CN104094842A - 长寿花抑菌组培方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及长寿花抑菌组培方法，包括抑菌剂配制、容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的长寿花的抑菌组培方法，培养容器和培养基都无需进行高温高压灭菌，一方面降低了长寿花组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展长寿花组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。本发明的长寿花抑菌组培方法与常规方法比较，可以降低成本10％以上。本发明的抑菌组培方法可以在其它植物的组培中应用。

Description

长寿花抑菌组培方法
技术领域
本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种长寿花抑菌组培方法，属生物技术领域。
背景技术
长寿花(Kalanchoe bolssfeldiana)又名红景天，是景天科和枷蓝菜属多年生肉质草本，喜温暖、阳光充足、通风条件好的环境。长寿花耐干旱，要求土壤疏松、肥沃、排水良好。长寿花的叶片密集翠绿，花色丰富，有红、黄、橙红、粉红、绯红、桃红等，花期长2～3个月,临近圣诞节开花，花朵细密拥簇成团,整体观赏效果好，是最受人们喜爱的室内盆栽花卉。长寿花在中国栽培的时间不长，多数是从国外引进优良品种，借助于组织培养技术具有繁殖系数高、周期短、成本低等优点,迅速地繁殖出所需要的大量花卉新品种种苗,以满足大批量现代化温室生产的需求,并使其在质量上达到更高标准。
长寿花组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的优良性状的基础上，实现长寿花种苗的快速繁殖和壮苗生产。常规的长寿花组织培养方法要求在无菌培养基中进行，无菌消毒耗能大，设施设备、供电成本、耗材和人工成本高。如果长寿花组织培养能通过培养基改造，获得既保证长寿花组织正常生长，又具有杀菌、抗菌或抑菌功能的培养基，菌类也就不能在培养基中滋生。由于这种改造后的培养基不需要进行高温高压灭菌，一方面可以降低长寿花组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展长寿花组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，组织培养过程中的污染问题得到有效控制，长寿花组织培养无需在严格的无菌环境中进行，从根本上简化了长寿花组织培养。
发明内容
本发明的目的是提供一种长寿花的抑菌组培方法。
本发明的目的是通过以下方法实现的。
本发明的长寿花抑菌组培方法，包括抑菌剂配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：
1.抑菌剂的配制：取20％的次氯酸钠溶液100ml，加2g乳酸链球菌素，加40g的山梨酸钾，再加4g过氯霉素，用蒸馏水定容到200ml；即为抑菌剂；
2.培养容器消毒：将培养瓶及瓶盖在抑菌剂与水的体积比为1‰～2‰(Ｖ/Ｖ)的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；
3.培养基配制：诱导培养基为MS+0.5～1.0mg/L6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～0.6ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～0.6ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.5～0.6ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培养基时，先不加抑菌剂，按各培养基配方配齐其他原料后，定容、加热至琼脂粉完全溶解，然后按各培养基配方添加抑菌剂，用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到容器中，封口，冷却凝固后备用。
本发明的应用效果：
1、本发明的不同抑菌剂浓度对培养基污染的影响：我们设计了8种抑菌剂浓度的对比试验，培养基配制后15天统计培养基的污染率，结果如表1所示。试验结果表明，抑菌剂浓度为0.5ml/L以上，污染率均为0。
表1本发明的不同抑菌剂浓度对培养基污染的影响
抑菌剂浓度(ml/L) 培养基瓶数 污染瓶数 污染率(％)
0.1 30 30 100
0.2 30 24 80
0.3 30 11 36.7
0.4 30 2 6.7
0.5 30 0 0
0.6 30 0 0
0.7 30 0 0
0.8 30 0 0
2.本发明的抑菌组培方法对长寿花增殖倍数和污染率的影响：由于用本发明的长寿花的抑菌组培方法配制的培养基无需高温高压灭菌，所以在增殖过程中，除了要考虑污染率外，还要考虑的增殖率问题。通过实验证实，本发明的长寿花的抑菌组培方法与常规的长寿花组培方法相比，增殖率和污染率都没有太大差异。从瓶苗的生长状况看，本发明的长寿花的抑菌组培方法的培养基，由于不经过高温高压灭菌，激素和营养元素损失较少，因此，长寿花组培苗更绿，更壮。本发明的抑菌组培方法对长寿花增殖倍数和污染率的影响如表2所示。
表2本发明的抑菌组培方法对长寿花增殖倍数和污染率的影响
组培方式 增殖倍数 污染率(％) 生长状况
常规组培方法 3.8 0 苗浅绿
抑菌组培方法 4.0 0 苗绿
3.本发明的抑菌组培方法对长寿花生根率和污染率的影响：在生根过程中，本发明的长寿花的抑菌组培方法与常规的长寿花组培方法相比，结果如表3所示，生根率和污染率都没有太大差异；从瓶苗的生长状况看，用本发明的抑菌组培方法，长寿花组培苗叶片更大。
表3本发明的抑菌组培方法培养的长寿花瓶苗生根情况
组培方式 生根率(％) 污染率(％) 生长状况
常规组培方法 100 1.5 叶片小
抑菌组培方法 100 1.0 叶片大
本发明具有如下有益效果：
