CN106135004A - 一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取紫玉簪侧芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；(3)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；(4)将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；(5)取完整的带根苗进行炼苗后移植于沙土壤生长一个半月，再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，能够在短期内提供大量紫玉簪的优质种苗，有效解决了紫玉簪的规模化育苗问题。

Description

一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
紫玉簪(Hosta ventricosa(Salisb.)Stearn)亦名紫萼、山玉簪，为百合科玉簪属多年生宿根草本植物。全草含香豆精类、紫玉簪三萜、紫玉簪多糖等活性成分；具有散瘀止痛、解毒功效，治跌打损作、胃痛；根可治疗牙痛、烧烫伤、乳腺炎、中耳炎等症，其在非特异性炎症方面很有价值，在中老年人呼吸道疾病防治方面有特殊疗效。
然而目前国内外紫玉簪都存在着单花花期短、缺乏香气、繁殖系数低、周期长等缺陷。在自然条件下，紫玉簪存在育种周期长及物种局限性的影响，采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高紫玉簪种苗的繁殖速度和质量，实现紫玉簪优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良紫玉簪种苗。
本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取紫玉簪侧芽作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中加入0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.3mg/L的IAA、50-60g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)丛生芽壮苗培养：将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中加入0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.3mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(4)健壮植株生根培养：将步骤(3)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中加入0.1-0.3mg/L的NAA、10-15g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(5)炼苗与移栽：步骤(4)获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，炼苗2-4天，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。
移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时的温度条件为20-28℃，相对湿度75-80％，遮阳率为75％。
本发明的突出优点在于：
(1)通过生物技术对紫玉簪进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的紫玉簪幼苗，显著提高了紫玉簪种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
(2)在MS繁殖培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA能够促进丛生芽的分化；添加浓度为0.1-0.3mg/L的生长激素吲哚乙酸IAA能够促进丛生芽的生长；
在MS壮苗培养基中添加浓度为1.5mg/L的6-BA和0.1-0.3mg/L的IAA能够促进丛生芽叶片的展开；
在1/2MS生根培养基上组合使用浓度为0.1-0.3mg/L的生长激素萘乙酸NAA，能够获得带根的完整植株，这些植株经炼苗后能够直接移栽沙床。
(3)采用本发明所述的培养方法，得到的单芽增殖系数达到5-8倍，获得的组培苗生根率在95％以上，每株平均带3-4个根，根长为3-5厘米，移栽沙床成活率在98％以上；快速、便捷、高效地进行紫玉簪组织培养，实现紫玉簪组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
本发明所述的紫玉簪的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取紫玉簪侧芽作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养30天，侧芽分化后获得大量丛生芽，其中MS培养基中添加0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖倍率为6.0；
(3)丛生芽壮苗培养：将步骤(2)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中培养30天得到健壮植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中MS壮苗培养基中添加1.5mg/L的6-BA和0.2mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(4)试管苗生根培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于1/2MS生根培养基中培养20天得到带根的完整植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中1/2MS生根培养基中添加0.2mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。生根率达98.7％。
实施例2
本发明所述的紫玉簪的组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取紫玉簪侧芽作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养30天，侧芽分化后获得大量丛生芽，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖倍率为5.5；
(3)丛生芽壮苗培养：将步骤(2)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中培养30天得到健壮植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中MS壮苗培养基中加入1.5mg/L的6-BA和0.2mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(4)试管苗生根培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于1/2MS生根培养基中培养20天得到带根的完整植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中1/2MS生根培养基中添加0.2mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率达95.8％。
实施例3
本发明所述的紫玉簪的组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取紫玉簪侧芽作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养30天，侧芽分化后获得大量丛生芽，其中MS培养基中添加1.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖倍率为5.3；
(3)丛生芽壮苗培养：将步骤(2)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中培养30天得到健壮植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中MS壮苗培养基中添加1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(4)试管苗生根培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于1/2MS生根培养基中培养20天得到带根的完整植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中1/2MS生根培养基中添加0.2mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率达96.5％。
实施例4
本发明所述的紫玉簪的组织培养快速繁殖方法的又一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取紫玉簪侧芽作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养30天，侧芽分化后获得大量丛生芽，其中MS培养基中添加0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖倍率为6.0；
(3)丛生芽壮苗培养：将步骤(2)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中培养30天得到健壮植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中MS壮苗培养基中添加1.5mg/L的6-BA和0.2mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(4)试管苗生根培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于1/2MS生根培养基中培养20天得到带根的完整植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天；其中1/2MS生根培养基中添加0.1mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率达97.7％。

Claims (1)

1.一种紫玉簪的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取紫玉簪侧芽作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中加入0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.3mg/L的IAA、50-60g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)丛生芽壮苗培养：将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中加入0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.3mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(4)健壮植株生根培养：将步骤(3)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中加入0.1-0.3mg/L的NAA、10-15g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(5)炼苗与移栽：步骤(4)获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，炼苗2-4天，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。
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