CN104304035A - 金边玉簪的组织培养快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种金边玉簪的组织培养快繁方法,解决此品种分株繁殖速度较慢,增殖系数极低的生产问题,该方法包括以下的步骤:1)外植体的选择;2)外植体灭菌;3)外植体初代培养;4)增殖培养;5)壮苗培养;6)生根培养;7)移栽驯化。本发明以植株基部分化芽为外植体,以MS为基本培养基,利用萘乙酸(NAA)、6-苄胺基嘌呤(6BA),吲哆丁酸(IBA)激素调节,建立金边玉簪再生体系的方法。该发明一个增殖继代周期为4-6周,增殖系数控制在4-6倍,且不受季节的影响,可极大提高种苗繁殖系数,为该品种的开发和利用提供科学、有效的繁殖方法,满足生产需求进行产业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种金边玉簪的组织培养快繁方法。
技术背景
金边玉簪为百合科、玉簪属多年生草本宿根花卉,花白色或紫色,耐寒、耐荫,在浓荫通风处生长茂盛,是园林中林下地被植物,岩石园等处的重要的绿化材料。引自美国的金边玉簪是近年来园林绿化的新品种,备受人们喜爱,其叶片质地厚、有黄边相嵌,白色的花朵带着香气,既是极好的园林景观花卉,又是极具开发前景的药用植物。由于金边玉簪种子繁殖后代性状易发生变化,又需要三年才能开花;此品种生长较慢,分株繁殖速度较慢,增殖系数极低,每年仅能增殖2-4倍,极大地影响金边玉簪的生产与应用,因此周年生产受阻。
发明内容
本发明以优化再生体系为目的,以保持遗传稳定性为核心,提供一种金边玉簪高效再生体系建立的方法,以解决现在金边玉簪种子繁殖变异大、分株繁殖速度慢、不能满足产业化需求的问题。
本发明的技术方案为:一种金边玉簪植株再生体系建立的方法,所述再生体系建立方法是通过植株侧芽为外植体,分化出不定芽,经增殖、壮苗、生根、移栽驯化方法培育出小植株,本发明方法提高无菌苗分化率,增殖速度快,生根率高,驯化成活率高,为保持金边玉簪原有优良属性及规模化生产提供可靠的技术,其特征在于包括以下几个步骤:
1)外植体的选择:春季,选择健康植株萌发出来的嫩芽,用锋利刀片切下;
2)外植体灭菌:切去叶片的2/3,先用自来水洗净后,加适量洗洁精自来水冲洗30-40分钟,用滤纸吸干;加入质量百分比浓度1‰氯化汞溶液,加2滴吐温20(Tween20)浸泡,量至漠过外植体材料,摇晃,8-10分钟后倒掉消毒液,然后,用无菌水冲洗外植体材料3-5次,表面没有泡沫后,吸干;
3)初代培养:将消毒好的外植体切去边缘,插于基本培养基(MS)上,培养20-30天。培养室内为22-25℃,光14小时,黑暗10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),Lux为:照度的国际单位;
4)增殖培养:将初代培养外植体材料,转接于MS+NAA0.1+6BA2培养基上培养4-6周后,所述培养基构成为:基本培养基(MS)附加0.1mg/L萘乙酸(NAA)和2mg/L6-苄胺基嘌呤(6-BA),每个外植体萌发出4-8个小侧芽;切取新长出的侧芽,去叶片后插入增殖培养基中,若需大量繁殖,可进行重复培养;培养室内为22-25℃,光14小时,黑暗10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux);
5)壮苗培养:将长到1-2cm长的丛生芽剪切后移入壮苗培养基基本培养基(MS)中,培养3-4周,无菌苗长到2-4cm高度即可转入生根培养基中,增殖培养中的较大的无菌苗可直接转入生根培养基中。培养室内22-25℃,光14小时,黑10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux);
6)生根培养:将在壮苗培养基中无菌苗转接至生根培养基1/2MS+NAA0.5+IBA1+活性炭,所述培养基构成为:基本培养基(MS培养基中大量元素含量减半)附加0.5mg/L萘乙酸(NAA)、1mg/L吲哆丁酸(IBA)和活性炭3000mg/L,于24-26℃,光12小时,黑12小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),培养1-2周;
