CN104293716A - 一种用大型真菌菌液(质)制备高效益生菌制剂的方法 - Google Patents

一种用大型真菌菌液(质)制备高效益生菌制剂的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用大型真菌菌液(质)制备高效益生菌制剂的方法，该方法为：用农副产品制备液体或固体培养基培养真菌得到菌液或菌质；将菌液或菌质经物理和生物处理使多糖多肽物质从细胞中释放出来，加入氮源和碳源配制成益生菌培养基；再接种益生菌培养得到高效益生菌制剂。所述的真菌包括香菇、茶薪菇、羊肚菌、滑子菇、猴头菇、牛肝菌、白灵菇、黄金菇、灵芝、云芝、虫草菌、茯苓、竹荪、松乳菇等药(食)用真菌；益生菌是芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌、肠球菌、双歧杆菌等中的一种或多种。本发明制备的益生菌制剂富含多糖、多肽等活性物质，其保健与治疗效果比常规益生菌制剂更好，可作为人畜胃肠道疾病的治疗药物与保健食品或饲料添加剂。

Description

一种用大型真菌菌液(质)制备高效益生菌制剂的方法
技术领域
本发明涉及益生菌制剂的制备，具体涉及一种用大型真菌菌液(质)制备高效益生菌制剂的方法。
背景技术
随着抗生素的长期使用所引起的内源性感染和二重感染、耐药菌株的产生、动物体免疫力下降、药物残留及食品等一系列问题引起人们的广泛关注，使人们对身体健康、环境保护及食品安全的意识不断加强；对养殖业从养殖到贮藏、加工、运输和销售各个环节全程质量控制的要求也日益加剧。“无公害饲料”、“生态饲料”、“环保饲料”、“有机饲料”和“绿色饲料”等倍受关注。尤其是微生物饲料已成为目前或将来的研究方向和热点之一。益生菌制剂正是这样一种饲料添加剂。益生菌制剂是一种含有大量有益微生物，在肠道环境中存活并进行代谢，具有维持肠道微生态平衡，提高机体健康水平的活菌制剂。益生菌制剂治疗肠道菌群失调克服了抗生素单纯杀菌或抑菌的治疗取向，而是促进正常菌群充分发挥生物拮抗作用，将致病菌祛除，正所谓“扶正祛邪”，由此也避免了因抗生素滥用造成耐药株的增加和耐药因子的扩散等现实难题。益生菌制剂是融汇了动物营养学、饲料学和微生物学等学科知识；结合了配合饲料工业技术、发酵工程技术和酶工程技术而诞生的。在医药保健、种植业、环境净化和养殖业等方面发挥了越来越重要的作用。
微生态制剂可分为益生菌(probiotics)、益生元(prebioics)、合生元(snybiotics)三种类型。益生菌又称益生素，是指能促进肠道内菌群平衡，对宿主起到有益作用的活菌制剂及其代谢产物；益生元是指能选择性促进宿主肠道内一种或几种有益菌的繁殖，达到调整肠道菌群作用的物质；合生元是将益生菌与益生元同时合并应用的一类制剂，合生元既可发挥益生菌的生理活性，又可选择性地增加这种益生菌的数量，使益生作用更显著。
目前益生菌制剂市场看，也存在菌种活性及其稳定性不高，治疗效果低的问题；为了更好地挖掘益生菌的潜能作用，近年来国内外在探索益生菌的作用机理研究的同时，加强高效产品的开发研究，包括：(1)微生物品种的筛选与组合，寻求自己的菌源(包括基因工程菌株筛选)，开发复合菌制剂(因复合菌制剂较代单一菌制剂的协同作用效果更好，更符合实际生态环境)；(2)益生菌产品稳定性的研究，在优良菌株的筛选、高活力菌剂的发酵工艺、菌体保护(微囊包被等)和增效剂选用等关键技术方面获得突破，使在保藏及加工处理过程中保持其菌体活性；(3)益生元的开发，探索新的益生元，以天然原料提取、酶解或酸解等方法制备可以减少有害菌种，促进有益菌种繁殖活动，有益于机体健康的物质，提高微生态制剂(合生元)的活性功能。低聚糖类物质是益生元研究的重点。(4)益生菌与其他物质联用：人们在制备多菌种制剂的同时，也在不断尝试研究开发益生菌与其他制剂间的联合使用，如：酶制剂、中草药、酸化剂和特异性疫苗等的协同作用。世界上已有许多国家大量使用益生菌制剂，其剂型有胶囊、粉剂和原液，也添加其他成分，如：酸果提取物、低聚果糖、免疫球蛋白、发酵副产物及其他生物活性物质。
发明内容
