮的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述刺五加粉末与低共熔体系的料液比为1:(15-20)，及混合时间为10-30 min。
3.根据权利要求1所述的一种提取刺五加总黄酮的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述超声提取的功率密度为60-80W/cm2，超声波占空比60%，及超声提取温度为50℃~60℃，提取时间为70-80 min。
4.一种低共熔溶剂和刺五加总黄酮的回收方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：
A.将如权利要求1得到的所述刺五加总黄酮的粗提液加水稀释，使其浓度为原粗提液的1/7-1/9，作为上样液；
B.大孔树脂预处理：用无水乙醇将HPD-600型大孔树脂浸泡24 h，用去离子水洗至无醇味，并用5倍体积的5% NaOH浸泡5-6 h，待浸泡结束后，再用去离子水洗至中性，最后用5倍体积的5% HCL浸泡4-5 h，再次洗至中性；
C.刺五加总黄酮的回收：将大孔树脂湿法装柱，随后将上样液以0.5-1.5 mL/min的流速上柱，开始动态吸附，流出液每5 mL为一个检测单位，测定最终流出液中总黄酮的浓度达到上样液的10-15%时，停止上样；
用去离子水按同样速度洗脱直至洗脱液为无色，再用70-80%乙醇以0.5-1.5 mL/min的流速进行洗脱实验，收集含总黄酮的收集液，即完成刺五加总黄酮的回收；
D.低共熔溶剂的回收：收集上样流出液，将流出液中的水蒸发后，即可重新用于刺五加总黄酮的提取，即完成低共熔溶剂的回收。
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