7)驯化移栽:待根长1-2cm时,将瓶苗移置过渡培养间。瓶膜稍敞开,但并不完全揭开,保持瓶内与室内环境一至,1-2天后,去掉瓶膜1天。调水温20-22℃,洗去无菌苗根部的培养基,移入含有珍珠岩:蛭石体积比2:1的基质中,在保湿保温条件下进行驯化培育,逐步降低湿度、温度,30天后,计算成活率。
本发明采用组织培养技术,建立其高效再生体系,能够保持原品种优良性状,快速提高繁殖速度,满足生产需求进行产业化生产。本发明从外植体选择、消毒方法、初代培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养及驯化移栽方法,建立了一套完整的金边玉簪植株再生体系,确定了组培繁殖培养基配方,直接分化不定芽,不定芽分化率达100%,一代增殖系数为5.3,生根率达到90.12%,移栽成活率达92%以上。本发明以植株基部分化芽为外植体,以MS为基本培养基,利用萘乙酸(NAA)、6-苄胺基嘌呤(6BA),吲哆丁酸(IBA)激素调节,建立金边玉簪再生体系的方法。该发明一个增殖继代周期为4-6周,增殖系数控制在4-6倍,且不受季节的影响,可极大提高种苗繁殖系数,为该品种的开发和利用提供科学、有效的繁殖方法,满足生产需求进行产业化生产。
附图说明
图1 增殖培养示意图
图2 壮苗培养示意图
图3 生根培养示意图
图4 移栽驯化示意图
具体实施方式:
本发明实施的条件:无菌接种室、无菌培养室、过渡培养室、温室。
本发明的实质是:新生植株保持健康母本的遗传性状,再生植株品质好,繁殖系数大。
一种金边玉簪植株再生体系建立的方法,通过植株侧芽为外植体,分化出不定芽,经增殖、壮苗、生根、移栽驯化方法培育出优良小植株,具体步骤如下:
1)外植体的选择:春季,选择健康植株萌发出来的嫩芽,用锋利刀片切下;
2)外植体灭菌:切去叶片的2/3,先用自来水洗净后,加适量洗洁精自来水冲洗30-40分钟,用滤纸吸干;加入质量百分比浓度1‰氯化汞溶液,加2滴吐温20(Tween20)浸泡,量至漠过外植体材料,摇晃,8-10分钟后倒掉消毒液,然后,用无菌水冲洗外植体材料3-5次,表面没有泡沫后,吸干;
3)初代培养:将步骤2)消毒好的外植体切去边缘,插于基本培养基(MS)上,培养20-30天。培养室内为22-25℃,光14小时,黑暗10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),Lux为:照度的国际单位;
4)增殖培养:将步骤3)初代培养外植体材料,转接于MS+NAA0.1+6BA2培养基上培养4-6周后,每个外植体萌发出4-8个小侧芽;切取新长出的侧芽,去叶片后插入增殖培养基中,若需大量繁殖,可进行重复培养;培养室内为22-25℃,光14小时,黑暗10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux);
5)壮苗培养:将步骤4)长到1-2cm长的丛生芽剪切后移入壮苗培养基基本培养基(MS)中,培养3-4周,无菌苗长到2-4cm高度即可转入生根培养基中,增殖培养中的较大的无菌苗可直接转入生根培养基中。培养室内22-25℃,光14小时,黑10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux);
6)生根培养:将步骤5)在壮苗培养基中无菌苗转接至生根培养基1/2MS+NAA0.5+IBA1+活性炭,于24-26℃,光12小时,黑12小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),培养1-2周,培养基中加入活性炭,提供局部黑暗环境,缩短生根时间;
7)驯化移栽:待步骤6)根长1-2cm时,将瓶苗移置过渡培养间。瓶膜稍敞开,但并不完全揭开,保持瓶内与室内环境一至,1-2天后,去掉瓶膜1天。调水温20-22℃,洗去无菌苗根部的培养基,移入含有珍珠岩:蛭石体积比2:1的基质中,在保湿保温条件下进行驯化培育,逐步降低湿度、温度,30天后,计算成活率。