本发明的目的在于对益生菌制剂的发酵基质与工艺进行创新，提供一种用大型真菌(药/食用真菌)菌液(质)制备高效益生菌制剂的方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种用大型真菌(药/食用真菌)菌液(质)制备高效益生菌制剂的方法，包括如下步骤：
(1)用农副产品制备液体或固体培养基培养大型真菌得到菌液或菌质。
(2)将步骤(1)得到的菌液或菌质经物理和生物处理后，加入氮源和碳源配制成益生菌培养基。
(3)将益生菌接种到步骤(2)配制的益生菌培养基培养得到高效益生菌制剂。
步骤(1)中所述的液体或固体培养基优选为以玉米浆、玉米皮、玉米粉、大米粉、面粉、麦麸、土豆、葡萄糖、CMC等为碳源，以豆粕、棉粕、菜粕、动物蛋白、植物蛋白、硫铵等为氮源，以酵母浸膏、硫酸镁、硫酸铁、硫酸锰、磷酸氢二钾、VB1、VB6、烟酸等为生长促进因子。
步骤(1)中所述的大型真菌包括(但不限于)：茶薪菇、羊肚菌、滑子菇、猴头菇、牛肝菌、白灵菇、香菇、平菇、黄金菇、灵芝、云芝、虫草菌、茯苓、竹荪、松乳菇、竹黄、樟芝等产多糖多肽率高或具有保健/治疗胃肠道疾病功能的药用真菌或食用真菌。
步骤(1)中培养大型真菌的条件优选为25-32℃培养2-5天。
步骤(1)优选为：以玉米浆、玉米皮、玉米粉、大米粉、面粉、麦麸、土豆、葡萄糖、CMC等为碳源，以豆粕、动物蛋白(蚕蛹粉等)、植物蛋白(玉米蛋白等)、硫铵等为氮源，以酵母浸膏、硫酸镁、硫酸铁、硫酸锰、磷酸氢二钾、VB1、VB6、烟酸等为生长促进因子，配制成液体培养基或固体培养基，灭菌后，接种大型真菌菌丝，25-32℃培养2-5天，取其培养物，即真菌菌液或菌质。
步骤(2)中所述的物理处理优选为打浆或粉碎破碎、高温提取等；所述的生物处理为生物酶解。经物理和生物处理的目的是使多糖多肽等活性物质释放出来，有利于益生菌利用，促进益生菌生长繁殖及活性提高。其中，大型真菌菌丝培养的液体菌质经打浆、高压均浆、复合酶(纤维素酶0.5～1.5％，果胶酶1.0％～3.0％，蛋白酶1.5-3.0％)酶解、高温(60-90℃)超声波浸提，提取多糖多肽等活性物质；大型真菌菌丝培养的固体菌质经干燥、粉碎、超微粉碎，破坏菌丝使多糖多肽等活性物质得以释放。
步骤(2)中所述的碳源和氮源优选为豆粕、面粉、麦麸、玉米浆、玉米粉、动物蛋白、植物蛋白、葡萄糖等农副产品的一种或多种；固体发酵碳源和氮源的添加量与真菌菌质的干质量比优选为1:1-5；液体发酵按真菌菌液容积百分比添加2-5％的碳源和氮源。
步骤(3)中所述的益生菌是国家批准允许在保健食品、饲料添加剂中可使用的有益微生物菌种，包括(但不限于)双岐杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、片球菌属(Pediococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、芽孢杆菌属(Bacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、拟(类)杆菌属(Bacteroides)、酵母菌属(Saccharomyces)、假丝酵母(Candida)、假单胞菌(Rhodopseudmonas)、梭菌属(Clostridium)等属的有关菌种。其中，在保健食品中可使用的益生菌种包括：两岐双岐杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、婴儿双岐杆菌(B.infantis)、长双岐杆菌(B.longum)、短双岐杆菌(B.breve)、青春双岐杆菌(B.adolescentis)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus.Bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、干酪乳杆菌干酪亚种(L.Caseisubsp.Casei)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、布拉酵母菌(SaccharomvcesBoulardii)等；在饲料添加剂中可使用的益生菌种包括：地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、粪肠球菌(Straptoccusfaecium)、屎肠球菌(Enterococcuslactis)、乳酸肠球菌(Lactobacillusacidophilus)、嗜酸性乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)、乳酸乳杆菌(Lactobacilluslactis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilacticii)、戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)、产朊假丝酵母(Candidautilis)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)、丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)等。
步骤(3)中的益生菌可单一使用或多种联合使用；联合使用时，先接种需氧菌需氧条件下培养(30-38℃)12-24h，后接种厌氧菌厌氧条件下培养(30-38℃)12-24h。
本发明的生产工艺为二次处理三步发酵工艺。第一次配制培养基并进行大型真菌菌丝接种发酵，为第一次处理第一次发酵；其菌质/菌液加工配制益生菌培养基，对复合益生菌菌种中的耗氧益生菌和厌氧益生菌分先后二步接种发酵，即第二次处理和第二、三步发酵。通过该生产工艺培养的益生菌制剂比常规益生菌制剂活性更强，应用效果更好，多菌复合发酵的比单一菌种效果好。本发明发现了大型真菌发酵的菌液(质)中的多糖多肽等功能物质可为益生菌的促进因子(益生元)，促进益生菌的生长繁殖，增强在肠道内的定植能力和抗病(病菌)能力。
一种高效益生菌制剂通过上述方法制备得到。本发明制备的益生菌制剂，生物活性(益生菌、生物酶、活性多糖、多肽、核苷、三萜等)高，药理效应(提高免疫、疾病预防与治疗等)强，生产的保健食品益生菌制剂可作为人肠道保健品；生产饲料级微生物添加剂菌种制剂可用于动物肠道疾病的预防与治疗及动物保健促生长剂。
本发明的优点和积极效果：
(1)本发明将大型真菌发酵制剂与益生菌制剂有机地结合，及药(食)真菌的药用菌质/菌液，作为益生菌的培养物与促进剂，大大提高制剂的生物活性与保健治疗效果。
(2)药/食用真菌菌质/菌液中含有大量多糖多肽物质，试验证明对益生菌的生长繁殖与定植有促进作用，成为新的益生元；为开发新的益生元提供广阔的来源。
(3)本发明采用培养基二次处理三步发酵(用豆粕、玉米浆或粉、麦麸、面粉等农副产品制备大型真菌培养基，并接种大型真菌发酵，生产菌质或菌液；用大型真菌菌质或菌液配制益生菌培养基，先后二次接种好氧性益生菌和厌氧性益生菌分二步发酵)，制备高活性复合微生态制剂，工艺简便，效果好。
(4)本发明开发的高效益生菌制剂(合生元)可用于医疗保健、食品与饲料添加剂、及兽药制剂，保健与治疗效果好，且生产原料来源广泛，生产工艺简便，具有广泛的开发应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述。应理解，下面的实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
本发明中，采用培养基二次处理三步发酵，制备高活性复合微生态制剂，可用于医疗保健、食品与饲料添加剂及兽药制剂，保健与治疗效果好。
实施例1  不同种大型真菌菌丝发酵菌质/菌液活性成分比较
1、材料
大型真菌菌种：茶薪菇、羊肚菌、滑子菇、猴头菇、牛肝菌、白灵菇、香菇、平菇、黄金菇、灵芝、云芝、虫草菌、茯苓、竹荪、松乳菇等斜面菌种由湖南民康生物技术研究所保存。
液体培养基：玉米浆1.5g，硝酸铵0.15g，羧甲基纤维素钠0.4g，葡萄糖1.5g，K2HPO40.02g、MgSO4·7H2O0.05g、蒸馏水定容至100mL，pH6.5。
固体培养基：固体基质(麸皮40％、玉米皮30％、豆粕10％、膨化玉米10％、油糠10％)，营养液(玉米浆0.5％，葡萄糖1％，(NH4)2NO30.3％、K2HPO40.05％、MgSO4·7H2O0.1％，余量为水，pH6.0-6.5)为固体基质质量的55％，121℃灭菌20min。
2、方法