1.本发明的长寿花抑菌组培方法中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了长寿花组培环节，降低了长寿花组培成本。
2.本发明的长寿花抑菌组培方法，操作简单，只要按不同的培养基配方配制后，再加上抑菌剂即可，实用性强，推广性好。
3.本发明的长寿花抑菌组培方法与常规的长寿花组培方法对比，可以降低成本10％以上。
4.本发明的这种抑菌组培方法还可以应用到其它植物的组培上。
具体实施方式
为了进一步阐明本发明而不是限制本发明，以下结合实施例加以说明。
实施例一：一种长寿花抑菌组培方法
长寿花抑菌组培方法，包括以下步骤：
1、抑菌剂筛选和配制：选用4种药剂各3种浓度，采用L9(3)4正交表进行排列试验，接种20天后统计污染和材料坏死率，其结果见表4。
表4不同药剂和浓度对组培的影响
根据表4中的K值和R值的大小，找出的主次因子分别依次为：次氯酸钠、乳酸链球菌素、山梨酸钾、过氯霉素；
其最佳组合为：50ppm次氯酸钠+5ppm乳酸链球菌素+100ppm山梨酸钾+10ppm过氯霉素。
表4中1～9表示处理组合，K1～K3表示在每个因素下各水平的实验结果的平均数，R表示每个因素下K的最大值减最小值的差。
按照最佳组合的配方配制抑菌剂：取20％的次氯酸钠溶液100ml，加2g乳酸链球菌素，加40g的山梨酸钾，再加4g过氯霉素，用蒸馏水定容到200ml。即为抑菌剂。
2.培养容器消毒：将培养瓶及瓶盖在抑菌剂与水的体积比为2‰(Ｖ/Ｖ)的水溶液中浸泡10h，保存备用；
3.培养基配制：诱导培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.5ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.5ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.5ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；配制培养基时，先不加抑菌剂，按各培养基配方配齐其他原料后，定容、加热至琼脂粉完全溶解，然后按各培养基配方添加抑菌剂，用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到容器中，封口，冷却凝固后备用。
4.诱导培养：将采集的长寿花叶片用体积浓度为75％的酒精浸泡30s后，用质量浓度为0.1％的升汞溶液消毒6min，取出用无菌水冲洗3次，接种于诱导培养基上；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1200lx；培养30d在叶片的边缘会长出丛芽。
5.增殖培养：将诱导出的丛芽切开接种到增殖培养基上，30d转接一次；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1200lx；即可形成丛生苗。
6.生根培养：当苗长到2～4cm时，将丛生苗切成单株，接种到生根培养基上，25d形成完整的植株后即可移栽；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1500lx；
7.瓶苗移栽：将生根培养后的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后，移栽至大棚的穴盘内，基质为常用的腐质土。大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为25℃～30℃。移栽成活率一般不低于90％。

Claims (4)

1.一种长寿花抑菌组培方法，包括抑菌剂配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：
(1)抑菌剂配制：取20％的次氯酸钠溶液100ml，加2g乳酸链球菌素，加40g的山梨酸钾，再加4g过氯霉素，用蒸馏水定容到200ml；即为抑菌剂；
(2)培养容器消毒：将培养瓶及瓶盖在抑菌剂与水的体积比为1‰～2‰的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；
(3)培养基配制：诱导培养基为MS+0.5～1.0mg/L6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～0.6ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～0.6ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.5～0.6ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培养基时，先不加抑菌剂，按各培养基配方配齐其他原料后，定容、加热至琼脂粉完全溶解，然后按各培养基配方添加抑菌剂，用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到容器中，封口，冷却凝固后备用。
2.根据权利要求1所述的一种长寿花抑菌组培方法，其特征在于所述诱导培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.5ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8。
3.根据权利要求1所述的一种长寿花抑菌组培方法，其特征在于所述增殖培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.5ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8。
4.根据权利要求1所述的一种长寿花抑菌组培方法，其特征在于所述生根培养基为1/2MS+0.5ml/L抑菌剂+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8。
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