基本培养基(MS)中所述大量元素,由质量百分比浓度,1900mg/L的硝酸钾(KNO3),440mg/L的氯化钙(CaCl2·2H2O),370mg/L的硫酸镁(MgSO4·7H2O),1650mg/L的硝酸铵(NH4 NO3),170mg/L的磷酸二氢钾(KH2PO4·H2O)组成,配制大量元素母液1L,10倍量,分别取19000mgKNO3、4400mgCaCl2·2H2O、3700mgMgSO4·7H2O、16500mgNH4 NO3、1700mg KH2PO4·H2O,分别溶解后混合定容至1L,每配置1L培养基取大量元素母液100ml;微量元素由体积百分比浓度为22.3mg/L的硫酸锰(MnSO4·4H2O),6.2mg/L的硼酸(H3BO3),8.6mg/L的硫酸锌(ZnSO4·7H2O),0.25mg/L的钼酸钠(Na2MoO4·2H2O),0.025mg/L的硫酸铜(CuSO4·5H2O),0.025mg/L的氯化钴(CoCl2·6H2O),0.83mg/L的碘化钾(KI)组成,配置微量元素母液1L,100倍量,分别取2230mgMnSO4·4H2O、620mgH3BO3,860mgZnSO4·7H2O,25mgNa2MoO4·2H2O,2.5mgCuSO4·5H2O,2.5mgCoCl2·6H2O,83mgKI,分别溶解后混合定容至1L,每配置1L培养基取微量元母液10ml;铁盐由质量百分比浓度为27.8mg/L的硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和质量百分比浓度为37.3mg/L的乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA·2H2O)螯合后的溶液(EDTA-Fe)组成,配置铁盐母液1L,分别取2780mgFeSO4·7H2O、3730mgNa2·EDTA·2H2O,分别加热溶解,混合后再煮沸约20分钟,冷却后定容至1L,每配置1L培养基取铁盐溶液10ml;有机物由质量百分比浓度为0.5mg/L的烟酸,0.5mg/L的盐酸吡哆醇,0.4mg/L的盐酸硫胺素,2mg/L的甘氨酸,100mg/L的肌醇组成,配置有机物母液1L,分别取50mg的烟酸,50mg的盐酸吡哆醇,40mg的盐酸硫胺素,200mg的甘氨酸,10000mg的肌醇,分别溶解,混合后定容至1L,每配置1L培养基取有机物母液10ml;蔗糖30g/L,琼脂粉5g/L,pH值5.8~6.2。
如图1所示,培养20-30天。培养室内为22-25℃,光14小时,黑暗10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),不定芽分化率达100%。
如图2所示,丛生芽剪切后移入壮苗培养基基本培养基(MS)中,培养3-4周,培养室内22-25℃,光14小时,黑10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),一代增殖系数为5.3。
如图3所示,在壮苗培养基中无菌苗转接至生根培养基1/2MS+NAA0.5+IBA1+活性炭,于24-26℃,光12小时,黑12小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),培养1-2周,生根率达到90.12%。
如图4所示,在珍珠岩:蛭石体积比2:1的基质中,在保湿保温条件下进行驯化培育,逐步降低湿度、温度,30天后,移栽成活率达92%以上。
如图1、图2、图3、图4所示,本发明从外植体选择、消毒方法、初代培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养及驯化移栽方法,建立了一套完整的金边玉簪植株再生体系,确定了组培繁殖培养基配方,直接分化不定芽,不定芽分化率达100%,一代增殖系数为5.3,生根率达到90.12%,移栽成活率达92%以上。
Claims (2)
1.一种金边玉簪的组织培养快繁方法,其特征是:包括以下几个步骤:
1)外植体的选择:春季,选择健康植株萌发出来的嫩芽,用锋利刀片切下;
2)外植体灭菌:切去叶片的2/3,先用自来水洗净后,加适量洗洁精自来水冲洗30-40分钟,用滤纸吸干;加入质量百分比浓度1‰氯化汞溶液,加2滴吐温20(Tween20)浸泡,量至漠过外植体材料,摇晃,8-10分钟后倒掉消毒液,然后,用无菌水冲洗外植体材料3-5次,表面没有泡沫后,吸干;
3)初代培养:将消毒好的外植体切去边缘,插于基本培养基(MS)上,培养20-30天。培养室内为22-25℃,光14小时,黑暗10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),Lux为:照度的国际单位;