将上述各大型真菌按容积(液体)或质量(固体)的10-15％分别接种到液体培养基和固体培养基中，于26-32℃发酵培养，液体发酵培养2-3天，固体发酵培养3-5天，取菌液和菌质，测定多糖与多肽含量。
(1)多糖测定方法：多糖含量＝总糖含量-还原糖含量；
总糖含量测定：采用硫酸-苯酚法；
还原糖含量测定：采用3,5-二硝基水盐酸(DNS)比色法。
(2)多肽测定方法：Folin-酚试剂法。
3、结果
表1不同大型真菌发酵菌质/菌液中多糖多肽含量的测定
以上大型真菌菌丝发酵菌液/菌质均含有较高的多糖与多肽，其中液体发酵菌液中2种活性物质的相对含量更高，系液体发酵比固体发酵非菌丝体物质少所致。
实施例2  大型真菌菌液配制培养基对益生菌的培养试验
1、材料
(1)益生菌菌种：嗜酸乳杆菌(Lacticacidophilus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌(B.lichenifofmis)、啤酒酵母菌(Saccharomycesbayanus)。
(2)培养基：实施例1产生的真菌液体发酵物(培养液与菌丝)，乳匀机均浆，复合酶(纤维素酶0.5～1.5％，果胶酶1.0％～3.0％，蛋白酶1.5-3.0％)酶解后，80℃超声提取40min，四层纱布过滤；取滤液，按容积(滤液中干菌质含量约占2-3％)百分比加入2％葡萄糖、1.5％玉米浆、1％蛋白胨(如100mL滤液，加入2g葡萄糖、1.5g玉米浆、1g蛋白胨)，置三角瓶中，121℃灭菌20min。
2、方法
(1)二次接种培养：往上述培养基中按容积百分比接种2-5％需氧益生菌单一菌种液体培养的复合菌种(地衣芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌：啤酒酵母菌为1:1:1)，32-37℃、有氧条件下培养12-24h；而后按容积百分比接种1-3％厌氧益生菌(嗜酸乳酸杆菌和保加利亚乳杆菌为1:1)单一培养的复合液体菌种，32-37℃、厌氧条件下培养12-24h。
(2)益生菌含量测定：芽孢杆菌和乳酸杆菌含量测定，取上述培养物，用灭菌生理盐水稀释后，分别取0.1mL平铺接种益生菌平板培养基(蛋白胨10g，酵母浸粉5g，NaC1 5g，琼脂粉15g，水1000mL，pH值7.0～7.2)上，每个样品作6个处理，其中3个作需氧培养，另3个作厌氧培养，37℃，培养时间18h，计数平板菌落，换算培养液中的菌数。酵母菌测定，取培养液稀释后用血球计数板，置显微镜下直接计数。
3、结果
表2大型真菌菌液配制培养基对益生菌的生长情况(cfu/mL)
表2显示：以上10种食药真菌菌丝培养物均能很好地适应益生菌生长，各菌间的差异性不显著。
实施例3  食药用真菌菌丝发酵液及其培养益生菌对病原菌的抗菌活性测定
1、方法：分别取表3中的9种真菌菌丝的液体培养物，经研磨、酶解、超声处理和灭菌后，按实施例2的方法二次接种培养复合益生菌，真菌菌质液及其培养益生菌分别过滤(其中菌质液浓度含约2％干菌质，益生菌液菌浓度1.5×109cfu/mL)备用；用琼脂平板培养法划线接种病菌(大肠杆菌C44103、沙门氏菌C26112、巴氏杆菌C44-1、链球菌01026)，分别放置牛津杯，每杯加50μL菌质液/菌液，37℃培养24h，游标卡尺测量抑菌圈大小(mm)，评价其抗菌活性。
2、结果：所测9种药食真菌菌丝的培养菌质对4种G-和G+菌均有一定的抑制作用，其菌质的益生菌培养物对几种病原菌有更强的抑菌效果，见表3。
表3真菌菌质液及其培养益生菌对病原菌的抑制效果测定
实施例4  益生菌的抗逆性测定
1、方法：按实施例1的固体培养基及培养方法培养的松乳菇菌丝菌质，经干燥、粉碎和超微粉碎后，添加其质量20％的麦麸，接种2％枯草芽孢杆菌固体培养菌种，37℃有氧条件下培养24h；接种3％啤酒酵母菌和乳酸杆菌固体培养的复合菌种(1:1)，37℃密封(厌氧)培养24h，制备出松乳菇菌质培养的益生菌制剂。松乳菇菌质培养的益生菌制剂与非菌质培养基(麦麸50g、豆粕36g、玉米粉12.5g、葡萄糖2g、MgSO40.05g、(NH4)2SO40.5g、K2HPO40.02g)以同方法培养的同菌种益生菌，分别作高浓度的酸(pH2)和胆盐(0.5％)、人工胃液(氯化钠2.0g、胃蛋白酶3.2g、10％盐酸24mL，加水溶解至1000mL，pH1.2)处理2h，用MRS培养基、肉汤琼脂培养基和马铃薯葡萄糖培养基作平板培养(37℃培养18h)，检测其乳酸菌、芽孢杆菌和酵母菌的耐酸、耐胆盐、耐人工胃液的能力。还将这2种益生菌制剂常温保存，定期用平板培养法测定其益生菌的存活率。
2、结果：以上2种培养基培养的3种益生菌对酸、胆盐和人工胃液的耐受力测定显示，松乳菇菌质培养益生菌的耐受力明显强于非菌质培养基培养的益生菌(见表4)。
表4不同培养基培养益生菌对酸、胆盐和人工胃液耐受力的测定，单位：cfu/mL
保存试验显示：松乳菇菌质培养的益生菌的存活率明显高于非菌质培养基培养益生菌的存活率，前者保存180d芽胞杆菌和酵母菌的存活率18.0％和16.2％，乳酸杆菌存活率1.9％；后者保存180d芽胞菌和酵母菌活率13.1％和12.7％，乳酸菌存活率1.2％。
实施例5  2种益生菌制剂益生菌在雏鸡肠道中的定植及对病原菌作用的对比测定
1、方法：按实施例2的二次发酵方法，用松乳菇菌丝发酵菌质液培养基培养的益生菌制剂(强化益生菌)和非菌质液培养基(葡萄糖2g、玉米浆2g、蛋白胨1g、NaCl0.5g、水100mL)培养的益生菌制剂均包含乳酸菌、布拉酵母、蜡样芽胞杆菌，总菌密度2×1010cfu/mL。病原菌是产β-内酰胺酶大肠杆菌(ESBLsE.coli)和产β-内酰胺酶沙门氏菌(ESBLs Salmonella)，菌密度为5×109cfu/mL。初出壳雏鸡150只，分5组，每组30只，于0d按表5处理，于处理后3d和10d取雏鸡盲肠内容物作定量显色计数培养，每组每次10只；其余10只观察健康状况至20d。定量显色计数培养包括产β-内酰胺酶病菌检测培养和益生菌检测培养：
(1)产β-内酰胺酶病菌检测：分别用青岛海博生物技术有限公司的HB007沙门氏菌分离计数显色培养基+阿莫西林和HB001大肠杆菌分离计数显色培养基+阿莫西林，37℃培养24h，观测，产β-内酰胺酶沙门氏菌和产β-内酰胺酶大肠杆菌的菌落分别显亮红色和蓝绿色。
(2)益生菌检测：用青岛海博生物技术有限公司的细菌分离计数显色培养基：乳酸菌检测用乳酸菌检测计数显色培养基HB7030(红色)；酵母菌检测用酵母菌计数显色培养基HB7010-1(蓝色)；芽孢杆菌用蜡样芽孢杆菌计数显色培养基HB7021(蓝绿色)。
表5  2种益生菌制剂对鸡大肠杆菌和沙门氏菌在肠道定植及致病率的影响
2、结果：(1)益生菌饲喂雏鸡试验显示，3种益生菌均能在肠道生存，尤其是乳酸菌第3d和第10d均保持较高的存量；其次是芽孢杆菌，再次是酵母菌。(2)用松乳菇菌丝发酵发酵物培养的益生菌制剂(强化益生菌)第3d和第10d3种益生菌的含量均比非菌质液制备的益生菌制剂高一个数量级，相反病原菌含量降低约一个数量级，雏鸡的发病率和死亡率降低一倍以上，显示出对病菌攻击有良好的保护性。
实施例6  断奶仔猪腹泻治疗试验
按实施例2方法制备液态菌质益生菌制剂和实施例4方法制备固态菌质益生菌制剂，用实施例4的非菌质培养基和实施例5的非菌质液培养基，同方法制备非菌质固态益生菌制剂和非菌质液液态益生菌制剂；140头腹泻的断奶仔猪进行分组治疗试验，共分为7组，每组20只，液态益生菌制剂每只口服3mL(1.2×109cfu/mL)，固态益生菌制剂每只口服1.5g(2.5×109cfu/g)，抗生素对照组每只肌注3mL；所有病猪每天治疗2次，至康复为止。
表6不同益生菌制剂治疗早期断奶乳猪腹泻的治疗试验
从表6可知，食药真菌菌质/菌液培养益生菌制剂治疗仔猪腹泻疗效达100％，其治愈率疗较安痢(粘杆菌素)和常规培养益生菌制剂高10-15个百分点；且治愈后仔猪的体况恢复快，采食量迅速增加，皮肤红润，被毛光泽。
实施例7  初生仔猪黄白痢的预防试验
按实施例6的方法制备液态菌质益生菌制剂和非菌质液态益生菌制剂，用1日龄大长杂仔猪24窝245头，按窝别随机分为6个组，每组4窝，按表7设计投药预防，测定腹泻及增重情况。
表7不同益生菌制剂预防初生乳猪的腹泻情况
由上表可知，4种大型真菌菌液培养益生菌制剂组无严重腹泻病例发生，仅A组和D组各出现1次轻度腹泻，各为1头，可能是天气变化引起，1-2天恢复正常。非菌质液培养基培养益生菌组有3次5头出现较轻的腹泻，重复给药后1-2天康复；抗生素对照组出现5次腹泻，数量分别为2、5、4头，程度为中度，经2-4天治疗恢复正常。