4)增殖培养:将初代培养外植体材料,转接于MS+NAA0.1+6BA2培养基上培养4-6周后,所述培养基构成为:基本培养基(MS)附加0.1mg/L萘乙酸(NAA)和2mg/L6-苄胺基嘌呤(6-BA),每个外植体萌发出4-8个小侧芽;切取新长出的侧芽,去叶片后插入增殖培养基中,若需大量繁殖,可进行重复培养;培养室内为22-25℃,光14小时,黑暗10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux);
5)壮苗培养:将长到1-2cm长的丛生芽剪切后移入壮苗培养基基本培养基(MS)中,培养3-4周,无菌苗长到2-4cm高度即可转入生根培养基中,增殖培养中的较大的无菌苗可直接转入生根培养基中。培养室内22-25℃,光14小时,黑10小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux);
6)生根培养:将在壮苗培养基中无菌苗转接至生根培养基1/2MS+NAA0.5+IBA1+活性炭,所述培养基构成为:基本培养基(MS培养基中大量元素含量减半)附加0.5mg/L萘乙酸(NAA)、1mg/L吲哆丁酸(IBA)和活性炭3000mg/L,于24-26℃,光12小时,黑12小时,光照强度为1800~2000勒克斯(Lux),培养1-2周;
7)驯化移栽:待根长1-2cm时,将瓶苗移置过渡培养间。瓶膜稍敞开,但并不完全揭开,保持瓶内与室内环境一至,1-2天后,去掉瓶膜1天。调水温20-22℃,洗去无菌苗根部的培养基,移入含有珍珠岩:蛭石体积比2:1的基质中,在保湿保温条件下进行驯化培育,逐步降低湿度、温度,30天后,计算成活率。
2.根据权利要求1所述的一种金边玉簪的组织培养快繁方法,其特征是:基本培养基(MS)中所述大量元素,由质量百分比浓度,1900mg/L的硝酸钾(KNO3),440mg/L的氯化钙(CaCl2·2H2O),370mg/L的硫酸镁(MgSO4·7H2O),1650mg/L的硝酸铵(NH4NO3),170mg/L的磷酸二氢钾(KH2PO4·H2O)组成,配制大量元素母液1L,10倍量,分别取19000mgKNO3、4400mgCaCl2·2H2O、3700mgMgSO4·7H2O、16500mgNH4NO3、1700mg KH2PO4·H2O,分别溶解后混合定容至1L,每配置1L培养基取大量元素母液100ml;微量元素由体积百分比浓度为22.3mg/L的硫酸锰(MnSO4·4H2O),6.2mg/L的硼酸(H3BO3),8.6mg/L的硫酸锌(ZnSO4·7H2O),0.25mg/L的钼酸钠(Na2MoO4·2H2O),0.025mg/L的硫酸铜(CuSO4·5H2O),0.025mg/L的氯化钴(CoCl2·6H2O),0.83mg/L的碘化钾(KI)组成,配置微量元素母液1L,100倍量,分别取2230mgMnSO4·4H2O、620mgH3BO3,860mgZnSO4·7H2O,25mgNa2MoO4·2H2O,2.5mgCuSO4·5H2O,2.5mgCoCl2·6H2O,83mgKI,分别溶解后混合定容至1L,每配置1L培养基取微量元母液10ml;铁盐由质量百分比浓度为27.8mg/L的硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和质量百分比浓度为37.3mg/L的乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA·2H2O)螯合后的溶液(EDTA-Fe)组成,配置铁盐母液1L,分别取2780mgFeSO4·7H2O、3730mgNa2·EDTA·2H2O,分别加热溶解,混合后再煮沸约20分钟,冷却后定容至1L,每配置1L培养基取铁盐溶液10ml;有机物由质量百分比浓度为0.5mg/L的烟酸,0.5mg/L的盐酸吡哆醇,0.4mg/L的盐酸硫胺素,2mg/L的甘氨酸,100mg/L的肌醇组成,配置有机物母液1L,分别取50mg的烟酸,50mg的盐酸吡哆醇,40mg的盐酸硫胺素,200mg的甘氨酸,10000mg的肌醇,分别溶解,混合后定容至1L,每配置1L培养基取有机物母液10ml;蔗糖30g/L,琼脂粉5g/L,pH值5.8~6.2。
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