Claims (10)

1.一种用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)用农副产品制备液体或固体培养基培养大型真菌得到菌液或菌质；
(2)将步骤(1)得到的菌液或菌质经物理和生物处理后，加入氮源和碳源配制成益生菌培养基；
(3)将益生菌接种到步骤(2)配制的益生菌培养基培养得到高效益生菌制剂。
2.根据权利要求1所述的用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的大型真菌包括：茶薪菇、羊肚菌、滑子菇、猴头菇、牛肝菌、白灵菇、香菇、平菇、黄金菇、灵芝、云芝、虫草菌、茯苓、竹荪、松乳菇、竹黄、樟芝。
3.根据权利要求1所述的用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于：步骤(1)为：以玉米浆、玉米皮、玉米粉、大米粉、面粉、麦麸、土豆、葡萄糖和CMC中的一种或多种为碳源，以豆粕、动物蛋白、植物蛋白和硫铵中的一种或多种为氮源，以酵母浸膏、硫酸镁、硫酸铁、硫酸锰、磷酸氢二钾、VB1、VB6和烟酸中的一种或多种为生长促进因子，配制成液体培养基或固体培养基，灭菌后，接种大型真菌菌丝，25-32℃培养2-5天。
4.根据权利要求1所述的用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于：步骤(2)中的物理和生物处理为：大型真菌菌丝培养的液体菌质经打浆，高压均浆，纤维素酶、果胶酶和蛋白酶组成的复合酶酶解，50-90℃超声波浸提；大型真菌菌丝培养的固体菌质经干燥、粉碎、超微粉碎。
5.根据权利要求1所述的用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的碳源和氮源为豆粕、面粉、麦麸、玉米浆、玉米粉、动物蛋白、植物蛋白和葡萄糖中的一种或多种；固体发酵碳源和氮源的添加量与真菌菌质的干质量比为1:1-5，液体发酵按真菌菌液容积百分比添加2-5％的碳源和氮源。
6.根据权利要求1所述的用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的益生菌是国家批准允许在保健食品、饲料添加剂中可使用的有益微生物菌种，包括双岐杆菌属、乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、片球菌属、明串珠菌属、芽孢杆菌属、乳球菌属、丙酸杆菌属、拟(类)杆菌属、梭菌属、酵母菌属、假丝酵母、假单胞菌的有关菌种。
7.根据权利要求6所述的用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于：在保健食品中可使用的益生菌种包括：两岐双岐杆菌、婴儿双岐杆菌、长双岐杆菌、短双岐杆菌、青春双岐杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种、嗜热链球菌、布拉酵母菌；在饲料添加剂中可使用的益生菌种包括：地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌、两歧双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸肠球菌、嗜酸性乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母、沼泽红假单胞菌、保加利亚乳杆菌、丁酸梭菌。
8.根据权利要求1所述的用大型真菌菌液或菌质制备高效益生菌制剂的方法，其特征在于：步骤(3)中的益生菌可单一使用或多种联合使用；联合使用时，先接种需氧菌需氧条件下培养12-24h，后接种厌氧菌厌氧条件下培养12-24h。
9.一种高效益生菌制剂，其特征在于：通过权利要求1-9任一项所述的方法制备得到。
10.权利要求9所述的高效益生菌制剂在制备人或畜胃肠道疾病的治疗药物/保健食品或者饲料添加剂中的应用。
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